JPS6091990A - 新抗生物質３７８０物質及びその製造法並びにこれを有効成分とする抗腫瘍剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 造法並びＫこれを有効成分とする抗腫瘍剤に関するもの
である。

従来、腫瘍の化学療法剤として、アルキル化剤（ナイト
ロジエンマスタード類、エチレンイミン類、スルフォン
酸エステル類）、代謝拮抗物質（葉酸拮抗剤、プリン拮
抗剤、ピリＳノン拮抗剤）、植物性核分裂毒（コルセミ
ド、ビンプラスチン等）、抗生物質（デルコマイシン、
カルチノフイリン、マイトマイシン等）、ホルモン類（
副腎ステロイド、男性ホルモン、女性ホルモン）及びポ
ルフィリン錯塩（マーフィリン、ｃｏｐｐ　）等が用い
られている。しかしながら、これらのほとんどが１１１
１胞市型の物質であり、副作用を呈するものが多い。従
って、低毒性で優れた抗腫瘍活性を有する物質の開発か
望まれている。

そこで、本発明者らは、上記の主旨に鑑み、低毒性で抗
腫瘍活性を有する物質を探索したところ、ストレプトミ
セス（　Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｌ属に属する微生
物の培養物よシ新規な抗生物質３７ｇθ吻質（以下、ｒ
３’７ｇＯ物質」と称する。）を分離、採取することに
成功し、更に該物質の生理活性につき、鋭意研究の結果
、著１，　＜低毒性で優れた抗腫瘍活性をイ〕すること
治：児出し、この物質か腫瘍の治療に旧著な効果を発揮
し倚ることの新たな知見を得て、不発明を完成するに至
った。

以下、本発明の抗１重瘍活性を翁する３７ｇｏ物質及び
その、製ｉυ法について述べる。

本発明方法において用いる微生物は、新抗生物質３７ざ
０物貿の生産能を有するストレプトミセス属にｇｌ４す
る菌種である。

その一例として、ストレプトミセス・エスピー・Ｊ６　
３　７　ｇ　Ｏ　（　Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｓｐ
．Ａ　３　７δ０）と呼称される微生物がｉｉＩ記のｌ
Ｆ．ｆ性を有する新菌株で本発明の新抗生物質３７ｇｏ
物質を有利に生産するものであり、本発明方法に有効に
利用し得る微生物としで挙げられる。

また、ｒｉｉＪ記ストレノトミセス・エスピー・扁３７
ｇｏの自然的及び人工的変異株は勿論、ストレプトミセ
ス属に属する菌種・で、後述の新抗生物質３７ｇｏ物質
の生産能を有する微生物はすべて本発明方法において使
用することができる。

前記ストレプトミセス・エスピー・＆３７ｇθ（以下、
単に１３７ｇＯ株」という。）は、本発明者もＫよって
富山県射水郡大門町で採取した土壌試料中よシ発見され
た微生物であり、工業技術院微生物工業技術研究所に昭
和．！ｉｇ年７月２７日付で寄託され、その微生物受託
番号は、微工研菌１Ｍ第７／７／号である。

３７ｇθ株は次の蘭学的性質を廟する。

〔Ｉ〕　形態的特徴 ３７ｇθ株は、ストレプトミセス属に属し、スターチ無
機寒天培地、チロシン寒天培地、イースト麦芽寒天培地
、オートミール寒天培地上で良く生育し、豊富な気中菌
糸と螺旋状菌糸に多数の胞子を着生する。シュークロー
ス硝酸塩寒天培地及びグリセリン・アスパラギン寒天培
地上での発育は充分でなく、気中繭糸の着生も悪いが、
螺旋状菌糸と胞子の着生はみられる。しかし、グルコー
ス・アスパラギン寒天培地と栄養寒天培地での生育は不
良で、気中菌糸を生成せず、胞子の形成は認められない
。オートミール寒天培地、イースト麦芽寒天培地、スタ
ーチ無機塩寒天培地では、気中菌糸が豊富に着生したも
のの気中菌糸は白色ないし赤灰色を呈する。基底菌糸の
裏面は、一般に淡黄色ないし淡黄褐色である。気中菌糸
は直線状だが、胞子を着生する先端は、７〜７０回螺旋
状になっておシ、電子顕微鏡の所見では、胞子は円筒型
で、長さθ７〜／μ、巾θｌＩ〜０３μでおシ、とげ状
ｆ：崩し、数十個が螺旋状に連なっている。

チロシン寒天培地、ペプトン・イースト鉄寒天培地に生
育した本菌は、メラノイド色素を形成しない。炭素源の
軟化性試験では、し−アラビノース、Ｄ−キシロース、
Ｄ−グルコース、Ｄ−フラクトース、シュークロース、
Ｌ−イノシトール、ラフィノース、Ｄ−マンニトール上
ではよく生育するが、し−ラムノース上では生育しない
。スターチ無機塩寒天培地上で、スターｔを加水分解す
るが、ゼラチンは液化せず、脱脂乳は、わずかに凝固す
るが、ペプトン化はしない。・ 特許庁産業別審査基準に従い、各種培地を調製し、接種
後３週間を経過したものについて観察した結果を次に記
載する。なお色調の記載においてカッコ内の記号はディ
スクリグチイブ・カラー・ネイムズ・ディクショナリー
（Ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｖｅ　ＣｏｌｏｒＮａｍｅｓ　ｄ
ｉｃｔｉｏｎａｒｙ）第９版の色名記号に従ったもので
ある。

（１）７ユークロース・硝酸塩寒天培地化　育：やや不
良 気中菌糸の着生：殆んどなし 気中菌糸の色　：　ｓ２’ｌ　／／２　ｂａ（ｃｈａｒ
ｔｒｅｕｓｅ　ｔｉｎｔ）基底菌糸の色　：　／／／２
　ｈｂ（ｐａｓｔｅｌ　ｙｅｌｌｏｗ）可溶性色素　：
なし ■グルコース・アスパラギン寒天培地 化　育：不良 気中菌糸の着生：なし 気中菌糸の色　：不明 基底菌糸の色　：　／　／／、２ｈｂ（ｐａｓｔｅｌ　
ｙｅｌｌｏｗ）可溶性色素　；なし く３）グリセロール・アス）？ラギン寒天培士出生　育
：やや不良 気中菌糸の着生：殆んどなし 気中菌糸の色　：不明 基底菌糸の色　：　２ｄｂ＋、２ｃａ（ｉｖｏｒｙ＋ｃ
ｌｔｒｏｎ）可溶性色素　：なし く的スターチ無機塩寒天培地 生　育：良好 気中菌糸の着生　：豊富 気中菌糸の色　：　ａ−Ｈｅａ（ｗｈｉｔｅ−１−ｌｉ
ｇｈｔ　ａｐｒｉｃｏｔ）基底菌糸の色　：　３ｃａ＋
、２ｃａ（ｓｈｅｌｌ＋ｒｏｓｅ　ｂｅｉｇｅｉ可溶性
色累　：なし く勺チ゛ロジン寒天培地 生　育：良好 気中菌糸の着生二豊富 気中菌糸の色：　ａ＋３ｃａ（ｗｈｉｔｅ−１−ｓｈｅ
ｌｌ　）基底菌糸の色　：　／　／／、Ｚｆｂ＋３ｉｅ
（ｐａｓｔｅｌ　ｙｅｌ　ｌｏｗ＋ｃａｒｒｅｌ　）可
溶性色素　二方し ω）栄養寒天培地 生　育：不良 気中菌糸の着生：なし 気中菌糸の色：不明 基底菌糸の色　：　３ｃａ（ｓｈｅｌｌ）可溶性色素　
：なし く７）イースト麦芽寒天培地 生　育：良好 気中繭糸の着生；豊富 可溶性色素　：なし 伏）オートミール寒天培地 生　育；良好 気中菌糸の着生　：豊富 気中菌糸の色　：　ａ−Ｂｅｃ（ｗｈｉｔｅ＋ｄｕｓｔ
ｙ　ｐｅａｃｈ）（９）−”プトン・イースト鉄寒天培
地生　育：やや不良 気中菌糸の着生　：なし 気中菌糸の色　：不明 基底菌糸の色　：　／／７．２ｆｂ（ｐａｓｔｅｌ　ｙ
ｅｌｌｏｗ）可嬉性色素　：なし Ｃｕ１ｌ）炭素源の員化性（ｆリドハム・コ゛ットリー
プ寒天培地） 発育状況 ／　Ｌ−アンドノース　＋＋＋ −〇−キシロース　千十十 ３　Ｄ−グルコース　＋十干 ｌＩ　Ｄ−７ラクトース　＋十十 Ｓ　シュークロース　＋＋十 乙　蕾−イノシトール　＋十十 ７　Ｌ−ラムノース　− ｇ　ラフィノース　＋＋十 ９　Ｄ−マンニット　＋十十 ｎ　コントロール　− （発育状況：十十十非常によく発育する、十十良く発育
する、十発育する、 ±稍々発育する、−発育しない。） ｌ〕その他の生理的性質 ／　生育畠度範囲： 主適生育篇度−汐〜３０℃ ユ　ゼラチンの液化（グルコース・（プトンゼラチン培
地上）： 液化しない。

３　スターチの加水分解（スターチ寒天培地上）：加水
分解する。

ク　脱脂牛乳の凝固にノトン化： わずかに凝固するが、ベノトン化しない。

左　メラニン（）丘色素の生成（チロシン寒天培地及び
ペプトンイースト鉄寒天培地）： 色素の生成Ｖｉ認められない。

上記の諸性質全有するストレプトミセス属の菌種を野々
村氏妬よるツヤ−ナル・オプ・ファーメンティジョン・
テクノロジー３２巻λ号記載の放線菌１．Ｓ、Ｐ、グｓ
ｇ菌種の分類法の記載（ギイ・フォア・クラシイフィケ
イション・アンド・アイデンティフィケイション・オプ
・４ｌ３ｇスペシーズ・オグ・ザ・ストレプトミセス・
インクルーフ゛ツド・イン・１．Ｓ、Ｐ、）　（Ｋｅｙ
　ｆｏｒ　Ｃ１ａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄ　Ｉｄ
ｅｎｔｉｆｉｃａｔｌｏｎ　ｏｆ　ｌｌ５ｇ　５ｐｅｃ
ｉｅｓ　ｏｆ　５ｔｒｅｐｔｏ　−ｍｙｃｅｓ　１ｎｃ
ｌｕｄｅｄ　ｉｎ　１．　Ｓ、　Ｐ、　）によシ検索し
た。

その結果、気中菌糸が白色系ないし灰色系でメラニン様
色素と可溶性色素を生成せず、Ｌ−シムノース以外の糖
を資化し、気中菌糸が螺旋状となり、胞子洗とげ状物を
不するものとして、ストレグトミセスｄマラチテイカス
（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｍａｌａｃｈｌ　−ｔｉ
ｃｕｓＬストレプトミセス・スパルソダネス（Ｓｔｒｅ
ｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｓｐａｒｓｏｇｅｎｅｓ　）　、ス
トレプトミセス・パリアビリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃ
ｅｓ　ｖａｌｉａｂｉｌｉｓ　ｌ、ストレプトミセス・
ピリド−シアスタテイカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ
　ｖ　ｉｒ　ｉｄｏ　−ｄ　１ａｓｔａｔ　１ｃｕｓ　
）、ストレプトミセス・ウエラｘ　ンシス（Ｓｔｒｅｐ
ｔｏｍｙｃｅｓ　ｗｅｒｒａ　−ｅｎｓｉｓ）等を挙げ
ることができ、３７ｇθ株は、これらの菌種と類似する
が、糖料用の点で必ずしも一致せず、また抗生物質の生
産能において明らかに相違が認められるため、３７ｇ０
株は、ストレプトミセス属に属するＯｒ菌種とすること
が妥当であると結論された。

次に１本発明を実施するに当っては、ストレプトミセス
属に属する抗生物質３７ｇＱ物質生産菌を、抗生物質を
坐座する通常の方法で培養することができる。培養の形
態は、液体培養でも固体培養でもよく、工業的に有利Ｋ
ｊ′＠養するためには、前記生産菌の胞子暦濁液又ｔま
培賛液を培地妬接種し、通気攪拌培養を行なえはよい。

培地の栄養諒としては特に限定きれることはなく、微生
物の培養に通常用いられる炭素源、窒素源その他を培地
中忙含有させることができる。炭素源としてハ、澱粉、
ガキストリン、グリセリン、グルコース、シュークロー
ス、ガラクトース、イノシトール、マンニトールなどが
、また窒素源としては、ペグトン、大豆粉、肉エキス、
米ぬか、骸、尿ｉ、：＋−ンスティーノリカー、アンモ
ニウム塩、硝酸塩、その他の有機寸たけ無機の窒素化合
物が用いられる。その他、無機塩類、たとえば食塩、燐
酸塩類、カリウム、カルシウム、！ｌｉｊ鉛、マンガン
、鉄等の金属塩類等を適宜νこ添加してもよく、必要に
応じて消泡剤として、動、植、鉱物油等を添加してもよ
い。培養温度、培養時間等の培養条件は使用菌の発育に
ｉＭＬ、Ｌがも３７ｇθ物質の生産が最高となるような
条件が選ばれる。

たとえば、培地のｐＨはグ〜？、特に中性付近がよく、
培養の適温は、２ｊｔ０−３３℃程度がよい。しかし、
これらの培養組成物、培地の水素イオンｓ度、培養温度
、攪拌条件などの培養条件は使用する菌株のｓ類や、外
部の条件などに応じて好ましい結果が得られるように適
宜？Ａ節されるべきであることはいうまでもない。この
ようにして得られる培養物から、３７ｇθ物質を得るに
は代謝産物を採取するのに通常用いられる手段を適宜に
利用して採取し得る。たとえば、３７ｇ０物質と不純物
との溶解度差を利用する手段、イオン結合力の差を利用
する手段、吸着親和力の差を利用する手段、分子量の差
を利用する手段、有機溶剤と水との分配の差を利用する
手段のいずれも、それぞれ単独で、または組合わせて、
あるいは反復して使用される。

具体的には、３７ｇ０物質は、培養ｆ液にその大部分が
存在するが、そのイオン結合力の性質を利用してイオン
交換樹脂、例えば、ダウエックスＳＯ、ダウエックス／
、アンバーライト１Ｒ４５等で吸着し、希アンモニア水
で溶出することかできる。培養菌体中には約／／／θ以
下の３７ｇ０物質が存在するが、これは菌体をアンモニ
ア性の含水アセトン又は含水メタノールで抽出し、抽出
液を減圧濃縮して得られた水溶液を、培養ｌＪ液の場合
と同様にイオン交換４ｇＪ脂に吸着し、希アンモニア水
で溶出することにより分離することができる。

溶出液を減圧下に濃縮すると３７ｇ０物質が沈澱する。

沈澱を１取し、冷水で洗滌後乾燥すると３７ｇθ物質の
粗粉末が得られる。、このようにして得た３７ｇ０吻質
の粗粉末は夾雑する不純物を除く目的で、セファデック
スＧ−１０等を用いたグル１過法で精製することができ
る。用いる溶媒系ｉｃ、ｌ：シ不純物との分離状態が異
なシ、溶媒系の組合せで単一な３７ｇ０物質１に得るこ
とができる。

例えば、重炭酸アンモニウム水溶液で調輿したセファデ
ックスＧ−７０のカラムを用い、先ず、重炭酸アンモニ
ウム水溶液で浴出し、次いで水で溶出する。活性区分を
集め、減圧ａ縮し、凍結乾燥すると３７ｇθ物質の微褐
色の精製粉末を得ることができる。なお、溶媒として重
炭酸アンモニウム水浴液を使用した場合には３７ｇθ物
質はアンモニウム塩となるが、これを酢酸酸性で沈澱さ
せ、水で洗浄することによシ完全に遊離状態の３７　ｇ
　ｏ　ｔ＋勿質を得ることができる。

かくして得られた３７ｇ０物質の理化学的性質及び生物
学的性状は次のとおりである。

〔抗生物質３７　ｇＯ物質の理化学的性質及び生物学的
性状〕 （ハ元素分析； 炭素：　３！；、３０チ、水素＝３１５チ、窒素：ｌｌ
Ｉざ／チ（−分子量（質量分析による）： ／６７ （３）融点： ３ｓ０℃以上 （り比旋光度： 〔α〕　θ°（ｃ＝θｇ、　／Ｎ−Ｎａ０Ｈ）（５）紫
外線吸収スペクトル： 第１図のとおり。

λｍａｘ　ｎｍ　（Ｅ　”％） １ｃｍ ７００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７，０）中：　、２３１
１（／　／／ＩＩ　）１．２９θ（３グ、！ｉ） Ｏ／ＮＨα中　：　２ｓ２　（５４−２）、２７乙Ｒ（
３７グ） ０、／　Ｎ　ＮａＯＨ中　：２３θ肩（／θ０５）、λ
Ｓ６肩（３／２） 、２ｇ乙（３乙５） （６）赤外線吸収スペクトル：　（ＫＢｒ　Ｎ剤中）ｍ
２図のとおり、次の主な極太値を有する。

３３５０．３／３０．２９２０、／７０３、／乙乙θ、
／３！；０、／グｇθ、／３９２、／３乙汐、／３’ｌ
！；、　／シー、／２１０、／／ダニ、／／コム／θ９
０．１０３！；、　ｇＡ７、ｇ’ｌざ、７７０．７／２
．６３，２、！ｉｇθ、ｊ３５、！；Ｏｇ、　’１２０
ｃｍ　’（７）溶解性： 希アンモニア水、濃塩酸に溶ける。

水に離溶。他の有機溶媒に不溶。

促）呈色反応： ヨード蒸気、過マンガン酸カリ反応は陽性、ニンヒドリ
ン、アニリン水素フタレート反応は陰性である。

（９）塩基性、酸性、中性の区別： 酸性物質（本項の性質は遊離酸について示しである。） （１０）物質の形態： 微褐色結晶性粉末。

（／／）　Ｒｆ値：（薄層クロマトグラフィー）ブタノ
ール：酢酸：水Ｃｔｌ：／：２）　θ３０エタノール：
／Ｎアンモニア（！：３）　０７２ブタノール：メタノ
ール：水（４：／：ユ）　０２４７５％フェノール　θ
３／ ゾロノやノール：／Ｎアンモニア（５：３）　θ５．２
エタノール：／Ｎアンモニア（！；：３）　０４．２ブ
タノール：メタノール：水（ｌｌ：／：、２）　θ２１
Ｉ７Ｓチフェノール　θ４ｔＳ プロパツール：／Ｎ７ンモニア（、ｔ＋３）　θ３θア
セトン：水（／：／）　０グ３ （／Ｊｈｔ菌スペクトル ブイヨン寒天培地（細菌類）及びザブロー塞天培地（真
菌類）を用い、倍数希釈法にょっって生育阻止最小磯度
をめた結果を以下に示す。

カンジダ菌 カンジダ菌 石膏様白酢菌 ・　トリコフィトン・ルブラム　〉／θθ（Ｔｒｉｃｈ
ｏｐｈｙｔｏｎ　ｒｕｂｒｕｍ）狸紅色白解菌 ・スタフィロコッカス・アウレウス　コθｑｐ　＞ｉｏ
θ（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕＳ　、
２θ９Ｐ）黄色ブドウ球菌 ・エシェリキア・コリ （Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌ　ｉ　）　〉１０θ
大腸菌 （／３）毒性： マウス腹腔内投与による急性毒性ＬＤ５ｏ値は、５３ダ
／館である。

以上の３７ｇ０物質の理化学的性質及び生物学的性状を
既知の抗生物質と比較すると、全く類似する物質が見当
らないが、分子の大きさ、紫外部吸収スペクトルその他
の性質から強いて誉けると、プリン系の抗生’Ｖａ質が
挙けられる。プリン系の抗生物質としてｕｇ−アザグア
ニン（ｇ　−Ａｚａｇｕａｎ　ｉ　ｎｅ　）があるが、
このものはカンジダ菌に活性を有しない。さらに、３７
ｇ０物質の有する２９０ｎｍの特徴的な紫外線吸収はｇ
−アザグアニンには見られない。以上を考ｌは如入れて
３７ｇθ物質忙同−ないし類似する抗生物質は既知文献
上に全く見当らない。

よって、ここに３７ｇθ物質を新規抗生物質と結論した
。

本発明の３７ｇ０吻質は、後述の抗腫瘍活性試験（Ｉｎ
　ｖｉｔｒｏ及びＩｎ　ｖｉｖｏ　ｔｅｓｔ）　におい
て＼曖れた抗腫瘍７占性を示し、抗腫瘍剤として有用で
ある。以下、３７ｇθ物質を有効成分とする抗ＩＩＩＩ
Ｉ瘍剤について述べる。

本発明の抗腫瘍剤は、経口及び非経口投与のいずれも使
用ｉＪ能であり、経口投与する）局舎は、軟・硬カプセ
ル剤又Ｖｉ錠剤、顆粒剤、１ｌｉｌ１粒剤、散剤として
投与され、非経口投与する場合ｅま、注射１１す、点滴
剤及び固体状又は懸濁粘稠液として持続的な粘膜吸収が
維持できるように座薬のような剤型で投与され得る。

また、本発明の上動成分を製剤化するに当っては、削成
（表わされる化合物は常法に従い、皮下或いは静脈注射
用製剤とすることができる他、カプセル剤、錠剤、細粒
剤等の剤型に製剤化して経口用に供することができる。

本発明の有効成分の製剤化け、界面活性剤、賦形剤、滑
沢剤、佐剤、及び有効成分の性質を考慮して腸溶性製剤
とするために医薬的に許容しイヒる皮膜形成物質、コー
ティング助剤等食用いて適宜行うことができ、その具体
例を挙げれば、次のとおりである。

本発明の組成物の崩壊、溶出を良好ならしめるために１
界面活性剤、例えばアルコール、エステル類、ポリエチ
レングリコール誘導体、ソルビタンの脂肪酸エステル類
、硫酸化脂肪アルコール類等の／梅又はコ種以上を添加
することができる。

また、賦形剤として、例えば蔗糖、乳糖、デンプン、結
晶セルロース、マンニット、軽質無水珪酸、アルミン酸
マグネシウム、メタ珪酸アルミン酸マグネシウム、合成
珪酸アルミニウム、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウ
ム、リン酸水素カルシウム、カルボキシメチルセルロー
スカルシウム等の７種又は２種以上を組合せて添加する
ことができる。

滑沢剤としては、例えばステアリン酸マグネシウム、タ
ルク、硬化油等を／種又Ｖｉλ種以上添加することがで
き、また矯味剤及び矯臭剤として、食塩、サッカリン、
糖、マンニット、オレンジ油、カンゾウエキス、クエン
酸１．ブドウ糖、メントール、子−カリ油、リンゴ酸等
の甘味剤、香料、着色料、保存料等を含有させてもよい
。

懸濁剤、湿潤剤の如き佐剤としては、例えばココナツト
油、オリーブ油、ゴマ油、落下牛油、乳酸カルシウム、
ベニバナ油、大豆リン脂質等を含有させることができる
。

また、皮膜形成物質としては、セルロース、糖類等の炭
水化物誘導体として酢酸フタル酸セルロース（ＣＡＰ　
）、またアクリル酸系共重合体、二塩基酸モノエステル
類等のポリビニル１４休店してアクリル酸メチル・メタ
アクリル酸共重合体、メタアクリル酸メチル・メタアク
リル酸共重合体が挙げられる。

また、上記皮膜形成物質をコーティングするに際し、通
常使用されるコーティング助剤、例えば可塑剤の他、コ
ーティング操作時の薬剤相互の付着防止のための各種添
加剤を添加することによって皮膜形成剤の性質を改良し
た沙、コーティング操作をよシ容易ならしめることがで
きる。なお、有効成分を皮膜形成物質を用いてマイクロ
カプセル化してから賦形剤等と混合した剤型としても良
い。

特に代表的な剤型における配合比Ｑま下記の通シである
。

特に好ましい範囲 有効成分　θ／〜９０　爪針％　０３〜７５重量％賦形
剤／θ〜７９ｇ　ｌ　ｇ３〜デ９．ダＩ渭沢剤θ〜Ｓ０
　ｌ　θ〜２０〃 界面活性剤　θ　〜Ｓθ　Ｉ　θ　〜２０　’皮膜形成
物質　θ／〜夕０　〃　θ３〜２θ　〃特に好ましい賦
形剤は、乳糖、結晶セルロース、カルｙｌ？キシメチル
セルロースカルシウムである。

また、投与量は、対象腫瘍を不動に治療する眞十分な飢
であり、腫瘍の症状、投与経路、剤ｉｉｑなどによって
左右されるか、一般に、経口投与の場合、大人では７日
当り、約０００／〜コθｎｙ　／　ｋｇ体重（小人でけ
、θ０θ／〜１０ｍ９／＃体重）の範囲で、その上限は
好ましくけ約ｌ０ＩＫ／／Ｈ体軍、更に好ましくは約２
９／Ａｙ体重程度であシ、非経口投与の場合、その上限
は約、３ｍ９／に？体重程度であシ、好ましくは２　ｍ
ｙ　／　＃体■、史に好１しくは／ｍ９／ｋＷ体ｍが適
当である。

以下に、本発明を実施例、製剤イ９［１及び試験例によ
って具体的に説明する。

実施例 グルコースコＳ係、大豆粉θ３％、乾燥酵母０３％、硝
酸アルミニウムθダチ、炭ｌ′Ｉλカルシウム０３チ、
食塩０３％（滅菌前１）ＩＩ　７．２　）の組成から斤
る培地ｇ　ｍｅに、前記３’１ｇＯ株（微工研菌寄第７
／７／号）を接種して、ｉｉｇ時間１．２ｇ℃で振盪」
Ｂ養する。このｌ（ｒ、養液／　ｍｅを同１屯成の」＆
地／　００　ｍｅに接種し、／ｌ、　ｇ時間、２ｇ℃で
振数培養する。前記培地洗すン酸マグネシウムＯ３係を
加えた培地（滅菌前ｐＨ乙乙）Ｓｅを・含むジャーファ
ーメンタ−（アイラ醗酵槽Ｍ−，２０θ型；東京〕・Ｊ
！化製）に前８［；培養液を接種し、約２ｑ時曲１．２
ｇ℃で通気４′６拌培養を行う。培養条件はｆＩＪ分ろ
ｌの通気を行い、）び分ｇＳθ回転の攪拌を行う。培養
液（ｐｉｔ　Ａ、　０　）を冷却遠心機で毎分７５００
回転／θ分間遠心する。上清’１．７１をダウエックス
５ＯＶＪ−’Ａ２　（Ｈ型）のカラム（直径：ｌ＝Ｏｍ
ｍ、長さ：３．２θ朋）にかける。カラムを水洗後コ規
定のアンモニア水３ノで浴出する。溶出液を減圧濃縮し
約ＳθＯｍｌとし、希塩酸でｐｌｊを５−乙に調整する
。これをアンバー２イトＩＲ−１ｊのカラム（直径ニゲ
６龍、長さニゲθθｙｓｍ　）にかけ水洗後、／規定の
アンモニア水Ｊ／で溶出する。溶出液を減圧−ａａ　Ｌ
　、約７５　ｍｌとしたところで氷冷する。生じた沈澱
をＰ取し、冷水で洗滌後乾燥すると粉末ユＡ’ＺＩＩＩ
？が得られる。これをｇ、３　ｍｌの０１モル重炭酸ア
ンモニウム及び／　ｍｌの濃アンモニア水に溶かし、０
１モル重炭酸アンモニウムで調製したセファデックスＧ
−／θのカラム（直径：２ｇｍｍ、長さ＝７ｇＯ朋）に
かける。−まず、０１モルの重炭酸アンモニウム（フラ
クション黒／〜７０）で展開溶出を行った後、蒸留水で
展開溶出を行い、溶出液を６ｇずつの両分に分取する。

（７ラクシヨン１に７７〜／２０）。抗菌活性は７ラク
シヨン１６７３〜９Ｓの両分に溶出される。これを合せ
て濃縮し凍結乾燥して、３７ｇｏ物質のアンモニウム塩
の粉末／　ｇ　３．７　ｍｙを得る。伶られたアンモニ
ウムｔｉ　１１．ｔ　ｔｗを／脱走のアンモニア水３　
ｍｌ　Ｋ　浴かし、酢酸θ３＃＋ｌを滴下し、生じた沈
澱をｆ取し、水、エタノール、エーテルの順で洗浄後乾
燥すると、３７ｇθ物負の遊離酸３９．２ｍ９を得る。

製剤例／（注射、点滴剤） ３７ｇｏ物質！；　００　ｍｔｉを含有するように粉末
ブドウ糖５Ｉを加えてバイアル妬無菌的に分配し、密封
した上、窒素、ヘリウム等の不活性ガスを封入して冷＠
　Ｆ）ｒ　Ｋ保存する。使用前にθｇｓ％生理的食塩水
１０θ−を添加して静脈内注射剤とし、／日／θ〜／θ
Ｏｍｌを症状に応じて静脈内ｔＩ；射又は点滴で投与す
る。

製剤例２（＠剤） 以下の成分組成で大人用錠剤１０θ閏を調製した。

［Ａ） ３７ｇｏ物質　１０ｇ 乳　糖　９！９１Ｉｔｉ ヒドロキシノロビルセルロース　θ０６ｇステアリン酸
マグネシウム　０．２ｇ （Ｂ） 酢酸フタル酸セルロース　０６ｇ ヒドロキシグロビルメチルセルロースフタレート　θろ
Ｉ［Ａ）の成分をとシ、よく混合し、これを直接加圧す
るか、又はよく練合した後、押し出し型製粒機のスクリ
ーンを通して顆粒成形を行い、充分乾燥後、刀日圧して
錠剤を肖興した。

史に、必要に応じて成形した錠剤によく溶解した［８）
の基材を被覆して腸溶性錠剤とする。

製剤例３（カプセル剤） 以下の成分で大人用カプセル剤１００個を１１岡製した
。

ＣＡ） ３７ｇｏ物質　／θ　ｙ 乳　ｔａ　ユｑＵ ヒドロキシグロビルセルロース　ｏ、　ｏ　４ｔ、ｙヒ
ドロキシグロビルメチルセルロースンタレート　７ｇ上
記の［Ａ）成分をと９、よく混合した後、常法に従って
粒状に成形し、これをよく乾燥１−て篩別し、カプセル
用に適した顆粒剤とし、これをカプセルに充填してカプ
セル剤を調製した。更に必要に応じ、この顆粒剤を浮遊
流動させながら溶解した〔Ｂ〕の基材を被覆し、腸溶性
の顆粒剤として、これをカプセルに充填して腸溶性カプ
セル剤とする。

次に、３７ｇ０物質の抗腫瘍活性をｔａ認した試験例虻
ついて述べる。

試験例１ 〔吉日肉腫培養細胞に対する増ダ旧Ｘ目害作用〕３７ｇ
ｏ物質を、培養液〔罵血清を２０％添加したフィッシャ
ーの培地（Ｆｉｓｃｈｅｒｓ　ｍｅｄｌｕｍ）　（白水
製薬（株）〕に溶解し、これを渦高碕度（ム０μｊｑ／
ｍＡ　）とし、以下同じ培養液にてコ倍、グ倍稀釈液を
つくり、その／　ｍｅずつを７ｍ１．中に吉田肉ｎ’Ｒ
Ａ′ｌｌｌ胞／Ｘ１０５個を含む培養液／　ｍｅを加え
、３７℃、グｇ時間直立静止培養した。培養終了時のイ
１１１胞数を、コールタ−カウンター（ｚＢ１型）を用
いて仰Ｉ定し、培養後、検体投与群（ｔｒｅａｔｅｄ　
ｇｒｏｕｐ　：　Ｔ　）と対照群（ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇ
ｒｏｕｐ　：　Ｃ）の細胞数の比Ｔ／Ｃ×１０θよシ、
Ｓθチ増殖阻害濃度（ＩＣ，ｏ）を対数確率紙を用いて
めた。なお、培養に用いた吉田肉腫剖Ｕ胞は、呑竜ラッ
トで継代移植し、移植Ｓ〜乙日目の腹水から分離したも
のである。

この結果を第１表圧示す。

＊対照群に対してＰくθ０／で有意な差がある。

この結果より　Ｉｃ５ｏ値はｉ　５４／ｍｔであった。

試験例ａ 〔ｐ３ｇｇ＋ａがんマウスに対する延命効果〕ＢＤＦ、
維マウス（体重平均２７ｇ）の腹腔内ＫＤＢＡ／コマウ
スで継代移植したＰ３ｇｇ白血病細胞／×７０６個を移
植し、７日後よシ／日／回連続９日間、３７ざ０物賀を
０５％ＣＭＣ（カルボキシメチルセルユース）生理曳塩
水に懸濁して腹腔内投与した。対照群には０５乃ＣＭＣ
生理食塩水を投力し／こ。検体投与群、対照群とも／群
Ｓ匹のマウスを使用した。。Ｐ　３　、＆　ｇ細胞の移
植後、３θ日間動物を観、察し、検体投与群の生存日数
の中間値（ｍｅｄｉａｎ　５ｕｒｖｉｖａｌ　ｔｉｍｅ
）から、次式に従って廷命率（ＩＬｓ’）をめた。

第２表 この結果、３７ｇθ物負は１ｌＳダ／館／日以上の濃度
による腹腔内投与で顕著な延命効果が認められた。

【図面の簡単な説明】

第１図は、３７ざθ物質の紫外線吸収スペクトルを示す
図面であシ、第β図は、３７ｇθ物質の赤外線吸収スペ
クトルを示す図面である。 特許出願人　理化学研究所 同　上　株式会社池田模範堂 １００「 ４ｔＪＪＪ　ｊｔｔＬＩ　ｊｌＬｌｌＪ　ｊ１５ｔＪＬ
Ｊ　ＩＡＵＵ　ＩＵ力　１沃Ｌ］ＢＵ０　１’／ＩＪｔ
Ｊ　１５ＬＸＪ　Ｉ第２図 手続補正書 ５９．１２．−７ 昭和　年　月　日 １、事件の表示　昭和５８年特許願第１７７６２９号３
、補正をする者 事件との関係　出願人 名称　（６７９）理化学研究所 同　株式会社　池　ＩＵ３　模　範　堂４、代理人 ５、補正命令の口側　自　発 （１〕　特許請求の範囲を別紙のとおり訂正する。 （２）　明細書第２１＋Ｔ第［ｊ行〜下から第２行の’
　＋ＥＪ　＋の３７８０物質の−・結論した。′を次の
８ダり言Ｉ正する。 ｒ　３７８０物質の１・記ｐＪｊ化学的性質から、３７
８０物質は、次のＧｉｉ造式で表されるクアニ’ｙ−７
ＮオキシＩ・であると結論された。 ↑）５乍１ｉｉｔｉ＞ｋの範囲 （１）　次式で表される抗生物質３７１１０物質。 １ （２）　ストレプトミセス（ＳＬｒｃｐｌ：ｏｍｙｃ＋
！ｓ　）属に属する抗（１゛物質３７８０物質生産菌を
培養し、そのＪｊｋ養物質から抗生物：ｆ〔：ｌ１７８
０物質を分：；ｉＩ［、採取する。ことを’ｌｌｊ徴と
する抗ノー：物質３７８０物質の製造法５゜（３）　ス
トレプトミセ叉屈に属する抗生物質３７８０物質’Ｉ　
産菌が、ストレプトミセス・１又ビー・Ｎ。 ３７８０　（ＳＬｒｃ１＋ＬｏｍｙｃｅＳＳｐ、Ｎｏ、
３７８０　）である特許請求の範囲第（２）項記載の製
造法。 （４）　抗生物質３７ｆｌＯ’以下をイＪ効成分とし−
Ｃ含有する、−とを’ｔ４Ｉ徴とずろ抗腫瘍剤。 （５）　弁径１１投＋ｊノ［＆態による特許請求の範囲
第（４）項記載の抗腫瘍剤。 （６）　経口投ｌＥ形態にょる特言′１請求の範囲第（
４）　３Ｊｉ記載の抗腫；易剤。 手続補正書 。６□、４１＝　５’９．．２．ＩＣ＋３１、事件の表
示　昭和５８年特許Ｉ第１７７　［ｉ　２９号３、補正
をする者 事件上の関係　出願人 名称　（６７４１）理化学研究所 ４、代理人 ５、袖ＩＦ命令の日イＮ１　自　発 （１）特許請求の範囲を別紙のとおり訂正する。 （２）明細糊を次のとおり訂正する。 特許請求の範囲 ｌ、　下記の理化学的性質及び生物学的性質を有するこ
とを特徴とする新抗生物質３７８　ｌｌ物質、。 （１）元素分析 炭　素　：　３５．５０％　水　素　：１．１５％窒　
素　４１．８１％ （２）分子率（質微分Ｍｉによる） ６７ （３）融　点 ３５０ｒ：）：ノーに （４）比旋光度 し　α　］　０　”　（［：＝（］、５　、　ｌＮ−Ｎ
ａ１月Ｄ（５）紫外線吸収スペクトル １戸 １［］ＯｍＭ　リン酸緩衝液（ｐＨ７、（））中：２３
４　（１１１４）２９０　（３４５） ０．１Ｎ１１α中　：２５２（５４２）２７Ｇ肩（：ｌ
７４） ０、］Ｎ南ａ旧中　°２３０肩（１（ｌ１５）２５６肩
（３１２） ２８６（３Ｇ５） （６）赤外線吸収スペクトル （に０「錠剤中のトな極大値） ３３５０．３　］　：ｉ　０．２　！＋　２　Ｆ＋、ｌ
　７　［１５，１６６０，１５５［１，１４８Ｄ、ｌ　
：１　！＋　２、ｌ　：ｌ　ｆｉ　５．１３４５．１２
６２．１２Ｈ］、１１４２．１１２２、Ｉ（１！１０．
１０３５．８６７．８４Ｂ　、７７（１，７１２、ｆｉ
：１２　．５８（１，５３５，５（１８，４２（ｌｒ二
１ｎ−１（７）溶解性 希す′ンモニーノ′水、濃塩酸に溶けろ、。 水に離溶、池の有機溶媒に不溶。 （８〕呈色反応 ヨード蒸気、過マンガン酸カリ反応は陽性、。 ニンヒドリン、’Ｊ”　ｒ−リン水−素フタレート反応
は陰性である１゜ （９）塩基性、酸性、中性の区別 酸（ｌｌ物質 ＯＱ物質の形態 微褐色結晶性粉末 （団抗閑スペクトル カンジグ・アルビカンス菌に対し、生育阻害活性を示す
。 ２、　ストレプトミセス（Ｓｌ、ｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ
）属に属する抗生物質３７８０物質生産菌を培養し、そ
の培養物から新抗生物質３７　＋１０物質を分ｉｌｌ、
採取することを肪ｉ’ｌｔ、　、ｕする新抗生物質３７
８　Ｆ＋物質の製造法。 ３、　ストレプトミセス属に属する抗４４．物質：Ｉ　
７８［１物質生産菌が、ストレプトミセス・エスピー・
Ｎ。 ３７８０（Ｓｔｒｅｐｌ：ｏｍｙｃｅｓ　ｓｐ、Ｎｏ、
３７８０）　である特、＝Ｑ請求の範囲第２項記載の製
造法。 ４　抗生物質３７８０物質を有効成分とし−Ｃ含イｊす
ることを動機とする抗１挿瘍剤。 ５、　弁径口授！ｉｊ［＆態による′１！ｆ許話求の範
囲第４項記載の抗腫瘍剤。 ６、　経口投与形態による特許請求のＦｌ（ｊ間第４項
記載の抗腫瘍剤。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 ｌ　下記の理化学的性質及び生物学的性質を有すること
   を特徴とする新抗生物質３７ｇθ物質。 （１）元素分析： 炭素＝３ふ５０％　水素：　３．　／　５％窒素：ｌｌ
   １ｇ／チ （−分子量（質量分析による）： ／６７ ■融点： ３８Ｏ℃以上 （４）比旋光度：〔α〕２０θ０（Ｃ＝θ！；、　／Ｎ
   −Ｎａ０Ｈ）σ）紫外線吸収スペクトル： λｍａｘ　ｎｍ　（Ｅ　１％） Ｃｒｎ ７００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ２θ）中：　２３１Ｌｔ
   （／／／ＩＩ）コ９０　（３４’５） θ／ＮＨＣ／　中：２！ｆ；２＜Ｓ’１２）、２７Ａ７
   Ｆ！（３７４’） θ／　Ｎ　Ｎａ０ｌ−１中　：　、２３０肩（／θ０５
   ）６２５４肩（３／２１ ．２Ｓ乙（３４！；＞ （６）赤外線吸収スペクトル （にＢｒ錠剤中の主な極大値） ３３Ｓ０．３八？０．咥−θ、／７０！；、／乙乙０．
   １ｓｓｏ、／’Ｉｇθ、／３９コ、／３６．！；、　／
   ３４ｔ３．　／コ乙ム／コ１０、／／ｑλ／１．２．２
   ．１０９０．１０３！；、ｇｌ、７、ざグｇ１７７θ、
   ７／λ、／、３コ、ｓｇθ、Ｓ３Ｓ、ｓｏｇ、ｑス０−
   −１（′７）溶解性 希アンモニア水、濃塩酸に溶ける。 水に難溶、他の有機溶媒に不溶。 ＜ｇ＞呈色反応： ヨード蒸気、過マンガン酸カリ反応は陽性。 ニンヒドリン、アニリン水素フタレート反応は陰性であ
   る。 ＜９）塩基性、酸性、中性の区別： 酸性物質 （１０）物質の形態： 微褐色結晶性粉末 （／ハ抗菌スペクトル： カンアイダ・アルビカンス酌に対し、生育阻害活性を示
   す。 、２　ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｃｍｙｃｅｓ　
   ）属に属する抗生物質３７ｇｏ物質生産菌を培養し、そ
   の培養物から新抗生物質３７ｇｏ物質を分離、採取する
   ことを特徴とする新抗生物ｔｐ３ｑｇｏ物質の製造法。 ３　ストレプトミセス属に属する抗生物質３７ｇθ物質
   生産菌が、ストレプトミセス・エスピー・＆３７ｇθｆ
   ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｓｐ、Ａ　３７　ｇθ）で
   ある特許請求の範囲第コ項記載の製造法。 グ　抗生物質３７ｇθ物質を有効成分として含有するこ
   とを特徴とする抗腫瘍剤。 Ｓ　非経口投与形態による特許請求の１ｌｉｉ）囲第ｙ
   項記載の抗腫瘍剤。 ６　経口投与形態による特許請求の範囲第１項記載の抗
   腫瘍剤。