JPH02265478A - 新規なザルコシンオキシダーゼおよびその製法 - Google Patents
新規なザルコシンオキシダーゼおよびその製法Info
- Publication number
- JPH02265478A JPH02265478A JP1086611A JP8661189A JPH02265478A JP H02265478 A JPH02265478 A JP H02265478A JP 1086611 A JP1086611 A JP 1086611A JP 8661189 A JP8661189 A JP 8661189A JP H02265478 A JPH02265478 A JP H02265478A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- sarcosine
- sarcosine oxidase
- optimum
- oxidase
- around
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 108010060059 Sarcosine Oxidase Proteins 0.000 title claims abstract description 33
- 102000008118 Sarcosine oxidase Human genes 0.000 title claims abstract description 33
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 5
- FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N sarcosine Chemical compound C[NH2+]CC([O-])=O FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 26
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 18
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 14
- 108010077895 Sarcosine Proteins 0.000 claims abstract description 13
- 229940043230 sarcosine Drugs 0.000 claims abstract description 13
- 241000186063 Arthrobacter Species 0.000 claims abstract description 11
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims abstract description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 9
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 claims description 4
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 abstract description 16
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 abstract description 16
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 5
- 241000233866 Fungi Species 0.000 abstract description 4
- 238000012258 culturing Methods 0.000 abstract description 3
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 abstract description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 abstract description 2
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 abstract 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 abstract 1
- 230000000050 nutritive effect Effects 0.000 abstract 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 10
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 8
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M sodium hydroxide Inorganic materials [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- CVSVTCORWBXHQV-UHFFFAOYSA-N creatine Chemical compound NC(=[NH2+])N(C)CC([O-])=O CVSVTCORWBXHQV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N creatinine Chemical compound CN1CC(=O)NC1=N DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 4
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 241000186073 Arthrobacter sp. Species 0.000 description 3
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 4-aminoantipyrine Chemical compound CN1C(C)=C(N)C(=O)N1C1=CC=CC=C1 RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N Indole Chemical compound C1=CC=C2NC=CC2=C1 SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000004218 Orcein Substances 0.000 description 2
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 2
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 2
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 2
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 2
- 229960003624 creatine Drugs 0.000 description 2
- 239000006046 creatine Substances 0.000 description 2
- 229940109239 creatinine Drugs 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 description 2
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KYARBIJYVGJZLB-UHFFFAOYSA-N 7-amino-4-hydroxy-2-naphthalenesulfonic acid Chemical compound OC1=CC(S(O)(=O)=O)=CC2=CC(N)=CC=C21 KYARBIJYVGJZLB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NOWKCMXCCJGMRR-UHFFFAOYSA-N Aziridine Chemical compound C1CN1 NOWKCMXCCJGMRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 1
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 1
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-VRPWFDPXSA-N D-Fructose Natural products OC[C@H]1OC(O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-VRPWFDPXSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen sulfide Chemical compound S RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000925662 Enterobacteria phage PRD1 Endolysin Proteins 0.000 description 1
- -1 French press Substances 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- ZOKXTWBITQBERF-UHFFFAOYSA-N Molybdenum Chemical compound [Mo] ZOKXTWBITQBERF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 1
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QACUPNAKIPYZAW-RMQWDSPGSA-N O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O.O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O.O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O QACUPNAKIPYZAW-RMQWDSPGSA-N 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 102000007327 Protamines Human genes 0.000 description 1
- 108010007568 Protamines Proteins 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 108010046334 Urease Proteins 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 229910000037 hydrogen sulfide Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N indole Natural products CC1=CC=CC2=C1C=CN2 PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N indolenine Natural products C1=CC=C2CC=NC2=C1 RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 239000006193 liquid solution Substances 0.000 description 1
- 239000002932 luster Substances 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 229910052750 molybdenum Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011733 molybdenum Substances 0.000 description 1
- 230000004899 motility Effects 0.000 description 1
- 150000002823 nitrates Chemical class 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 229940048914 protamine Drugs 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000005185 salting out Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 235000019333 sodium laurylsulphate Nutrition 0.000 description 1
- 229960002920 sorbitol Drugs 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 239000002023 wood Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
(産業上の利用分野)
本発明は熱安定性に優れ、かつKm値の小さい新規なザ
ルコシンオキシダーゼ及びその製法に関するものである
。
ルコシンオキシダーゼ及びその製法に関するものである
。
本発明の新規なザルコシンオキシダーゼは、血清、尿中
のクレアチン、クレアチニンの定にに用いられる。
のクレアチン、クレアチニンの定にに用いられる。
(従来の技術)
従来からザルコシンオキシダーゼは、バチルス属(特開
昭54−52789号公報)、コリネバクテリウム属(
J、Biochem、 LL。
昭54−52789号公報)、コリネバクテリウム属(
J、Biochem、 LL。
599、(1981))、シリンドロカルボン属(特開
昭5E3−92790号公報)、アルスロバクタ−属(
特開Ki 54−28893号公報)、シュードモナス
属(特開昭80−43379号公報)等の菌株が生産す
ることが知られている。しかしながらいずれの菌株の生
産するザルコシンオキシダーゼも熱安定性が[・分でな
く、もしくはKrn値が大きく、実用1・0問題があっ
た。
昭5E3−92790号公報)、アルスロバクタ−属(
特開Ki 54−28893号公報)、シュードモナス
属(特開昭80−43379号公報)等の菌株が生産す
ることが知られている。しかしながらいずれの菌株の生
産するザルコシンオキシダーゼも熱安定性が[・分でな
く、もしくはKrn値が大きく、実用1・0問題があっ
た。
(発明が解決しようとする問題点)
本発明者らは下記の背景を踏まえ、従来のザルコシンオ
キシダーゼよりも熱安定性に優れ、かつKm値の小さい
、より実用的なザルコシンオキシダーゼを見い出そうと
試みた。
キシダーゼよりも熱安定性に優れ、かつKm値の小さい
、より実用的なザルコシンオキシダーゼを見い出そうと
試みた。
(問題点を解決するための手段)
本発明者らは1−記問題点を解決するため鋭意研究を市
ねた結果、石用県加賀市内の土壌より分離した、アルス
ロバクタ−属に属すると同定された菌株、TE182E
lから従来のザルコシンオキシダーゼよりも熱安定性に
優れ、かつKm値の小さいザルコシンオキシダーゼを見
い出した。
ねた結果、石用県加賀市内の土壌より分離した、アルス
ロバクタ−属に属すると同定された菌株、TE182E
lから従来のザルコシンオキシダーゼよりも熱安定性に
優れ、かつKm値の小さいザルコシンオキシダーゼを見
い出した。
すなわち本発明は、下記性質■〜■を有する新規なザル
コシンオキシダーゼである。
コシンオキシダーゼである。
■ 下記の反応を触媒する。
ザルコシン+H*O+0□→グリシン+ホルムアルデヒ
ド+H,0□ ■ 安定pHが6.5〜9.0付近である。
ド+H,0□ ■ 安定pHが6.5〜9.0付近である。
■ 至適pHが7.0〜8.5付近である。
■ 熱安定性が約55℃以ドである。
■ 至適温度が40〜50℃付近である。
■ ザルコシンに対するKm値が約2.8×10−’M
である。
である。
■ 分子量が約65,000である(ゲルろ適法)。
また本発明は、L記性質■〜■を有する新規なザルコシ
ンオキシダーゼを産生ずるアルスロバクタ−属菌を栄養
培地にて培養し、該培養物から前記ザルコシンオキシダ
ーゼを採取することを特徴とする新規なザルコシンオキ
シダーゼの!!!l去である。
ンオキシダーゼを産生ずるアルスロバクタ−属菌を栄養
培地にて培養し、該培養物から前記ザルコシンオキシダ
ーゼを採取することを特徴とする新規なザルコシンオキ
シダーゼの!!!l去である。
本発明に用いる微生物は、」ユ記性質を有するザルコシ
ンオキシダーゼを産生しうるアルスロバクタ−属菌であ
って、好適な例としてはアルスロバクター−XXピー(
Arthrobacter sp、) T E L 8
26があげられる。アルスロバクタ−・エスピー(Ar
throbacter sp、) T E 182 B
は本発明者らが土壌中より新たに分離した菌株であり、
その菌学的性質は下記のとおりである。
ンオキシダーゼを産生しうるアルスロバクタ−属菌であ
って、好適な例としてはアルスロバクター−XXピー(
Arthrobacter sp、) T E L 8
26があげられる。アルスロバクタ−・エスピー(Ar
throbacter sp、) T E 182 B
は本発明者らが土壌中より新たに分離した菌株であり、
その菌学的性質は下記のとおりである。
(a)形能
(1)細胞の大きさ二〇、5〜0.7X1.0〜10.
0/JJの桿菌。
0/JJの桿菌。
■ 細胞の多形性:生活環にともなう多形性有り。
(:3)運動性二なし。
(2)胞子の有無:なし。
■ ダラム染色性:陽性。
■ 抗酸性:陰性。
(b)各培地における生育状態
(1)肉t1−寒天甲板培養:37℃、24時間培養で
淡褐色円形のコロニーを形成する。表面はなめらかで鈍
い光沢をイ「シ、不透明である。
淡褐色円形のコロニーを形成する。表面はなめらかで鈍
い光沢をイ「シ、不透明である。
色素の生成はない。
■ 肉汁寒天斜面培a:生育は良好で(1)に同じ。
<3)肉汁液体培養:静置培養は生育悪く、振とう培養
にて良好に生育する。
にて良好に生育する。
(2)肉汁ゼラチン穿刺培4!ii:]一部のみ生育し
、層状に液化する。
、層状に液化する。
■ リドマスミルク:全く変化しない。
(c)生理的性質
(1)硝酸塩の還元:陽性。
(2)脱窒反応:l13性。
(3)MRテスト:陰性。
(4)VPテスト:g3性。
(5)インドールの生成二つ性。
(6)硫化水素の生成二〇性。
(7)デンプンの加水分解:陽性。
(8)クエン酸の利用:シモン培地で陰性、クリステン
セン培地で陽性。
セン培地で陽性。
(9)無機窒素源の利用:アンモニウム塩は利用するが
弱い。硝酸塩はほとんど利用しない。
弱い。硝酸塩はほとんど利用しない。
(10)色素の生成:陰性。
(II)ウレアーゼ:陽性。
(12)オキシダーゼ:嶋性。
(3)カタラーゼ:陽性。
(14)生育の範囲:生育pH域は5.0〜8.5、生
育温度域は10〜45℃。
育温度域は10〜45℃。
(+5)酸素に対する態度:好気性。
(IG)0− Fテスト二〇(酸化)
(17)糖からの酸の生成
り一アラビノース
1〕−キシロース −
l〕−グルコース +
D−マンノース −
D−フラクトース
!〕−ガラクトース
麦芽糖(マルトース) +
76糖(サブ力ロース) +
乳糖(ラクトース)
トレハロース +
D−ソルビット +
1)−マンニット +
イノジット
グリセリン 十
デンプン +
1−記菌学的性質の同定のための実験法は主として長谷
用武治編著、改訂版「微生物の分類と同定」学会出版セ
ンター(1965年)によって行った。
用武治編著、改訂版「微生物の分類と同定」学会出版セ
ンター(1965年)によって行った。
また分類同定の基準として「バージイス・マニュアル・
オブ・デタミネイティブ・バクテリオロジー」第8版(
1974年)を参考にした。
オブ・デタミネイティブ・バクテリオロジー」第8版(
1974年)を参考にした。
以にの菌学的性状における木菌TE182Bは生活環に
ともなう多形性が認められ、ダラム染色は陽性の無胞子
桿菌で、通常栄養培地に良好に生育し、極めて好気的で
あることより、アルスロバクタ−属に属するとみなされ
、アルスロバクター−xスビー(Arthrobact
er s+p、) T E 182 Bと命名した。な
お木菌は工業技術院微生物り業技術研究所に、微−L研
菌寄第10837号として寄託されている。
ともなう多形性が認められ、ダラム染色は陽性の無胞子
桿菌で、通常栄養培地に良好に生育し、極めて好気的で
あることより、アルスロバクタ−属に属するとみなされ
、アルスロバクター−xスビー(Arthrobact
er s+p、) T E 182 Bと命名した。な
お木菌は工業技術院微生物り業技術研究所に、微−L研
菌寄第10837号として寄託されている。
本発明の酵素を製造するにあたっては、1−記ザルコシ
ンオキシダーゼ生産菌を酵素を生産する通常の方法で培
養する。使用する培地組成としては使用菌株が資化しう
る炭素源、窒素源、無機物、その他必要な栄養素を適1
武含有するものであれば、合成培地、天然培地いずれも
使用できる。本発明においてはクレアチン又はクレアチ
ニン又はザルコシンを含有する培地で培養したときにザ
ルコシンオキシダーゼが最も収M良く得られる。培養は
通常振とう培養あるいは通気撹拌培養で行う。培a潟度
は30℃〜40℃で杼うことが好ましい。
ンオキシダーゼ生産菌を酵素を生産する通常の方法で培
養する。使用する培地組成としては使用菌株が資化しう
る炭素源、窒素源、無機物、その他必要な栄養素を適1
武含有するものであれば、合成培地、天然培地いずれも
使用できる。本発明においてはクレアチン又はクレアチ
ニン又はザルコシンを含有する培地で培養したときにザ
ルコシンオキシダーゼが最も収M良く得られる。培養は
通常振とう培養あるいは通気撹拌培養で行う。培a潟度
は30℃〜40℃で杼うことが好ましい。
これら以外の条件ドでも使用する菌株が生育すれば実施
できる。通常1〜211の培養期間で生育し、菌体内に
ザルコシンオキシダーゼが生成蓄積される。
できる。通常1〜211の培養期間で生育し、菌体内に
ザルコシンオキシダーゼが生成蓄積される。
本発明酵素の精製法は一般に使用されている精製法を用
いることができる。例えば抽出法には超n波破砕、ガラ
スピーズを用いる機械的破砕、フレンチプレス、界面活
性剤、溶菌酵素などいずれを用いてもよい。さらに抽出
液については硫安やご硝などの塩析法、塩化マグネシウ
ムや塩化カルシウムなどの金属凝集法、プロタミンやエ
チレンイミンポリマーなどの凝集法、熱処理、さらには
イオン交換クロマトグラフィーなどにより精製すること
ができる。
いることができる。例えば抽出法には超n波破砕、ガラ
スピーズを用いる機械的破砕、フレンチプレス、界面活
性剤、溶菌酵素などいずれを用いてもよい。さらに抽出
液については硫安やご硝などの塩析法、塩化マグネシウ
ムや塩化カルシウムなどの金属凝集法、プロタミンやエ
チレンイミンポリマーなどの凝集法、熱処理、さらには
イオン交換クロマトグラフィーなどにより精製すること
ができる。
次に本発明のザルコシンオキシダーゼの活性測定法を示
す。95mMザルコシン、0.47mM4−アミノアン
チピリン、2mMフェノール、4.5U/mQペルオキ
シダーゼ、0.045%トリトンX−100を含む48
mM)リス塩酸緩衝液(pH8,0)を調製した後、1
.0m+(!を試験管に分取し、37℃で−を備加温す
る。適当な濃度の酵素液0.05a+Qを添加し、37
℃、10分間反応させ、次にこれに0.25%ラウリル
硫酸すトリウム水溶液を添加して反応を停止させ、分光
光度計にて500 nmにおける吸光度変化と求める。
す。95mMザルコシン、0.47mM4−アミノアン
チピリン、2mMフェノール、4.5U/mQペルオキ
シダーゼ、0.045%トリトンX−100を含む48
mM)リス塩酸緩衝液(pH8,0)を調製した後、1
.0m+(!を試験管に分取し、37℃で−を備加温す
る。適当な濃度の酵素液0.05a+Qを添加し、37
℃、10分間反応させ、次にこれに0.25%ラウリル
硫酸すトリウム水溶液を添加して反応を停止させ、分光
光度計にて500 nmにおける吸光度変化と求める。
ザルコシンオキシダーゼの活性の表示は、1−、記条件
下で1分間にl”フィクロモルのH2O。を生成する酵
素活性を1!11位(U)とする。
下で1分間にl”フィクロモルのH2O。を生成する酵
素活性を1!11位(U)とする。
次に本発明の酵素の理化学的な性質について述べる。
(1)作用及び基質特異性
ザルコシンを酸化分解して、グリシン、ホルムアルデヒ
ドと過酸化水素を生成する反応を触媒する。なおザルコ
ミンに対するKm値は37℃、pH8,0()リス塩酸
緩衝液)で約2.8X10−Mである。
ドと過酸化水素を生成する反応を触媒する。なおザルコ
ミンに対するKm値は37℃、pH8,0()リス塩酸
緩衝液)で約2.8X10−Mである。
■ 安定pH
本発明の酵素と0.1Mジメチルグルタル酸−NaOH
緩衝液(pH5,5〜6.5)、0、IMK−リン酸緩
衝液(pH6,5〜7.5)、O,1Mトリス塩酸緩衝
液(pH7,5〜8.5)、O,1Mグリシン−NaO
H緩衝液(pH8,5〜9.5)、0.1Mグリシ7−
NaCQ−NaOH緩衝液(pH9,0〜10.0)中
で25℃、24時間保温後、残存する酵素活性を測定し
た。その結果は第1図に示す通りであって、安定pHは
6.5〜9.0付近であった。
緩衝液(pH5,5〜6.5)、0、IMK−リン酸緩
衝液(pH6,5〜7.5)、O,1Mトリス塩酸緩衝
液(pH7,5〜8.5)、O,1Mグリシン−NaO
H緩衝液(pH8,5〜9.5)、0.1Mグリシ7−
NaCQ−NaOH緩衝液(pH9,0〜10.0)中
で25℃、24時間保温後、残存する酵素活性を測定し
た。その結果は第1図に示す通りであって、安定pHは
6.5〜9.0付近であった。
(3) 至適pH
O,IMK−リン酸緩衝液(pH5,5〜7.5)、0
.1Mトリス塩酸緩衝液(pH7,5〜8.5) 、O
,1Mグリシ7−NaOH緩衝液(pH8,0〜9.0
)、0.1Mグリシ7−NaCQ−NaOH!衝液(p
H9,0〜10.0)中での酵素活性を測定した。その
結果は第2図に示す通りであって、至適pHは7.0〜
8.5付近であった。
.1Mトリス塩酸緩衝液(pH7,5〜8.5) 、O
,1Mグリシ7−NaOH緩衝液(pH8,0〜9.0
)、0.1Mグリシ7−NaCQ−NaOH!衝液(p
H9,0〜10.0)中での酵素活性を測定した。その
結果は第2図に示す通りであって、至適pHは7.0〜
8.5付近であった。
(Φ 熱安定性
本発明の酵素を50mMK−!Jン酸緩衝液(pH7,
5)中で25〜60℃、10分間保温した後、残存する
酵素活性を測定した。
5)中で25〜60℃、10分間保温した後、残存する
酵素活性を測定した。
その結果は第3図に示す通りであって約55℃まで安定
であった。
であった。
■ 至適温度
25〜60℃の各温度における酵素活性を測定した。そ
の結果は第4図に示す通りであって、至適温度は40〜
50℃付近であった。
の結果は第4図に示す通りであって、至適温度は40〜
50℃付近であった。
■ 分子噛
HPLC用カラムAsahipak GFA−50(
旭化成J−業製)を用いたゲルろ適法を行った結果、分
子頃は約65.000であった。
旭化成J−業製)を用いたゲルろ適法を行った結果、分
子頃は約65.000であった。
(実施例)
以ド、実施例をあげ本発明を具体的に示す。
実施例1
ザルコシン0.5%、クレアチ70.5%、肉エキス0
.3%、ポリペプトン0.3%、酵1:Lエキス0.3
%、KH2PO,O,・1%、K2HPO,0,22%
、Mg5On・7H200,05%を含む培地(pH7
、0) 5 mQを30、Q容試験管に移し、121’
C115分間オートクレーブ殺菌を行なった。種菌とし
てアルスロバクタ−・エスピー(Arthrobact
er sp、) T E 1826(微−[研菌寄第1
0837号)を11金耳植菌し、37℃で16時間娠と
う培養し、種培a岐とした。次に同培地500 raQ
を2Q容坂[1フラスコに移し、121℃、15分間オ
ートクレーブを行った。これに種培養液5−を移し、3
7℃で24時間振とう培養した。培養終了時のザルコシ
ンオキシダーゼ活性は0.3U/mQであった。
.3%、ポリペプトン0.3%、酵1:Lエキス0.3
%、KH2PO,O,・1%、K2HPO,0,22%
、Mg5On・7H200,05%を含む培地(pH7
、0) 5 mQを30、Q容試験管に移し、121’
C115分間オートクレーブ殺菌を行なった。種菌とし
てアルスロバクタ−・エスピー(Arthrobact
er sp、) T E 1826(微−[研菌寄第1
0837号)を11金耳植菌し、37℃で16時間娠と
う培養し、種培a岐とした。次に同培地500 raQ
を2Q容坂[1フラスコに移し、121℃、15分間オ
ートクレーブを行った。これに種培養液5−を移し、3
7℃で24時間振とう培養した。培養終了時のザルコシ
ンオキシダーゼ活性は0.3U/mQであった。
培養液500 yaQを遠心分離にて集菌し、50mM
K−リン酸緩衝液(pH7,5)50+mOにて懸濁し
た。超音波破砕機(海上電気製、19KHz)にて20
分間処理し、遠心分離にてその上清液45−を得た。硫
酸アンモニウム22gを添加、溶解し、遠心分離にて塩
析沈殿物を得た。これを50mMK−リン酸緩衝液(p
H7,5)25−にて懸濁し、遠心分離にて七清液を得
た。上清液を50mMK−リン酸緩衝液にて平衡化した
セファデックスG−25(ファルマシア製)で脱塩を行
なった。次に同級衝岐にて・14衡化したDEAE−セ
フrロースCL−6B、(ファルマシア製)カラl、ク
ロマトグラフィーに供し、0〜0.4MNaCQ容出画
分にザルコシンオキシダーゼ酵素活性を得た。溶出液を
55℃、1時間熱処理した後、50mMK−リン酸緩衝
液(pH7,5)にて平衡化したセファデックスG−2
5(ファルマシア製)で脱塩を行った。その結果65U
の酵素が得られた。得られた酵素の理化学的性質は前述
の通りであった。
K−リン酸緩衝液(pH7,5)50+mOにて懸濁し
た。超音波破砕機(海上電気製、19KHz)にて20
分間処理し、遠心分離にてその上清液45−を得た。硫
酸アンモニウム22gを添加、溶解し、遠心分離にて塩
析沈殿物を得た。これを50mMK−リン酸緩衝液(p
H7,5)25−にて懸濁し、遠心分離にて七清液を得
た。上清液を50mMK−リン酸緩衝液にて平衡化した
セファデックスG−25(ファルマシア製)で脱塩を行
なった。次に同級衝岐にて・14衡化したDEAE−セ
フrロースCL−6B、(ファルマシア製)カラl、ク
ロマトグラフィーに供し、0〜0.4MNaCQ容出画
分にザルコシンオキシダーゼ酵素活性を得た。溶出液を
55℃、1時間熱処理した後、50mMK−リン酸緩衝
液(pH7,5)にて平衡化したセファデックスG−2
5(ファルマシア製)で脱塩を行った。その結果65U
の酵素が得られた。得られた酵素の理化学的性質は前述
の通りであった。
比較例1
比較のために先行技術文献に記載されているザルコシン
オキシダーゼの理化学的性質を第1表を示す。
オキシダーゼの理化学的性質を第1表を示す。
以ド余自
(発明の効果)
本発明では熱安定性に優れ、かつKm値の小さい新規な
ザルコシンオキシダーゼが(りられる。
ザルコシンオキシダーゼが(りられる。
第1図は本発明のザルコシンオキシダーゼのpH安定性
を示す。 第2図は本発明のザルコシンオキシダーゼの至適pHを
示す。 第3図は本発明のザルコシンオキシダーゼの熱安定性を
示す。 第4図は本発明のザコシンオキシダーゼの至適温度を示
す。
を示す。 第2図は本発明のザルコシンオキシダーゼの至適pHを
示す。 第3図は本発明のザルコシンオキシダーゼの熱安定性を
示す。 第4図は本発明のザコシンオキシダーゼの至適温度を示
す。
Claims (2)
- (1)下記性質[1]〜[7]を有する新規なザルコシ
ンオキシダーゼ。 [1]下記の反応を触媒する。 ザルコシン+H_2O+O_2→グリシン+ホルムアル
デヒド+H_2O_2 [2]安定pHが6.5〜9.0付近である。 [3]至適pHが7.0〜8.5付近である。 [4]熱安定性が約55℃以下である。 [5]至適温度が40〜50℃付近である。 [6]ザルコシンに対するKm値が約2.8×10^−
^3Mである。 [7]分子量が約65,000である(ゲルろ過法)。 - (2)下記性質[1]〜[7]を有する新規なザルコシ
ンオキシダーゼを産生するアルスロバクター属菌を栄養
培地にて培養し、該培養物から前記ザルコシンオキシダ
ーゼを採取することを特徴とする新規なザルコシンオキ
シダーゼの製法。 [1]下記の反応を触媒する。 ザルコシン+H_2O+O_2→グリシン+ホルムアル
デヒド+H_2O_2 [2]安定pHが6.5〜9.0付近である。 [3]至適pHが7.0〜8.5付近である。 [4]熱安定性が約55℃以下である。 [5]至適温度が40〜50℃付近である。 [6]ザルコシンに対するKm値が約2.8×10^−
^3Mである。 [7]分子量が約65,000である(ゲルろ過法)。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP1086611A JPH0787780B2 (ja) | 1989-04-04 | 1989-04-04 | 新規なザルコシンオキシダーゼおよびその製法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP1086611A JPH0787780B2 (ja) | 1989-04-04 | 1989-04-04 | 新規なザルコシンオキシダーゼおよびその製法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH02265478A true JPH02265478A (ja) | 1990-10-30 |
JPH0787780B2 JPH0787780B2 (ja) | 1995-09-27 |
Family
ID=13891814
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP1086611A Expired - Fee Related JPH0787780B2 (ja) | 1989-04-04 | 1989-04-04 | 新規なザルコシンオキシダーゼおよびその製法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPH0787780B2 (ja) |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH1084954A (ja) * | 1996-07-25 | 1998-04-07 | Rikagaku Kenkyusho | 酵素を熱活性化する方法 |
WO2004044193A1 (ja) | 2002-11-13 | 2004-05-27 | Toyo Boseki Kabushiki Kaisha | 改変型ザルコシンオキシダーゼ、その製造法およびそれを用いた試薬組成物 |
US7132253B2 (en) | 2003-11-18 | 2006-11-07 | Kikkoman Corporation | Modified sarcosine oxidases, modified sarcosine oxidase genes, and methods for preparing the modified sarcosine oxidases |
US11479757B2 (en) | 2016-09-15 | 2022-10-25 | Kikkoman Corporation | Modified sarcosine oxidase, and gene and production method therefor |
-
1989
- 1989-04-04 JP JP1086611A patent/JPH0787780B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH1084954A (ja) * | 1996-07-25 | 1998-04-07 | Rikagaku Kenkyusho | 酵素を熱活性化する方法 |
WO2004044193A1 (ja) | 2002-11-13 | 2004-05-27 | Toyo Boseki Kabushiki Kaisha | 改変型ザルコシンオキシダーゼ、その製造法およびそれを用いた試薬組成物 |
US7132253B2 (en) | 2003-11-18 | 2006-11-07 | Kikkoman Corporation | Modified sarcosine oxidases, modified sarcosine oxidase genes, and methods for preparing the modified sarcosine oxidases |
US11479757B2 (en) | 2016-09-15 | 2022-10-25 | Kikkoman Corporation | Modified sarcosine oxidase, and gene and production method therefor |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPH0787780B2 (ja) | 1995-09-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP2850515B2 (ja) | グルコースデヒドロゲナーゼおよびその製造法 | |
JPH0653069B2 (ja) | 耐熱性ビリルビン・オキシダーゼの製造法 | |
JP3041840B2 (ja) | 新規なグリセロールデヒドロゲナーゼ、その製法及びその用途 | |
JPH02265478A (ja) | 新規なザルコシンオキシダーゼおよびその製法 | |
JPH07170979A (ja) | 新規なクレアチンアミジノハイドロラーゼ及びその製造法 | |
JPH06169764A (ja) | ソルビトールオキシダーゼ、その製法及びその用途 | |
US4061540A (en) | Cholesterol oxidaze and process for preparing same | |
JP3642344B2 (ja) | クレアチンアミジノハイドロラーゼの製造法 | |
US4496655A (en) | Process for the production of tyramine oxidase | |
US5185257A (en) | Thermostable xanthine oxidase from Arthrobacter luteus | |
JPH0364107B2 (ja) | ||
JP3102543B2 (ja) | グルタミン酸デヒドロゲナーゼおよびその製造法 | |
JPH0127714B2 (ja) | ||
JP2530998B2 (ja) | サ―マス(Thermus)属に属する新菌株 | |
JPS584551B2 (ja) | コリン酸化酵素の製造法 | |
JPH03133376A (ja) | ザルコシンオキシダーゼの製造法 | |
JPS5852632B2 (ja) | 新規なグリセロ−ルキナ−ゼおよびその製造法 | |
JPS62155085A (ja) | L−フコ−ス・デヒドロゲナ−ゼの製造法 | |
JPS6167486A (ja) | 新規クレアチンアミジノハイドロラ−ゼ | |
JPH0141307B2 (ja) | ||
JPS6363382A (ja) | キトサナ−ゼの製造法 | |
JPS632592B2 (ja) | ||
JPH0224517B2 (ja) | ||
JPH0253484A (ja) | D−ラクテートデヒドロゲナーゼおよびその製法 | |
JPS6352875A (ja) | ピルビン酸オキシダ−ゼ |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20070927 Year of fee payment: 12 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20080927 Year of fee payment: 13 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |