JPS6041499A - ペプチドの酵素的合成法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はペプチド結合全切断する酵素を用いたペプチド
の合成法に関する。更に詳しくは本発明は一般式Ｘ−Ａ
　−ＯＨ（１）で表わされるアミノ酸又はペプチドと一
般式ｉ−１−Ｂ　−Ｙ（ＩＩ）で表わされるアミノ４．
・２又はペプチドとの反応による一１役式Ｘ　−Ａ　−
Ｂ　−Ｙ　＜ＩＩＩ）で表わされるペプチドの合成法に
二ひいて、基質アミノｆｆ２のアミノ基側のペプチド結
合を切断する酵素（以下Ｎ酵素と称する）或いは芳香族
アミノ酸のカルボキシル基側のペプチド結合ｆ：９１断
するか又は、酸性アミノ１了ハ　リジン、アルギニン又
はプロリンのカルボキシル基側のペプチド結合のみをＩ
ｌｄ先的にＩ；ＯＥ？する？、メ討へ（以下Ｃ酵素と称
する）ｆ：用いる事を特徴とするペプチドの合成法。

但し、前記一般式において、Ｎ１写素をＩＩＩいる時Ｘ
　ｉ−）：　Ｎ　ｉ’ｉｉａ　ｕ　栖ｇ、Ｎ　Ｓ（’＋
４　保：’ｊ：’ｌ　ｕＡ　イｉ’　７Ｊｔ１７　ミ／
　（ｌｉＱ　残基、Ｎ　ｌ”ｔＡと６１目了］保１鵬基
付加アミノ敵残基、ペプチド残糸、Ｎ端保二基側線ペプ
チド残基、側頷保亡基付加ペプチド残ｈζ又Ｕ：Ｎ端と
側鎖保ｉ泣基イ１ｊ加ペプチド残基を、人はアミン１α
残基又は側鎖保ぼと基質アミノ酸残基を、Ｂは該酵素の
基質アミノ歳残基ブチド残基又はＣ’；’ＨＡと側鎖保
：語基付加ペプチド残酸残基、Ｎ端保護基付加ペプチド
残基又はＮ端と側鎖保証基付加ペプチド残基を、Ａは該
酵素の基質アミノ酸残基ｔｔ　Ｂはアミノ酸残基又は側
鎖保護基付加アミノ酸残基を、ＹはＣ端保鐵基、Ｃ幻保
誤基付加アミノ酸残基、Ｃ端と側鎖保訴基付加アミノ酸
残基、ペプチド残基、Ｃ端保護基（＝ｊ加ペプチド残基
、側ｇｉ保護基伺側線プチド残基又ｔ：Ｊ：　Ｃ端と側
鎖保訟基付加ペプチド残基金表わす。

近年、生理活性を有するペプチドが次々に明らかにされ
、それに伴いペプチド合成法の開発も盛んである。公知
のペプチドの酵素的合成法は特定のペプチドの合成に限
られる。即ち、パパインを用いたペプチドの合成法はジ
又はトリペプチドに限られ（例ｔば、オー・グー・ベー
レンス（０、Ｊ（。

Ｂｅｈｒｅｎｓ　）とＺ　ムｍベルグマン（Ｍ、Ｂｅｒ
ｇｍａｎｎ　）　：ジャーナル拳オプ・バイオロジカル
・ケミストリー（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｂｉｏｌｏｇ
ｉｃａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　）　１２９巻５８７頁
１９３９年及びエッチ・ピー・ミレー（Ｈ，Ｂ、　Ｍｉ
　ｌａｅ　）とウオレ／・キルディ（Ｗａｒｒｅｎ　Ｋ
１１ｄａｙ　）　：　ジャーナル、オプｅオルガニック
Φケミストリー（Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ　Ｏｒｇａｎｉｃ
　Ｃ１１ｃｍ１ｓｔｒｙ　）　３０巻３４頁１９６５年
参昭〕、ペプ／ン金用いたペプチドの合成法は一般式Ｘ
−Ａ−Ｂ−ＯＨで表わされる特定のペプチドとＱ５弐１
■−Ｃ−Ｙ　で表わされる付定のアミノ酸又はペプチド
とを反応さぜる一般式Ｘ　−、Ｌ　−Ｂ　−Ｃ−Ｙで表
わされる特定のペプチドの合成法（但し。

前記一般式にｋいてＸはＮ端保愚基、Ｎ端保護基付加ア
ミノＢグ残基又はＮ端保護基付加ペプチド残基を、Ｙば
Ｃ端保護基、Ｃ端保護基付加アミノ酸残基又はＣ☆：１
；１保護基付加ペプチド残基金、ＡはＡｌａ、　（）１
ｎ、　Ａｓｎ、　ｗ　−Ｂｏｃ−Ｌｙｓ、　Ｌｅｕ又は
Ｇｌｙ　ｆ、ＢはＧｌｕ、　Ａｓｐ、　Ｇｌｎ、　Ａｓ
ｎ又はＴｒｐ　ｆ、ＣはＰｈｅ　、　Ｌｅｕ　。

１１ｅ、　Ｔｙｒ、　５−Ｂｚｌ　−Ｃｙｓ、　０−Ｂ
ｚｌ　−８ｅｒ、　Ｔｒｐ又はＭｃｔを表わす）に限ら
一ル（例えば特開昭５１−１１００９４参照）、トリプ
シンを用いたペプチドの合成法は一般式ｘ　−Ａ　−ｏ
ｎ　で表わされる特定のアミンＷ又はペプチドと一般式
Ｈ−Ｂ　−Ｙ　で表わされるｌ［を定のアミノ酸又はペ
プチドとｒ反応させる一般弐Ｘ−Ａ−Ｂ−Ｙ　で表わさ
れる°特定のペプチドの合成法（但し、前記一般式にお
いてＸはＮ端保賎基、Ｎ端保護基側線アミノ酸残基又は
Ｎ姑保護基付加ペプチド残基を、Ａはアルギニン残基又
はリジンｒＡ基を、Ｂはアミノ酸残基を、ＹはＣ端保護
基、Ｃ端保設基付加アミノ酸残基又はＣ端保護基付加ペ
プチド残基を表わす）に限られ、かつ、例えばＸ−Ａｒ
ｇ　−ＯＨで表わされるアミノ酸又はペプチドに、Ｘ−
Ｌｙｓ−ＯＨで表わされるアミノ酸又はペプチドが混入
している場合も反応が進行し、相互の分離が非常に困難
なＸ−Ａｒｇ−Ｂ−Ｙで表わされるペプチドとＸ−Ｌｙ
ｓ−Ｂ　−Ｙ　”’Ｃ嚢わされるペプチドの混合物にな
る欠点も有する（例えば特開昭５３−６２８９６　）。

本発明者は従来法の欠点を解決すべくペプチド結合の形
成について鋭意検削を重ねた結果、従来の方法とは全く
異なる酵素を用いてのペプチド合成法を完成するに至っ
たものである。基仙アミノ酸のアミノ基側のペプチド結
合を切断する酵素、或いは芳香族アミノ酸カルボキシル
基側のペプチド結合を切断するか又は、酸性アミノ酸、
リジン、アルギニン又はプロリンのカルボキシル基側の
ペプチド結合のみを切断する酵素をペプチド合成に利用
し所望のペプチドを簡単な操作で且つ高収率で合成でき
ることを見出したのは本発明が最初であり画期的な発明
であると゛に°える。特に、特定のアミノ酸又はＮ端に
特定のアミノ酸を有するペプチドのα−アミ７基と任意
のアミノ酸又はペプチドのα−カルボキシル゛基との縮
合に適用する場合、従来法と比較して極めてすぐれた方
法であり、芳香族アミン１ソ、酸性アミノ酸、リジン、
アルギニン又はプロリン、或いはＮ端に該アミンはを有
するペプチドのα−カルボキシル基と任意のアミノ酸又
はペプチドのα−アミノ基の縮合に適用する場合も、副
反応の少ない点だけ従来法よりすぐれた方法である。例
えば、Ｘ−Ａｒｇ−ＯＨで表わされるアミン〔ｄ又はペ
プチドにＸ−Ｌｙｓ−ＯＨで表わされるアミノ酸又はペ
プチドが混入している場合でもトリプシンの代りにアル
ギニンのカルボキシル基側のペプチド結合のみを切断す
る酵素を用いれは、Ｘ−Ａｒｇ−Ｂ−Ｙ　で表わされる
ペプチドのみ小米るという長所がある。

本発明の方法は前記一般式（Ｉ）で表わされるアミノ酸
又はペプチド（以下Ｎ原料と称する）と一般式（ＩＩ）
で表わされるアミノ酸又はペプチド（以下Ｃ）ＪｊＣ料
と称する）を原料とする。

Ｎ原料とＣ原料の反応はＮ原料のＣ端アミノ酸又はＣ原
料のＮ　Ｓｌ、アミノ酸の種類によって選ばれたＮ酵素
又はＣ酵素を存在させる事により起る。

即ち、Ｎ原料のＣ端アミノ酸が芳香族アミノ酸の時は芳
香族アミノ酸のカルボキシル基側のペプチド結合を切断
する酵素を、酸性“アミノ酸の鴫は酸性アミノ酸のカル
ボキシル基側のペプチド結合のみを切断する酵素を、リ
ジンの時はリジンのカルボキシル基側のペプチド結合の
みを切断する酵素を、アルギニンの時はアルギニンのカ
ルボキシル基側のペプチド結合のみを切断する酵素を、
プロリンの時はプロリンのカルボキシル基側のペプチド
結合のみを切断する酵素を、Ｃ原料のＮ端アミノｒｔ２
が成るアミノ酸の時はそのアミノ酸のアミン基側のペプ
チド結合を切断する酵素を用いる。

Ｎ酵素として（ｄ当業界で一般にアミノ酸配列決定に用
いる酵素として知られている酵素、例えばザーモリシン
〔例えばエッチ・マツバラ（Ｈ。

Ｍａｔｓｕｂａｒａ　）　ら：アーク・ビオヘム・ピオ
フイズ（Ａｒｃｈ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙ
ｓ、　）　１１５　＠３２４頁１９６６年参昭〕、ミク
ソバクター（Ｍ３’ｘｏｂａｃｔｅｒ　）　Ａ　Ｌ　−
Ｉプロテアーゼ（１〕ｒｏｔｅａｓｅ　）　ＩＩ：　（
例えばエム・　ウィンガード（Ｍ、　Ｗｉｎｇａｒｄ　
）　ら：ジャーナル・バクテリオロジ−（Ｊｏｕｒｎａ
ｌ　Ｂａｃｔｅｒｔｏｌｏｇｙ　）　１１２　＠　９４
０頁１９７２年参照〕、アルミラリア・メジ・プロテア
ーゼ（Ａｒｒｎｉｌｌａｒｉａ　ｍｅｌｌｅａ　ｐｒｏ
ｔｅａｓｅ　）　Ｃ例えばジー・ダブリュ・ルウイス（
Ｇ、　Ｗ、　Ｌｅｗｉｓ　）ら：ビオキム°ピオフイズ
・アクタ（Ｂｉｏｃｈｉｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ　、　Ａ
ｃｔａ　）５２２巻５５１頁１９７８年参照〕等が挙げ
られる。

Ｃ酵素としては当業界で一般にアミノ酸配列決定に用い
る酵素として知られている酵素、即ち、芳香族アミノ酸
のカルボキシル基側のペプチド結合を切断する酵素とし
ては例えばキモトリプシ／ら、酸性アミノ酸のカルボキ
シル基側のペプチド結合のみを切断する酵素としては例
えばスタフィロコッカル拳グロテアーゼ（５ｔａｐｈｙ
ｌｏｃｏｃｃａｌ　ｐｒｏ−ｔｅａｓｅ　）　Ｃ例えば
ジェー・フマード（Ｊ、　Ｂｉｏｕｍａｒｄ　）とシー
−７−ルートラブ（Ｇ、　Ｒ，Ｄｒａｐｅａｕ　）　：
プロシーデイング・ナショナル・アカデミ−・メジ・サ
イエンスΦイン番ニー９ニス轡ニー（Ｐｒｏｃｅｅｄｉ
ｎｇＮａｔｉｏｎａｌ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　５ｃｉ
ｅｎｑｅ　ｉｎ　Ｕ、Ｓ、Ａ、　）　６９巻３５０６頁
１９７２　年参照〕ら、リジンのカルボキシル左側のペ
プチド結合のみを切断する酵素と［７ては例えはアクロ
モバクタ−・プロテアーゼ（Ａｃｈｒｏ−ｍｏｂａｃｔ
ｅｒ　ｐｒｏｔｅａｓｅ　）　Ｉ　（例えばティー・マ
ザキ（Ｔ、　Ｍａｓａｌａ　）ら：アグリカルチャル・
アンド・バイオロジカル・ケミストリー（Ａｇｒｉｃｕ
ｌｔｕｒａｌ　ａｎｄＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｃｈｅｍ
ｉｓｔｒｙ　）　４２を１４４３頁１９７８年参照〕、
エンドプロテナー耀（Ｅｎｄｏｐｒｏｔａｉｎａｓｅ　
）　Ｌｙｓ　−Ｃ〔％開明５７−４９８８４　：Ｉ　ら
、アルギンのカルボキシル基側のペプチド結合のみを切
断する酵素としては例えばマウスの顎下線グロテアーゼ
（ｐｒｏｔｅａｓｅ　）Ａ、Ｄ（例えばエム・ポーマン
（Ｍ、　Ｂｏｅｍａｎ　）ら：ア−り・ビオヘム・ビオ
フイズ（Ａｒｅｈ、　Ｂｉｏｅｈｅｍ。

Ｂｉｏｐｈｙｓ　、　１７５　各４６３頁１９７６年、
アイ・シエケイン（Ｉ　、　５ｈｅｌｃｃｉｎ　）ら：
同りイＬ誌１８２巻６４頁１９７７年参照〕ら、プロリ
ンのカルボキシル基側のペプチド結合のみ切１ｆＪＦす
る酵素としては例えはポスト・プロリン（Ｐｏｓｔ−ｐ
ｒｏｌｉｎｅ　）切断酵素〔例えばエム・コイダ（Ｍ、
　Ｋｏｉｄａ　）とアール・ウオルタ−（Ｒ，Ｗａｉｔ
ｅｒ　）：ジャーナル・バイオロジーカル・ケミストリ
ー（Ｊｏｕｒｎａｌ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｃｈｅｍ
ｉｓｔｒｙ）　２５１巻７５９３頁１９７６年参照〕、
プロリン・スペシフィック・エンドペプチダーゼ（Ｐｒ
ｏｌｉｎｅ　５ｐｅｃｉｆｉｃ　Ｅｎｄｏｐｅｐｔｉｄ
ａｓｅ）：例えばティー・ヨシモト（Ｔ、　Ｙｏｓｈｉ
ｍｏｔｏ　）とディー・ツル（Ｄ、Ｔｕｒｕ）ニアグリ
カルチャルーアンド・バイオロジカル・ケミストリー（
Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌａｎｄ　Ｉ３ｉｏ１ｏｇｉｃ
ａｌ　Ｃｂｅｒｎｉｓｔｒｙ　）　４２巻３０１７頁１
９７８年８照〕らが挙げられる。

Ｎ端保護基としては当業界で一般にＮ端保獲基として知
られている基、例えばカルボベンゾキシ基（以下Ｚ基と
称す）、ｐ−ノドキシベンジルオキシカルボニル基（以
下ｐ　Ｂ、４　Ｚ基と称す）の如きル基（以下Ｂｏｃ基
と称す）、トシル基（以下Ｔｏｓ基と称す）等が挙けら
れる。Ｃ端保愚基としては当父界でＣ端保膣基として知
られている基、例えハメｆ　ルｘステル、エチルエステ
ル、ベンジルエステル、ｔ−ブチルニスデル、ｐ−ニト
ロベンジルエステル等が挙げられる。側鎖保忌基として
は指業界で側鎖保護基として知られている基、例えば、
Ｗ−アミノ保護基としてＺ基、Ｂｏｃノー２１９、グア
ニジノ保薗基としてＧ−ニトロ基、Ｇ−Ｔｏｓ基、Ｇ−
Ｚ基等、イミグゾリル保護基としてｉｍ−ベンジ）ｂ４
、ｉｍ−Ｚ基、ｉｍ　−Ｔｏｓ基等、リーカルボキシル
保護基としてメチルエステル、エチルエステル、ベンジ
ルエステル、ｔ−ブチルエステル、ｐ−ニトロベンジル
エステル等、ω−カルバミド保ｈζ２基としてγ−キサ
ンチル基、ビス−２，４−ジメトキシベンジル〔以下（
ＤＭＢ）２と称する〕晴、水酸保護基としてベンジル基
（以下Ｂｚｌと称ず）、第３ブチル基（以下ｔ　−Ｂｕ
　と称す）、メチルカプト保護基としてＢｚｌ　、バラ
メトキシベンジル〔以下Ｂｚｌ　（ＯＭｅ　）と称す〕
等が挙げられる。

不発１刃の反応潴碌として当業界で一般に蛋白質合成に
用いる溶媒として知られている溶媒、例えばジメチルホ
ルムアミド（以−１’　ＤＭＦと称す）、ジメチルスル
フオキ７ド（以下ＤＭＳ　Ｏと称す）、ヘキサメチレン
ファスフミド（以下ＨＭＰＡと称す）、Ｎ−メチルピロ
リドン（以下Ｎ　Ｍ　Ｐと称す）、亜リン酸ジエチル、
トリフルオロエタノール、ヘキサフルオロイソグロパノ
ール等と緩衝液との混合苗妙が好ましく、混合溶媒のｐ
Ｉ−ＩはｐＨ４〜１２、好−？ｒしくはｐＨ７〜９、で
ある。

本発明の実Ｉ已に当っては、酵素の使用割合は仕込原料
１モルに対し、限定的範囲のものではないが、０−１　
ミリモル−１０ミリ ある。Ｎ原料どＣ原料は当ｔｋ用いれば充分であるが、
所呆ならはいずれか一方の原料を多量罠用いて反応を行
う小も出来る。反応温度と反応時間は限定的範囲のもの
ではないが、一般的に言えば、サーモリシン等の側熱性
酵素の時２０℃〜８０℃、好咳しくけ３０℃〜６０℃で
１〜２０時間反応し２，キモトリプシン等非耐熱性酵素
の時２０℃〜５０℃、好ましくは３０℃〜４０℃で１〜
２０時間反応する。

反応は前記水性溶媒中で非常に円滑に進行し、生成物は
水性溶媒に難溶であるため結晶となって反応系外に析出
してくるか、又は析出して来ない時は水を等量〜ｌＯ倍
量加えて析出する。析出した結晶は常法により炉取し、
適宜に弱アルカリ性水溶液、別画性水溶液及び水で洗浄
することにより高純度の目的物を得ることができる。こ
のようにして得られた生成物の保護基は必要に応じて公
知の方法により脱離することができる。

以下実施例により本発明を史らに詳細に説明する。

実施例Ｉ Ｂｏｃアスパラギン酸ナトリウム塩４２とフェニルアラ
ニンメチルエステル塩酸塩８２を５０ｍＭリン酸緩衝液
ｐＨ７．８とＤＭＦの等量混合液２０ｍ１。

に溶解する。ジー・アール・ドラポー（　Ｇ．　Ｒ．　
Ｄｒａ−ｐｅａｕ　）らの文献〔ジャーナル・オブ・バ
イオロジカル・ケミストリー（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　
Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｃｈｅｍｉ−５ｔｒｙ　）　２
４７巻６７２０頁１９７２年〕に従って得られるスタフ
ィロコッカル嗜プロテアーゼ（５ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃ
ｃａｌｐｒｏｔｅａｓｅ　）　０．１　ｆ　を加え、振
とうしながら３７℃で２４時間反応を行なう。この反応
液に４０−の水を加える。白色沈澱物をイ（Ｉる。この
沈澱物をガラスフィルターにてＰ取し、５饅アンモニア
水、５裂クエン酸水浴液、水にて順次よく洗浄後、五ｒ
″ｌ化すン上５０℃にて減圧乾燥して、Ｂｏｃ　−Ａｓ
ｐ　−ＰＩＩＱ　−ＯＣＨ３６ｆする：得る。生成物の
元素分析値は誤差ｉｌＧ　ＩＵＩ内で理論値と一致する
。Ｂｏｃ−Ａｓｐ　−Ｐｈｅ、−０Ｃｉ（３は甘味料ア
スパルテームの前駆体として有用である。

り、施例２ 実施例１においてＢｏｃアスパラギン改ナトリウム塩４
２の代りにＢｏｃグルタミン醒ナトリウム塩４り、フェ
ニル−／”５ニンメチルエステル塩（ｐ　塩８２の代り
に通常の化学反応操作で得られるヒスチジルプロリンア
ミド１３Ｆ、５０ｍＭυ］酸緩衝液１）ｆＩ　７．８と
ＤＭＦの等景況合液２０−の代りＫ　Ｏ，１Δ１炭酸水
素アンモニウムｋｍ液ＰＩ（７，５とＤＭＦの等景況合
液２０ｍｅを用いて、実施例１と同様の操作によりＢｏ
ｃ　−Ｇｌｕ　−Ｈｔｓ　−Ｐｒｏ　−１＞ｆＩ２６　
？をイＵる。

生成物の元素分析値は誤差範囲内で理論値と一致する。

Ｂｏａ　−Ｇｌｕ　−Ｈｉｓ　−Ｐｒｏ　−ＮＩ（２は
甲状腺刺激ホルモン放出ホルモンの前駆体として有用で
ある。

実施例３ Ｂｏｃアルギニンナトリウム塩４７と血常の化学反応操
作で得られるバリルチロシンベンジルエステル塩酸塩８
２を５．Ｏｍ　Ｍ　）　’）ス塩酸緩衝液ｐＩ■７．８
とＤＭＦの等景況合液２０ｍ１に溶解する。アイ・シエ
ケイン（１，５ｈｅｋｅｉｎ　）らの前述の文献［：　
Ａｒｃｈ、　Ｂｉｏｃｈｅｒｎ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　
、　１８２　、６４　（１９７７）　］に従って得られ
るマウスの顎下線グロテアーゼ０．１１を加え、振とう
しながら３７℃で２４時間反応を行なう。この反応液に
４０ｒｎ１．の水を加える。白色沈澱物を得る。この沈
澱物をガラスフィルターにて炉取し、５チアンモニア水
、５裂クエン酸水溶液、水にて順次よく洗浄後、五酸化
リン上５００にて減圧乾燥して、Ｂｏｃ−Ａｒｇ　−Ｖ
ａｌ　−Ｔｙｒ　ＯＢｚｌ　６９を得る。生成物の元素
分析値は誤差範囲内で理論値と一致する。

マウスの顎下イあ１プロテアーゼ０．１ｒの代りにサー
モリシン（生化学工業販売）０．０１ｉｉ’を用いて全
く同様のゼ；ｊ作に」、すＢｏｃ　−Ａｒｆ　−Ｖａｌ
　−Ｔｙｒ　ＯＢｚｌ　６７をイ０る。生成物の元素分
析イ直は誤差範囲内で環１ｉｉｉｉｉ値と一致する。

通常の化学反応］）す作で得られるＢｏｃ−インロイシ
ルヒスチジルプロリンナトリウム塩８１とフェニルアラ
ニンベンジルエステルｍ　ｉ！　ｊｍ　８　？　ヲ５０
ｒｎＭリン酸緩衝液ｐＨ７，８とＤＭＥ”の等景況合液
２゜ゴにＰａ　５’ｆ（する。エム・コイダとアール・
ウォルターの前述の文ｔｉｉｋ　（Ｊ、Ｂｉｏｌ、　Ｃ
ｈｅｒｎ、　、　２５１．７５９３　（１９７６）〕に
従い得られるボスト−プロリン切Ｉｆ７１９素ｏ、ｔ　
ｙを加え、振とうしながら３０℃で２８時間反応を行な
う。この反応液に４０−の水を加える。白色沈澱物を得
る。この沈澱物をガラスフィルターにて戸数し、５俤ア
ンモニア水　５％クエン酸水溶液、水にて順次よく洗浄
後、五酸化リン上５（Ｉｃにて減圧乾燥してＢｏｃ−Ｔ
ｉｅ　−Ｈｌｓ　−Ｐｒｏ　−ｐＨｅ−０−Ｂｚｌ　８
　ｒを得る。生成物の元素分析値は誤差範囲内で理論値
と一致する。

常連の操作により得られるＢｏｃ　−Ａｒｇ　−Ｖａｌ
　−１”ｙｒ−ＯＢｚｌ　＋３１Ｆをブイ・ドウ・ビノ
ード（Ｖ、　ｄｕ　Ｖｊｇｎｃａｕｄ　）ら〔ジャーナ
ル・オプ・アメリカン・ケミカル・ソサイアティ（Ｊｏ
ｕｒｎａｌ　ｏｆ〕ｍｅｒｉｃａｎ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ
Ｓｏｃｉｅｔｙ　）　７５巻４８７９頁１９５３年と７
６巻３１１５頁１９５４年〕に従い液体アンモニア−金
属ナトリウムで接触還元してＢｏｃ　−Ａｒｇ−Ｖａｌ
　−Ｔｙｒ　−０Ｉ−ｆ　３　ｆ　を得る。又、前述の
操作により得られるＢｏｃ−１１ｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−
Ｐｂｅ−０−Ｂｚｌ　８　？　をピー・シーバー（Ｐ、
　５ｉｅｂｅｒ　）ら〔ヘルプ・キム・アクタ（Ｈｃｌ
ｖ。

ｃｂｉｍ、　Ａｃｔａ　）　ｓｓ巻１２４３頁１９７２
年〕に従いトリフルオロ酢酸処理してＨ−Ｉ　ｌｅ　−
Ｈｉｓ　−Ｐｒｏ　−Ｐｈｅ−♀−Ｂｚ１７ｒを得る。

Ｂｏａ　−Ａｒｇ−Ｖａｌ　−Ｔｙｒ−ＯＨ３ｔとＩ（
−１１ｅ　−Ｈｊｓ　−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ　−０−Ｂｚｌ
　６　ｆを５０ｍＭ）リス塩酸緩術液ｐＨ７，８とＤＭ
Ｓ　Ｏの等景況合液２０　ｍｅ　ｖｔｃ　Ｐａ　ｈ’ｉ
する。キそトリプシン〔ワシントン（Ｗｏｒｔ、ｈｉｎ
ｇｔｏｎ　）社の脱塩結晶標品〕を６０巧加え、２５℃
で２４時間培養する。ＩＮ塩酸でｐＨを２．２に下け゛
て反応を停止さぜ、４０ｍの水を加え、白色沈澱物を戸
数し、前述の５％アンモニア水、５係クエン酸水Ｙ＋、
’ｉ　’＋夜、水にて順次よく洗浄後、五酸化リン上５
０℃にて減圧乾燥してＢｏｃ　−Ａｒｇ　−Ｖａｌ　−
Ｔｙｒ　−Ｉ　ｌｅ　−１１、ｉｓ−Ｐｒｏ　−Ｐｈｅ
　−０−ＢＺＩ　３　’ｉ！を得る。生成物の元素分析
］直は誤差範囲内で理ｉ１−値と一致する。Ｂｏｃ　−
Ａｒｇ−Ｖａｌ　−Ｔｙｒ−１１ｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−
Ｐｈｅ−０−Ｂｚｌ　は血圧調節剤として有用なアンジ
オテンシン■の前駆体として有用でちる。

実施例４ Ｂｏｃ−システインナトリクムｊ益４２とリジンベンジ
ルエステル塩酸塩６２を５０ｍＭ）リス塩酸塩緩衝液ｐ
Ｉ−１，７，８とエタノールの咎旦混合液２０ｍＡ　’
ＶＣ＊　ｆＱ’ｆ、する。エム・ウィンガード（Ｒ４，
Ｗｉｎｇａｒｄ　）らの１）；Ｊ述の文献ＣＪ、　Ｂａ
ｃｔｅｒｉｏｌ、　、　１１２．９４０　（１９７２）
）も・こ従って’ｆＧられるミクソバクター（１ｖｉｙ
ｘｏｂａｃｔｅｒ　）ＡＬ−Ｉプｌコテアーゼ（Ｐｒｏ
ｔｅａｓｅ　）　ＩＦ　Ｏ，１ｆを加え、３５℃で２４
時間反応を行なう。この反応液に４０πｌの水を加える
。白色沈澱をガラスフィルターで炉取する。５襲アンモ
ニア水、５φクエン酸水溶液、水にて順次よく洗浄後、
五酸化リン上５０℃にて減圧乾燥してＢｏｃ　−Ｃｙｓ
　−Ｌｙｓ　−ＯＢｚｌ　５　ｆ待る。

実施例３に記載のアンモニア・金属ナトリウムによる接
触還元にてＢｏａ−Ｃｙｓ　Ｌｙｓ　−ＯＨ３’ｉｆを
イ（Ｉる。

Ｂｏｃ　−Ｃｙｓ−Ｌｙｓ　−ＯＨｆ：ＮａＯＨで中和
して得られるＢ６ｅシステニルリジルナトリウム塩３２
とアスパラギンベルジルエステル塩酸塩５２を５０ｍＭ
）リス塩酸塩緩衝液ｐＨ７，８とエタノールの等Ｊｉｌ
−混合液２０ゴに溶解する。ティー・マサキ（Ｔ、　Ｍ
ａｓａｌ＜ｉ　）らの前述の文献（Ａｇｒｉｃ、　Ｂｉ
ｏｌ、　ｃｈｅｒｎ、　４２＋　１４４３　（１９７８
））に従って得られるアクロモバクタ−・グロテアーゼ
Ｉ　（Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ　ｐｒｏｔｅａｓｅ
　Ｉ　）　０．１９　を加え、同様の操作によりＢｏａ
　−Ｃｙｓ−Ｌｙｓ　−Ａｓｎ　−０−Ｂｚｌ　４　ｆ
を得る。生成物の元素分析値は誤差範囲内で理１ｆ、ｊ
ｆｉ値と一致する。

Ｂｏｃ−Ｃｙｓ　−Ｌｙｓ　−Ａｓｎ−０−Ｂｚｌはソ
マトスフチンの中間／ｉＸ′＋とじて有用である。

特許出願人　旭化成工業株式会社

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 一般式　Ｘ−Ａ−ＯＩ−Ｉ　で表わされるアミノ酸又は
   ペプチドと一般式Ｈ−Ｂ　−Ｙ　で表わされるアミン酸
   又はペプチドとの反応による一般式Ｘ−Ａ−Ｂ−Ｙ　で
   表わされるペプチドの合成法において、基質アミノ酸の
   アミン基側のペプチド結合を切断する酵素（以下Ｎ酵素
   と称する）、或いハ芳香族アミノ酸のカルボキシル基側
   のペプチド結合全切断するか又は、酸性アミノ酸、リジ
   ン、アルギニン又はプロリンのカルボキシル基側のペプ
   チド結合のみ全切断する酵素（以下Ｃ酵素と称する）ｆ
   ：用いる事を特徴とするペプチドの合成法。 但し、前記一般式において、Ｎ酵素金円いる時ＸはＮ端
   保護基、Ｎ端保護基付加アミノ散残基。 Ｎ端と側頌保護基付加アミノ酸残基、ペプチド残基、Ｎ
   端保１ａ基付加ペプチド残基、側鎖保護基付加ペプチド
   残基又はＮ端と側鎖保護基付加ペプチド残基金、Ａはア
   ミノ酸残基又は側鎖保詑基付加アミノ酸残基を、Ｂは該
   酵素の基質アミノ酸残基プチド残基又はＣ端と側鎖保護
   基付加ペプチド残基残基、Ｎ端保護基付加ペプチド残基
   又はＮ端と側鎖保護基付加ペプチド残基を、Ａは該「１
   に素の基質アミノ酸残基ｆｆ：ｓ　Ｂはアミノ酸残基又
   は側３）゛１保護基付加アミノ酸残基を、ＹはＣ端保勲
   基、Ｃ端保護基付加アミノ酸残基、Ｃ端と側鎖保、１３
   基付加アミノ酸残基、ペプチド残基、Ｃ端保護基付加ペ
   プチド残基、側鎖保誰基付加ペプチド残基又はＣ端と側
   鎖保護基付加ペプチド残基金表わす。