JPS6017518B2 - Ｌ−γ−ヒドロキシアルギニンの製造方法 - Google Patents
Ｌ−γ−ヒドロキシアルギニンの製造方法Info
- Publication number
- JPS6017518B2 JPS6017518B2 JP14663282A JP14663282A JPS6017518B2 JP S6017518 B2 JPS6017518 B2 JP S6017518B2 JP 14663282 A JP14663282 A JP 14663282A JP 14663282 A JP14663282 A JP 14663282A JP S6017518 B2 JPS6017518 B2 JP S6017518B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- hydroxyarginine
- culture
- producing
- medium
- bacterial cells
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はＬーッーヒドロキシアルギニンの新規な製造法
に関する。
に関する。
Ｌ−ンーヒドロキシアルギニンはナマコ、イソギンチャ
ク、そら豆、スィトピーの種子等に存在するアミノ酸で
あり、後述のべプチド性抗生物質Ｋ−５８２Ｍ−Ａ及び
Ｂの構成アミノ酸として知られている。
ク、そら豆、スィトピーの種子等に存在するアミノ酸で
あり、後述のべプチド性抗生物質Ｋ−５８２Ｍ−Ａ及び
Ｂの構成アミノ酸として知られている。
そして、近年生理活性を有するべプチドの化学合成が盛
んになってきたことから、この特殊なアミノ酸を制建、
降圧、鎮痛あるいはホルモン作用を有するべプチドの合
成原料として利用しようとする研究が行われている。そ
こで、本発明者は、Ｌ−ｙ−ヒドロキシアルギニンを工
業的に製造せんと鋭意研究を行った結果、すでに抗生物
質Ｋ一５８２Ｍ−Ａ及びＢの生産菌として知られている
メタリジウム・アニソプリエ（メッシュ）・ソロク・パ
ール・アニソプリエ〔ＭｅｔａｒｈｉＺｉ山ｍａｎｉＳ
ｏｐｌｉａｅ（Ｍｅねｃｈ）Ｓｏｒｏｋ ｖｏｒａｎｉ
ｓｏｐｌｉａｅ〕５８２Ｍがこれを生産することを見出
し、本発明を完成した。
んになってきたことから、この特殊なアミノ酸を制建、
降圧、鎮痛あるいはホルモン作用を有するべプチドの合
成原料として利用しようとする研究が行われている。そ
こで、本発明者は、Ｌ−ｙ−ヒドロキシアルギニンを工
業的に製造せんと鋭意研究を行った結果、すでに抗生物
質Ｋ一５８２Ｍ−Ａ及びＢの生産菌として知られている
メタリジウム・アニソプリエ（メッシュ）・ソロク・パ
ール・アニソプリエ〔ＭｅｔａｒｈｉＺｉ山ｍａｎｉＳ
ｏｐｌｉａｅ（Ｍｅねｃｈ）Ｓｏｒｏｋ ｖｏｒａｎｉ
ｓｏｐｌｉａｅ〕５８２Ｍがこれを生産することを見出
し、本発明を完成した。
従って、本発明は、メタリジウム属に属するＬＯ−ｙ−
ヒドロキシアルギニン生産菌を培養し、その培養物又は
（及び）菌体からＬーッーヒドロキシアルギニンを採取
することからなるＬ−ｙ−ヒドロキシアルギニンの製造
方法である。
ヒドロキシアルギニン生産菌を培養し、その培養物又は
（及び）菌体からＬーッーヒドロキシアルギニンを採取
することからなるＬ−ｙ−ヒドロキシアルギニンの製造
方法である。
本発明方法で使用されるＬ−ｙーヒドロキシアタルギニ
ン生産菌はメタリジゥム属に属する菌株であればよく、
例えばメタリジウム・アニソプリェ（メッシュ）ソロク
・パール・アニソプリエ５８２Ｍ（徴工研菌寄第４２１
７号、特公昭５４−９２９１４号）、メタリジウム・ア
ニソプリェＩＦ０５９４蛤等が挙げられ０る。
ン生産菌はメタリジゥム属に属する菌株であればよく、
例えばメタリジウム・アニソプリェ（メッシュ）ソロク
・パール・アニソプリエ５８２Ｍ（徴工研菌寄第４２１
７号、特公昭５４−９２９１４号）、メタリジウム・ア
ニソプリェＩＦ０５９４蛤等が挙げられ０る。
またこれらの菌をＸ線照射、紫外線照射、変異薬剤処理
あるいは遺伝子工学処理することによって得られる変異
株も使用できる。本発明で使用される培養培地としては
、糸状菌の培養に用いられる一般的な培地で、メタリジ
ウム属菌株が生育して、培地中又は菌体内にＬ−ｙ−ヒ
ドロキシアルギニンを生成蓄積しうるものであればどの
ようなものでも良い。
あるいは遺伝子工学処理することによって得られる変異
株も使用できる。本発明で使用される培養培地としては
、糸状菌の培養に用いられる一般的な培地で、メタリジ
ウム属菌株が生育して、培地中又は菌体内にＬ−ｙ−ヒ
ドロキシアルギニンを生成蓄積しうるものであればどの
ようなものでも良い。
炭素源としては、例えばグルコース、フラクトース、シ
ュクロース、ソルビトール、マルトース等が、窒素源と
しては、ベプトン、ポリベプトン、酵母エキス、カザア
ミノ酸、硝酸アンモニウム、硝酸ソ−ダ、その他の各種
有機あるいは無機窒素化合物が用いられる。また無機塩
としての各種リン酸塩、硫酸マグネシウム、塩化ナトリ
ウム、塩化カリウム等を添加するのが好ましい。更に本
発明者は、上記塔地中にＬ−アルギニン又はその塩酸塩
等の塩類を添加するとＬ−ｙ−ヒードロキシアルギニン
の生成が著しく増大することを見出した。
ュクロース、ソルビトール、マルトース等が、窒素源と
しては、ベプトン、ポリベプトン、酵母エキス、カザア
ミノ酸、硝酸アンモニウム、硝酸ソ−ダ、その他の各種
有機あるいは無機窒素化合物が用いられる。また無機塩
としての各種リン酸塩、硫酸マグネシウム、塩化ナトリ
ウム、塩化カリウム等を添加するのが好ましい。更に本
発明者は、上記塔地中にＬ−アルギニン又はその塩酸塩
等の塩類を添加するとＬ−ｙ−ヒードロキシアルギニン
の生成が著しく増大することを見出した。
従って、本発明方法では培地にＬ−アルギニン又はその
塩を０．１〜２％添加するのが好ましい。培養条件とし
ては、通常、液体培地による振濠培養又は通気燈杵培養
により、．好気的条件下で行われ、培養温度は３０ｏｏ
が最適であり、培地のｐＨは５〜６が最適である。
塩を０．１〜２％添加するのが好ましい。培養条件とし
ては、通常、液体培地による振濠培養又は通気燈杵培養
により、．好気的条件下で行われ、培養温度は３０ｏｏ
が最適であり、培地のｐＨは５〜６が最適である。
工業的に実施する場合には、あらかじめ前培養を行って
得られる培養物を培地に１％（ｖ′ｖ洋髪種し、上記培
養条件で１〜６日間培養するのが好ましい。このように
すると、Ｌ−ｙ−ヒドロキシアルギニンは培地中及び菌
体内に蓄積される。
得られる培養物を培地に１％（ｖ′ｖ洋髪種し、上記培
養条件で１〜６日間培養するのが好ましい。このように
すると、Ｌ−ｙ−ヒドロキシアルギニンは培地中及び菌
体内に蓄積される。
従って培養液は自然炉過、加圧炉過等によって培養炉液
と菌体に分離し、菌体は純水又は含水エタノール等で加
熱抽出する等の通常の菌体内アミノ酸の抽出に使用され
ている方法によって抽出する。培養炉液及び菌体抽出液
からＬ−ｙ−ヒドロキシアルギニンを単離採取するには
、イオン交≠剣樹脂処理法、吸着法、濃縮法、沈殿法等
を単独あるいは組合せることによって行われる。
と菌体に分離し、菌体は純水又は含水エタノール等で加
熱抽出する等の通常の菌体内アミノ酸の抽出に使用され
ている方法によって抽出する。培養炉液及び菌体抽出液
からＬ−ｙ−ヒドロキシアルギニンを単離採取するには
、イオン交≠剣樹脂処理法、吸着法、濃縮法、沈殿法等
を単独あるいは組合せることによって行われる。
特に、ＩＲＣ−５０、ＩＲ−１２０、ダウェックスー５
拍等の酸性樹脂に吸着させ、これに対する吸着性の違い
を利用して前記Ｋ−５８２Ｍ−Ａ及びＢと分離すること
ができる。このようにして得られるＬ−ｙ−ヒドロキシ
アルギニンはそのままではラクトンを形成するが、これ
を酢酸塩の形とするラクトンの形成はなく、含水エタノ
ール中で容易に結晶化し単離される。
拍等の酸性樹脂に吸着させ、これに対する吸着性の違い
を利用して前記Ｋ−５８２Ｍ−Ａ及びＢと分離すること
ができる。このようにして得られるＬ−ｙ−ヒドロキシ
アルギニンはそのままではラクトンを形成するが、これ
を酢酸塩の形とするラクトンの形成はなく、含水エタノ
ール中で容易に結晶化し単離される。
本発明で得られるＬ−ｙーヒドロキシアルギニン・酢酸
塩の理化学的性質は次の通りである。【１’融点（分解
点） １８９〜１９０ｑｏ■ 元素分析：Ｃ８日，８Ｎ
４４として実験値（％）：Ｃ３８．４９、日７．３２、
Ｎ２２．４３計算値（％）：Ｃ３８．４０日７．２５Ｎ
２２．４０‘３１ 比旋光度〔Ｑ〕奪う十１１‐０（Ｃ
：１、０‐ＳＭＮａ〇Ｈ）■ 呈色反応ニンヒドリン反
応、坂口反応陽一性 ■ アルギナーゼの作用により尿素を遊離する。
塩の理化学的性質は次の通りである。【１’融点（分解
点） １８９〜１９０ｑｏ■ 元素分析：Ｃ８日，８Ｎ
４４として実験値（％）：Ｃ３８．４９、日７．３２、
Ｎ２２．４３計算値（％）：Ｃ３８．４０日７．２５Ｎ
２２．４０‘３１ 比旋光度〔Ｑ〕奪う十１１‐０（Ｃ
：１、０‐ＳＭＮａ〇Ｈ）■ 呈色反応ニンヒドリン反
応、坂口反応陽一性 ■ アルギナーゼの作用により尿素を遊離する。
【６１ 紫外線吸収スペクトル：第１図‘７ー 赤外線
吸収スペクトル：第２図 次に実施例を挙げて説明する。
吸収スペクトル：第２図 次に実施例を挙げて説明する。
尚実施例中のＬ−ｙ一ヒドロキシアルギニン量はアミノ
酸分析機によって測定した。実施例 １ グルコース３．０％、ポリベプトン１．０％、硝酸ソー
ダ０．２％、燐酸第一カリウム０．１％、塩化カリウム
０．０５％、硫酸マグネシウム０．０５％、硫酸第一鉄
０．００１％（ｐＨ５．４）の組成を有する液体培地を
１その三角フラスコに３００の上分注し、１１０ｏｏで
１０分間加圧滅菌後、メタリジウム・アニソプリェ（メ
ッシュ）ソロク・パール・アニソブリェ５８２Ｍ（徴工
研菌寄第４２１７号）を一白金耳楯菌し、３０ｏｏで４
日間振濠培養する。
酸分析機によって測定した。実施例 １ グルコース３．０％、ポリベプトン１．０％、硝酸ソー
ダ０．２％、燐酸第一カリウム０．１％、塩化カリウム
０．０５％、硫酸マグネシウム０．０５％、硫酸第一鉄
０．００１％（ｐＨ５．４）の組成を有する液体培地を
１その三角フラスコに３００の上分注し、１１０ｏｏで
１０分間加圧滅菌後、メタリジウム・アニソプリェ（メ
ッシュ）ソロク・パール・アニソブリェ５８２Ｍ（徴工
研菌寄第４２１７号）を一白金耳楯菌し、３０ｏｏで４
日間振濠培養する。
その前培養液１％（ｖ／ｖ）を同培地組成にＬーアルギ
ニン塩酸塩０．５％を添加した培地（同容量）に接種し
、５日間同条件で培養する。５日後、培養液を東洋炉紙
Ｎｏ．２で自然炉遇し、培養炉液（３．５〆）を採取し
、菌体は熱水に入れ１５分間加熱抽出後、同様に炉過し
た。
ニン塩酸塩０．５％を添加した培地（同容量）に接種し
、５日間同条件で培養する。５日後、培養液を東洋炉紙
Ｎｏ．２で自然炉遇し、培養炉液（３．５〆）を採取し
、菌体は熱水に入れ１５分間加熱抽出後、同様に炉過し
た。
培養炉液及び菌体抽出液中に含まれるＬ−ｙ一ヒドロキ
シアルギニンの総量は１．１７夕であった。得られた培
養液及び菌体抽出液を合せ、ＩＲ−１２０（Ｈ＋型）、
（外径４．５肌×高さ６０肌）のカラムに目的物質を吸
着させる。カラムを充分に純水で水洗し、次いで、２．
８Ｍアンモニア水で目的物質を溶出させる。目的物質を
含む函分を集め、減圧濃縮する。濃縮液を少量のＩＭピ
リジンー酢酸緩衝液（ｐＨ５．２）に溶解した後、同緩
衝液で緩衝化したダウエツクス５０ＷＸ−８（１００〜
２００メッシュ）（外径４．０伽×高さ５５肌）のカラ
ムに吸着させ、同緩衝液１．５〆で溶出し、続いて２Ｍ
緩衝液で溶出した。２Ｍ同緩液での溶出区分に溶出され
た目的物質を含む分画を集め、減圧下に濃縮乾固した。
シアルギニンの総量は１．１７夕であった。得られた培
養液及び菌体抽出液を合せ、ＩＲ−１２０（Ｈ＋型）、
（外径４．５肌×高さ６０肌）のカラムに目的物質を吸
着させる。カラムを充分に純水で水洗し、次いで、２．
８Ｍアンモニア水で目的物質を溶出させる。目的物質を
含む函分を集め、減圧濃縮する。濃縮液を少量のＩＭピ
リジンー酢酸緩衝液（ｐＨ５．２）に溶解した後、同緩
衝液で緩衝化したダウエツクス５０ＷＸ−８（１００〜
２００メッシュ）（外径４．０伽×高さ５５肌）のカラ
ムに吸着させ、同緩衝液１．５〆で溶出し、続いて２Ｍ
緩衝液で溶出した。２Ｍ同緩液での溶出区分に溶出され
た目的物質を含む分画を集め、減圧下に濃縮乾固した。
この試料を少量の２Ｍ同緩衝液に溶解し、２Ｍ同緩衝液
で緩衝化したダゥヱックス５肌ｘ−８（２００〜４００
メッシュ）（外蚤４．０肌×高さ１１０弧）のカラムに
吸着させた後、同緩衝液で溶出すると、目的とするＬ−
ｙ一ヒドロキシアルギニン単独のピークが得られる。Ｌ
ーッーヒドロキシアルギニンのみを含む画分を集め、減
圧下に濃縮乾固した後、少量の純水に溶解し、活性炭で
脱色後、白濁するまでエタノールを加え、冷凍室に放置
後、Ｌーッーヒドロキシアルギニン・酢酸塩の白色板状
結晶約８００の９を得た。実施例 ２ 実施例１において、培地へのＬ−アルギニン塩酸塩の添
加量を変える以外は同様に操作し、培養５日目‘こＬ−
ッーヒドロキシアルギニンの生成量を測定した。
で緩衝化したダゥヱックス５肌ｘ−８（２００〜４００
メッシュ）（外蚤４．０肌×高さ１１０弧）のカラムに
吸着させた後、同緩衝液で溶出すると、目的とするＬ−
ｙ一ヒドロキシアルギニン単独のピークが得られる。Ｌ
ーッーヒドロキシアルギニンのみを含む画分を集め、減
圧下に濃縮乾固した後、少量の純水に溶解し、活性炭で
脱色後、白濁するまでエタノールを加え、冷凍室に放置
後、Ｌーッーヒドロキシアルギニン・酢酸塩の白色板状
結晶約８００の９を得た。実施例 ２ 実施例１において、培地へのＬ−アルギニン塩酸塩の添
加量を変える以外は同様に操作し、培養５日目‘こＬ−
ッーヒドロキシアルギニンの生成量を測定した。
その結果は第１表のとおりである。第１表実施例 ３
実施例１と同一の条件下、メタＩＪジウム−アニソプリ
ェ『０５９４０を培養し、培養５日目に培養液中のＬ一
ｙ−ヒドロキシアルギニンの生成量を測定したところ５
．７３ｙ′の‘であった。
ェ『０５９４０を培養し、培養５日目に培養液中のＬ一
ｙ−ヒドロキシアルギニンの生成量を測定したところ５
．７３ｙ′の‘であった。
第１図はＬ−ッーヒドロキシアルギニン・酢酸塩の紫外
線吸収スペクトル、第２図は同物質の赤外線吸収スペク
トルである。 第１図 第２図
線吸収スペクトル、第２図は同物質の赤外線吸収スペク
トルである。 第１図 第２図
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ メタリジウム属に属するＬ−γ−ヒドロキシアルギ
ニン生産菌を培養し、その培養物又は（及び）菌体から
Ｌ−γ−ヒドロキシアルギニンを採取することを特徴と
するＬ−γ−ヒドロキシアルギニンの製造方法。 ２ 培養をＬ−アルギニン又はその塩類を含有する培地
中で行う特許請求の範囲第１項記載のＬ−γ−ヒドロキ
シアルギニンの製造方法。 ３ Ｌ−γ−ヒドロキシアルギニンをその酢酸塩として
採取する特許請求の範囲第１項記載のＬ−γ−ヒドロキ
シアルギニンの製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14663282A JPS6017518B2 (ja) | 1982-08-24 | 1982-08-24 | Ｌ−γ−ヒドロキシアルギニンの製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14663282A JPS6017518B2 (ja) | 1982-08-24 | 1982-08-24 | Ｌ−γ−ヒドロキシアルギニンの製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5934892A JPS5934892A (ja) | 1984-02-25 |
| JPS6017518B2 true JPS6017518B2 (ja) | 1985-05-02 |
Family
ID=15412118
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP14663282A Expired JPS6017518B2 (ja) | 1982-08-24 | 1982-08-24 | Ｌ−γ−ヒドロキシアルギニンの製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6017518B2 (ja) |
-
1982
- 1982-08-24 JP JP14663282A patent/JPS6017518B2/ja not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5934892A (ja) | 1984-02-25 |
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