JPS6034986A - ヒトのパラトルモンを産生する雑種ベクタ―及びヒトのパラトルモン遺伝子 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はヒトの・ξラトルモン（副腎皮質ホルモン）を
産生ずる雑種ベクター及びヒトのバラトルモン遺伝子に
関する。

ヒトのバラトルモンはとｐわけ骨におけるカルシウムの
取シ込み及び除去を制御している。

不発明の基礎にある課題はヒトのパラトルモンを工業的
に製造できる有用々生物学的材料をつくることにある。

１つの態様に上れば、この課題はけ核細胞内でクローン
化でき、ヒトのバラトルモンｆ匹生１．。

かつ次の特徴： （ａｔ　プロモーター、 （ｂ）０〜１０００．特に０〜２００個の塩基対を有す
る、プロモーターに隣接したＤＮＡ領域。

（ｅｌ　［ｂｌによるＤＮＡ領域に隣接したリポソーム
結合部位、 （ｄ）４〜１５個の塩基対を有する、リポソーム結合部
位に隣接したＤＮＡ領域、 ｉｅｌ　（ｄ）によるＤＮＡ　領域に隣接した出発コー
ドｌ。

及び げ）　ヒトのバラトルモンをコード化する次ノＤＬｑＡ
配列： によって特徴づけられる雑種ベクターはよって解決され
る。

原核細胞としては、工業的な規模に基づいて示した上記
の特徴を有し、かつバラトルモンを産生ずる雑種ベクタ
ーをクローン化できるすべての細胞が考えられる。大腸
菌が特に適している。大腸菌に適したプロモーターの例
は例えばＳｅｎｇｂｕｓｃｂＩＰ、ｖａｎ、　Ｍｏ１ｅ
ｋｕｌａｒ−ｕｎｄ　Ｚｅｌｌｂｉｏｌｏｇｉｅ（Ｍｏ
ｌｅｃｕｌａｒ　ａｎｄ　Ｃｅ１ｌ　Ｂｉｏｌｏｇｙ）
、　Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、　Ｈｅｉｄｅｌ
ｂｅｒｇ（１９７９）　等に記載されている。大腸菌の
場合にはリポソーム結合部位は例えば次のＤＮＡ配列： ＡＧＧＡまたはＧＧＡＧ ＴＯＯＴ　ＧＯＴＣｊ を有することができる。

大腸菌の場合に使用できる出発コードンの例は次のＤＮ
Ａ配列： ＴＧ ＡＧ を有する。

別の態様によれば、本発明の基礎にある課題は原核細胞
内でクローン化でき、かつ （Ａｌ　（ａｌ　子豚のバラトルモンからｍＲＮＡ　ｆ
単離し、（ｂｌ　単離したｎ＋ＲＮＡを大腸菌内でベク
ターの助けによってｄｓ−ｃＤＮＡとし、てクローン化
し、（ｃｌ　生成するクローンのプールから雑種ベクタ
ーＤＮＡ　を単離し、 （ａｌ　単離した雑種はフタ−ＤＮＡ　を各プール用担
体に固定し、［ａｌによル単離されたｍＲＮＡ　（ｉ−
雑種化し、次いでそれを再び除去し、除去された。ＲＮ
Ａ　＠ブタのプレーブローバラトルモン又はブタのパラ
トルモンに翻訳することを試み、抗体沈降によシ形成さ
れたブタのプレープローバラトルモン又はブタのパラト
ルモンを明らかにし、こうしてブタのバラトルモン遺伝
子配列を有する、（ｂ）によシ得られるクローンを決定
し、ブタのバラトルモン遺伝子配列を有する、決定され
たクローンの雑種ベクターＤＮＡ　ｔ−配列し、雑種ベ
クターＤＮＡを有するクローンを、ブタのバラトルモン
をコ−ド化するＤＮＡ配列と同一化し、 （ｅ）　ｆｄ）により同一化されたクローンの雑種ベク
ターＤＩ’ＪＡに放射能によるラベルを付し、（ｆ）生
成する放射能によるラベルを付した雑種ベクター１）Ｎ
Ａ　（ｉ−有するヒトの遺伝子バンクをスクリーニング
し、 リ　決定されたヒトのノリトルモンを原核細胞内でクロ
ーン化できる雑種バクターに変えることによって製造で
き、がっ （均　次のＤＮＡ配列を含有する２つのＲＥ切断部位の
間に位置したＤＮＡ配列、またはＲＥ切断部位の間に位
置したＤＮＡ配列のサブ領域：ＩＴＧ　ＴＣｉＴ　ＴＴ
Ａ　ＧＴＩＴ　ＴＡＯＴＣＡ　ＧＧＡＩＴＣＡ　ＧＯＴ
　ＡＣＴＩＡＯＡＧＡ　ＡＡＴ　ＣＡＩＡ　ＡＴＧ　Ａ
ＧＴ　０ＧＴＩＡ（、Ｔ　ＣＧＡ　ＴＧＡ−ｈ’？’ｆ
ｆ　ｅａ　６ＩＴ￥　ｉ’ｒｆ　６”Ｘｉ　’；ｒへ”
Ｅ　ａ’？”１ｔｃｉ”ａＷ　ｉ’７；　（３’Ａ”ｒ
”ＩＡＴ　ＣＴＣＧＡＡ　ＴＡＩＣ；　（、ＴＡ　ＴＴ
Ｇ　ＧＡＣＩＣＯＴ　ＴＴＴ　ＧＴＡ　１−ＩＧＴ−古
Ｃ古Ｊさ消音τ６へ〒ｈ皆渋６を吉ｉ守ｆ□。

ＩＯＡ　ＴＴＯＴＴ（３ＧＡＩＣ；　ＧＴＧ　ＧＴＡ　
ＣＡＯＩＧＴ（ｒ　ＴＴＡ　ＡＡＡ１バ＾Ｙ高τｊ背δ
キτ＾乍Ｖ滌贅克髪古！肖ＪＩＴＡ　Ｃ１ＧＡ　（３Ｃ
；Ａ　ＡＧ追ＧＴＧ　ＴＣＯＧＧＧｉＧＯＴ　ＴＴＴ　
ＴＴ（３古ｉ階Ｓ淘憚品俣δτ商Ｗ♂山古に春Ｙ♂、〒
ＩＴＴ　ＴＣＡ　ＧＡＡ　ＣｃＩＴＯＴＯ（、ＧＴ　Ｃ
ＴＧＩＴＴＴ　ＯＧＡ　０ＴＡＩＧＡ　ＡＡＡ　ＴＧＡ
　ＡＡＩＡ　ＣＡＧ　ＡＴＡ　ＴＴＧＩＴＯＡ　ＧＡＧ
　ＴＴ。

ＩＣ０Ｔ　ＴＴＴ　ＡＣＴ　ＴＴＩＴ　ＧＴＯＴＡＴ　
ＡＡＯＩＡＧＴ　ＣＴＣＡＡＧＩＣＴ　ＧＯＴ　ＡＡｒ
　ＴＧＩＡ　ＡＡＧ　ＣＴＣＴＡＴＩＴＡＡ　ＧＡＴ　
ＴＴ。

ＩＧＡ　ＣＧＡ　ＴＴＡ　ＡＧＩＴ　ＴＴＯＧＡＧ　Ａ
ＴＡＩＡＴＴ　ＣＴＡ　ＡＡＧＩＧＡ　ＴＣＴ　ＡＡＴ
　ＧＣＩＡ　ＴＣＡ　ＣＴＡ　ＧＯＣＩＡＴＧ　ＡＴＡ
　ＡＣＴＩＧＴ　ＡＧＡ　ＴＴＡ　（、ＧＩＴ　ＡＧＴ
　ＧＡ“１°ＣＧ（、ＩＴＡＣ’ｒＡＴ　ＴＧＡＩＴＴ
　ＡＴＴＧＡＩＴ道ΩＡＧ’ｒ　ＡＡＴ　ＴＴＴＩＡＡ
Ｔ　ＴＡ’Ｉ’　ＧＴＴＩＡＡ　ＴＡＡ　ＧＴＡ　ＡＡ
ＩＯＴＧＡ　ＴＴＡ　ＡＡＡＩＴＴＡ　ＡＴＡ　ＧＡＡ
ＩＴＴ　ＧＯＡ　ＴＡＡ　ＴＴＩＴ　ＡＴＡ　ＡＡＡ　
ＧＴＡＩＴＡＡ　ＡＡＴ　ＴＣＧＩＡＡ　ＣＧＴ　ＡＴ
Ｔ　ＡＡＩＡ　ＴＡＴ　ＴＴＴ　ＧＡＴｉＡＴＴ　ＴＴ
Ａ　ＡＧＯＩＡＡ　ＡＡＣＡＡＡ　ＡＡＩＴ　ＧＴＡ　
ＡＴＧ　ＡＴＧＴＡＴＡ　ＡＧＴ　０ＴＡＩＴＴ　ＴＴ
Ｇ　ＴＴＴ　ＴＴＬＡ　ＣＡＴ　ＴＡＯＴＡＧＩＴＡＴ
　ＴＯＡ　ＣＡＴヒ　−−Ｈプレープロ　トーーーＨＰ
ＴＨ〜ＡＯ ＴＧ 晶Ｃ課Ｖスせ駒￥吉Ｃｈ云訴ど責Ｇ−占τＧＩＴＡ（３
ＧＧＡ　ＴＴＩＴ　Ｃ１ＡＡ　ＴＡＯＴＡＡＩＣＡＧ　
ＴＡｃＡＡ（３ＣｉＩズ噴Ｃλ貧爲■詩Ｗλｔ￥六ＷＡ
Ｉ ＴＴＯＴＣＴ　ＡＧＡＩＯＡＯＴＣＡ　０ＴＴＴＩ−Ｌ
　ｕ−−Ａ　ｎ−−８ｒ−−Ｍ　−４１ｕ−−Ａｒｇ−
−Ｖ　ｕ−−Ｇｌｕ−−Ｔｒｐ−−Ｌ　ｕ−を訃仝輯天
８８仝謡日８仝請８珪肋仝仝ｇＢτ謝措■♂柘各１品Ｍ
嵩〒δｔ〒為τＩ♂♂Ｙ九茗スｌτ０Ｉ３ｕＡ　ＣＧＧ
　ＧＡＡ　０ＧＩＴ　ＯＧＡ　ＧＧＡ　ＧＡＴＩＧＧＡ
　ＧＧＧＴＯＴＧＩ−Ｇｌｕ−−Ａ　−ｐ−−Ａ　ｎ−
−Ｖａｌ−−Ｌ　ｕ−−Ｖａｌ−−Ｇｌｕ−−８ｒ−−
Ｈｌ　−−Ｇｌｕ−：ｆｆ１ｆ、ＡＡ　ＧＡＧ　ＡＡＴ
　ＧＴＩＣＴＴＧ　ＧＴＴ　ＧＴＧＩＡＧＣＯＯＴ　Ｇ
ＡＡＡＩコＩＴＴ　ＣＴＧ　ＴＴＡ　０ＡＩＧ　ＡＡＯ
Ｃ１ＡＡ　０ＡＣＩＴＣ；Ｇ　ＧＣＡ　ＧＴＴＴＩ挑ス
”Ａ〒駒Ｗ各Ｎ　＝Ｔｇ宜１Ｘ♂界ス宕晶■〃ｉ：ｌ；
ＩＡＯＴＴＡ　Ｃ１ＡＴ　ＡＡＩＴ　ＴＧＡ　ＴＴＴ　
０ＧＡＩＴＴＴ　ＡＧＧ　ＧＴＯＡＩ口Ｇｏ　ＴＧＴ　
ＡＧＡ　０ＡＩＩＢ　ＴＧＴ　ＡＧＧ　ＧＯＡＩＴＯＡ
ＡＡＴＡ　ＧＡＴＧＩＡＩＯＧ　ＡＧＡ　ＴＧＴ　ＧＴ
ＩＯＡＣＡ　ＴＣＣＯＧＴＩＡＧＴＴＩ’ＡＴ　ＧＴＡ
（３Ｉ０ＩＡＡ　ＧＴＧ　ＯＣＡ　ＡＴＩＡ　ＴＴＴ　
ＣＴＧ　ＡＴＡＩＴＡＡ　ＯＡＡ　ＡＯＴＡＩＨＩＴＴ
　ＯＡＯＧＧＴ　ＴＡＩＴ　ＡＡＡ　ＧＡＣＴＡＴＩＡ
ＴＴ　ＧＴＴ　ＴＧＡＴＩ’ｚＩＧＡ　ＡＴＴ　ＴＴＡ
　ＡＴＩＴ　ＧＡＴ　ＴＡＴ　ＴＣＴＩＧＡＴ　Ｔｏｏ
　ＡＯＴＴＩＣＩＧＴ　ＴＡＡ　ＡＡＴ　ＴＡＩＡ　Ｃ
ＴＡ　ＡＴＡ　ＡＧＡＩＣＴＡ　ＡＧＧ　ＴＧＡＡＩＴ
ＩＴＯＴＡＴ　ＴＧＴ　ＴＴＩＡ　ＴＴＯＴＴＴ　ＴＴ
ＡＩＡＡＧ　ＴＡＴ　ＧＴＴＡＩＡＩＡＧ　ＡＴＡ　Ａ
ＣＡ　ＡＡＩＴ　ＡＡＧ　ＡＡＡ　ＡＡＴＩＴＴＣＡＴ
Ａ　ＧＡＡＴＩＡＩＯＴ　ＴＴＴ　ＡＡＡ　ＧＯＩＴ　
Ｃ１ＴＯＴＴＣＴＡＯＩＯＴＴ　ＡＡＡ　ＡＴＧＴＩＩ
’ＩＧＡ　ＡＡＡ　ＴＴＴ　ＧＧＩＡ　ＧＡＧ　ＡＡＧ
　ＡＴＧＩＧＡＡ　ＴＴＴ　ＴＡＯＡＩＡＩＡＴ　ＡＡ
Ａ　ＴＧＡ　ＡＧＩＴ　ＡＴＴ　ＴＯＴ　ＣＡＣＩＴ（
３Ａ　ＡＡＴＩＴＡ　ＴＴＴ　ＡＣＴ　ＴＣＩＡ　ＴＡ
Ａ　ＡＧＡ　ＧＴＧＩＡＧＴ　ＴＴを有することを特徴
とする雑種ベクターによって解決される。

雑種ベクターをクローン化でき、かつヒトのバラトルモ
ンを産生でき慝原核細胞の例はヒトの細胞又はサルの細
胞、例えばサルの腎臓細胞である。

さらに、本発明の基礎にある課題は （ａｌ　上記及び特許請求の範囲（３）（Ａ）によシ製
造でき、かつ （ｂ）　上記及び特許請求の範囲（３）［８）による２
つのＲＥ切断部位の間に配列されたＬ）ＮＡ配列、゛ま
たはそのサブ領域によって特徴づけられる ヒトのバラトルモン遺伝子によって解決される。

ヒトのパラートルモンの製造のために、本発明によるヒ
トのノミ２トルモン遺伝子を直接原核細胞に変えること
もでさる、 以下、本発明による雑種ベクター及び本発明によるヒト
のバラトルモン遺伝子の製造を例及び表に基づいて説明
する。

副甲状腺を新たに屠殺したブタから除去した。

、ＲＮＡをこの腺組織から単離した。単離しｆｃｍＲＮ
Ａを大腸菌内のプラスミドの助けによって、２本鎖の相
補的ＤＮＡ　（ｄｓ−ＣＤＮＡ　）　としてクローン化
した。生成する雑種クローンから雑種プラスミド−ＤＮ
Ａ　’ｉ単離した。副甲状腺から単離した。ＲＮＡ　’
ｉインビトロの翻訳システム中でブタのプレープローパ
ラトルモン又はブタのバラトルモンに翻訳した。ブタの
プレーブローバラトルモン又はシタのパラトルモンは抗
体沈降によって示された。′雑種を抑制した翻訳および
ＤＮＡ配列分析婁の助けによってブタのノξラトルモン
配列を含有するクローンを同定することができた、決定
された雑種クローンから、ブタのバラトルモンｃＤＮＡ
遺伝子（表１）を含有する雑種プラスミド−ＤＮＡに放
射能のラベルを付しくニック翻訳）、ヒトの遺伝子バン
クをスクリーニングするために使用した。このようにし
て決定されたヒトの７ｇラトルモン遺伝子をプラスミド
中のサブクローン化によって富化した。こうして富化し
たヒトのノぐラトルモン遺伝子を配列した。ヒトのバラ
トルモンの表現に適した断片の配列は表２に示される。

決定された配列はヒトのノラトルモンの公知のＣＤＮＡ
配列及び公知のアミノ酸配列と一致した０ 表３は次の事柄を説明するものである。す力わち、（１
）さらに別のプロセスにおいてそのＤＮＡ配列が表２の
ＤＮＡ配列を含有するＲＥ切断部位の間に位置したＤＮ
Ａ配列を用いた。次いで制限エンドヌクレアーゼ５ａｕ
３Ａの助けによってＰＴＨ−遺伝子（ＰＴＨ＝バラトル
モン）のプレープロ部分を成熟１−８４−　ＰＴＨの遺
伝子から分離した。　（２）　ｄＡＴＰ及びａＧＴＰを
大腸菌−ＤＮＡ−ポリメラーゼ−■の１大きな断片′を
供給する（ｆｉｌｌｉｎｇ−ｉｎ）こと及び（３）続い
てＳｌ−ヌクレアーゼで減成することによって、５ａｕ
３Ａ−切断から生じる粘性末端（ＧＡＴＣ）−の残シの
１本鎖残渣（ＧＡ）を除去した：その結果ヒトのＰＴＨ
のアミノ酸１（セリン）のためのコードンＩＴｃＴ−が
復元された。（４）　ＤＮＡ　アダプター會上記の方法
で処理されたこのＰＴ）ｌ−ＤＮＡ−断片に結合した。

その結果メチオニンのコードンＩＡＴＧ”　がセリンの
前で直接結合された。このコードンは微生物中のＰＴ）
（の合成の出発のための重要な信号の１つである。（５
）上記の方法で構成されたＰＴＨ遺伝子断片をｐＢＲ３
２２（６−７’）のＣ１ａ　Ｉ−切断部位にサブクロー
ン化した。そのＰＴ）Ｉ遺伝子が反時計回シの方向でｐ
ＢＲ３２２のＨｉｎｄ　ｍ切断部位の前に位置したクロ
ーンを選別した。このＰＴＨクローン１Ｈｉｎｄｌ［［
で切断した。（力　この切断部位の１粘性末端″を４つ
の異なるヌクレアーゼによる「ｆｉｌｌ−ｉｎ反応」に
付した。、Ｓｌ　−ヌクレアーゼによる減成と組合せて
、　ｆｉｌｌ−ｉｎ末端（水平々末端）を有する断片を
得、ＡＴＧ　コードン４からの距離は１０個までの塩基
対（８）で構成されていた。（９）断片のこのような変
化の前に。

２つの合成りＮＡ　アダプター、すなわち／ＴＣＣＧＴ
ＡｅＧＧＡ／、／ＴＣＣＣＴＡＧＧＧＡ／　（９１を結
合した。これらのリンカ−は微生物中の表現のためのさ
らに重要な信号であるリポソームの結合部位ａ〔の配列
を含有していた。その結果、ＢａｍＨＩ切断部位も同様
に形成された。これは上記したベクターａυの種々のプ
ロモーター（例えばｔｒｐ。

ｉａｃ、Ｔ５）の後にクロ矛ン化するのに適していた。

形質転換された大腸菌の細胞は、中間の対数相に到達し
且つ遠心分離を行うまで、アンピシリン（５０μｇ／ｍ
ｌ）　の存在下にＬＢ完全培地中で生長させた。ベレッ
トを懸濁緩衝液中に塩化グアニジン（３Ｍ）（約１０１
０細胞／―）で懸濁させた。

その後光学密度（ＯＤ６５０）が始めの光学密度の約九
　に相当する値に達するまで超音波（振動器）でブレー
クダウンを行った。この細胞断片を遠心分離した。上澄
みはＰＴｆｌを含有していた。蛋白質を５％ＴＣＡで沈
殿させ、次いで０．０２Ｎ塩酸中に溶解させた。ＴＣＡ
残渣をエーテルで洗浄した。粗抽出物から得たＰＴＨを
さらに抽出したものはＰＴＨ断片１−３４ＡＡ、２８−
４８ＡＡ　及び４８−６８ＡＡ（ｌ（ＩＡ）に対して特
異的な抗体に対して免疫学的に有効であシ、アデニルシ
クラーゼ試験によれば生物先約に活性でめった。

ヒトのバラトルモン遺伝子をベクター（ｐＢＲ３２２／
ＳＶ４０誘導体）に結合させ、次いでリン酸カルシウム
沈殿の助けによってサルの腎臓細胞中で形質転換させた
。１０９　位の細胞から、ＰＴＨを抽出によって得、次
いでＲＩＡ（放射線免疫検定法）で試験した。

さらに、ヒトのバラトルモン遺伝子（λ−ヒト雑種−Ｄ
ＮＡ）’ｉＴ３細胞内での共−形質転換によって単純性
庖疹のチミジンキナーゼ遺伝子で形質転換させた：ＴＫ
＋クローンから、ヒトのＰＴＨ遺伝子の組込みｌＤＮＡ
雑種形成によって確認した。

表１ ＴＴ 〔完了〕 ＴＧＡ　ＧＡＧ　ＧＩＵＴ　ＵＴ’Ｉ’　ＬｉＬｉ４°
　（ｊＴ括　ｌ“ｌｏ“ｒ　ＵＧＡ　にＧＡＩ２）ＲＥ
−切断（Ｓａｕ　３Ａ） ＧＡＧＧＡＧ　ＡＡＧＡ　ＧＡＴＣＴＧＴＧ、、−、、
・ｃ’ｒｃｃ’ｒｃ’ｒ’ｒｃ’ｒｃ’ｒＡｃ　ＡＣＡ
ｃ、、、、、。

Ｓｅｒ　Ｖａｌ ＧＡＴＣＴＧＴＧ・・・・・・ ＡＣＡＣＡＣ・・・・・・ Ｓｅｒ　Ｖａｌ ＴＣＴＧＴＧ・−・・・・ ＡＧＡＣＡＣ、、、、−。

６）ＲＥ−切断（Ｃ１ａ工） Ｍ６ｔ　Ｓｅｒ　Ｖａｌ ＣＧＡＴＧＴＣＴＧＴ（、・・・・・・ＴＡＣＡＧＡＣ
ＡＯ・９．・・・ ＡＧＣＴＴＣＡＴＣＧＡＴＧＴＣＴＧＴＧ・・・・・・
ＡＧＴＡＧＣＴＡＣＡＧＡＣＡＣ・６．・・・ｅｔ ＴＣＡＴＣＧＡＴＧ、、、、、。

ＡＧＴＡＧＣＴＡＣ・・・・・・ ｅｔ ＴＴＣＡＴＣＧＡＴＧ　、、、、、。

ＡＡＧＴＡＧＣＴＡＣ、、−、、。

ｅｔ ＣＴＴＣＡＴＣＧＡＴＧ・・・・・・ ＧＡＡＧＴＡＧＣＴＡＣ、、、、、。

Ｍｅｔ （、ＣＴＴＣＡＴＣＧＡＴＧ・・・・・・ＣＧＡＡＧＴ
ＡＧＣＴＡＣ，、、、、。

Ｍｅｔ ＡＧＣＴＴＧＡＴＣＧＡＴＧ・・・・・・ＴＣＧＡＡＧ
ＴＡＧｃＴＡｃ　、、、、、。

’ｒｏ）ＲＥ−切断（Ｂａｍｌ） １１）プラスミド上での強力なプロモーターの後の挿入
プロモーター　ターミネータ− ＰＴＨ−遺伝子　Ｈ ｘｏｏｂｐ（塩基対） 形質転換 （ほか３名） 第１頁の続き ■Ｉｎｔ、Ｃ１，’　識別記号　庁内整理番号手続？…
正書（方式） 昭和５９年　８月　３日 特許庁長官　志賀　学　殿 １、　事件の表示 昭和５９年特許願第７１０４１号 ２、　発明の名称 ヒ１のバラトルモンを産生Ｊる雑種ベクター及びヒトの
バラトルモン遺伝子 ３、　補正をする者 事件との関係：特許出願人 名称　ゲゼルシ１シフト・フユア・ビオテクノロギッシ
エ・フオルシュンク・ミツト・ベシュレンクテル・ハフ
ラング４、　代理人 住所　〒１００　東京都千代田区霞が関３丁目２番５号
霞が関ビル２９階 霞が関ビル内郵便局私書箱第４９号 昭和５９年　７月１１日　（発送日：昭和５９年　７月
３１日）６、　補正により増加する発明の数：０７、　
補正の対象 明細書の浄書 ８、　補正の内容 別紙の通り（内容に変更なし）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）次の特徴： （ｍｌ　プロモーター、 （ｂ）０〜１０００個、特に０〜２００個の塩基対を有
   する、プロモーターに隣接したＤＮＡ領域、 （ｃ）　（ｂ）によるＤＮＡ領域に隣接したリポソーム
   結合部位、 （ｄ）４〜１５（［！］の塩基対を有する、リポソーム
   結合部位に隣接したＤＮＡ領域、 （ｅ）　（ｄｉによるＤＮＡ領域に隣接した出発コード
   ン、 （ｆ）　ヒトのバラトルモンをコード化する次のＤＮＡ
   配列： ＯＡＴ　ＡＡＩＴＴｅＡ　’ｌ’Ｔ’ｌ’　ＧＧＡＩＴ
   ＴＴ　ＡＧＧ　ＧＴＯＡＩによって特徴づけられた、原
   核細胞内でクローン化されることができ、かつヒトのバ
   ラトルモンを産生する雑種ベクター。 ２）　前記ベクターが大腸菌内でクローン化され得るこ
   とを特徴とする前項（１）記載の雑種ベクター。 ３）　前項（１）（ｆ）記載の特定のＤＮＡ配列が、そ
   の１本鎖が前記特定のＤＮＡ配列の１本鎖で雑種化され
   ることができるＤＮＡ配列で置換され、該置換ＤＮＡ配
   列が所望生産物の表現に有用であることを％徴とする前
   項１又は２記載の雑種ベクター。 ４）１又は数個の塩基対三つ組が相当する塩基対で置換
   されることを特徴とする前項（１）、（２）又は（３）
   記載の雑種ベクター。 ！５）（ん（ａ）　ブタの副用状腺からｍＲＮＡ　’ｉ
   単離し、（ｂｌ　単離したｍＲＮＡ　ｆ大腸菌内でベク
   ターの助けによってｄｓ−ＣＤＮＡとしてクローン化し
   、 ［ｃ）　生成するクローンのプールから雑種ベクターＤ
   ＮＡ　ｔ−単離し。 （（至）単離した雑種ベクターＤＮＡ　ｉ各プール用の
   担体に固定し、（ａ）によシ単離されたｍＲＮＡを雑種
   化し、次いでそれを再び除去し、除去されたｍＲＮＡを
   ブタのバラトルモンに翻訳することを試み、抗体沈降に
   よシ形成されたブタのパラトルモンを明らかにし、こう
   してブタのバラトルモン遺伝子配列を有する。 （ｂ）によシ得られるクローンを決定し、ブタのパラト
   ルエン遺伝子配列を有する、決定されたクローンの雑種
   ベクターＤＮＡ　ｉ配列し、雑種ベクターＤＮＡ　ｉ有
   するクローンを、ブタのバラトルモンをコード化するＤ
   ＮＡ配列と同一化し、 （ｅ）　（ｄ）によシ同−化されたクローンの雑種ベク
   ターＤＮＡに放射能によるラベルを付し、（ｆｌ　生成
   する放射能によるう×ルを付した雑種はフタ−ＤＮＡ　
   ｉ有するヒトの遺伝子バンクをスクリーニングし、 Ｔｇ＋　決定されたヒトのバラトルモン遺伝子（（Ｂ）
   記載のＥ。ＯＲ工制限部位間のＬＩＮＡ配列）を単離し
   、次いでこれ７ｉＩ−原核細胞内でクローン化され得る
   表現雑種はフタ−に変えることによって製造することが
   でき、かつ （Ｂ）　次のＤＮＡ配列を含有する２つのＲＥ切断部位
   の間に位置したＤＮＡ配列、またはＢＥ切断部位の間に
   位置したＤＮＡ配列のサブ領域：（６）雑種ベクターが
   動物細胞１例えばを推動物の細胞、哨乳動物の細胞、サ
   ルの細胞、例えばサルの腎臓細胞、及びヒトの細胞中で
   クローン化されることができることを特徴とする前項（
   ５）記載の細胞。 （力　前項（５１（Ｂｌ記載の特定のＤＮＡ配列が、そ
   の１本鎖がＭｉＪ記特定のＤＮＡ配列の１本鎖で雑種化
   されることができるＤＮＡ配列で置換され、該置換ＤＮ
   Ａ　配列が所望生産物の表現に有用であることを特徴と
   する前項（５）又は（６）記載の雑種ベクター６（８）
   １又は数個の塩基対（三つ組）ｆｉ相当する塩基、１７
   で置換されることを特徴とする雑種ベクター。 （９１（ａ）　前項（５）（Ａｌに従って製造さ　れる
   ことができ、かつ （ｂｌ　前項（５１（Ｂ）記載の２つのＥＣ１ＯＲＩ制
   限部位又社そのサブ領域の間に位置するＤＮＡ配列によ
   って特徴づけられた ヒトのバラトルモン遺伝子。 （Ｉω　前項（５１，（６）、（７）又は（８）、記載
   の雑種ベクターによシヒトのバラトルモンを産生ずる原
   核細胞、特に動物細胞、例えばを推動物の細胞、哨乳動
   物の細胞、サルの細胞及びヒトの細胞。 （ｌ］）バラトルモンの作用及び機能を欠く生物（例え
   ば唱乳動物、特に人間）の場合に使用するだめの前項（
   １０）記載の細胞の用途。