JPS61135597A - シチジンおよびデオキシシチジンの製造法 - Google Patents
シチジンおよびデオキシシチジンの製造法Info
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- JPS61135597A JPS61135597A JP59258788A JP25878884A JPS61135597A JP S61135597 A JPS61135597 A JP S61135597A JP 59258788 A JP59258788 A JP 59258788A JP 25878884 A JP25878884 A JP 25878884A JP S61135597 A JPS61135597 A JP S61135597A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明は医薬品の合成原料等として耳用なシチジンおよ
び（またはノブオキシシチジンの発酵法による製造法、
およびその製造法に用いるバチルス属の微生物に関する
。
び（またはノブオキシシチジンの発酵法による製造法、
およびその製造法に用いるバチルス属の微生物に関する
。
従来の技術
発酵法によるシチジンの製造法としては、バチルス・ズ
ブチリスあるいはプロプウス・レトゲリ−の変異株を用
いる方法（特公昭３６−２１４９９）。
ブチリスあるいはプロプウス・レトゲリ−の変異株を用
いる方法（特公昭３６−２１４９９）。
ブレビバクテリウム属細菌から誘導されたプリンアナロ
グ、ピリミジンアナログおよび（または）ヒスチジンア
ナログ耐性株を用いる方法（特公昭５７−１８８７１）
、ミクロバクテリウム属細菌から誘導されたプリンアナ
ログ耐性株を用いる方法（特公昭５７−１８８７２）ｒ
、（どが知られている。
グ、ピリミジンアナログおよび（または）ヒスチジンア
ナログ耐性株を用いる方法（特公昭５７−１８８７１）
、ミクロバクテリウム属細菌から誘導されたプリンアナ
ログ耐性株を用いる方法（特公昭５７−１８８７２）ｒ
、（どが知られている。
著欧のデオキシシチジンを培養液中に生成蓄積させる方
法については従来全く知られていない。
法については従来全く知られていない。
発明が解決しようとする問題点
本発明は、シチジンおよびデオキシシチジンの製造法に
関し、収率等において工業的に一層有利な方法を提供し
ようとするものである。
関し、収率等において工業的に一層有利な方法を提供し
ようとするものである。
本発明者らは、シチジンおよびデオキシシチジンの生産
菌について研究ＴＸ：ｉｆｆねた結果、バチルス属にｆ
ｉＥＬ、シチジンデアミナーゼ活性を欠損し、ピリミジ
ンアナログ耐性を有する微生物が培地中に著量のシチジ
ンおよび（または）デオキシノチジンを生成蓄積するこ
と乞見出し、この知見（二基づいてさらに研究を続け、
本発明を完成した。
菌について研究ＴＸ：ｉｆｆねた結果、バチルス属にｆ
ｉＥＬ、シチジンデアミナーゼ活性を欠損し、ピリミジ
ンアナログ耐性を有する微生物が培地中に著量のシチジ
ンおよび（または）デオキシノチジンを生成蓄積するこ
と乞見出し、この知見（二基づいてさらに研究を続け、
本発明を完成した。
すなわち、本発明は、（１）バチルス属に属し、シチジ
ンデアミナーゼ活性乞欠損し、ピリミジンアナログに耐
性を有し、シチジンおよび（またはンデオキシンチジン
生産能乞有する微生物を培地に培養し、培養物中にシチ
ジンおよび（ｆ、たは」デオキシシチジン乞生成蓄積せ
しめ、シチジンおよび（またはツブオキシシチジンを採
取することを特徴とするシチジンおよび（ｆ、たはツブ
オキシシチジンの製造法、（２）シチジンデアミナーゼ
活性を欠損し、ピリミジンアナログに耐性を有するノく
チルス・ズブチリスである。
ンデアミナーゼ活性乞欠損し、ピリミジンアナログに耐
性を有し、シチジンおよび（またはンデオキシンチジン
生産能乞有する微生物を培地に培養し、培養物中にシチ
ジンおよび（ｆ、たは」デオキシシチジン乞生成蓄積せ
しめ、シチジンおよび（またはツブオキシシチジンを採
取することを特徴とするシチジンおよび（ｆ、たはツブ
オキシシチジンの製造法、（２）シチジンデアミナーゼ
活性を欠損し、ピリミジンアナログに耐性を有するノく
チルス・ズブチリスである。
本発明（二いう「Ｖチジンデアミナーゼ活性欠損株」と
は、供試菌体を超音波処理により破壊した後、その遠心
上清画分を用いて、Ｄ−Ｆ・Ｗｅｎｔｗｏｒｔｈらの方
法（”Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌ−ｏｇｙ
’、 Ｖｏｌ、 Ｌ Ｉ、ｃｄ、 ｂｖ Ｐ、Ａ、Ｈｏ
ｆｆｅｅ ａｎｄ Ｍ。
は、供試菌体を超音波処理により破壊した後、その遠心
上清画分を用いて、Ｄ−Ｆ・Ｗｅｎｔｗｏｒｔｈらの方
法（”Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌ−ｏｇｙ
’、 Ｖｏｌ、 Ｌ Ｉ、ｃｄ、 ｂｖ Ｐ、Ａ、Ｈｏ
ｆｆｅｅ ａｎｄ Ｍ。
Ｅ、Ｊｏｎｅｓ 、 Ａｃａｄｅｒ＋＋ｉｃ Ｐｒｅｓ
ｓ 、 Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ。
ｓ 、 Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ。
１９７８、ｐ、４０１）でシチジンデアミナーゼ活性音
測定した時の値が０．０１ユニット７呼−蛋白（１分間
に１ナノモルのシチジンを脱アミノ化する酵素力ｔｌユ
ニットとする。）以下の微生物をいい、また「ピリミジ
ンアナログ耐性株」とは、ノくチルス属細菌を親株とこ
て誘導される微生物であって、親株が生育できないよう
な高い濃度のピリミジンアナログを含む培地でも生育で
きるように遺伝的性質の変化した微生物をいう。また、
［ピリミジンアナログ］とはウラシルやシ計シンなどの
ピリミジン塩基と類似の構造を有する物質、例えば。
測定した時の値が０．０１ユニット７呼−蛋白（１分間
に１ナノモルのシチジンを脱アミノ化する酵素力ｔｌユ
ニットとする。）以下の微生物をいい、また「ピリミジ
ンアナログ耐性株」とは、ノくチルス属細菌を親株とこ
て誘導される微生物であって、親株が生育できないよう
な高い濃度のピリミジンアナログを含む培地でも生育で
きるように遺伝的性質の変化した微生物をいう。また、
［ピリミジンアナログ］とはウラシルやシ計シンなどの
ピリミジン塩基と類似の構造を有する物質、例えば。
６−アザウラシル、２−チオウラシル、５−フルオロウ
ラシル、５−フルオロオロチン酸、などやこれらのリボ
サイドおよびリボタイドなどが挙げられ、これらの少な
くとも一つに耐性を有すればよい。
ラシル、５−フルオロオロチン酸、などやこれらのリボ
サイドおよびリボタイドなどが挙げられ、これらの少な
くとも一つに耐性を有すればよい。
本発明で使用される微生物の具体例としては。
バチルス、ズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ５ｕｂｔｉ
ｌｉｓ）ＡＵ ５０（ＩＰ’０１’１（９５，Ｆ’ＥＲ
Ｍ Ｐ−７９１１ハパチルス・ズブチリスＦＵ−１１（
ＩＰ０１４８９Ｂ。
ｌｉｓ）ＡＵ ５０（ＩＰ’０１’１（９５，Ｆ’ＥＲ
Ｍ Ｐ−７９１１ハパチルス・ズブチリスＦＵ−１１（
ＩＰ０１４８９Ｂ。
ＦＥＲＭ Ｐ−７９１２）ｖバチルス・ズブチリス６Ａ
Ｕ−５ｏｏ（ＩＦ（ｊｔ４４ｏｙ、ＦＥＲＭ ｐ−７
９７１）およびバチルス・ズブチリス２ＴＵ−２００（
ＩＦ０１４４０８、ＦＥＢＭ Ｐ−７９７２）があげら
れる。
Ｕ−５ｏｏ（ＩＦ（ｊｔ４４ｏｙ、ＦＥＲＭ ｐ−７
９７１）およびバチルス・ズブチリス２ＴＵ−２００（
ＩＦ０１４４０８、ＦＥＢＭ Ｐ−７９７２）があげら
れる。
これらの微生物の中で、バチルス・ズブチリスＡＵ−５
０およびＦＵ−ｔｔ株はバチルス・ズブチリス（ＩＦ０
１ａ７１９．ＡＴＣＣ６０５１）を親株トして、また６
ＡＵ−５００および２ＴＵ−２００株ハパチルス・ズブ
チリスム１２２（ＩＦＯ１４，３８６、ＦＥＲＭ Ｐ−
７９０８Ｊを親株としてそれぞれ誘導されたものである
。
０およびＦＵ−ｔｔ株はバチルス・ズブチリス（ＩＦ０
１ａ７１９．ＡＴＣＣ６０５１）を親株トして、また６
ＡＵ−５００および２ＴＵ−２００株ハパチルス・ズブ
チリスム１２２（ＩＦＯ１４，３８６、ＦＥＲＭ Ｐ−
７９０８Ｊを親株としてそれぞれ誘導されたものである
。
なお、本願明細書において、ＩＦＯ番号は財団法人発酵
研究所（ＩＦＯ大阪府大阪市淀川区十三本町２丁目１７
番８５号）への寄託番号、また、ＦＥＲＭ Ｐ−番号は
工業技術院微生物工業技術研究所（Ｆ’ＲＩ、茨城県筑
皮郡谷田部町東１丁目１番３号）への寄託番号あられ丁
。
研究所（ＩＦＯ大阪府大阪市淀川区十三本町２丁目１７
番８５号）への寄託番号、また、ＦＥＲＭ Ｐ−番号は
工業技術院微生物工業技術研究所（Ｆ’ＲＩ、茨城県筑
皮郡谷田部町東１丁目１番３号）への寄託番号あられ丁
。
ＦＲＩへの寄託は、バチルス・ズブチリスＡＵ−ｓｏ、
ＦＵ−１を株および株ム１２２株については１９８４年
１０月１９日に、またバチルス・ズブチリス６ＡＵ−５
００および２ＴＵ−２００株については１９８４年１２
月１日になされている。 − なお、上記した親株の中で、バチルス・ズブチリス（Ｉ
Ｉｌ’Ｏ１３７１９、ＡＴＣＣ６０５１）、財団法人発
酵研究ｉｇＴ（Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ Ｆｏｒ Ｆｅｒｍ
ｅｎｔａｔｉｏｎ、 ＱＳＡＫＡ）発行のＬｉ５ｔ ｏ
ｆ Ｃｕ１ｔｕｒｅｓ。
ＦＵ−１を株および株ム１２２株については１９８４年
１０月１９日に、またバチルス・ズブチリス６ＡＵ−５
００および２ＴＵ−２００株については１９８４年１２
月１日になされている。 − なお、上記した親株の中で、バチルス・ズブチリス（Ｉ
Ｉｌ’Ｏ１３７１９、ＡＴＣＣ６０５１）、財団法人発
酵研究ｉｇＴ（Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ Ｆｏｒ Ｆｅｒｍ
ｅｎｔａｔｉｏｎ、 ＱＳＡＫＡ）発行のＬｉ５ｔ ｏ
ｆ Ｃｕ１ｔｕｒｅｓ。
１９７８ 、５ｉｘｔｈ Ｉｉ：ｄｉｔｉｏｎおよびＡ
ｍｅｒｉｃａｎＴｙｐｅ Ｃｕ１ｔｕｒｅ Ｃｏ１１ｅ
ｃｔｉｏｎ （ＡＴＣＣ）発行のＣａｔａｌｏｇｕｅ
ｏｆ ５ｔｒａｉｎｓ Ｉ、 ＦｉｆｔｅｃｎｔｈＥｄ
ｉｔｉｏ’ｎ、 １９８２に記載の公知株である。一方
、バチルス・ズブチリス屋１２２（１ｐｏｔ４ａｓｓ、
ＦＥＲＭ Ｐ−１９０８）は本発明者らによって土壌
から新しく分離された菌であって、その菌学的性質は次
の通りである。
ｍｅｒｉｃａｎＴｙｐｅ Ｃｕ１ｔｕｒｅ Ｃｏ１１ｅ
ｃｔｉｏｎ （ＡＴＣＣ）発行のＣａｔａｌｏｇｕｅ
ｏｆ ５ｔｒａｉｎｓ Ｉ、 ＦｉｆｔｅｃｎｔｈＥｄ
ｉｔｉｏ’ｎ、 １９８２に記載の公知株である。一方
、バチルス・ズブチリス屋１２２（１ｐｏｔ４ａｓｓ、
ＦＥＲＭ Ｐ−１９０８）は本発明者らによって土壌
から新しく分離された菌であって、その菌学的性質は次
の通りである。
Ａ、形態
１ノ 形および大きさ：短桿菌（０，７−０，８Ｘ２．
５−８、Ｏｔｔ ） 幻多形性：単一まれに二連 １運動性：なし ４）胞子の形成：有り ５）胞子の形：楕円形 ６）胞子の位置：中心付近 ７）ダラム染色：陽性 ８）抗酸性ニなし Ｂ、生育状況 １）肉汁寒天平板培養：不定形で拡散状、表面粗く扁平
状、不透明で薄褐色 ２）肉汁液体培＃二表面に菌膜を形成、混濁なし ３）す）−マスミルク：ペプトン化、色素の還元有り Ｃ０生理的性質 １）硝酸塩の還元：有り ２） Ｖ−Ｐテスト：陽性 ３）デンプンの加水分解：有り ４）クエン酸の利用：有り ５）プロピオン酸の利用：なし ６）アンモニウム塩の利用：有す 旬りレアーゼ：微弱 ８）カタラーゼ：有り ９）酸素に対する態度：好気性 １０）塩化ナト’Ｊウム耐性ニア％で生育可能１１）耐
酸性： ｐＨ５，７で生育可能上記の菌学的諸性質’１
１ Ｒ，Ｅ、 ＢｕｃｈａｎａｎおよびＮ＋Ｅ、Ｇｉｂ
ｂｏｎｓ編の［パーシーズ・マニュアル。
５−８、Ｏｔｔ ） 幻多形性：単一まれに二連 １運動性：なし ４）胞子の形成：有り ５）胞子の形：楕円形 ６）胞子の位置：中心付近 ７）ダラム染色：陽性 ８）抗酸性ニなし Ｂ、生育状況 １）肉汁寒天平板培養：不定形で拡散状、表面粗く扁平
状、不透明で薄褐色 ２）肉汁液体培＃二表面に菌膜を形成、混濁なし ３）す）−マスミルク：ペプトン化、色素の還元有り Ｃ０生理的性質 １）硝酸塩の還元：有り ２） Ｖ−Ｐテスト：陽性 ３）デンプンの加水分解：有り ４）クエン酸の利用：有り ５）プロピオン酸の利用：なし ６）アンモニウム塩の利用：有す 旬りレアーゼ：微弱 ８）カタラーゼ：有り ９）酸素に対する態度：好気性 １０）塩化ナト’Ｊウム耐性ニア％で生育可能１１）耐
酸性： ｐＨ５，７で生育可能上記の菌学的諸性質’１
１ Ｒ，Ｅ、 ＢｕｃｈａｎａｎおよびＮ＋Ｅ、Ｇｉｂ
ｂｏｎｓ編の［パーシーズ・マニュアル。
オブ・デターミナテイブ・バクテリオロジ−（Ｂｅｒｇ
ｙ ｓ Ｍａｎｎｕａｌ ｏｆ Ｄｅｔｅｒｍｉ
ｎａｔｉｖｅＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）第８版（１９
７４年月にしたがって検索した結果、本菌株はバチルス
・ズブチリスに属する微生物であると同定された。
ｙ ｓ Ｍａｎｎｕａｌ ｏｆ Ｄｅｔｅｒｍｉ
ｎａｔｉｖｅＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）第８版（１９
７４年月にしたがって検索した結果、本菌株はバチルス
・ズブチリスに属する微生物であると同定された。
上記に例示された本発明の製造法で用いられるバチルス
属菌の菌学的性質は、シチジンデアミナーゼ活性ｗ欠Ｗ
ｔし、ピリミジンアナログに耐性を有し、シチジンおよ
び（またはノブオキシシチジンの生産能７有するほかは
、その親株と同様である。
属菌の菌学的性質は、シチジンデアミナーゼ活性ｗ欠Ｗ
ｔし、ピリミジンアナログに耐性を有し、シチジンおよ
び（またはノブオキシシチジンの生産能７有するほかは
、その親株と同様である。
本発明においては、］−２記に例示された微生物以外に
も、種々のバチルス属細菌を親株として、これに、例え
ば紫外線照射、Ｎ−メチル−Ｎ′−二トローＮ−二トロ
ングアニジン（ＮＴＧ）処理などの変異操作Ｚ旋すこと
によって、シチジンデアミナーゼ活性を欠損し、ピリミ
ジンアナログに耐性を有し、シチジンおよび（またはツ
ブオキシシチジンの生産能を有する微生物を容易に誘導
することができる。
も、種々のバチルス属細菌を親株として、これに、例え
ば紫外線照射、Ｎ−メチル−Ｎ′−二トローＮ−二トロ
ングアニジン（ＮＴＧ）処理などの変異操作Ｚ旋すこと
によって、シチジンデアミナーゼ活性を欠損し、ピリミ
ジンアナログに耐性を有し、シチジンおよび（またはツ
ブオキシシチジンの生産能を有する微生物を容易に誘導
することができる。
上記のようにして得られたシチジンおよび（ｆｌ。
たはツブオキシシチジン生産菌の培養には、通常の微生
物の培養方法と同様の方法が用いられる。
物の培養方法と同様の方法が用いられる。
すなわち、培地としては、炭素源、窒素源、金属イオン
類のほかに、必要に応じて、アミノ酸、核酸、ビタミン
類などの栄養源を含有する培地が用”いられる。
類のほかに、必要に応じて、アミノ酸、核酸、ビタミン
類などの栄養源を含有する培地が用”いられる。
例えば、炭素源としては、グルコース、ンユークロース
、マルトース、澱粉、澱粉糖化液、糖蜜などが用いられ
る。窒素源としては、ペプトン、コーン・ステイープ・
リカー、大豆粉、＃母、尿素などの有機窒素源のほかに
、硫酸、硝酸、塩酸。
、マルトース、澱粉、澱粉糖化液、糖蜜などが用いられ
る。窒素源としては、ペプトン、コーン・ステイープ・
リカー、大豆粉、＃母、尿素などの有機窒素源のほかに
、硫酸、硝酸、塩酸。
炭ｆｔｆｌＴｘどのアンモニウム塩や、アンモニアガス
。
。
アンモニア水などの無機窒素源が、それぞれ単独もしく
は混合して用いられる。その他の栄ｉｌｉ［としては、
菌の生育に必要な各種の無機塩類、アミノ酸類、ビタミ
ン類などが適宜選択の上、それぞれ単独もしくは混合し
て用いられる。さらに、培地には、必要に応じて、シリ
コンオイル、ポリアルキレングリコールエーテルなどの
消泡剤や界面活性剤などを添加することができる。培養
は、通常、振盪あるいは通気攪拌深部培養などの好気的
条件下に行われる。培地のｐＨは、通常、４ないし９の
範囲が好ましい。培養中にｐＨの変動が観察される場合
は、これを好ましい範囲に修正するために、硫酸、炭酸
カルシウム、水酸化ナトリウム、アンモニアガス、アン
モニア水など娶適宜添加してもよい。培朗温度は、通常
、２０℃ないし４５°Ｃの範囲から、使用される微生物
の生育およびシチジンおよび（またはノブオキシシチジ
ンの蓄積に好適な温度が選択される。培養は実質的にｉ
／ ｆｉ；’７および（またはツブオキシシチジンの蓄
積晴が最大になるまで行われるが、通常２日間ないし６
日間の培養で目的を達することができる。
は混合して用いられる。その他の栄ｉｌｉ［としては、
菌の生育に必要な各種の無機塩類、アミノ酸類、ビタミ
ン類などが適宜選択の上、それぞれ単独もしくは混合し
て用いられる。さらに、培地には、必要に応じて、シリ
コンオイル、ポリアルキレングリコールエーテルなどの
消泡剤や界面活性剤などを添加することができる。培養
は、通常、振盪あるいは通気攪拌深部培養などの好気的
条件下に行われる。培地のｐＨは、通常、４ないし９の
範囲が好ましい。培養中にｐＨの変動が観察される場合
は、これを好ましい範囲に修正するために、硫酸、炭酸
カルシウム、水酸化ナトリウム、アンモニアガス、アン
モニア水など娶適宜添加してもよい。培朗温度は、通常
、２０℃ないし４５°Ｃの範囲から、使用される微生物
の生育およびシチジンおよび（またはノブオキシシチジ
ンの蓄積に好適な温度が選択される。培養は実質的にｉ
／ ｆｉ；’７および（またはツブオキシシチジンの蓄
積晴が最大になるまで行われるが、通常２日間ないし６
日間の培養で目的を達することができる。
培養物からシチジンおよび（またはノブオキシシチジン
を分離・採取するには、丁でに公知にされている通常の
精製手段、例えば、沈殿法、イオン交換樹脂や活性炭に
よるクロマトグラフィー法など（Ａｇｒｉｃ、Ｂｉｏｌ
、 Ｃｈｅｍ、 、 ２９．７４２（１９６５）などン
の分離精製法が用いられる。
を分離・採取するには、丁でに公知にされている通常の
精製手段、例えば、沈殿法、イオン交換樹脂や活性炭に
よるクロマトグラフィー法など（Ａｇｒｉｃ、Ｂｉｏｌ
、 Ｃｈｅｍ、 、 ２９．７４２（１９６５）などン
の分離精製法が用いられる。
実施例
以下に、実施例をもって本発明をさら（二具体的に説明
する。
する。
実施例１゜
バチルス・ズブチリス（ＩＦＯ１（７１９、ＡＴＣＣ６
０５１）を５０μｇ〜のＮＴＧで３７℃で２０分間処理
した後（以下ＮＴＧ処理は同様の条件で行った。ン下記
の基本培地（Ａ月二１００ ａｇ／ｚｌのクラシルを添
加した培地に塗抹し、ａ７”ｃで、８日間培養した。出
現したコロニーの中から、レプリカ法によって、ウラシ
ル要求性変異株を選択した。次に、このウラシル要求株
に上記と同様の条件でＮＴ（Ｊ処理を施した後、基本培
地（Ａ月＝１００μｇ／ｄのウラノルｔ、２ ｆ４加し
た培地に塗抹し、３７℃で、３日間培喬した。
０５１）を５０μｇ〜のＮＴＧで３７℃で２０分間処理
した後（以下ＮＴＧ処理は同様の条件で行った。ン下記
の基本培地（Ａ月二１００ ａｇ／ｚｌのクラシルを添
加した培地に塗抹し、ａ７”ｃで、８日間培養した。出
現したコロニーの中から、レプリカ法によって、ウラシ
ル要求性変異株を選択した。次に、このウラシル要求株
に上記と同様の条件でＮＴ（Ｊ処理を施した後、基本培
地（Ａ月＝１００μｇ／ｄのウラノルｔ、２ ｆ４加し
た培地に塗抹し、３７℃で、３日間培喬した。
Ｊ占木培地（Ａ）
グルコース ２．０ ％硫酸ア
ンモニウム ０．２ ％燐酸−カリウム
０．６ ％クエン酸三ナトリウム
０．１ ％燐酸二カリウム
１．４ ％硫酸マグイ・シウム ０．０
２％ビオチン（ｐｉ（ｒ、ｏ Ｊ ｏ、１
’９／１寒 天 ２．０
％出現したコロニーを、基本培地（Ａ）に１００μｇ
／ａｔのシチジンを添加した培地にレプリカして、生育
できない株（シチジンデアミナーゼ活性欠損株）を選択
した。次に、このようにして得られたシチジンデアミナ
ーゼ活性欠損株に上記と同様にしてＮＴＧ処理を施した
後、基本培地（Ａ）上に塗抹して、３７℃で３日間培養
した。出現したコロニー（ウラシル要求性の復帰株）か
ら−菌株を選択して上記と同様の条件下にＮＴＧ処理を
施した後、基本培地（Ａ月二〇、５μｇ／ＩＩＬｌの５
−フルオロクラシルを添加した培地（Ａ−ＦＵ）上に塗
抹して、３７℃で４日間培養した。培地（Ａ−ＦＵＪ上
に出現シたコロニーの中から、シチジンおよび２′−デ
万キシシチジン生産能を有する株としてバチルス・ズブ
チリスＦＵ−１１（ＩＦｏ １４８９８、ＦＢＲＭ
Ｐ−７９１２）ン選択した。これらの菌株ノシチシンデ
アミナーゼ活性（Ｄ、Ｆ、Ｗｅｎｔｗｏｒｔｈらの方法
（前記ｌ：より測定〕およびピリミジンアナログ耐性度
は表１および表２の通りであった。
ンモニウム ０．２ ％燐酸−カリウム
０．６ ％クエン酸三ナトリウム
０．１ ％燐酸二カリウム
１．４ ％硫酸マグイ・シウム ０．０
２％ビオチン（ｐｉ（ｒ、ｏ Ｊ ｏ、１
’９／１寒 天 ２．０
％出現したコロニーを、基本培地（Ａ）に１００μｇ
／ａｔのシチジンを添加した培地にレプリカして、生育
できない株（シチジンデアミナーゼ活性欠損株）を選択
した。次に、このようにして得られたシチジンデアミナ
ーゼ活性欠損株に上記と同様にしてＮＴＧ処理を施した
後、基本培地（Ａ）上に塗抹して、３７℃で３日間培養
した。出現したコロニー（ウラシル要求性の復帰株）か
ら−菌株を選択して上記と同様の条件下にＮＴＧ処理を
施した後、基本培地（Ａ月二〇、５μｇ／ＩＩＬｌの５
−フルオロクラシルを添加した培地（Ａ−ＦＵ）上に塗
抹して、３７℃で４日間培養した。培地（Ａ−ＦＵＪ上
に出現シたコロニーの中から、シチジンおよび２′−デ
万キシシチジン生産能を有する株としてバチルス・ズブ
チリスＦＵ−１１（ＩＦｏ １４８９８、ＦＢＲＭ
Ｐ−７９１２）ン選択した。これらの菌株ノシチシンデ
アミナーゼ活性（Ｄ、Ｆ、Ｗｅｎｔｗｏｒｔｈらの方法
（前記ｌ：より測定〕およびピリミジンアナログ耐性度
は表１および表２の通りであった。
米ユニット７叩−蛋白
表２
米子：生育あり −二生育なし
次に、これらの微生物をグルコース１５％、コーン・ス
チープ・リカー３％、尿素１％、炭酸力ルシュム２％か
らなる発酵培地２０ｍ１を含む２００ｄ容フラスコに接
種して、３７℃で３日間振盪培養したところ、表３に示
す結果が得られた。
チープ・リカー３％、尿素１％、炭酸力ルシュム２％か
らなる発酵培地２０ｍ１を含む２００ｄ容フラスコに接
種して、３７℃で３日間振盪培養したところ、表３に示
す結果が得られた。
表３
実施例２゜
実施例１と同様にしてバチルス・ズブチリス（ＩＦＯ１
ｆｌ１７１９．ＡＴＣＣ６０５１）から得られたウラシ
ル要求性の消失したシチジンデアミカーゼ活性欠損株を
ＮＴＧ処理を施した後、実施例１に示す基本培地（Ａ）
に親株が生育できない濃度（１００μｇ／ｒｔｔｌ ）
の６−アザウラシルを添加した培地に生育できる株とし
て、バチルス・ズブチリスＡＵ−５０（ＩＦＯ１４３９
５，ＦＥＲＭ Ｐ−７９１１）に選択した。この菌株の
ピｌＪミジンアナログ耐性度は表４の通りであった。
ｆｌ１７１９．ＡＴＣＣ６０５１）から得られたウラシ
ル要求性の消失したシチジンデアミカーゼ活性欠損株を
ＮＴＧ処理を施した後、実施例１に示す基本培地（Ａ）
に親株が生育できない濃度（１００μｇ／ｒｔｔｌ ）
の６−アザウラシルを添加した培地に生育できる株とし
て、バチルス・ズブチリスＡＵ−５０（ＩＦＯ１４３９
５，ＦＥＲＭ Ｐ−７９１１）に選択した。この菌株の
ピｌＪミジンアナログ耐性度は表４の通りであった。
表４
来＋：生育あり −：なし
このＡＵ−５０株を実施例１と同様の条件下に培養した
ところ、１，５■／ｄのシチジンおよび２、３ ’ｉ’
／ｙｔｅのデオキシシチジンが蓄積された。
ところ、１，５■／ｄのシチジンおよび２、３ ’ｉ’
／ｙｔｅのデオキシシチジンが蓄積された。
実施例３゜
実施例１と同様にして、バチルス・ズブチリス＆ １２
２（Ｉ ＰＯ１４８８６、ＦｇＲＭ Ｐ−７９０８）か
らウランル要求性変異株乞得たのち、実施例１と同様に
してε／チジンデアミカーゼ活性を欠損し、かつウラシ
ル要求性の復帰した株を得た。次にこの変異株１−Ｎ’
ｌ’０処理を施した後、実施例１に示す基本培地（Ａ）
に親株が生育できない濃度（２００μｇＡ＃）の２−チ
オウラシルを添加した培地に生育できる株としてバチル
ス・ズブチリス２ＴＵ−２００（Ｉ ト”０ １４４０
８． ＦＥＲＭ Ｐ−７９７２）を選択した。この株
のシチジンデアミナーゼｌを測定したところ０．Ｏｌユ
ニット／〜−タンパク（親株のそれは、５５．８ユニッ
ト／Ｗ９−タンパク）であった。また、これらの菌株の
ピリミジンアナログ耐性度は表５の通りであった０ 表５ 次に、バチルス・ズブチリス２ＴＵ−２ｏｏｍ実施例１
と同様の条件下に培養したところ１．５ｍ９／ｒｔｔｌ
のシチジンおよび０．６η／肩ｌのデオキシシチジンが
蓄積されていた。
２（Ｉ ＰＯ１４８８６、ＦｇＲＭ Ｐ−７９０８）か
らウランル要求性変異株乞得たのち、実施例１と同様に
してε／チジンデアミカーゼ活性を欠損し、かつウラシ
ル要求性の復帰した株を得た。次にこの変異株１−Ｎ’
ｌ’０処理を施した後、実施例１に示す基本培地（Ａ）
に親株が生育できない濃度（２００μｇＡ＃）の２−チ
オウラシルを添加した培地に生育できる株としてバチル
ス・ズブチリス２ＴＵ−２００（Ｉ ト”０ １４４０
８． ＦＥＲＭ Ｐ−７９７２）を選択した。この株
のシチジンデアミナーゼｌを測定したところ０．Ｏｌユ
ニット／〜−タンパク（親株のそれは、５５．８ユニッ
ト／Ｗ９−タンパク）であった。また、これらの菌株の
ピリミジンアナログ耐性度は表５の通りであった０ 表５ 次に、バチルス・ズブチリス２ＴＵ−２ｏｏｍ実施例１
と同様の条件下に培養したところ１．５ｍ９／ｒｔｔｌ
のシチジンおよび０．６η／肩ｌのデオキシシチジンが
蓄積されていた。
実施例４゜
実施例８と同様にして、バチルス・ズブチリス蕉１２２
（ＩＦＯ１４３８６、ＦＥＲＭ Ｐ−７９０８）から得
られた９ランル要求性の消失したシチ１）７ｆアミ力−
ゼ欠損株を実施例１と同様にしてＮＴＧ処理を施した後
、実施例１に示す基本培地（Ａ）に親株が生育できない
濃度（２００μｇ７１１１ｇ ）の６−アザウラシルを
添加した培地に生育できる株としてバＪ・ルス・ズブ１
−リス６Ａ４Ｊ−５００（ｒ Ｉ“１０１４４０７、
ト１ト：ＲＭ Ｉ’−７９７１）’：ｔｍ択シタ・
ンこの菌株のピリミジンアナログ耐性度は表６の通りで
あった□ 表６ 来 ＋：生育あり 次にバチルス・ズブチリス６ＡＵ−５００を実施例１と
同様の条件−ドに培養したところ、２．０ Ｎｉ／ｒｒ
ｔｅのシチジンが蓄積された。
（ＩＦＯ１４３８６、ＦＥＲＭ Ｐ−７９０８）から得
られた９ランル要求性の消失したシチ１）７ｆアミ力−
ゼ欠損株を実施例１と同様にしてＮＴＧ処理を施した後
、実施例１に示す基本培地（Ａ）に親株が生育できない
濃度（２００μｇ７１１１ｇ ）の６−アザウラシルを
添加した培地に生育できる株としてバＪ・ルス・ズブ１
−リス６Ａ４Ｊ−５００（ｒ Ｉ“１０１４４０７、
ト１ト：ＲＭ Ｉ’−７９７１）’：ｔｍ択シタ・
ンこの菌株のピリミジンアナログ耐性度は表６の通りで
あった□ 表６ 来 ＋：生育あり 次にバチルス・ズブチリス６ＡＵ−５００を実施例１と
同様の条件−ドに培養したところ、２．０ Ｎｉ／ｒｒ
ｔｅのシチジンが蓄積された。
実施例５゜
実施例１の発ｆＩＹ培地２０ｙｒｔｅを含む２００ｍ／
容フラスコ５０個をＩｌｌい 、実施例１に従ってバチ
ルス・ズブナリスト゛１−１−目（Ｌｌ−０１４８９８
，Ｆ”１Ｍ１’−７９１２）を培養した。得られた培養
物から遠心分離によって菌体を除去し、この上清液をＩ
Ｎの塩酸溶液によりＩ）Ｈ２，０とし遠心分離により沈
殿を除いた。得られた上清液中のシチジン、およびデオ
キシシチジンを活性炭カラムに吸着させた後。
容フラスコ５０個をＩｌｌい 、実施例１に従ってバチ
ルス・ズブナリスト゛１−１−目（Ｌｌ−０１４８９８
，Ｆ”１Ｍ１’−７９１２）を培養した。得られた培養
物から遠心分離によって菌体を除去し、この上清液をＩ
Ｎの塩酸溶液によりＩ）Ｈ２，０とし遠心分離により沈
殿を除いた。得られた上清液中のシチジン、およびデオ
キシシチジンを活性炭カラムに吸着させた後。
１．４％のアンモニア水を含む５０％エタノール溶液に
より溶出させた。シチジンおよびデオキシシチジンの溶
出画分を集め、減圧濃縮したのち濃縮液暑アンモニア水
によりｐ）ｌ ｓ、 ｏとし、更に等８駄の０．０１Ｍ
ホクホウ酸ウム溶液を加え、Ｄｏｗｅｘ−ＩＮ２（ＣＩ
型、２００〜４００メツシユノのカラムを用いてシチジ
ンを吸着させた後、この方ラムを蒸留水で洗浄した（デ
オキシシチジンはこのカラムに吸着されないので、上記
のカラム通過液とカラム洗浄液（デオキシシチジン含有
画分ンから別途下記の方法により精製する〕。
より溶出させた。シチジンおよびデオキシシチジンの溶
出画分を集め、減圧濃縮したのち濃縮液暑アンモニア水
によりｐ）ｌ ｓ、 ｏとし、更に等８駄の０．０１Ｍ
ホクホウ酸ウム溶液を加え、Ｄｏｗｅｘ−ＩＮ２（ＣＩ
型、２００〜４００メツシユノのカラムを用いてシチジ
ンを吸着させた後、この方ラムを蒸留水で洗浄した（デ
オキシシチジンはこのカラムに吸着されないので、上記
のカラム通過液とカラム洗浄液（デオキシシチジン含有
画分ンから別途下記の方法により精製する〕。
次にこの方ラムから、ｌｌ！中に０．０１Ｍ塩化カリク
ムおよび０．０２Ｍホウホウ酸ウムを含む水溶液を用い
てシチジンを溶出させた。シチジンの溶出画分を集めて
等８晴のメタノールを加え、濃縮乾固をくり返し、ホウ
酸をのぞいた。得られた固形物を夕晴の水にとかし冷却
下にアルコールヲ添加し、シチジンの粗結晶３．９ｙを
得た。次に、これを少瞳の熱水に溶解した後、再び冷却
して、シチジンの結晶２．８２を得た。
ムおよび０．０２Ｍホウホウ酸ウムを含む水溶液を用い
てシチジンを溶出させた。シチジンの溶出画分を集めて
等８晴のメタノールを加え、濃縮乾固をくり返し、ホウ
酸をのぞいた。得られた固形物を夕晴の水にとかし冷却
下にアルコールヲ添加し、シチジンの粗結晶３．９ｙを
得た。次に、これを少瞳の熱水に溶解した後、再び冷却
して、シチジンの結晶２．８２を得た。
次に、上記のデオキシシチジン含有画分を濃縮乾固し、
得られた固形物を少量の水にとかし冷却下にアルコール
を添加して、デオキシシチジンの粗結晶０，８ノを得た
。次に、これ？少歌の熱水に溶解したのち、再び冷却し
て、デオキシシチジンの結晶ｏ、 ａ ！ｉＥを得た。
得られた固形物を少量の水にとかし冷却下にアルコール
を添加して、デオキシシチジンの粗結晶０，８ノを得た
。次に、これ？少歌の熱水に溶解したのち、再び冷却し
て、デオキシシチジンの結晶ｏ、 ａ ！ｉＥを得た。
発明の効果
本発明によると、医薬品の合成原料等として有用なシチ
ジンおよびデオキシシチジンを工業的有利に製造できる
。−ｒＴｘわち、本発明の製造法は、バチルス属に属し
、ｉ／チジンデアミカーゼ活性を欠損し、ピリミジンア
ナログに耐性を有するシチジンおよび（またはノブオキ
シシチジン生産能を有する微生物を用いることに特徴が
あり、従来のバチルス属菌な用いる方法よりもこれら目
的物を収率よく得ることができる。
ジンおよびデオキシシチジンを工業的有利に製造できる
。−ｒＴｘわち、本発明の製造法は、バチルス属に属し
、ｉ／チジンデアミカーゼ活性を欠損し、ピリミジンア
ナログに耐性を有するシチジンおよび（またはノブオキ
シシチジン生産能を有する微生物を用いることに特徴が
あり、従来のバチルス属菌な用いる方法よりもこれら目
的物を収率よく得ることができる。
手続補正書（甚）
昭和６０年４月弘日
１、 事件の表示
昭和５９年特許願第２５８７８８号
２、 発明の名称
シチジンおよびデオキシシチジンの製造法３、 補正を
する者 事件との関係 特許出願人 住所 大阪市東区道修町２丁目２７番地名称 （２
９３） 武田薬品工業株式会社代表者 金棒 育四部 ４、代理人 住所 大阪市淀川区十三本町２丁目１７番８５号６、補
正の対象 明細書の発明の詳細な説明の欄 ７、補正の内容 ■）明細書第３頁第１９〜２０行のｒＤ、Ｆ、Ｗｅｎｔ
−ｗｏｒｔｈＪを「ディ・エフ・ウェントワース（Ｄ、
Ｆ。
する者 事件との関係 特許出願人 住所 大阪市東区道修町２丁目２７番地名称 （２
９３） 武田薬品工業株式会社代表者 金棒 育四部 ４、代理人 住所 大阪市淀川区十三本町２丁目１７番８５号６、補
正の対象 明細書の発明の詳細な説明の欄 ７、補正の内容 ■）明細書第３頁第１９〜２０行のｒＤ、Ｆ、Ｗｅｎｔ
−ｗｏｒｔｈＪを「ディ・エフ・ウェントワース（Ｄ、
Ｆ。
Ｗｅｎｔｖｏｒｔｈ）Ｊに補正する。
２）同書第３頁第２０行の「らの方法」と「（”Ｍｅｔ
−ｈｏｄｓ ｉｎ Ｅ ｎｚｙｍｏｌ−→との間に
「〔“メソッヅ・イン・エンザイモロジー”ルＩ巻、ピ
ー ・エイ・ホラフィー・アンド・エム・イー・ジョン
ズ編集。
−ｈｏｄｓ ｉｎ Ｅ ｎｚｙｍｏｌ−→との間に
「〔“メソッヅ・イン・エンザイモロジー”ルＩ巻、ピ
ー ・エイ・ホラフィー・アンド・エム・イー・ジョン
ズ編集。
アカデミツク・プレス、ニューヨーク、１９７８゜４０
１頁」を挿入する。
１頁」を挿入する。
３）同書第４頁第３行のｒｌ ９７ Ｂ、Ｐ、 ４０１
）Ｊと「でシチジンデアミナーゼ」 との間に 「〕」
を挿入する。
）Ｊと「でシチジンデアミナーゼ」 との間に 「〕」
を挿入する。
４）同書第６頁第９〜１１行のｒＬｉｓｔ ｏｆ Ｃｕ
１ｔｕｒｅｓ。
１ｔｕｒｅｓ。
１９７８ 、 Ｓ １ｘｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ Ｊを
［リスト・オブ・カルチャーズ、１９７８．シックス・
エディジョン（Ｌｉ５ｔｏｆ Ｃｕ１ｔｕｒｅｓ、 １
９７８．５ｉｘｔｈ Ｅｄｉ−ｔｉｏｎ Ｊに補正する
。
［リスト・オブ・カルチャーズ、１９７８．シックス・
エディジョン（Ｌｉ５ｔｏｆ Ｃｕ１ｔｕｒｅｓ、 １
９７８．５ｉｘｔｈ Ｅｄｉ−ｔｉｏｎ Ｊに補正する
。
５）同書第６頁第１０〜１１行のｒＡｍｅｒｉｃａｎ
ＴｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅ Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ
（ＡＴＣＣ）Ｊを「アメリカン・タイプ・カルチャー・
コレクション（エイ３テイ８シー・シー） （Ａｍｅｒ
ｉｃａｎ ’ｒＹｐｅＣｕｌｔｕｒｅ Ｃｏ１１ｅ
ｃｔｉｏｎ （ＡＴＣＣ））Ｊに補正する。
ＴｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅ Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ
（ＡＴＣＣ）Ｊを「アメリカン・タイプ・カルチャー・
コレクション（エイ３テイ８シー・シー） （Ａｍｅｒ
ｉｃａｎ ’ｒＹｐｅＣｕｌｔｕｒｅ Ｃｏ１１ｅ
ｃｔｉｏｎ （ＡＴＣＣ））Ｊに補正する。
６）同書第６頁第１２〜１３行のｒ Ｃａｔａｌｏｇｕ
ｅ ｏｒＳｔｒａｉｎｓ Ｉ 、 Ｆｉｆｔｅｃ
ｎｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ 、 １９８２ Ｊを［カタ
ログ・オブ・ストレインズ １．フィフティーンス・エ
ディジョン（Ｃａｔａｌｏｇｕｅ ｏｒＳｔｒａｉｎ
ｓ １． Ｆｉｆｔｅｅｎｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ
）、 Ｌ ９８２」 に補正する。
ｅ ｏｒＳｔｒａｉｎｓ Ｉ 、 Ｆｉｆｔｅｃ
ｎｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ 、 １９８２ Ｊを［カタ
ログ・オブ・ストレインズ １．フィフティーンス・エ
ディジョン（Ｃａｔａｌｏｇｕｅ ｏｒＳｔｒａｉｎ
ｓ １． Ｆｉｆｔｅｅｎｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ
）、 Ｌ ９８２」 に補正する。
７）同書第１１頁第７〜８行のｒ （Ａｇｒｉｃ、 Ｂ
ｉｏｌ。
ｉｏｌ。
Ｃｈａａ＋、、２９，７４２ （１９６５）など）」を
［〔アブリフ・パイオル・ケム（Ａｇｒｉｃ、 Ｂｔｏ
ｌ。
［〔アブリフ・パイオル・ケム（Ａｇｒｉｃ、 Ｂｔｏ
ｌ。
Ｃｈｅｆｆｌ、 ）、２９．７４２（１９６５）） Ｊ
に補正する。
に補正する。
８）同書第１９頁第１０行の ｒ Ｄｏｗｅｘ Ｊを［
ダウエックス（Ｄｏｖｅｘ ） Ｊに補正する。
ダウエックス（Ｄｏｖｅｘ ） Ｊに補正する。
以上
手 続 蒲 正 置部）
昭和６０年ｌθ月２９日
喝
１、 事件の表示
昭和５９年特許願第２５８７８８号
１２、 発明の名称
１ンチジンおよびデオキシシチ
ジンの製造法３、 補正をする音 事件との関係 特許出願人
１住所 大阪市東区道修町２丁目２７番地名称
（２９３） 武田薬品工業株式会社代表者 金体
育四部 ４、代理人 住所 大阪市淀用区十三本町２丁目１７番８５号巳・ ＝／（ ６、補正の内容 （１）明細書の特許請求の範囲を別紙のとおりに訂正す
る。
１２、 発明の名称
１ンチジンおよびデオキシシチ
ジンの製造法３、 補正をする音 事件との関係 特許出願人
１住所 大阪市東区道修町２丁目２７番地名称
（２９３） 武田薬品工業株式会社代表者 金体
育四部 ４、代理人 住所 大阪市淀用区十三本町２丁目１７番８５号巳・ ＝／（ ６、補正の内容 （１）明細書の特許請求の範囲を別紙のとおりに訂正す
る。
（２）同書第４頁第２０行のｒＢａｃｉｌｌｕｓ ５ｕ
ｂｔｉｌｉｓＪをｒ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ５ｕｂｔｉ
ｌｉｓ Ｊに訂正する。
ｂｔｉｌｉｓＪをｒ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ５ｕｂｔｉ
ｌｉｓ Ｊに訂正する。
（３）同書第６頁第５〜６行の「なされている。」を「
なされ、該寄託がブダペスト条約に基づく寄託に切換え
られて下記に示す受託番号として同研究祈に保管されて
いる。
なされ、該寄託がブダペスト条約に基づく寄託に切換え
られて下記に示す受託番号として同研究祈に保管されて
いる。
」
：二訂正する。
：４）同書第６頁第７行ノｒＡＴＣＣ６０５１）Ｊｆ７
）麦に「は」を挿入する。
）麦に「は」を挿入する。
］５）同書第６頁第１２行の ｒＦ １ｆｔｅｃｎｔｈ
ＪをｒＦ １ｆｔｅｅｎｔｈＪに訂正する。
ＪをｒＦ １ｆｔｅｅｎｔｈＪに訂正する。
（６）同書第６頁第１５行、第１６頁第６行１第１７頁
第１５行のｒＦＥＲＭ Ｐ−７９０８ＪをｒＦＥＲＭ
ＢＰ−８５９Ｊに訂正する。
第１５行のｒＦＥＲＭ Ｐ−７９０８ＪをｒＦＥＲＭ
ＢＰ−８５９Ｊに訂正する。
（７）同書第１２頁第１１行のｒ（ＰＨ７、０）Ｊを削
除し、ｒ（ｐＨ７、０）Ｊ第１２行と第１３行の間に挿
入する。
除し、ｒ（ｐＨ７、０）Ｊ第１２行と第１３行の間に挿
入する。
（８）同書第１３頁第８行、第１８頁第２０行〜第１９
頁第１行の ｒＦＥＲＭ Ｐ〜７９１２ ｊをｒＦＥ
ＲＭ ＢＰ−９０８」に訂正する。
頁第１行の ｒＦＥＲＭ Ｐ〜７９１２ ｊをｒＦＥ
ＲＭ ＢＰ−９０８」に訂正する。
（９）同書第１５頁第９行の ｒＦＥＲＭ Ｐ−７９
１１ＪをｒＦ’ＥＦＬＭ ＢＰ−９０７ｊに訂正する
。
１１ＪをｒＦ’ＥＦＬＭ ＢＰ−９０７ｊに訂正する
。
（ｌＯ）同書第１６頁第１４行の ｒＦＥＦＬＭ Ｐ
−７９７２」をｒＦＥＲＭ ＢＰ−９１０Ｊに訂正す
る。
−７９７２」をｒＦＥＲＭ ＢＰ−９１０Ｊに訂正す
る。
（１１）同書第１６頁第１６行及び同頁第１７行の「タ
ンパク」を「蛋白」に訂正する。
ンパク」を「蛋白」に訂正する。
（１２）同書第１７頁第８行と第９行の間に「帛＋：成
育あり −：成育なし」を挿入する。
育あり −：成育なし」を挿入する。
（１３）同書第１７頁第１６行の「ウラシル」を「ウラ
シル」に訂正する。
シル」に訂正する。
（１４）同書第１８頁第２行の ｒＦＥＲＭ Ｐ−７
９７１Ｊ を ｒＦＥＲＭ ＢＰ−９０９Ｊに訂正
する。
９７１Ｊ を ｒＦＥＲＭ ＢＰ−９０９Ｊに訂正
する。
７、添付書類の目録
（１）別紙（特許請求の範囲） １ 連凧
上 別紙 特許請求の範囲 （１）バチルス属に属し、シチジンデアミナーゼ活性を
欠損し、ピリミジンアナログに、耐性を有し、シチジン
および（または）デオキシシジン生産能を有する微生物
を培地に培養して、培養物中にシチジンおよび（または
）デオキシシチジンを生成蓄積させ、シチジンおよび（
または）デオキシシチジンを採取することを特徴とする
シチジンおよび（または）デオキシシチジンの製造法。
上 別紙 特許請求の範囲 （１）バチルス属に属し、シチジンデアミナーゼ活性を
欠損し、ピリミジンアナログに、耐性を有し、シチジン
および（または）デオキシシジン生産能を有する微生物
を培地に培養して、培養物中にシチジンおよび（または
）デオキシシチジンを生成蓄積させ、シチジンおよび（
または）デオキシシチジンを採取することを特徴とする
シチジンおよび（または）デオキシシチジンの製造法。
（２）シチジンデアミナーゼ活性を欠損し、ピリミジン
アナログに耐性を有するバチルスニズブチリス。
アナログに耐性を有するバチルスニズブチリス。
受託番号変更届
昭和６０年ＩＯ月２９８
１、 事件の表示
昭和５９年特許願第２５８７８８号
２、 発明の名称
シチジンおよびデオキシシチジンの製造法３、 手続を
した者 事件との関係 特許出願人 住 所 大阪市東区道修町２丁目２７番地名 称
（２９３） 武田薬品工業株式会社代表者 金棒
育四部 ４、代理人 住 所 大阪市淀川区十三本町２丁目１７番８５号５、
旧寄託機関の名称 工業技術院微生物工業技術研究所 ６、 旧受託番号 別紙のとおり ７、 新寄託機関の名称 工業技術院微生物工業技術研究所 ８、 新受託番号 別紙のとおり ９、 添付書類の目録 （１）新受託番号を証明する書面 ５ 連
凧上 別紙
した者 事件との関係 特許出願人 住 所 大阪市東区道修町２丁目２７番地名 称
（２９３） 武田薬品工業株式会社代表者 金棒
育四部 ４、代理人 住 所 大阪市淀川区十三本町２丁目１７番８５号５、
旧寄託機関の名称 工業技術院微生物工業技術研究所 ６、 旧受託番号 別紙のとおり ７、 新寄託機関の名称 工業技術院微生物工業技術研究所 ８、 新受託番号 別紙のとおり ９、 添付書類の目録 （１）新受託番号を証明する書面 ５ 連
凧上 別紙
Claims (2)
- （１）バチルス属に属し、シチジンデアミナーゼ活性を
欠損し、ピリミジンアナログに耐性を有し、シチジンお
よび（または）デオキシシチジン生産能を有する微生物
を培地に培養して、培養物中にシチジンおよび（または
）デオキシシチジンを生成蓄積させ、シチジンおよび（
または）デオキシシチジンを採取することを特徴とする
シチジンおよび（または）デオキシシチジンの製造法。 - （２）シチジンデアミナーゼ活性を欠損し、ピリミジン
アナログに耐性を有するバチルス ズブチリス。
Priority Applications (10)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59258788A JPS61135597A (ja) | 1984-12-06 | 1984-12-06 | シチジンおよびデオキシシチジンの製造法 |
| CN85108240A CN1011704B (zh) | 1984-12-06 | 1985-11-16 | 胞苷和/或脱氧胞苷的生产方法 |
| US06/802,344 US4839285A (en) | 1984-12-06 | 1985-11-25 | Method for production of cytidine and/or deoxycytidine |
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