JPS63246388A - 抗生物質ｒｓ−４４ｂ及びその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （技術分野） 本発明は、抗生物質ＲＳ−４４Ｂ及びその製造法に関す
るものである。本発明の抗生物質ＲＳ−４４Ｂは、スト
レプトミセス属に属する抗生物質ＲＳ−４４Ｂ生産菌を
培養して、その培養物から分離採取される文献未載の新
規抗生物質である。

なお、ＲＳ−４４Ｂは、本願に対応する中国特許出願に
おいて、“５Ｒ−４４Ｂ”と呼称される物質と同一の物
質である。

（発明の背景） 近年、抗生物質は、医療用のみならず農薬用としても利
用しうるちのが数多く見出されている。

本発明者らは、従来より上記の如き有用な抗生物質の探
索を目的として、多数の土壌中から微生物を分離し、そ
の産出する抗生物質について、精製、同定及び用途の開
発を行ってきた。

その結果、本発明者らは、先にストレプトミセス・エス
ピー・ＲＳ　−４４（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｓｐ
　。

ＲＳ−４４）の培養物から文献未載の新規抗生物質ＲＳ
−４４を、単離・精製することに成功した。

本発明らは、更に研究を進めた結果、上記ＲＳ−４４株
の培養物より、上記抗生物質ＲＳ−４４とは全く異なっ
た理化学的性質及び生物学的性質を有する新しい抗生物
質ＲＳ−４４８をＩＬ離・精製することに成功した。

（発明の目的） 本発明の目的は、新規な抗生物質および該抗生物質を放
線菌ストレプトミセス属に属する微生物から分離、採取
する方法を提供することにある。

（発明の構成） （使用する微生物） 本発明の抗生物質ＲＳ−４４Ｂを生産する微生物はスト
レプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属する
抗生物質ＲＳ−４４Ｂの生産能を有する菌種である。

その−例として、ストレプトミセス・エスピー・ＲＳ　
−４４（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｓｐ、　　ＲＳ　
−４４）（以下、“ＲＳ−４４株”と称する。）を挙げ
ることができ、該微生物は、上記の特性を有し、本発明
の抗生物質ＲＳ−４４Ｂを有利に生産するものであり、
本発明の製造法に有効に利用し得るものである。

また、上記ＲＳ−４４株の自然的及び人工的変異株は勿
論、ストレプトミセス属に属する菌種で後述の抗生物質
ＲＳ−４４Ｂの生産能を有する微生物はすべて本発明方
法において使用することができる。

上記ＲＳ−４４株は、中国江蘇省で採取された土壌中よ
り分離された土壌放線菌であり、工業技術院微生物工業
技術研究所に昭和６１年３月５日付寄託され、その微生
物受託番号は、微工研菌寄第８６３４号（ＦＥＲＭ　Ｐ
−８６８４）である。

ＲＳ−４４株は、次の菌学的性質を有する。

■、形態的特徴 本菌株、ＲＳ−４４株をグルコースイーストエキスを含
む菌体分析用培地で培養し、菌体を分離乾燥後６Ｎ　　
Ｈ（ｌで１１０℃、２０時間加水分解し、ペーパークロ
マトグラフで細１Ｉ８２璧アミノ酸を検出すると、Ｌ、
Ｌ−ジアミノピメリン酸を検出した。

また寒天平板上に発育した気菌糸は螺旋状菌糸を形成し
、これに数十個の胞子の形成がみられるが、胞子のう、
運動性胞子はみられない。

以上のことがら本菌はストレプトミセスに属するもので
ある。胞子の形態は円柱状で表面は平滑である。

２、　各種培地上における生育状態（２７℃、３週間培
饗、色調はディスクリブチイブ・カラー・ネームズ・デ
ィクショナリ（Ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｖｅ　ｃｏｌｏｒｎ
ａｍｅｓ　ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ　）による）１）　シ
ニクロース硝酸塩寒天培地 発　育：　発育せず ２）　グルコース・アスパラギン酸寒天培地発　育：　
普通 気菌糸：　微量　ｂ（オイスター・ホヮイ　ト　） 裏　面：　　　　ｂ（オイスター・ホヮイ　ト　） 色　素：　なし ３）　グリセリン・アスパラギン寒天培地発　育：　普
通 気菌糸：　微量　ｂ（オイスター・ホヮイ　ト　） 裏　面：　　　　ｂ（オイスター・ホヮイ　ト　） 色　素：　なし ４）　スターチ・無機塩寒天培地 発　育：　良好 気菌糸：　多量　２ｇｅ（ベイシュ） 裏　面：　　　　　　２ｉｅ（ライト・マスタード）色
　素：　なし ５）　チロシン寒天培地 発　育；　良好 気菌糸：　多量　３ｄｃ（ナチュラル）裏　面：　　　
　　　２１ｅ（マスタード）色　素：　　　　　２ｅａ
（ライトメイズ）６〉栄饗寒天培地 発　育：　良好 気菌糸：　なし 裏　面：　１各Ｃａ　　（クリーム） 色　素：　なし ７）イースト麦芽寒天培地 発　育：　良好 気菌糸：　多量　５ｆｅ（アッシュ） 裏　面：　　　　　　２１ｇ（マスタードタン）色　素
：　なし ８）オートミール寒天培地 発　育：　不良 気菌糸：　なし 裏　面：　不明 色　素：　なし ９〉　ペプトン・イースト・鉄寒天培地発　育：　良好 気菌糸：　なし 裏　面：　１各Ｃａ　（ライトイエロー）色　素：　な
し ３、　炭素源の資化性（プリドハム・ゴツトリーブ寒天
培地） Ｌ−アラビノース　　− Ｄ−キシロース　　　＋ Ｄ−グルコース　　　＋ Ｄ−フラクトース　　− シュクロース　　　　− イノシトール　　　　− Ｌ−ラムノース　　　− ライフィノース　　　− Ｄ−マンニトール　　− ＋・・・・・・発育する。

−・・・・・・発育しない。

４、その他の生理的性質 １、　至適温度　　　　　　　　　２５〜３５℃２、　
ゼラチンの液化（グルコース・ペプトン・ゼラチン培地
上）　　　　　液化する ３、　スターチの加水分解くスターチ無機塩寒天培地上
）　　　　　　　　　加水分解する４、　脱脂乳の凝固
　　　　　　　凝固する５、　脱脂乳の液化　　　　　
　　液化する６、　メラニン様色素の形成 〈チロシン寒天培地上）　なし （ペプトン・イースト鉄 寒天培地上）　　　　なし 上記の性質を有するストレプトミセスをバーシイのマニ
ュアルオブデターミネイティブバクテリオロジイ８版（
Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ　Ｍａｎｕａｌ　ｏｆ　Ｄｅｔｅｒｍ
＋ｎａ−ｔｉＶｅ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ　８ｔｈ
　ｅｄ、　　）によって分類すると、（す１ＳｉＣ−ｉ
Ｓ！、１群に属し、色調、胞子形態などからストレプト
ミセス、カカオイが最も近縁であり、従って水閘はスト
レプトミセス、カカオイ（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　
ｃａｃａｏｉ　）又はこれに極めて近縁の菌であると推
定される。

（培養法および精製法） 本発明の抗生物質ＲＳ−４４Ｂを得るに当たっては、ス
トレプトミセス属に属する上記抗生物質生産菌を、抗生
物質を生産する通常の方法で培養することができる。培
養の形態は、液体培養でも固体培養でもよく、工業的に
有利に培養するためには、前記生産菌の胞子懸濁液又は
培養液を培地に接種し、通気攪拌培養を行えばよい。

培地の栄養源としては特に限定されることはなく、微生
物の培養に通常用いられる炭素源、窒素源その他の培地
中に含有させることができる。炭素源としては、殿粉、
デキス）ＩＪン、グリセリン、グルコース、シュークロ
ース、ガラクトース、イノシトール、マンニトールなど
が、また窒素源としては、ペプトン、大豆粉、肉エキス
、米ぬか、！、尿素、コーンステイープリカー、アンモ
ニウム塩、硝酸塩、その他の有機または無機の窒素化合
物が用いられる。その池、無機塩類、たとえば食塩、燐
酸塩類、カリウム、カルシウム、亜鉛、マンガン、鉄等
の金属塩類等を適宜に添加してもよく、必要に応じて消
泡剤として、動、植、鉱物油等を添加してもよい。培養
温度、培養時間等の培養条件は使用菌の発育に適し、し
かもＲＳ−４４Ｂの生産が最高となるような条件が選ば
れる。

たとえば、培地のｐＨは４〜９、特に中性付近がよく、
培養の適温は２５°〜３５℃程度がよい。、しかし、こ
れらの培養組成物、培地の水素イオン濃度、培養温度、
攪拌条件などの培養条件は使用する菌株の種類や、外部
の条件などに応じて好ましい結果が得られるように適宜
調節されるべきであることはいうまでもない。このよう
にして得られる培養物から、ＲＳ−４４Ｂを得るには、
代謝産物を採取するのに通常用いられる手段を適宜に利
用して採取し得る。たとえば、ＲＳ−４４Ｂと不純物と
の溶解度差を利用する手段、イオン結合力の差を利用す
る手段、吸着親和力の差を利用する手段、分子量の差を
利用する手段のいずれも、それぞれ単独、又は、適宜組
合わせて、あるいは反復して使用される。具体的には、
ＲＳ−４４Ｂは、培養濾液にその大部分が存在する。そ
の培養濾液のｐＨを酸性側、たとえばｐ）１４．０に調
整し、酢酸エチルのような有機溶媒で抽出し、濃縮して
得られる油状物をメタノール等を用いて結晶化する。こ
れを、更に高速液体クロマトグラフィー（例えば、ヌク
レオシルＳＣ＋Ｓ、メタノール：水＝８：２で展開）に
付し、ＲＫ−４４Ｂの活性部分を集め、更にメタノール
を用いて常法により結晶化を行うことによりＲＳ−４４
Ｂの無色結晶を得る。

このようにして得られたＲＳ−４４Ｂの理化学的性質及
び生物学的性質は、次のとおりである。　。

（抗生物質ＲＳ−４４Ｂの理化学的性質及び生物学的性
質） 〔１〕　　形　　状：　無色結晶 （２）　　　融　　　点　：　　１５７〜１６０　℃（
３）元素分析：　炭素５８゜１４％、水素６．７７％、
窒素１０．７０％、酸素２４．１３ ％ （４）　　分子ｆｔ：　　８９５（ＦＤマス・スペクト
ルによる） （５）比旋光度：　　〔α〕。　　−７６°（Ｃ＝０．
５、メタノール） （６）　　紫外線吸収スペクトル； ２６５肩（７，３）、２６８肩（８，１）、２７４（８
，５＞　　、２８２（７，１）（第１図のとおり） （７）赤外線吸収スペクトル； ＫＢｒ ｖ　　　　ｃｍ−’　　３３００．２９５０．１７２５
゜ａｘ １６３０、１５２５．１５００．１４５０．１４００゜
１２９５、１２４５．１１９５．１０８０．１０５０゜
１０２０、８２５．７４５．６９５ （第２図に示すとおり） （８）　　酸加水分解：　酸加水分解により、セリン、
スレオニン、グリシン、チロシン及び 未知アミノ酸を与える。

（９）呈色反応：　ドラーゲンドルフ（Ｄｒａｇｅｎ−
ｄｏｌｆ）　　反応、ライドン・スミス（Ｒｙｄｏｎ−
３ｍｉｔｈ　）反応に陽性 σＱ　溶　解　性　：　メタノール、酢酸エチル、クロ
ロホルムに易溶、水、ペンタン、 ヘキサン、ベンゼンに難溶 αＤ　薄層クロマトグラフィー：　　（米国メルク（Ｍ
ｅｒｃｋ）　　社製シリカゲル薄層ｔＭＯ，２５ｍｍ　
）溶　　　媒　　　　　　　　　　　　　Ｒｆ　　値酢
酸エチル：ベンゼン＝４：１　　０．１３（支）　抗菌
スペクトル二　通常の寒天平板希釈法による検定を行い
、最低阻止濃度 （ＭＩＣ）を求めた（使用培地： カビは、ポテトシュクロース寒天 培地、バクテリアは、ブイヨン基 天培地を用いた）。

この結果、ＲＳ−４４Ｂは、極 めて特異的にキサントモナス （Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ）　　属に属する細菌に対し
、強い生育阻止作用を示し、 通常のバクテリア、カビに対して は、はとんど生育阻止作用を示さ なかった。

（他物質との比較） ＲＳ−４４Ｂ物質は、その理化学的性質において、ペプ
チド系抗生物質と考えられる。しかしながら、ペプチド
系抗生物質であって、キサントモナス属の細菌に対して
のみ特異的に強い生育阻害作用を示すものは、現在まで
に見出されていない。

従ってＲＳ−４４Ｂを新規物質であると結論した。

（有用性） ＲＳ−４４Ｂは、上記の如く、キサントモナス属の細菌
に対して強い生育阻害作用を示すことから、農業用抗生
物質としての利用が期待される。

実施例 グルコース２％、可溶性澱粉１％、肉エキス０．１％、
乾燥酵母０．４％、大豆粉２．５％、食塩０．２％、リ
ン酸第２カリウム０．００’　５％の組成からなる培地
にＲＳ−４４株（ＦＥＲＭ　　Ｐ−８６８４）を接種し
て、９６時間、２８℃で振とう培養した。

この培養液２５ＡをｐＨ４で酢酸エチルで抽出し、ＲＳ
−４４Ｂ活性成分を含む抽出液を得た。これを減圧下に
濃縮して油状ｍ４．８ｇを得た。その後、この油状物を
メタノール２００ｍ１に、６０℃で溶かし、０℃に温度
を下げると結晶化した。これを更に濾別し、メタノール
で洗浄すると無色結晶４００　ｍｇが得られた。これを
高速液体クロマトグラフィー（カラム：２０胴φ×２５
０ｍｍ、ヌクレオシル５　’ｃ　、、、溶媒：メタノー
ル：水＝８：２、流速：６．Ｏｍｆ／分、圧カニ　１８
０　ｋｇ／ｃｍ）に付すと、保持時間１２分にＲＳ−４
４Ｂの活性ピークが現われる。この活性ピーク部分を集
め、メタノールがなくなるまで減圧下ａ縮し、沈澱を濾
別して、メタノールにより再結晶化すると純粋な無色結
晶としてＲＳＲＳ−４４Ｂ１５０が得られた。

【図面の簡単な説明】

第１図は、本発明の抗生物質ＲＳ−４４Ｂの紫外線吸収
スペクトルを示す図であり、第２図は、抗生物質ＲＳ−
４４Ｂの赤外線吸収スペクトルを示す図である。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、下記の理化学的性質を有する抗生物質ＲＳ−４４Ｂ
   。 （１）形状：無色結晶 （２）融点：１５７〜１６０℃ （３）元素分析：炭素５８．１４％、水素６．７７％、
   窒素１０．７０％、酸素 ２４．１３％ （４）分子量：８９５（ＦＤマス・スペクトルによる） （５）比旋光度：〔α〕＿Ｄ−７６°（Ｃ＝０．５、メ
   タノール） （６）紫外線吸収スペクトル： λ＾メ＾タ＾ノ＾ー＾ル＿ｍ＿ａ＿ｘｎｍ（Ｅ＾１＾％
   ＿１＿ｃ＿ｍ）２３０（９０）、２６５肩（７．３）、
   ２６８肩（８．１）、２７４（８．５）、２８２（７．
   １） （７）赤外線吸収スペクトル： ν＾Ｋ＾Ｂ＾ｒ＿ｍ＿ａ＿ｘｃｍ＾−＾１　３３００、
   ２９５０、１７２５、１６３０、１５２５、１５００、
   １４５０、１４００、１２９５、１２４５、１１９５、
   １０８０、１０５０、１０２０、８２５、７４５、６９
   ５ （８）酸加水分解：酸加水分解により、セリン、スレオ
   ニン、グリシン、チロシン及び 未知アミノ酸を与える。 （９）呈色反応：ドラーゲンドルフ反応、ライドン・ス
   ミス反応に陽性 （１０）溶解性：メタノール、酢酸エチル、クロロホル
   ムに易溶、水、ペンタン、 ヘキサン、ベンゼンに難溶 ２、ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属
   に属する抗生物質ＲＳ−４４Ｂ生産菌を培養し、その培
   養物から抗生物質ＲＳ−４４Ｂを分離採取することを特
   徴とする抗生物質ＲＳ−４４Ｂの製造法。 ３、抗生物質ＲＳ−４４Ｂ生産菌がストレプトミセス・
   エスピー・ＲＳ−４４（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｓ
   ｐ．ＲＳ−４４）である特許請求の範囲第２項に記載の
   製造法。