JPS60221099A - スクロ−スグルコシルトランスフエラ−ゼによるグルコシル化法 - Google Patents
スクロ−スグルコシルトランスフエラ−ゼによるグルコシル化法Info
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- JPS60221099A JPS60221099A JP7507284A JP7507284A JPS60221099A JP S60221099 A JPS60221099 A JP S60221099A JP 7507284 A JP7507284 A JP 7507284A JP 7507284 A JP7507284 A JP 7507284A JP S60221099 A JPS60221099 A JP S60221099A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、三糖類誘導体の新規な合成方法に関するもの
である。スクロースグルコシルトランスフェラーゼの転
移反応によるアルドースのグルコシル化については、ス
クロースを供与体として遊離のアルドースに対するグル
コシル基の転移反応が知られている。（Ｗ、Ｗａｕｃｈ
ｕｎｃｌ ＩＦ。
である。スクロースグルコシルトランスフェラーゼの転
移反応によるアルドースのグルコシル化については、ス
クロースを供与体として遊離のアルドースに対するグル
コシル基の転移反応が知られている。（Ｗ、Ｗａｕｃｈ
ｕｎｃｌ ＩＦ。
Ｅｌ、Ａａｍａ 、Ｚ、Ｚｕｃｋｅｒｉｎｄ ２６ 、
２１〜２５ 、 １９７６）。
２１〜２５ 、 １９７６）。
しかしながら、スクロースを供与体とした場合には最も
転移率のよいＤ−アラビノースを受容体とした場合でも
転移生成物である三糖類誘導体は約６ｑｂ得られるのみ
で大部分はパラチノースである。
転移率のよいＤ−アラビノースを受容体とした場合でも
転移生成物である三糖類誘導体は約６ｑｂ得られるのみ
で大部分はパラチノースである。
本発明者等はスクロースグルコキシトランスフェラーゼ
が、該酵素本来の基質であるスクロース以外のグルコシ
ル供与体および受容体を用いて高収率かつ選択的なアル
ドースのグルコシル化に利用できることを見出して本発
明を完成するに至った。
が、該酵素本来の基質であるスクロース以外のグルコシ
ル供与体および受容体を用いて高収率かつ選択的なアル
ドースのグルコシル化に利用できることを見出して本発
明を完成するに至った。
すなわち本発明は、スクロースグルコシルトランスフェ
ラーゼを用い、６’−を換スク０−ス誘導体をグルコク
ル供与体とし、フラノシド構造を持つアルコールを受容
体とすることを特徴とするグルコシル化法を提供するも
のである。
ラーゼを用い、６’−を換スク０−ス誘導体をグルコク
ル供与体とし、フラノシド構造を持つアルコールを受容
体とすることを特徴とするグルコシル化法を提供するも
のである。
本発明に用いられるスクロースグルコシルトランスフェ
ラーゼはある種の細菌、例えばプロタミノバクタ−・ル
ブラム（Ｐｒｏｔａｍｉｎｏｂａｃｔｅｒｒｕｂｒｕｍ
ＯＢＳ Ｎｈ ５７４７７ ） やセラチア・プリム
チ力（５ｅｒｒａｔｉａ ｐｌｙｍｕｔｈｉｃａ ’Ｅ
Ｃ１Ｂ ｌｋ ８２８５ ） Ｚどを蔗糖の存在下で培
養することによって生産される。この酵素は細菌の菌体
内に存在するので菌体そのものを酵素剤として使用する
こともできる。しかし上記細菌源に限定されるものでは
ない。
ラーゼはある種の細菌、例えばプロタミノバクタ−・ル
ブラム（Ｐｒｏｔａｍｉｎｏｂａｃｔｅｒｒｕｂｒｕｍ
ＯＢＳ Ｎｈ ５７４７７ ） やセラチア・プリム
チ力（５ｅｒｒａｔｉａ ｐｌｙｍｕｔｈｉｃａ ’Ｅ
Ｃ１Ｂ ｌｋ ８２８５ ） Ｚどを蔗糖の存在下で培
養することによって生産される。この酵素は細菌の菌体
内に存在するので菌体そのものを酵素剤として使用する
こともできる。しかし上記細菌源に限定されるものでは
ない。
又特公昭５Ｂ−５６９５９号公報に開示されているよう
に固定化剤によって固定化した酵素はより工業的規模で
、経済的に用いることもできる。
に固定化剤によって固定化した酵素はより工業的規模で
、経済的に用いることもできる。
本発明の方法で供与体として用いられる６′−置換スク
ロース誘導体を得るための合成法は公知である。その概
要と参考文献を次のａ）〜Ｃ）に示す。
ロース誘導体を得るための合成法は公知である。その概
要と参考文献を次のａ）〜Ｃ）に示す。
（ａ） ６’ −りｏロー６′−チオキシスクロースの
合成（Ｊ、 Ｇ、 Ｂｕｃｈａｎａｎ 、 Ｄ、 Ａ、
Ｃｕｍｍｅｒｓｏｎ 、 Ｄ、 Ｍ。
合成（Ｊ、 Ｇ、 Ｂｕｃｈａｎａｎ 、 Ｄ、 Ａ、
Ｃｕｍｍｅｒｓｏｎ 、 Ｄ、 Ｍ。
Ｔｕｒｎｅｒ 、０ａｒｂｏｈｙｄｒ、Ｒｅｓ、、 ２
１．２８５ （１９７２） 〕Ｊ、 Ｇ、 Ｂｕｃｈａ
ｎａｎ 、Ｄ、 Ａ、 Ｏｕｍｍｅｒｓｏｎ 、Ｄ、
Ｍ。
１．２８５ （１９７２） 〕Ｊ、 Ｇ、 Ｂｕｃｈａ
ｎａｎ 、Ｄ、 Ａ、 Ｏｕｍｍｅｒｓｏｎ 、Ｄ、
Ｍ。
Ｔｕｒｎｅｒ の方法に従って、スクロース（１）から
３行程で、２．＆ムＩ ＜Ｉ ｔ、−ベンター０−７セ
チルスクロース（Ｉｔ）を合成し、これをピリジン中２
当量のトリフェニルホスジインおよび１０当量の四塩化
炭素とともに５５〜６０℃に２５分間加熱し、相当する
６′−クロロ−６′一デオキシ誘導体＠）を得た。つい
で、これをメタノール中ナトリウムメトキシドを用いて
脱２アセチル化し、６′−クロロ−６１−デオキシスク
ロース（転）を得た。２行程合わせて７２％の収率であ
った。
３行程で、２．＆ムＩ ＜Ｉ ｔ、−ベンター０−７セ
チルスクロース（Ｉｔ）を合成し、これをピリジン中２
当量のトリフェニルホスジインおよび１０当量の四塩化
炭素とともに５５〜６０℃に２５分間加熱し、相当する
６′−クロロ−６′一デオキシ誘導体＠）を得た。つい
で、これをメタノール中ナトリウムメトキシドを用いて
脱２アセチル化し、６′−クロロ−６１−デオキシスク
ロース（転）を得た。２行程合わせて７２％の収率であ
った。
（１） （ｎ）
（Ｉｌｌ、Ｒ＝ＡＣ）
（ｍＶ、Ｒ＝Ｈ）
（ｂ）６’−ｏ−メチルスクロースの合成Ｍ、 Ｇ、
Ｌｉｎｄｌｅｙ 、Ｇ、 Ｇ、 Ｂｉｒｃｈ 、Ｒ，Ｋ
ｈａｎ 。
Ｌｉｎｄｌｅｙ 、Ｇ、 Ｇ、 Ｂｉｒｃｈ 、Ｒ，Ｋ
ｈａｎ 。
０ａｒｂｏｈｙｄｒ、Ｒｅｓ、、４３３６０ （１９７
５）（ｃ） ６’−〇−デオキスクロースの合成Ｒ，Ｋ
ｈａｎ 、 Ａｄｖ、 ０ａｒｂｏｈｙｄｒ、 （３ｈ
ａｍ、 Ｂｉｏｃｈａｍ 。
５）（ｃ） ６’−〇−デオキスクロースの合成Ｒ，Ｋ
ｈａｎ 、 Ａｄｖ、 ０ａｒｂｏｈｙｄｒ、 （３ｈ
ａｍ、 Ｂｉｏｃｈａｍ 。
と、 ２６４ （１９７６）
しかし本発明の方法において、供与体とじて用いられる
６′−置換スクロース誘導体は、上記の具体例により得
られたものに限定されるものではない。
６′−置換スクロース誘導体は、上記の具体例により得
られたものに限定されるものではない。
本発明において受容体はフラノシド構造を持つアルコー
ルである。たとえばベントフラノシド、ヘキソフラノシ
ド及び他のテトラヒドロフラン誘導体を挙げることがで
きる。
ルである。たとえばベントフラノシド、ヘキソフラノシ
ド及び他のテトラヒドロフラン誘導体を挙げることがで
きる。
本発明におけるグルコシル化反応は、スクロースグルコ
シルトランスフェラーゼが活性に作用する条件下で慣用
のやり方で行うことができる。また生成物の分離精製も
、慣用の精製法に従い行うことができる。
シルトランスフェラーゼが活性に作用する条件下で慣用
のやり方で行うことができる。また生成物の分離精製も
、慣用の精製法に従い行うことができる。
グルコシル化反応の実施及び生成物の精製の好ましい一
実施態様を次に説明する。
実施態様を次に説明する。
供４体として６′−クロロ−６′−デオキシスクロース
（転）を用いる場合を例にとると、前記（ａ）で示した
ようにして得た６′−クロロ−６１−デオキシスクロー
ス（転）１，１〜ｔ４当量と受容体たとえば後記の（Ｖ
−Ｘｌｌ）１当量を、受容体１ ｍｍｏｌ当）五〇−の
α口２Ｍプロピオン酸カルシウム緩衝液（Ｉ）Ｈ５，５
）に溶解し、２５℃で３０分間ブレインキュベーション
する。この溶液に固定化スクロースグルコシルトランス
フェラーゼを受容体１ ｍｍｏｌ 当シ２５〜３５η加
え、攪拌しながら２５℃で２４時間インキュベーション
する。反応後、固定化スクロースグルコシルトランスフ
ェラーゼを炉別し、上記の緩衝液で数回洗浄する。Ｆ液
と洗液を合せ、そのま＼４５℃で減圧濃縮し、得られる
残渣をシリカゲルカラムを用いて分離精製して生成物を
得ることができる。展開溶媒としては（Ａ）酢酸エチル
：エタノール：水（６：２：１）、またはφ）クロロホ
ルム：メタノール：水（４０：２０：１）を用いるとと
ができる。
（転）を用いる場合を例にとると、前記（ａ）で示した
ようにして得た６′−クロロ−６１−デオキシスクロー
ス（転）１，１〜ｔ４当量と受容体たとえば後記の（Ｖ
−Ｘｌｌ）１当量を、受容体１ ｍｍｏｌ当）五〇−の
α口２Ｍプロピオン酸カルシウム緩衝液（Ｉ）Ｈ５，５
）に溶解し、２５℃で３０分間ブレインキュベーション
する。この溶液に固定化スクロースグルコシルトランス
フェラーゼを受容体１ ｍｍｏｌ 当シ２５〜３５η加
え、攪拌しながら２５℃で２４時間インキュベーション
する。反応後、固定化スクロースグルコシルトランスフ
ェラーゼを炉別し、上記の緩衝液で数回洗浄する。Ｆ液
と洗液を合せ、そのま＼４５℃で減圧濃縮し、得られる
残渣をシリカゲルカラムを用いて分離精製して生成物を
得ることができる。展開溶媒としては（Ａ）酢酸エチル
：エタノール：水（６：２：１）、またはφ）クロロホ
ルム：メタノール：水（４０：２０：１）を用いるとと
ができる。
本発明によシ得られる生成物は、各種化学工業における
製造原料、たとえば醗酵工業原料、界面活性剤原料、プ
ラスチック原料、可塑剤原料、となる他に、生理活性を
有するオリゴ糖や抗生物質の製造原料として有用である
。
製造原料、たとえば醗酵工業原料、界面活性剤原料、プ
ラスチック原料、可塑剤原料、となる他に、生理活性を
有するオリゴ糖や抗生物質の製造原料として有用である
。
実施例
６′−クロロ−６′−デオキシスクロース（ＩＶ）を供
与体とし、下記の化合物（ｖ −ｘｎ ）を受容体とし
て用いた。上に詳しく説明したようにして、グルコシル
化反応を行い、次いで精製した。
与体とし、下記の化合物（ｖ −ｘｎ ）を受容体とし
て用いた。上に詳しく説明したようにして、グルコシル
化反応を行い、次いで精製した。
固定化スクローストランスフェラーゼの調製は、特公昭
５Ｂ−５６９５９号公報の実施例１の方法に準じて行っ
た。すなわちスクロース５チ、コーンスチーゾリカ−３
’％％ リン酸２ナトリウムａ３％および塩化ナトリウ
ムα２％から成るｐＨ７の培地１５Ａを３０ｔのジャー
ファーメンタ−に入れて殺菌し、プロタミノバクタ−・
ルブラムＯＢＳ Ｎｈ５７４７７を接種して、温度２８
℃、通気量７．５ Ｌ ／ ｍｉｎ 、攪拌速度４００
ｒ、 ｐ、 ｍで１６時間培養してグルコシルトランス
フェラーゼ活性の高い培養物を得、遠心分離して酵素を
含有する菌体のスラリー ２．５１を得た。
５Ｂ−５６９５９号公報の実施例１の方法に準じて行っ
た。すなわちスクロース５チ、コーンスチーゾリカ−３
’％％ リン酸２ナトリウムａ３％および塩化ナトリウ
ムα２％から成るｐＨ７の培地１５Ａを３０ｔのジャー
ファーメンタ−に入れて殺菌し、プロタミノバクタ−・
ルブラムＯＢＳ Ｎｈ５７４７７を接種して、温度２８
℃、通気量７．５ Ｌ ／ ｍｉｎ 、攪拌速度４００
ｒ、 ｐ、 ｍで１６時間培養してグルコシルトランス
フェラーゼ活性の高い培養物を得、遠心分離して酵素を
含有する菌体のスラリー ２．５１を得た。
アルギン酸ナトリウムの４チ水溶液２．５ｔを前記の菌
体スラリーとよく混合し、先端にφｒ１．６諺の細孔多
数を有するダイスを取りつけた円筒型の押出し機に入れ
、空気圧をかけて混合物を細孔よシ下方に押出した。押
出し機の下方には、ｃＬ１５Ｍ塩化カルシウム溶液１０
Ｌを入れた２０を容の容器を置き、攪拌機によって溶液
を攪拌しておき、上方から落下する混合物の液滴を受け
た。押出しは１０分はどで終了したが、その後２時間塩
化カルシウム溶液の攪拌を続け、液内に生じた粒状化物
の物理性を強化させた。その後、濾過によシ粒状物を回
収し、よく水洗した。得られた粒状物の重量は４ｋｇで
あった。
体スラリーとよく混合し、先端にφｒ１．６諺の細孔多
数を有するダイスを取りつけた円筒型の押出し機に入れ
、空気圧をかけて混合物を細孔よシ下方に押出した。押
出し機の下方には、ｃＬ１５Ｍ塩化カルシウム溶液１０
Ｌを入れた２０を容の容器を置き、攪拌機によって溶液
を攪拌しておき、上方から落下する混合物の液滴を受け
た。押出しは１０分はどで終了したが、その後２時間塩
化カルシウム溶液の攪拌を続け、液内に生じた粒状化物
の物理性を強化させた。その後、濾過によシ粒状物を回
収し、よく水洗した。得られた粒状物の重量は４ｋｇで
あった。
３０％ポリエチレンイミン２７０ｆを約３ｔの水で稀釈
してから、稀塩酸で中和してｐＨｌ ！ｌＬ５に調整し
、次で総量を４ｋｌ？とじた。この溶液中に前記の粒状
物全量を投入し、１０分間ゆるやかに攪拌した後、濾過
して、粒状物を回収した。
してから、稀塩酸で中和してｐＨｌ ！ｌＬ５に調整し
、次で総量を４ｋｌ？とじた。この溶液中に前記の粒状
物全量を投入し、１０分間ゆるやかに攪拌した後、濾過
して、粒状物を回収した。
粒状物中にはポリエチレンイミン約２Ｏｆが滲透したこ
とが、廃液の固形分分析によって推定された。そこで、
その２．５倍量である５０ｔのグルタルアルデヒドを含
む（Ｌ５％グルタルアルデヒド１０ｔを調製し、ポリエ
チレンイミンを含ませた粒状物を投入し、３０分ゆるや
かに攪拌後、濾過して粒状物を回収し、充分に水洗した
。
とが、廃液の固形分分析によって推定された。そこで、
その２．５倍量である５０ｔのグルタルアルデヒドを含
む（Ｌ５％グルタルアルデヒド１０ｔを調製し、ポリエ
チレンイミンを含ませた粒状物を投入し、３０分ゆるや
かに攪拌後、濾過して粒状物を回収し、充分に水洗した
。
以上の各操作はすべて２５℃近辺で行なった。
受容体として下記のものを各々用いた。
受容体：
メチルβ−ツーアラビノフラノシド（Ｖ）メチルα−ク
ーアラビノフラノシド（Ｖｌ）メチルβ−ツーリボフラ
ノシド（■） メチルβ−クーキシロフラノシド（■）メチルα−Ｌ−
キシロフラノシド（■）メチル２−デオキシ−Ｄ−エリ
トロ−ペント７２ノ７ド（Ｘ） メチル３−デオキシ−α−り一トレオーベントフラノシ
ド（ＸＩ） （Ｒｅ）−テトラヒドロフリフリとアルコール（ＸＩ＋
） これら受容体の合成法は公知であり、その参老文献を以
下に示す。
ーアラビノフラノシド（Ｖｌ）メチルβ−ツーリボフラ
ノシド（■） メチルβ−クーキシロフラノシド（■）メチルα−Ｌ−
キシロフラノシド（■）メチル２−デオキシ−Ｄ−エリ
トロ−ペント７２ノ７ド（Ｘ） メチル３−デオキシ−α−り一トレオーベントフラノシ
ド（ＸＩ） （Ｒｅ）−テトラヒドロフリフリとアルコール（ＸＩ＋
） これら受容体の合成法は公知であり、その参老文献を以
下に示す。
Ｖ、Ｗ、■：工、 Ａｕｇｅａｔａｄ 、 Ｂ、 Ｂｅ
ｒｎｅｒ 、 ＡｃｔａＯｈｅｍ、 ８ｃａｎｄ、、
８．２５１ （１９５４）■ ： Ｇ、Ｒ，Ｂａｋｅｒ
、Ｄ、０．０．Ｓｍ１ｔｈ 、Ｊ、Ｏｈｅｍ、Ｂｏａ
、。
ｒｎｅｒ 、 ＡｃｔａＯｈｅｍ、 ８ｃａｎｄ、、
８．２５１ （１９５４）■ ： Ｇ、Ｒ，Ｂａｋｅｒ
、Ｄ、０．０．Ｓｍ１ｔｈ 、Ｊ、Ｏｈｅｍ、Ｂｏａ
、。
１９５４ ２１５１
■：上記の工、Ａｕｇｅｅｔａａ、 ＬＢｅｒｎｅｒ
の方法を６体に適用 Ｘ ： Ｒ，Ｅ、Ｄｅｒｉａｚ 、 Ｗ、Ｇ、Ｄｖｅｒ
ａｎｄ 、 Ｍ、５ｔａｃｅｙ 。
の方法を６体に適用 Ｘ ： Ｒ，Ｅ、Ｄｅｒｉａｚ 、 Ｗ、Ｇ、Ｄｖｅｒ
ａｎｄ 、 Ｍ、５ｔａｃｅｙ 。
Ｌ、 Ｆ−Ｗｉｇｇｉｎｇｓ 、Ｊ、 （！ｈｅｍ、
Ｓｏａ、、 １９４６．２８５６Ｍ ： Ｈ，Ｓ、 Ｋ
ｈａｄｅｍ 、Ｔ、 Ｄ、 Ａｕｄｉｃｈｙａ 、 Ｍ
、 、ｒ、 ＷｉｔｅｅＯａｒｂＯｈｙｄｒ、 Ｒｅｓ
。、 ３３．３２９ （１９７４）生成物として下記の
ものが得られる。
Ｓｏａ、、 １９４６．２８５６Ｍ ： Ｈ，Ｓ、 Ｋ
ｈａｄｅｍ 、Ｔ、 Ｄ、 Ａｕｄｉｃｈｙａ 、 Ｍ
、 、ｒ、 ＷｉｔｅｅＯａｒｂＯｈｙｄｒ、 Ｒｅｓ
。、 ３３．３２９ （１９７４）生成物として下記の
ものが得られる。
生成物：
メチル５−Ｏ−（α−Ｄ−グルコピラノシル）−β−Ｄ
−アラビノフラノシド（Ｘｎｌ）メチル５−Ｏ−（α−
Ｄ−グルコピラノシル）−α−Ｄ−アラビノフラノシド
（ＸｔＶ）メチル５−Ｏ−（α−Ｄ−グルコピラノシル
）−β−Ｄ−リボフラノシド（ＸＶ） メチル５−Ｏ−（α−Ｄ−ゲルコピ２ノシル）−β−Ｄ
−キシロフラノシド（ＸＶＩ）メチル５−Ｏ−（α−Ｄ
−グルコヒラノシル）−α−Ｌ−キシロフラノシド（Ｘ
■） メチル２−デオキシ−３−０−（α−Ｄ−グルコヒラノ
シル）−β−Ｄ−エリトロベントピラノシド（ｘＶＩ） メチル３−デオキシ−５−Ｏ−（α−Ｄ−グルコピラノ
シル）−α−り一トレオーペントピ２ノシド（ＸＩＸ
） メチル３−デオキシ−２−０−（α−Ｄ−グルコピラノ
シル）−α−Ｄ−）／オーペントピラノシド（ＸＸ） （Ｒ）−テトラヒドロフルフリルα−Ｄ−／ルコピラノ
シド（ＸＸＩ） 実施例１ メチル５−０−（α−Ｄ−グルコピラノシル
）−β−Ｄ−アラビノフラ ノシド（ＸＩ［ｌ） の製造 グルコシル供与体■２．１０ｆ（５，８２ｍｍｏｌ）お
よび受容体ｖ６８８■（４，１７ｍｍｏｌ ） を緩衝
液１２．５ｍに溶かし、この溶液に固定化菌体１００′
ｑを加え、前記一般的方法に準じて反応させた。得られ
九粗生成物をシリカゲルカラムによシ、展開溶媒Ｂを用
いて精製し、ＸＩ［Ｉ １．０９１（収率８０％）を無
定形の粉末として得た。
−アラビノフラノシド（Ｘｎｌ）メチル５−Ｏ−（α−
Ｄ−グルコピラノシル）−α−Ｄ−アラビノフラノシド
（ＸｔＶ）メチル５−Ｏ−（α−Ｄ−グルコピラノシル
）−β−Ｄ−リボフラノシド（ＸＶ） メチル５−Ｏ−（α−Ｄ−ゲルコピ２ノシル）−β−Ｄ
−キシロフラノシド（ＸＶＩ）メチル５−Ｏ−（α−Ｄ
−グルコヒラノシル）−α−Ｌ−キシロフラノシド（Ｘ
■） メチル２−デオキシ−３−０−（α−Ｄ−グルコヒラノ
シル）−β−Ｄ−エリトロベントピラノシド（ｘＶＩ） メチル３−デオキシ−５−Ｏ−（α−Ｄ−グルコピラノ
シル）−α−り一トレオーペントピ２ノシド（ＸＩＸ
） メチル３−デオキシ−２−０−（α−Ｄ−グルコピラノ
シル）−α−Ｄ−）／オーペントピラノシド（ＸＸ） （Ｒ）−テトラヒドロフルフリルα−Ｄ−／ルコピラノ
シド（ＸＸＩ） 実施例１ メチル５−０−（α−Ｄ−グルコピラノシル
）−β−Ｄ−アラビノフラ ノシド（ＸＩ［ｌ） の製造 グルコシル供与体■２．１０ｆ（５，８２ｍｍｏｌ）お
よび受容体ｖ６８８■（４，１７ｍｍｏｌ ） を緩衝
液１２．５ｍに溶かし、この溶液に固定化菌体１００′
ｑを加え、前記一般的方法に準じて反応させた。得られ
九粗生成物をシリカゲルカラムによシ、展開溶媒Ｂを用
いて精製し、ＸＩ［Ｉ １．０９１（収率８０％）を無
定形の粉末として得た。
１３（！ −ＮＭＲ
δ ７α５４ｐｐｍ（アラビノフラノシドのＣ−５）９
９．６４ｐｐｍ（グルコピラノシドのＣ−１）〔Ｄ２０
中、ＴＭＥＩ外部基外部 基準例２ メチル５−ｏ−（α−Ｄ−グルコピラノシル
）−α−Ｌ−キシロ７ラノ シド（Ｘ■）の製造 グルコクル供与体■７６４グ（２，１１ｍｍｏｌ）およ
び受容体Ｖ ２７２ ｔｑ （１，６７ｍｍｏｌ ）
を緩衝液５−に溶かし、この溶液に固定化菌体６０ηを
加え、前記一般的方法に準じて反応させた。
９．６４ｐｐｍ（グルコピラノシドのＣ−１）〔Ｄ２０
中、ＴＭＥＩ外部基外部 基準例２ メチル５−ｏ−（α−Ｄ−グルコピラノシル
）−α−Ｌ−キシロ７ラノ シド（Ｘ■）の製造 グルコクル供与体■７６４グ（２，１１ｍｍｏｌ）およ
び受容体Ｖ ２７２ ｔｑ （１，６７ｍｍｏｌ ）
を緩衝液５−に溶かし、この溶液に固定化菌体６０ηを
加え、前記一般的方法に準じて反応させた。
得られた粗生成物はシリカゲルカラムにより、展開溶媒
Ａを用いて精製し、Ｘ■ ２９３■（収率５３％）をシ
ロップとして得た。
Ａを用いて精製し、Ｘ■ ２９３■（収率５３％）をシ
ロップとして得た。
１３０− ＮＭＲ
δ ６ａ１ｓｐｐｍ（キシロフラノシドのＣ−５）９９
．８６ｐｐｍ（グルコピラノシドのＣ−１）〔Ｄ宜Ｏ中
、ＴＭＳ外部外部基 準節例３ メチル２−デオキシ−３−０−（α−Ｄ−グ
ルコピラノシル）−β−Ｄ −エリトローペントピラノシド（溜） の製造 グルコシル供与体■９６１■（２，６７ｍｍｏｌ）およ
び受容体Ｘ（α−アノマーとβ−アノマーの１：２混合
物） ２６８１９ （１，８３ｍｍｏｌ ） を緩衝液
５．５艷に溶かし、この溶液に固定化菌体６５１！１９
を加え、前記一般的方法に準じて反応させた。得られた
粗生成物はシリカゲルカラムによシ、展開溶媒Ａを用い
て精製し、Ｘ■２５８り（収率４２チ：受容体となシう
るβ−アノマーを基準にすれば６３％）をシロップとし
て得た。
．８６ｐｐｍ（グルコピラノシドのＣ−１）〔Ｄ宜Ｏ中
、ＴＭＳ外部外部基 準節例３ メチル２−デオキシ−３−０−（α−Ｄ−グ
ルコピラノシル）−β−Ｄ −エリトローペントピラノシド（溜） の製造 グルコシル供与体■９６１■（２，６７ｍｍｏｌ）およ
び受容体Ｘ（α−アノマーとβ−アノマーの１：２混合
物） ２６８１９ （１，８３ｍｍｏｌ ） を緩衝液
５．５艷に溶かし、この溶液に固定化菌体６５１！１９
を加え、前記一般的方法に準じて反応させた。得られた
粗生成物はシリカゲルカラムによシ、展開溶媒Ａを用い
て精製し、Ｘ■２５８り（収率４２チ：受容体となシう
るβ−アノマーを基準にすれば６３％）をシロップとし
て得た。
１３（３−ＮＭＲ
δ ７ａ２４ｐｐｍ（ベントフラノシドのＣ−３）９９
．７２ｐｐｍ（グルコピラノシドのＣ−１）〔Ｄ雪０中
、ＴＭ８外部外部基 準節例４（Ｒ）−テトラヒドロフルフリルα−ツーグル
コピラノシド（ＸＸＩ）の製造グルコシル供与体ＩＶ
１．３０ ｆ （＆６Ｊｍｍｏｘ）および受容体ＸＩＩ
２８５ｖＩｇ（２，７９ｍｍｏｌ ） を緩衝液ａ５
−に溶かし、この溶液に固定化菌体９０ｑを加え、前記
一般的方法に準じて反応させた。得られた粗生成物はシ
リカゲルカラムにより、展開溶媒Ａを用いて精製し、Ｘ
ＸＩ ３１５ＶＶ（収率４３％；受容体となる（Ｒ）一
体を基準にすれば８６６１ｂ）をシロップとして得た。
．７２ｐｐｍ（グルコピラノシドのＣ−１）〔Ｄ雪０中
、ＴＭ８外部外部基 準節例４（Ｒ）−テトラヒドロフルフリルα−ツーグル
コピラノシド（ＸＸＩ）の製造グルコシル供与体ＩＶ
１．３０ ｆ （＆６Ｊｍｍｏｘ）および受容体ＸＩＩ
２８５ｖＩｇ（２，７９ｍｍｏｌ ） を緩衝液ａ５
−に溶かし、この溶液に固定化菌体９０ｑを加え、前記
一般的方法に準じて反応させた。得られた粗生成物はシ
リカゲルカラムにより、展開溶媒Ａを用いて精製し、Ｘ
ＸＩ ３１５ＶＶ（収率４３％；受容体となる（Ｒ）一
体を基準にすれば８６６１ｂ）をシロップとして得た。
ＩＢＣ−１’１ＭＲ
δ ７（１８２ｐｐｍ（テトラヒドロフルフリル基のＣ
−１′）９９．５７ｐｐｍ（グルコピラノシドのＣ−１
）〔Ｄ２０中、ＴＭＥＩ外部基外部 基準例５ メチル５−ｏ−（α−Ｄ−グルコピラノシル
）−α−Ｄ−アラビノフラ ノシド（ＸＩＶ） の製造 グルコシル供与体■４３５ ｔｒｑ （１，２０ｍｍｏ
ｌ）および受容体■１６４■（１，０ｍｍｏｌ ） を
緩衝液６７！に溶かし、この溶液に固定化菌体４０ＭＩ
を加え、前記一般的方法に準じて反応させ友。
−１′）９９．５７ｐｐｍ（グルコピラノシドのＣ−１
）〔Ｄ２０中、ＴＭＥＩ外部基外部 基準例５ メチル５−ｏ−（α−Ｄ−グルコピラノシル
）−α−Ｄ−アラビノフラ ノシド（ＸＩＶ） の製造 グルコシル供与体■４３５ ｔｒｑ （１，２０ｍｍｏ
ｌ）および受容体■１６４■（１，０ｍｍｏｌ ） を
緩衝液６７！に溶かし、この溶液に固定化菌体４０ＭＩ
を加え、前記一般的方法に準じて反応させ友。
得られた生成物はシリカゲルカラムによシ、展開溶媒Ａ
を用いて精製し、ｘ＋ｖ ７５ Ｗ （収率２２％）を
シロップとして得た。
を用いて精製し、ｘ＋ｖ ７５ Ｗ （収率２２％）を
シロップとして得た。
凰３Ｃ！−ＮＭＲ
δ ６ａ１１ｐｐｍ（アラビノフラノシドのＣ−５）９
９．７５ｐｐｍ（グルコピラノシドのＣ−１）［１１，
ｏ中、ＴＭＳ外部基準〕 実施例６ メチル５−Ｏ−（α−Ｄ−グルコピラノシル
）−β−Ｄ−キシロフラノ シド（Ｘ■）の製造 グル：ｌシル供与体■４ ！ｌ５ｔｒｑ（１，２０ｍｍ
ｏｌ）および受容体Ｍ １６５ ｔｎ９ （１，０ｍｍ
ｏｌ ） を緩衝液３−に溶かし、この溶液に固定化菌
体４０〜を加え、前記一般的方法に準じて反応させた。
９．７５ｐｐｍ（グルコピラノシドのＣ−１）［１１，
ｏ中、ＴＭＳ外部基準〕 実施例６ メチル５−Ｏ−（α−Ｄ−グルコピラノシル
）−β−Ｄ−キシロフラノ シド（Ｘ■）の製造 グル：ｌシル供与体■４ ！ｌ５ｔｒｑ（１，２０ｍｍ
ｏｌ）および受容体Ｍ １６５ ｔｎ９ （１，０ｍｍ
ｏｌ ） を緩衝液３−に溶かし、この溶液に固定化菌
体４０〜を加え、前記一般的方法に準じて反応させた。
得られた生成物はシリカゲルカラムによシ、展開溶媒Ａ
を用いて精製し、Ｘ■ １１５１ｒｑ（収率３４係）を
シロップとして得た。
を用いて精製し、Ｘ■ １１５１ｒｑ（収率３４係）を
シロップとして得た。
”Ｏ−ＮＭＲ
δ ６ａ４３ｐｐｍ（キシロフラノシドのＣ−５）９９
．６１ｐｐｍ（グルコツ２ノシドのＣ−１）ＣＤ、Ｏ中
、ＴＭＲ外部外部基 準流例７ メチル３−デオキシ−５−Ｏ−（α−Ｄ−グ
ルコピラノシル）−α−り 一トレオーペントピラノシド（ＸＩＸ）およびメチル３
−デオキシ−２−〇 −（α−Ｄ−グルコピラノシル）− α−Ｄ−）レオ−ペントピラノシド （ＸＸ） の製造 グルコシル供与体９０６ ｍｇ （２，５０ｍｍｏｘ
）および受容体■３００■（２，０５ｍｍｏｌ ） を
緩衝液６ｔｎｔに溶かし、この溶液に固定化菌体８５■
を加え、一般的方法に準じて反応させた。得られた生成
物は２種の異性体の混合物であることは”Ｏ−ＮＭＲに
よシ確認される。展開溶媒Ｂを用いてシリカゲルカラム
で精製し得られるＸＩＸとｘＸ の混合物の収量は２０
（ｌｖ（収率３０チ）であった。
．６１ｐｐｍ（グルコツ２ノシドのＣ−１）ＣＤ、Ｏ中
、ＴＭＲ外部外部基 準流例７ メチル３−デオキシ−５−Ｏ−（α−Ｄ−グ
ルコピラノシル）−α−り 一トレオーペントピラノシド（ＸＩＸ）およびメチル３
−デオキシ−２−〇 −（α−Ｄ−グルコピラノシル）− α−Ｄ−）レオ−ペントピラノシド （ＸＸ） の製造 グルコシル供与体９０６ ｍｇ （２，５０ｍｍｏｘ
）および受容体■３００■（２，０５ｍｍｏｌ ） を
緩衝液６ｔｎｔに溶かし、この溶液に固定化菌体８５■
を加え、一般的方法に準じて反応させた。得られた生成
物は２種の異性体の混合物であることは”Ｏ−ＮＭＲに
よシ確認される。展開溶媒Ｂを用いてシリカゲルカラム
で精製し得られるＸＩＸとｘＸ の混合物の収量は２０
（ｌｖ（収率３０チ）であった。
”Ｃ！−ＮＭＲ
ＸＩＸ δ ７０．６２（フラノシドのＣ−５）７５．
５０（フラノシドのＣ−２） ９９、８６ （ピラノシドのＣ−１） ＸＸ δ ６４．９６（７う／シト（７）Ｏ−５）ａｚ
、ｓｓ（フラノシドのＣ−２） ９９、１７ （ピラノシドのＣ−１） 〔Ｄ２０中、ＴＭＳ外部基準〕 下記に受容体、生成物、分離精製をシリカゲルカラムで
行う際の展開溶媒、収率を次表に１とめて示す。
５０（フラノシドのＣ−２） ９９、８６ （ピラノシドのＣ−１） ＸＸ δ ６４．９６（７う／シト（７）Ｏ−５）ａｚ
、ｓｓ（フラノシドのＣ−２） ９９、１７ （ピラノシドのＣ−１） 〔Ｄ２０中、ＴＭＳ外部基準〕 下記に受容体、生成物、分離精製をシリカゲルカラムで
行う際の展開溶媒、収率を次表に１とめて示す。
÷１ （）内はグルコシル化を受けるβ体をもとに算出
畳２ （）内はグルコシル化を受けるＲ体をもとに算出
上表に掲げた収率は、グルコシル化の難易度がわかるよ
うに同一条件下で実験した値であシ、収率の一見低いも
のでも、供与体や固定化酵素の量を増すことによって、
或は固定化酵素を固定床カラムに充填して用いることＫ
よってより高い収率を達成することができる。
畳２ （）内はグルコシル化を受けるＲ体をもとに算出
上表に掲げた収率は、グルコシル化の難易度がわかるよ
うに同一条件下で実験した値であシ、収率の一見低いも
のでも、供与体や固定化酵素の量を増すことによって、
或は固定化酵素を固定床カラムに充填して用いることＫ
よってより高い収率を達成することができる。
受容体（■〜Ｘ■）および生成物（Ｘ１ｌｌ〜ＸＸＩ
）の構造式をま七めて示す。
）の構造式をま七めて示す。
Ｖ Ｒ１＝Ｒ”＝ Ｈ，Ｒ２＝ ＱＣ！Ｈｓ ■ Ｒ１
＝Ｒ”＝Ｈ，Ｒ３＝ＯＨＭ Ｒ’＝Ｒ”＝Ｈ，Ｒ３＝Ｏ
ＯＨｓ ■ Ｒ１＝Ｒ３＝Ｈ，Ｒ”＝ＯＨＸｍ Ｒ１＝
ａ−Ｇｌｕｐ、 ＸＶ Ｒ’＝α−Ｇｌｕｐ。
＝Ｒ”＝Ｈ，Ｒ３＝ＯＨＭ Ｒ’＝Ｒ”＝Ｈ，Ｒ３＝Ｏ
ＯＨｓ ■ Ｒ１＝Ｒ３＝Ｈ，Ｒ”＝ＯＨＸｍ Ｒ１＝
ａ−Ｇｌｕｐ、 ＸＶ Ｒ’＝α−Ｇｌｕｐ。
Ｒ”＝ ＯＯＨ，、Ｒ癌ＨＲ２＝Ｈ、Ｒ３＝ＯＥＩ）Ｇ
Ｖ Ｒ”＝ａ−Ｇｌｕｐ 、 ＸＶＩ Ｒ１＝ａ−Ｇｌ
ｕｐ 。
Ｖ Ｒ”＝ａ−Ｇｌｕｐ 、 ＸＶＩ Ｒ１＝ａ−Ｇｌ
ｕｐ 。
Ｒ２＝Ｈ，Ｒ３＝ＯＯＨ，Ｒ２＝ＯＨ，Ｒ”＝ＨＸ■
ｘｉ ｘｘｔ
ＸＩＸ Ｒ”＝ ａ−Ｇｌｕｐ。
Ｒ”＝Ｈ
Ｈ
生成物Ｘ■〜ＸＸＩ は本発明の方法によって初めて得
られた物質であって、醗酵工業原料、界面活性剤製造原
料、プラスチック製造原料、可塑剤製造原料となる他に
、生理活性を有するオリゴ糖や抗生物質の製造原料とし
て産業上利用することができる。
られた物質であって、醗酵工業原料、界面活性剤製造原
料、プラスチック製造原料、可塑剤製造原料となる他に
、生理活性を有するオリゴ糖や抗生物質の製造原料とし
て産業上利用することができる。
代理人 江 崎 光 好
代理人 江 崎 光 史
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 ｔ スクロースグルコシルトランスフェラーゼを用い、
６′−置換スクロース誘導体をグルコシル供与体とし、
フラノシド構造をもつアルコールを受容体とすることを
特徴とするグルコシル化法。 ｚ グルコシル供与体が６′−ハロゲン化スクロースで
ある特許請求の範囲第１項記載の方法。 五 グルコシル供与体が６′−デオキシスクロースであ
る特許請求の範囲第１項記載の方法。 ４、 受容体がペントフラノシド、ヘキソフラノシド又
は他のテトラヒドロフラン誘導体である特許請求の範囲
第１〜３項のいずれか一つに記載の方法。 ５、 スクロースグルコシルトランスフェラーゼとして
固定化されたスクロースグルコシルトランスフェラーゼ
を用いる特許請求の範囲第１〜４項のいずれか一つに記
載の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7507284A JPS60221099A (ja) | 1984-04-16 | 1984-04-16 | スクロ−スグルコシルトランスフエラ−ゼによるグルコシル化法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7507284A JPS60221099A (ja) | 1984-04-16 | 1984-04-16 | スクロ−スグルコシルトランスフエラ−ゼによるグルコシル化法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60221099A true JPS60221099A (ja) | 1985-11-05 |
| JPH0440998B2 JPH0440998B2 (ja) | 1992-07-06 |
Family
ID=13565617
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7507284A Granted JPS60221099A (ja) | 1984-04-16 | 1984-04-16 | スクロ−スグルコシルトランスフエラ−ゼによるグルコシル化法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS60221099A (ja) |
-
1984
- 1984-04-16 JP JP7507284A patent/JPS60221099A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0440998B2 (ja) | 1992-07-06 |
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