JPH02308797A

JPH02308797A - ２′，３′‐ジデオキシプリンヌクレオシド類及びその製造方法

Info

Publication number: JPH02308797A
Application number: JP1046183A
Authority: JP
Inventors: Toshiji Kojima; 児島　鋭士; Hidetoshi Yoshioka; 英敏吉岡; Hidenori Tomikanehara; 冨金原　秀則; Kunimutsu Murakami; 邦睦村上
Original assignee: Sanyo Kokusaku Pulp Co Ltd
Current assignee: Sanyo Kokusaku Pulp Co Ltd
Priority date: 1989-02-27
Filing date: 1989-02-27
Publication date: 1990-12-21
Anticipated expiration: 2012-06-11
Also published as: GB2228479A; CA1338532C; FR2643558B1; DE4004558C2; US5563049A; US5053499A; GB8918417D0; FR2643558A1; DE4004558A1; GB2228479B; JP2619710B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕本発明の目的は、一般式ＣＩ］および／または［ＩＩ］
で示される新規な２’、３’−ジデオキシプリンヌクレ
オシド類及びその製造方法にある。

（式中Ｘは窒素原子あるいは炭素原子であり、Ｒ，、Ｒ
，およびＲ１はそれぞれ独立して、水素原子水酸基アミノ基アルキル基ハロゲン原子アルコキシ基メルカプ）・基のいずれかである）（式中Ｙは窒素原子あるいは炭素原子であり、Ｒ４およ
びＲ１はそれぞれ独立して、水素原子水酸基アミノ基アルキル基ハロゲン原子アルコキシ基メルカプト基のいずれかである）〔従来の技術〕２’、３’−ジデオキシシチジン（以降ＤＤＣと称する
）、２’、３’−ジデオキシアデニン（以降ＤＤＡと称
する）、２’、３’−ジデオキシイノシン（以降ＤＤＩ
と称する）などの既存の２’　、　３’−ジデオキシヌ
クレオシド類は抗ウイルス性を持ち、特に抗レトロウィ
ルス剤としての作用が顕著なので抗ＨＩＶ剤として期待
されている。しかしながら、上記の各化合物は人体に対
する副作用の面で問題がある。

即ち、ＤＤＣは末梢神経障害を引き起こし、ＤＤＡおよ
びＤＤＩは骨髄毒性を示す。

また、現在ＡＩＤＳの唯一の治療薬として認められてい
る３′−アジドチミジン（以降ＡＺＴと称する）にも骨
髄毒性が認められている。

（Ｎ、εｎｇ１．　Ｊ、　Ｍｅｄ、　、　３１６．５５
７．１９８７；　１ｂｉｄ、　、　３１７゜１８５、１
９８７；Ｎｘ１ｕｒｅ、　３２５．７７３．１９８７）
〔発明が解決しようとする課題〕本発明の課題は、ＤＤＣ，ＤＤＡ、ＤＤＩおよびＡＺＴ
などの既知の２’、３’−ジデオキシヌクレオシド類の
持つ上記の問題点を克服して、抗ウイルス性、特に抗レ
トロウイルス性を持った医薬品として有用な新規２’、
３’−ジデオキシヌクレオシド類を見出すことにある。

〔課題を解決する手段〕

本発明者は、各種の原子あるいは官能基（すなわち、水
素原子、水酸基、アミノ基、アルキル基、ハロゲン原子
、アルコキシ基、メルカプト基など）で修飾されたプリ
ン塩基あるいはプリン塩基類縁体に、２’、３’−ジデ
オキシボースを微生物の作用により結合させることによ
り、新規な２’、３’−ジデオキシプリンヌクレオシド
類を合成し、この化合物を単独であるいは従来知られて
いる２’、３’−ジデオキシヌクレオシド類（ＤＤＣ，
ＤＤＡ、ＤＤ［、ＡＺＴなど）との併用することにより
、従来知られている２’、３’−ジデオキシヌクレオシ
ド類ＣＤＤＣ，ＤＤＡ、ＤＤＩ、ＡＺＴなど）の持つ上
記の問題点を克服することを見出した。

即ち、本発明の２’、３’−ジデオキシプリンヌクレオシド類は、一般
式［１］（式中Ｘは窒素原子あるいは炭素原子であり、Ｒ１，Ｒ
２およびＲ１はそれぞれ独立して、水素原子水酸基アミノ基アルキル基ハロゲン原子アルコキシ基メルカプト基のいずれかである）で表される。

２’、３’−ジデオキシプリンヌクレオシド類および一般式［■コＲ１（式中Ｙは窒素原子あるいは炭素原子であり、Ｒ４およ
びＲ２は　　水素原子水酸基アミノ基アルキル基ハロゲン原子アルコキシ基メルカプト基のいずれかである）で表される。

２’、３’−ジデオキシプリンヌクレオシド類である。

この新規の２’、３’−ジデオキシプリンヌクレオシド
類は、次の方法により合成できる。

１　　　　　　　　　　　即ち、一般式［Ｉ］で表され
る２’、３’−ジデオキシプリンヌクレオシドは、一般式［ｍ］Ｉ（式中Ａは水素原子リボフラノシル基デオキシリボフラノシル基５′−燐酸−リボフラノシル基又は　　５′−燐酸−デオキシリボフラノシル基でありＸは窒素原子あるいは炭素原子であり、Ｒ，、Ｒ２およ
びＲ３はそれぞれ独立して、水素原子水酸基アミノ基アルキル基ハロゲン原子アルコキシ基メルカプト基のいずれかである）に示すプリン化合物と２’、３’−ジデオキシシチジン。

２’　、　３’−ジデオキシウリジン。

又は　３′−デオキシチミジンとを、リン酸又はリン酸塩の存在下エシェリヒア（Ｅｓ
ｃｈｅｒｉｃｈｉｇ　）属、クレブシェラ（Ｋｌｅｂｓ
ｉｅｌｌａ）ｉｌｌあるいはエルビニア（Ｅｒｖｉｎｉ
ａ）属の微生物の作用により水溶液中にて反応させるこ
とによって得られる。

さらに、一般式［ＩＩ］で表される２’、３’−ジデオ
キシプリンヌクレオシドは、一般式［ＩＶ］（式中Ｂは水素原子リボフラノシル基デオキシリボフラノシル基５′−燐酸−リボフラノシル基又は　　５′−燐酸−デオキシリボフラノシル基でありＹは窒素原子あるいは炭素原子であり、Ｒ４およびＲ９
はそれぞれ独立して、水素原子水酸基アミノ基アルキル基ハロゲン原子アルコキシ基メルカプト基のいずれかである）に示すプリン化合物と２’、３’−ジデオキシシチジン。

２’、３’−ジデオキシウリジン。

又は　３′−デオキシチミジンとを、リン酸又はリン酸塩の存在下エシェリヒア（Ｅｓ
ｃｈｅｒｉｃｈｉａ　）属、クレブシェラ（Ｋｌｅｂｓ
ｉｅｌｌａｌ属あるいはエルビニア（Ｅｒｗｉｎｉａ）
〜属の微生物の作用により水溶液中にて反応させること
によって得られる。

一般式［ｍ］および一般式［ＩＶ］で表わされるプリン
誘導体は、安価なリボ核酸の構成成分からそのまま用い
ることができるし、またリボ核酸の構成成分をよく知ら
れた方法により化学的に修飾して用いることができる。

あるいは、全合成的に合成したプリン塩基誘導体や既に
市販されているものなども用いることができる。

２’Ｊ’−ジデオキシシチジン、２’、３’−ジデオキ
シウリジン、３′−ジデオキシチミジンは既知の手法に
より容易に得ることができる。

すなわ２’、３’−ジデオキシシチジンはＨｏｒｖｉ　
＋！らの方法により２゛−デオキシシチジンより誘導さ
れるＮ−ベンゾイル−２′−デオキシ−３’、５’−ジ
デオキシシチジンを、エタノール中水酸化ナトリウム水
溶液で還流したのち希酢酸で処理し、さらにジメチルス
ルホキシド中ターシャリブトキシカリウムを作用させて
２’、３’−ジデオキシ−２’、３’−ジヒドロキシシ
チジンとし、これを水素添加することによって得ること
ができる。

（１，０ｒｇ、　Ｃｈｅｍ、　、　３２．８１７．１９
６７　）また２’、３’−ジデオキシウリジンは、安価
なリボ核酸の構成成分であるウリジンより誘導される５
′−０−ベンゾイル−２′−ブロモ−２′−デオキシ−
３’−０−メシルウリジンをパラジウム−硫酸バリウム
存在下水素添加することにより得ることができる。（Ｃ
ｈｅｍ、　Ｐｈｘｎ、　Ｂｕｌｌ、　、　１８．５５４
．１９７０　）また３′−デオキシチミジンは、チミジ
ンのジメシレートをｔ＋ｏｔｖｉｌｓらの方法（Ｊ、　
Ｏｒｇ、　Ｃｈｅｌｍ、　。

２８、９４２．１９６３　’）によりｉ　（２’−デオ
キシ−３’　、　５’　−エポキシ−β−Ｄ−スレオ−
ペントフラノシル）−チミンとした後、これをジメチル
ホルムアミド中ターシャリブトキシドカリウムを作用さ
せ、さらに接触水素添加することによって得ることがで
きる。（Ｔｅｌｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｌ、　、　３
８．２７２５．１９６４）前記の一般式［１］で表され
る化合物として具体的には下記の化合物をあげることが
できる。

イ）プリン −９−β−Ｄ−２’　、　３’−ジデオキシリボフラノ
シド口）６−クロロプリン −９−β−Ｄ−２’、３’−ジデオキシリボフラノシド
ハ）６−メチルプリン −９−β−Ｄ−２’　、　３’−ジデオキシリボフラノ
シドニ）２−アミノ−６−クロロプリン＝９−β−Ｄ−２’　、　３’−ジデオキシリボフラノ
シドホ）２−アミノ−６−メチルプリン＝９−β−Ｄ−２’、３’−ジデオキシリボフラノシド
へ）２．６−ジアミツプリンー９−β−Ｄ−２’　、　３’−ジデオキシリボフラノ
シドト）２．６−シヒドロキシプリンー９−β−Ｄ−２’　、　３’−ジデオキシリボフラノ
シドチ）２．６−シクロロブリンー９−β−Ｄ−２’　、　３’−ジデオキシリボフラノ
シドリ）６−メルカプトプリンー９−β−Ｄ−２’　、　３’−ジデオキシリボフラノ
シドヌ）２．アミノ−６−メルカブトプリンー９−β−
Ｄ−２’　、　３’−ジデオキシリボフラノシドまた前
記の一般式［ｒＩ］で表される化合物として具体的には
下記の化合物をあげることができる。

ル）６−ヒトロキシー７−デアザー８−アザプリン−９
−β−Ｄ−２’　、　３’−ジデオキシリボフラノシド
ヲ）６−アミノ−８−アザプリン −９−β−Ｄ−２’、３’−ジデオキシリボフラノシド
〔作用〕２’　、　３’−ジデオキシピリミジンヌクレオシドを
原料とし、微生物あるいは酵素による塩基交換反応を用
いて２’、３’−ジデオキシプリンヌクレオシドを得る
方法としては次に示す２つの報告がある。

まず１つ目の報告は、大腸菌（ε５ｃｈｅｔｉｃｈｉａ
ｃｏ１ｉ）＾ｊ−２５９５を用いて２’、３’−ジデオ
キシアデノシン、　２’、３’−ジデオキシイノシン、
２’、３’−ジデオキシグアノシンを得る方法である（
Ｎｕｃｈｌｅｉｃ＾ｃｉｄｅｓ　Ｓｙｍｐｏｓｉｕｎ　
５ｅｒｉｅｓ　Ｎｏ、　２０．１７．　ｊ９８８）。

しかしこの報告では生成物の同定を１１　Ｐ　Ｌ　Ｃに
よってのみ行っており、スケールとしても５ｎ＋１反応
液で行うなど実験室的な規模を出ていない。

かつ、工業的生産に必要な単離・精製方法については一
切触れられておらず、実際の単離は行っていない。また
、ＨＰＬＣの値より計算された収率も低く　（２’、３
’−ジデオキシアデノシン合成の場合、５０ｍＭ濃度で
３３％）反応時間が２４時間を要し長いことなど、この
点でも工業的手法とは言い難い。

２つ目の報告は、精製チミジンホスホリラーゼとプリン
ヌクレオシドホスホリラーゼを用いて６−Ｎ−ピペリジ
ノプリン−９−β−Ｄ−２’、３’−ジデオキシリボフ
ラノシドなどの２’、３’−ジデオキシヌクレオシド類
を合成するものである。（特開昭６３−２６７７９６１しかしこの報告では、高価で入手し難い２種の酵素を使
用していること、収率が低いこと、反応時間が数日から
一週間前後と非常に長くかかることなど、短時間により
収率良（生成物を得るための工業的製法としては難しい
。

本発明は以上の報告に見られるようなそれぞれの欠点を
克服するものとして、手法の細部にわたり種々検討の結
果初めて見出された新しい工業的合成法であり２’、３
’−ジデオキシプリンヌクレオシド類を短時間で収率良
く与えることを特徴とする。

すなわち本発明は以下に示すいくつかの点で従来法より
優れている。

まず第１点は、本発明中の反応に用いる微生物としてＥ
ｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ　、　Ｋｌｅｂｓｉｅ
ｌｌａｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、　　および−Ｅ＋ｖｉｎ
ｉａ　　ｈｅｒｂｉｃｏｌｘを用いた点であり、特にそ
の中でもＥ、ｃｏｌｉ　ｊＡ−３００株、に、ｐｎｅｕ
ｒａｏｎｉａｅ　ＩＦＯ−３３２１株およびＥ、ｈｅｒ
ｂｉｃｏｌｘ　ＩＦＯ−１２６８６株が高い塩基交換能
を有することを見出したことである。本反応で用いた微
生物、特にＥ、ｃｏｌｉ　ＪＡ−３０ｔ１株、　Ｋ、ｐ
ｎｅｕｒａｏｎｉａｅ　ＩＦＯ−３３２１株およびＥ、
ｈｅｒｂｉｅｏｌｉ　ＩＦＯ−１２６８６株は広範囲に
わたる綿密なスクリーニングによって得られたものであ
り、２’、３’−ジデオキシピリミジンヌクレオシドと
プリン誘導体より２’、３’−ジデオキシプリンヌクレ
オシドを収率良（得ることができる。

本発明中の反応に用いた微生物は生菌であり、適当な培
養条件を選ぶことによって増殖培養して用いることがで
きるため精製された酵素を用いるよりも更に安価である
。

第２点は、反応温度２反応液のｐＨ，反応の経時変化な
どの反応条件を細く検討することにより短時間で好収率
を得る条件を見出した点である。

すなわち、反応温度としては４５〜５５℃が最も適当で
あることがわかった。この温度は、本発明で用いる反応
に必要なピリミジンヌクレオシドホスホリラーゼとプリ
ンヌクレオシドホスホリラーゼが活性を示すのに十分な
反応温度であり、かつデアミナーせなどの反応に直接必
要のない酵素の働きを押えるのに必要かつ十分な温度で
ある。

この反応温度（４５〜５５℃）で反応を行う際に気をつ
けねばならないことは、反応開始時よりすでに４５〜５
５℃という温度が保たれていなければならないことであ
る。

すなわち具体的には、反応基質（２’、３’−ジデオキ
シピリミジンヌクレオシドとプリンヌクレオシド誘導体
）を懸濁した反応液体と、菌体を懸濁した液体とをそれ
ぞれ独立に４５〜５５℃まで温度を保った後、両者を加
えて反応を開始させる点である。

反応を開始する際に、基質を懸濁した液体と菌体を含ん
だ液体との温度が異なっておれば、両者を加えて反応を
開始する際の温度は適性温度（４５〜５５℃）とはなら
ず反応収率の低下につながる。

また反応液の反応速度や生成物の安定性の点よりｐＨは
７．５〜９，０が最も適当であることも検討により見出
された。

さらに本反応で用いた反応系の場合反応時間は数時間で
十分であることを、細かい経時的な収率変化の比較によ
り見出している。

第３点は、簡単な単離・精製方法を確立した点である。

具体的には、反応液の遠心分離操作と吸着樹脂による精
製手段より成る。

すなわち、反応終了後の反応液を遠心分離することによ
り菌体を沈殿させ、その上澄み液を傾斜法によって分取
する。得られた上澄液を吸着樹脂をつめたカラムに通液
し生成物のみを吸着させ、リン酸塩などを除く。カラム
を水でよく洗浄した後に適当な有機溶媒で吸着している
生成物を溶離させ、２’、３’−ジデオキシプリンヌク
レオシド類を得る方法を見出したものである。

以上に述べた３点により簡便な操作で短時間に収率良＜
２’、３’−ジデオキシプリンヌクレオシドを得ること
ができる。

本発明の２’、３’−ジデオキシプリンヌクレオシド類
は、抗ウィルス剤および抗レトロウィルス剤として、特
に抗ＨＩＶ剤として有用であり、後天性免疫不全症候群
（ＡＩＤＳ）の予防薬および治療薬として有効である。

また、本発明の２’、３’−ジデオキシプリンヌクレオ
シド類は、ＤＮＡチェーン・ターミネータ−としての性
質を持ち、遺伝子工学上有用な医薬である。

〔実施例〕

実施例１酵母エキス５ｇ／Ｌ、ペプトン１０　ｇ　／Ｌ、　Ｎａ
Ｃ１５ｇ／Ｌを含みｐ）ＩＴ、　Ｑに調節した液体培地
のＩＯＬをファーメンタ−・ジャーに入れ殺菌した。

この培地にＥ、ｃｏｌｉｌ＾−３００（Ｇｅｎｅ　１θ
、１５７（１９８０））をＩＧＯｍｇ接種し３７℃にて
１６時間振盪培養した。

得られた培養液より菌体を遠心分離して集め生理食塩水
にて洗浄後、ＫＨ２ＰＯ４とＮａ２ＨＰＯ４により調節
した０、０５Ｍ燐酸緩衝液（ＩＩＨ７，５）に懸濁した
（１００Ｂ　？Ｓｉ量／ｍＬ）。

上記の菌体懸濁液を５０℃まで加温した後、その７０ｍ
Ｉを２’　、　３’−ジデオキシウリジン７、　Ｑｍｍ
ｏｌ。

プリン７、　Ｏｍｍｏｌを含みＫＨ２ＰＯ，とＮａ２Ｈ
ＰＯ４により、１１７．５に調節した０、［１５Ｍの燐
酸緩衝液よりなるあらかじめ５０℃に加温した反応液７
ｈｌに加えた。

これを５０℃に振盪しながら４時間保ち、次いで１００
℃にて３分間加熱した。

反応終了後、遠心分離により菌体を沈殿させて残りの上
澄み液を傾斜法によりビーカーに移した（上澄み液１）
。

沈殿している菌体にｐＨ１，５の燐酸緩衝液（０，０５
Ｍ）を７０ｍ１加え、しばらく攪拌した後遠心分離操作
を行い、この上澄み液を傾斜法によりビーカーに移した
。これを２回繰返した（上澄液２，３）。

上記の上澄み液１．　２．　３を順に吸着樹脂（三菱化
成製、　ＨＰ−２０）をつめたカラム（４ｘ２０ｃｍ）
に通液した。

試料を適用後、このカラムをＩＬの蒸留水により洗浄し
生成物をメタノールで溶離した。

溶媒を除去した後、メタノール１０％を含有するクロロ
ホルムに再溶解してシリカゲルを充填したカラム（４ｘ
２（１ｃｍ）によりクロマトグラフィーを行った。移動
層はメタノール１０％を含有するクロロホルムで行った
。

生成物を含むフラクションを合せて濃縮し、得られた固
形分をメタノールより再結晶した。

結晶を乾燥後、プリン−９−β−Ｄ−２’、３’−ジデ
オキシリボフラノシド（０，６６２９ｇ、　３．Ｏｌｍ
ｍｏｌ）を得た（収率イ３％）。

融点　１５２℃ ＩＨＮＭＲ（ＤＭＳＯｄ６）は第１−１図、ＩＲ（ＫＢ
＋）は第１−２図に示した。

実施例２実施例１においてプリンの代りにプリン−９−β−Ｄ−
２′−デオキシリボフラノシドを用いて同様の反応を行
った。反応によって得られた生成物を実施例１に示した
方法に、より後処理及び精製を行い、乾燥固形分として
プリン−９−β−Ｄ−２’。

３゛−ジデオキシリボフラノシド（０，３２３７ｇ。

１、４７ｍｍｏｌ）を得た（収率２１％）。

実施例３実施例１においてプリンの代りにプリン−９−β−Ｄ−
リボフラノシドを用いて同様の反応を行った。反応によ
って得られた生成物を実施例１に示した方法により後処
理及び精製を行い、乾燥固形分としてプリン−９−β−
Ｄ−２’、３’−ジデオキシリボフラノシド（０，４１
６２ｇ、　！、８９ｍｎｏｌ）を得た（収率２７％）。

実施例４実施例１において２’　、　３’−ジデオキシウリジン
の代りに３１−デオキシチミジンを用いて同様の反応を
行った。反応によって得られた生成物を実施例１に示し
た方法によ、り後処理及び精製を行い、乾燥固形分とし
てプリン−９−β−Ｄ−２’。

３′−ジデオキシリボフラノシド（０，６２７６ｇ　。

２．８５ｍｍｏｌ）を得た（収率４１％）。

実施例５実施例１において２’、３’−ジデオキシウリジンの代
りに２’　、　３’−ジデオキシシチジンを用いて同様
の反応を行った。反応によって得られた生成物を実施例
１に示した方法により後処理及び精製を行い、乾燥固形
分としてプリン−９−β−Ｄ−２’、３’−ジデオキシ
リボフラノシド（０，１８５０ｇ　。

０、８４ｍｍｏｌ）を得た（収率１２％）。

実施例６実施例１においてプリンの代りに６−クロロプリンを用
いて同様の反応を行った。反応によって得られた生成物
を実施例１に示した方法により後処理及び精製を行い、
乾燥固形分として６−クロロプリン−９−β−Ｄ−２’
、３’−ジデオキシリボフラノシド（０，９２６７ｇ、
　３．６４ｎｎ＋ｏｌ）を得た（収率５２％）融点　１
０４℃ ＩＨＮＭＲ（ＤＭＳＯｄ６）は第２−１図、ＩＲ（Ｋｌ
ｌｒ）は第２−２図に示した。

実施例７実施例１においてプリンの代りに６−クロロプリン−９
−β−〇−リボフラノシドを用いて同様の反応を行った
。反応によって得られた生成物を実施例１に示した方法
により後処理及び精製を行い、乾燥固形分として６−り
ａロブリン−９−β−Ｄ−２’　、　３’−ジデオキシ
リボフラノシド（０，６９５１ｇ、　　２゜７３ＩＩ１
ｍｏｌ）を得た（収率３９％）実施例８実施例１においてプリンの代りに６−メチルプリンを用
いて同様の反応を行った。反応によって得られた生成物
を実施例１に示した方法により後処理及び精製を行い、
乾燥固形分として６−メチルプリン−９−β−Ｄ−２’
、３’−ジデオキシリボフラノシド（０，９０１９ｇ、
　３．８５ｎ＋ｍｏｌ）を得た（収率５５％）融点　１
１０℃ ＩＨＮＭＲ（ＤＭＳＯｄ６）は第３−１図、ＩＲ（ＫＢ
ｒ）は第３−２図に示した。

実施例９実施例１においてプリンの代・りに６−メチルプリン−
９−β−Ｄ−リボフラノシドを用いて同様の反応を行っ
た。反応によって得られた生成物を実施例１に示した方
法により後処理及び精製を行い、乾燥固形分として６−
メチルプリン−９−β−Ｄ−２’　、　３’−ジデオキ
シリボフラノシド（［１，５２４７ｇ、　２．２４ｍｍ
ｏｌ）を得た（収率３２％）実施例１０実施例１においてプリンの代りに２−アミノ−６−クロ
ロプリンを用いて同様の反応を行った。

反応によって得られた生成物を実施例１に示した方法に
より後処理及び精製を行い、乾燥固形分として２−アミ
ノ−６−クロロプリン−９−β−Ｄ−２’、３’−ジデ
オキシリボフラノシド（１，０５７ｇ。

３、９２ｍｎｏｌ）を得た（収率５６％）融点　１３８
℃ ＩＨＮＭＲ（ＤＭＳＯｄ６）は第４−１図、ＩＲ（ＫＢ
ｒ）は第４−２図に示した。

実施例１１実施例１においてプリンの代りに６−メルカプトプリン
を用いさらに反応液のｐＨを９として他は同様の反応を
行った。ｐＨを９としたのは基質である６−メルカプト
プリンの溶解性を上げるためである。

反応によって得られた生成物を実施例１に示した方法に
より後処理及び精製を行い、乾燥固形分として６〜メル
カプトプリン−９−β−Ｄ−２’　、　３’−ジデオキ
シリボフラノシド（０，２１１９ｇ　、　０．８４ｖ＋
＋ｏｌ）を得た（収率１２％）融点　１８８℃ ＩＨＮＭＲ（Ｐ７ｒｉｄｉｎｅ　　ｄ５）は第５−１図
、ＩＲ（ＫＢｒ）は第５−２図に示した。

実施例１２実施例１においてプリンの代りに６−メルカブトプリン
ー９−β−Ｄ−リボフラノシドを用いて同様の反応を行
った。反応によって得られた生成物を実施例１に示した
方法により後処理及び精製を行い、乾燥固形分としトメ
ルカプトプリン−９−β−Ｄ−２’、３’−ジデオキシ
リボフラノシド（０，３７０９ｇ　、　１．４７１１１
１１１０１）を得た（収率２１％）実施例１３実施例１においてプリンの代りに６−メルカブトプリン
ー９−β−Ｄ−リボフラノシドー５′−モノリン酸エス
テルを用いて同様の反応を行った。反応によって得られ
た生成物を実施例１に示した方法により後処理及び精製
を行い、乾燥固形分として６−メルカブトプリンー９−
β−Ｄ−２’、３’−ジデオキシリボフラノシド（０，
３１７９ｇ　、　１．２６ｍｍｏｌ）を得た（収率１８
％）実施例１４実施例１においてプリンの代りに２−アミノ−６−メル
カプトプリンを用いさらに反応液のｐＨを９として他は
同様の反応を行った。ｐｌ（を９としたのは原料である
２−アミノ−６−メルカプトプリンの溶解性を上げるた
めである。

反応によって得られた生成物を実施例１に示した方法に
より後処理及び精製を行い、乾燥固形分として２−アミ
ノ−６−メルカブトプリンー９−β−Ｄ−２’、３’−
ジデオキシリボフラノシド（０，３１８１ｇ　、　１．
１９ｎ＋ｍｏｌ）を得た（収率１７％）融点　２０３℃ １　ＨＮＭＲ（Ｐｒｒｉｄｉｎｅ　　ｄ　５）は第６−
１図、ＩＲ（ＫＢｒ）は第６−２図に示した。

実施例１５実施例１においてプリンの代りに２−アミノ−６−メル
カブトプリンー９−β−Ｄ−リボフラノシドを用いて同
様の反応を行った。反応によって得られた生成物を実施
例１に示した方法により後処理及び精製を行い、乾燥固
形分とし２−アミノ−６−メルカブトプリンー９−β−
Ｄ−２’、３’−ジデオキシリボフラノシド（０，４３
０４ｇ、　１．６１ｎｏｎｏｌ）を得た（収率２３％）実施例１６実施例１においてプリンの代りに６−ヒトロキシー７−
デアザー８−アザプリンを用いて同様の反応を行った。

反応によって得られた生成物を実施例１に示した方法に
より後処理及び精製を行い、乾燥固形分とし６−ヒトロ
キシー７−デアザー８−アザプリン−９−β−Ｄ−２’
、３’−ジデオキシリボフラノシド（０，６７８０ｇ　
、　２．８７１１１１１０１）を得た（収率４１％）融
点　１８４℃ ＩＨＮＭＲ（ＤＭＳＯｄ６）は第７−１図、ＩＲ（ＫＢ
ｒ）は第７−２図に示した。

実施例１７実施例１６において２’、３’−ジデオキシウリジンの
代りに３′−デオキシチミジンを用いて同様の反応を行
った。反応によって得られた生成物を実施例１に示した
方法により後処理及び精製を行い、乾燥固形分とし６−
ヒトロキシー７−デアザー８−アザプリン−９−β−Ｄ
−２’、３’−ジデオキシリボフラノシド（０，５９５
３ｇ、　２．５２ｍｍｏｌ）を得た（収率３６％）実施例１８実施例１においてプリンの代りに６−アミノ−８−アザ
プリンを用いて同様の反応を行った。反応によって得ら
れた生成物を実施例１に示した方法により後処理及び精
製を行い、乾燥固形分とし６−アミノ−８−アザプリン
−９−β−Ｄ−２’、３’−ジデオキシリボフラノシド
（０，８５９９ｇ　、　３．６４１１１１１０１）を得
た（収率５２％）融点　１９２℃ ＩＨＮＭＲ（ＤＭＳＯｄ６）は第８−１図、ＩＲ（ＫＢ
ｒ）は第８−２図に示した。

実施例１９実施例１において、Ｅ、ｃｏｌｉＪ＾−３００の代りに
Ｅ、ｅｏｌｉ　ＪＣ−４１１（Ｐｒｏｃ、Ｎａｌ、　＾
ｃｘｄ、　　Ｓｃｉ、　Ｕ、Ｓ、Ａ。

６０１６０　（１９６８）　’）を用いて同様の反応を
行った。

反応によって得られた生成物を実施例１に示した方法に
より後処理及び精製を行い、乾燥固形分としてプリン−
９−β−Ｄ−２’、３’−ジデオキシリボフラノシド（
０，４７８０ｇ　、　２．１７＋ｎｍｏｌ）を得た（収
率３１％）実施例２０実施例１０において、Ｅ、ｃｏｌｉｌ＾−３００の代り
にに、ｐｎｅｕｍｏｎｉｘｅ　ＩＦＯ−３３２１（Ｌｉ
ｓｔ　ｏｆ　Ｃｕ１ｔｕｒｅｓ。

１９８４財団法人発酵研究所発行に記載）を用いて同様
の反応を行った。

反応によって得られた生成物を実施例１に示した方法に
より後処理及び精製を行い、乾燥固形分として２−アミ
ノ−６−クロロプリン−９−β−Ｄ−２’、３’−ジデ
オキシリボフラノシド（１，０Ｉ９ｇ。

３、７８ｍｍｏｌ）を得た（収率５４％）実施例２１実施例８において、Ｅ、ｃｏｌｉ　ＩＡ−３００の代り
にＥ、ｈｅｒｂｉｃｏｌｇ　ＩＦＯ−１２６８６（Ｌｉ
ｓｔ　ｏｆ　Ｃｕ１ｌｕｒｅｓ。

反応によって得られた生成物を実施例１に示した方法に
より後処理及び精製を行い、乾燥固形分として６−メチ
ルプリン−９−β−Ｄ−２’、３’−ジデオキシリボフ
ラノシド（０，６３９５ｇ、　２．７３ｎ＋ｍｏｌ）を
得た（収率３９％）実施例２２実施例１１において、Ｅ、ｃｏｌｉｌ＾−３００の代り
にに、ｐｎｅｕｍｏｎｉｘｅ　ＩＦＯ−３３２１（Ｌｉ
ｓｔ　ｏｌ　Ｃｕ１ｔｕｒｅｓ。

反応によって得られた生成物を実施例１に示した方法に
より後処理及び精製を行い、乾燥固形分として６−メル
カブトプリンー９−β−Ｄ−２’　、　３’−ジデオキ
シリボフラノシド（０，２６４９ｇ　、　１．０５ｍｎ
ｏｌ）を得た（収率１５％）〔発明の効果〕以上説明したように、本発明の新規２’、３’−ジデオ
キシプリンヌクレオシド類は、抗ウィルス剤および抗レ
トロウィルス剤としての効果を持ち、特に抗ＨＩＶ剤と
して有用であることから、ＡＩＤＳの予防薬および治療
薬として有効である。またＤＮＡチェーン・ターミネー
タ−としての性質から、遺伝子工学上の試薬としても用
いることができる。

本発明の新規２’　、　３’−ジデオキシプリンヌクレ
オシド類は、それぞれ単独で用いることができるし、２
Ｆ１以上の化合物を混合して複合の形であるいは併用し
て用いることもできる。さらに従来の２’、３’−ジデ
オキシヌクレオシド類（ＤＤＣ，ＤＤＡ、ＤＤＩ、ＡＺ
Ｔなど）と併用することによりそれらの投薬員を下げて
、その結果副作用を軽減することもできる優れた物質で
ある。

また、本発明の製造方法によれば、２’、３’−ジデオ
キシピリミジンヌクレオシドとプリン誘導体から２’、
３’−ジデオキシプリンヌクレオシドを、短い反応時間
で収率良く且つ容易に単離することができる。しかも、
用いられる試薬類は安価であり、使用する微生物も簡単
な培養系で容易に増殖培養が可能である。更に反応装置
についても、一般に市販されている培養装置を直接用い
ることができ、特殊な装置は必要としないなど経済的で
且つ工業的に実施可能な優れた製造方法である。

【図面の簡単な説明】

第１−１図および第１−２図は本発明の実施例１化合物
のＮＭＲチャートおよびＩＲチャートを示す。第２−１図および第２−２図は本発明の実施例６化合物
のＮＭＲチャートおよびＩＲチャートを示す。第３−１図および第３−２図は本発明の実施例８化合物
のＮＭＲチャートおよびＩＲチャートを示す。第４−図および第４−２図は本発明の実施例１０化合物
のＮＭＲチャートおよびＩＲチャートを示す。第５−１図および第５−２図は本発明の実施例１１化合
物のＮＭＲチャートおよびＩＲチャートを示す。第６−図および第６−２図は本発明の実施例１４化合物
のＮＭＲチャートおよびＩＲチャートを示す。第７−１図および第７−２図は本発明の実施例１６化合
物のＮＭＲチャートおよびＩＲチャートを示す。第８−１図および第８−２図は本発明の実施例１８化合
物のＮＭＲチャートおよびＩＲチャートを示す。

Claims

【特許請求の範囲】１）一般式［ I ］ ▲数式、化学式、表等があります▼［ I ］（式中Ｘは窒素原子あるいは炭素原子であり、Ｒ＿１，
Ｒ＿２およびＲ＿３はそれぞれ独立して、水素原子水酸基アミノ基アルキル基ハロゲン原子アルコキシ基メルカプト基のいずれかである）で表される２′，３′−ジデオキシプリンヌクレオシド類。２）一般式［ I ］ ▲数式、化学式、表等があります▼［II］（式中Ｙは窒素原子あるいは炭素原子であり、Ｒ＿４お
よびＲ＿５はそれぞれ独立して、水素原子水酸基アミノ基アルキル基ハロゲン原子アルコキシ基メルカプト基のいずれかである）で表される２′，３′−ジデオキシプリンヌクレオシド類。３）請求項１記載の一般式［ I ］で表される下記の化
合物２−アミノ−６−クロロプリン−９−β−Ｄ−２′，３
′−ジデオキシリボフラノシド４）請求項１記載の一般
式［ I ］で表される下記の化合物６−メルカプトプリン−９−β−Ｄ−２′，３′−ジデ
オキシリボフラノシド５）請求項１記載の一般式［ I
］で表される下記の化合物２，アミノ−６−メルカプトプリン−９−β−Ｄ−２′
，３′−ジデオキシリボフラノシド６）一般式［III］ ▲数式、化学式、表等があります▼［III］（式中Ａは水素原子リボフラノシル基デオキシリボフラノシル基５′−燐酸−リボフラノシル基又は５′−燐酸−デオキシリボフラノシル基でありＸは窒素原子あるいは炭素原子であり、Ｒ＿１，Ｒ＿２およびＲ＿３はそれぞれ独立して、水素
原子水酸基アミノ基アルキル基ハロゲン原子アルコキシ基メルカプト基のいずれかである）に示すプリン化合物と２′，３′−ジデオキシシチジン、２′，３′−ジデオキシウリジン，又は３′−デオキシチミジンとを、リン酸又はリン酸塩の存在下エシェリヒア（￥Ｅ
ｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ￥）属，クレブシェラ（￥Ｋｌｅ
ｂｓｉｅｌｌａ）属あるいはエルビニア（￥Ｅｒｗｉｎ
ｉａ￥）属の微生物の作用により水溶液中にて反応させ
て、一般式［ I ］に示す２′，３′−ジデオキシプリ
ンヌクレオシドを生成させることを特徴とする２′，３
′−ジデオキシプリンヌクレオシドの製造方法。 ▲数式、化学式、表等があります▼［ I ］（式中Ａ、Ｘ、Ｒ＿１、Ｒ＿２、Ｒ＿３は一般式［III
］に同じ）７）一般式［IV］ ▲数式、化学式、表等があります▼［IV］（式中Ｂは水素原子リボフラノシル基デオキシリボフラノシル基５′−燐酸−リボフラノシル基又は５′−燐酸−デオキシリボフラノシル基でありＹは窒素原子あるいは炭素原子であり、Ｒ＿４およびＲ＿５はそれぞれ独立して、水素原子水酸基アミノ基アルキル基ハロゲン原子アルコキシ基メルカプト基のいずれかである）に示すプリン化合物と２′，３′−ジデオキシシチジン、２′，３′−ジデオキシウリジン，又は３′−デオキシチミジンとを、リン酸又はリン酸塩の存在下エシェリヒア（￥Ｅ
ｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ￥）属，クレブシェラ（￥Ｋｌｅ
ｂｓｉｅｌｌａ￥）属あるいはエルビニア（￥Ｅｒｗｉ
ｎｉａ￥）属の微生物の作用により水溶液中にて反応さ
せて、一般式［II］に示す２′，３′−ジデオキシプリ
ンヌクレオシドを生成させることを特徴とする２′，３
′−ジデオキシプリンヌクレオシドの製造方法。 ▲数式、化学式、表等があります▼［II］（式中Ａ、Ｘ、Ｒ＿４、Ｒ＿５は一般式［IV］に同じ）８）請求項６記載の一般式［III］で表されるプリン化
合物と２′，３′−ジデオキシシチジン、２′，３′−ジデオキシウリジン，又は２′，３′−ジデオキシチミジンとを、リン酸又はリン酸塩の存在下エシェリヒア（￥Ｅ
ｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ￥）属，クレブシェラ（￥Ｋｌｅ
ｂｓｉｅｌｌａ￥）属あるいはエルビニア（￥Ｅｒｗｉ
ｎｉａ￥）属の微生物の作用により水溶液中にて反応さ
せた後、反応液の遠心分離操作を行い得られる上澄液を
合成吸着剤により不純物を除去して、請求項１記載の一
般式［ I ］で表される２′，３′−ジデオキシプリン
ヌクレオシドを単離することを特徴とする２′，３′−
ジデオキシプリンヌクレオシドの製造方法。９）請求項７記載の一般式［IV］で表されるプリン化合
物と２′，３′−ジデオキシシチジン、２′，３′−ジデオキシウリジン，又は２′，３′−ジデオキシチミジンとを、リン酸又はリン酸塩の存在下エシェリヒア（￥Ｅ
ｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ￥）属、クレブシェラ（￥Ｋｌｅ
ｂｓｉｅｌｌａ￥）属あるいはエルビニア（￥Ｅｒｗｉ
ｎｉａ￥）属の微生物の作用により水溶液中にて反応さ
せた後、反応液の遠心分離操作を行い得られる上澄液を
合成吸着剤により不純物を除去して、請求項２記載の一
般式［II］で表される２′，３′−ジデオキシプリンヌ
クレオシドを単離することを特徴とする２′，３′−ジ
デオキシプリンヌクレオシドの製造方法。１０）請求項６記載の一般式［III］で表されるプリン
化合物と２′，３′−ジデオキシシチジン、２′，３′−ジデオキシウリジン，又は２′，３′−ジデオキシチミジンとを、リン酸又はリン酸塩の存在下エシェリヒア（￥Ｅ
ｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ￥）属，クレブシェラ（￥Ｋｌｅ
ｂｓｉｅｌｌａ￥）属あるいはエルビニア（￥Ｅｒｗｉ
ｎｉａ￥）属の微生物の作用により水溶液中にて反応さ
せる際、あらかじめ４５〜５５℃に保温した水溶液中に
、あらかじめ４５〜５５℃に保温したエシェリヒア（￥
Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ￥）属，クレブシェラ（￥Ｋｌ
ｅｂｓｉｅｌｌａ￥）属あるいはエルビニア（￥Ｅｒｗ
ｉｎｉａ￥）の微生物を加えて請求項１記載の一般式［
I ］で表される２′，３′−ジデオキシプリンヌクレ
オシドを収率良く得ることを特徴とする２′，３′−ジ
デオキシプリンヌクレオシドの製造方法。１１）請求項７記載の一般式［IV］で表されるプリン化
合物と２′，３′−ジデオキシシチジン、２′，３′−ジデオキシウリジン，又は２′，３′−ジデオキシチミジンとを、リン酸又はリン酸塩の存在下エシェリヒア（￥Ｅ
ｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ￥）属，クレブシェラ（Ｋｌｅｂ
ｓｉｅｌｌａ￥）属あるいはエルビニア（￥Ｅｒｗｉｎ
ｉａ￥）属の微生物の作用により水溶液中にて反応させ
る際、あらかじめ４５〜５５℃に保温した水溶液中に、
あらかじめ４５〜５５℃に保温したエシェリヒア（￥Ｅ
ｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ￥）属、クレブシェラ（￥Ｋｌｅ
ｂｓｉｅｌｌａ￥）属あるいはエルビニア（￥Ｅｒｗｉ
ｎｉａ￥）の微生物を加えて請求項２記載の一般式［
I ］で表される２′，３′−ジデオキシプリンヌクレオ
シドを収率良く得ることを特徴とする２′，３′−ジデ
オキシプリンヌクレオシドの製造方法。１２）請求項６記載の一般式［III］で表されるプリン
化合物と２′，３′−ジデオキシシチジン、２′，３′−ジデオキシウリジン，又は２′，３′−ジデオキシチミジンとを、リン酸又はリン酸塩の存在下エシェリヒア（￥Ｅ
ｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ￥）属、クレブシェラ（￥Ｋｌｅ
ｂｓｉｅｌｌａ￥）属あるいはエルビニア（￥Ｅｒｗｉ
ｎｉａ￥）属の微生物の作用により水溶液中にて反応さ
せる際、用いる微生物としてエシェリヒア（Ｅｓｃｈｅ
ｒｉｃｈｉａ）属としては￥Ｅ．ｃｏｌｉ￥　ＪＡ−３
００株、クレブシェラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）属とし
ては￥Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ￥　ＩＦＯ−３３２１
株、エルビニア（Ｅｒｗｉｎｉａ）属としては￥Ｅ．ｈ
ｅｒｂｉｃｏｌａ￥　ＩＦＯ−１２６８６株を選ぶこと
により、請求項１記載の一般式［ I ］で表される２′
，３′−ジデオキシプリンヌクレオシドを収率良く得る
ことを特徴とする２′，３′−ジデオキシプリンヌクレ
オシドの製造方法。１３）請求項７記載の一般式［IV］で表されるプリン化
合物と２′，３′−ジデオキシシチジン、２′，３′−ジデオキシウリジン、又は２′，３′−ジデオキシチミジンとを、リン酸又はリン酸塩の存在下エシェリヒア（￥Ｅ
ｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ￥）属、クレブシェラ（￥Ｋｌｅ
ｂｓｉｅｌｌａ￥）属あるいはエルビニア（￥Ｅｒｗｉ
ｎｉａ￥）属の微生物の作用により水溶液中にて反応さ
せる際、用いる微生物としてエシェリヒア（￥Ｅｓｃｈ
ｅｒｉｃｈｉａ￥）属としては￥Ｅ．ｃｏｌｉ￥　ＪＡ
−３００株、クレブシェラ（￥Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ￥
）属としては￥Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ￥　ＩＦＯ−
３３２１株、エルビニア（￥Ｅｒｗｉｎｉａ￥）属とし
ては￥Ｅ．ｈｅｒｂｉｃｏｌａ￥　ＩＦＯ−１２６８６
株選ぶことにより、請求項２記載の一般式［II］で表さ
れる２′，３′−ジデオキシプリンヌクレオシドを収率
良く得ることを特徴とする２′，３′−ジデオキシプリ
ンヌクレオシドの製造方法。１４）請求項１記載の一般式［ I ］あるいは／および
請求項２記載の一般式［II］で表される２′，３′−ジデオキシプリンヌクレオシド類のうち少
なくとも一種を有効成分とする抗ウィルス剤。１５）請求項１記載の一般式［ I ］あるいは／および
請求項２記載の一般式［II］で表される２′，３′−ジデオキシプリンヌクレオシド類のうち少
なくとも一種を有効成分とする抗レトロウイルス剤。１６）請求項１記載の一般式［ I ］あるいは／および
請求項２記載の一般式［II］で表される２′，３′−ジデオキシプリンヌクレオシド類のうち少
なくとも一種を有効成分とする後天性免疫不全症（ＡＩ
ＤＳ）の治療薬及び予防薬。１７）請求項１記載の一般式［ I ］あるいは／および
請求項２記載の一般式［II］で表される２′，３′−ジデオキシプリンヌクレオシド類のうち少
なくとも一種を有効成分として含む遺伝子工学上用いら
れる実験用医薬および実験用試薬。