JPS6027519B2 - ペプチド誘導体の新規合成法 - Google Patents
ペプチド誘導体の新規合成法Info
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- JPS6027519B2 JPS6027519B2 JP52131859A JP13185977A JPS6027519B2 JP S6027519 B2 JPS6027519 B2 JP S6027519B2 JP 52131859 A JP52131859 A JP 52131859A JP 13185977 A JP13185977 A JP 13185977A JP S6027519 B2 JPS6027519 B2 JP S6027519B2
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明はプロテアーゼによるべプチド譲導体の新規合成
法に関するものである。
法に関するものである。
酵素によるべプチド合成はラセミ化を起さず、官能基を
保護する必要がなく、Ｌ−体のみが選択的に反応する等
々の利点を有し、化学合成法を代替する酵素によるべプ
チド合成法の確立が希まれている。
保護する必要がなく、Ｌ−体のみが選択的に反応する等
々の利点を有し、化学合成法を代替する酵素によるべプ
チド合成法の確立が希まれている。
しかし、酵素によるべプチド合成はその可逆反応のため
、現在は工業的に利用できる方法が確立されていない。
諸種のプロテアーゼによるべプチド合成法においても、
この可逆反応を阻止し目的べプチドを合成する方法が種
々検討されている。
、現在は工業的に利用できる方法が確立されていない。
諸種のプロテアーゼによるべプチド合成法においても、
この可逆反応を阻止し目的べプチドを合成する方法が種
々検討されている。
例えばベルグマンらはキモトリプシンによりペンゾイル
ーＬ−トリプトフアンとグリシンアニリドを反応させペ
ンゾイル−Ｌートリブトフアニルーグリシンアニリドを
得ることに成功している（Ｂｅｒｇｍａｎｎｅｔａｌ，
ＪｏｕｍａｌｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔ
ｒｙ，１２４，３２１（１９３８））。この反応は可溶
性の原料を用いて不溶性のべプチドを得ることにより生
成物の二次的加水分解を阻止する点が特徴である。した
がって、不溶性の生成物を得るため、末端アミノ保護基
および末端カルボキシ保護基に工夫が必要である。一方
、ファストレッらはキモトリプシンによりアセチルーＬ
ーフエニルアラニンメチルエステルとＬ−アラニンアミ
ドを反応させてアセチル−Ｌ−フェニルアラニルーＬー
アラニンアミドの生成を確認しているが、生成物の単離
はされていない（Ｊ．ＦａｓｔｒｅＺ ｅｔ ａｌ，Ｂ
ｉｏｃｈｅｍｉｓｔり １２，２０２５（１９７３））
。本発明はプロテアーゼの存在下カルボキシ末端が遊離
のＣ端側べプチド（以下Ｃ−成分と略記）とカルボキシ
末端が遊離または保護されているＮ端側べプチド（以下
Ｎ−成分と略記）をどちらか一方を過剰に用いて反応さ
せて、目的べプチドを合成する方法を提供する。
ーＬ−トリプトフアンとグリシンアニリドを反応させペ
ンゾイル−Ｌートリブトフアニルーグリシンアニリドを
得ることに成功している（Ｂｅｒｇｍａｎｎｅｔａｌ，
ＪｏｕｍａｌｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔ
ｒｙ，１２４，３２１（１９３８））。この反応は可溶
性の原料を用いて不溶性のべプチドを得ることにより生
成物の二次的加水分解を阻止する点が特徴である。した
がって、不溶性の生成物を得るため、末端アミノ保護基
および末端カルボキシ保護基に工夫が必要である。一方
、ファストレッらはキモトリプシンによりアセチルーＬ
ーフエニルアラニンメチルエステルとＬ−アラニンアミ
ドを反応させてアセチル−Ｌ−フェニルアラニルーＬー
アラニンアミドの生成を確認しているが、生成物の単離
はされていない（Ｊ．ＦａｓｔｒｅＺ ｅｔ ａｌ，Ｂ
ｉｏｃｈｅｍｉｓｔり １２，２０２５（１９７３））
。本発明はプロテアーゼの存在下カルボキシ末端が遊離
のＣ端側べプチド（以下Ｃ−成分と略記）とカルボキシ
末端が遊離または保護されているＮ端側べプチド（以下
Ｎ−成分と略記）をどちらか一方を過剰に用いて反応さ
せて、目的べプチドを合成する方法を提供する。
すなわち、本発明にかかるべプチド合成法はカルボキシ
末端遊離のＣ−成分を用い、Ｃ一成分またはＮ一成分の
いずれかを過剰に使用し、反応溶媒中に可溶性または不
落性の目的べプチド誘導体を得ることを特徴とする。し
たがって本発明方法ではカルボキシ末端が修飾されてい
ないアミノ酸またはべプチドを原料として用いることが
でき、また原料と生成物の溶解度の差異が小さい高分子
べプチド同志の縮合や高分子べプチドと低分子べプチド
の縮合が可能であるという利点を有する。
末端遊離のＣ−成分を用い、Ｃ一成分またはＮ一成分の
いずれかを過剰に使用し、反応溶媒中に可溶性または不
落性の目的べプチド誘導体を得ることを特徴とする。し
たがって本発明方法ではカルボキシ末端が修飾されてい
ないアミノ酸またはべプチドを原料として用いることが
でき、また原料と生成物の溶解度の差異が小さい高分子
べプチド同志の縮合や高分子べプチドと低分子べプチド
の縮合が可能であるという利点を有する。
また高価なべプチド原料に対して廉価なべプチド原料を
多量に用い反応を進行させることも考慮できる。本発明
を詳しく説明すると、Ｃ−成分として一般式×−Ａ−Ｏ
Ｈで表わされるアミノ酸またはべプチド誘導体を用い、
Ｎ一成分として一般式Ｈ−Ｂ−Ｙ，Ｈ−Ｂ−Ｃ−ＯＨま
たはＨ−Ｂ−Ｃ−Ｙで表わされるアミノ酸またはべプチ
ド誘導体を用いる（ただし、Ｘは末端アミノ保護基また
は末端アミノ基を保護されたアミノ酸残基もしくはべプ
チド残基；Ｙは末端カルボキシ保護基；Ａ，Ｂはそれぞ
れプロテアーゼが特異性を有するアミノ酸残基；Ｃはア
ミノ酸残基またはべプチド残基を表わす。
多量に用い反応を進行させることも考慮できる。本発明
を詳しく説明すると、Ｃ−成分として一般式×−Ａ−Ｏ
Ｈで表わされるアミノ酸またはべプチド誘導体を用い、
Ｎ一成分として一般式Ｈ−Ｂ−Ｙ，Ｈ−Ｂ−Ｃ−ＯＨま
たはＨ−Ｂ−Ｃ−Ｙで表わされるアミノ酸またはべプチ
ド誘導体を用いる（ただし、Ｘは末端アミノ保護基また
は末端アミノ基を保護されたアミノ酸残基もしくはべプ
チド残基；Ｙは末端カルボキシ保護基；Ａ，Ｂはそれぞ
れプロテアーゼが特異性を有するアミノ酸残基；Ｃはア
ミノ酸残基またはべプチド残基を表わす。
なお、Ｘ−Ａ−ＯＨにおいてＡがアスパラギン酸または
グルタミン酸残基の場合はＨ−Ｂ−ＹにおいてＢはアラ
ニン、バリン、ロイシン、イソロィシンまたはフェニル
アラニン残基でない。プロテアーゼが特異性を有するア
ミノ酸残基とは、使用するプロテアーゼが各々固有に特
異性を示すアミノ酸残基である。本発明ではセリンプロ
テアーゼ、チオールプロテアーゼ、金属中性プロテアー
ゼ、酸性プロテアーゼなどが使用され、特にトリプシン
、キモトリプシン、バプシン、パパイン、サブチリシン
、サーモリシン、カテプシン、フイシン、プロメリンが
例示され、トリプシン、キモトリプシン、パパイン、サ
ブチリシンＢＰＮ′、サーモリシンが好適に使用できる
が、トリプシンの場合Ａは塩基性アミノ酸務基であり、
キモトリプシンでは芳香族又は疎水性アミノ酸残基であ
る。パパィンの場合は、特に選択的に反応するアミ／酸
はなくＡは広範囲のアミノ酸残基をとりうる。Ｂについ
ては、サーモリシンでは疎水性、巨大アミノ酸残基であ
る。ただし、このいわゆる酵素の特異性はべプチド結合
を作るＡおよびＢにあたるアミノ酸にのみ依存するもの
ではないことは当分野でよく知られている。したがって
、目的とするべプチド誘導体と使用するプロテアーゼの
組合せにより、ＡおよびＢが決定される。×に用いられ
る末端アミノ保護基はべプチド合成に一般に使用される
ものであり、例えば、アセチル、ベンジルオキシカルボ
ニル、ｐ−メトキシベンジルオキシカルポニル、ｔーブ
チルオキシカルボニル、トシル基などであり、Ｎ−成分
の末端カルボキシ保護基Ｙは当分野で一般に使用されて
いる基、例えばアミド基、ヒドラジド基、アルコキシ基
、アリールオキシ基が利用され、アルコキシ基としてメ
トキシ、ェトキシ、ｔ−ブトキシ基などが、アリールオ
キシ基としてペンジルオキシ基、ｐ−ニトロベンジルオ
キシ基、２，４，６ートリメチルベンジルオキシ基など
が例示される。さらに必要に応じて側鎖の官能基、例え
ばの−アミノ基、の−カルボキシ基、グアニジル基、ィ
ミダゾール壕、水酸基、メルカプト基などをべプチド合
成において一般に用いられる保護基により予め保護して
おいてもよい。Ｃ一成分およびＮ一成分は遊離型であっ
てもよいし、ナトリウム、カリウム、塩酸、臭化水素酸
、トリフルオｏ酢酸、ｐートルェンスルホン酸などの塩
、その他の有機および無機の塩であっても同様に利用で
きる。
グルタミン酸残基の場合はＨ−Ｂ−ＹにおいてＢはアラ
ニン、バリン、ロイシン、イソロィシンまたはフェニル
アラニン残基でない。プロテアーゼが特異性を有するア
ミノ酸残基とは、使用するプロテアーゼが各々固有に特
異性を示すアミノ酸残基である。本発明ではセリンプロ
テアーゼ、チオールプロテアーゼ、金属中性プロテアー
ゼ、酸性プロテアーゼなどが使用され、特にトリプシン
、キモトリプシン、バプシン、パパイン、サブチリシン
、サーモリシン、カテプシン、フイシン、プロメリンが
例示され、トリプシン、キモトリプシン、パパイン、サ
ブチリシンＢＰＮ′、サーモリシンが好適に使用できる
が、トリプシンの場合Ａは塩基性アミノ酸務基であり、
キモトリプシンでは芳香族又は疎水性アミノ酸残基であ
る。パパィンの場合は、特に選択的に反応するアミ／酸
はなくＡは広範囲のアミノ酸残基をとりうる。Ｂについ
ては、サーモリシンでは疎水性、巨大アミノ酸残基であ
る。ただし、このいわゆる酵素の特異性はべプチド結合
を作るＡおよびＢにあたるアミノ酸にのみ依存するもの
ではないことは当分野でよく知られている。したがって
、目的とするべプチド誘導体と使用するプロテアーゼの
組合せにより、ＡおよびＢが決定される。×に用いられ
る末端アミノ保護基はべプチド合成に一般に使用される
ものであり、例えば、アセチル、ベンジルオキシカルボ
ニル、ｐ−メトキシベンジルオキシカルポニル、ｔーブ
チルオキシカルボニル、トシル基などであり、Ｎ−成分
の末端カルボキシ保護基Ｙは当分野で一般に使用されて
いる基、例えばアミド基、ヒドラジド基、アルコキシ基
、アリールオキシ基が利用され、アルコキシ基としてメ
トキシ、ェトキシ、ｔ−ブトキシ基などが、アリールオ
キシ基としてペンジルオキシ基、ｐ−ニトロベンジルオ
キシ基、２，４，６ートリメチルベンジルオキシ基など
が例示される。さらに必要に応じて側鎖の官能基、例え
ばの−アミノ基、の−カルボキシ基、グアニジル基、ィ
ミダゾール壕、水酸基、メルカプト基などをべプチド合
成において一般に用いられる保護基により予め保護して
おいてもよい。Ｃ一成分およびＮ一成分は遊離型であっ
てもよいし、ナトリウム、カリウム、塩酸、臭化水素酸
、トリフルオｏ酢酸、ｐートルェンスルホン酸などの塩
、その他の有機および無機の塩であっても同様に利用で
きる。
反応は使用するプロテァーゼのべプチド合成反応に適す
るｐＨ城で行なわれる。
るｐＨ城で行なわれる。
すなわち、セリンブロテアーゼ、チオールプロテアーゼ
、金属中性プロテアーゼでは大体微酸性から中性（ｐＨ
６〜８）が、酸性プロテアーゼでは酸性（ｐＨ３〜５）
が好適である。これらｐＨ域を保っため、例えば、トリ
ス緩衝液、燐酸塩緩衝液、ホゥ酸緩衝液、酢酸塩緩衝液
などを用いる。反応温度はプロテアーゼの至適温度、２
０〜５０午０で実施しうるが、特に３０〜４０ｏｏで行
うと反応が速やかに進む。反応はＣ−成分またはＮ一成
分のいずれか一方を過剰に用いて行うが、その割合は１
対１０〜１００特に１対１０〜２０が好ましい。溶媒は
水あるいはメタノール、エタノール、ジオキサン、グリ
セリン等のような水と相漆性のある煤質を含む水性媒質
を用いる。
、金属中性プロテアーゼでは大体微酸性から中性（ｐＨ
６〜８）が、酸性プロテアーゼでは酸性（ｐＨ３〜５）
が好適である。これらｐＨ域を保っため、例えば、トリ
ス緩衝液、燐酸塩緩衝液、ホゥ酸緩衝液、酢酸塩緩衝液
などを用いる。反応温度はプロテアーゼの至適温度、２
０〜５０午０で実施しうるが、特に３０〜４０ｏｏで行
うと反応が速やかに進む。反応はＣ−成分またはＮ一成
分のいずれか一方を過剰に用いて行うが、その割合は１
対１０〜１００特に１対１０〜２０が好ましい。溶媒は
水あるいはメタノール、エタノール、ジオキサン、グリ
セリン等のような水と相漆性のある煤質を含む水性媒質
を用いる。
酵素濃度は原料の濃度、プロテアーゼの種類その他の反
応条件によって一定でないが、一般に加水分解反応に使
用される量に比較して相当大量に使用される。
応条件によって一定でないが、一般に加水分解反応に使
用される量に比較して相当大量に使用される。
使用する酵素は必要に応じて前処理を行うのが好ましく
、例えば、トリブシンを予めトシルーＬーフエニルアラ
ニンクロロメチルケトンで処理し、混在するキモトリプ
シンを除いたり、パパィンを青酸で処理して活性化する
とよし、。生じた生成物は沈殿する場合は炉取してもよ
いが、高純度の目的べプチド誘導体を得るためには適当
な溶媒を用いて抽出したり、ベプチドクロマトグラフィ
ーにより精製するのが希ましい。
、例えば、トリブシンを予めトシルーＬーフエニルアラ
ニンクロロメチルケトンで処理し、混在するキモトリプ
シンを除いたり、パパィンを青酸で処理して活性化する
とよし、。生じた生成物は沈殿する場合は炉取してもよ
いが、高純度の目的べプチド誘導体を得るためには適当
な溶媒を用いて抽出したり、ベプチドクロマトグラフィ
ーにより精製するのが希ましい。
以下に実施例において本発明の実施態様を示すが、これ
ら実施例は何ら本発明を限定するものではない。実施例
１ ペンジルオキシカルボニル一Ｌーフエニルアラニン３０
取り（１．０２ｈＭ）を当量の水酸化ナトリウム溶液で
ナトリウム塩とし、Ｌ−アラニンアミド塩酸塩１５６の
９（１１ｍＭ）と共に０．２Ｍトリス緩衝液（ｐＨ７）
８の上に溶解し、結晶。
ら実施例は何ら本発明を限定するものではない。実施例
１ ペンジルオキシカルボニル一Ｌーフエニルアラニン３０
取り（１．０２ｈＭ）を当量の水酸化ナトリウム溶液で
ナトリウム塩とし、Ｌ−アラニンアミド塩酸塩１５６の
９（１１ｍＭ）と共に０．２Ｍトリス緩衝液（ｐＨ７）
８の上に溶解し、結晶。
ーキモトリプシン（Ｗｏｒ比ｉｎｇｔｏｎ社製）ｌｍＭ
溶液２私を加え室温（２５００）で一夜放置すると白色
のゲル状となる。ＩＮ塩酸を加えて懸濁し酢酸エチルで
抽出する。抽出液を無水硫酸ナトリウムで乾燥後溶媒を
蟹去し、残澄を酢酸エチルに溶解して石油エーテルで結
晶化すると、ベンジルオキシカルボニルーＬ−フエニル
アラニルーＬーアラニンアミド２６６．１雌（収率７１
％）を得る。ｍｐ２１１〜２１３℃。元素分析 Ｃ２汎
２３０４Ｎ３として計算値：Ｃ，６５．０３；日，６．
２８；Ｎ’１１．３７実験値：Ｃ，６５．２８；日，６
．３８；Ｎ，１１．２７。
溶液２私を加え室温（２５００）で一夜放置すると白色
のゲル状となる。ＩＮ塩酸を加えて懸濁し酢酸エチルで
抽出する。抽出液を無水硫酸ナトリウムで乾燥後溶媒を
蟹去し、残澄を酢酸エチルに溶解して石油エーテルで結
晶化すると、ベンジルオキシカルボニルーＬ−フエニル
アラニルーＬーアラニンアミド２６６．１雌（収率７１
％）を得る。ｍｐ２１１〜２１３℃。元素分析 Ｃ２汎
２３０４Ｎ３として計算値：Ｃ，６５．０３；日，６．
２８；Ｎ’１１．３７実験値：Ｃ，６５．２８；日，６
．３８；Ｎ，１１．２７。
実施例 ２ペンジルオキシカルボニル一Ｌーフヱニルア
ラニン２９９のｏ（１．仇ｈＭ）を当量の水酸化ナトリ
ウム水溶液でナトリウム塩とし、Ｌーロィシルグリシル
グリシン２４４０のｏ（１０．仇ｈＭ）と実施例１と同
様に反応させる。
ラニン２９９のｏ（１．仇ｈＭ）を当量の水酸化ナトリ
ウム水溶液でナトリウム塩とし、Ｌーロィシルグリシル
グリシン２４４０のｏ（１０．仇ｈＭ）と実施例１と同
様に反応させる。
減圧乾燥後、ＩＮ塩酸を加えて懸濁し酢酸エチルで抽出
する。抽出液を無水硫酸ナトリウムで乾燥後溶媒を留去
し、残湾をエーテルで＋分洗液すると、ベンジルオキシ
カルボニル−ＬーフエニルアラニルーＬーロイシルーグ
リシルーグリシン２５７脚（収率５０．５％）を得る。
ｍｐｌ９２〜１９５ｑ○。元素分析 Ｃ２７日３４０７
Ｎ４として・計算値：Ｃ，６１．５８：日，６．５１；
Ｎ，１０．６４実験値：Ｃ．６１．４８；日，６．４６
；Ｎ，１０．５９。
する。抽出液を無水硫酸ナトリウムで乾燥後溶媒を留去
し、残湾をエーテルで＋分洗液すると、ベンジルオキシ
カルボニル−ＬーフエニルアラニルーＬーロイシルーグ
リシルーグリシン２５７脚（収率５０．５％）を得る。
ｍｐｌ９２〜１９５ｑ○。元素分析 Ｃ２７日３４０７
Ｎ４として・計算値：Ｃ，６１．５８：日，６．５１；
Ｎ，１０．６４実験値：Ｃ．６１．４８；日，６．４６
；Ｎ，１０．５９。
実施例 ３ペンジルオキシカルボニル一Ｌーフエニルア
ラニン２８５雌（０．９８ｈＭ）を当量の水酸化ナトＩ
Ｊウム水溶液でナトリウム塩とし、Ｌーロィシンアミド
塩酸塩１８の９（０．１１ｍＭ）を実施例１と同様に反
応させ、生じた沈澱を後処理するとペンジルオキシカル
ボニル一ＬーフエニルアラニルーＬ−０イシンアミド２
０の９（収率４４％）を得る。
ラニン２８５雌（０．９８ｈＭ）を当量の水酸化ナトＩ
Ｊウム水溶液でナトリウム塩とし、Ｌーロィシンアミド
塩酸塩１８の９（０．１１ｍＭ）を実施例１と同様に反
応させ、生じた沈澱を後処理するとペンジルオキシカル
ボニル一ＬーフエニルアラニルーＬ−０イシンアミド２
０の９（収率４４％）を得る。
ｍＰＩ９２〜１９３００。元素分析 Ｃ２３日２９０４
Ｎ３として 計算値：Ｃ，６７．１３；日，７．１０：Ｎ，１０．２
１実験値：Ｃ，６７．１９；日，７．１３：Ｎ，１０．
３３。
Ｎ３として 計算値：Ｃ，６７．１３；日，７．１０：Ｎ，１０．２
１実験値：Ｃ，６７．１９；日，７．１３：Ｎ，１０．
３３。
実施例 ４ペンジルオキシカルボニル一Ｌーアルギニン
３１５の９（１．０２ｈＭ）とＬ−ロィシンアミド塩酸
塩１６８０の９（１０．１ｍＭ）をＩＭトリス緩衝液（
ｐＨ８）２の‘、グリセリン３の‘、エタノール３私の
濠液に溶解し、結晶トリプシン（Ｗｏｒ批ｉｎｇｔｏＴ
生製）をあらかじめトシルーＬーフエニルアラニンク。
３１５の９（１．０２ｈＭ）とＬ−ロィシンアミド塩酸
塩１６８０の９（１０．１ｍＭ）をＩＭトリス緩衝液（
ｐＨ８）２の‘、グリセリン３の‘、エタノール３私の
濠液に溶解し、結晶トリプシン（Ｗｏｒ批ｉｎｇｔｏＴ
生製）をあらかじめトシルーＬーフエニルアラニンク。
ロメチルケトソで処理して調製して２５０ｍ９を加え、
室温で一夜放置する。０．１Ｍピリジンで２そに希釈後
、不溶物を炉去する。
室温で一夜放置する。０．１Ｍピリジンで２そに希釈後
、不溶物を炉去する。
上清をアワバーラィト‐ＣＧ５０（１００〜２００メッ
シュ、０．１Ｍピリジンで緩衝化）に吸着させ、０．１
Ｍピリジン２そと０．１Ｍピリジン−酢酸（ｐＨ６）２
そで蛇修後、０．２Ｍ酢酸３そで溶出する。減圧乾燥後
い残澄をメタノールから結晶化するとペンジルオキシカ
ルボニル−Ｌ−アルギニルーＬーロィシンアミド酢酸塩
を得る（シロップ状）。元素分析 Ｃ２虹３２０４Ｎ６
として 計算値：Ｃ，５７．１３；日，７．６７；Ｎ，１９．９
８実験値：Ｃ，５７．３７；日，７．５９：Ｎ，１９．
８７。
シュ、０．１Ｍピリジンで緩衝化）に吸着させ、０．１
Ｍピリジン２そと０．１Ｍピリジン−酢酸（ｐＨ６）２
そで蛇修後、０．２Ｍ酢酸３そで溶出する。減圧乾燥後
い残澄をメタノールから結晶化するとペンジルオキシカ
ルボニル−Ｌ−アルギニルーＬーロィシンアミド酢酸塩
を得る（シロップ状）。元素分析 Ｃ２虹３２０４Ｎ６
として 計算値：Ｃ，５７．１３；日，７．６７；Ｎ，１９．９
８実験値：Ｃ，５７．３７；日，７．５９：Ｎ，１９．
８７。
実施例 ５ペンジルオキシカルボニル−Ｌーフエニルア
ラニン３１０の９（１．０４ｍＭ）に当量の水酸化ナト
リウム水溶液を加えてナトリウム塩とし、Ｌ−ロィシル
ーグリシルーグリシン２５１０ｍ９（１０．３ｍＭ）と
０．２Ｍトリス緩衝液（軸７）８机に溶解し、結晶サー
モリシン（大和化成社製）の５仇ｈＭ溶液２の‘を加え
、室温で一夜放置する。
ラニン３１０の９（１．０４ｍＭ）に当量の水酸化ナト
リウム水溶液を加えてナトリウム塩とし、Ｌ−ロィシル
ーグリシルーグリシン２５１０ｍ９（１０．３ｍＭ）と
０．２Ｍトリス緩衝液（軸７）８机に溶解し、結晶サー
モリシン（大和化成社製）の５仇ｈＭ溶液２の‘を加え
、室温で一夜放置する。
減圧乾燥後、実施例２と同様に処理してペンジルオキシ
カルボニル−ＬーフエニルアラニルーＬ−ロイラル−グ
リシルーグリシン３０１のｃ（収率５５％）を得る。ｍ
ｐｌ９２〜１９５℃。元素分析 Ｃ２７日３３０６Ｎ４
として ．計算値こＣ，６１．球：日，６．５１；Ｎ，
１０．６４実験値：Ｃ，６１．４８：日，６．４６：Ｎ
，１０．５９。
カルボニル−ＬーフエニルアラニルーＬ−ロイラル−グ
リシルーグリシン３０１のｃ（収率５５％）を得る。ｍ
ｐｌ９２〜１９５℃。元素分析 Ｃ２７日３３０６Ｎ４
として ．計算値こＣ，６１．球：日，６．５１；Ｎ，
１０．６４実験値：Ｃ，６１．４８：日，６．４６：Ｎ
，１０．５９。
実施例 ６ペンジルオキシカルボニル一Ｌーフエニルア
ラニン３０１の夕（１．０１ｍＭ）をナトリウム塩とし
Ｌ−ロィシンアミド塩酸塩２５岬（０．１８ｈＭ）を実
施例５と同様に反応させると沈澱物が生じる。
ラニン３０１の夕（１．０１ｍＭ）をナトリウム塩とし
Ｌ−ロィシンアミド塩酸塩２５岬（０．１８ｈＭ）を実
施例５と同様に反応させると沈澱物が生じる。
この沈澱物を実施例１と同様に処理してペンジルオキシ
カルボニル一Ｌーフエニルアラニル−Ｌーロイシンァミ
ド３９の９（収率６０％）を得る。ｍｐｌ９２〜１９３
０○。元素分析 Ｃ２３日２９０４Ｎ３として 計算値：Ｃ，６７．１３；日，７．１０：Ｎ，１０．２
１実験値：Ｃ，６７．２０：日７．１８：Ｎ，１０．４
１。
カルボニル一Ｌーフエニルアラニル−Ｌーロイシンァミ
ド３９の９（収率６０％）を得る。ｍｐｌ９２〜１９３
０○。元素分析 Ｃ２３日２９０４Ｎ３として 計算値：Ｃ，６７．１３；日，７．１０：Ｎ，１０．２
１実験値：Ｃ，６７．２０：日７．１８：Ｎ，１０．４
１。
実施例 ７ペンジルオキシカニボニルグリシルーＬープ
ロリル−Ｌーロイシン４４０の９（１．０５ｈＭ）を当
量の水酸化ナトリウム水溶液でナトリウム塩とし、Ｌー
ァラニンァミド塩酸塩１２５５雌（１０．２ｈＭ）と０
．２Ｍトリス緩衝液（ｐＨ７）８の‘に溶解し、サブ‐
チリシンＢＰＮ′（長瀬産業社製ナガーゼ）のｌｍＭ溶
液２の‘を加え、室温で一夜放置すると多量の沈澱が析
出する。
ロリル−Ｌーロイシン４４０の９（１．０５ｈＭ）を当
量の水酸化ナトリウム水溶液でナトリウム塩とし、Ｌー
ァラニンァミド塩酸塩１２５５雌（１０．２ｈＭ）と０
．２Ｍトリス緩衝液（ｐＨ７）８の‘に溶解し、サブ‐
チリシンＢＰＮ′（長瀬産業社製ナガーゼ）のｌｍＭ溶
液２の‘を加え、室温で一夜放置すると多量の沈澱が析
出する。
以下実施例１と同様に処理しペンジルオキシカルボニル
グリシル−ＬープロリルーＬ−ロィシル−Ｌ−アラニン
アミド３３４雌（収率６５％）を得る。ｍｐ２０６〜２
０７０。元素分析 Ｃ２４日３５０６Ｎ５として 計算値：Ｃ，斑．総；日，７．２１：Ｎ，１４．３０実
験値：Ｃ，５８．８０：日，７．０９：Ｎ，１４．１７
。
グリシル−ＬープロリルーＬ−ロィシル−Ｌ−アラニン
アミド３３４雌（収率６５％）を得る。ｍｐ２０６〜２
０７０。元素分析 Ｃ２４日３５０６Ｎ５として 計算値：Ｃ，斑．総；日，７．２１：Ｎ，１４．３０実
験値：Ｃ，５８．８０：日，７．０９：Ｎ，１４．１７
。
実施例 ８Ｑ，ごージベンジルオキシカルボニルーＬー
リジン４２５の夕（１．３仇Ｍ）を当量の水酸化ナトリ
ウム水溶液でナトリウム塩とし、Ｌーロィシンアミド塩
酸塩２３雌（０．１４ｍＭ）と０．１Ｍ燐酸塩緩衝液（
ｐＨ６）８の‘に溶解し、予め青酸で活性化したパパィ
ン（シグマ製）のｌｍＭ溶液１の‘とかＭ青酸溶液１の
‘を加え室温で一夜放置すると、沈澱が析出する。
リジン４２５の夕（１．３仇Ｍ）を当量の水酸化ナトリ
ウム水溶液でナトリウム塩とし、Ｌーロィシンアミド塩
酸塩２３雌（０．１４ｍＭ）と０．１Ｍ燐酸塩緩衝液（
ｐＨ６）８の‘に溶解し、予め青酸で活性化したパパィ
ン（シグマ製）のｌｍＭ溶液１の‘とかＭ青酸溶液１の
‘を加え室温で一夜放置すると、沈澱が析出する。
実施例１と同様に処理し、Ｑ，ど−ジベンジルオキシカ
ルボニルーＬーリジルーＬ−ロイシンアミドの結晶３９
雌を得る（収率５３％）。ｍＰ１８９〜１９０午０。元
素分析 Ｃ２８日３８０６Ｎ４として 計算値：Ｃ，６３．８６；日，７．２７；Ｎ，１０．畝
実験値：Ｃ，６３．４０；日，７．２１；Ｎ，１０．４
＆実施施例 ９Ｑ，ごージベンジルオキシカルボニルー
Ｌ−リジン３８の９（０．０卵Ｍ）を当量の水酸化ナト
リウム水溶液でナトリウム塩とし、Ｌ−ロイシンアミド
塩酸塩１５８地（０．９前Ｍ）と実施例８と同様に処理
すると沈澱物が生成する。
ルボニルーＬーリジルーＬ−ロイシンアミドの結晶３９
雌を得る（収率５３％）。ｍＰ１８９〜１９０午０。元
素分析 Ｃ２８日３８０６Ｎ４として 計算値：Ｃ，６３．８６；日，７．２７；Ｎ，１０．畝
実験値：Ｃ，６３．４０；日，７．２１；Ｎ，１０．４
＆実施施例 ９Ｑ，ごージベンジルオキシカルボニルー
Ｌ−リジン３８の９（０．０卵Ｍ）を当量の水酸化ナト
リウム水溶液でナトリウム塩とし、Ｌ−ロイシンアミド
塩酸塩１５８地（０．９前Ｍ）と実施例８と同様に処理
すると沈澱物が生成する。
この沈澱物を実施例１と同様に処理して、Ｑ，ご−ジベ
ンジルオキシカルボニル−ＬーリジルーＬ−ロイシンア
ミドの結晶３２の９（収率６８％）を得る。ｍｐ１８９
〜１９０『０。元素分析 Ｃ２８日３８０６Ｎ４として
計算値：Ｃ，６３．８６；日，７．２７：Ｎ，１０．６
４実験値：Ｃ，６３．４０：日，７．２１；Ｎ，１０．
４＆実施例 １００．０３１Ｍｔ−ブトキシカルボニル
ーＬ−リジンと０．３３７ＭＬーバリンｔ−プチルヱス
テルとを含む０．０９Ｍトリス緩衝液（ｐＨ６．３５、
但しジメチルホルムアミド６０％を含み総量０．２６５
の‘）にトリプシン（Ｗｏｒ伍ｉｎｇｏｎ社製）０．５
の９を加え、室温で一夜反応させる。
ンジルオキシカルボニル−ＬーリジルーＬ−ロイシンア
ミドの結晶３２の９（収率６８％）を得る。ｍｐ１８９
〜１９０『０。元素分析 Ｃ２８日３８０６Ｎ４として
計算値：Ｃ，６３．８６；日，７．２７：Ｎ，１０．６
４実験値：Ｃ，６３．４０：日，７．２１；Ｎ，１０．
４＆実施例 １００．０３１Ｍｔ−ブトキシカルボニル
ーＬ−リジンと０．３３７ＭＬーバリンｔ−プチルヱス
テルとを含む０．０９Ｍトリス緩衝液（ｐＨ６．３５、
但しジメチルホルムアミド６０％を含み総量０．２６５
の‘）にトリプシン（Ｗｏｒ伍ｉｎｇｏｎ社製）０．５
の９を加え、室温で一夜反応させる。
酢酸を加えて反応を止めたのち、凍結乾燥し、ｔ−プト
キシカルボニルーＬ−リジル−Ｌ−バリンｔ−ブチルェ
ステルを含む標品を得る。本品の一定量をトリフルオロ
酢酸と室温で３０〜４５分間反応させた後アミノ酸分析
にかけるとＬ−リジルーＬーバリンが同定され、その定
量値から上記反応の収率を算出すると７９％である。
キシカルボニルーＬ−リジル−Ｌ−バリンｔ−ブチルェ
ステルを含む標品を得る。本品の一定量をトリフルオロ
酢酸と室温で３０〜４５分間反応させた後アミノ酸分析
にかけるとＬ−リジルーＬーバリンが同定され、その定
量値から上記反応の収率を算出すると７９％である。
実施例 １１０．０３３Ｙｔーブトキシカルボニル−Ｌ
ーアルギニンと０．３３８ＭＬ−バリンｔープチルェス
テルとを含む０．０８Ｍトリス緩衝液（解６．６ふ但し
ジメチルホルムアミド５０％を含み総量０．２６５の‘
）にトリプシン（Ｗｏｒ仇ｉｎｇｔｏの辻製）０．５雌
を加え、室温で一夜反応される。
ーアルギニンと０．３３８ＭＬ−バリンｔープチルェス
テルとを含む０．０８Ｍトリス緩衝液（解６．６ふ但し
ジメチルホルムアミド５０％を含み総量０．２６５の‘
）にトリプシン（Ｗｏｒ仇ｉｎｇｔｏの辻製）０．５雌
を加え、室温で一夜反応される。
反応液を実施例１０と同機に処理して、ｔ−ブトキシカ
ルボニルーＬーアルギニルーＬ−バリンｔ−ブチルェス
テルを含む標品を得る。本品を実施例１０と同機の方法
で同定し、収率を算出すると７５％であった。
ルボニルーＬーアルギニルーＬ−バリンｔ−ブチルェス
テルを含む標品を得る。本品を実施例１０と同機の方法
で同定し、収率を算出すると７５％であった。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 温度２０〜５０℃において、プロテアーゼの存在下
、その至適ｐＨの媒質中で一般式Ｘ−Ａ−ＯＨで表わさ
れるアミノ酸またはペプチド誘導体に一般式Ｈ−Ｂ−Ｙ
，Ｈ−Ｂ−Ｃ−ＯＨまたはＨ−Ｂ−Ｃ−Ｙで表わされる
アミノ酸またはペプチド誘導体をいずれか一方を過剰に
用いて反応させて、一般式Ｘ−Ａ−Ｂ−Ｙ，Ｘ−Ａ−Ｂ
−Ｃ−ＯＨまたはＸ−Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｙで表わされるペプ
チド誘導体を得ることを特徴とするペプチドの新規合成
法（ただし、Ｘは末端アミノ保護基または末端アミノ基
を保護されたアミノ酸残基もしくはペプチド残基；Ｙは
末端カルボキシ保護基；Ａ，Ｂはそれぞれプロテアーゼ
が特異性を有するアミノ酸残基；Ｃはアミノ酸残基また
はペプチド残基を表わす。 なお、上記定義においてアミノ酸はすべてＬ一体をいい
、Ｘ−Ａ−ＯＨにおいてＡがアスパラギン酸またはグル
タミン酸残基の場合はＨ−Ｂ−ＹにおいてＢはアラニン
、バリン、ロイシン、イソロイシンまたはフエニルアラ
ニン残基でない。）
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP52131859A JPS6027519B2 (ja) | 1977-11-02 | 1977-11-02 | ペプチド誘導体の新規合成法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP52131859A JPS6027519B2 (ja) | 1977-11-02 | 1977-11-02 | ペプチド誘導体の新規合成法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5464692A JPS5464692A (en) | 1979-05-24 |
| JPS6027519B2 true JPS6027519B2 (ja) | 1985-06-29 |
Family
ID=15067779
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP52131859A Expired JPS6027519B2 (ja) | 1977-11-02 | 1977-11-02 | ペプチド誘導体の新規合成法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6027519B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63160598U (ja) * | 1987-04-07 | 1988-10-20 |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6041499A (ja) * | 1983-08-12 | 1985-03-05 | Asahi Chem Ind Co Ltd | ペプチドの酵素的合成法 |
| WO1987006268A1 (en) * | 1986-04-10 | 1987-10-22 | Commonwealth Scientific And Industrial Research Or | Enzymatic synthesis |
| CN104905242B (zh) * | 2014-03-14 | 2017-06-13 | 浙江欧诗漫生物股份有限公司 | 一种从珍珠中分离制备珍珠可溶食用钙和珍珠复合美白因子溶液的方法 |
Citations (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS50110094A (ja) * | 1974-02-09 | 1975-08-29 | ||
| JPS50110093A (ja) * | 1974-02-09 | 1975-08-29 | ||
| JPS50140686A (ja) * | 1974-04-24 | 1975-11-11 | ||
| JPS5251093A (en) * | 1975-10-23 | 1977-04-23 | Sagami Chem Res Center | Mthod of preparing peptides |
| JPS5251092A (en) * | 1975-10-23 | 1977-04-23 | Sagami Chem Res Center | Method of preparing peptides |
| JPS5272885A (en) * | 1975-10-23 | 1977-06-17 | Sagami Chem Res Center | Preparation of peptide |
| JPS52108089A (en) * | 1976-03-09 | 1977-09-10 | Shionogi & Co Ltd | Novel process for synthesis of peptide derivatives |
| JPS5326394A (en) * | 1976-08-24 | 1978-03-11 | Sagami Chem Res Center | Preparation of peptide |
| JPS5326392A (en) * | 1976-08-24 | 1978-03-11 | Sagami Chem Res Center | Preparation of peptide |
| JPS5326393A (en) * | 1976-08-24 | 1978-03-11 | Sagami Chem Res Center | Preparation of peptide |
-
1977
- 1977-11-02 JP JP52131859A patent/JPS6027519B2/ja not_active Expired
Patent Citations (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS50110094A (ja) * | 1974-02-09 | 1975-08-29 | ||
| JPS50110093A (ja) * | 1974-02-09 | 1975-08-29 | ||
| JPS50140686A (ja) * | 1974-04-24 | 1975-11-11 | ||
| JPS5251093A (en) * | 1975-10-23 | 1977-04-23 | Sagami Chem Res Center | Mthod of preparing peptides |
| JPS5251092A (en) * | 1975-10-23 | 1977-04-23 | Sagami Chem Res Center | Method of preparing peptides |
| JPS5272885A (en) * | 1975-10-23 | 1977-06-17 | Sagami Chem Res Center | Preparation of peptide |
| JPS52108089A (en) * | 1976-03-09 | 1977-09-10 | Shionogi & Co Ltd | Novel process for synthesis of peptide derivatives |
| JPS5326394A (en) * | 1976-08-24 | 1978-03-11 | Sagami Chem Res Center | Preparation of peptide |
| JPS5326392A (en) * | 1976-08-24 | 1978-03-11 | Sagami Chem Res Center | Preparation of peptide |
| JPS5326393A (en) * | 1976-08-24 | 1978-03-11 | Sagami Chem Res Center | Preparation of peptide |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63160598U (ja) * | 1987-04-07 | 1988-10-20 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5464692A (en) | 1979-05-24 |
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