JPS61254197A - リパ−ゼ基質、及びリパ−ゼの視覚的測定法及び測定試薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 リパーゼ（トリアジルグリセリンアシルヒドロラーゼＥ
Ｃろ、１．１．３）は油滴及び水性相聞の界面の乳化し
た長鎖脂肪酸のトリグリセリド全加水分解する。急性膵
炎又は膵臓癌のような一定の疾患においては、通常非常
に低い血清中のリパーゼ巖度が上昇し、従って、リパー
ゼ活性の測定は臨床上著しく重要である。従って、リパ
ーゼ測定は臨床化学にとって、並びに生物化学、薬化学
及び栄養化学にとっても著しく重要である。

従来技術 丁でに一連のリパーゼ測定法が公知である。

こうして、遊離酸全アルカリ液で滴定する。該方法は妨
害全党けや丁く、特に特異的ではない。

更にＵＶ中での測光法は公知である。こうして、西ドイ
ツ国％計公開第６３４２１０６号公報中にはＵＶ−測定
用基質として非イオン糸界面活性剤と組合わセた筒脂肪
酸のモノ−又はジクリセリドの使用が記制されている。

しかし々がらＵＶ−テストは比較的費用のかかる測定装
置全必要とし、かつ装置の故障、試薬の消耗のような可
能な妨害がしはしは容易にわからない。従って、簡単な
装置で実施することができ、直接視覚的にコントロール
することができる呈色テストに対する要求がある。

基質としてのジメルカプトプロパノ−ルート原 リエステル會色櫨体としてのジチオビスニトロ安息香酸
、エステラーゼ阻害剤及びリパーゼ賦活剤と一緒に使用
するクロ才力（Ｋｕｒｏｏｋａ　）による呈色テストは
丁でに公知である。しかしながらこの方法は十分な正確
さを示さない（Ｊ。

Ｃｌ１ｎ、　Ｃｈｅｍ、　Ｃ１１ｎ、Ｂｉｏｃｈｅｍ、
　第’ｌ　Ｑ巻、５３７〜５５２頁（１９８２年））。

史に、基質としてトリリルイン、補助系としてリポキシ
ゲナーゼを用いる方法が公知であるが、この除引き続き
行なう呈色反応において脂肪酸ヒドロペルオキシドによ
り鉄（］］　）ｋ鉄（ＩＩＩ　）　Ｋ酸化し、かつチオ
シアン酸鉄（ｍ）ｋ検出する。この方法は全く色順のお
ける結果を示さない（Ｊ。

Ｃ１：Ｌｎ、　Ｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　　第２
０巻、第７４５〜７５２頁（１９８２）） 混濁測定も公知であるが、比較的僅かな感度奮示す。

従って、本発明の課題は公知呈色テストの欠点を示さず
、正確な結果を提供し、操作が簡単で高い感度ヲ肩し、
種々の自動分析シヌテムへの適応が困難ではない僅かな
積層相全有する、リパーゼの測定のための呈色テストに
提供することである。

この課題は本発明により一般式 ］ ％式％ 〔式中、Ａは炭素原子数１〜１６のアルキレン基又はア
ルケニレン基？表わし、Ｒ及びＲ１は同−又は異なって
いてよく、それぞれ炭素原子数１〜２０のアルキル基、
アルケニル基又はアシル基？衣わ丁か、又はアルキル基
中の炭素原子数１〜８のアルキル置換していてよいアリ
ール基又はアルアルキル基を表わし、基Ｒ及びＲ１の１
万は水素原子であってもよく、Ｘは芳香族ヒドロキシ化
合物又はチオール化合物の基全衣わし、かつそれぞれＹ
及び２は相互に独立して−８−又は−〇−を表わし、２
は一〇Ｈ２−も衣わア〕のりパーゼ基質により解決する
。

リパーゼの作用下に、本発明によるリパーゼ基質ｌ−ｉ
基ＸＫ相え・する芳香族ヒドロキシ化合物又はチオール
化合物の遊離下に切断され、これらの化合物を直接視覚
的に測定するか又は好適な発色団又は螢光団とカップリ
ングさせ、カップリング生成物を測定する。

Ｒ又は／及びＲ１は有利に炭素原子数６〜１８、特に８
〜１２に表わす。加水分解に対する非鋭敏性のために、
Ｒ及びＲ１はアシル基よりアルキル基が特に有利である
。天然のトリグリセリドはアシル基會有しているにもか
かわらす、Ｒ及びＲ工がアルキル、アルケニル又はアル
アルキルを有する化合物が艮好なリパーゼ基質であるこ
とが判明したのは前処であった。

Ｒ及び／又はＲ１の例はアルキル基としてメチル−、エ
チル−、フロピルー、フチルー、ペンテルー、ヘキシル
−、ヘプチル−、オクチル−、ノニル−、デシル−、ウ
ンデシル−、ドテシル−、テトラデシル−、ヘキサデシ
ル−及ヒオククデシル基であり、更に相応するアシル基
、例えはアセチル−、プロピオニル−、ゾチリルー、バ
レリル−、カプロニル−、カフリルー、カプリニル−、
ラウリル−、ミリスチル−、パルミチルー及びステアリ
ル基並びにオレイル−、クロトニル−、リノリル基、フ
ェニル−、ベンジル−又はオクチルフェニル基である。

本発明によるリパーゼ基質はジカルボン酸Ｃ０ＯＨ”　
Ａ　−Ｃｏ○Ｈ（式中、Ａは有利に炭素原子数６〜７で
ある）の基を有する。Ａ７５′−誘導される酸の例とし
てはマロン酸、コハク酸、グルタル酸、アジピン酸、ピ
メリン酸、スペリン酸、アゼライン酸、セバシン酸、ノ
ナンジカルボン酸、デカンジカルボン酸及びウンデカン
ジカルボン酸である。炭素原子数３〜７のＡに相応する
、ゲルタール酸〜アゼライン酸が目ｉｌ記のように有利
である。

Ｘは芳香族ヒドロキシ−又はチオール化合物であって良
いが、これは発色団全形成するか又は後反応によジはじ
めて色票に変換する０とができる。典型的な例はフェノ
ール、チオフェノール、ナフトール、チオナフトール及
びその誘導体並びに自体発色団である化合物、例えばし
゛戸ルフィンー、クロルフェノールレット−、インドキ
シル−又はチオフルオレンイン桿；である。

好適なヒドロキシ−又はチオール化合物ケチべて挙げる
ことはその数が非常に多いので不ｉｊＪ能であるが、ま
さに発色性であるか、又は発色団に変換可能な芳香族ヒ
ドロキシ−又はチオール化合物は専門家に公知である。

僅かな極性を示し、かつ親油性である発色団が廟利であ
る。しかしながら水酊性はなお保証されているべきであ
る。

削記発色団の親油性特性は好適なｔ′、候によム例えは
アルキル恭でプラスに影９１　ｋうける。レゾルフィン
基に好適な置換分としては特にメチル−、ジメチル−及
びエチル基欠挙げることができるが、美果での置換も好
適である。

本発明による化８ｗＩＪは新規である。該化８物は不斉
中心？有しており、従って光学活性である。リパーゼ基
質としては通常の４法により生じるラセミ体としても、
光学活性異性体としても使用することができる。

本発明によるリパーゼ基質の製造は自体公知の方法によ
り行なうことができる。こうして、１．２−’Ｏ−ジエ
ーテルー及び１．２−ジアシルグリセリン誘導体は例え
ばメソツズ・イン・工、／テモａギー（Ｍｅｔｈｏａ８
　ｉｎ　Ｆｉｎｚｙｍｏ’ｌｏｇｙ　）、第９８巻、第
６２６頁（１９８３）及びオレギネ−（○’ｌｆ３ａｇ
ｉ　ｎθｕｘ　）、第２６巻、第１８５頁（１９６８年
）中に記載されている。アルカンジオール誘導体からの
合成は、例えはカナディアン・ジャーナル・オプ・ビオ
ケミストリー（Ｃａｎ、Ｊ、Ｂｉｏｃｈｅｍ、　）　ｆ
ｊＪ４４６巻、第６９員（１９６８年）に記載されてい
る。

１．２−〇−ジエーテルー及び１．２−ジアシル−グリ
セリン化合物から出発し、クロロホルム／ピリジンのよ
うな無水媒体中で相応するジカルボン酸舒水物と反応さ
セることにより相応するグリセロジカルボン酸モノエス
テルが得られる。ジカルボン酸無水物全製造するための
好適な方法はツーベン・パイル・ミューｙ　−（）Ｊｏ
ｕｂｅｎ　−Ｗｅ７１−　Ｍｕｅｌｌｅｒ　）の６メト
ーデンーデル・オルが一ニツシエン・ケミ−（ｙｅｔｈ
ｏｄθｎｄｅｒ　□ｒｇａｎｉｓｃｈｅｎ　Ｃｈｅｍｉ
ｅ　）　″、鉋ＩＶ　／　４巻、第７８６頁に記載され
ている。

基Ｘが誘導される芳香族ヒドロキシ−又はチオール化合
物でのモノエステルのエステル化は、例工ばジシクロへ
キシルカルボジイミドのような吸湿剤の存在下に芳香族
アルコール又はチオールとジカルボン酸モノエステルと
全直接反応させることによｆ）実施される。更に、ジカ
ルボン酸モノエステル會活性化エステル、例えはヒｒロ
キシスクシンイミドエステル又はイミダゾリドに変換し
、かつ活性化エステル全芳香族アルコール又はチオール
と反応、させることによっても実施することができる。

［、芳香族アルコール又はチオール金剛いてジカルボン
酸のモノエステル、例えばアジピン酸−モノニトロフェ
ニルエステル又はグルタル酸モノフェニルエステルケ製
造し、次いでこれ’に１．２’−０−ジアルキル−もし
くは−ジアシルグリセリンで、例えば酸クロリド、酢無
水物又は活性化エステルの中間体形成？介してエステル
化することも同様に可能である。芳香族アルコール又は
チオールとのジカルボ゛ン酷モノエステルの般造は例え
ば酸無水物と芳香族化合物とから１＝１のモル比で、又
はジカルボン酸と芳香族化合物とから２＝１のモル比で
、又は容易に脱離可能な保護基ｒ有するジカル４でン酸
モノエステルと芳香族化合物とから行なうことができる
。好適な方法は１９１１えはアルヒプ・デル、　７７　
／ｌ、’７　：、／イー（Ａｒｃｈ、　Ｐｈａｒｍ、　
）、第２８７巻、第５１４頁（１９５４年）に記載され
ている。

更に、１．２−０−ジアルキル−もしくは１．２−０−
ジアシルグリセロ−ジカルボン酸−モノエステルは、先
ずジカルボン酸と容易に脱離性のアルコール、例えはベ
ンジルアルコールｌｊ：２，２．２−　ト＋）クロルエ
チルアルコールとからジカルだン酸モノエステル會製造
し、次いでこのようにして得られ；＋ｔｌｋｌｆｆＪ記
ジアルキルーもしくはジアシル−グリセリンでエステル
化することによ！ｌｌ製造されることができる。

引き続き、保護基を除去し、芳香族アルコール又はチオ
ールとの反応を罰記のように行なう。

もう１つの製造法は、先す１，２−インプロピリデン−
グリセリンのような保護グリセリン會ジカルボン酸モノ
エステルと反応さセて相応して保護されたグリセロ−６
−ジカルボン酸−ジエステルを形成し、次いでグリセリ
ンの保護基を除去し、遊離した○Ｈ基食アルキル化もし
くはアシル化する。距後に、最初に存在したモノエステ
ル基（カルボキシル保護基）を脱離し、芳香族アルコー
ル又はチオールと反応させる。

本発明による基質の口１」記の製法はすべてではなく、
専門家は本発明による丁べての化合物會容易に製造する
ことができる一連の自体公知法ケ更に提供することがで
きる。罰記方法によジ得られたラセミ生成物から、所望
の場合光学的に純粋な異憔体會公知の分割法により得る
ことができる。同様に、該異性体を自体公知法で立体特
異的に経過する製法により獲得することもできる。

リパーゼの視覚的測定のための本発明による方法は、本
発明によるリパーゼ基質にリパーゼ含肩試、科會作用さ
セ、遊離した芳香族ヒドロキシ−又はチオール化合物の
童會Ｎ接又は好適な発色団と結合させたのち生じた色素
全視覚的に測定すること’ａ［徴とする〇 この方法の特徴は、公知方法において何１にも必要とさ
れる助酵素又はエステラーゼ阻害剤全必要としないこと
にある。この棟の添加物は高いたけでなく、多くの場合
あまり安定ではない。本発明の特別な利点は、本発明に
よるリパーゼ基質及び緩衝物質と共に、界面活性剤、特
に胆汁酸塩、コリパーゼ、発色性カップラー及び／又は
塩化ナトリウムのような塩を台上する、良好な保存注會
有する視覚的測定用臥薬會可能としたことである。更に
、該試薬は有利に尿素、保存剤及び／又は活性化剤奮含
石することができる。

有利外組成中には次の試薬全室７ＰＡ’する：基質　　
　　　　　　　　　０．０５〜１０１＋僚／祷、デソキ
シコール酸塩　　　　　　２〜５０〃夕／ｍＡ。

コリパーゼ　　　　　　　ｏ、ｏ　ｏ　ｉ〜ｏ、ｏ　ｉ
　＋ψ／罰、尿素１〜１ｏＯ〃！！７／ｍノ、 ＮａＣｌ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　Ｏ−
１〜１０　”／／ｍ’＼緩衝物質　　　　　　　　　　
　１〜５０〜／ｍｌ、（それぞれ試験におげろ赴１合済
的洒に対して）胆汁酸としては公知界面を占性胆汁澱、
例えはコール酸、タウロコール［テソキシコール酸、ク
ウロデソキシコール酸、グリコデソキシコール酸もしく
はそのアルカリ塩、特にナトリウム塩を挙げるごとがで
きる。有利な鷲は２〜５０ダ／　ｒｎｌである。

本発明による試薬のその他の主な成分はコリパーゼであ
る。竹に好適であるのは不純物不含コリパーゼである。

有利な忙はｏ、ｏ　ｏ　ｉ〜ｏ、ｏｉｍ！７／　ｒｔｔ
ｌである。

更に不発明による試薬は尿素ｔ、有利に１〜１００　ｍ
−Ｑ／　ｍｌ葡含石していてよい。

緩衝物質としては、本発明による試薬の範囲において−
１値を６．０と１０．５との間に調整する丁べての公知
緩衝剤が好適である。不利なＰＨ値範囲は７．０と９．
５との間である。好適な緩衝剤の例はジェタノールアミ
ン緩衝剤、トリエタノールアミン緩衝剤、トリス緩衝剤
、及びグツド（Ｇｏｏａ　）緩衝剤、例えばへペス（１
４ｅｐｅｓ　）　−緩衝剤（凍結乾・腺前の徐加に好・
適である）、タブ７、　（Ｔａｐｓ　）−緩衝剤、ＣＨ
ＫＳ−緩衝剤（２−（シクロへキシルアミノ）−エタン
スルホン酸）及びビシン（Ｂｉｃｉｎｅ　）である。有
利な緩衝物質糸″は１〜５０ノψ／　ｒｔｔｌの間にあ
る。

塩としてはアルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩及びア
ンモニウム塩が好適であり、０．１〜１０ｍ９／ｍｌの
１震度で使用するのが不利である。

保存剤としては測定子べぎリパーゼの酵素活性を妨害し
ないものが本発明の範囲において好適である。特に好適
であるのはアルカリアジド、特にす）　ＩＪウムアジド
である。他の保存剤、例えはチオシト及び他の硫黄含Ｍ
保存剤も同様に好適である。保存剤の不利な量は０．０
１〜２ｍ９／　ｍｌである。

活性化剤としてはアルカリ土類今風イオン、有利にカル
シウムイオンが好適である。カルシウムイオンはデンキ
シコール酸と不耐性の化合物と彦るので、カルシウムの
右在においてハ胆汁酸としてクウロデソキシコール酪〃
・有ｆｔＪ　？−、ｉ、ｒる、それというのもクウロデ
ソキシコール酸は１〜５ミリモルという高いカルシウム
濃度でホ１−容性であるためである。

最終組成に希釈することを指示した、乾煉又は議縮した
剤形會使用する場合、該剤杉はｂｉ」記物質を相応する
量比で、かつ有利に保獲コロイドで含有する。

保護コロイドとしては化学者に公知の物質、例えはポリ
ヒドロキシ化合唆へ血清アルブミン、承りビニルピロリ
ドン、固体ポリエチレンオキシド等である。不利にはポ
リヒドロキシ化＠物、特に分子中にペントース単位１〜
１０もしくはヘキソース単位１〜１０を肩するモノマー
もしくはポリマーのペントース又はヘキソース単位／ヌ
は室温で固体のポリエチレングリコールである。好適な
ポリヒドロキシ化合物の有利な例はマンニット及び類似
の糖アルコール、グルコースのオＩＪ−１’糖ｅ、マン
ノース、マルトヘプタオース、平均分子量３５００〜７
００口のポリエチレングリコール、その他これに類する
ものである。他の使用可能な保護コロイドは例えばアラ
ニンのようなアミノ酸、アラビヤゴムのような植物ゴム
等である。保護コロイドもしくは保護コロイドの混合物
の有利ガ量は２０〜９０重量係である。特に好適である
のは糖アルコール及びポリアルキレングリコールの混合
物である。

本発明による試薬は好適な担体材料上に含浸されて存在
していてもよい。吸収性担体材料並びに膨潤性、可溶性
フィルム形成性担体材料を挙げることができる。この形
において、本発明による試薬は直接視覚的に又は好適な
測定装置により測定することのできる試験テープの製造
全可能にした。

リパーゼを測定するための本発明による呈色試験は高い
感度で著しく正確な結＄ｔｋもたら丁。

本発明による呈色試験は操作が非常に簡単であり、試験
テープにも好適である。Ｍ／曽相が非常に僅かであるか
、又は全くないので、種々の自動分析装置−に容易に適
用することができる。

測定自体は終点法によっても、動力学的にも実施するこ
とができる。栓荀しなくてもよいし、生じた反応午成物
の振盪もしなくてよいので、多くの公知法に対して動力
学的に実施することができるという利点全弔する。

実施例 次に実施例につき本発明の詳細な説明する。

例　　１ ａ）ｉ、２−ｏ−ジヘギシルーｒａｃ−グリセロ−６−
グルタル酸モノエステル クロロホルムろＱ　ｍｌ中の１．２−０−ジヘキシルグ
リセリン３．３．９　’（１１，５ミリモル）の酸液に
、順次ピリジン２．５１１Ｖ、　４−ジメチルアミノピ
リジン　スパーチル先端量及びグルクル酸無水物２．６
　ｇ（２３ミ！Ｊモル）全添加する。混＠物に１０時間
還流下に加熱し、冷却後クロロホルム２００廐で希釈す
る。クロロホルム相を１Ｎ塩酸で振出し、乾燥させる。

乾燥側の濾別後、溶剤全吸引ａζ、過し、残分會シリカ
ゲルカラムヶ介して（市離剤：酢酸エステル／石油エー
テル１：１）精製する。

ＴＬＣ：　Ｒｆ：　０．４５　（酢酸エステル／石油エ
ーテル１：２＋氷酢１％） １．２−０−ジヘキシルーｒａｃ−グリセロ−３−グル
タル酸−Ｌノゾルフィンエステル：Ａリ　１　ａ）　　
１．４９　（３，７ミリモル）ラフｏ。

ホルム２Ｑｍｌ；中に溶かし、水冷下に蓚酸クロリド２
ｍｅ（２６，６ミリモル）を流加する。水浴を除去し、
溶液を室温で１２時間撹拌する。引き続き、酸剤を留去
し、残分？トルエン中に取り込み、再たび護縮する。ご
のようにして得られた油状物質γ更に精製することなく
使用する。

ｃ）　　レゾルフィン０．８　ｇ（３，７ミリモル）會
ジメチルホルムアミド４０．ｄ中にぎりジン１．１ｍｅ
及びスパーチル先端部誓の４−ジメチルアミノピリジン
の添加下に懸濁させる。これにジメチルホルムアミド２
０ｍ１中の１　ｋｌ）の溶液葡流加する。室温で１〜２
日間撹拌した後、薊過し、内削を蒸発させる。残分？酢
酸エステル中に取ジ込み、不溶性の成分を濾別し、極液
ｋＩＮ塙帥、次いで水で振盪する。石機相會乾燥させ、
ｍ剤會留去すると、油状残分が得られ、これケシリカゲ
ルのカラムクロマトグラフィーを介して精製する（ｌ＠
離剤：酢酸エステル／石油エーテル　１：１）。ＴＬＣ
：　Ｒｆ：　０．７０　（酢酸エステル／ヘキサン　１
；１） 例　　２ ａ）１．２−０−ジオクチル−ｒａｃ−グリセｏ−３−
４”ルクル酸−モノエステル 例ｉ　ａ）と同様にして、１．２−０−ジオクチル−グ
リセリン１３ｇ（４１ミリモル）、クロロホルム１５３
　ｍｌ　％ピリジン１Ｑ＋ｕ及びダルクル酸無水＠６．
８　ｇ（５９，５ミリモル）から製造。

収率：６．５．９（３７％〕 ＴＬＣ：　’Ｆｔｆ：　［１，３１（酢酸エステル／石
油エーテル１：１）。

１．２−０−ジオクチル−ｒａｃ−グリセロ−３−グル
グル酸レソルフインエステル：ｂ）例１　ｂ）と同様に
して２　ａ）　２　ｇ（４，５ミリモル）から製造。

Ｃ）レゾルフィン０．９６９　（４，５ミリモル）會り
ロロホルム５０ｍｆ中に、１，８−ジアザ−シクロ−（
５，４，３）−ウンデク−７−エン０．７５＋ｄ（５ミ
リモル）及び４−ジメチルアミノピリジン０．１ｇの添
加下に酌が丁。ここにクロロホルム２０ａ中の２１））
の溶液全滴下する。

１〜２日間室温で撹拌した後、總過して＼ｍ剤會留去す
る。例１ｃ）と同様に処理を行なう。

ＴＴＪＣ：　Ｒｆ　：　０．６６　（酢酸エステル／ヘ
キサン１：１）。

例　　６ リ　１，２−０−ジオクチル−ｒａｃ−グリセロ−６−
ビメリン酸−モノエステル 例１　ａ）と同様にして１・２−０−ジオクチルグリセ
リン５．２　ｇ（１０ミリモル）及びｔメリン酸無水物
２．１　ｇ（１５ミリモル）から製造。

ＴＬＣ：　Ｒｆ：　０．６１　（酢酸エステル／石油エ
ーテル１：１） 工Ｒ（ｃｍ−１）　：　（膜）：１７，１１０．１７１
００１．２−０−ジオクチル−ｒａｃ−グリセロ−５−
ピメリン酸−レゾルフインエステル：ｂ）例１１））と
同様にして３　ａ）’２”２ｇ＜　４．７ミリモルンか
ら製造 Ｃ）例２　Ｑ）と同様にして、レゾルフィン１ｇ（４，
７ミリモル）、１．８−シアずビシクロ−（５，４，０
）−ウンデク−７−ニン０．７１及び３ｂ）から例２　
Ｑ）と同様に製造。

ＴＬＣ：　Ｒｆ＝　［１，７８（酢酸エステル／ヘキサ
ン１：２） 例　　４ ａ）１．２−０−ジオクチル−ｒａｃ−グリセロ−６−
アゼライン彫ノーモノエステル例ｉ　ａ）と同様にして
１．２−０−ジオクチルークリセリン６．３　ｇ（２０
ミリモル）、クロロホルム８０Ｍ１ピリジン５　ｒｎｌ
ｊ及びアゼライン酸無水？！Ｉ５゜２　ｇ（３０ミ！ｊ
モル）から製造。

１．２−０−ジオクチＡ／　−ｒａｃ−グリセロ−６−
アゼライン散−レゾルフインエステル＝ｂ）　　ｆｌｌ
　１１））　、！−同ｌ４ｅＫして４　ａ）　３．２　
ｇ（６，５ミリモル〕及び蓚酸クロリド６ｍｌから製造
。

Ｃ）例２０）と同様にしてレゾルフィン１．４ｊｌ　（
６，５ミリモル）、クロロホルム６５−１１．８−シア
ずビシクロ−（５，４，０）−ウンデク−７−ニン１．
１１及び４ｂ）から製造。

ＴＬＣ：　ｎｆ−０，８６（酢酸エステル／ヘキサン１
：２） 工Ｒ（ｃｒｎ−１）　：　（ｌｊｌｔｊ）　１７６２．
１７６６例　　５ ａ）１．２−０−ジデシル−ｒａｃ−グリセロ−３−グ
ルタル酸−モノエステル 例１　ａ）と同様にして１．２−０−ジデシル−グリセ
リン３．７．９　（１０ミリモル）、クロロホルム４０
継、ピリジン２．５ｍｌ及びグルタル酸魚水物１．８．
９　（１５，８ミリモル）から製造。

ＴＬＣ：　Ｒｆ：　０．７７　（ｒＷ−’Ｗｘステル／
ヘキザン１：２） １．２−０−ジデシル−ｒａｃ−グリセロ−ろ−クルタ
ル酸−レゾルフインエステル：ｂ）例１ｂ）とＩＨＩ　
株にして５　ａ）２．５　ｇ（５ミリモル）、クロロホ
ルム５　Ｑ　〃ｌｌ及び蓚酸クロリド２．’；１ｍｌか
ら製造。

Ｃ）例２りと同様にしてレゾルフィン１．１ｇ（５ミリ
モルＬｌ、８−ジアザビシクロ−（５，４，０）−ウン
デク−７−エン１祷及び５１））から製造。

ＴＩ、Ｃ：　Ｒｆ＝　０．７０　（酢酸エステル／ヘキ
サン１：１） 例　　６ ａ）１＋２−ｏ−ジウンデシｐｖ　−ｒａｃ−グリセロ
−６−グルタル酸−モノエステル 例１ａ）と同様にして１．２−０−ジウンデシルークリ
セリン２ｇＣ５ミリモル）、クロロホルム２５祷、ピリ
ジン１．４＋＋＋Ａ’及びグルタル酸無水物０．９．９
　（７，５ミＩＪモル）から製造。

ＴＬＣ：　Ｒｆ：　Ｏ−５５（酢酸エステル／石油エー
テル１：２） 工Ｒ，（ｃｔｒｔ−１）　：　（膜）　１７４０．１７
１０１．２−０−ジウンデシルーｒａｃ−グリセロ−６
−グルタル酸−レゾルフインエステル＝ｂ）例１　ｂ）
と同様にして６　ＩＩ’）　２　ｇ（３，９ミリモル）
、クロロホルム５酎及び蓚酸クロリド１．８ｍノから製
造。

Ｃ）例２　Ｑ）と同様にして、レゾルフィン０．８３　
ｇ（３，９ミリモル〕、１，８−シアずビシクロ−＜５
．４．０）−ウンデク−７−エン０．６１　ＷＬｌ及び
６　ｂ）から製造。

ＴＬＣ：　ｘｆ−［１，４７（ｘ’Ｅ’　１８、エタノ
ール／アセトン２：１） 例　　７ ａ）１．２−〇−ジラウリルーｒａＣ−グリセロ−６−
グルタル酸−モノエステル 例１ａ）と同様にして、１．２−０−ジラウリル−グリ
セリン１０．７　、！９　（２５ミリモル）、（２Ｂ） クロロホルム７０成、ピリジン５．５威及びグルタル醒
無水物５．５　ｇ（２９ミリモル）から製造。

ＴＬＣ：　Ｒｆ：　１１．３３　（１ｒＩ−酸ｘステル
／石油エーテル１：１） 工Ｒ（ｃｍ−”）：（膜）：１７，４１．１７０８１１
２−０−シラウリ７ｔ、　−ｒａｃ−グリセロ−３−グ
ルタル酸−レゾルフインエステルｂ）例１１））ト同様
Ｋして、７　ａ）　５．５　、！ｉ’（１０ミリ七ル）
、クロロホルム５０ｄ及び修隙クロリド４．６ミリモル
から製造。

リ　例２Ｃ）と同様にして、レゾルフィン２．２、！９
（１０ミリモル）、クロロホルム１００ｄ及び１，８−
シアずビシクロ−（５，４，０）−ウンデク−７−ニン
１．５ｍｌ及び７１））から製造。

ＴＬＣ：　Ｒｆ＝　０．７８　（酢酸エステル／石油エ
ーテル１：１） 工Ｒ（ｃ７ｎ−１）：（膜）１７６５．１７２０例　　
８ １１．２−０−ジラウリル−ｒａｃ−グリ七〇１−３−
ピメリン酸・−モノエステル例１　ａ）と同様にして、
１．２−０−ジラウリル−グリセリン８．６　ｇ（２０
ミリモル）、クロロホルム５０ＴｎｌＸ　ピリジン１５
−及びピメリン酸無水？＋４．３ｇ（３０ミリモルンか
ら製造。

ＴＬＣ：　ｐ、ｆ：　ＩＪ、５（酢酸エステル／石油工
箋チル１：２） 工Ｒ（ｚｙ＋−１）　：膜：１７ｄＯ１１７１０１，２
−０−ジラウリル−ｒａＱ−グリセロ−３４’、’ＩＪ
ン酸−レゾルフインエステル：ｂ）例１　ｂ）と同様に
して、８ａ）１．６６ｇ（６ミリモル）及び蓚酸クロリ
ド１．６虹から製造。

リ　例２０）と同様にして、レゾルフィン０．６５　、
！ｉ’　（３ミリモル）、クロロホルム３０ｍ１．１．
８−シアずビシクロ−（５、、４、０）−ウンデク−７
＋　エフ　Ｑ、５　ｎｒｉＶ及び８′ｏ）から製造。

ＴＬＣ：　Ｒｆ、−０，７５（酢酸エステル／ヘキサン
１：１） 工Ｒｃｃｍ’　）　：　ＣＢｊＬ）　：　１７６８．１
７３９′例　　９ ａ）１．２−ｏ−ジテトラデシ７ｔ、−ｒａｃ−グリセ
ロ−３−グルタル酸−モノエステル１．２−０−ジテト
ラデシルーグリセリン１４．６．！ｉ’（３０ミリモル
）、クロロホルム１５０ｍ１、ピリジン８．２　ｖＬｌ
及びグルモル榮゛無水’Ｉ！ｌｌ！１５．１ｇ（４５ミ
リモル）から例１　ａ）と同様にして製造。

ＴＬＣ：　Ｒｆ：　０．４２　（酢酸エステル／石油エ
ーテル１：２） 工Ｒ（ｃＩｎ−’　）　：　（ＫＢｒ）　１７４０．１
７１０１．２−０−ジテトラデシルーｒａＣ−グリセロ
−６−グルタル酸−レゾルフインエステル：ｂ）例１　
ｂ）と同様にして、９ａ）４．９（５ミリモル）及び蓚
酸クロリド２．２ｍｌから製造。

Ｃ）例２　Ｃ）と同様にしてレゾルフィン１．［１６ｇ
（５ミリモル）、クロロホルム５０ｍ１ｚ　　１　＋８
−ジアザビシクロ−（５，４，０）−ウンデク−７−ニ
ン０−７５ｍ１；及び９１））から製造。

ＴＬＣ：　Ｒｆ＝　ｏ、６４　（ＲＰ　１　ｓ、アセト
ニトリル／ジクロルメタン１：１） 工Ｒ（ｃＩｒＬ−１）　　＝（ＫＢｒ）　　＝１７６３
．１７６５例１０ ａ）１．２−〇−ジテトラデシ／ｌ／　−ｒａｃ−グリ
セロ−６−ピメリン酸−モノエステル例９　ａ）と同様
にして、ピメリン酸無水物６．４ｇ（４５ミリモル）か
ら製造。

ＴＬＣ：　Ｒｆ：　０．４５　（酢酸エステル／石油エ
ーテル１：２） 工Ｒ（ｃｍ−１）　：　（膜）１７４０，１７０８１．
２−０−ジテトラデシルーｒａｃ−グリセロ−６−ピメ
リン酸しゾルフィンエステルｂ）例１　ｂ）と同様にし
て、１０＆）　３．１９（５ミリモル）及び蓚酸クロリ
ド’１．’１ｍ１ｌから製造。

Ｃ）例２Ｑ）と同様にして、レゾルフィン１．０６　ｇ
（５ミリモル）、りｏｏホルム５０ｗＬｌ及び１，８−
シアずビシクロ−（５，４，０）−ウンデク−７−：ｆ
−ン０．７８ｍ１及び１０ｂ）から製造。

ＴＬＣ：　Ｒｆ＝　０．７１　（酢酸エステル／石油工
一チル１：２） 工Ｒ（Ｃｍ−１）　：　（膜）：１７５５．１７６４例
１１ ａ）１．２−ｏ−ジヘキサデシ／Ｉ、−ａｎ−グリセロ
−３−４”ルタル臣−モノエステル例１ａ）と同様にし
て、１，２−ジヘキザデシルー日ｎ−グリセリン２．７
　ｇ（５ミリモル）、クロロホルム５０ｗＬｌ、ピリジ
ン６罰及びグルタル酸無水物１．５ｇ（１３ミ’Ｊモル
）から製造。

ＴＴＪＣ：　Ｒｆ　：　０．６５　（酢酸エステル／石
油エーテル１：１） ＩＲ（ｍ−１）：　ＣＫＢｒ）１７４０，１７１０１．
２−０−ジヘキサデシルー８ｎ−グリセロ−３−グルタ
ル酷−レゾルフインエステル：リ　例１　ｂ）と同様に
して、１１　ａ）　２．２ｇ（６，６ミリモル）及び蓚
酸クロリド１ｍｅから製造。

リ　例１りと同様にして、レゾルフィン０．７１　ｇ（
３，３ミリモル）、ジメチルホルムアミド２０１、ピリ
ジン０．５　ｍｌ　＆　Ｕ　１　ｌ　ｂ）　カラ製造。

ＴＬＣ：　Ｒｆ＝　０．７２　（酢酸エステル／石油エ
ーテル１：２） 例１２ ａ）１．２−ｏ−ジベンジル−ｒａｃ−グリセロ−６−
グルタル酸−モノエステル 例ｉ　ａ）と同様にして、１．２−０−ジベンジル−グ
リセリン３ｇ（１１ミリモル〕、クロロホルム３０Ｉｎ
ｌ、ピリジン２−５ｒｎｌ及びグルタル酸無水物１．８
ｇ（１６ミリモル）から製造。

ＴＩ、Ｃ：　Ｒｆ：　０．３９　（酊＝酸エステル／石
油エーテル１：１＋氷酢１％〕 ｉ、２−ｏ−ジベンジル−ｒａｃ−グリセロ−６−グル
タル酸−レゾルフインエステル：ｂ）例１　ｂ）と同様
にして、１２　ａ）　２．９９（７，５ミリモル）、ク
ロロホルム６Ｑ’ｍｌ及び蓚酸クロリド６．６プから製
造。

Ｃ）レゾルフィン１．６　、！ｌｉ’　（７，５ミリモ
ル）、クロロホルム７５ｍｌ、　　１　、　’８−ジア
ザビシクロ−（５，４，０）−ウンデク−７−ニン１．
２ｒｎｌ及び１２ｂ）から、例２Ｃ）と同様に製造。

ＴＬＣ：　Ｒｆ＝　０．４８　（酢酸エステル／ヘキサ
ン１：１） 例１６ リ　１−ｏ−オクタデシル−２−０−ベンジル−８ｎ−
グリセロ−６−グルタル酸“モノエステル １−０−オクタテンルー２−ｏ−ベンジル−５ｎ−グリ
セリン２．２　ｇ（５ミリモル）、クロロホルム５０ａ
１　ピリジン３ｄ及びグルクル酸無水物１．５ＥＣ１６
ミリモル）から例ｉ　ａ）と同様にして製造。

工　Ｒ（ｃｎ”）：（月ｋ）１７３０　、１７００１−
０−オクタデシル−２−〇−ベンジル−８ｎ−グリセロ
−６−グルグル酢−レゾルフインエステル： ｂ）例１ｂ）と同様にし℃、１３ａ）１．７ｇ（６，１
ミリモル）及び蓚版・クロリド１．６ｒｎｌから製造。

リ　例１ｃ）と同様にしてレゾルフィン０．８ｇ（ロア
ミリモル）、ジメチルホルムアミド２０ＦＩＬｌ、ピリ
ジ７　［］、７―及び１６ｂ）から製造。

ＴＬＣ：　Ｒｆ＝　０．６８　（酢酸エステル／石油エ
ーテル１：１） 工Ｒ（ｃｍ−１）　：　（ＫＢｒ）　：　１７６８．１
７５９例１４ ａ）１．２−ジオクタノイル−８ｎ−グリセロ−３−グ
ルタル酸−モノエステル １．２−ジオクタノイル−８ｎ−グリセリン６．８９　
（２０ミリモル〕、クロロホルム１００祷、ピリジン１
２．５−及びグルグル酸無水物５．８　、！９　（５［
］ミリモル）から例１りと同様にして製造。

ＴＬＣ：　’Ｒｆ：　０．４９　（酢酸エステル／石油
エーテル１：１） １．２−ジオククノイルーｓｎ−グリセロ−３−グルタ
ル酸−レゾルフインエステルｂ）例１　ｂ）と同様にし
て１４　ａ）　２．２　Ｆ　Ｃ５ミリそル）及び蓚酸ク
ロリド２．２鮮から製造。

Ｃ）レゾルフィン１．０５９（５ミリモル）、ジメチル
ホルムアミドろ０１、ピリジン０．７５ｍ１及び１４ｂ
）から例１ｃ）と同様にして製造。

ＴＬＣ：　Ｒｆ＝　０．８６　（ＲＰ　１８、アセトニ
トリル／ジクロルメタン１：２） 例１５ ａ）１．２．　−ジオレイ／Ｉ／　−ｒａｃ−グリセロ
−３−グルクル酩−モノエステル 例１りと同様にして、ジオレイン３．１　、！ｉ＋　（
５ミリモル）、クロロホルム４［３ｍＡ、＄リジン６ｍ
ｌ及びグルクル酸無水ｆａ１−５ｇ（１３ミリモル）か
ら製造。

ＴＬＣ：　Ｒｆ＝　０．３２　（酢酸エステル／石油エ
ーテル１：１） 工Ｒ（１−１）：（膜）：１７４０．１７０６′ジオレ
インは工業用ジオレインからシリカゲル上で溶離剤とし
て酢酸エステル／石油エーテル１：６會用いてクロマト
グラフィーを行なりことにより純粋な形に製造すること
ができる。

１．２．−ジオレイル−ｒａｃ−グリセロ−６−クルタ
ル酸−レゾルフインエステル：′ｂ）　　１５ａ）　３
．５９（４，８ミリモル）及びイ疼酸クロリド１．３ｍ
／＋から例１　ｂ）と同様にして製造。

Ｃ）レゾルフィン０．９　ｇ（４，２ミリモル）、ジメ
チルホルムアミド２０威、ピリジン１ｍ１Ｖ）Ｊひ１５
ｂ）から例１Ｃ）と同様にして製造。

例１６ １．２−０−ジテトラデシルーｒａｃ−グリセａ−ピメ
リン酸−ナフチルエステル 製造は１−ナフトール０．７２　、！ｉ’　（５ミリモ
ル）から例１［］１））及びＣ）と同様に行なう。俗離
剤酢酸エステル／ヘキサン１：６會用いてシリカケ８ル
上でフラッシュ・クロマトグラフィーにより精製。

ＴＬＣ：　Ｒｆ＝　０．８９　（酢酸エステル／石油エ
ーテル１：５） 例１７ １．２．−ジオレイＡ／　−ｒａｃ−グリセロ−６−ク
ルタル１設−レゾルフインエステル例１５ａ）による１
、２−ジオレイル−６−クリセログルクル酸モノエステ
ル１［１，３，！ｉ’（１４，２ミリモル）、レゾルフ
ィン６．２μ（１５ミリモル）、ジシクロへキシルカル
ボジイミド６．２．！７（，３０ミリモル）及びスパー
チル先端部慧の４−ジメチルアミノピリジンをジメチル
ホルムアミド７５ｍ中で室温で２〜６日間撹拌する。次
いで、酢酸エステルで希釈し、沈殿金旋別する。酢酸エ
ステル相’ｋｌＮ塩酸で振出し、仇酸ナトリウム上で乾
燥させる。浴剤を留去した後、油状残分が召ノられ、こ
れ會シリカケゞルーカラムクロマトグラフィー（俗離剤
：＃酸エステル／石油エーテル１：１）によ！ｌ　ｍ　
’Ｈする。

同様に、相応するクロルフェノールレット誘導体が製造
された。

ＴＬＣ”、　Ｒｆ＝　０−６９　（ＲＰ　１８　；イソ
プロパツール／メタノール１：２） 例１８ １．２−０−ジオクチル−６−ビメリン酸−モノエステ
ルの製造 第１工程：文献：　Ｊ、Ｈ，ショー′ト（５ｈｏｒｔ　
）、Ｕ、ビーヤマツヒヤ−（Ｂｊ−ｅｒｍａｃｈｅｒ　
）著、Ｃｈｉ、ｍ、　Ｔｈｅｒ、第１９６６巻、第４５
６頁ピメリン酸モノベンジルエステルの合成（５ｙｎｔ
ｈｅｓｅｖｏｎ　Ｐｉｍｅｒｉｎｓａｕｅｒｅ　ｍｏｎ
ｏｂｅｎｚｙｌ・ｓｓｔθｒ）。

第２工程：ピメリン酸モノベンジルエステル２．５　ｇ
Ｃ，１０ミリモル）から１り１１１ｂ）と同様に製造。

イ得られた油状物質全１　、２−〇−ジオクチルグリセ
リン３．２．９（１０ミリモル）、ピリジン７−の溶液
に流加する。例Ｉ　Ｃ）と同様に処理。

第６エ程二前記生成物全テトラヒドロフラン２Ｏｄ中に
酎かし、パラジウム／活性炭０．４９ｋ　Ｓ’ｘ加後水
素添加した。粗生成ｗＪヲシリカゲルーカラム會介して
精製する。

浴離剤：酢酸エステル／石油エーテル１：１゜ＴＬＣ：
　Ｒｆ＝　０．６１　（酢酸エステル／石油エーテル１
：１） 工　Ｒ（１−ユ　）　：　膜　：１７４０　、　１７１
０例１９ １．２．　−ジオレイル−グリセロ−６−グルタル酸モ
ノエステルの合成 ａ）１＋２−ｏ−インプロピリデン−グリセロ−３−グ
ルタル［１ｌＪ７０ルエテルエステル 第１工程：イソプロぎりデングリセロール５．５５　ｇ
（４２ミリモル）及び２．２．２−トリクロルエチル−
水系−クルタル酸エステル１２　ｇ（４５，３ミリモル
）葡エチレングリコールジメチルエーテル中に酌かし、
ジシクロへキシルカルボジイミド１０．５　、！ｉ’　
（５１ミリモル〕を添加した。２日間撹拌した後飾過し
、蒸留する。

沸点：１７０℃（０，１鼎Ｈｇ）ｍ色油状＠質。

ＴＬＣ：Ｒｆ−０，８２（アセトン／クロロホルム１：
８） 第２工程：得られた油状物質ケエーテル１１ｍ１中に的
かし、メタノール６ｍｌ及び６Ｎ塩酸６ｍｌ　ｐ添加し
、室温で１２時間撹拌する。肩機相酸 全飽和炭鵞水素す）　ＩＪウム溶液で、次いで飽和塩化
ナトリウム溶液で振出し、乾燥させる。俗剤全留去した
後、油状残分が残留する。

ＴＬＣ：　Ｒｆ＝　０．２３　（酢酸エステル／石油エ
ーテル１：１） １））１．２−ジオレイル−グリセロ−６−グルタル酸
トリクロルエチルエステル 第６エ程二前記生成物６．１　ｇ（１８ミＩＪモル）及
び油酸７．８４　ｇ（３８ミリモル）會エチレングリコ
ールジメチルエーテル１００廐中にｍかし、エチレング
リコールジメチルエーテル５０Ｍ中のジシクロへキシル
カルボジイミド１Ｑ、５Ｉ（ロアミリモル）を筒部する
。室温で１２時間攪拌した後、濾過し、順次６Ｎ塩酸、
戻酸水累ナトリウム浴液で、次いで水で缶出する。有機
相の乾燥及び濃縮後、残分子シリカゲル上クロマトグラ
フィー？行なう。

第４工程：１．２．　−ジオレイル−グリセロ−６−グ
ルタル酸−モノエステル トリクロルエチル保護基會文献〔シュステ（Ｊｕｓｔｅ
　）、シンテシス（５ｙｎｔｈｅｓｉｓ　）　、１９７
６巻、第４５７員〕により脱離。

例２０ リ　１，２−０−ジデシル−ｒａｃ−グリセロ−３−ピ
メリン酸−モノエステル １．２−０−ジデシル−グリセリン５．６ｇ（１５ミリ
モル）、クロロホルム１ｏｏｉ、ピリジン３．２＋Ｊ及
びピメリン酸無水物４４１　ｆＪ　（２８ミリモル）か
ら例１ａ）と同様にして製造。

ＴＬＣ：　Ｒｆ＝　０．３６　（酢酸エステル／ヘキサ
ン１：１） 工Ｒ（σ−１）＝（腺）１７３５．１７１０１．２−０
−ジデシル−ｒａｃ−グリセロ−６−ビメリン酸−レゾ
ルフインエステル ｂ）　　２　Ｄａ）　３ｇ（５，８ミリモル）、りｏ。

ホルム５０祷及び蓚酸クロリド２．２祷から例１ｂ）と
同様にして製造。

Ｃ）レゾルフィン１．１　ｇ（５ミリモル）、１．８−
ジアザビシクロ−（，５，４，０）−クンデク−７−エ
ン１ｉＡ（６，４ミリモル）及び２０１）から例２Ｃ）
と１−１＝、１様に製造。

ＴＬＣ：　Ｒｆ＝　Ｏ’、７１　（酢酸エステル／ヘキ
サン１：１） 工Ｒ（ｃｍ’　　）：　　（ＩＩＩ）１７５５．１７２
０例２１ ａ）１．２−０−ジラウリル−ｒａｃ　−、ｚ’リセロ
〜６−アゼライン酢−モノエステル １．２−０−ジラウリルグリセリン６．７９（１５，６
ミリモル）、クロロホルム１００ｍｇ。

ピリジン６．２罰及びアゼライン酸無水物４．０ｇ（２
６ミリモル）から例１　ａ）と同様にして製造。

ＴＴＪＣ：　Ｒｆ＝　ｔＪ、２２　（酢酸エステル／ヘ
キサン１：１） 工Ｒ（ぼ−１）：（膜）：１７３８．１７１０１．２−
〇−ジラウリルーｒａｃ−グリセロ−６−アゼライン酸
−レゾルフインエステル’ＩＩ））　　２１　ｆＬ）　
１．５ｇ（２，５ミリモル）、クロロホルム３０ｍ１及
び蓚酸クロリド１．５罰から例１　ｂ）と同様にして製
造。

Ｃ）レゾルフィン０．５５　ｇ（２，５ミリそル）、ク
ロロホルム２５ｍ、１．８−ジアザビシクロ−（５，４
，０）−ウンデク−７−ｘ　ｙ　Ｑ、５ｍｚ（３，２ミ
リモル）かび２１ｂから例２Ｃ）と同様にして製造。

Ｔｒ、、ｃ　：　Ｒｆ＝　０．７８　（酢酸エステル／
ヘキサン１：１） 工Ｒ（１−”）：（膜）：１７６２．１７４０例２２ 蒸留水６３ａ／；中に撹拌下にデソキシコール酢ナトリ
ウム１．２９及びコリパーゼ（豚から）１１．１５ｍσ
ケ溶かす。強力が撹拌下にｎ−プロパツール１．７ｍｌ
中のリパーゼ基質、１．２−０−ジオクチル−ｒａｃ−
グリセロ−６−アゼライン酸−レゾルフインエステル（
例４）７０ｍｇの溶液を加圧下にできるだけ細い噴流で
注入する。

蒸留水２００　ｍＡ中に尿紫１−５　ｇ、デソキシコー
ル師ナトリウム１ｇ、塩化ナトリウム２０　Ｇ　１１１
１７゜トリ、ｌ（（ＴＲ工５）８００１１１１＆、９ひ
トリ、’（−ＨＣ’１１　（１７ｍｅケ済解して営有す
る溶液を別記のように製造した乳汐と十分に混合する。

このように製造した溶液２．５ｍｌ會臥刹（血清）１０
０μｌと混合する。反応に５７８ｎｍＨｇで測光法によ
り追跡する。

公知リパーゼ活性の標準に関して、試料のリパーゼ活性
は次のように計算される： 試料のリパーゼ活性の計算は次の式によっても可能であ
る： Ｖ　　：試験配合量の全容罪・〔ｃｍ３〕全 ■試料：試料の容量〔ｃｍ３〕 ε　：　５７８ｎｍにおける色原体の吸光係数ｄ　：キ
ュベットの層厚〔―〕 ΔＥ／分：　５７８　ｎｍにおける１分間あたりの吸光
変化 削孔反応条件において吸光係数ε−６０，６５−・μｍ
Ｏ’ｌ　−”である。

例２６ 種々のリパーゼ基質に関して、空値変化、エステラーゼ
感度、リパーゼ感度及び混濁測定試験との相関性を測定
した。

空値変化は例１による試薬及び種々のリパーゼ基質によ
ρ調べた。＠料の力・わりに水１ＤＤμｔ２添加し、５
７８ｎｍＫｊ６ける吸光変化ケ追跡した（ｍＥ／分）。

エステラーゼＩｎを調べるためにｉｌ″Ｉ試料のがわり
にカルボキシルエステラーゼ（ＥＣ６，１，１，１、約
２００００Ｕ／７．ペーリンガー・マンハイム社、注文
番号（Ｂｅ５ｔ　−Ｎｏ　）　１０４６９８　）１００
μｔｋ添加し、吸光変化ｋ　Ｍｉｊ記のように追跡した
。

リパーゼ感度２調べる１こめには試料のがわりに、リパ
ーゼ（ＦｊＣ３，１，１，ろ、約１００Ｕ／　ｔ　％ペ
ーリンガーマンハイム社、注文番号（Ｂｅｓｔ−Ｎｏ）
４１４５９０）１００１ｉＡｋ＋２加し、吸光変化ｋｍ
Ｂ記のように追跡した。

混濁測定試験に対する相ＩＪＡ性會調べるために、リパ
ーゼの上昇量（０〜１０００Ｕ／ｌ）で混ｗｉｔｈ　＜
ペーリンガーマンハイム社、注文番号２６２３５８）’
に実施し、例２２による呈色試験と比軟し、かつ相関係
数を調べる。

結果を第１表に示す。

例２４ デソキシコール酸ナトリウム８．５ｇ、コリパーゼ０．
０５　ｇ、マンニット２０ｇ１塩化カルシウム０．０５
　ｇ、塩化ナトリウム０．８２　ｇ、トリス（ＴＲＩＳ
）　２．１　ｇ及びトリス・ＨＯ２０，４、！ｉ＋を蒸
留水２０　Ｏｍｌ中に浴かす。プロパツール７　ｍｌ中
に１．２−〇−ジテトラデシルーｒａｃ−グリセロ−６
−ビメリン酸−ナフトールエステル０．３５ｇを溶かし
て含有する浴液を攪拌下に噴射注入する。このようにし
て得られた乳液を一４０°Ｃで凍結し、凍結乾燥させる
。得られた凍結乾燥物質７０ｍｇを蒸留水２　ｍｌ中に
溶かし、ファスト・レッドＴＲ溶液（ファスト・レッド
−４−クロル−６−メチル−ペンゾールジアゾニウムナ
フタリン−１，５−ジスルホネート）（蒸留水１０ｙｒ
ｌ；中２３１ｍ９）１００μｄを加える。試料（血清）
１００μｔの添加後、反応を４０５　ｎｍで測光法で追
跡する。リパーゼ濃度の調査は例２２と同様に検量線に
関し、て行なう。

例２５ ラム７ｍ９、コリパーゼ（豚から）０．２〜の浴液中に
ｎ−７０ロバノール６．５ｒｎｌ中のリパーゼ基實、１
．２−０−ジデシル−ｒａｃ−グリセロ−６−グルタル
酸−レゾルフィンニスデル１５０＃ＩＰ’＆攪拌下に噴
射注入する。

このようにして得られた乳液に仄の浴液奮硲加し、十分
に混合する： タウロデソキシコレート１０ｇ、ポリワックス６．４ｇ
、マンニット５０ｇ１永素１４ｇ、塩化ナトリウム８０
０ｍρ及びトリス１５ｇを蒸留水３００　ｍｌ中に畔か
す。塩酸溶液でＰＩ」値をＰＨ−７，５に調節する。そ
の後、該溶液を蒸留水で４０　ＯｉｌＶにする。

このようにして製造された反応混合物２．５劇を試料（
血清）１００μｌを混合する。反応を５７８　ｎｍで測
光法により追跡する。

評１曲は例２２中と同様に行なう。

例２６ 蒸留水１２０ａ中のタウロデソキシコレート３．０４　
ｇ、ポリワックス４０００２．７Ｌ塙化力ルシウム７ｍ
９、コリパーゼ（豚から）’０．２＋＋ｙの溶液に、ｎ
−プロパツール３．５祷中のリパーゼ基質、１．２−０
−ジデシル−ｒａｃ−グリセロ−３−グルタル酸−レゾ
ルフインエステル１５０雫を攪拌下に噴射注入する。

このようにして得られた乳液に次の浴液を添加し、十分
に混合する： タウロデソキシコレート１０Ｆ、ポリワックス６．４ｇ
、マンニット５０ｇ１尿累１４ｇ、塩化ナトリウム８０
０ｍ９、チェス（ＣＨＥＳ）　２８　ｇを蒸留水３００
　ｍｌ中に溶かす。塩酸溶液でＰＩＩ値をｍ＝８．５と
する。その後、該溶液を蒸留水で４００　ｍｌにする。

このように製造された反応混合物２．５ｍｌを試料（血
清）１００μ彩と混合する。反応を５７８ｎｍ−″Ｃ測
光法により追跡する。

評ｆ［ｌｔｌを例２２に記載したと同様に行なう。

例２７ 蒸留水１［１０ｍ１甲のタウロデ゛ソキシコール酸ナト
リウム４、Ｏｇ、塩化カルシウム０．０６　、！ｉ’　
。

コリパーゼ（豚から）０．２ｍ９、マンニット５．０ｇ
及びポリワックス４０’００　２．Ｏｇからなる浴液中
にｎ−プロパツール４麻中に浴けている１、２−０−ジ
テトラデシルーｒａｃ−グリセロ−６−ビメリン酸−ナ
フトールエステル１５０彪を攪拌下に噴射注入する。十
分な冷却下に、こ０）ように得られた乳液を数分間超音
波で処理する。

第２の溶液は’１００ｍ１中にタウロデソキシコール酸
ナトリウム２．４ｇ、トリス２．０．９　、マンニット
１２．ＯＬ尿素３．５　ｇ及び塩化ナトリウム０．５　
ｇを含有する。塩酸で、この溶液のＰＨ値をｐＨ＝８−
３にする。

第６の溶液はファスト・レッドＴＲ（ファスト・レッド
ＴＲ＝４−クロル−６−メチｎ−ペンゾール−ジアゾニ
ウム−ナフタリン−１，５−ジスルホネー））１＆を蒸
留水４　［１７ｎｌ中に溶解して含有する。

５部の溶液１及び６部の浴液２とを１部の溶液６と混合
する。このようにして得られた溶液で、試験テープ製造
に経通な吸収性紙、例えばシュライヒャー及びシェル（
Ｓｃｂｌｅｉｃｈｅｒ　ｕｎｄＳｃｈｕｌｌ）　？、：
ｔ：のｖｓ５３２糧を含浸させ、空気循環乾燥箱中で６
０〜６５℃の温度で注意深く乾燥する。

次の使用の際まで、乾燥剤の存在で保存するのがよい。

試料（血清）のリパーゼに関する試験のためには、試料
を少量（数滴）テープ上に与える。

黄色層色の時間経過から調べる試料のリパーゼ活性を決
定することができる。

例２８ ａ）１．２−０−ジラウリル−ｒｒｃ−グリセロ−３−
テトラデカンジ酸モノエステル：１．２−０−ジラウリ
ルグリセリン８．６ｇ（２０ミリモル）、クロロホルム
１００７Ｒ１１ピリジン４解、ジメチルアミノピリジン
０．４　、！ｌｉ’、テトラデカンジ酸無水物９．６．
９（４０ミリモル）から例１　ａ）と同僚に製造。

ＴＬＣ：　Ｒｐ−０−４５（酢酸エステル／石油エーテ
ル１：５） １．２−０−ジラウリル−ｒａＣ−グリセロ−６−テト
ラデカンジ酸（６−メチルレゾルフィン）−エステル： ｂ）　２８　ａ）　３．３５　ｇ（５ミリモル）及び（
Ｐｉｅクロリド２．２ｍｌから例１ｂ）と同様にして製
造。

Ｃ）　４−メチルレゾルフィン１．２．９（５ミリモル
）、クロロホルム２０ｍｇ、１．８−ジアザ′ビシクロ
−（５，４，０）−ウンデク−７−ニン０．７５７／１
．ｌ、ジメチルアミノピリジン０．１ｇ及び２８ｂ）か
ら例２　ｃ）と同様にして製造。

ＴＬＣ：　Ｒ，＝［］、６３　（酢酸エステル／ヘキサ
ン１：４） ｄ）例２２に記載し、たように乳液を製造する。

しかしながら、そこに記載したリパーゼ基質のかわりに
、ｎ−プロパツール１．７ｍｌ中のリパーゼ基質、１．
２−０−ジラウリル−ｒａＣ−グリセロ−３−テトラデ
カンジ酸−（６−メチルレゾルフィン）−エステル７０
１Ｑが溶解している浴液を１更用する。

この除、次の試験特異的特性値が得られた（例２３及び
第１表参照） 空１直：Ｄ、２ｍＥ／分、 エステラーゼ活性：　Ｑ、７　ｍＥ／分１分片リパーゼ
感度００Ｕ／Ａあたり２３．６　ｍＶ分、相関係数：Ｄ
、ｕ９５０９ 例２９ １．２−０−ジラウリル−ｒａｃ−グリセロ−６−グル
タル酸−（６−メチル−レゾルフィン−）エステル： ａ）　　４−メチルレ・戸ルフィン２．３ｇ（１０ミリ
モル）ケ・用いて例７　ａ）〜Ｃ）と同様にして製造。

’Ｉ”ＬＣ：　Ｒ，＝　［］、６８　（酢酸エステル／
ヘキサン１：２） ｂ）蒸留水６０ｍ１中に攪拌下にタウロデソキシコール
酸ナトリウム０．９　ｇ及びコリパーゼ（豚から）０．
３ｇを攪拌下に溶解する。良好な撹拌下に、ｎ−プロパ
ノ−ｙｖｌ、７ｒｎｔｊ中の１．２−〇−ジラウリルー
ｒａＣ−グリセロ−３−グルタルｖ−（６−メチル−レ
ゾルフィン−）エステル７０ｍ９の浴孜を前記浴液中に
噴射証人する。

更に、２００ｍＡ中に尿素０．５ｇ、タウロデツキ…値
が７．５に調節されている浴ｍ　（２００ｍ／！：）を
添加する。十分に混合した後、このように製造された溶
液２．５ｍを試料（血清）１００μｅと混合する。この
反応を５７８部ｍ　Ｈｇで測光法により追跡し、例２２
に記載されているように評１曲する。

試験％異性特性値（例２６及び第１表参照）：中値：Ｄ
−４ｍＥ１分、 リパーゼ感度：１００ｍＥ／分あたり２８　ｍＦ　／分
、相関係数：　０．９８８ 例３０ ４−メチルレゾルフィン： ２−メチル−４−二トロンレゾルシン７．５ｇ、レゾル
シン４−２ｊｌ’、輌石６゜６９、ＭＣ酸４．３　ｍ１
３゜メタノール７５ｍ１、亜鉛粉末４ｇ及び２５％アン
モニア１８廐から西ドイツ国峙Ｗ＋第６４１１５７４号
明卸１曹に記載されているように製造。

ＴＬＣ：　Ｒｙ二０．７０　（エタノール／アセトン２
：ｒＪＶ／ＶＩＳ　（０，１Ｍ　９に酸カリウム緩側液
、ｐＨ８，５）：ｍａｘ　＝　５７９　ｎｍ ２−メチルー二トロンレソゞルシンσ”　裂、４　Ｕ　
−［ｕｌａドイツ国特許第６４１１５７５号明細書Ａ１
により得られる。

例６１ １．２−０−ジラウリル−ｒａｃ−グリセロ−３−グル
タル酸−（４−メチルウンベリフエリルー）エステル： ａ）７ａ）２−７５ｇ（５ミリモル）及び４−メチルウ
ンベリフェロン１ｇ（５ミリモル）全テトラヒドロフラ
ン６０祷中に溶かし、欠いてジシクロヘキシルカルボジ
イミド２ｇ（１［１ミリモル）及びジメチルアミノピリ
ジン０．１５ｇを添加する。型温で２４時間攪拌慎、確
過（２、礒縮する。粗生成物をフラッシュ・クロマトグ
ラフィーに」゛り舗装する、 ＴＬＣ：　Ｉ：ｔｆ＝　０．４０　（酢酸エステル／石
油エテル１：６） ｂ）　　＄Ｌ液製造は例２２に記載したように行なうが
、例２２で使用したリバーセ゛基寅のかわりに、ｎ−プ
ロパツール１．７ｍＡ中の１．２−ジラウリル−ｒａｃ
−グリセロ−３−グルグル酸−（４−メチルウ−・ベリ
フエリル）−ニスデル６５ｍｇを使用する。

反応を２５℃で蛍光測定により行なり。すなわち３６４
　ｎｍの励起波長、スリット幅５ηｍ及び４４８　ｎｍ
の発光波長及び’ｌ［］ｎｍのスリット幅で行なう。

試験時異性特性１直（例２３及び第１表音参照）：空埴
：４．ＱｍＥ／分、 リパーゼ感度：１００Ｕ／−ｅあた’）　２８　ｍＥ／
分、相関係数：　０．９９４２ 例６２ １．２−０−ジラウリル−ｒａｃ−グリセロ−６−グル
タル酸−（ｐ−二トロチオフェニル）エステル： ６２ａ〜ｂ）を例７ａ−ｂ）により製造。

リジン２．４ｍｌ、ジメチルアミノピリジン０．２ｇ及
び６２ｂ）から例１Ｃ）と同様に製造。

ＴＬＣ：　Ｒ，＝０．７（Ｓ　（酢酸エステル／ヘキサ
ン１；４） ｄ）蒸留水２７ｍ１中に次の化合物を良好な攪拌下に溶
かす： デソキシコール酸ナトリウム　　　　　　　　４．８３
ｍ＆尿素　　　　　　　　１７．５０．９ 塩化ナトリウム　　　　　　　　　　　２．１３１ｎ９
豚ｏ”）　：：Ｉリパーゼ　　　　　　　　　　０．１
６路塩化カルシウム　　　　　　　　　　　０．３３ｍ
９タウＰデンキシコール酸ナトリウム　　　１５２．０
［］　ｍ９浴液のＰＦ（ｉ＋＋ｔをｐＨ＝８，３に調節
する。該浴液に１．２−０−シラウリル−ｒａｃ−グリ
セロ−６−グルタル酸−（ｐ−二トローチオフェニル）
−エステルの浴液娑十分な攪拌下に噴射注入する。引き
続き、冷却下にし浴液を２分間超音波で処理する（適音
の強度）。

このように得られた乳液１′Ｉｎ１Ｋ試料（リパーゼ言
有人血清）５０μｔを加え、混合した。反応を４０５ｎ
ｍＨｇ′″Ｃ測光法により行ない、例２２に記載したよ
うに計算する。

試験特異性特性値： 空値：０．３ｍＥ／分 リパーゼ感度：１００Ｕ／−ｅあたり１２．２　ｍＥ／
分相関係数：　０．９９８ 例６６ ａ）１−０−（２−メトキシ−オクタデシル）−２−〇
−メチ、ルーｒａｃ−グリセロー６−グルタル酸モノエ
ステル： １−ｏ−（２−メトキシ−オクタデシル）−２−０−メ
チルグリセリン３　！？（７，７ミリモル）、クロロホ
ルム２５Ｎ、ビ′リジンｉ、８ｍｇ５ジメチルアミノピ
リジン０．１９及びグルタル酸無水物１．７５＆（ｌｂ
ミリモル）から例１　ａ）と同様にして製造。

収率：１．５．９（３９％）、 ＴＬＣ：　Ｒ１＝　０．６８　（ＲＰ　１８、アセトン
／エタノール１：２） １−０−　（２−メトキシ−オクタデシル）−２−０−
メチル−ｒａｃ−グリセロ−６−グルタルｍ−Ｃ６−メ
チルレゾルフィン）−エステル：ｂ）　　３３ａ）　１
．５ｇ（３ミリモル）及びｒａｍクロリド１．５ｍＡか
ら例１ｂ）と同様にして製造。

ｃ）　　４−メチルレゾルフィン０．６８　ｇ（３ミリ
モル）、１，８−シアずビシクロ−（５、４゜０）つ７
５”クー７−、＝ｃ：ｙ　Ｑ、４５ｍ、ｌ及び３３ｂ）
から例２　Ｃ）と同様にして製造。

ＴＬＣ：　Ｒｆ−［１，８６（酢酸エステｙ＋＝　）ｄ
）試験乳液の製造を例２２に記載されているように行な
うが、ここではリパーゼ基質として１．０−（２−メト
キシ−オクタデシル）−２−○−メチルーｒａｃ−クリ
セロ−６−ゲルタールｆｆ　−、（６−メチル−レゾル
フィン）−エステルケ便用する。

リパーゼ論度ｋ　ｉ１４べることは、異なるリパーゼ濃
度の二つの標準からの、吸光変化に対して１分あたりの
吸光変化ケ記載した検量線により行なわれる。

９．１直　：　　８．４ｍＥ／分、 エステラーゼ感度：　２５．３　ｍＥ／分、リパーゼ感
１’１００Ｕ／ｎあたり１９．０　ｍＥ／分相関係数：
　０．９４８３ 例６４ ａｉ１１２−０−シラウリ／ｌ／　−ｒａｃ−グリセロ
−６−コハク酸−モノエステル： １．２−〇　シラウリルグリセリン８．５６ｇ（２０ミ
リモル）、コ・・り酸無水ｖ／Ｊ４ｇ（４０ミリモル）
、クロロホルム６ＱｍＡ’、）ｉ’リジン４．６Ｎ及び
ジメチルアミノピリジン０．２４　ｇから例１　ａ）に
より製造。該生成物をヘキサンから結晶化。

融点：４１〜４３°Ｃ ＴＬＣ：　Ｒｆ−０，２６（酢酸エステル／ヘキサン１
：４） １．２−０−ジラウリル−ｒａＣ−グリセロ−６−コハ
ク酸−レゾルフィン−ニス１ル：ｂ）　　３４　ａ）　
２．６５　ｇ（５ミリモル）、レゾルフィン１．０６ｇ
（５ミリモル）、ジシクロへキシルカルボジイミド６．
１８ｇ（ｌ［）ミリモル）、ジメチルアミノピリジン０
．１９及びジメチルホルムアミド５　Ｑ　ｍｌから例１
７）と同様にして製造。

ＴＬｌＣ：　Ｒ４””　０，４７　（酢酸エステル／石
油エーテル１：３） Ｃ）ここでも、例２２に記載されているように乳液を製
造する。しかし、この場合リパーゼ基質としては、プロ
パツール１．７ｍ１ｌ中に溶解した１、２−０−ジラウ
リル−ｒａＣ−グリセロ−６−コハク酸−レゾ１１フイ
ン工ステル７０ｍ９’ｅ使用する。

この際、次の試験％異性特性値が得られる、　　　（，
６４＞ （例２６及び第１表ケ診照）： 空１１［：　３．８〜４−ＯｍＥ／分、エステラーゼ感
度：ｔＪ＋べず、 リバーセ゛感度：１００Ｕ＃！あたり８．７ｍＦ／分、
相関係数：　０．８７９３ 例６５ ａ）２−０−ラウリル−オクタデカンジオ−／ｌ’（１
，２）−１−グルタル酸−モノエステル：２−〇−ラウ
リルーオクタデカンジオール（１，２）４．６ｇ（１０
ミリモル）、クロロホルム２９ｍ１．　　ピリジン２．
３ｍ／３．ジメチルアミノピリジン０．１２ｇ、グルタ
ル酸無水物２．６ｇ（２０ミリモル）から例１　ａ）と
同様にして製造。

ＴＬＣ：　Ｒ，＝０．５４　（石油エーテル／酢酸エス
テル４：１） ２−０−ラウリル−オクタデカンジオール（１，２）−
１−グルタル酸−（ｆ−メチルレゾルフィン）−エステ
ル： ｂ）　　３５１１）　　１．１５．！Ｔ’（２ミリモル
）及び幡酸クロリド０．８８７１１１から例１　ｂ）と
同様に製造。

Ｃ）　　４−メチルレゾルフィン０．４５ｇ（２ミリモ
ル）、クロロホルム２０　”、１．８−　’７アザ′ビ
シクロー（５，４，０）−ウンデク−７−エン肌３罰、
ジメチルアミノピリジン４０晰及び６５ｂ）から例２　
Ｃ）と同様にして製造。

ＴＬＣ：　Ｒ１＝　０．３７　（石油エーテル／酢酸エ
ステル５：１） ｄ）例２２に記載されているように乳液全製造するが、
リバー−１！′基質としてｎ−プロパツール１．７ｍｌ
中に溶解した２−０−ラウリル−オクタデカンジオール
−１，２−１−グルタル酸−（６−メチルレゾルフィン
）−エステル７０〜を使用する。

例２６、第１表に相応して、次の試験特異性特性値が得
られた： ９値：　０．５〜１．０　ｍＥ　７分、エステラーゼ感
度＋１．ＱｍＥ／分、 リパーゼ感度：１００Ｕ＃ｌあたり２５．５ｍＥ／分、
相関係数：　０．９９６ 例６６ ａ）１．２−０−ジラウリル−ｒａｃ　−３−チオグリ
セロ−６−８−グルタル酸モノエステル：１．２−０−
ジラウリル−ｒａｃ　−３−チオグリセリン２．ｂ　９
　（４，８ミリモル）、クロロホルム１４ｍ１．　ピリ
ジン１．１〃ｌｌ及びグルタル酸無水物１．１μ（９，
６ミリモル）から例１　ａ）と同様に製造。

ＴＬＣ：　Ｒ５＝　Ｄ、５　（ヘキサン／テトラヒドロ
フラン１：４） １．２−○−ジラウリルーｒａｃ　−３−チオグリセロ
−３−８−グルタル酸−（６−′７チルレゾルフイン）
−エステル： ｂ）　　３６　ａ）　　０．７４ｇ（１，３ミリモル）
及び蓚酸クロリド０．６ｍｌ：から例１　ｂ）と同様に
製造。

Ｃ）　　４−メチ−ノルゾルフィン０．３　ｆｉｌ　（
１，３ミリモル）、クロロホルム１３７１１１１１．８
−ジアザビシクロ−（５，４，０）−ウンデク−７−ニ
ン０．２１ｉ’＋７、ジメチルアミノピリジン２７〜及
び６６ｂ）から例２　ｃ）と同様にして製造。

１°ＬＣ：　Ｒ，＝０．３８　（石油エーテル／酢酸エ
ステル１７二６） 出発物實として使用した１、２７０−ジラウリル−ｒａ
ｃ　−３−チオグリセリンをＯｒｇ、　５ｙｎｔｈ。

刊、第６６６頁及び６６３負と同様にして次のように得
られる： １．２−０−ジラウリルグリセリンとドルオールスルホ
ン酸クロ１）ドとを反応させ、ジラウリル−クリセロ−
３−ドルオールスルホネートとし、次いでチオ尿素と反
応させて相応するインチウロニウム塩とし、引き続き塩
酸で加水分解する。

ＴＬＣ：　Ｒ１＝　０．５２　（石油エーテル／酢酸エ
ステル４９：１） ｄ）例２２に記載したように乳液を製造する。

しかしながら、そこに使用したリパーゼ基質のかわりに
ｎ−プロパツール１．７ＴＬｌ中の１．２−〇−ジラウ
リルーｒＢｃ　−３−チオグリセロ−３−ｓ−グルタル
酸−（６−メチルレゾルフィン）−エステル７０■の溶
液を使用する。

試験特異性特性１直： ９値：　Ｏ−２〜０．９　ｍＥ／分 エステラーゼ感度：　１．３　ｍＥ／分リパーゼ感度：
１０［］Ｕ／沼あた’）　４−１　ｍＥ／分相関保数：
　０．８５７ 例６７ ａ）ｌ、２−８−ジラウリル−ｒａｃ　−１＋　２−ジ
チオグリセロ−３−グルタル酸モノエステル　： １．２−８−ジラウリル−１，２−ジチオグリセリン３
　ｇ（６，５ミリモル）、ピリジン３０ｍ１及びグルタ
ル酸無水物１．５ｇ（１３ミＩＪモル）から例１　ａ）
と同様にして製造。

ＴＬＣ：　Ｒ４＝０．４３　（石油エーテル／酢酸エス
テル１：１） １．２−８−シラウリ／ｌ／−ｒａｃ−１＋　２−ジチ
オグリセロ−６−グルタル酸−（６−メチル−レゾルフ
ィン）−エステル： ｂ）　　３７ａ）　１．２ｇ（２ミリモル）及び蓚酸ク
ロリド１−から、例１　ｂ）と同様にして製造。

Ｃ）　　４−メチルレゾルフィン０．４６９（２ミリモ
ル）、クロロホノ１ム２Ｄｄ、１．８−ジアヂビシクロ
ー（５，４，０）−ウンデク−７−ニン０．６ｒｎ！Ｖ
及び３７　ｂ＋から例２　Ｃ）と同様にして製造。ＴＬ
Ｃ＋Ｒ，＝０．３７（酢酸／石油エーテル１：４）出発
制料として使用した１　、２−８−ジラウリル−ｒａｃ
　−１，２−ジチオグリセリンを次のように製造： エタノール２５０Ｔｎｌ中の水飲化カリウム９ｇ（１６
０ミリモル）の溶液にエタノール１００ｍ１中の２．６
−ジメルカゾトプロバノール１０．９（８０ミリモル）
を滴加する。１時間の攪拌後、エタノール１００蛯中の
ドデシ、＋１／プロミド４０ｇ（１６Ｄミ！、１モル）
の溶液を滴加する。

反応を完結させるために更に２日間攪拌し、次いで濾過
し、氷を加える。２Ｎ塩酸で酸性にした後、エーテルで
６回抽出し、有機相を乾燥させ、かつ濃縮する。残分を
シリカゾルカラム上で舗装する（溶離剤：酢酸エステル
／石油エーテル１１０）。ＴＬＣ：　Ｒ１＝　［Ｊ、５
４　（酢酸工ステル／石油エーテル１：１０） ｄ）例２２に記載されているように乳ｅ、を製造する。

この鵠−８−は？０２２に使用したリパーセ゛基賀のか
わりにｎ−グロバノール１．７ｍＡ中に浴Ｍｌた１、２
−８−ジラウリル−ｒａ、ｃ　−１＋　２−ジチオグリ
セｒＪ−３−Ｓ−ゲルタール１ｌＦ−（６−メチルレゾ
ルフィン）−ニスデル７０〜を使用する。

９値：３ｍＥ／分 エステラーゼ感度？　３．４　ｍ２７分す・ソーぜ感度
１１００　　Ｕ／ｌあたり２４ｍＥ／分相関係数：０．
９９４３

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、Ａは炭素原子数１〜１６のアルキレン基又はア
   ルケニレン基を表わし、Ｒ及びＲ＿１は同一又は異なつ
   ていてよく、それぞれ炭素原子数１〜２０のアルキル基
   、アルケニル基又はアシル基を表わすか、又はアルキル
   基中の炭素原子数１〜８のアルキル置換していてよいア
   リール基又はアルアルキル基を表わし、基Ｒ及びＲ＿１
   の１方は水系原子であつてもよく、Ｘは芳香族ヒドロキ
   シ化合物又はチオール化合物を表わし、かつそれぞれＹ
   及びＺは相互に独立して−Ｓ−又は−Ｏ−を表わし、Ｚ
   は−ＣＨ＿２−も表わす〕のリパーゼ基質。 ２、Ｒ及び／又はＲ＿１は炭素原子数８〜１２を示す特
   許請求の範囲第１項記載のリパーゼ基質。 ３、Ａが炭素原子数６〜７を示す特許請求の範囲第１項
   又は第２項記載のリパーゼ基質。 ４、Ｘは置換されていてよいレゾルフイン基、クロルフ
   エノールレッド基、インドキシル基、ナフトール基、チ
   オフエノール基、チオフルオレンイン基又はフエノール
   基である特許請求の範囲第１項から第６項までのいずれ
   か１項記載のリパーゼ基質。 ５、１，２−Ｏ−ジオクチル−ｒａｃ−グリセロ−３−
   アゼライン酸−レゾルフインエステルである特許請求の
   範囲第１項記載のリパーゼ基質。 ６、１，２−Ｏ−ジデシル−ｒａｃ−グリセロ−３−ピ
   メリン酸−レゾルフインエステルである特許請求の範囲
   第１項記載のリパーゼ基質。 ７、１，２−Ｏ−ジデシル−ｒａｃ−グリセロ−３−グ
   ルタル酸−レゾルフインエステルである特許請求の範囲
   第１項記載のリパーゼ基質。 ８、１，２−Ｏ−ジドデシル−ｒａｃ−グリセロ−３−
   グルタル酸−レゾルフインエステルである特許請求の範
   囲第１項記載のリパーゼ基質。 ９、一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、Ａは炭素原子数１〜１６のアルキレン基又はア
   ルケニレン基を表わし、Ｒ及びＲ＿１は同一又は異なつ
   ていてよく、それぞれ炭素原子数１〜２０のアルキル基
   、アルケニル基又はアシル基を表わすか、又はアルキル
   基中の炭素原子数１〜８のアルキル置換していてよいア
   リール基又はアルアルキル基を表わし、基Ｒ及びＲ＿１
   の１方は水素原子であつてもよく、Ｘは芳香族ヒドロキ
   シ化合物又はチオール化合物を表わし、かつそれぞれＹ
   及びＺは相互に独立して−Ｓ−又は−Ｏ−を表わし、Ｚ
   は−ＣＨ＿２−も表わす〕のリパーゼ基質にリパーゼ含
   有試料を作用させ、遊離する芳香族ヒドロキシ化合物又
   はチオール化合物の量を直接視覚的に測定するか、又は
   好適な色原体と のカップリングにより、これから生じた色糸を視覚的に
   測定することを特徴とするリパーゼの視覚的測定法。 １０、試験中の塩濃度０．１〜１０ｍｇ／ｍｌで測定を
   行なう特許請求の範囲第９項記載の方法。 １１、一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、Ａは炭素原子数１〜１６のアルキレン基又はア
   ルケニレン基を表わし、Ｒ及びＲ＿１は同一又は異なつ
   ていてよく、それぞれ炭素原子数１〜２０のアルキル基
   、アルケニル基又はアシル基を表わすか、又はアルキル
   基中の炭素原子数１〜８のアルキル置換していてよいア
   リール基又はアルアルキル基を表わし、基Ｒ及びＲ＿１
   の１方は水素原子であつてもよく、Ｘは芳香族ヒドロキ
   シ化合物又はチオール化合物を表わし、かつそれぞれＹ
   及びＺは相互に独立して−Ｓ−又は−Ｏ−を表わし、Ｚ
   は−ＣＨ＿２−も表わす〕の基質少なくとも１種及び緩
   衝物質、並びに胆汁酸アルカリ塩、コリパーゼ、塩、尿
   素及び／又は発色性カップラーを含有することを特徴と
   するリパーゼの視覚的測定試薬。 １２、試験における調合済溶液に関してそれぞれ、基質
   ０．０５〜１０ｍｇ／ｍｌ、 デソキシコール酸塩２〜５０ｍｇ／ｍｌ、 コリパーゼ０．００１〜０．０１ｍｇ／ｍｌ、尿素１〜
   １００ｍｇ／ｍｌ、 ＮａＣｌ０．１〜１０ｍｇ／ｍｌ、 緩衝物質１〜５０ｍｇ／ｍｌ を含有している特許請求の範囲第１１項記載の試薬。 １３、担体材料中に含浸されて存在する特許請求の範囲
   第１１項又は第１２項記載の試薬。