JPS61128140A - 粒子解析装置 - Google Patents
粒子解析装置Info
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- JPS61128140A JPS61128140A JP59250283A JP25028384A JPS61128140A JP S61128140 A JPS61128140 A JP S61128140A JP 59250283 A JP59250283 A JP 59250283A JP 25028384 A JP25028384 A JP 25028384A JP S61128140 A JPS61128140 A JP S61128140A
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- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 21
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Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
- G01N15/10—Investigating individual particles
- G01N15/14—Optical investigation techniques, e.g. flow cytometry
- G01N15/1456—Optical investigation techniques, e.g. flow cytometry without spatial resolution of the texture or inner structure of the particle, e.g. processing of pulse signals
- G01N15/1459—Optical investigation techniques, e.g. flow cytometry without spatial resolution of the texture or inner structure of the particle, e.g. processing of pulse signals the analysis being performed on a sample stream
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/5302—Apparatus specially adapted for immunological test procedures
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- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔技術分野〕
本発明は粒子解析装置に関し、特にフローセル内を連続
的に通過する細胞浮遊液に例えばレーザ光を照射し、散
乱光又は螢光を検出して細胞粒子の性質、構造を解析す
るようにした、いわゆるフローサイトメータに関する。
的に通過する細胞浮遊液に例えばレーザ光を照射し、散
乱光又は螢光を検出して細胞粒子の性質、構造を解析す
るようにした、いわゆるフローサイトメータに関する。
従来、フローサイトメータにおいて、螢光染色された被
検粒子にレーザ光を照射し、照射光と直角な方向で被検
粒子からの螢光を検出し、被検粒子の化学的性質を調べ
ることが知られている。
検粒子にレーザ光を照射し、照射光と直角な方向で被検
粒子からの螢光を検出し、被検粒子の化学的性質を調べ
ることが知られている。
ここで螢光強度が微小量であるため照射光源として大出
力レーザを用い、又検出器として感度の高いフォトマル
が用いられる。
力レーザを用い、又検出器として感度の高いフォトマル
が用いられる。
更に螢光検出用の集光光学系のＮＡ（開口数）を大きく
すれば良いものであるが、被検粒子の該集光光学系の光
軸方向への移動によって検出出力に対する影響を受は易
くなる。
すれば良いものであるが、被検粒子の該集光光学系の光
軸方向への移動によって検出出力に対する影響を受は易
くなる。
又、被検粒子の前述した移動が照射光の強度分布の影響
を受け、検出出力に影響を与える。更には被検粒子に対
する照射光の強度分布の移動が検出出力に影響を与える
。
を受け、検出出力に影響を与える。更には被検粒子に対
する照射光の強度分布の移動が検出出力に影響を与える
。
ごれによって測定精度の劣化が生じてくるが、以下第２
図及び第３図を用いて従来例を詳述する。
図及び第３図を用いて従来例を詳述する。
第２図でフローセル内を浮遊液に包まれた被検粒子５は
流体力学的焦点合わせ法を使って、はぼフローセル３の
フロ一部４の中心を安定して流れている。
流体力学的焦点合わせ法を使って、はぼフローセル３の
フロ一部４の中心を安定して流れている。
この被検粒子５ヘレーヂ光源１からの光が集光レンズ２
により集光される。そして通常はストッパ６、集光レン
ズ７、光検出器８で構成される検出系で前方散乱光強度
を検出し、被検粒子５のサイズの情報を得ている。
により集光される。そして通常はストッパ６、集光レン
ズ７、光検出器８で構成される検出系で前方散乱光強度
を検出し、被検粒子５のサイズの情報を得ている。
又、被検粒子５を螢光染色して、その細胞化学的性質を
知るのに集光レンズ９．ダイクロイックミラー１０．バ
リヤーフィルタ１１．フォトマル１２で構成される光学
系で螢光強度を検出する。
知るのに集光レンズ９．ダイクロイックミラー１０．バ
リヤーフィルタ１１．フォトマル１２で構成される光学
系で螢光強度を検出する。
更にフローセル内の粒状性を知るために照射光に対し９
０°方向の側方散乱を拾うが、この光学系を集光レンズ
９．ダイクロイックミラー１０．全反射ミラー１３．フ
ォトマル１４で構成する。
０°方向の側方散乱を拾うが、この光学系を集光レンズ
９．ダイクロイックミラー１０．全反射ミラー１３．フ
ォトマル１４で構成する。
さてこのような測光を行う場合、以下に述べる点で測光
精度の低下が考えられる。
精度の低下が考えられる。
まず第３図（ａ）でフコ−セル３のフロ一部４の中央部
を流れる被検粒子５がフロ一部内で照射方向と直角の集
光レンズ９の光軸方向に移動したとき立体角Ω＝２π（
１−−）が変化するので、特に大きなＮＡ（開口数）の
集光レンズの場合にはフォトマル１２又は１４からの測
光信号が変動することになる。
を流れる被検粒子５がフロ一部内で照射方向と直角の集
光レンズ９の光軸方向に移動したとき立体角Ω＝２π（
１−−）が変化するので、特に大きなＮＡ（開口数）の
集光レンズの場合にはフォトマル１２又は１４からの測
光信号が変動することになる。
これは当然に被検粒子の性質を検知する精度の低下を招
くことになる。
くことになる。
又第３図（ｂ）に示すように、フロ一部４に対して照射
方向と９０°方向の照射光強度分布は通常３０．３２の
如くガウス形状となるが、被検粒子２９ｏ 、２９＋
、２９２の如くフロ一部４の位置ａＯ＋ ａＩ ＋
ａ２に応じて粒子に当たる光強度は各々 １．０．Ｓ
、、Ｓ２となるので、フロ一部内に粒子が移動すること
によって、それが検出信号の精確さに影響を与えること
になる６ 更に第３図（Ｃ）に示すように、フロ一部４の中央部ｂ
０を被検粒子３１が流れているとき、照射光強度分布３
２の如く、照射光強度分布３２がｂｌの位置にシフトし
たとき光強度は１．０からｔｌと変化し、これによって
前述のように検出信号の精確さに影響を与えることにな
る。
方向と９０°方向の照射光強度分布は通常３０．３２の
如くガウス形状となるが、被検粒子２９ｏ 、２９＋
、２９２の如くフロ一部４の位置ａＯ＋ ａＩ ＋
ａ２に応じて粒子に当たる光強度は各々 １．０．Ｓ
、、Ｓ２となるので、フロ一部内に粒子が移動すること
によって、それが検出信号の精確さに影響を与えること
になる６ 更に第３図（Ｃ）に示すように、フロ一部４の中央部ｂ
０を被検粒子３１が流れているとき、照射光強度分布３
２の如く、照射光強度分布３２がｂｌの位置にシフトし
たとき光強度は１．０からｔｌと変化し、これによって
前述のように検出信号の精確さに影響を与えることにな
る。
実際には第３図（ａ）（ｂ）（Ｃ）で示す誤差が改なっ
て検出精度の低下をおこす。
て検出精度の低下をおこす。
（目 的）
本発明は上述した従来例の欠点を除去し、照射光の強度
分布、被検粒子の位置、被検粒子と集光光学系との間の
集光距離を調べることにより、これらのデータを基にし
て検出器の出力に補正を施すことによってより精確な粒
子の解析を可能とする装置を提供することを目的とする
。
分布、被検粒子の位置、被検粒子と集光光学系との間の
集光距離を調べることにより、これらのデータを基にし
て検出器の出力に補正を施すことによってより精確な粒
子の解析を可能とする装置を提供することを目的とする
。
（実施例）
以下、第１図を用いて本発明の実施例を示す。
該装置は基本的に第２図に示した装置にハーフミラ−１
５，集光レンズ１６．アレイ状検出器１７を加え、これ
によりフローセルのフロ一部での照射光強度分布、粒子
位置の検出する。なおアレイ状検出器１７としてはＣＯ
Ｄ等が用いられる。粒子位置は最小出力となる位置を検
出することにより、又照射光強度分布は粒子の無い時点
での各位置出力より検出する。
５，集光レンズ１６．アレイ状検出器１７を加え、これ
によりフローセルのフロ一部での照射光強度分布、粒子
位置の検出する。なおアレイ状検出器１７としてはＣＯ
Ｄ等が用いられる。粒子位置は最小出力となる位置を検
出することにより、又照射光強度分布は粒子の無い時点
での各位置出力より検出する。
なお上述のアレイ状検出器１７は、粒子位置検出と照射
光強度分布検出を兼用するものであるが、粒子位置検出
と照射光強度分布検出を別個の検出器で検出しても良い
。
光強度分布検出を兼用するものであるが、粒子位置検出
と照射光強度分布検出を別個の検出器で検出しても良い
。
例えばレンズ１６の後方で光束を光分割器（ハーフミラ
−等）で分割し、一方の光路中に粒子位置検出器を設け
、他方の光路中に照射光強度分布検出器を設ける。
−等）で分割し、一方の光路中に粒子位置検出器を設け
、他方の光路中に照射光強度分布検出器を設ける。
さてアレイ状検出器１７からの出力信号は強度分布及び
位置検出部・１９により検出され粒子照射光強度演算部
２７．又は集光距離演算部２８で粒子に照射される光強
度、又は開口数に対応する集光レンズ９と粒子との距離
すなわち集光距離が演算される。
位置検出部・１９により検出され粒子照射光強度演算部
２７．又は集光距離演算部２８で粒子に照射される光強
度、又は開口数に対応する集光レンズ９と粒子との距離
すなわち集光距離が演算される。
そして螢光検出部２５、側方散乱検出部２３の出力は各
々、信号補正部２６．２４に粒子照射光強度演算部２７
．集光距離演算部２８の出力と共に入力され、検出出力
が補正されて正確なデータを得る。
々、信号補正部２６．２４に粒子照射光強度演算部２７
．集光距離演算部２８の出力と共に入力され、検出出力
が補正されて正確なデータを得る。
又、前方散乱検出部１８の出力は粒子照射光強度演算部
２７の出力と共に信号補正部２０に入力され、検出出力
が補正されて正確なデータを得る。
２７の出力と共に信号補正部２０に入力され、検出出力
が補正されて正確なデータを得る。
これらのデータはデータ記憶部２１に記憶され、必要に
応じて表示記録部２２に表示記録される。
応じて表示記録部２２に表示記録される。
（効 果）
以上、本発明によれば、集光距離の変化により生ずる側
方散乱光又は螢光の検出出力変化並びに粒子位置或いは
照射光強度の変化により生ずる検出出力変化を補正して
精度の高い粒子解析をすることが可能となる。
方散乱光又は螢光の検出出力変化並びに粒子位置或いは
照射光強度の変化により生ずる検出出力変化を補正して
精度の高い粒子解析をすることが可能となる。
又、照射光源（レーザ等）のパワーの低減化にもなり、
コストの安い装置の実現が可能となる。
コストの安い装置の実現が可能となる。
第１図は本発明の実施例の図、
第２図は従来例の図、
第３図（ａ）（ｂ）（ｃ）は各々従来例の検出精度低下
の要因を示す図、 図中、１はレーザ光源、３はフローセル、４はフロ一部
、５は被検粒子、９は集光レンズ、１２．１４はフォト
マル、１７はアレイ状検出器、２０，２４．２６は信号
補正部、２７は粒子照射光強度演算部、２８は集光圧＃
ｙｉ算部である。
の要因を示す図、 図中、１はレーザ光源、３はフローセル、４はフロ一部
、５は被検粒子、９は集光レンズ、１２．１４はフォト
マル、１７はアレイ状検出器、２０，２４．２６は信号
補正部、２７は粒子照射光強度演算部、２８は集光圧＃
ｙｉ算部である。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、流体中の粒子に光を照射し集光光学系を介して粒子
からの散乱光又は螢光を受光して粒子解析を行う装置に
おいて、 照射光強度分布及び照射方向に直角な側方方向の粒子位
置を検出する検出部と、 粒子位置での照射光強度を演算する第１演算部と、 粒子位置と前記集光光学系との間の集光距離を演算する
第２演算部と、 第１、第２演算部の出力により前記側方方向の散乱光又
は螢光の出力を補正する補正部を有することを特徴とす
る粒子解析装置。 ２、前記補正部は前記第１演算部の出力により照射光に
対して前方方向の散乱光の出力を補正する特許請求の範
囲第１項記載の粒子解析装置。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59250283A JPS61128140A (ja) | 1984-11-27 | 1984-11-27 | 粒子解析装置 |
| US06/753,871 US4643566A (en) | 1984-07-20 | 1985-07-11 | Particle analyzing apparatus |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59250283A JPS61128140A (ja) | 1984-11-27 | 1984-11-27 | 粒子解析装置 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61128140A true JPS61128140A (ja) | 1986-06-16 |
| JPH0262181B2 JPH0262181B2 (ja) | 1990-12-25 |
Family
ID=17205593
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59250283A Granted JPS61128140A (ja) | 1984-07-20 | 1984-11-27 | 粒子解析装置 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS61128140A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2009098868A1 (ja) * | 2008-02-07 | 2009-08-13 | Mitsui Engineering & Shipbuilding Co., Ltd. | 蛍光検出装置及び蛍光検出方法 |
| JP5611493B1 (ja) * | 2012-12-03 | 2014-10-22 | 富士電機株式会社 | 粒子線成形装置 |
| WO2023276269A1 (ja) * | 2021-06-30 | 2023-01-05 | ソニーグループ株式会社 | 生体試料分析装置 |
-
1984
- 1984-11-27 JP JP59250283A patent/JPS61128140A/ja active Granted
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2009098868A1 (ja) * | 2008-02-07 | 2009-08-13 | Mitsui Engineering & Shipbuilding Co., Ltd. | 蛍光検出装置及び蛍光検出方法 |
| JP4489146B2 (ja) * | 2008-02-07 | 2010-06-23 | 三井造船株式会社 | 蛍光検出装置及び蛍光検出方法 |
| JPWO2009098868A1 (ja) * | 2008-02-07 | 2011-05-26 | 三井造船株式会社 | 蛍光検出装置及び蛍光検出方法 |
| US8049185B2 (en) | 2008-02-07 | 2011-11-01 | Mitsui Engineering & Shipbuilding Co., Ltd. | Fluorescence detection device and fluorescence detection method |
| JP5611493B1 (ja) * | 2012-12-03 | 2014-10-22 | 富士電機株式会社 | 粒子線成形装置 |
| WO2023276269A1 (ja) * | 2021-06-30 | 2023-01-05 | ソニーグループ株式会社 | 生体試料分析装置 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0262181B2 (ja) | 1990-12-25 |
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