JPS6112677B2

JPS6112677B2 -

Info

Publication number: JPS6112677B2
Application number: JP14025980A
Authority: JP
Inventors: Shigeki Hamaguchi; Masahiro Ogura; Junzo Hasegawa; Hajime Kawarada; Kyoshi Watanabe
Original assignee: Kanegafuchi Chemical Industry Co Ltd
Current assignee: Kanegafuchi Chemical Industry Co Ltd
Priority date: 1980-10-06
Filing date: 1980-10-06
Publication date: 1986-04-09
Also published as: JPS5765191A

Description

【発明の詳細な説明】本発明は、抗微生物作用を有する医薬或いは除
草作用を有する農薬等の合成原料若しくは中間体
として有用な化合物である(+)―α―ヒドロキシ
メチル酪酸を微生物を利用して工業的に有利に製
造する方法に関するものである。

これまで(±)―α―メチル酪酸を原料として、
微生物を利用して(+)―α―ヒドロキシメチル酪
酸を蓄積させた報告はなく、特に本発明によれ
ば、通常の合成法では製造が困難な高純度の光学
活性(+)―α―ヒドロキシメチル酪酸が簡単な操
作により得られる利点がある。

即ち本発明は、(±)―α―メチル酪酸に、この
ものを(+)―α―ヒドロキシメチル酪酸に変換す
る能力を有するトリコスポロン
（Trichosporon）属に属する微生物を作用せし
め、生成した(+)―α―ヒドロキシメチル酪酸を
採取することを特徴とする(+)―α―ヒドロキシ
メチル酪酸の製造方法に関するものである。

本発明に使用される、(±)―α―メチル酪酸か
ら(+)―α―ヒドロキシメチル酪酸へ変換する代
謝系をもつ微生物としては、例えばトリコスポロ
ン・フアーメンタンス（Trichosporon
fermentans）があり、この培養には通常これら
の菌が資化しうる栄養源ならなんでも使用しう
る。例えば炭素源としてグルコース・シユクロー
ス・マンニツト等の炭水化物、エタノールを始め
とするアルコール類、酢酸等の有機酸類、大豆油
等の単独又はこれらの混合物、窒素源として硫酸
アンモニウム・リン酸アンモニウム等、栄養源と
してイーストエキス・麦芽エキス・肉エキス・ペ
プト等、また微量金属塩、ビタミン等通常の培養
に用いられる栄養源を適宜混合した培地を用いる
ことができる。

培養の方法としては、栄養培地のPHを4.0〜9.5
の範囲で好気的に20〜40℃の範囲で１〜５日間培
養する。(±)―α―メチル酪酸から光学活性α―
ヒドロキシメチル酪酸への変換には6.0〜9.0のPH
範囲が好ましい。

又、微生物を(±)―α―メチル酪酸に作用させ
る方法としては、菌体の培養と並行して行なう方
法として、(±)―α―メチル酪酸と上記の炭素源
との共存下でPH4.0〜9.5の範囲で好気的に培養
し、培養液中に光学活性α―ヒドロキシメチル酪
酸を蓄積させる方法があり、また菌体の培養と
(±)―α―メチル酪酸から光学活性α―ヒドロキ
シメチル酪酸への変換反応を２段階に分けて行な
う方法、例えば菌体の生産を上記の炭素源又はこ
れらの混合物の栄養培地でPH4.0〜9.5の範囲で好
気的に培養し、得られた培養液に(±)―α―メチ
ル酪酸を添加し、PHを6.0〜9.0に保持して好気的
に反応せしめる方法、又は得られた培養液から遠
心分離等で菌体を集め、菌体を適当な組成の液、
例えばM/15リン酸緩衝液（PH7.0）に懸濁し、
(±)―α―メチル酪酸と少量のグルコースを加
え、好気的にPH6.0〜9.0の範囲で反応を行なう方
法とがある。この場合の菌体は、反応速度を早め
るためにトルエン処理等の適当な前処理を加えた
ものも使用できる。

培養及び反応で得られた光学活性α―ヒドロキ
シメチル酪酸の採取方法としては、通常の公知の
抽出精製方法が利用しうるが、次の如き方法も使
用しうる。例えば、得られた光学活性α―ヒドロ
キシメチル酪酸含有液のPHを硫酸等で2.0付近ま
で下げ、更に飽和に達するまで硫酸アンモニウム
を加える。しかる後、等量の酢酸エチルで３回抽
出を行なう。これを低温、減圧下で溶剤を除くと
光学活性α―ヒドロキシメチル酪酸含有物が渇色
油状で得られる。更に、このものを少量のベンゼ
ンに溶解し、ベンゼン―アセトン混合溶剤で溶出
するシリカゲルカラムクロマトグラフイーを行な
うことにより容易に他の不純物と分離する事がで
きる。

次に本発明を実施例によつて説明するが、本発
明は実施例に限定されるものではない。

実施例１グルコース２％、イーストエキス0.5％、ペプ
トン0.3％、肉エキス0.3％、(±)―α―メチル酪
酸0.1％含有する培地（PH6.0）１に、トリコス
ポロン・フアーメンタンスCBS2529
（Trichosporon fermentans）を植菌し、３容
ミニジヤーフアメンターで30℃、通気1vvm、撹
拌500rpmで20時間培養した。その後、培養液に
(±)―α―メチル酪酸30ｇを添加し、カセイソー
ダでPH7.0に調整し、更に72時間反応を行なつ
た。得られた反応液を濃硫酸でPH2.0とし、硫酸
アンモニウムを加え飽和溶液とした。次に等量の
酢酸エチルで３回抽出し、抽出液を無水硫酸ナト
リウムで脱水し、これを減圧下、40℃以下で溶剤
を除去して黄褐色油状物質を得た。

この油状物質を重量５倍のシリカゲル（ワコー
ゲルＣ―200）を用い、ベンゼンで調製したカラ
ムにかけた。最初、カラム容量の５倍のベンゼ
ン：アセトン（９：１）溶剤で洗浄し、未反応の
(±)―α＋メチル酪酸を溶出除去し、次にベンゼ
ン：アセトン（３：１）溶剤で(±)―α―ヒドロ
キシメチル酪酸を溶出する。得られた(+)―α―
ヒドロキシメチル酪酸画分を集め、減圧下溶剤を
除去しシロツプ状の物質1.5ｇを得た。この様に
して得られたものは、ガスクロマトグラフイー、
シリカゲル薄層クロマトグラフイー、NMR分析
により高純度な(+)―α―ヒドロキシメチル酪酸
であることが確認された。次に、この(±)―α―
ヒドロキシメチル酪酸の施光度をユニオン技研製
のデイジタル自動施光計PM101にて測定したとこ
ろ〔α〕^２５ _Ｄ＋1.5゜（Ｃ、5.0、メタノール）であつ
た。

実施例２ (±)―α―メチル酪酸1.0％、グルコース2.0
％、リン酸二アンモニウム1.3％、リン酸一カリ
ウム0.7％、塩化ナトリウム0.01％、硫酸亜鉛
0.006％、硫酸第一鉄0.009％、イーストエキス0.5
％、含有培地（PH6.5）１に、トリコスポロ
ン・フアーメンタンスCBR2529を植菌し、３
容ミニジヤーフアメンターにて30℃、通気
1.5vvm、撹拌500rpmで24時間培養、その後PHを
7.0にカセイソーダで維持し、更に24時間培養を
行なつた。この培養液を実施例１と同様に処理
し、(+)―α―ヒドロキシメチル酪酸0.70ｇを得
た。施光度は〔α〕^２５ _Ｄ＋1.5゜（Ｃ、5.0、メタノー
ル）であつた。

実施例３グルコース３％、リン酸二アンモニウム1.3
％、リン酸一カリウム0.7％、塩化ナトリウム
0.01％、硫酸亜鉛0.006％、硫酸第一鉄0.009％、
イーストエキス0.5％含有培地（PH6.5）１に、
トリコスポロン・フアメンタンスCBS2529を植菌
し、30℃、通気1vvm、撹拌700rpmで24時間培養
し、得られた培養液を遠心分離により菌体を集
め、更に0.9％食塩水で２回洗浄した菌体を得
た。これをM/15リン酸緩衝液（PH7.0）に懸濁
し、(±)―α―メチル酪酸30ｇ、グルコース２ｇ
添加し、PHを7.0にカセイソーダで調整して、培
養と同一条件で48時間反応させた。その後、実施
例１と同様な方法で抽出精製を行ない(+)―α―
ヒドロキシメチル酪酸1.6ｇを得た。施光度は
〔α〕^２５ _Ｄ＋1.5゜（Ｃ、5.0、メタノール）であつ
た。

Claims

【特許請求の範囲】１ (±)―α―メチル酪酸に、このものを(±)―
α―ヒドロキシメチル酪酸に変換しうる能力を有
するトリコスポロン属に属する微生物を作用せし
め、生成した(±)―α―ヒドロキシメチル酪酸を
採取することを特徴とする(+)―α―ヒドロキシ
メチル酪酸の製造方法。２ (±)―α―メチル酪酸を添加した培地で微生
物を培養することにより、微生物を(±)―α―メ
チル酪酸に作用させる特許請求の範囲第１項記載
の製造方法。３微生物を栄養培地で培養して得た培養液を
(±)―α―メチル酪酸に作用させる特許請求の範
囲第１項記載の製造方法。４微生物を栄養培地で培養して得た培養液から
微生物菌体を分離して菌体懸濁液を調製し、それ
を(±)―α―メチル酪酸に作用させる特許請求の
範囲第１項記載の製造方法。５微生物がトリコスポロン・フアーメンタンス
である特許請求の範囲第１項記載の製造方法。６微生物の培養をPH4.0〜9.5の範囲で行ない、
培養液又は菌体懸濁液と(±)―α―メチル酪酸と
の反応をPH6.0〜9.0の範囲で行なう特許請求の範
囲第３項又は第４項記載の製造方法。