JPS63139190A - 抗生物質ｒｓ−１２２３及びその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （技術分野） 本発明は、抗生物質ＲＳ−１２２３及びその製造法に関
するものである。本発明の抗生物質ＲＳ−１２２３は、
ストレプトミセス属に属する抗生物質ＲＳ−１２２３生
産菌を培養して、その培養物から分離採取される文献未
載の新規抗生物質である。なお、Ｒ８−１２２３は、本
願に対応する中国特許出願において、”　Ｓ　Ｒ−１２
２３”と呼称される物質と同一の物質である。

（発明の背景） 近年、抗生物質は、医療用のみならず農薬用としても利
用しろるものが数多く見出されている。

本発明者らは、従来より上記の如き有用な抗生物質の探
索を目的として、多数の土壌中から微生物を分離し、そ
の産出する抗生物質について、精製、同定及び用途の開
発を行ってきた。

特に、本発明者らは、中国の土壌中より分離された土壌
放線菌の培養物からいくつかの新規な抗生物質を単離し
てきたが、今回、更に、それらとは異なった新しい抗生
物質を単離することに成功した。

（発明の目的） 本発明の目的は、新規な抗生物質および該抗生物質を放
線菌ストレプトミセス属に属する微生物から分離、採取
する方法を提供することにある。

（発明の構成） （使用する微生物） 本発明の抗生物質ＲＳ−１２２３を生産する微生物はス
トレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属す
る抗生物質ＲＳ−１２２３の生産能を有する菌種である
。

その−例として、ストレプトミセス・エスピー・ＲＳ−
１２２３（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｓｐ、　　ＲＳ
−１２２３）＜以下、”ＲＳ−１２２３株″゛と称する
。）を挙げることができ、該微生物は、上記の特性を有
し、本発明の抗生物質ＲＳ−１２２３を有利に生産する
ものであり、本発明の製造法に有効に利用し得るもので
ある。

また、上記ＲＳ−１２２３株の自然的及び人工的変異株
は勿論、ストレプトミセス属に属する菌種で後述の抗生
物質ＲＳ−１２２３の生産能を有する微生物はすべて本
発明方法において使用することができる。

上記ＲＳ−１２２３株は、中国逝江省で採取された土壌
中より分離された土壌放線菌であり、工業技術院微生物
工業技術研究所に昭和６１年１０月１５日付寄託され、
その微生物寄託番号は、微工研菌寄第９０１５号（ＦＥ
ＲＭ　　Ｐ−９０１５）である。

ＲＳ−１２２３株は、次の菌学的性質を有する。

１、形態的特徴 本菌株を菌体成分分析用培地であるグルコース・イース
トエキス培地で培養し、菌体を分離乾燥後６Ｎ−ＨＣｆ
中、１１０℃で２０時間加水分解したもののペーパーク
ロマトグラフではり、Ｌ−ジアミノピメリン酸が検出さ
れる。

本菌株を平板培養したものは螺旋性を有し、これは多数
の胞子の連らなった胞子鎖となる。

スターチ・イースト寒天培地、スターチ・無機塩寒天培
地上では気菌糸の発育は良好で灰色系となる。チロシン
寒天培地ではメラ、ニン様色素の形成があるが、可溶性
色素の顕著な生成は認められない。炭素源としての糖の
利用はソルボース、ソルビトール以外は良くこれを利用
する。

以上のことから本菌株はストレプトミセスに属するが、
各培地に於ける性状は次の様である。

２、各種培地での生育状態 ２７℃３週間培養、色調はディスクリブチイブ・カラー
・ネームズ・ディクショナリによる。

１）シュークロース硝酸塩寒天培地 発　　　育：普通 気　菌　糸：中庸　ｂオイスター　ホワイト裏　　　面
：　　　　２Ｃｂアイポリ−ティント可溶性色素：なし ２）クルコース・アスパラギン寒天培地発　　　育；普
通 気　菌　糸：少量　　　ｅ　グレイ 裏　　　面：　　　　　　３ｇｃ　　ライト・クン可溶
性色素：わずかに　３ｇｃ　ライト・クン３）グリセリ
ン・アスパラギン寒天培地発　　　育：良好 気　菌　糸：豊富　　４ｇｅローズベイシュ裏　　　面
：　　　　　３βｇライト・ブラウン 可溶性色素：わずかに３１ｇライト・ブラウン ４）スターチ・無機塩寒天培地 発　　　育；良好 気　菌　糸：豊富　５ｆｅ　　アッシュ裏　　　面：　
　　　　３ｅｃ　　ライト・ベージュ可溶性色素：なし ５）チロシン寒天培地 発　　　育：普通 気　菌　糸；なし 裏　　　面：４Ｎ１　チェストナツツブラウン可溶性色
素：４Ｐｆ！、　　ディープ・ブラウン６）栄養寒天培
地 発　　　育：普通 気　菌　糸：なし 裏　　　面：２ｇｃ　　バンブー 可溶性色素：なし ７）イースト・麦芽寒天培地 発　　　育：良好 気　菌　糸：殆どなし　ｅ　グレイ 裏　　　面：　　　　　３ｉｅ　　シナモン可溶性色素
：少量　　　３Ｊ２ｇ　ライト・ブラウン８）オートミ
ール寒天培地 発　　　育：不良 気　菌　糸：少量　３ｄｃ　　ナチュラル裏　　　面：
２ＩｌｌＣナチュラルストリング可溶性色素ｚなし ９）ペプトン・イースト・鉄寒天培地 発　　　育：普通 気　菌　糸：なし 裏　　　面＝３１ｅ　　シナモン 可溶性色素：３ｉｅ　　シナモン １０）スターチ・イースト寒天培地 発　　　育：良好 気　菌　糸：豊富　ｅ　グレイ 裏　　　面：３１ｅ　　シナモン 可溶性色素：少量　３ｆ１ｇ　ライト・ブラウン３、炭
素源の資化性（プリドハム・−゛ットリーブ寒天培地） 生育状態 Ｌ−アラビノース　　　　　　＋＋＋ Ｄ−キシロース　　　　　　　＋十＋ Ｄ−グルコース　　　　　　　＋十十 り−フラクトース　　　　　　＋＋＋ シニークロース　　　　　　　＋＋＋ ＋＋シトール　　　　　　　　＋十十 し−ラムノース　　　　　　　＋＋＋ ＋＋ィノース　　　　　　　　＋十十 り−マンニトール　　　　　　＋＋＋ ＋＋トース　　　　　　　　　　＋＋ メリビオース　　　　　　　　　＋＋ Ｄ−ガラクトース　　　　　　＋十＋ Ｌ−ソルボース　　　　　　　　± Ｄ−マルトース　　　　　　　＋＋＋ Ｄ−ソルビトール　　　　　　　± サリシン゛　　　　　　　　　　　　　＋コントロール
　　　　　　　　− ＋＋十　非常によく発育する。

＋＋　よく発育する。

＋　　発育する。

±　　ごくわずか発育する。

−発育しない。

４、その他の生理的性質 １、　至適温度　　　　　　　　　２５〜３５℃２、　
ゼラチンの液化　　　　　　　陰　性３、ミルクの凝固
・ペプトン化　　陽　性４、　スターチの加水分解　　
　　　陽　性５、　セルロースの分解　　　　　　陰性
ないし擬陽性 ６、　メラニン様色素の生成　　　　陽　性７、　硝酸
塩の還元　　　　　　　　陽　性８、　キサンチンの溶
解　　　　　　陽　性上記の記載にある如く、本菌株は
灰色系ストレプトミセスに属するものであり、これをバ
ージエイのマニュアル・オブ・ディタミネイティブ・バ
ｎ クテリオロジイ第８版（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ　Ｍａｎｕａ
ｌ　ｏｆＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ　Ｂａｃｔｅｒｉ
ｏｌｏｇｙ、　３ｔｈ　ｅｄｉｔｉｏｎ）により探索す
ると、ストレプトミセス・グリセオスポレウス（Ｓｔｒ
ｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｇｒｉｓｅｏ’５ｐｏｒｅｕｓ）
　　、ストレプトミセス・ルテオグリセウス又はこれに
極めて近縁の種であると推定される。

（培養法および精製法） 本発明の抗生物質ＲＳ−１２２３を得るに当たっては、
ストレプトミセス属に属する上記抗生物質生産菌を、抗
生物質を生産する通常の方法で培養することができる。

培養の形態は、液体培養でも固体培養でもよく、工業的
に有利に培養するためには、前記生産菌の胞子懸濁液又
は培養液を培地に接種し、通気攪拌培養を行えばよい。

培地の栄養源としては特に限定されることはなく、微生
物の培養に通常用いられる炭素源、窒素源、その他を培
地中に含有させることができる。

炭素源としては、澱粉、デキストリン、グリセリン、グ
ルコース、シニークロース、カラクトース、イノシトー
ル、マンニトールなどが、また窒素源としては、ペプト
ン、大豆粉、肉エキス、米ぬか、ｕ　、尿素、コーンス
テイープリカー、アンモニウム塩、硝酸塩、その他の有
機または無機の窒素化合物が用いられる。その他、無機
塩類、たとえば食塩、燐酸塩類、カリウム、カルシウム
、亜鉛、マンガン、鉄等の金属塩類等を適宜に添加して
もよく、必要に応じて消泡剤として、動、植、鉱物油等
を添加してもよい。培養温度、培養時間等の培養条件は
使用菌の発育に適し、しかもＲＳ−１２２３の生産が最
高となるような条件が選ばれる。たとえば、培地のｐＨ
は４〜９、特に中性付近がよく、培養の適温は２５°〜
３５℃程度がよい。

しかし、これらの培養組成物、培地の水素イオン濃度、
培養温度、攪拌条件などの培養条件は使用する菌株の種
類や、外部の条件などに応じて好ましい結果が得られる
ように適宜調節されるべきであることはいうまでもない
。このようにして得られる培養物から．ＲＳ−１２２３
を得るには、代謝産物を採取するのに通常用いられる手
段を適宜に利用して採取し得る。たとえば．ＲＳ−１２
２３と不純物との溶解度差を利用する手段、イオン結合
力の差を利用する手段、吸着親和力の差を利用する手段
、分子量の差を利用する手段のいずれも、それぞれ単独
、又は、適宜組合わせて、あるいは反復して使用される
。具体的には．ＲＳ−１２２３は、培養濾液にその大部
分が存在する。

その培養濾液のｐＨを酸性側、たとえばＩ］８４．０に
調整し、酢酸エチルのような有機溶媒で抽出し、濃縮し
て得られる油状物をシリカゲルカラムクロマトグラフィ
ー（例えば、溶媒：クロロホルム−メタノール系）に付
し．ＲＳ−１２２３活性区分を集めて濃縮する。得られ
た濃縮物を高速液体クロマトグラフィー（例えば、ヌク
レオシル（Ｎｕｃｌｅ−ｏｓｉｌ）　　５　Ｃ＋ｅ、溶
媒：メタノール水系に対し１％のジエチルアミン−ギ酸
を加えた系）に付し、ＲＳ−１２２３の活性ピークを集
め、ｐＨを酸性側、例えばＩ］８４．０に調整した後、
濃縮し、酢酸エチルのような有機溶媒で抽出し、洗浄、
濃縮してＲＳ−１２２３の粗粉末を得る。これを更に高
速液体クロマトグラフィー（例えば、ハイカーボン（Ｈ
ｉｇｈ　Ｃａｒｂｏｎ）　　○ＤＳ、溶媒：＃／　−ル
ー水系に対し１％のジエチルアミン−ギ酸を加えた系）
に付し．ＲＳ−１２２３の活性ピークを集め、上記と同
様に濃縮、抽出、洗浄、濃縮した後、凍結乾燥すること
によりＲＳ−１２２３の純粋な淡黄色粉末を得る。

このようにして得られたＲ１１２２３の理化学的性質及
び生物学的性質は、次のとおりである。

（ＲＳ−１２２３の理化学的性質及び生物学的性質） （１）形　　状：淡黄色粉末 （２）融　　点：１３０℃（分解） （３）元素分析：炭素６３．８５％、水素８．５６％（
４〕分子量：６６０（ＳＩＭＳマス・スペクトルによる
） （５）比旋光度：　〔α〕。　　＋１０°　（Ｃ＝１．
０、メタノール） （６）紫外線吸収スペクトル：第１図のとおり（７）赤
外線吸収スペクトル：第２図のとおりｍａｘ １５７０．１４５０．１３７０．１２７０．１１７０．
１０３０ （８）呈色反応ニアニスアルデヒド−硫酸反応に陽性 （９）溶解性：メタノール、酢酸エチル、アセトン、ク
ロロホルムに易溶、水、 ペンタン、ヘキサン、ベンゼン に難溶 αＱ薄層クロマトグラフィー：　く米国メルク（Ｍｅｒ
ｃｋ）　　社製シリカゲル薄層板０．２５＋ｎｍ）溶　
　　　　媒　　　　　系　　　　　　　　　　Ｒｆ値ジ
クロロホルムメタノール−２：１　　０．６４クロロホ
ルム：メタノール−１０：　１　　０．１７酢酸エチル
：ベンゼン＝４＋１　　　　０．１００Ｄ抗菌スペクト
ル：通常の寒天平板希釈法による検定を行い、最低阻止
濃 度（ＭＩＣ）を求めた （使用培地：カビは、ボテ トシニクロース寒天培地、 バクテリアは、ブイヨン基 天培地を用いた。） この結果．ＲＳ−１２２３ は、植物病原性糸状菌に対 し、強い生育阻止作用を示 し、通常のバクテリアに対 しては、はとんど生育阻止 作用を示さなかった。

０アスパジラス・ニガー　　　　　　　６２．５（Ａｓ
ｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｎｉｇｅｒ）（他物質との比較） 酸性、塩基性、中性において２７Ｏｎｍ付近に紫外部吸
収を示す抗生物質としては、クリオマイシン（Ｃｒｙｏ
ｍｙｃｉｎ）、ホモマイシン（Ｈｏｍｏｍｙｃｉｎ）、
ナフチリドマイシン（Ｎａｐｈｔｈｙｒｉｄｏｍｙｃｉ
ｎ）　、サブリオマイシン（Ｓｕｂｌｉｏｍｙｃｉｎ）
、ツバラクチノマイシン（Ｔｕｂｅｒａｃｔｉｎｏｍｙ
ｃｉｎ）　等が知られているが、これらはいずれも細菌
類に対し抗菌性を示す点で、本物質とは明らかに異なる
他、他の理化学的性質においても明らかに異なるので、
本物質を新しい抗生物質であると結論した。

（有用性） ＲＳ−１２２３は、上記の如く植物病原性の糸状菌に対
して強い生育阻害作用を示すことから、農業用抗生物質
としての利用が期待される。

（実施例） グルコース２％、可溶性でんぷん１％、肉エキス０．１
％、乾燥酵母０．４％、大豆粉２．５％、食塩０．２％
、リン酸第２カリウム０．００５％の組成からなる培地
に．ＲＳ−１２２３株（ＦＥＲＭ　　Ｐ−９０１５）を
接種して、９６時間、２８℃で振とう培養した。この培
養液１５ＡをｐＨ４に調整し、酢酸エチルで抽出し、減
圧下に濃縮して油状物８．５ｇを得た。その後、６０ｍ
ｍφ、長さ４００＋ｎｍのシリカゲルカラムを、クロロ
ホルム−メタノール（４：１）系溶媒で調製し、メタノ
ール溶解した上記油状物をかけ、展開した。各分画量は
１０−であり、分画Ｎｏ、　２５〜４７に活性区分が得
られた。上記活性区分を集め、減圧下に濃縮すると、２
，２ｇの濃縮物が得られた。これを、高速液体クロマト
グラフィー（カラム：２０ｍｍφ×３００ｍｍ、ヌクレ
オシル５Ｃ１８、溶媒；メタノール−水（７，５：２．
５）に対して１％のジエチルアミンーギ酸（ｐＨ７，３
）を加えた系、流速：　８．　ＯｒｄＺ分、圧力１７０
ｋｇ／ｃｆｆｌ）に付すと、保持時間１６分にＲ８−１
２２３の活性ピークが現われた。

このピーク画分を集め、０．ＩＮ塩酸でｐＨ４に調整し
、メタノールがなくなるまで減圧下で濃縮し、酢酸エチ
ルで抽出し、水で洗浄、次いで濃縮すると．ＲＳ−１２
２３の粗粉末２６ｍｇが得られた。

更にこのものを、高速液体クロマトグラフィー（カラム
：１０＋＋＋＋ｎφＸ２５０＋ｎ＋ｎ、ハイ・カーボン
ＯＤＳ、溶媒：メタノール：水：１％のジエチルアミン
−ギ酸（ｐＨ７，３）　　（７，５：１．５　：　１）
、流速：１．４艶／分、圧力１５０ｋｇ／ｃｆｆｌ）に
付すと保持時間２０分にＲ８−１２２３の活性ピークが
現われた。このピーク画分を集め、０．ＩＮ塩酸でｐｌ
（４に調整し、メタノールがなくなるまで減圧下で濃縮
し、酢酸エチルで抽出し、０．ＩＮ塩酸による洗浄、水
による洗浄を行った後、濃縮した。次いで、濃縮物をメ
タノールに溶解し、水を加え、メタノールがなくなるま
で減圧下で濃縮し、凍結乾燥して純粋なＲＳ−１２２３
の淡黄色粉末２６ｍｇを得た。

【図面の簡単な説明】

第１図は、本発明の抗生物質ＲＳ−１２２３の紫外線吸
収スペクトルを示す図であり、第２図は、抗生物質ＲＳ
−１２２３の赤外線吸収スペクトルを示す図である。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）下記の理化学的性質を有する抗生物質ＲＳ−１２
   ２３。 （１）形状：淡黄色粉末 （２）融点：１３０℃（分解） （３）元素分析：炭素６３．８５％、水素８．５６％（
   ４）分子量：６６０（ＳＩＭＳマス・スペクトルによる
   ） （５）比旋光度：〔α〕＾２＾５＿Ｄ＋１０°（Ｃ＝１
   ．０、メタノール） （６）紫外線吸収スペクトル： λ＾メタノール＿ｍａｘ　ｎｍ（Ｅ＾１％＿１ｃｍ）２
   ７０（５７９）（７）赤外線吸収スペクトル ν＾ＫＢｒ＿ｍａｘ　ｃｍ＾−＾１　３４００、２９０
   ０、１７５５、１７００、１５７０、１４５０、１３７
   ０、１２７０、１１７０、１０３０ （８）呈色反応：アニスアルデヒド−硫酸反応に陽性 （９）溶解性：メタノール、酢酸エチル、アセトン、ク
   ロロホルムに易溶、水、ペ ンタン、ヘキサン、ベンゼンに難 溶 （２）ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）
   属に属する抗生物質ＲＳ−１２２３生産菌を培養し、そ
   の培養物から抗生物質ＲＳ−１２２３を分離採取するこ
   とを特徴とする抗生物質ＲＳ−１２２３の製造法。 （３）抗生物質ＲＳ−１２２３生産菌がストレプトミセ
   ス・エスピー・ＲＳ−１２２３（Ｓｔｒｅｐｔｏ−ｍｙ
   ｃｅｓ　ｓｐ．　ＲＳ−１２２３）である特許請求の範
   囲第（２）項に記載の製造法。