JPS61268191A - フラクトオリゴ糖を含有する糖質の製造法 - Google Patents
フラクトオリゴ糖を含有する糖質の製造法Info
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- JPS61268191A JPS61268191A JP60111754A JP11175485A JPS61268191A JP S61268191 A JPS61268191 A JP S61268191A JP 60111754 A JP60111754 A JP 60111754A JP 11175485 A JP11175485 A JP 11175485A JP S61268191 A JPS61268191 A JP S61268191A
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- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
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- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はフラクトオリゴ塘を含有する糖質の新規製造法
に関し、詳しくはバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ） 属に
属し、生育の至適ｐＨを中性からアルカリ性に有する好
アルカリ性の微生物を培養し、新規菌体外フラクトシル
トランスフェラーゼを培養液中に生成蓄積せしめ、これ
を採取して得られる該菌体外フラクトシルトランスフェ
ラーゼをβ−Ｄ−フラクトフラノシド結合を有する糖類
基質に作用させることを特徴とするフラクトオリゴ糖を
含有する糖質の製造法に関する。
に関し、詳しくはバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ） 属に
属し、生育の至適ｐＨを中性からアルカリ性に有する好
アルカリ性の微生物を培養し、新規菌体外フラクトシル
トランスフェラーゼを培養液中に生成蓄積せしめ、これ
を採取して得られる該菌体外フラクトシルトランスフェ
ラーゼをβ−Ｄ−フラクトフラノシド結合を有する糖類
基質に作用させることを特徴とするフラクトオリゴ糖を
含有する糖質の製造法に関する。
ここでいうフラクトシルトランスフェラーゼとはシュー
クローズなどのフラクトースとグルコースとのβ−（２
−１）結合を有する基質に作用してその結合を切断した
後、該フラクトースをシュークローズや１−ケスドース
あるいはニスドースなどのフラクトース残基へ転移し、
オリボッラフクンあるいはそれ以上の分子量を有するフ
ラクタンを生成する作用を有する酵素であり、従来は、
アスパラガスやキクイモ等の植物組織中あるいはオーレ
オバシディウム・プルランス（Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉ
ｕｍｐｕｌｌｕｌａｎｓ）、アスペルギルス旧ｇｅｒ）
、酵母などの菌体内酵素として存在することが知られて
いる（酵素ハンドブック、Ｐ 、 ８０６。
クローズなどのフラクトースとグルコースとのβ−（２
−１）結合を有する基質に作用してその結合を切断した
後、該フラクトースをシュークローズや１−ケスドース
あるいはニスドースなどのフラクトース残基へ転移し、
オリボッラフクンあるいはそれ以上の分子量を有するフ
ラクタンを生成する作用を有する酵素であり、従来は、
アスパラガスやキクイモ等の植物組織中あるいはオーレ
オバシディウム・プルランス（Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉ
ｕｍｐｕｌｌｕｌａｎｓ）、アスペルギルス旧ｇｅｒ）
、酵母などの菌体内酵素として存在することが知られて
いる（酵素ハンドブック、Ｐ 、 ８０６。
朝倉書店；米国特許第４， ３０９， ５０５号；特開
昭５７一１６６９８１号）。
昭５７一１６６９８１号）。
このようなフラクトシルトランスフェラーゼを例えばシ
ュークローズに作用させると糖転移反応の結果、副生じ
たグルコースやフラクトースの他にシュークローズにフ
ラクトースが数分子転移した１−ケスドースやニスドー
ス、フラクトシルニスドースなどのフラクトオリゴ糖お
よび未反応のシュークローズを含有する甘味組成物が得
られるばかりでなく、該トランスフェラーゼとグルコー
スイソメラーゼを併用してシュークローズに作用させる
ことによりシュークローズから高フラクトース含有物を
容易に製造し得ることが知られている（米国特許第４．
３１７．８８０号）。
ュークローズに作用させると糖転移反応の結果、副生じ
たグルコースやフラクトースの他にシュークローズにフ
ラクトースが数分子転移した１−ケスドースやニスドー
ス、フラクトシルニスドースなどのフラクトオリゴ糖お
よび未反応のシュークローズを含有する甘味組成物が得
られるばかりでなく、該トランスフェラーゼとグルコー
スイソメラーゼを併用してシュークローズに作用させる
ことによりシュークローズから高フラクトース含有物を
容易に製造し得ることが知られている（米国特許第４．
３１７．８８０号）。
また、シュークローズにフラクトースが数分子転移した
フラクトオリゴ糖は、う触原因菌であるストレプトコッ
カス・ミュータンスの生産するデキストランシュークラ
ーゼの基質とならないのでう触性が無く虫歯の原因とな
らないだけでなく、有用腸内細菌であるビフィズス菌の
増殖促進物質としても知られており、工業的にも非常に
有用な物質と考えられている。（特公昭５９−５３８３
４号）。
フラクトオリゴ糖は、う触原因菌であるストレプトコッ
カス・ミュータンスの生産するデキストランシュークラ
ーゼの基質とならないのでう触性が無く虫歯の原因とな
らないだけでなく、有用腸内細菌であるビフィズス菌の
増殖促進物質としても知られており、工業的にも非常に
有用な物質と考えられている。（特公昭５９−５３８３
４号）。
従来、これらのフラクトオリゴ糖は主としてオーレオバ
シディム・プルランス（Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍｐ
ｕｌｌｕｌａｎｓ）を好気的に培養することにより菌体
内に生成蓄積されるフラクトシルトランスフェラーゼを
高濃度のシュークロニスに作用させることにヨリ得うレ
テイルカ（ＢＩ［］ ＩＮＤＬＩｓＴＲＹ、 １巻、６
号。
シディム・プルランス（Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍｐ
ｕｌｌｕｌａｎｓ）を好気的に培養することにより菌体
内に生成蓄積されるフラクトシルトランスフェラーゼを
高濃度のシュークロニスに作用させることにヨリ得うレ
テイルカ（ＢＩ［］ ＩＮＤＬＩｓＴＲＹ、 １巻、６
号。
第５頁〜１３頁、 １９８４年）、該酵素が菌体内酵素
であるため菌体からの抽出精製操作が繁雑であるばかり
でなく、酵素の生産性もそれ程高いものとは言えなかっ
た。
であるため菌体からの抽出精製操作が繁雑であるばかり
でなく、酵素の生産性もそれ程高いものとは言えなかっ
た。
また、菌体から該酵素を抽出せずに菌体そのものを酵素
源として使用する方法もあるが菌体内に存在する他の酵
素群による副次的な反応が起り、目的とするフラクトオ
リゴ糖の収率を低下させるだけでなく、添加した菌体（
酵素）が転移反応生成物の濾過精製工程において目詰ま
りの原因となり、糖液の精製を実質上困難とする原因と
なっていた。そのため、菌体内酵素をフラクトオリゴ糖
の製造に用いる場合は包括法で菌体を固定化して使用す
る必要があった。
源として使用する方法もあるが菌体内に存在する他の酵
素群による副次的な反応が起り、目的とするフラクトオ
リゴ糖の収率を低下させるだけでなく、添加した菌体（
酵素）が転移反応生成物の濾過精製工程において目詰ま
りの原因となり、糖液の精製を実質上困難とする原因と
なっていた。そのため、菌体内酵素をフラクトオリゴ糖
の製造に用いる場合は包括法で菌体を固定化して使用す
る必要があった。
本発明者らはｐＨや温度に安定で精製の容易なフラクト
シルトランスフェラーゼを培養濾液中に生成蓄積せしめ
る能力を持つ微生物を鋭意検索し、中性からアルカリ性
に生育の至適ｐＨを有し、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ
）属に属するいくつかの好アルカリ性細菌が培養液中に
著量の新規菌体外フラクトシルトランスフェラーゼを生
成蓄積することを見出し、該酵素をシュークローズに作
用させることにより著量のフラクトオリゴ糖を製造し得
ることを発見し、本発明を完成せしめたものである。
シルトランスフェラーゼを培養濾液中に生成蓄積せしめ
る能力を持つ微生物を鋭意検索し、中性からアルカリ性
に生育の至適ｐＨを有し、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ
）属に属するいくつかの好アルカリ性細菌が培養液中に
著量の新規菌体外フラクトシルトランスフェラーゼを生
成蓄積することを見出し、該酵素をシュークローズに作
用させることにより著量のフラクトオリゴ糖を製造し得
ることを発見し、本発明を完成せしめたものである。
本発明に使用される新規菌体外フラクトシルトランスフ
ェラーゼは、本発明者らにより天然界から新たに検索単
離された好アルカリ性のバチルス属に属する数種類の新
菌株を培養することにより培養濾液中に生成蓄積される
ものである。これらの新菌株は夫々、工業技術院微生物
工業技術研究所にＦＥＲＭ Ｐ−８２５４、Ｐ−８２５
５、Ｐ−８２５６、として寄託されている。
ェラーゼは、本発明者らにより天然界から新たに検索単
離された好アルカリ性のバチルス属に属する数種類の新
菌株を培養することにより培養濾液中に生成蓄積される
ものである。これらの新菌株は夫々、工業技術院微生物
工業技術研究所にＦＥＲＭ Ｐ−８２５４、Ｐ−８２５
５、Ｐ−８２５６、として寄託されている。
これらの菌株の菌学的性質を第１表に示す。
これらの菌株を例えばシュクロース５％、ポリペプトン
０．５％、酵母エキス０．５％、Ｋ２ＨＰＯ。
０．５％、酵母エキス０．５％、Ｋ２ＨＰＯ。
０．１％、ＭｇＳ○４＋ ７ Ｈ２Ｏ０，０２％、Ｎａ
ｚ Ｃ０３１％を含む液体培地を用い、３５〜５５℃で
２０〜５０時間好気的に培養することによりフラクトシ
ルトランスフェラーゼが培養液上清中（菌体外）に生成
蓄積される。なお、本培地で使用する培地は前述の培地
に限定される私のではなく、実質的に安価に入手し得る
コーンステイープリカーやアミノ酸液あるいは無機物を
用いても可能である。また培地のｐＨ調整剤も炭酸ソー
ダに限定されるものではなく、重炭酸ソーダ、炭酸アン
モン、炭酸カリウム、苛性ソーダなど実質的に培地のｐ
Ｈを中性からアルカリ性に調整し得る物質であれば培養
は可能である。
ｚ Ｃ０３１％を含む液体培地を用い、３５〜５５℃で
２０〜５０時間好気的に培養することによりフラクトシ
ルトランスフェラーゼが培養液上清中（菌体外）に生成
蓄積される。なお、本培地で使用する培地は前述の培地
に限定される私のではなく、実質的に安価に入手し得る
コーンステイープリカーやアミノ酸液あるいは無機物を
用いても可能である。また培地のｐＨ調整剤も炭酸ソー
ダに限定されるものではなく、重炭酸ソーダ、炭酸アン
モン、炭酸カリウム、苛性ソーダなど実質的に培地のｐ
Ｈを中性からアルカリ性に調整し得る物質であれば培養
は可能である。
本培養液中の菌体を遠心分離あるいは濾過で除いた上澄
液（粗酵素液）を糖転移反応に用いるのが経済的である
が、硫安等による塩析、エタノーノペアセトン、イソプ
ロパツール等による溶媒沈殿、限外濾過法、ゲル濾過法
、イオン交換樹脂等の一般的な酵素精製手段により精製
した酵素を用いることもできる。また、吸着法や包括法
などの種々の方法で調整した固定化酵素を用いることも
できる。
液（粗酵素液）を糖転移反応に用いるのが経済的である
が、硫安等による塩析、エタノーノペアセトン、イソプ
ロパツール等による溶媒沈殿、限外濾過法、ゲル濾過法
、イオン交換樹脂等の一般的な酵素精製手段により精製
した酵素を用いることもできる。また、吸着法や包括法
などの種々の方法で調整した固定化酵素を用いることも
できる。
次に本発明で使用される新規菌体外フラクトシルトラン
スフェラーゼの一般的特性に関し述べる。
スフェラーゼの一般的特性に関し述べる。
（イ）作用
シュークローズ、１−ケスドース、ニスドース、ラフィ
ノース等のβ−Ｄ−フラクトフラノシド結合を有する糖
類のβ−Ｄ−フラクトフラノシド結合を切断し、生成し
たフラクトースをシュークローズ、１−ケスドース、ニ
スドース、ラフィノースなどの糖類へ転移する。
ノース等のβ−Ｄ−フラクトフラノシド結合を有する糖
類のβ−Ｄ−フラクトフラノシド結合を切断し、生成し
たフラクトースをシュークローズ、１−ケスドース、ニ
スドース、ラフィノースなどの糖類へ転移する。
（ロ）基質特異性
シュークローズ、１−ケスドース、ニスドース、ラフィ
ノースに良く作用するがツラノース、マルチ二ロース、
トレハロースには作用しない。
ノースに良く作用するがツラノース、マルチ二ロース、
トレハロースには作用しない。
（ハ）至適ｐＨおよび安定ｐＨ範囲
・至適ｐＨＳ−４３２菌：５．５〜６．５Ｓ−４４２菌
：５，０〜６．０ Ｓ−４５２菌＝５．５〜６．５ ・安定ｐＨ範囲（５５℃、３０分間処理）Ｓ−４３２菌
− （ニ）作用適温の範囲 Ｓ−４３２菌：５０〜６０℃ Ｓ−４４２菌：５０〜６０℃ Ｓ−４５２菌：４５〜５５℃ （ホ） ｐＨ１温度などによる失活の条件５５℃、３０
分間の処理条件ではｐＨ３，５及び１０．５で完全に失
活する。ｐＨ５，５，１５分間では７０℃で完全に失活
する。
：５，０〜６．０ Ｓ−４５２菌＝５．５〜６．５ ・安定ｐＨ範囲（５５℃、３０分間処理）Ｓ−４３２菌
− （ニ）作用適温の範囲 Ｓ−４３２菌：５０〜６０℃ Ｓ−４４２菌：５０〜６０℃ Ｓ−４５２菌：４５〜５５℃ （ホ） ｐＨ１温度などによる失活の条件５５℃、３０
分間の処理条件ではｐＨ３，５及び１０．５で完全に失
活する。ｐＨ５，５，１５分間では７０℃で完全に失活
する。
（へ）阻害剤および安定化剤
水銀、銅、ＥＤＴＡで失活する。カルシウムで安定化す
る。
る。
（ホ）分子量（ゲル濾過法）
Ｓ−４３２菌： ８０，０００±ｉｏ、 ｏｏ。
Ｓ−４４２閑： １５０，０００±１０．０００Ｓ−
４５２閑： １１５，０００±１０．０００上記の理化
学的及び酵素化学的性質を既知の微生物由来のフラクト
シルトランスフェラーゼと比較して第２表に示す。
４５２閑： １１５，０００±１０．０００上記の理化
学的及び酵素化学的性質を既知の微生物由来のフラクト
シルトランスフェラーゼと比較して第２表に示す。
尚、フラクトシルトランスフェラーゼの活性測定方法な
らびに活性表示方法は以下の通りである。
らびに活性表示方法は以下の通りである。
０、ＩＭの酢酸緩衝液（ｐＨ５，５）に溶解させた５％
（Ｗ／Ｖ）のシュークローズ溶液０．５ｍｌに酵素液０
、１ｍｌを混合し、５５℃で１０分間反応させた後沸騰
水浴中で１０分間加熱して酵素を失活させる。糖転移反
応で生成する還元性糖類をソモギー・ネルフン法〔メン
ラド イン カーボハイドレイト ケミストリー（Ｍｅ
ｔｈｏｄ ｉｎ Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ ｃｈｅｍ
ｉｓｔｒｙ）第１巻、第３８６頁、 １９６２年〕で定
量する。ここで酵素の単位は前述の条件で１分間に１μ
ｍｏｌｅのグルコースに相当する還元糖を生成する酵素
量を１単位として表示する。
（Ｗ／Ｖ）のシュークローズ溶液０．５ｍｌに酵素液０
、１ｍｌを混合し、５５℃で１０分間反応させた後沸騰
水浴中で１０分間加熱して酵素を失活させる。糖転移反
応で生成する還元性糖類をソモギー・ネルフン法〔メン
ラド イン カーボハイドレイト ケミストリー（Ｍｅ
ｔｈｏｄ ｉｎ Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ ｃｈｅｍ
ｉｓｔｒｙ）第１巻、第３８６頁、 １９６２年〕で定
量する。ここで酵素の単位は前述の条件で１分間に１μ
ｍｏｌｅのグルコースに相当する還元糖を生成する酵素
量を１単位として表示する。
また、該酵素をシュークローズに作用させることにより
得られるフラクトオリゴ糖はセンシューパックＮ Ｈ２
−１２５１（Ｈ）カラム（４，６ｘ ２５０＋ｍｍ）
（センシュー科学社製）を用い、アセトニトリル：水＜
７５：２５）の溶媒系を用いる高速液体クロマトグラフ
（ＨＰＬＣ）法もしくは、ＴＳＫゲルＧ２００ＯＰＷカ
ラム（２１，５Ｘ６００ｍｍ） （東洋ソーダ製）を用
いて、展開溶媒に水を使用するＨＰＬＣ法により定量し
た。
得られるフラクトオリゴ糖はセンシューパックＮ Ｈ２
−１２５１（Ｈ）カラム（４，６ｘ ２５０＋ｍｍ）
（センシュー科学社製）を用い、アセトニトリル：水＜
７５：２５）の溶媒系を用いる高速液体クロマトグラフ
（ＨＰＬＣ）法もしくは、ＴＳＫゲルＧ２００ＯＰＷカ
ラム（２１，５Ｘ６００ｍｍ） （東洋ソーダ製）を用
いて、展開溶媒に水を使用するＨＰＬＣ法により定量し
た。
次に本発明の方法によるフラクトオリゴ糖の生産には酵
素の特異性および経済的な観点から基質濃度は高い方が
好ましく、濃度５０〜７０％（Ｗ／Ｖ）、好ましくは６
０％（Ｗ、／Ｖ）前後で反応させるのが良い。また、反
応温度も工程内の微生物汚染を防止する上から５０℃以
上が好ましい。
素の特異性および経済的な観点から基質濃度は高い方が
好ましく、濃度５０〜７０％（Ｗ／Ｖ）、好ましくは６
０％（Ｗ、／Ｖ）前後で反応させるのが良い。また、反
応温度も工程内の微生物汚染を防止する上から５０℃以
上が好ましい。
また、糖転移反応で生成するフラクトオリゴ糖は当業者
が糖の分離精製に通常用いている例えばダイヤイオンＦ
ＲＫ−０１やダイヤイオンＦＲＫ−１３１（三菱化成
工業製）などの陽イオン交換樹脂やトヨパールＨＷ−４
０（東洋ソーダ製）などのゲル濾過樹脂などを用いるカ
ラムクロマトグラフィーにより容易に単離することがで
きる。
が糖の分離精製に通常用いている例えばダイヤイオンＦ
ＲＫ−０１やダイヤイオンＦＲＫ−１３１（三菱化成
工業製）などの陽イオン交換樹脂やトヨパールＨＷ−４
０（東洋ソーダ製）などのゲル濾過樹脂などを用いるカ
ラムクロマトグラフィーにより容易に単離することがで
きる。
以下に本発明を実施例により更に詳しく説明する。
実施例１
好アルカリ性細菌バチルスＮＮｏ−３−４３２ｔ（ＦＢ
ＲＰ−８２５４）を１β容の三角フラスコ中のシューク
ローズ５％、酵母エキス０．５％、ポリペプトン０．５
％、Ｋ２ＨＰＯ，０，１％、ｌ、Ｉｇｓ○４・７Ｈ２０
０，０２及び炭酸ソーダ１％を含む培地３００ｍ１（ｐ
ｉ（１０，３） ！；植菌し、３７℃で４８時間２５（
ｌｒｐｍで回転振とう培養し培養液を遠心分離して２７
．５単位／ｍｌの粗酵素を得た。次いで、該粗酵素液を
平均分画分子量１０．０００の限”外濾過膜を用いて約
１０倍に濃縮し、２８０単位／ｍｌの酵素を得た。
ＲＰ−８２５４）を１β容の三角フラスコ中のシューク
ローズ５％、酵母エキス０．５％、ポリペプトン０．５
％、Ｋ２ＨＰＯ，０，１％、ｌ、Ｉｇｓ○４・７Ｈ２０
０，０２及び炭酸ソーダ１％を含む培地３００ｍ１（ｐ
ｉ（１０，３） ！；植菌し、３７℃で４８時間２５（
ｌｒｐｍで回転振とう培養し培養液を遠心分離して２７
．５単位／ｍｌの粗酵素を得た。次いで、該粗酵素液を
平均分画分子量１０．０００の限”外濾過膜を用いて約
１０倍に濃縮し、２８０単位／ｍｌの酵素を得た。
このようにして得られたフラクトシルトランスフェラー
ゼヲ６０％（Ｗ／Ｖ）シュークローズ溶液１０ｍ１（シ
ュークローズ二〇ｇ）中に、シュークローズ１ｇ当り２
単位添加し、５５℃、ｐＨ６、０で４８時間反応させた
。得られた糖質をＨＰＬＣ法で定量した結果フラクトー
ス１７．４％、グルコース３２．５％、シュークローズ
６．３％、フラクトオリゴ糖４３．８％であった実施例
２ 好アルカリ性細菌バチルスＮｏ −Ｓ −４４２株（Ｆ
ＢＲＭ Ｐ−８２５５）を実施例１で述べた培地組成の
炭酸ソーダに代えて重炭酸ソーダ０．２５％を含む培地
３００ｍ１ （ｐＨ８，６）に植菌し、実施例１と同一
条件で振とう培養し、２０．３単位／ｍｌの粗酵素液を
得、更に％ 実施例１で用いた限外濾過膜を用いて約１
０倍に濃： 縮し、２００単位／ｍｌの酵素を得た。
ゼヲ６０％（Ｗ／Ｖ）シュークローズ溶液１０ｍ１（シ
ュークローズ二〇ｇ）中に、シュークローズ１ｇ当り２
単位添加し、５５℃、ｐＨ６、０で４８時間反応させた
。得られた糖質をＨＰＬＣ法で定量した結果フラクトー
ス１７．４％、グルコース３２．５％、シュークローズ
６．３％、フラクトオリゴ糖４３．８％であった実施例
２ 好アルカリ性細菌バチルスＮｏ −Ｓ −４４２株（Ｆ
ＢＲＭ Ｐ−８２５５）を実施例１で述べた培地組成の
炭酸ソーダに代えて重炭酸ソーダ０．２５％を含む培地
３００ｍ１ （ｐＨ８，６）に植菌し、実施例１と同一
条件で振とう培養し、２０．３単位／ｍｌの粗酵素液を
得、更に％ 実施例１で用いた限外濾過膜を用いて約１
０倍に濃： 縮し、２００単位／ｍｌの酵素を得た。
このようにして得られたフラクトシルトランスフェラー
ゼ０．５ｍｌ （１００単位）を１０ｍＭの酢酸緩衝液
（ｐＨ５，５＞で平衡化した５ｇ（湿重量）の陰イオン
交換樹脂ダイヤイオンＩＲＡ、９０４（三菱化成工業製
）に吸着させた。ついで、同樹脂を５５℃に保温された
カラムに充填し、同上緩衝液で良く洗浄した。
ゼ０．５ｍｌ （１００単位）を１０ｍＭの酢酸緩衝液
（ｐＨ５，５＞で平衡化した５ｇ（湿重量）の陰イオン
交換樹脂ダイヤイオンＩＲＡ、９０４（三菱化成工業製
）に吸着させた。ついで、同樹脂を５５℃に保温された
カラムに充填し、同上緩衝液で良く洗浄した。
酵素の同樹脂への吸着率は約９０％、活性発現率は６５
％であった。ついで、同カラムに５０％（Ｗ／Ｖ）シュ
ークローズ溶液（ｐＨ５，５）をＳＶｏ、２で通液し１
、 得られた糖液をＨＰＬＣ法で測定した結果、フラ
クトース１８．１％、グルコース３５．９％、シューク
ロ。 −スフ、５％、フラクトオリゴ！３８．５％で
あった。
％であった。ついで、同カラムに５０％（Ｗ／Ｖ）シュ
ークローズ溶液（ｐＨ５，５）をＳＶｏ、２で通液し１
、 得られた糖液をＨＰＬＣ法で測定した結果、フラ
クトース１８．１％、グルコース３５．９％、シューク
ロ。 −スフ、５％、フラクトオリゴ！３８．５％で
あった。
実施例３
好アルカリ性細菌バチルスＮｏ−３−４５２株（ＦＥＲ
Ｍ Ｐ−８２５６）を実施例１で述べた培地組成の炭酸
ソーダに代えて苛性ソーダでｐＨ７，！ｌに調整した培
地に植菌し、実施例１と同一条件で振どう培養し、２４
．８単位／ｍｌの粗酵素液を得た。該粗酵素液に冷却し
た５倍量のアセトンを添加し一夜冷室中に放置した。生
じた沈殿を遠心分離で集め、減圧下で乾燥させ２．５０
０単位／ｇの酵素粉末を得た。
Ｍ Ｐ−８２５６）を実施例１で述べた培地組成の炭酸
ソーダに代えて苛性ソーダでｐＨ７，！ｌに調整した培
地に植菌し、実施例１と同一条件で振どう培養し、２４
．８単位／ｍｌの粗酵素液を得た。該粗酵素液に冷却し
た５倍量のアセトンを添加し一夜冷室中に放置した。生
じた沈殿を遠心分離で集め、減圧下で乾燥させ２．５０
０単位／ｇの酵素粉末を得た。
ｐＨ６，０に調整した５０％（Ｗ／Ｖ）シュークローズ
滑液１１シユークロース： ６００ｇ）に上記酵素粉
末１ｇ（約４．２単位／ｇ・シュークローズ）を添加し
、５０℃に保温した。該反応混液を平均分画分子量３０
、０００の限外濾過膜を装置した限外濾過装置（日本ミ
リポア・リミテッド社製、ペリコンラボカセット）中を
５時間、５０℃で回分させた。ついで１０ｍ１／分の流
速でシュークローズ溶液を保充すると同時に同速度で濾
過液（パーミエート）を抜き出し−その糖組成をＨＰＬ
Ｃ法で測定した結果、フラクトース１７．９％、グルコ
ース３４．２％、シュークローズ８．５％、フラクトオ
リゴ塘３９．４％であった。
滑液１１シユークロース： ６００ｇ）に上記酵素粉
末１ｇ（約４．２単位／ｇ・シュークローズ）を添加し
、５０℃に保温した。該反応混液を平均分画分子量３０
、０００の限外濾過膜を装置した限外濾過装置（日本ミ
リポア・リミテッド社製、ペリコンラボカセット）中を
５時間、５０℃で回分させた。ついで１０ｍ１／分の流
速でシュークローズ溶液を保充すると同時に同速度で濾
過液（パーミエート）を抜き出し−その糖組成をＨＰＬ
Ｃ法で測定した結果、フラクトース１７．９％、グルコ
ース３４．２％、シュークローズ８．５％、フラクトオ
リゴ塘３９．４％であった。
Claims (2)
- （１）バチルス属に属し、中性からアルカリ性に生育の
至適ｐＨを有する好アルカリ性の微生物を培養して得ら
れる菌体外フラクトシルトランスフェラーゼを、β−Ｄ
−フラクトフラノシド結合を有する糖類基質に作用させ
ることを特徴とするフラクトオリゴ糖を含有する糖質の
製造法。 - （２）上記基質がシュークローズであることを特徴とす
る特許請求の範囲第１項に記載のフラクトオリゴ糖を含
有する糖質の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60111754A JPS61268191A (ja) | 1985-05-24 | 1985-05-24 | フラクトオリゴ糖を含有する糖質の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60111754A JPS61268191A (ja) | 1985-05-24 | 1985-05-24 | フラクトオリゴ糖を含有する糖質の製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61268191A true JPS61268191A (ja) | 1986-11-27 |
| JPH0567279B2 JPH0567279B2 (ja) | 1993-09-24 |
Family
ID=14569337
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60111754A Granted JPS61268191A (ja) | 1985-05-24 | 1985-05-24 | フラクトオリゴ糖を含有する糖質の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS61268191A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0812915A3 (en) * | 1996-06-10 | 1999-08-04 | Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo | Polypeptide having beta-fructofuranosidase activity |
| US6383769B1 (en) | 1996-06-10 | 2002-05-07 | Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo | Polypeptides having β-fructofuranosidase activity |
| US6762046B2 (en) | 1996-06-10 | 2004-07-13 | Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo | Polypeptide having β-fructofuranosidase activity |
-
1985
- 1985-05-24 JP JP60111754A patent/JPS61268191A/ja active Granted
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0812915A3 (en) * | 1996-06-10 | 1999-08-04 | Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo | Polypeptide having beta-fructofuranosidase activity |
| US6383769B1 (en) | 1996-06-10 | 2002-05-07 | Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo | Polypeptides having β-fructofuranosidase activity |
| US6762046B2 (en) | 1996-06-10 | 2004-07-13 | Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo | Polypeptide having β-fructofuranosidase activity |
| KR100532847B1 (ko) * | 1996-06-10 | 2006-02-01 | 가부시끼가이샤 하야시바라 세이부쓰 가가꾸 겐꾸조 | β-프룩토푸라노시다아제활성을가진폴리펩티드 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0567279B2 (ja) | 1993-09-24 |
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