JP3365644B2 - α−Ｄ−グリコシルカスガマイシン、その製造法およびそれを含有する抗菌剤 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、新規物質α−Ｄ−グリ
コシルカスガマイシン、その製造法およびそれを含有す
る抗菌剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】カスガマイシンは、特公昭42-6818 号公
報に示されるごとく、ストレプトミセス・カスガエンシ
スの産生する抗生物質であって一般式(I) ：

【０００３】

【化１】

【０００４】で示される化学構造を有し、植物、魚類、
家畜などへの病害微生物の成長阻止作用を有しているこ
とから、たとえば特公昭63-56202号公報、特公平1-3344
7 号公報などで示されるごとく、農園芸用、水畜産用な
どの抗菌剤として広く利用されている。

【０００５】一般に、抗生物質は耐性菌の出現に悩まさ
れ、安全性の高い新たな誘導体の確立が望まれている。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】本発明者らはカスガマ
イシンの本来の抗菌作用を有し、安全性の高いカスガマ
イシンの糖誘導体に着目し、鋭意研究した。

【０００７】その結果、新規物質α−Ｄ−グリコシルカ
スガマイシンを見い出すとともにその製造法およびそれ
を含有する抗菌剤を確立して本発明を完成した。

【０００８】

【課題を解決するための手段】本発明は、α−Ｄ−グリ
コシルカスガマイシン、カスガマイシンと澱粉質とを含
有する溶液に糖転移酵素を作用させ、α−Ｄ−グリコシ
ルカスガマイシンを生成せしめ、これを採取することを
特徴とするα−Ｄ−グリコシルカスガマイシンの製造
法、カスガマイシンと澱粉質とを含有する溶液に糖転移
酵素を作用させてα−Ｄ−グリコシルカスガマイシンを
生成せしめ、ついで、この溶液をＨ型強酸性カチオン交
換樹脂に接触させて精製し、α−Ｄ−グリコシルカスガ
マイシンを採取することを特徴とするα−Ｄ−グリコシ
ルカスガマイシンの製造法およびα−Ｄ−グリコシルカ
スガマイシンを含有する抗菌剤に関する。

【０００９】本発明のα−Ｄ−グリコシルカスガマイシ
ンは、安全性が高く、その上、α−グルコシダーゼによ
って容易に加水分解されてカスガマイシン本来の生理効
果を発揮するという理想的な物質であることが判明し
た。

【００１０】本発明のα−Ｄ−グリコシルカスガマイシ
ンの製造法は、カスガマイシンと澱粉質とを含有する溶
液に糖転移酵素を作用させ、α−Ｄ−グリコシルカスガ
マイシンを生成せしめ、これを採取すればよいことが判
明した。

【００１１】以下、本発明を詳細に説明する。

【００１２】本発明に用いるカスガマイシン、α−Ｄ−
グリコシルカスガマイシンまたはα−Ｄ−グルコシルカ
スガマイシンは、不都合が生じない限り、それらの塩
類、たとえば塩酸塩をも意味するものとする。

【００１３】本発明に用いるカスガマイシンは、一般に
精製されたカスガマイシンが望ましい。また、必要なら
ばカスガマイシンを産生せしめたストレプトミセス属に
属する微生物の培養物またはその部分精製物などが適宜
使用できる。

【００１４】本発明に用いる澱粉質とは、澱粉または澱
粉を加工したものも含み、同時に用いる糖転移酵素によ
ってα−Ｄ−グルコシルカスガマイシン、α−マルトシ
ルカスガマイシン、α−マルトトリオシルカスガマイシ
ン、α−マルトテトラオシルカスガマイシンなどのグル
コース残基がカスガマイシンに等モル以上結合したα−
Ｄ−グリコシルカスガマイシンを生成することができる
ものであればよく、かかる澱粉質の具体例としては、た
とえばアミロース、デキストリン、シクロデキストリ
ン、マルトオリゴ糖などの澱粉部分分解物、さらには液
化澱粉、糊化澱粉などがあげられる。

【００１５】さらに、α−Ｄ−グリコシルカスガマイシ
ンの生成を容易にするためには、糖転移酵素の作用に好
適な澱粉質が選ばれる。

【００１６】たとえば、糖転移酵素としてα−グルコシ
ダーゼ（EC 3.2.1.20 ）を用いる際には、マルトース、
マルトトリオース、マルトテトラオースなどのマルトオ
リゴ糖、またはＤＥ（Dextrose Equivalent 、以下ＤＥ
と略す）約10〜70の澱粉部分分解物などが好適であり、
シクロマルトデキストリン グルカノトランスフェラー
ゼ（EC 2.4.1.19 ）を用いる際には、シクロデキストリ
ンまたはＤＥ１以下の澱粉糊化物からＤＥ約60の澱粉部
分分解物などが好適である。α−アミラーゼ（EC 3.2.
1.1）を用いる際には、ＤＥ１以下の澱粉糊化物からＤ
Ｅ約30のデキストリン、澱粉部分分解物などが好まし
い。

【００１７】本発明でいうカスガマイシンと澱粉質とを
含有する溶液とは、カスガマイシンをできるだけ高濃度
に含有するものが望ましく、かかる溶液の具体例として
は、たとえばｐＨ7.0 未満の酸性側ｐＨで溶解させた溶
液があげられ、その濃度は、カスガマイシンとして約1.
0 ｗ／ｖ％以上の濃度であり、好ましくは、約5.0 〜2
0.0ｗ／ｖ％含有している溶液が適している。

【００１８】本発明に用いる糖転移酵素は、カスガマイ
シンとこの酵素に好適な性質の澱粉質とを含有する溶液
に作用させる時、カスガマイシンを分解せずにα−グリ
コシルカスガマイシンを生成するものであればいずれの
ものでもよい。かかる糖転移酵素の具体例としては、た
とえばブタの肝臓、ソバの種子もしくはイネの種子など
の動植物由来のα−グルコシダーゼまたはムコール（Mu
cor ）属、ペニシリウム（Penicillium ）属などに属す
るカビもしくはサッカロミセス（Saccharomyces ）属な
どに属する酵母などを栄養培地で培養することによりえ
られる微生物の培養物由来のα−グルコシダーゼ、バチ
ルス（Bacillus）属またはクレブシーラ（Klebsiella）
属などに属する細菌の培養物由来のシクロマルトデキス
トリン グルカノトランスフェラーゼ、バチルス（Bacill
us）属などに属する細菌もしくはアスペルギルス（Aspe
rgillus ）属などに属するカビの培養物由来のα−アミ
ラーゼなどがあげられる。

【００１９】これらの糖転移酵素は、前記の条件を満足
しさえすればよく、必ずしも精製して使用する必要はな
く、通常は、粗酵素で用いても本発明の目的を達成する
ことができる。精製が必要なばあいには、公知の各種方
法で精製して使用してもよく、市販の糖転移酵素を利用
することもできる。

【００２０】反応時のｐＨと温度は、カスガマイシンの
安定性がえられ、かつ、α−Ｄ−グリコシルカスガマイ
シンが生成すればよく、ｐＨ3.0 〜7.0 、温度10〜90
℃、好ましくはｐＨ4.0 〜6.5 、温度40〜75℃である。

【００２１】使用酵素量は反応時間と密接な関係があ
り、通常は、経済性の点から約５〜80時間で反応を終了
するように酵素量が選ばれる。

【００２２】また、固定化された糖転移酵素をバッチ式
で反応に利用することも適宜選択できる。

【００２３】さらに、必要ならば、糖転移酵素産生能を
有する微生物、動物または植物の組織を、澱粉質とカス
ガマイシンとを含有する培地に培養してα−Ｄ−グリコ
シルカスガマイシンを生成させることもできる。

【００２４】本発明の反応方法は、糖転移酵素または糖
転移酵素とグルコアミラーゼ（EC 3.2.1.3）をカスガマ
イシンと澱粉質とを含有する溶液に加え、作用させれば
よい。

【００２５】前記反応に用いるグルコアミラーゼとして
は、微生物、植物など各種起源のものが利用できる。か
かるグルコアミラーゼの具体例としては、たとえばアス
ペルギルス（Aspergillus ）属またはリゾープス（Rhiz
opus）属に属する微生物起源の市販のグルコアミラーゼ
があげられる。

【００２６】使用する糖転移酵素を有効に利用するため
に、あらかじめ、糖転移酵素を作用させてα−Ｄ−グリ
コシルカスガマイシンを生成せしめ、ついで、グルコア
ミラーゼを作用させてグルコース残基がカスガマイシン
に等モル結合したα−Ｄ−グルコシルカスガマイシンを
蓄積生成させるのが望ましい。また、グルコアミラーゼ
とともにβ−アミラーゼ（EC 3.2.1.2）を併用すること
も随意である。

【００２７】このようにしてα−Ｄ−グリコシルカスガ
マイシンを生成せしめた反応溶液は、通常、α−Ｄ−グ
リコシルカスガマイシンとともに未反応カスガマイシン
およびグルコース、マルトオリゴ糖などを含有してお
り、そのままでα−Ｄ−グリコシルカスガマイシン製品
にすることもできる。

【００２８】一般的には、反応溶液を濾過、濃縮してシ
ロップ状とし、そののちに乾燥、粉末化することにより
粉末状のα−Ｄ−グリコシルカスガマイシン製品とす
る。さらに、精製されたα−Ｄ−グリコシルカスガマイ
シン製品を製造するばあいには、たとえば、Ｈ型強酸性
カチオン交換樹脂による吸着性の差を利用してα−Ｄ−
グリコシルカスガマイシンとグルコース、オリゴ糖など
の夾雑物を分離、精製すればよい。かかるＨ型強酸性カ
チオン交換樹脂の具体例としては、たとえばスルホン基
を結合したスチレン- ジビニルベンゼン架橋共重合体樹
脂のＨ型が使用され、市販品としては、たとえばダウエ
ックス50W-X2、ダウエックス50W-X4またはダウエックス
50W-X8（商品名、ダウケミカル社製）、アンバーライト
IR-116、アンバーライトIR-118またはアンバーライトIR
-124（商品名、ローム アンド ハース社製）、ダイヤ
イオンSK 1B 、ダイヤイオンSK 102またはダイヤイオン
SK 104（商品名、三菱化成工業（株）製）などがあげら
れる。

【００２９】本発明のα−Ｄ−グリコシルカスガマイシ
ンを生成せしめた反応液の精製法は、反応液を、たとえ
ばＨ型強酸性カチオン交換樹脂を充填したカラムに通液
すると、α−Ｄ−グリコシルカスガマイシンおよび比較
的少量の未反応カスガマイシンが、Ｈ型強酸性カチオン
交換樹脂に吸着するのに対し、多量に共存するグルコー
ス、マルトオリゴ糖などの水溶性糖類は吸着されること
なくそのまま流出する。

【００３０】必要ならば、Ｈ型強酸性カチオン交換樹脂
に接触させるまでの間に、たとえば、反応液を加熱して
生じる不溶物を濾過して除去するなどの精製法を組み合
わせて利用することも随意である。

【００３１】前述のようにして、Ｈ型強酸性カチオン交
換樹脂カラムに選択的に吸着した大量のα−Ｄ−グリコ
シルカスガマイシンと比較的少量の未反応カスガマイシ
ンとは、希酸などの酸性水溶液で洗浄したのち、たとえ
ば、苛性ソーダ水、アンモニア水などのアルカリ性水溶
液を通液すれば、α−Ｄ−グリコシルカスガマイシンお
よび未反応カスガマイシンが溶出してくるので、これを
採取すればよい。

【００３２】ついで、適当な濃度にまで濃縮すれば、α
−Ｄ−グリコシルカスガマイシンを主成分とするシロッ
プ状製品がえられる。さらに、これを乾燥し粉末化する
ことによって、α−Ｄ−グリコシルカスガマイシンを主
成分とする粉末状製品がえられる。

【００３３】また、糖転移酵素とグルコアミラーゼとを
作用させて、グルコース残基がカスガマイシンに等モル
結合したα−Ｄ−グリコシルカスガマイシンを蓄積生成
せしめた溶液を、Ｈ型強酸性カチオン交換樹脂を用いて
精製して、高純度のα−Ｄ−グリコシルカスガマイシン
を製造することもできる。

【００３４】また、必要ならば、前述のＨ型強酸性カチ
オン交換樹脂を利用する方法とは別の方法、たとえば、
溶解度分別法、分子量分画法、膜濃縮法、高速液体クロ
マトグラフィー、カラムクロマトグラフィーなどの方法
を採用するか、または、これらの１種または２種以上の
方法をＨ型強酸性カチオン交換樹脂を利用する方法と併
用して、さらに高純度のα−Ｄ−グリコシルカスガマイ
シンを調製することも随意である。必要ならば、α−Ｄ
−グリコシルカスガマイシンを過飽和溶液から晶出さ
せ、この結晶を分離してさらに高純度のα−Ｄ−グリコ
シルカスガマイシンを製造することも随意である。

【００３５】前述のようにしてえられたα−Ｄ−グリコ
シルカスガマイシンは、α−グルコシダーゼによって、
容易にカスガマイシンとＤ−グルコースとに加水分解さ
れ、カスガマイシン本来の生理活性を発揮することか
ら、農園芸用、水畜産用などの抗菌剤として有利に利用
される。

【００３６】農園芸用抗菌剤としては、イネの病害微生
物ピリキュラリア・オリゼ（Piricularia oryzae）また
はシュードモナス・グルメ（Pseudomonas glumae）など
をはじめとして、メロン、トマト、ニンジンまたはキャ
ベツなどの病害微生物の防除に、葉面または圃場散布す
ることにより、水畜産用抗菌剤としては、養殖魚類、家
畜の病害微生物の生育阻止に、通常、飼餌料に配合して
投与することにより用いられる。

【００３７】抗菌剤は、その目的に応じてその形状を自
由に選択できる。たとえば、噴霧剤などの液剤または散
剤、顆粒剤などの固形製剤である。製剤にあたっては、
必要に応じて、他の成分、たとえば、生理活性物質、抗
生物質、補助添加剤（賦形剤、結合剤、崩壊剤など）、
増量剤、安定剤、着色剤、香料などの１種または２種以
上と併用するこも随意である。

【００３８】投与量は、通常、公知のカスガマイシンに
準じて用いればよく、必要に応じて、含量、投与方法、
投与頻度などによって適宜調節することができる。通
常、α−Ｄ−グリコシルカスガマイシンとして、1,000p
pm未満、望ましくは、５〜800ppmの濃度になるよう使用
され、圃場または苗床のばあい、１ｍ² 当り、約0.1 〜
20.0ｇの範囲が好適である。

【００３９】α−Ｄ−グリコシルカスガマイシンを含有
せしめる方法としては、抗菌剤の製品が完成するまでの
工程で、たとえば、混和、混捏、溶解、浸漬、浸透、散
布、塗布、注入などの公知の方法が適宜選ばれる。

【００４０】以下、本発明のα−Ｄ−グリコシルカスガ
マイシンの一例として、α−Ｄ−グルコシルカスガマイ
シンについて詳細に説明する。

【００４１】実験例１ α−Ｄ−グルコシルカスガマイ
シンの調製 カスガマイシン（シグマ ケミカル カンパニー(Sigma
Chemical Company)製、米国）５ｇ、デキストリン（パ
イン- デックス(PINE-DEX)#1、商品名、松谷化学工業
（株）製）50ｇ、塩化カルシウム60mgおよびバチルス・
ステアロサーモフィラス（Bacillus stearothermophilu
s ）由来のシクロマルトデキストリン グルカノトラン
スフェラーゼ（（株）林原生物化学研究所製）7,000 単
位に、0.1Ｍ酢酸塩緩衝液（ｐＨ5.5 ）を加えて100ml
とし、50℃で２日間反応させた。反応液を薄層クロマト
グラフィーで分析したところ、カスガマイシンのかなり
の部分がグルコース残基を等モル以上結合したα−Ｄ−
グリコシルカスガマイシンに変換していた。この反応液
にリゾプス・ニベウス（Rhizopus niveus ）由来のグル
コアミラーゼ（生化学工業（株）製）を800 単位加え、
37℃で６時間反応させた。反応液を薄層クロマトグラフ
ィーで分析したところ、Ｄ−グルコース、α−Ｄ−グル
コシルカスガマイシンおよびカスガマイシンを含有して
いた。

【００４２】反応液を沸騰水で10分間加熱して酵素を失
活させ、これにメタノールを等量加えて、濾過し、濾液
を減圧濃縮し、この濃縮液をＨ型強酸性カチオン交換樹
脂、ダウエックス（DOWEX ）-X8 （Ｈ型）（商品名、ダ
ウケミカル社製）に接触させ、ついで、0.01Ｎ塩酸と水
で洗浄してグルコースなどの夾雑物を除去したのち、１
％アンモニア水で、α−Ｄ−グルコシルカスガマイシン
およびカスガマイシンを溶出、採取し、塩酸で中和し、
濾過した濾液を凍結乾燥し、粉末化した。本粉末を水で
溶解し、これをセファデックス（Sephadex）G-10（商品
名、ファルマシア エルケービー(Pharmacia LKB) 社
製、スウェーデン）5.6 ×62cmに充填したカラムを用い
てゲル濾過し、α−Ｄ−グルコシルカスガマイシン高含
有画分を採取し、濾過し、濾液を凍結乾燥し、粉末化し
て、高純度α−Ｄ−グルコシルカスガマイシン粉末をえ
た。

【００４３】この粉末の理化学的性質を調べたところ、
従来全く知られていないα−Ｄ−グルコシルカスガマイ
シンであることが判明した。

【００４４】以下、本発明物質α−Ｄ−グルコシルカス
ガマイシンの理化学的性質について述べる。

【００４５】（１）薄層クロマトグラフィー 本発明のα−Ｄ−グルコシルカスガマイシンと対照のカ
スガマイシンの薄層クロマトグラフィーによる結果を表
１に示す。

【００４６】

【表１】

【００４７】（２）赤外線吸収スペクトル ＫＢｒ錠剤法で測定した。結果を図１に示す。

【００４８】本発明のα−Ｄ−グルコシルカスガマイシ
ンの赤外線吸収スペクトルを実線で示し、対照のカスガ
マイシンのそれを点線で示す。

【００４９】（３）薬剤に対する溶解性 水、酢酸、0.1 Ｎ- 水酸化ナトリウム、0.1 Ｎ- 塩酸に
易溶。メタノール、エタノールに難溶。クロロホルム、
酢酸エチルに不溶。室温下での水に対する溶解度が、カ
スガマイシンのばあいの５倍以上に向上した。

【００５０】（４）物性、物質の色 無臭の白色粉末。水溶液は中性ないし酸性を示す。

【００５１】（５）安定性 水溶液の安定性は、ｐＨ3.0 〜7.0 ですぐれている。

【００５２】（６）呈色反応 アントロン- 硫酸反応で緑色を呈する。フェーリング氏
液還元反応は陰性。

【００５３】（７）構造 (a) 加水分解 ブタの肝臓、イネ種子またはムコール属微生物由来のα
−グルコシダーゼで容易に加水分解され、カスガマイシ
ン１モルに対し、Ｄ−グルコース１モルを生成する。

【００５４】(b) ＮＭＲ 本発明物質とカスガマイシンとについて、ＮＭＲ測定装
置（ＶＸＲ装置-500ハ゛リアン(Varian)社製、米国）を用い
て測定した。測定溶媒は、重水（Ｄ₂ Ｏ）を用いた。結
果を図２に示す。本発明の一例としてのα−Ｄ−グルコ
シルカスガマイシンの¹³Ｃ- ＮＭＲスペクトルを（Ａ）
に、対照のカスガマイシンを（Ｂ）に示す。

【００５５】図２の結果から、カスガマイシンのイノシ
トール残基部分に、大きなケミカルシフトが見出された
ことにより、糖転移したグルコースの結合は、カスガマ
イシンのイノシトール残基の水酸基にエーテル結合して
いるものと判断される。

【００５６】以上の理化学的性質から、本発明物質は、
一般式(II)：

【００５７】

【化２】

【００５８】で示される新規物質α−Ｄ−グルコシルカ
スガマイシンであることが判明した。

【００５９】また、これらの結果から、カスガマイシン
と澱粉質とを含有する溶液にシクロデキストリン グル
カノトランスフェラーゼを作用させて生成されるカスガ
マイシンにグルコース残基が等モル以上結合したα−Ｄ
−グリコシルカスガマイシンは、一般式(III) ：

【００６０】

【化３】

【００６１】（式中、ｎは１以上の整数を表わし、ｎが
１のばあいはα−Ｄ−グルコシルカスガマイシン、ｎが
２のばあいはα−マルトシルカスガマイシン、ｎが３の
ばあいはα−マルトトリオシルカスガマイシン、ｎが４
のばあいはα−マルトテトラオシルカスガマシインを表
わす）で示される構造を有しているものと判断される。

【００６２】実験例２ 急性毒性試験 ７週齢のｄｄ系マウスを使用して、α−Ｄ−グルコシル
カスガマイシンを腹腔内投与して、急性毒性試験をした
ところ、kg当り3,000mg まで死亡例は見られず、本物質
の毒性は極めて低い。

【００６３】以下、本発明の実施例としてα−Ｄ−グリ
コシルカスガマイシンの製造例およびα−Ｄ−グリコシ
ルカスガマイシンの用途例を述べる。

【００６４】実施例１ α−Ｄ−グリコシルカスガマイ
シン カスガマイシン（シグマ ケミカル カンパニー製）１
重量部およびデキストリン（ＤＥ８）８重量部を水40重
量部に加熱溶解し、これにバチルス・ステアロサーモフ
ィラス（Bacillus stearothermophilus ）由来のシクロ
マルトデキストリン グルカノトランスフェラーゼ
（（株）林原生物化学研究所製）をデキストリングラム
当り20単位加え、ｐＨ6.0 に調製して65℃で48時間反応
させた。反応液を薄層クロマトグラフィーで分析したと
ころ、大部分が、α−Ｄ−グルコシルカスガマイシン、
α−マルトシルカスガマイシン、α−マルトトリオシル
カスガマイシン、α−マルトテトラオシルカスガマイシ
ンなどのグルコース残基を等モル以上結合したα−Ｄ−
グリコシルカスガマイシンに変換していた。

【００６５】この反応液を加熱して酵素を失活させ、濾
過し、濃縮し、固形物当り約20ｗ／ｗ％のα−Ｄ−グリ
コシルカスガマイシンとともに少量のカスガマイシンお
よび大量のデキストリンを含有するシロップ状製品を、
固形物当り原料重量に対して約95％の収率でえた。

【００６６】本品は、安全性の高い抗菌剤として、農園
芸用、水畜産用などに有利に利用できる。

【００６７】実施例２ α−Ｄ−グリコシルカスガマイ
シン （１）α−グルコシダーゼ標品の調製 マルトース４ｗ／ｖ％、リン酸１カリウム0.1 ｗ／ｖ
％、硝酸アンモニウム0.05ｗ／ｖ％、塩化カリウム0.05
ｗ／ｖ％、ポリペプトン0.2 ｗ／ｖ％、炭酸カルシウム
１ｗ／ｖ％（別に乾燥して植菌時に無菌的に添加）およ
び水からなる液体培地500 重量部にムコール ジャバニ
カス（Mucor javanicus ）IFO 4570（財団法人 発酵研
究所(Institute for Fermentation, OSAKA(IFO))）を植
菌し、温度30℃で44時間振盪培養した。培養終了後、菌
糸体を採取し、その湿菌体48重量部に対し、0.5 Ｍ酢酸
緩衝液（ｐＨ5.3 ）に溶解した４Ｍ尿素500 重量部を加
え、30℃で40時間保存したのち、遠心分離した。この上
清を流水中で一夜透析したのち、硫安0.9 飽和とし、４
℃で一夜放置して生成した塩析物を濾取し、0.01Ｍ酢酸
緩衝液（ｐＨ5.3 ）50重量部に懸濁したのち、遠心分離
して上清を採取し、α−グルコシダーゼ製品とした。

【００６８】（２） α−Ｄ−グリコシルカスガマイシ
ンの調製 カスガマイシン（シグマ ケミカル カンパニー製）４
重量部およびデキストリン（ＤＥ30）20重量部を水30重
量部に加熱溶解し、これに（１）の方法で調製したα−
グルコシダーゼ標品10重量部を加え、ｐＨ6.5 に維持し
て撹拌しつつ55℃で40時間反応させた。

【００６９】反応液を薄層クロマトグラフィーで分析し
たところ、大量のα−グルコシルカスガマイシン、α−
マルトシルカスガマイシン、α−マルトトリオシルカス
ガマイシンなどのα−Ｄ−グリコシルカスガマイシンを
生成していた。この反応液を加熱して酵素を失活させ、
濾過し、濾液をＨ型強酸性カチオン交換樹脂、ダイヤイ
オンSK-1B （商品名、三菱化成工業（株）製）のカラム
にＳＶ２で通液した。その結果、溶液中の大量のα−Ｄ
−グリコシルカスガマイシンと少量のカスガマイシンと
が陽イオン交換樹脂に吸着し、グルコース、オリゴ糖な
どは吸着することなく流出した。ついで、カラムを酸性
水で通液、洗浄したのち、アンモニア水溶液を通液し、
α−Ｄ−グリコシルカスガマイシンおよびカスガマイシ
ンを溶出、採取し、減圧濃縮、乾燥し、粉末化してα−
Ｄ−グリコシルカスガマイシンとともにカスガマイシン
を含有する粉末状製品を原料のカスガマイシン重量に対
して約90％の収率でえた。

【００７０】本品は、安全性の高い抗菌剤として農園芸
用、水畜産用などに有利に利用できる。

【００７１】実施例３ α−Ｄ−グルコシルカスガマイ
シン カスガマイシン（シグマ ケミカル カンパニー製）１
重量部およびデキストリン（ＤＥ12）10重量部を水15重
量部に加熱溶解し、これにシクロマルトデキストリング
ルカノトランスフェラーゼ（（株）林原生物化学研究所
製）をデキストリングラム当り20単位加え、ｐＨ6.0 、
温度70℃に維持し撹拌しつつ64時間反応させた。反応液
を薄層クロマトグラフィーで分析したところ、大部分
が、グルコース残基を等モル以上結合したα−Ｄ−グリ
コシルカスガマイシンに変換していた。反応液を実施例
１と同様に加熱して酵素を失活させ、ｐＨ5.0 に調製
し、これにグルコアミラーゼ（生化学工業（株）製）を
固形物グラム当り100 単位加え50℃で５時間反応させ
た。

【００７２】反応液を加熱して酵素を失活させ、濾過
し、濾液をＨ型強酸性カチオン交換樹脂、アンバーライ
トIR-116（商品名、ローム アンド ハース社製）のカ
ラムにＳＶ1.5 で通液した。その結果、溶液中のα−Ｄ
−グルコシルカスガマイシンと未反応のカスガマイシン
とがカチオン交換樹脂に吸着し、グルコースは吸着する
ことなく流出した。ついで、カラムを酸性水で通液、洗
浄したのち、アンモニア水溶液を通液し、α−Ｄ−グル
コシルカスガマイシンおよびカスガマイシンを溶出、採
取し、減圧濃縮し、乾燥し、粉末化して粉末状のα−Ｄ
−グルコシルカスガマイシン製品を固形物当り原料のカ
スガマイシン重量に対して約80％の収率でえた。

【００７３】本品は、安全性の高い抗菌剤として農園芸
用、水畜産用などに有利に利用できる。

【００７４】実施例４ 水和剤 実施例１の方法でえたα−Ｄ−グリコシルカスガマイシ
ン含有シロップ状製品10重量部、ホワイトカーボン２重
量部、ドデシルベンゼンスルホン酸ソーダ３重量部、リ
グニンスルホン酸ソーダ２重量部およびクレー90重量部
を混合し粉砕して水和剤を製造した。

【００７５】本品を水で約500 〜1,000 倍に希釈し、イ
ネ生育中の圃場１アール当り100 〜150 Ｌの割合で散布
すれば、イネいもち病を防除することができる。

【００７６】実施例５ 粉剤 実施例２の方法でえたα−Ｄ−グリコシルカスガマイシ
ン含有粉末状製品0.3重量部、タルク90重量部およびホ
ワイトカーボン５重量部を均一に混合粉砕して粉剤を製
造した。

【００７７】本品を、そのまま、イネ生育中の圃場１ア
ール当り約２〜４kgの割合で散布すれば、イネいもち病
を防除することができる。

【００７８】実施例６ 粒剤 実施例３の方法でえたα−Ｄ−グルコシルカスガマイシ
ン含有粉末状製品２重量部、リグニンスルホン酸ソーダ
３重量部、ラウリル硫酸ソーダ２重量部およびクレー90
重量部に水を加えてよく混練し、ペレッターにて造粒
し、乾燥、篩別して粒剤を製造した。

【００７９】本品は、そのまま、イネ生育中の圃場10ア
ール当り約２〜４kgの割合で施用すれば、イネいもち病
を防除することができる。

【００８０】

【発明の効果】前述のごとく、本発明の新規物質α−Ｄ
−グリコシルカスガマイシンは、水溶性、安定性にすぐ
れ、しかもα−グルコシダーゼにより容易にカスガマイ
シンとＤ−グルコースとに加水分解され、カスガマイシ
ン本来の生理活性を発揮する。

【００８１】また、このα−Ｄ−グリコシルカスガマイ
シンが、カスガマイシンと澱粉質とを含有する溶液に、
糖転移酵素を、または、糖転移酵素とグルコアミラーゼ
とを作用させる生化学的手法により容易に生成できるこ
とにより、経済性にすぐれ、その工業実施も容易であ
る。

【００８２】また、このようにしてえられるα−Ｄ−グ
リコシルカスガマイシンは、安全性の高い抗菌剤として
農園芸用、水畜産用などに有利に利用される。

【００８３】したがって、本発明によるα−Ｄ−グリコ
シルカスガマイシンの確立は、農薬産業における工業的
意義がきわめて大きい。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明の一例としてのα−Ｄ−グルコシルカス
ガマイシンと対照のカスガマイシンの赤外線吸収スペク
トルを示す図である。

【図２】本発明の一例としてのα−Ｄ−グルコシルカス
ガマイシンと対照カスガマイシンの¹³Ｃ- ＮＭＲを示す
図である。

【符号の説明】

Ｇ−１ α−Ｄ−グルコースの１位の炭素 Ｇ−３ α−Ｄ−グルコースの３位の炭素 Ｇ−６ α−Ｄ−グルコースの６位の炭素

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献 特開 平３−7593（ＪＰ，Ａ) 特開 平３−27293（ＪＰ，Ａ) 特開 昭62−259594（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) C07H 1/00 - 23/00 C12P 19/00 - 19/64 ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＣＡ（ＳＴＮ) ＪＩＣＳＴファイル（ＪＯＩＳ)

Claims (7)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 カスガマイシンと澱粉質とを含有する溶
   液に、α−グルコシダーゼおよびシクロマルトデキスト
   リングルカノトランスフェラーゼから選ばれる糖転移酵
   素を作用させて得ることのできる、一般式（III）： 【化１】 （式中、ｎは１以上の整数）で示される構造を有する、
   カスガマイシンにグルコース残基が等モル以上結合した
   α−Ｄ−グリコシルカスガマイシン。
2. 【請求項２】 α−Ｄ−グリコシルカスガマイシンが、
   α−Ｄ−グルコシルカスガマイシンである請求項１記載
   のα−Ｄ−グリコシルカスガマイシン。
3. 【請求項３】 カスガマイシンと澱粉質とを含有する溶
   液に、α−グルコシダーゼおよびシクロマルトデキスト
   リングルカノトランスフェラーゼから選ばれる糖転移酵
   素を作用させて、請求項１または２記載のα−Ｄ−グリ
   コシルカスガマイシンを生成せしめ、これを採取するこ
   とを特徴とするα−Ｄ−グリコシルカスガマイシンの製
   造法。
4. 【請求項４】 カスガマイシンと澱粉質とを含有する溶
   液に、α−グルコシダーゼおよびシクロマルトデキスト
   リングルカノトランスフェラーゼから選ばれる糖転移酵
   素を作用させて、請求項１または２記載のα−Ｄ−グリ
   コシルカスガマイシンを生成せしめ、ついで、この溶液
   をＨ型強酸性カチオン交換樹脂に接触させて精製し、α
   −Ｄ−グリコシルカスガマイシンを採取することを特徴
   とするα−Ｄ−グリコシルカスガマイシンの製造法。
5. 【請求項５】 前記糖転移酵素とともにグルコアミラー
   ゼを用いることを特徴とする請求項３または４記載の製
   造法。
6. 【請求項６】 α−Ｄ−グリコシルカスガマイシンがα
   −Ｄ−グルコシルカスガマイシンである請求項３、４ま
   たは５記載の製造法。
7. 【請求項７】 請求項１または２記載のα−Ｄ−グリコ
   シルカスガマイシンを１種以上含有する抗菌剤。