JPS6049199B2 - α−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フエニルアラニン低級アルキルエステルの精製法 - Google Patents
α−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フエニルアラニン低級アルキルエステルの精製法Info
- Publication number
- JPS6049199B2 JPS6049199B2 JP54043274A JP4327479A JPS6049199B2 JP S6049199 B2 JPS6049199 B2 JP S6049199B2 JP 54043274 A JP54043274 A JP 54043274A JP 4327479 A JP4327479 A JP 4327479A JP S6049199 B2 JPS6049199 B2 JP S6049199B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- dkp
- apm
- solution
- anion exchange
- aspartyl
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/06—Dipeptides
- C07K5/06104—Dipeptides with the first amino acid being acidic
- C07K5/06113—Asp- or Asn-amino acid
- C07K5/06121—Asp- or Asn-amino acid the second amino acid being aromatic or cycloaliphatic
- C07K5/0613—Aspartame
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/801—Peptide sweetners
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はα上−アスパルチルーＬ−フェニルアラニン低
級アルキルエステル（以下α−ＡＰＥと略す）を精製す
る方法に関する。
級アルキルエステル（以下α−ＡＰＥと略す）を精製す
る方法に関する。
α−ＭＴ）特にα上−アスパルチルーＬーフェニルアラ
ニンメチルエステル（以下α−ＡＰＭと略す）は強い蔗
糖様の甘味を有し、新しい甘味剤として注目されている
物質てある。
ニンメチルエステル（以下α−ＡＰＭと略す）は強い蔗
糖様の甘味を有し、新しい甘味剤として注目されている
物質てある。
α−ＡＰＥの合成法としては数多くの方法が提案されて
いる。たとえばアスパラギン酸無水物の強酸付加塩とＬ
−フェニルアラニンメチルエステルの直接結合して製造
する、方法がある。この様な方法では生成するα−Ｎ王
ともう一分子のアスパラギン酸が結合して生成するトリ
ペプチドエステル及びそのエステル基が加水分解された
トリペプチド、更にα−ＮΨが加水分解されて生じたα
上−アスパルチルーＬ−フェニルアラニン（以下α一佃
と略す）、あるいはα−ＡＰＥが環化して生ずるジケト
ピペラジン誘導体（以下ＤＫＰと略す）力唱１生してく
ることは避けられない。α−Ｍ王の合成法としては、Ｎ
−保護上一アスパラギン酸とＬ−フェニルアラニン低級
アルノキルエステルを酵素により縮合させ、その後保護
基を脱離させてα−ＡＰＥを得る方法も知られている。
いる。たとえばアスパラギン酸無水物の強酸付加塩とＬ
−フェニルアラニンメチルエステルの直接結合して製造
する、方法がある。この様な方法では生成するα−Ｎ王
ともう一分子のアスパラギン酸が結合して生成するトリ
ペプチドエステル及びそのエステル基が加水分解された
トリペプチド、更にα−ＮΨが加水分解されて生じたα
上−アスパルチルーＬ−フェニルアラニン（以下α一佃
と略す）、あるいはα−ＡＰＥが環化して生ずるジケト
ピペラジン誘導体（以下ＤＫＰと略す）力唱１生してく
ることは避けられない。α−Ｍ王の合成法としては、Ｎ
−保護上一アスパラギン酸とＬ−フェニルアラニン低級
アルノキルエステルを酵素により縮合させ、その後保護
基を脱離させてα−ＡＰＥを得る方法も知られている。
この方法の場合は副生物は比較的少ないが、α−ＡＰと
ＤＫＰの副生を完全に防ぐことは非常に困難である。α
−ＭＴを分離精製する方法としては、晶析等による方法
が考えられるが、これらの副生物は化学構造がα−ＡＰ
Ｅと類似しているため混晶を形成する場合もあり、この
様な方法では除去が困難であるといわれている。
ＤＫＰの副生を完全に防ぐことは非常に困難である。α
−ＭＴを分離精製する方法としては、晶析等による方法
が考えられるが、これらの副生物は化学構造がα−ＡＰ
Ｅと類似しているため混晶を形成する場合もあり、この
様な方法では除去が困難であるといわれている。
これらの副生物を除くため特定の型の陰イオン交換樹脂
を用いることは知られている（特公昭５２−３５６６０
）。
を用いることは知られている（特公昭５２−３５６６０
）。
即ちこれらの副生物を水性溶媒中でアニオン交換樹脂の
酢酸・ぎ酸塩形と接触させて、これらを選択的に吸着除
去する方法である。このとき有機付加塩の形以外の形の
アニオン交換樹脂を用いると原料ジペプチドエステル、
即ちα一Ｍ上はかえつて不純となり目的とする精製は不
可能であるとされている。本発明者らは陰イオン交換樹
脂によるα−ＭＴの精製についてさらに深く研究した結
果、有機弱酸付加塩形以外では不可能とされていた陰イ
オン交換樹脂によるα−ＭＴの精製を、Ｃｌ−型陰イオ
ン交換樹脂を用いることにより極めて効果的に行うこと
がてきることを見出して本発明に到達した。
酢酸・ぎ酸塩形と接触させて、これらを選択的に吸着除
去する方法である。このとき有機付加塩の形以外の形の
アニオン交換樹脂を用いると原料ジペプチドエステル、
即ちα一Ｍ上はかえつて不純となり目的とする精製は不
可能であるとされている。本発明者らは陰イオン交換樹
脂によるα−ＭＴの精製についてさらに深く研究した結
果、有機弱酸付加塩形以外では不可能とされていた陰イ
オン交換樹脂によるα−ＭＴの精製を、Ｃｌ−型陰イオ
ン交換樹脂を用いることにより極めて効果的に行うこと
がてきることを見出して本発明に到達した。
即ち本発明は夾雑物を含むα−ＡＰＥを水性溶媒中てＣ
１一型のアニオン交換樹脂と接触させ、夾雑物をこのア
ニオン交換樹脂に吸着させて除去することを特徴とする
α−Ｎ生の精製法を提供するものてある。
１一型のアニオン交換樹脂と接触させ、夾雑物をこのア
ニオン交換樹脂に吸着させて除去することを特徴とする
α−Ｎ生の精製法を提供するものてある。
本発明の方法では夾雑物を含むα−ＡＰＥとして、前述
した酵素を用いる方法で得られた粗α−Ｍ重を用いたと
き、最も効果的な精製を行うこ．とができる。
した酵素を用いる方法で得られた粗α−Ｍ重を用いたと
き、最も効果的な精製を行うこ．とができる。
この方法で得られるα−Ｎ事は、前記の様な通常の化学
的製造法によつて得たものと異り、不純物としては主と
してα−ＡＰ（５ＤＫＰを含んており、ほかに多少の原
料由来のものを含むに過ぎなこい。
的製造法によつて得たものと異り、不純物としては主と
してα−ＡＰ（５ＤＫＰを含んており、ほかに多少の原
料由来のものを含むに過ぎなこい。
従つてこの様な方法で得られたα−ＡＰＥについてはα
−？とＤＫＰを効果的に除去することが特に重要である
。本発明の方法は勿論通常の化学的方法で得た粗α−Ａ
ＰＥの精製に対しても充分効果的に適用で４きる。
−？とＤＫＰを効果的に除去することが特に重要である
。本発明の方法は勿論通常の化学的方法で得た粗α−Ａ
ＰＥの精製に対しても充分効果的に適用で４きる。
本発明の方法でα−ＡＰおよびＤＫＰを含むα−ＭＴを
水性溶媒中でＣｌ一型アニオン交換樹脂と接触させると
、樹脂はα−ＭＴを全く吸着しないがα一書と■１を吸
着する。
水性溶媒中でＣｌ一型アニオン交換樹脂と接触させると
、樹脂はα−ＭＴを全く吸着しないがα一書と■１を吸
着する。
本発明に使用される樹脂はＣ１一型のアニオン交換樹脂
であれば特に制限はないが強塩基性のものが特に好まし
い。
であれば特に制限はないが強塩基性のものが特に好まし
い。
本発明で使用される水性溶媒は水又は水に可溶で不活性
な有機溶媒例えばメタノール、エタノール、プロパノー
ル、アセトン、メチルエチルケトン、テトラヒドロフラ
ン、ジオキサン、エチレングリコール、ジメチルホルム
アミドなどと水とのフ混合溶媒である。
な有機溶媒例えばメタノール、エタノール、プロパノー
ル、アセトン、メチルエチルケトン、テトラヒドロフラ
ン、ジオキサン、エチレングリコール、ジメチルホルム
アミドなどと水とのフ混合溶媒である。
アニオン交換樹脂と不純物を含むα−ＡＰＥ溶液との接
触は通常の方法で行つてよい。
触は通常の方法で行つてよい。
例えば樹脂を充填したカラムに液を貫流させるか、ある
いは容器内で両者を攪拌又は振とうさせて接触させ門れ
ばよい。接触の際の温度は不純物の吸着にほとんど影響
がないが、高い温度ではα−ＡＰＥの安定性に問題があ
るため通常０〜７０℃付近が選択される。
いは容器内で両者を攪拌又は振とうさせて接触させ門れ
ばよい。接触の際の温度は不純物の吸着にほとんど影響
がないが、高い温度ではα−ＡＰＥの安定性に問題があ
るため通常０〜７０℃付近が選択される。
Ｃ１型のアニオン交換樹脂で処理した水性溶液・からの
純粋なα−ＭＴの回収は、慣用の方法例えば通常の晶析
法で行うことができる。例えば比較的稀薄な溶液を処理
した場合は、溶液を濃縮して冷却することにより、また
比較的濃い溶液を加温下に処理した場合は冷却するだけ
でα−Ｎ疋が回収される。前述した有機弱酸塩型のアニ
オン交換樹脂を用いる方法では吸着された不純物を脱着
して樹脂を再使用するためには、有機弱酸の解離度が小
さいので比較的高濃度の有機弱酸又はその塩をかなり多
量に用いる必要があり、これを避けようとすると一旦ア
ニオン交換樹脂を０Ｈ一型等に変換したのち有機弱酸塩
型とする必要があつた。
純粋なα−ＭＴの回収は、慣用の方法例えば通常の晶析
法で行うことができる。例えば比較的稀薄な溶液を処理
した場合は、溶液を濃縮して冷却することにより、また
比較的濃い溶液を加温下に処理した場合は冷却するだけ
でα−Ｎ疋が回収される。前述した有機弱酸塩型のアニ
オン交換樹脂を用いる方法では吸着された不純物を脱着
して樹脂を再使用するためには、有機弱酸の解離度が小
さいので比較的高濃度の有機弱酸又はその塩をかなり多
量に用いる必要があり、これを避けようとすると一旦ア
ニオン交換樹脂を０Ｈ一型等に変換したのち有機弱酸塩
型とする必要があつた。
本発明の方法で使用したＣｌ型のアニオン交換樹脂は塩
酸、食塩水等の塩素イオンを含む溶液で容易に再生する
ことができる。
酸、食塩水等の塩素イオンを含む溶液で容易に再生する
ことができる。
また前者の方法では処理したα−ＡＰＥ溶液中へイオン
交換によつてα−ＭＴとより親和性の大きな有機酸イオ
ンが入つてくるが、本発明の方法では晶析等の際に容易
に除去される塩素イオンが入るに過ぎず、後のα−Ｍ重
の回収がより容易である。
交換によつてα−ＭＴとより親和性の大きな有機酸イオ
ンが入つてくるが、本発明の方法では晶析等の際に容易
に除去される塩素イオンが入るに過ぎず、後のα−Ｍ重
の回収がより容易である。
更にまた本発明の方法ては有機酸やその塩が系内に入る
ことがないので廃液等の処理がより容易である。
ことがないので廃液等の処理がより容易である。
以上述べたことから明らかな様に、本発明によれば簡単
な操作でα−ＡＰＥ中の不純物、特にＤＫＰおよびα一
書を選択的に容易に除くことができる。
な操作でα−ＡＰＥ中の不純物、特にＤＫＰおよびα一
書を選択的に容易に除くことができる。
以下実施例により本発明をさらに詳しく説明する。
なお実施例における分析は高速液体クロマトグラフィで
定着した。
定着した。
測定条件を以下に示す。装置：α−．ＡＰＭにっいては
ＴＳＫＧＥＬ？−１７０（商標）、（５μ）（内径７．
５順×２０ｃＴｎ）をα 一ＡＰ，．ＤＫＰについては
ＴＳＫＧＥＬＩＥＸ−２１０、（商標）、（５μ）（内
径４．０７７！１１７！×１０ｃｍ） と同田−１７０
（５ｐ）（内径７．５？×４０ｃｍ） を使用溶離液：
酢酸ナトリウム水溶液流速：０．９ｍ１／分測定温度：
２５゜Ｃ検出器：Ｕ■ディテクターＵＶＩＤＥＣ−■（
日本分 光株式会社製）測定波長：２５６ｎｍ 実施例１ α−．ＡＰＭ２ＯＯｍｇ及びＤＫＰ２Ｏｍ９を水５０ｍ
１に溶解し処理液を調製した。
ＴＳＫＧＥＬ？−１７０（商標）、（５μ）（内径７．
５順×２０ｃＴｎ）をα 一ＡＰ，．ＤＫＰについては
ＴＳＫＧＥＬＩＥＸ−２１０、（商標）、（５μ）（内
径４．０７７！１１７！×１０ｃｍ） と同田−１７０
（５ｐ）（内径７．５？×４０ｃｍ） を使用溶離液：
酢酸ナトリウム水溶液流速：０．９ｍ１／分測定温度：
２５゜Ｃ検出器：Ｕ■ディテクターＵＶＩＤＥＣ−■（
日本分 光株式会社製）測定波長：２５６ｎｍ 実施例１ α−．ＡＰＭ２ＯＯｍｇ及びＤＫＰ２Ｏｍ９を水５０ｍ
１に溶解し処理液を調製した。
この溶液はＤＫＰ９．ｌ％を含むα−ＡＦ）Ｍ２２Ｏｍ
ｇを溶解した液に相当する。この溶液にＣ１一型の強塩
基性アニオン交換樹脂（Ａｍｂｅ一ＲｉｔｅＩＲＡ−４
１０、商標）２．０ｑ（乾燥）を加え、３０′Ｃでマグ
ネチツクスターラーで２吟間攪拌した。反応液をろ過し
樹脂を水２０ｍＬで洗浄した後ろ洗液を高速液体クロマ
トグラフィにより分析し、含まれるα−ＡＰＭおよびＤ
ＫＰを定量したところ、ろ洗液中には１８７ｍｇのα−
ＡＰＭおよび０．７０ｍｇのＤＫＰが含まれていること
がわかつた。α−．ＡＰＭとＤＫＰの合量に対するＤＫ
Ｐの含有率は０．３７％で、α−ＡＰＭの回収率は９３
．５％であつた。実施例２α−ＡＰＭ４ＯＯｍ９、ＤＫ
Ｐ２Ｏｍｇおよびα−ＡＰ２Ｏｍ９を水１００ｍ．Ｌに
溶解し処理液を得た。
ｇを溶解した液に相当する。この溶液にＣ１一型の強塩
基性アニオン交換樹脂（Ａｍｂｅ一ＲｉｔｅＩＲＡ−４
１０、商標）２．０ｑ（乾燥）を加え、３０′Ｃでマグ
ネチツクスターラーで２吟間攪拌した。反応液をろ過し
樹脂を水２０ｍＬで洗浄した後ろ洗液を高速液体クロマ
トグラフィにより分析し、含まれるα−ＡＰＭおよびＤ
ＫＰを定量したところ、ろ洗液中には１８７ｍｇのα−
ＡＰＭおよび０．７０ｍｇのＤＫＰが含まれていること
がわかつた。α−．ＡＰＭとＤＫＰの合量に対するＤＫ
Ｐの含有率は０．３７％で、α−ＡＰＭの回収率は９３
．５％であつた。実施例２α−ＡＰＭ４ＯＯｍ９、ＤＫ
Ｐ２Ｏｍｇおよびα−ＡＰ２Ｏｍ９を水１００ｍ．Ｌに
溶解し処理液を得た。
この溶液はＤＫＰ４．５％およびα−ＡＰ４．５％を含
むα−ＡＰＭを溶解した液に相当する。この溶液にＣｌ
一型の強塩基性アニオン交換樹脂（顛曲ＲｌｔｅＩＲＡ
−９００Ｎ商標）４．０ｙ（乾燥）を加え、３０′Ｃで
２紛間インキュベーター中で振とうした。反応液をろ過
し樹脂を水５０ｍ１て洗浄しろ洗液について前述の分析
法により定量したところ、ろ洗液中にはα一，ＡＰＭ３
９８ｍ９、ＤＫＰｌ．ｌｍｇおよびα−ＡＰｌ．４ｍｇ
が含まれていることがわかつた。α−ＡＰＭ．．ＤＫＰ
およびα一茫の合量に対するＤＫＰおよびα−ＡＰの含
有率はそれぞれ０．２７％および０．３５％てα−ＡＰ
Ｍの回収率は９９．５％であつた。実施例３ 実施例２の処理液と同一組成の処理液を調製した。
むα−ＡＰＭを溶解した液に相当する。この溶液にＣｌ
一型の強塩基性アニオン交換樹脂（顛曲ＲｌｔｅＩＲＡ
−９００Ｎ商標）４．０ｙ（乾燥）を加え、３０′Ｃで
２紛間インキュベーター中で振とうした。反応液をろ過
し樹脂を水５０ｍ１て洗浄しろ洗液について前述の分析
法により定量したところ、ろ洗液中にはα一，ＡＰＭ３
９８ｍ９、ＤＫＰｌ．ｌｍｇおよびα−ＡＰｌ．４ｍｇ
が含まれていることがわかつた。α−ＡＰＭ．．ＤＫＰ
およびα一茫の合量に対するＤＫＰおよびα−ＡＰの含
有率はそれぞれ０．２７％および０．３５％てα−ＡＰ
Ｍの回収率は９９．５％であつた。実施例３ 実施例２の処理液と同一組成の処理液を調製した。
これにＣ１型のアニオン交換樹脂（Ｎ計ビＩｔｅＩＲＡ
−４１０１商標）４．０ｙ（乾燥）を加え、以下実施例
２と同様の操作を行つた。分析結果よりろ洗液中に含ま
れるα−ＡＰＭは３８３Ｔ！Ｌ９、またＤＫＰは１．０
ｍｇであつた。α一茫は全く見出されなかつた。α−Ａ
ＰＭとＤＫＰの合量に対するＤＫＰの含有率は０．２６
％であり、α−ＡＰＭの回収率は９５．８％であつた。
実施例４ α−ＡＰＭ４ＯＯｍ９、ＤＫＰ４ＯＴｆＬ９およびα−
ＡＰ４ＯＷＬ９を水１００ｍｔに溶解し処理液を調製し
た。
−４１０１商標）４．０ｙ（乾燥）を加え、以下実施例
２と同様の操作を行つた。分析結果よりろ洗液中に含ま
れるα−ＡＰＭは３８３Ｔ！Ｌ９、またＤＫＰは１．０
ｍｇであつた。α一茫は全く見出されなかつた。α−Ａ
ＰＭとＤＫＰの合量に対するＤＫＰの含有率は０．２６
％であり、α−ＡＰＭの回収率は９５．８％であつた。
実施例４ α−ＡＰＭ４ＯＯｍ９、ＤＫＰ４ＯＴｆＬ９およびα−
ＡＰ４ＯＷＬ９を水１００ｍｔに溶解し処理液を調製し
た。
この溶液はＤＫＰおよびα−ＡＰをそれぞれ８．３３％
含むα−ＡＰＭを溶解した液に相当する。これにＣ１一
型の強塩基性アニオン交換樹脂（ＡｍｂｅｒｉｔｅＩＲ
Ａ一４１０、商標）４．０ｙ（乾燥）を加え実施例２と
同様の操作を行なつた。分析結果よりろ洗液中に含まれ
るα−ＡＰＭは４００ｍｇ、ＤＫＰは１．８ｍｇ、また
α一茫は２．３ｍｇてあつた。α−ＡＰＭ．．ＤＫＰお
ょび。一沖の合量に対するＤＫＰおよびα−ＡＰの含有
率はそれぞれ０．４５％および０．５７％であり、α−
ＡＰＭの回収は完全であつた。実施例５ ＣＩ一型の強塩基性アニオン交換樹脂 ノ（Ｎｍｌだ１ｔｅＩＲＡ−４１０、商標）１０ｙ（乾
燥）を内径１２閘の円筒形カラムに充填した（体積１８
．３ｍ１）。
含むα−ＡＰＭを溶解した液に相当する。これにＣ１一
型の強塩基性アニオン交換樹脂（ＡｍｂｅｒｉｔｅＩＲ
Ａ一４１０、商標）４．０ｙ（乾燥）を加え実施例２と
同様の操作を行なつた。分析結果よりろ洗液中に含まれ
るα−ＡＰＭは４００ｍｇ、ＤＫＰは１．８ｍｇ、また
α一茫は２．３ｍｇてあつた。α−ＡＰＭ．．ＤＫＰお
ょび。一沖の合量に対するＤＫＰおよびα−ＡＰの含有
率はそれぞれ０．４５％および０．５７％であり、α−
ＡＰＭの回収は完全であつた。実施例５ ＣＩ一型の強塩基性アニオン交換樹脂 ノ（Ｎｍｌだ１ｔｅＩＲＡ−４１０、商標）１０ｙ（乾
燥）を内径１２閘の円筒形カラムに充填した（体積１８
．３ｍ１）。
α−／ＳＪ）Ｍ５．Ｏｙ，．ＤＫＰｌＯＯＴｎｇおよび
α−ＡＰｌＯＯｍｇを水４００ｍＬに溶解し処理液を調
製した。この溶液はＤＫＰおよびα−ＡＰをそれぞれ１
．９％含７むα−．ＡＰＭを溶解した液に相当する。前
記の樹脂筒に処理液を２９′ＣてＳＶ＝１２で貫流させ
た後樹脂を水１００ｍ１で洗浄した。貫流液の一部を分
取して前述の分析法で定量したところ、α一ＡＰＭは５
．０ｑ（１００％）含まれており、■１、フα−ＡＰは
全く検出されなかつた。本貫流液を減圧下て濃縮し、溶
媒２５５ｙを留去した。残留液を冷蔵庫て一夜冷却晶析
させたところ、α−ＡＰＭの結晶２．４９ｙ（４９．８
％）を得た。この結晶からはＤＫＰおよびα一箸は全く
検出されなかつた。実施例６α−ＡＰＭ５．Ｏｑ．．Ｄ
ＫＰｌＯＯｍ９およびα−ＡＰｌＯＯｍｇを水３５０ｗ
Ｌｔとメタノール５０ｎｔに溶解し処理液を得た。
α−ＡＰｌＯＯｍｇを水４００ｍＬに溶解し処理液を調
製した。この溶液はＤＫＰおよびα−ＡＰをそれぞれ１
．９％含７むα−．ＡＰＭを溶解した液に相当する。前
記の樹脂筒に処理液を２９′ＣてＳＶ＝１２で貫流させ
た後樹脂を水１００ｍ１で洗浄した。貫流液の一部を分
取して前述の分析法で定量したところ、α一ＡＰＭは５
．０ｑ（１００％）含まれており、■１、フα−ＡＰは
全く検出されなかつた。本貫流液を減圧下て濃縮し、溶
媒２５５ｙを留去した。残留液を冷蔵庫て一夜冷却晶析
させたところ、α−ＡＰＭの結晶２．４９ｙ（４９．８
％）を得た。この結晶からはＤＫＰおよびα一箸は全く
検出されなかつた。実施例６α−ＡＰＭ５．Ｏｑ．．Ｄ
ＫＰｌＯＯｍ９およびα−ＡＰｌＯＯｍｇを水３５０ｗ
Ｌｔとメタノール５０ｎｔに溶解し処理液を得た。
この溶液はＤＫＰおよびα−ＡＰをそれぞれ１．９％含
むα−ＡＰＭを溶解した液に相当する。本処理液を実施
例５で用いたと同一の樹脂１０Ｖを用いて同様に処理し
た。貫流液の分析ではα−．ＡＰＭ４．８７ｙ（９７．
５％）が含有されており、α−ＡＰ．．ＤＫＰは認めら
れなかつた。
むα−ＡＰＭを溶解した液に相当する。本処理液を実施
例５で用いたと同一の樹脂１０Ｖを用いて同様に処理し
た。貫流液の分析ではα−．ＡＰＭ４．８７ｙ（９７．
５％）が含有されており、α−ＡＰ．．ＤＫＰは認めら
れなかつた。
本貫流液を減圧蒸留により濃縮し、溶媒２３７ｙを留去
した後一夜冷蔵庫で冷却晶析させ、α一ＡＰＭ２．９Ｏ
ｙ（５７．９％）を得た。
した後一夜冷蔵庫で冷却晶析させ、α一ＡＰＭ２．９Ｏ
ｙ（５７．９％）を得た。
この結晶中からはα一書およびＤＫＰは全く検出されな
かつた。実施例７実施例２の処理液と同一組成の処理液
を調製した。
かつた。実施例７実施例２の処理液と同一組成の処理液
を調製した。
これに中塩基性アニオン交換樹脂（Ｎ計ビｉ枦１ＲＡ−
Ｂ１商標）４．０Ｖ（乾燥）を塩酸塩付加型に変換した
ものを加え、実施例２と同様の操作を行つた。
Ｂ１商標）４．０Ｖ（乾燥）を塩酸塩付加型に変換した
ものを加え、実施例２と同様の操作を行つた。
分析結果よりろ洗液中に含まれるα−ＡＰＭは３９３ｍ
９またまたＤＫＰは１４．４ｍ９、ＡＰは６．５Ｔｎ９
であつた。
９またまたＤＫＰは１４．４ｍ９、ＡＰは６．５Ｔｎ９
であつた。
α−．ＡＰＭ．．ＤＫＰおよびα−ＡＰの合量に対する
ＤＫＰおよびα一書の含有率はそれぞれ３．５％および
１．６％でα−ＡＰＭの回収率は９７．５％であつた。
ＤＫＰおよびα一書の含有率はそれぞれ３．５％および
１．６％でα−ＡＰＭの回収率は９７．５％であつた。
実施例８実施例２の処理液と同一組成の処理液を調製し
た。
た。
これに弱塩基性アニオン交換樹脂（Ｎ計ビ１ｔｅＩＲ−
４＼商標）４．０ｙ（乾燥）を塩酸．付加塩型に変換し
たものを加え、実施例２と同様の操作を行つた。
４＼商標）４．０ｙ（乾燥）を塩酸．付加塩型に変換し
たものを加え、実施例２と同様の操作を行つた。
分析結果より、ろ洗液中に含まれるα−ＡＰＭは３９０
ｍｇ、またＤＫＰ．．ＡＰはそれぞれ６．３Ｔｎ９、４
．９ｍ９であつた。
ｍｇ、またＤＫＰ．．ＡＰはそれぞれ６．３Ｔｎ９、４
．９ｍ９であつた。
α−ＡＰＭ．．ＤＫＰおよびα−ＡＰの合量！に対する
ＤＫＰおよびα−ＡＰの含有率はそれぞれ１．６％およ
び１．２％でα−ＡＰＭの回収率は９７．５％であつた
。実施例９ α−ＡＰＭ４．Ｏｙ．．Ｌ−アスパラギン酸１００ｍ９
お・よびＮ−ベンジルオキシカルボニルーＬ−アスパラ
ギン酸１００Ｔｎ９を水４００ｍ１に溶解し処理液を調
製した。
ＤＫＰおよびα−ＡＰの含有率はそれぞれ１．６％およ
び１．２％でα−ＡＰＭの回収率は９７．５％であつた
。実施例９ α−ＡＰＭ４．Ｏｙ．．Ｌ−アスパラギン酸１００ｍ９
お・よびＮ−ベンジルオキシカルボニルーＬ−アスパラ
ギン酸１００Ｔｎ９を水４００ｍ１に溶解し処理液を調
製した。
この溶液はＬ−アスパラギン酸およびＮ−ベンジルオキ
シカルボニルーＬ−アスパラギン酸をそれぞれ２．４％
含むα−ＡＰＭを溶解した液に相当す一る。この処理液
を実施例５で用いたと同一の樹脂１４ｙを用いて実施例
５と同様に処理した。貫流液の分析ではα−ＡＰＭを３
．９６ダ（９９％）含んでおり、Ｌ−アスパラギン酸お
よびＮ−ベンジルオキシカルボニルーＬ−アスパラギン
酸は全）く検出されなかつた。実施例１０ Ｎ−ベンジルオキシカルボニルーＬ−アスパラギン酸と
Ｌ−フェニルアラニンメチルエステルを蛋白分解酵素サ
モアーゼにより縮合させて、Ｎ一ｌベンジルオキシカル
ボニルーα上−アスパルチルーＬ−フェニルアラニンメ
チルエステルを得た。
シカルボニルーＬ−アスパラギン酸をそれぞれ２．４％
含むα−ＡＰＭを溶解した液に相当す一る。この処理液
を実施例５で用いたと同一の樹脂１４ｙを用いて実施例
５と同様に処理した。貫流液の分析ではα−ＡＰＭを３
．９６ダ（９９％）含んでおり、Ｌ−アスパラギン酸お
よびＮ−ベンジルオキシカルボニルーＬ−アスパラギン
酸は全）く検出されなかつた。実施例１０ Ｎ−ベンジルオキシカルボニルーＬ−アスパラギン酸と
Ｌ−フェニルアラニンメチルエステルを蛋白分解酵素サ
モアーゼにより縮合させて、Ｎ一ｌベンジルオキシカル
ボニルーα上−アスパルチルーＬ−フェニルアラニンメ
チルエステルを得た。
次いで水添分解反応によりベンジルオキシカルボニル基
を脱離させ、α−ＡＰＭ水溶液３１６ｙを得た。この溶
液はα−ＡＰＭ２５．ｌＯｑ．．ＤＫＰＯ．５３３ｙｌ
α−ＡＰＯ．２４９ｙおよびＬ−アスパラギン酸０．０
５５ダ等を含んでおり、ＤＫＰｌα−ＡＰおよびＬ−ア
スパラギン酸をそれぞれ２．へ０．９４および０．２１
％含むα−ＡＰＭ水溶液に相当する。内径２ｃｍの円筒
形ガラス管に強塩基性アニオン交換樹脂（Ａｍｂｅｒｉ
ｔｅＩＲＡ−４１へ商標）１５．５ｙ（乾燥）を充填し
、上記処理液に水を加えて全量を６７４ｙとした液を５
５℃に保ち、ＳＶ＝５．２で貫流させた後、更に樹脂筒
を水６５ｍ１て洗浄した。
を脱離させ、α−ＡＰＭ水溶液３１６ｙを得た。この溶
液はα−ＡＰＭ２５．ｌＯｑ．．ＤＫＰＯ．５３３ｙｌ
α−ＡＰＯ．２４９ｙおよびＬ−アスパラギン酸０．０
５５ダ等を含んでおり、ＤＫＰｌα−ＡＰおよびＬ−ア
スパラギン酸をそれぞれ２．へ０．９４および０．２１
％含むα−ＡＰＭ水溶液に相当する。内径２ｃｍの円筒
形ガラス管に強塩基性アニオン交換樹脂（Ａｍｂｅｒｉ
ｔｅＩＲＡ−４１へ商標）１５．５ｙ（乾燥）を充填し
、上記処理液に水を加えて全量を６７４ｙとした液を５
５℃に保ち、ＳＶ＝５．２で貫流させた後、更に樹脂筒
を水６５ｍ１て洗浄した。
貫流液と洗浄液を合せた流出液７１９ｙを冷蔵庫に一夜
放置し晶析した結晶を沖集し水３６ｍ１で洗浄し、α−
ＡＰＭの結晶１９．６ｇ（７８．０％）を得た。結晶中
のＤＫＰおよびα一書は夫々２５即、８即で枦洗液中に
はα−ＡＰＭを５．２４ｙＤＫＰ１α−ＡＰをそれぞれ
２８ｍｇ、７ＴｒＬ９含んでいた。またＬ−アスパラギ
ン酸は結晶、消液のいずれにおいても全く検出されなか
つた。カラム流出液中のα−ＡＰＭ，，ＤＫＰおよびα
−沖の合量に対するＤＫＰ、α一沖の含有率はそれぞれ
０．２％および０．１％てα−ＡＰＭの回収率は９８．
８％であつた。
放置し晶析した結晶を沖集し水３６ｍ１で洗浄し、α−
ＡＰＭの結晶１９．６ｇ（７８．０％）を得た。結晶中
のＤＫＰおよびα一書は夫々２５即、８即で枦洗液中に
はα−ＡＰＭを５．２４ｙＤＫＰ１α−ＡＰをそれぞれ
２８ｍｇ、７ＴｒＬ９含んでいた。またＬ−アスパラギ
ン酸は結晶、消液のいずれにおいても全く検出されなか
つた。カラム流出液中のα−ＡＰＭ，，ＤＫＰおよびα
−沖の合量に対するＤＫＰ、α一沖の含有率はそれぞれ
０．２％および０．１％てα−ＡＰＭの回収率は９８．
８％であつた。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 夾雑物を含むα−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニル
アラニン低級アルキルエステルを水性媒体中でＣｌ型の
アニオン交換樹脂と接触させ、夾雑物をこのアニオン交
換樹脂に吸着させて除去することを特徴とするα−Ｌ−
アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニン低級アルキルエス
テルの精製法。 ２ α−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニン低級
アルキルエステルの低級アルキル基がメチル基である特
許請求の範囲第１項記載の精製法。 ３ 水性溶媒が水溶液である特許請求の範囲第１項また
は第２項記載の精製法。 ４ 水性溶媒がメタノール水溶液である特許請求の範囲
第１項ないしし第３項のいずれかの項記載の精製法。 ５ 夾雑物がα−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラ
ニンと３−ベンジル−６−カルボキシメチル−２，５−
ジケトピペラジンである特許請求の範囲第１項ないし第
４項のいずれかの項記載の精製法。
Priority Applications (7)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP54043274A JPS6049199B2 (ja) | 1979-04-10 | 1979-04-10 | α−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フエニルアラニン低級アルキルエステルの精製法 |
| US06/138,728 US4309341A (en) | 1979-04-10 | 1980-04-09 | Method for purifying α- L-aspartyl-L-phenylalanine lower alkyl ester |
| CA000349450A CA1148943A (en) | 1979-04-10 | 1980-04-09 | METHOD FOR PURIFYING .alpha.-L-ASPARTYL-L-PHENYLALANINE LOWER ALKYL ESTER |
| GB8011794A GB2047711B (en) | 1979-04-10 | 1980-04-09 | Method for purifying-l-aspartyl-l-phenylalanine lower alkyl ester |
| CH276080A CH643531A5 (de) | 1979-04-10 | 1980-04-10 | Verfahren zur reinigung von alpha-l-aspartyl-l-phenylalanin-niedrigalkylestern. |
| FR8008054A FR2453845A1 (fr) | 1979-04-10 | 1980-04-10 | Procede de purification d'esters alkyliques inferieurs de l'a-l-aspartyl-l-phenylalanine |
| DE19803013701 DE3013701A1 (de) | 1979-04-10 | 1980-04-10 | Verfahren zur reinigng von alpha - l-aspartyl-l-phenylalanin-niedrigalkylestern |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP54043274A JPS6049199B2 (ja) | 1979-04-10 | 1979-04-10 | α−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フエニルアラニン低級アルキルエステルの精製法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS55136257A JPS55136257A (en) | 1980-10-23 |
| JPS6049199B2 true JPS6049199B2 (ja) | 1985-10-31 |
Family
ID=12659233
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP54043274A Expired JPS6049199B2 (ja) | 1979-04-10 | 1979-04-10 | α−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フエニルアラニン低級アルキルエステルの精製法 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4309341A (ja) |
| JP (1) | JPS6049199B2 (ja) |
| CA (1) | CA1148943A (ja) |
| CH (1) | CH643531A5 (ja) |
| DE (1) | DE3013701A1 (ja) |
| FR (1) | FR2453845A1 (ja) |
| GB (1) | GB2047711B (ja) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2516077A1 (fr) * | 1981-11-06 | 1983-05-13 | Human Pharm Sa Laboratoires | Procede de preparation de l'ester-methylique de l'a-aspartyl phenylalanine |
| JPS58177952A (ja) * | 1982-04-12 | 1983-10-18 | Ajinomoto Co Inc | Ｌ−α−アスパルチル−Ｌ−フエニルアラニンメチルエステルの晶析法 |
| IT1197461B (it) * | 1983-05-13 | 1988-11-30 | Debi Derivati Biologici | Procedimento per la preparazione dell'estere metilico di alfa-l-aspartil-l-fenil-alanina |
| JPH0657719B2 (ja) * | 1986-06-03 | 1994-08-03 | 味の素株式会社 | α−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フエニルアラニンメチルエステルの回収方法 |
| JP2728936B2 (ja) * | 1989-06-14 | 1998-03-18 | 三井東圧化学株式会社 | α―Ｌ―アスパルチル―Ｌ―スェニルアラニンメチルエステルの製造方法 |
| JPH05194587A (ja) * | 1992-01-14 | 1993-08-03 | Ajinomoto Co Inc | α−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニンメチルエステルの精製法 |
| WO2000032621A1 (en) * | 1998-11-25 | 2000-06-08 | The Nutrasweet Company | PROCESS FOR PURIFICATION OF N- [N-(3,3-DIMETHYLBUTYL) -L-α-ASPARTYL] -L-PHENYLALANINE 1-METHYL ESTER |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1309605A (en) * | 1970-01-31 | 1973-03-14 | Ajinomoto Kk | Process for producing alpha-dipeptide esters of l-aspartic acid |
| FR2078640A5 (en) * | 1970-02-21 | 1971-11-05 | Beecham Group Ltd | Alpha-asparaginyl dipeptides prepn |
| JPS4941425B1 (ja) * | 1970-10-26 | 1974-11-08 | ||
| JPS5235660B2 (ja) * | 1972-05-25 | 1977-09-10 | ||
| JPS5113737A (en) * | 1974-07-23 | 1976-02-03 | Ajinomoto Kk | Arufua ll asuparuchiru ll fueniruaraninteikyuarukiruesuteruno seizoho |
-
1979
- 1979-04-10 JP JP54043274A patent/JPS6049199B2/ja not_active Expired
-
1980
- 1980-04-09 US US06/138,728 patent/US4309341A/en not_active Expired - Lifetime
- 1980-04-09 CA CA000349450A patent/CA1148943A/en not_active Expired
- 1980-04-09 GB GB8011794A patent/GB2047711B/en not_active Expired
- 1980-04-10 FR FR8008054A patent/FR2453845A1/fr active Granted
- 1980-04-10 CH CH276080A patent/CH643531A5/de not_active IP Right Cessation
- 1980-04-10 DE DE19803013701 patent/DE3013701A1/de active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FR2453845A1 (fr) | 1980-11-07 |
| DE3013701C2 (ja) | 1989-06-01 |
| GB2047711B (en) | 1983-02-02 |
| JPS55136257A (en) | 1980-10-23 |
| GB2047711A (en) | 1980-12-03 |
| CH643531A5 (de) | 1984-06-15 |
| US4309341A (en) | 1982-01-05 |
| CA1148943A (en) | 1983-06-28 |
| DE3013701A1 (de) | 1980-10-23 |
| FR2453845B1 (ja) | 1984-12-07 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4284721A (en) | Method for manufacturing dipeptides | |
| US4769474A (en) | Process for purifying tryptophane | |
| JPS6049199B2 (ja) | α−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フエニルアラニン低級アルキルエステルの精製法 | |
| US3833554A (en) | Method of purifying alpha-l-aspartyl-l-phenylalanine lower alkyl esters of peptide impurities | |
| FR2560879A1 (fr) | Procede de recuperation de l'antibiotique ceftazidime | |
| US6335461B1 (en) | Process for purification of aspartame derivative | |
| JPS61148147A (ja) | Ｌ−フエニルアラニンの精製法 | |
| JPS60136543A (ja) | フエニルアラニン精製法 | |
| JPS6112918B2 (ja) | ||
| JPH0812632A (ja) | グリシンの精製法 | |
| EP1048674A1 (en) | Method for separating and purifying aspartame and aspartame derivative | |
| JPS604168A (ja) | トリプトフアンの晶析法 | |
| JP2728936B2 (ja) | α―Ｌ―アスパルチル―Ｌ―スェニルアラニンメチルエステルの製造方法 | |
| JPS61234789A (ja) | Ｌ―トリプトファンよりインドールの分離回収方法 | |
| JPH05310657A (ja) | ペプチド類からアミノ酸を回収する方法 | |
| JPS6013758A (ja) | トリプトフアンの精製法 | |
| JP4384748B2 (ja) | 光学活性２−ピペラジンカルボン酸の製造法 | |
| WO2000032621A1 (en) | PROCESS FOR PURIFICATION OF N- [N-(3,3-DIMETHYLBUTYL) -L-α-ASPARTYL] -L-PHENYLALANINE 1-METHYL ESTER | |
| JPS63159355A (ja) | Ｌ−フェニルアラニンおよびｌ−アスパラキン酸の回収方法 | |
| JPS61249961A (ja) | トリプトフアンの精製法 | |
| JPS6348262A (ja) | 活性炭に吸着したｌ−トリプトフアンの溶離方法 | |
| JPH0342268B2 (ja) | ||
| JPS626702B2 (ja) | ||
| JPS6112919B2 (ja) | ||
| JPS6112917B2 (ja) |