JPS6012031B2 - ビリルビンオキシダ−ゼの製造法 - Google Patents
ビリルビンオキシダ−ゼの製造法Info
- Publication number
- JPS6012031B2 JPS6012031B2 JP56045503A JP4550381A JPS6012031B2 JP S6012031 B2 JPS6012031 B2 JP S6012031B2 JP 56045503 A JP56045503 A JP 56045503A JP 4550381 A JP4550381 A JP 4550381A JP S6012031 B2 JPS6012031 B2 JP S6012031B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- bilirubin oxidase
- bilirubin
- oxidase
- producing
- medium
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired
Links
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、不完全菌の一種であるミロセシウム属菌を培
養し、培地中にビリルビンオキシダーゼを産生せしめた
後、これを採取するところのビリルビンオキシダーゼの
製造法に関するものである。
養し、培地中にビリルビンオキシダーゼを産生せしめた
後、これを採取するところのビリルビンオキシダーゼの
製造法に関するものである。
従来、ビリルビンに応する酵素としては、ラット、ギー
ニアピッグ等の動物脳中に存在することが知られていた
が、その酵素的性質は明らかにされていない。
ニアピッグ等の動物脳中に存在することが知られていた
が、その酵素的性質は明らかにされていない。
又、最近、動物以外にも、きのこの一種であるアグリカ
ス属菌にビリルビンを酸化する作用を有する物質の報告
（侍開昭５４一１５１１９３）がある。がしかし、この
ものの酵素的性質も全く明示されていない。従って、ビ
リルビン反応酵素の存在は知られているとは云うものの
、酵素の性質等については未知のものであり、国際酵素
分類にも未だ登録されていない状態である。
ス属菌にビリルビンを酸化する作用を有する物質の報告
（侍開昭５４一１５１１９３）がある。がしかし、この
ものの酵素的性質も全く明示されていない。従って、ビ
リルビン反応酵素の存在は知られているとは云うものの
、酵素の性質等については未知のものであり、国際酵素
分類にも未だ登録されていない状態である。
しかしながら、ビリルビンオキシダーゼは、将来、医学
、診断用試薬等への利用が大いに期待されるものである
。本発明者等は、広く自然界よりビリルビンに反応する
酵素生産菌を求め、鋭意検討した結果、不完全菌のミロ
セシゥム属に属する一菌株がビリルビンを酸化する酵素
生産能を有することを見し、出し、この酵素を精製し、
諸性質を調べることに成功し、はじめてビリルビンオキ
シダーゼを明らかにすることができたものである。
、診断用試薬等への利用が大いに期待されるものである
。本発明者等は、広く自然界よりビリルビンに反応する
酵素生産菌を求め、鋭意検討した結果、不完全菌のミロ
セシゥム属に属する一菌株がビリルビンを酸化する酵素
生産能を有することを見し、出し、この酵素を精製し、
諸性質を調べることに成功し、はじめてビリルビンオキ
シダーゼを明らかにすることができたものである。
更に、検索を続けたところ、ミロセシウム属の保存菌株
においても、同じ酵素を生産することが分った。本発明
は、これらの知見により完成されたものであり、本発明
者等がスクリーニングして得たピリルピンオキシダーゼ
生産菌はミロセシウム・ベルカリア ＭＴ−１で、工業
技術院微生物工業技術研究所にＭｙｒｏｔｈｅｃｉｕｍ
ｖｅｒｍｃａｒｉａＭＴ−ＩＦＥＲＭ−Ｐ Ｎｏ．５９
１８として寄託されている。
においても、同じ酵素を生産することが分った。本発明
は、これらの知見により完成されたものであり、本発明
者等がスクリーニングして得たピリルピンオキシダーゼ
生産菌はミロセシウム・ベルカリア ＭＴ−１で、工業
技術院微生物工業技術研究所にＭｙｒｏｔｈｅｃｉｕｍ
ｖｅｒｍｃａｒｉａＭＴ−ＩＦＥＲＭ−Ｐ Ｎｏ．５９
１８として寄託されている。
次に、ＭＭｏ仇ｅｃｊｍｍｖｅｎｕｃａｒｉａＭＴ−１
の菌学的性質を示す。■ 形態学的性質 菌糸は、無色〜白色、猪面、隔壁あり、幅１．５〜３．
０〆である。
の菌学的性質を示す。■ 形態学的性質 菌糸は、無色〜白色、猪面、隔壁あり、幅１．５〜３．
０〆である。
分生子形成構造は、暗いオリーブ色〜黒緑色の分生子座
上に集る。分生子柄は、子座層から形成され、繰り返し
分岐し、それぞれの分岐部で２〜４本の分枝を生じ、最
後の分枝上にフイアラィドを着生、無色〜白色、隔壁あ
り。フィアラィドは３〜６本が輪生、互いに密着し平行
した層となる。円柱形、１１．５−１８．０仏×１．５
〜２．０ムである。分生子はフィアロ型分生子、級錘形
、７．０−８．０仏×２．０−３．０山、一端はとがり
、他端は裁断状、とがった先端上に扇形の付属物が認め
られる。子座上に暗いオリーブ色〜黒緑色の粘塊となっ
て集まる。曲 生育状態 ■ 麦芽エキス寒天培地 生育はやや抑制的である。
上に集る。分生子柄は、子座層から形成され、繰り返し
分岐し、それぞれの分岐部で２〜４本の分枝を生じ、最
後の分枝上にフイアラィドを着生、無色〜白色、隔壁あ
り。フィアラィドは３〜６本が輪生、互いに密着し平行
した層となる。円柱形、１１．５−１８．０仏×１．５
〜２．０ムである。分生子はフィアロ型分生子、級錘形
、７．０−８．０仏×２．０−３．０山、一端はとがり
、他端は裁断状、とがった先端上に扇形の付属物が認め
られる。子座上に暗いオリーブ色〜黒緑色の粘塊となっ
て集まる。曲 生育状態 ■ 麦芽エキス寒天培地 生育はやや抑制的である。
菌株は無色〜白色、羊毛状である。
分生子形成構造は暗いオリーブ色〜黒緑色の分生子座に
集まる。無色の分泌物が形成される。集落裏面はうす黄
〜うす黄茶色である。■ バレィショ・ドウ糖寒夫培地 生育は速やかである。
集まる。無色の分泌物が形成される。集落裏面はうす黄
〜うす黄茶色である。■ バレィショ・ドウ糖寒夫培地 生育は速やかである。
菌糸は無色〜白色、羊毛状である。分生子形成構造は、
暗いオリーブ色〜黒緑色の分生子座に集まる。無色の分
泌物が形成される。集落裏面は、うす黄茶〜にぶ黄であ
る。‘Ｃ｝ 生理的性質 ■ 最適生育条件 温度は３０００付近がよく、ｐＨは５〜７がよい。
暗いオリーブ色〜黒緑色の分生子座に集まる。無色の分
泌物が形成される。集落裏面は、うす黄茶〜にぶ黄であ
る。‘Ｃ｝ 生理的性質 ■ 最適生育条件 温度は３０００付近がよく、ｐＨは５〜７がよい。
■ 生育の範囲
８０３０で生育する。
３７０で生育するが４５ｑｏでは生育しない。
ｐＨは３５〜９．５で生育する。以上の諸性質から、本
菌株は、有性生殖器官が認められないので、不完全菌類
に分離される。さらに分生子殻（ｐｙｃｎｉｄＭｍ）、
分生子堆（ａｃｅｓｖｕｌ船）が形成されないので不完
全菌類の中でも線菌類（Ｈｙｐｈｏｍｙｃｅｔｅｓ）に
属することが判明した。バ ロ ン〔Ｂａｒｒｏｎ，Ｇ
，Ｌ，Ｔｈｅ，Ｃｅ肥ｒａ ｏｆＨｙｐｈｏｍｙｃｅｔ
ｅｓ ｆｒｏｍ ｓｏｉｌ ， Ｗｉｌｌｉａｍ
＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，鞠ｌｔｉｍｏｒｅ（１９６８）〕に
従って検索すると、■フイアロ型分生子を形成する。
菌株は、有性生殖器官が認められないので、不完全菌類
に分離される。さらに分生子殻（ｐｙｃｎｉｄＭｍ）、
分生子堆（ａｃｅｓｖｕｌ船）が形成されないので不完
全菌類の中でも線菌類（Ｈｙｐｈｏｍｙｃｅｔｅｓ）に
属することが判明した。バ ロ ン〔Ｂａｒｒｏｎ，Ｇ
，Ｌ，Ｔｈｅ，Ｃｅ肥ｒａ ｏｆＨｙｐｈｏｍｙｃｅｔ
ｅｓ ｆｒｏｍ ｓｏｉｌ ， Ｗｉｌｌｉａｍ
＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，鞠ｌｔｉｍｏｒｅ（１９６８）〕に
従って検索すると、■フイアロ型分生子を形成する。
■分生子座を形成する。■分生子は紡錘形で隔壁がない
。■分生子は暗いオリーブ色〜黒緑色の粘塊となる等に
よりミロセシウム属（Ｍｙｒｏｔｈｅｃ；肌ｍ属）に分
類される。種については、ツロツク〔Ｔｕｌｌｏｃｈ，
Ｍ．Ｔｈｅｇｅｎ雌 ＭＭｏｍｅｃｉ肌ｍ Ｔｏｄｅ
ｅｘ Ｆｒｙ Ｍｙｃｏｌ．ＰａｐＣＭ１，Ｎｏ．１３
０，１一４２（１９７２）〕に従って検索すると、■剛
毛を形成しない。
。■分生子は暗いオリーブ色〜黒緑色の粘塊となる等に
よりミロセシウム属（Ｍｙｒｏｔｈｅｃ；肌ｍ属）に分
類される。種については、ツロツク〔Ｔｕｌｌｏｃｈ，
Ｍ．Ｔｈｅｇｅｎ雌 ＭＭｏｍｅｃｉ肌ｍ Ｔｏｄｅ
ｅｘ Ｆｒｙ Ｍｙｃｏｌ．ＰａｐＣＭ１，Ｎｏ．１３
０，１一４２（１９７２）〕に従って検索すると、■剛
毛を形成しない。
■分生子の長さは１０山以下である。■分生子表面は、
綿状ではない。■フィアラィド‘ま円柱形である。■先
端が球状の周縁菌糸を形成しない。■分生子は紙錘形で
一端に扇状の付属物をつける。以上の諸性質によって、
本菌株はミロセシウム・ベルカリア（Ｍｙｒｏｔｈｅｃ
ｉｍｍｖｅｒｍｃａｒｉａ）属するものと同定された。
綿状ではない。■フィアラィド‘ま円柱形である。■先
端が球状の周縁菌糸を形成しない。■分生子は紙錘形で
一端に扇状の付属物をつける。以上の諸性質によって、
本菌株はミロセシウム・ベルカリア（Ｍｙｒｏｔｈｅｃ
ｉｍｍｖｅｒｍｃａｒｉａ）属するものと同定された。
本発明におけるビリルビンオキシダーゼ生産菌の例示と
しては更に次の菌株があげられる。
しては更に次の菌株があげられる。
Ｍｙｒｏｔｈｅｃｉｍｍ ｖｅｒｍｃａｒｉａ ＩＦ０
６１１３Ｍｙｒ。ｔｈｅＣｉ山ｍ ＶｅｒｍＣａｒｉａ
ＩＦ。６１３３Ｍｙｒｏｔｈｅｃｉｍｍ ｖｅｒｍｃ
ａｒｉａＩＦ０６３５１Ｍｙｒｏｔｈｅｃｉｍｍ ｖｅ
ｒｍｃａｒｉａ ＩＦＯ９０５６Ｍｙｒｏｔｈｅｃｉｍ
ｍ ｃｉｎｃｔｍｍ ＩＦＯ９９５０Ｍｙｒｏｔｈｅｃ
ｉｍｍ ｒｏｒｉｄｕｍＩＦＯ９３５１本発明において
、ビリルビンオキシダーゼ生産菌株を培養する好適な培
地としては、炭素源、窒素源、無機物、その他栄養素を
程よく含有する培地ならば、合成培地、天然培地のいず
れにても使用可能である。
６１１３Ｍｙｒ。ｔｈｅＣｉ山ｍ ＶｅｒｍＣａｒｉａ
ＩＦ。６１３３Ｍｙｒｏｔｈｅｃｉｍｍ ｖｅｒｍｃ
ａｒｉａＩＦ０６３５１Ｍｙｒｏｔｈｅｃｉｍｍ ｖｅ
ｒｍｃａｒｉａ ＩＦＯ９０５６Ｍｙｒｏｔｈｅｃｉｍ
ｍ ｃｉｎｃｔｍｍ ＩＦＯ９９５０Ｍｙｒｏｔｈｅｃ
ｉｍｍ ｒｏｒｉｄｕｍＩＦＯ９３５１本発明において
、ビリルビンオキシダーゼ生産菌株を培養する好適な培
地としては、炭素源、窒素源、無機物、その他栄養素を
程よく含有する培地ならば、合成培地、天然培地のいず
れにても使用可能である。
なお本発明のビリルビンオキシダーゼは、銅酵素である
ため、硫酸鋼の添加がより好ましく、例えば５ｐｐｍの
添加により約７０％も酵素生産の増大が認められる。培
地は液状でも固状でもよいが、通常液体培地を使用する
のが工業的に有利である。
ため、硫酸鋼の添加がより好ましく、例えば５ｐｐｍの
添加により約７０％も酵素生産の増大が認められる。培
地は液状でも固状でもよいが、通常液体培地を使用する
のが工業的に有利である。
そして液体培地による培養においては、静暦培養法、雌
梓培養法、通気培養法など適宜選択し得るが、大量に培
養するには、深部通気培養によるのが有利である。培養
温度は、２０〜３５００にて４８〜１１畑時間培養する
。
梓培養法、通気培養法など適宜選択し得るが、大量に培
養するには、深部通気培養によるのが有利である。培養
温度は、２０〜３５００にて４８〜１１畑時間培養する
。
こうして培養液中にビリルビンオキシダーゼが著量生成
する。
する。
そして生産蓄積されたビリルビンオキシダーゼは、次の
ごとき方法で精製される。まず培養液を菌体分離し、０
．８飽和まで硫安を加え、一晩５℃に放置後、沈澱部分
を溶解し、ィン交換水を用い、５℃で十分透折する。透
析終了後、透折内液に活性炭を０．７％量添加し、炉適
する。該炉液のｐＨを７．４に調整し、さらに活性炭を
０．２％量を添加し、炉遇する。
ごとき方法で精製される。まず培養液を菌体分離し、０
．８飽和まで硫安を加え、一晩５℃に放置後、沈澱部分
を溶解し、ィン交換水を用い、５℃で十分透折する。透
析終了後、透折内液に活性炭を０．７％量添加し、炉適
する。該炉液のｐＨを７．４に調整し、さらに活性炭を
０．２％量を添加し、炉遇する。
この炉液を０．棚アンモニア水でｐＨ９．３に調整後、
あらかじめ０．０１８ＭＮａ２Ｃ０３一ＮａＨＣ０３緩
衝液で平衡化したＱＡＥ−Ｓｅｐｈｄｅｘ Ａ一５０の
カラムクロマトグラフイーにかけ、ピリルビンオキシダ
ーゼを吸着せしめ、洗浄後、同緩衝液（０〜０．乳Ｍ）
でグラジェントに港出し、活性画分を分子量１０００の
アミコン膜で脱塩濃縮し、さらに０．０９ＭＮａ２Ｃ０
３−ＮａＨＣ０３緩衝液で平衡化したセフアデックスＧ
−１００のカラムクロマトグラフィーにチャージし、溶
出してくるビリルビンオキシダーゼ活性画分を集め凍結
乾燥を行うことにより精製ビリルビンオキシダーゼを得
る。次に、本発明において得られるピリルビンオキシダ
ーゼの理化学的性質を示す。
あらかじめ０．０１８ＭＮａ２Ｃ０３一ＮａＨＣ０３緩
衝液で平衡化したＱＡＥ−Ｓｅｐｈｄｅｘ Ａ一５０の
カラムクロマトグラフイーにかけ、ピリルビンオキシダ
ーゼを吸着せしめ、洗浄後、同緩衝液（０〜０．乳Ｍ）
でグラジェントに港出し、活性画分を分子量１０００の
アミコン膜で脱塩濃縮し、さらに０．０９ＭＮａ２Ｃ０
３−ＮａＨＣ０３緩衝液で平衡化したセフアデックスＧ
−１００のカラムクロマトグラフィーにチャージし、溶
出してくるビリルビンオキシダーゼ活性画分を集め凍結
乾燥を行うことにより精製ビリルビンオキシダーゼを得
る。次に、本発明において得られるピリルビンオキシダ
ーゼの理化学的性質を示す。
‘１｝ 作用：ビリルビンを分子状酸素の存在下に酸化
し、緑色物質、淡緑色物質を経て淡紫色物質を生成する
も過酸化水素を生成しない。
し、緑色物質、淡緑色物質を経て淡紫色物質を生成する
も過酸化水素を生成しない。
‘２｝ 基質特異性：ビリルビンおよびビルベルジンを
酸化する。
酸化する。
但しビルベルジンの酸化速度は、ビリルビンの場合に比
して約１／５０である。‘３’至薄ｐＨ：ｐＨ８．の寸
近にある。‘４ー ｐＨ安定性：ｐＨ５〜１０．５では
、３７００、６粉ご処理しても９５％以上残存活性があ
る。
して約１／５０である。‘３’至薄ｐＨ：ｐＨ８．の寸
近にある。‘４ー ｐＨ安定性：ｐＨ５〜１０．５では
、３７００、６粉ご処理しても９５％以上残存活性があ
る。
｛５）至適温度：４０ｑｏ付近にある。
側 温度安定性：０．１Ｍ燐酸緩衝液（ｐＨ８．０）の
酵素溶液の場合、５０ｑ○、１５分処理すると９０％以
上の残存活性を示す。
酵素溶液の場合、５０ｑ○、１５分処理すると９０％以
上の残存活性を示す。
７０００１５分では失活する。
（７｝ ３７５ｎｍおよび４６０ｎｍ付近に極大吸収が
ない。（８｝ 等電点：４．１１である。（９１ 分子
量：５２０００（セフアデツクスＧ−１００のゲルロ過
法による）。
ない。（８｝ 等電点：４．１１である。（９１ 分子
量：５２０００（セフアデツクスＧ−１００のゲルロ過
法による）。
ＯＱ 本酵素は銅を含んでいる。
次に本発明の試験例および実施例を示すが、次に、ここ
に用いたビリルピンオキシダーゼ活性の測定法について
述べる。
に用いたビリルピンオキシダーゼ活性の測定法について
述べる。
ＥＤＴＡ１ｍＭを含む０．２Ｍトリス−塩酸緩衝液（ｐ
Ｈ８．４）２５０の‘にビリルビン５の９を溶かした液
２．０の‘と酵素標品０．２泌をセルに供し、３７ｑ０
で反応させた後、初速度を測定する。
Ｈ８．４）２５０の‘にビリルビン５の９を溶かした液
２．０の‘と酵素標品０．２泌をセルに供し、３７ｑ０
で反応させた後、初速度を測定する。
即ち４４仇ｍでの吸光度を光度計で経時的に追っていき
、１分間当り５２．の．Ｄを減少させた場合を５山′の
‘とする。本方法によりビリルビン活性を求めるための
標準曲線を第１図に示す。試験例 １ ミロセシウム・ベルカリアＭＴ−１、ＦＥＲＭ−Ｐ Ｎ
ｏ．５９１８及びミロセシゥム属に属する保存菌株を用
いてビリルビンオキシダーゼ生産能を調べた。
、１分間当り５２．の．Ｄを減少させた場合を５山′の
‘とする。本方法によりビリルビン活性を求めるための
標準曲線を第１図に示す。試験例 １ ミロセシウム・ベルカリアＭＴ−１、ＦＥＲＭ−Ｐ Ｎ
ｏ．５９１８及びミロセシゥム属に属する保存菌株を用
いてビリルビンオキシダーゼ生産能を調べた。
培地としてグルコース・ジャガイモ培地（ジャガイモ４
００ｇに水１そを加え煮沸し、冷却後、ガーゼで炉適し
、炉液を１のこメスァップしたものにグリコース１％を
加えｐＨを５．８に調整して作製）を各１００叫を用い
５００私の坂口フラスに入れ、各保存菌株を接種し、２
５ｑｏにて各時間培養し、培養液中のビリルビンオキシ
ダーゼ活性を調べた。その結果を表１に示す。表 １ 表１の結果より明らかの如く、Ｍｙｒｏｔｈｅｃｉｍｍ
ｖｅｒｍｃａｒｉａＭＴ−Ｉ ＦＥＲＭ−ＰＮｏ．５９
１８以外にもＭｙｒｏｔｈｅｃｉｕｍ ｖｅｒｒｕ
ｃａｒｌａ ＩＦ０６１１３Ｍｙｒｏｔｈｅｃｊｍ
ｍ ｖｅｎｕｃａｒｌａ ＩＦ０６１３３Ｍｙ
ｒ。
００ｇに水１そを加え煮沸し、冷却後、ガーゼで炉適し
、炉液を１のこメスァップしたものにグリコース１％を
加えｐＨを５．８に調整して作製）を各１００叫を用い
５００私の坂口フラスに入れ、各保存菌株を接種し、２
５ｑｏにて各時間培養し、培養液中のビリルビンオキシ
ダーゼ活性を調べた。その結果を表１に示す。表 １ 表１の結果より明らかの如く、Ｍｙｒｏｔｈｅｃｉｍｍ
ｖｅｒｍｃａｒｉａＭＴ−Ｉ ＦＥＲＭ−ＰＮｏ．５９
１８以外にもＭｙｒｏｔｈｅｃｉｕｍ ｖｅｒｒｕ
ｃａｒｌａ ＩＦ０６１１３Ｍｙｒｏｔｈｅｃｊｍ
ｍ ｖｅｎｕｃａｒｌａ ＩＦ０６１３３Ｍｙ
ｒ。
ｔｈｅＣｉ印ｍ ＶｅｒｒｕＣａｎａ ＩＦ。
６３５１ＭｙｍｔｈｅＣｉ山ｍ Ｖｅｎ山Ｃａｎａ
ＩＦ。
６３５１ＭｙｍｔｈｅＣｉ山ｍ Ｖｅｎ山Ｃａｎａ
ＩＦ。
９０５６ＭｙｍｔｈｅＣ；山ｍ ｒ。
ｉｄｕｍ ＩＦ。９５３１・Ｍｙｒ。ｔｈｅＣｉｕｍｃ
ｉｎｃｔ肌ｍ ＩＦＯ９９５０にビリルビンオキシダ−
ゼ生産能があることが判る。実施例 １ Ｍｙｒｏｔｈｅｃｊｕｍ ｖｅｎＭａｒｉａＭＴ−１、
ＦＥＲＭ−ＰＮｏ．５９１８を試験例１の記載のグルコ
ース・ジャガイモ培地１００の‘を５００肌坂口フラス
コに入れたものに接種し、２５００で７２時間振濠培養
（１５比ｐｍ）し、得られた種培養物を、あらかじめ１
０そ容量のジャーフアメンターに殺菌した７そのグルコ
ース・ジャガイモ培地及び消泡剤アデカノール０．０７
％添加したものの中に接種する（接種量は２％）。
ｉｎｃｔ肌ｍ ＩＦＯ９９５０にビリルビンオキシダ−
ゼ生産能があることが判る。実施例 １ Ｍｙｒｏｔｈｅｃｊｕｍ ｖｅｎＭａｒｉａＭＴ−１、
ＦＥＲＭ−ＰＮｏ．５９１８を試験例１の記載のグルコ
ース・ジャガイモ培地１００の‘を５００肌坂口フラス
コに入れたものに接種し、２５００で７２時間振濠培養
（１５比ｐｍ）し、得られた種培養物を、あらかじめ１
０そ容量のジャーフアメンターに殺菌した７そのグルコ
ース・ジャガイモ培地及び消泡剤アデカノール０．０７
％添加したものの中に接種する（接種量は２％）。
培養温度２５午○、櫨拝２５仇ｐｍ、通気量６そ／ｍｉ
ｎの条件で６観音間培養し、培養終了後、除菌し、培養
炉液３０００Ｍを得る。
ｎの条件で６観音間培養し、培養終了後、除菌し、培養
炉液３０００Ｍを得る。
このもののビリルビンオキシダーゼ活性は１９．肌′の
【であった。実施例 ２Ｍのｏ仇ｅｃｉｕｍｖｅｎＭａ
ｒｉａＩＦ０６１３３を用いて実施例１と全く同様に処
理し、７その培地よりビリルビンオキシダーゼ活性１４
．０ｕ／泌を含む培養液３５００の上を得た。
【であった。実施例 ２Ｍのｏ仇ｅｃｉｕｍｖｅｎＭａ
ｒｉａＩＦ０６１３３を用いて実施例１と全く同様に処
理し、７その培地よりビリルビンオキシダーゼ活性１４
．０ｕ／泌を含む培養液３５００の上を得た。
実施例 ３
ＭＭｏｔｈｅｃｉｕｍｒｏｒｉｄｕｍび０９５３１を用
いて、実施例１と全く同様に処理し、７その培地よりピ
リルビンオキシダーゼ活性７．５ｕ／の‘を含む培養液
３３００の‘を得た。
いて、実施例１と全く同様に処理し、７その培地よりピ
リルビンオキシダーゼ活性７．５ｕ／の‘を含む培養液
３３００の‘を得た。
第１図は、本発明のビリルビンオキシダーゼ活性を求め
るための標準曲線を示す。 第１図
るための標準曲線を示す。 第１図
Claims (1)
- １ ミロセシウム属に属するビリルビンオキシダーゼ生
産菌を培養し、培地中にビリルビンオキシダーゼを産生
せしめ、これを採取することを特徴とするビリルビンオ
キシダーゼの製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56045503A JPS6012031B2 (ja) | 1981-03-30 | 1981-03-30 | ビリルビンオキシダ−ゼの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56045503A JPS6012031B2 (ja) | 1981-03-30 | 1981-03-30 | ビリルビンオキシダ−ゼの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS57159487A JPS57159487A (en) | 1982-10-01 |
| JPS6012031B2 true JPS6012031B2 (ja) | 1985-03-29 |
Family
ID=12721203
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP56045503A Expired JPS6012031B2 (ja) | 1981-03-30 | 1981-03-30 | ビリルビンオキシダ−ゼの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6012031B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH08312911A (ja) * | 1995-05-15 | 1996-11-26 | ▲吉▼田産業株式会社 | 燃焼炉用バーナーの噴射角度調節装置 |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS59135886A (ja) * | 1983-01-25 | 1984-08-04 | Takara Shuzo Co Ltd | ビリルビン・オキシダ−ゼの製造法 |
| JPS59198971A (ja) * | 1983-04-28 | 1984-11-10 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | ビリルビンオキシダ−ゼの製造法 |
| US4701411A (en) * | 1983-09-01 | 1987-10-20 | Eastman Kodak Company | Bilirubin-specific enzyme preparation, assay compositions, analytical elements and methods using same |
| US4600689A (en) * | 1983-11-21 | 1986-07-15 | Takara Shuzo Co., Ltd. | Novel bilirubin oxidase, its production and use |
| US4746606A (en) * | 1986-05-27 | 1988-05-24 | Eastman Kodak Company | Bilirubin-specific enzyme and its analytical use |
| EP0852260A1 (en) * | 1995-06-23 | 1998-07-08 | Novo Nordisk A/S | Oxidase, microorganisms producing the same and use of the same |
| KR970022316A (ko) * | 1995-10-27 | 1997-05-28 | 후루야 아끼라 | 빌리루빈의 정량 방법 |
-
1981
- 1981-03-30 JP JP56045503A patent/JPS6012031B2/ja not_active Expired
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH08312911A (ja) * | 1995-05-15 | 1996-11-26 | ▲吉▼田産業株式会社 | 燃焼炉用バーナーの噴射角度調節装置 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS57159487A (en) | 1982-10-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN105695340B (zh) | 一种米曲霉及其应用 | |
| JPS6012031B2 (ja) | ビリルビンオキシダ−ゼの製造法 | |
| DE3600563C2 (ja) | ||
| DE3714544A1 (de) | Glucosedehydrogenase und verfahren zu deren herstellung | |
| DE3014001A1 (de) | Verfahren zur herstellung von peroxidase und ihre verwendung | |
| JPH06169764A (ja) | ソルビトールオキシダーゼ、その製法及びその用途 | |
| FR2539757A1 (fr) | Procede de production de bilirubine-oxydase | |
| DE3116856A1 (de) | "verfahren zur gewinnung von l-aminosaeure-oxidase" | |
| JPH0678780A (ja) | パラヒドロキシ安息香酸の製造法およびその製造法に使用する微生物 | |
| JPS6012032B2 (ja) | ビリルビンオキシダーゼｎｓ―１ | |
| JPS6098982A (ja) | ポリアミン測定用酵素の製造法 | |
| JPH02265478A (ja) | 新規なザルコシンオキシダーゼおよびその製法 | |
| JPS5840466B2 (ja) | アシル−ＣｏＡ・オキシダ−ゼの製造法 | |
| JPH0763364B2 (ja) | 生澱粉分解酵素の製造法 | |
| JPS63503199A (ja) | リグノセルロースの分解 | |
| DE2659878A1 (de) | Verfahren zur herstellung von kreatinamidinohydrolase | |
| JPS58146297A (ja) | ポリアミンの定量方法 | |
| JPS63198984A (ja) | アルコ−ルオキシダ−ゼ及びその製造方法 | |
| JPH0391478A (ja) | コラーゲン分解酵素の製造方法 | |
| JPS62232385A (ja) | シアナイドヒトラタ−ゼ酵素の製法 | |
| JPS60221084A (ja) | スフインゴミエリナ−ゼの製造法 | |
| JPS6363382A (ja) | キトサナ−ゼの製造法 | |
| JPS6359881A (ja) | 生澱粉分解酵素生産菌 | |
| JPH0133159B2 (ja) | ||
| JPS58165789A (ja) | α−グリセロリン酸オキシダ−ゼの製造法 |