JPS5972059A - 抗原検定法及び検定用具 - Google Patents

抗原検定法及び検定用具

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JPS5972059A
JPS5972059A JP58134505A JP13450583A JPS5972059A JP S5972059 A JPS5972059 A JP S5972059A JP 58134505 A JP58134505 A JP 58134505A JP 13450583 A JP13450583 A JP 13450583A JP S5972059 A JPS5972059 A JP S5972059A
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JP
Japan
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enzyme
antibody
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JP58134505A
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アリス・ドイツチ
ハ−ベエイ・ブランドウエイン
ヘルベルト・プラツト
デイアンネエ・エム・ハンタ−
アンドリユ−・ドユビツキイ
ス−ザン・エム・ドユラム
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MEKUSU RESEARCH ASOSHIETSU
Original Assignee
MEKUSU RESEARCH ASOSHIETSU
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、成る特定物質の含有量を定量するための新規
な生物学的物質検定法、及び該検定を実施するための要
素及び該要素の製造法に関するものである。
血液又は尿中の成る特定の薬剤、例えば、ジゴキシンの
含有量を測定するための方法は、既に種々提案されてい
る。例えば、クロマトグラフィ及び、又は化学反応によ
る複雑な化学的分離法を用いて、活性物質を分離し、次
いで計量法、放射性同位元素による標識免疫検定法、又
は他の方法によって該活性物質を定量する方法がある。
しかし、これらの方法は満足すべき結果を与えるけれど
も、非常に時間と費用がかかり、その上非常に熟練した
操作が必要である。
従って、本発明の目的は、生物学的物質の検定技術、及
び該検定を比較的短時間に簡単に信頼性よ〈実施するた
めの要素を提供することである。
上記目的及び他の目的、更には多くの利点が、本発明に
よって実現される。本発明に係る検定要素は、次の方法
により製造される。即ち、（ａ）、検定されるべき抗原
に対して特異的な抗体に酵素を結合すること、 （ｂ）、抗原−蛋白質結合体を固体マトリックス（固体
状母体）上に付着又は被覆せしめること、により製造さ
れる。
該検定を行うためには、次の（ｃ）から（罰までのこと
がなされる。
（Ｃ１，ｉａ＋の抗体−酵素結合体を含む溶液の既知量
に定量されるべき抗原の未知量を含む試料の特定量を添
加すること、 （ｄｌ、　Ｃｂ）の被覆固体マトリックスをｆｅ）の溶
液に接触させ、非結合抗体とマトリックス結合抗原との
結合を行わせること、 （ｅ）、該溶液から該固体マトリックスを除去し、洗浄
すること、 （ｆ）、該酵素の作用を受けて該酵素と酵素−基質との
間に反応を起こす酵素−基質の既知量を含む溶液に該固
体マトリックスを浸漬し、検出し得る生成物を得、次い
で該酵素−基質溶液から該固体マトリックスを分離する
こと、及び （ｇ＋、更に、（ｆ）において形成された生成物を定量
し、該固体マトリックス及び、又は該溶液を予め設定さ
れた標準と比較して、（Ｃ１で添加された試料に存在す
る抗原の量を表示すること。
段階（ｅ）において、未知試料の抗原は抗体−酵素結合
体の載物と結合する。段階（ｄ）において、段階（ｅ）
の溶解している抗原に結合していない残りの抗体−酵素
結合体の載物はここで固体マトリックス抗原に結合し、
一つの平衡に達する。かくして、未知試料中の抗原の量
が多ければ多い程、固体−マトリックス抗原に結合し得
る抗体−酵素結合体の量は少なくなる。即ち、未知試料
中の抗原の量は固体−マトリックス上の酵素の量を決定
するであろう。
かくして、段階（ｅ）において、次の物からなる検定要
素が得られる。
Ｔａ）一つの固体マトリックス、 Ｔｏ）該固体マトリックス上に担持された多数の蛋白質
分子、 （Ｃ１該蛋白質分子のそれぞれに結合した多数の抗原分
子、 （ｄ）該抗原分子の載物にのみ結合した多数の抗体分子
、 （ｅｌ該抗体分子のそれぞれに結合した多数の酵素分子
。
この要素は次いで該酵素基質に酵素的な作用を起こさせ
るために用いられる。ここで、作用を受ける基質の量及
びその結果得られる生成物の量は結合した酵素の量の関
数であり、その結合酵素量は又固体マトリックス上の結
合抗体の量の関数であり、更に又固体マトリックス上の
結合抗体の量は未知試料の抗原の量の関数である。
望ましい酵素は、酵素−基質上に成る測定可能な変化を
生ぜしめ得る酵素、例えばウンベリフェロンのような螢
光物質のガラクトピラノシド残基に作用するベーター・
ガラクトシダーゼ酵素のような酵素である。従ってベー
ター・ガラクトシダーゼ酵素はウンベリフェリルβ−Ｄ
−ガラクトシド０ の既知量と接触せしめられる時、ウンベリフェロンは固
体マトリックス上のベーター・ガラクトシダーゼ酵素の
量に応じた量で、即ち、未知試料中に存在した抗原の量
に応じた量で遊離される。次いで、生成されたウンベリ
フェロンの量の指数である溶液の螢光が測定され、その
螢光量が、段階（Ｃ）の抗原の既知量を用いた検量実験
において生成された螢光と比較される。この比較は未知
試料中の抗原含有量の読み取りを与える。
或いは又、浸漬棒即ち固体マトリックス上の螢光が測定
される。螢光の他に、透過光の波長の差異、例えば光学
密度、色、光透過度等の差異が、適当な基質、酵素等を
用いて測定され得る。
これらの段階を更に詳細に添付図面を示して記述する。
第１図は、段階（Ｃ）の初めにおける系の模式的説明図
である。
第２図は、段階ｆｄｌの終わりにおける系の模式的説明
図である。
第３図は、段階（ｆ）の模式的説明図である。
１ 第４図は、段階（川を実施するために用いる曲線である
。
図において、１は抗原、２は抗体−酵素結合体、３は抗
原−蛋白質結合体、４は基質、５は生成螢光物質、６は
基質副生物、７は固体マトリックスを示す。
検定されるべき抗原としては、ジゴキシン、チオフェリ
ン、又はフェニトインのような薬剤、又はホルモン、又
は細胞中に存在する分子、寄生生物、ビールス、或いは
その他の微生物のような他の生物学的活性物質が挙げら
れる。この抗原は何かの物質と結合し、その結合した物
質は又段階ｆｂｌで固体マトリックスに結合される。適
当な高価でない固体マトリックスは、簡単なプラスチッ
ク例えばポリスチレンの浸漬棒である。これには特別な
処理なしに蛋白質が付着する。或いは又、化学処理が抗
原と蛋白質の結合を助長するために用いられる。ＩＩ、
、酢酸セルロース、プラスチックス等の他の物質も代用
できる。
抗原を固体マトリックスに固定するのに役立つ物質は勿
論固定すべき抗原と固体マトリックスに依存するであろ
うが、蛋白質は操作、コスト、入手し易さの点から特に
有用である。アルブ、ミン及び特にウシ血清アルブミン
（ＢＳＡ）はポリスチレンに容易に付着するので極めて
適している。
＋ａ）における酵素への抗体の結合は、抗体と酵素活性
が健全に保持されている間に化学結合を生成する架橋剤
、例えば、グルタルアルデヒド及び他の二官能性及び多
官能性化合物を用いて慣用の方法で実施され得る。
段階（Ｃ）で採用される抗体は、勿論段階（ｂ）で採用
される抗原、即ち、検定されるべき抗原に依存する。何
故なら抗体は抗原と結合しなければならないからである
。最良の結果を得るためには、その抗原は、骨髄腫細胞
と融合されたマウスの牌臓綱胞から良く知られた方法で
製造された単一クローナル抗体であることが望ましい。
これについては後で十分詳しく説明する。単一クローナ
ル抗体の使用は最も再現性の良い結果を与える。
段階（ｄ＋における結合は、室温又はそれより少し３ ２ 高い温度で数分以内に、例えば３７℃で約１０分以内に
完結されるのが望ましい。第１図は未知試料からの抗原
と抗体−酵素結合体との間の相互作用を示す。第２図は
、段階（Ｃ）において結合しながった抗体−酵素結合体
の載物が固体マトリックス抗原と結合し、二つの抗原源
の間に一つの平衡が達成された状態を示す。
（ｆｌにおける酵素−基質の本質は、勿論（ａｌにおけ
る酵素に依存する。酵素は抗体と結合可能でなければな
らないし、又酵素基質に早くて容易に計量される変化を
生ぜしめ得なければならない。アルカリン・フォスファ
ターゼ、β−ガラクトシダーゼ、パーオキシダーゼ及び
エステラーゼは全く満足すべきものであることが分かっ
た。例えば、ウンベリフェロンのような螢光化合物のガ
ラクトピラノシド残基を持つ酵素−基質が、β−ガラク
トシダーゼと共に用いられ得る。従って、この酵素−基
質の培養は、ウンベリフェロン（第３図における生成物
）をその溶液中に開放し、その開放は又その溶液に螢光
を付与する。この螢光は螢光計４ で測定でき１．抗原（第４図）の既知量を含む試料で予
め検量しておくことにより、未知試料の抗原の量が直接
指示され得る。
本発明の有利な点は、第４図の曲線が殆ど直線だと云う
ことである。これは未知試料の濃度が広い範囲にわたっ
ても、その全濃度範囲で非常に信頼性の高いデータが得
られることを意味する。
その操作は、次の（ｉ）〜（ｉｉｉ　）からなる用具（
キット）によって容易に実施できる。
（ｉ）既に抗原を担持した浸漬棒、（ｉｉ　）酵素に結
合された抗体の溶液、（ｉｉｉ　）段階＋ｄｌの後浸漬
棒を漬けるべき洗浄液を含む試験管の一群、及び酵素−
基質の予め測定された量を含む試験管。
検量のためには、抗原の特定量を含む含有量の分かった
一群の試料が供給され、用いられる特定の螢光針のため
の螢光曲線が描かれればよい。
本発明は次の実施例により、非常に詳細に記述される。
実施例 ［ａｌ　　免疫法： 各Ｂａ１ｂ／ｃマウスが、フロイントの完全免疫促進剤
（コンプリート・アジュバント）において５０１のトリ
ス−ＨＣｌ＠衝液ｐＨ７，６中でジゴキシン−ウシ血清
アルブミン（ＢＳＡ　）結合体（Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈ
から得られた）の１０μｇで免疫性を付与された。１力
月後各マウスは、燐酸塩緩衝液中の１０μｇのジゴキシ
ン−ＢＳＡを注射された。４日後牌臓が融合のために除
去された。
（ｂｌ　　細胞融合及び融合細胞腫（ハイブリドーマ）
の産生： コーラ−及びミルシュタイン（１９７５）の技術が単一
クローナル抗体を得るために用いられた。肺臓細胞が、
３７％ポリエチレングリコール（分子量１０００）を用
いて、ケント（１９８０）によって記述されティるよう
に、１．５　ＸＩＯ骨ａｌｌ！細胞（ｍｙｅｌｏｍｅｒ
　ｃｅｌｌｓ）と融合された。融合後洗浄された細胞は
、ヒポキサチン、アミノプテリン、およびデミジン（リ
トルフィールド１９６４）を含む完全媒地に懸濁され、
１０の９６−ウェルプレートの全ウェルに分配された。
ハイブリドーマ細胞を持つウェルは５ ジゴキシンに対して特異的な抗体の産生のためにスクリ
ーンされた。陽性のウェルは次いで完全培地で０．５％
アガロース中でクローン化された。１０日後クローンが
単離され、ミクロウェル中で更に成長させるために液体
培地に移された。得られた単一クローナルの集団は、５
×１０　のハイブリドーマ細胞の腹膜を通して差し込ま
れた注射の２週間前に０．５ｍｌのサメ肝油を与えられ
たマウスに注射された。
この単一クローナル抗体は、アメリカン・タイプ・カル
チャ・コレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ　ＴｙｐｅＣｕ
ｌｔｕｒｅ　　Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ　）に１９８３年
７月１５日付でＨＢ８３１９と同定され供託された。
（Ｃ１間接結合検定： 成長細胞を持つウェルからの上澄液は、ジゴキシン及び
対照としてのＢＳＡに結合する抗体の存在のためにスク
リーンされた。ｐＨ９，６の重炭酸塩緩衝液５抛台中の
ジゴキシン−ＢＳＡ　５００ｎｇが、イムロン２プレー
ト（ディナテエクから購入）の各ウェルに添加された。
緩衝液のみが対照ウェルに添加さ７ ６ れた。４℃で一晩培養した後、そのプレートが０゜０５
％ＢＳＡ　／ＰＢＳで洗浄され、次いで、室温で３０分
間１％ＢＳＡ　／ＰＢＳで培養された。プレートは洗浄
され、上澄液５０マイクロリツトルが各ウェルに添加さ
れ、プレートは１時間３７℃じ培養された。洗浄後、山
羊−アナウサギ結合体（ミクロバイオロジカル・アソシ
ェーツから購入）の１：１００希釈液６０マイクロリツ
トルが各ウェルに添加され、プレートは室温で１時間培
養された。洗浄後、ｐｌ＋４．２の０．１Ｍクエン酸塩
緩衝液に２，２゛−アジノージ−（３−エチルベンツチ
アゾリン・スルフオニツク・アシッド）と０．０３％Ｈ
Ｏを含む、基質１００マイクロリツトルが各ウェルに添
加された。各ウェルの含有量は４２０ｎｍで分光光度法
で測定された。
ｌｄ）　　抗体−酵素結合体： 抗体を含む腹水がｐＨ８，１の０．１４Ｍ燐酸カリ緩衝
液に希釈されて精製され、蛋白質Ａ−セファロース４Ｂ
（ファルマシア）カラムに注がれ、同じ緩衝液で洗浄さ
れ、ｐＨ３，２の０．１Ｍクエン酸塩緩衝液で溶出され
た。抗体はＰＢＳに対して透析された。
８ カールソン等の方法（１９７Ｂ）が抗体を酵素β−ガラ
クトシダーゼ（ボイリンジャーマアンハエムから購入）
に結合するために用いられた。ＰＯ２１５００マイクロ
リツトルに２ｍｇの精製抗体を含む溶液が、１６マイク
ロリソトルの４ｍＭ　Ｎ−サクシニミジル３−（２−ピ
リジルジチオ）プロピオネート　（ＳＰＤＰ）と室温で
３０分間エタノール中で混合された。この溶液は直ちに
脱塩カラムに注がれた。この修飾抗体は室温で一晩５ｍ
ｇのβ−ガラクトシダーゼと混合された。
（ｅｌ 混合物は次いで抗体−酵素結合体の残留溶液から遊離の
ピリジン−２−チオンを除去するために燐酸塩緩衝液に
対して透析された。この溶液には、付加的蛋白質担体と
して生血清アルブミンが、二価カチオン源としての塩化
マグネシウムが、保存剤としてのアジ化ナトリウムが添
加され、溶液は５％牛血清アルブミン、０．０１％アジ
化ナトリウム、及び１ミリモルＭｇＣｌの最終’ｔ　／
ｖｏｌ　ａ度に凋整された。
ポリスチレン浸漬棒は、ｐｉ　９．８の５０ｍＭ重炭酸
ナトリウム溶液中の牛血清アルブミン（イミュノテクか
ら購入）に結合されたジゴキシン１０μｇ／ｍｌを含む
溶液に浸漬された。浸漬棒と溶液は４℃で１６時間培養
され、次いで浸漬棒は、１％の牛血清アルブミンを含む
ブロッキング燐酸塩緩衝液中に置かれ、１５分間放置さ
れた。
（沿 燐酸塩緩衝液中ｌｎｇ／ｍｌのジゴキシンを含む溶液１
００マイクロリツトルを（ｄｌで得られた溶液５００マ
イクロリツトルに添加し、３７°Ｃで培養した。次いで
浸漬棒が（「）の溶液から除去され、各々燐酸塩で緩衝
された１％のウシ血清アルブミンと０．０１％のアジ化
ナトリウムを含む４個の塩溶液に次々に浸漬されて洗浄
された。
（ｈｌ 次いで、浸漬棒は、メチルウンベリフェリル−β−Ｄ−
ガラクトシド１００マイクロモル、燐酸塩で緩衝された
１％ウシ血清アルブミン、及び塩化マ９ グネシウム１ミリモルの溶液１ｍｌの中に浸漬された。
該溶液と浸漬棒は３７℃で５分間培養された。
浸漬棒は除かれて捨てられ、キュベツト（測定容器）中
に残った溶液は６５０４０Ｓ型パーキン−ニルマー螢光
社中に置かれ、４８の読みが与えられた。
（１） （酌及び（ｈｌの操作が、ジゴキシン溶液を次々に２ｎ
ｇ／ｍ！、３ｎｇ／ｍ１等Ｌｏｎｇ／ｍｌまで変えた以
外は同様にして、繰り替えされた、第４図に示すような
抗原濃度に対する螢光計の読みのプロットが得られた。
（」） （ｇ）及び（ｈ）の操作が、ジゴキシンの未知量を含む
１００マイクロリツトルの血清標本を用いて繰り返えさ
れた。この試料は実際に４０の螢光計読みを与え、２ｎ
ｇ　／ｍｌのジゴキシン含有量を示した。これは同試料
の放射線免疫試験法による分析結果と完全に一致した。
次の抗原が、適切な特異性抗体を用いる本質的に同じ操
作によって、検定された。得られた結果１ ０ は放射線免疫試験法による結果と一致した。
プロゲステロン エストロゲン（エストリオール、β−エストラジオール
、及びエストロン） チロキシン シランチン（フェニトイン） ティオフィリン ジギトキシン 同様に検定可能なものに次のものがある。
Ｔ−３（）リョードチロニン） 犬糸状虫（心臓に寄生） 犬糸状虫抗体 バイラ（ｖｉｒａ） 単純ヘルペスウィルス ペプチドおよびポリペプチド 蔗糖残基（サンカライド） グリコプロティン プロティン ステロイド 核酸例えばＲＮＡ、ＤＮＡ ２ 変性アミノ酸 グリコリピド 分析を行うために必要な物質はキットに結合され得るの
で、操作する人はどのような薬品も用いる必要がない。
例えば、キットは６個のシールされたプラスチックの皿
又は試験管、及び洗浄液（実施例ｇ）中に浸し、プラス
チックにシールされた１本の浸漬棒からなり得る。そし
て、浸漬棒は実施例すにおけるように、蛋白質と抗原を
既に担持している。
皿１は実施例ａにおける如＜５００マイクロリツトルの
抗体−酵素結合体を含む。−万里２．３．４及び５はそ
れぞれ洗浄液１ｍｌを含む。皿６は１ｍｌのウンベリフ
ェリル−β−Ｄガラクトシド基質溶液を含む。
操作者は皿１に未知試料１００マイクロリツトルを加え
、３７°Ｃで１０分間培養し、皿１に浸漬棒を加え、そ
して皿を更に３７℃で５分間培養する。浸漬棒を除去し
、次いで皿２．３．４．５．６と次々に浸漬し、そして
、浸漬棒の入っている皿６は３７℃で５分間培養される
。浸漬棒は捨てられ、皿６は螢光計に置かれ、数字が読
まれる。螢光計は検量可能であるから、未知試料中のジ
ゴキシン（又は他の抗原）濃度を直接示すことができる
。
６個の皿全部を並べて単一モジュールとして螢光計を準
備することさえできる。
これまでの説明及び実施例は、本発明を単に説明するた
めのものに過ぎず、本発明を固定するものでない。本発
明の要旨と範囲内の他の具体例は当業者には理解できる
であろう。
【図面の簡単な説明】
第１図は、段階ｔｅｌの初期における、抗体−酵素結合
体を含む溶液に抗原を含む試料が添加された状態（抗体
−酵素の載物が抗原の載物に結合している）を示す模式
図である。 第２図は、段階＋ｄ＋における、溶液中の抗原に結合し
ている抗体−酵素結合体及び固体７トリツクス上の抗原
を示す模式図である。 第３図は、段階（ｆｌにおける、抗体と結合し、かつ固
体マトリックスに固着した酵素が基質を破壊３ して溶液中に螢光物質を産生している状態を示す模式図
である。 第４図はジゴキシン標準曲線（ジゴキシン濃度と螢光強
度との関係を示す曲線）である。 図において、 １・・・抗原 ２・・・抗体−酵素結合体 ３・・・抗原−蛋白質結合体 ４・・・基質 ５・・・生成螢光物質 ６・・・基質副生物 ７・・・固体マトリックス 代理人　弁理士　　星　野　　透 ５ ４ 第１頁の続き　　　　” ０発　明　者　ヘルベルト・プラット アメリカ合衆国１１０２１ニユーヨ ーク州グレート・ネック・ウニ ンズレイ・ドライブ３９ ０発　明　者　ディアンネエ・エム・ハンターアメリカ
合衆国１０８０５ニユーヨ ーク州ニユー・ロチニレ・リー ・コート９ ０発　明　者　アンドリュー・ドユビツキイアメリカ合
衆国１１７０１ニューヨ ーク州アミテイビイレエ・エリ オツド・コート６ ＠発明者　　スーザン・エム・ドユラムアメリカ合衆国
１１５９０ニューヨ ーク州ウエストブユリイ・ニュ ートン・ストリート４６５ 手続補正書（自発） 昭和５８年Ｂ月１８日 特許庁長官　若　杉　和　夫　殿 １、事件の表示 昭和５８年特許願第１３４５０５号 ２、発明の名称 抗原検定法及び検定用具 ３、補正をする者 事件との関係　特許出願人 アメリカ合衆国　１０６０４ニユーヨーク州、ホワイト
・プレーンズ、コーポレーション・パーク・ドライブ２
、レオン・ライマー気付メクス・リサーチ・アソシェツ 代表者 ４、代理人 東京都新宿区四谷３丁目７番地かつ新ビル５Ｂ６、補正
により増加する発明の数　　なし７、補正の対象 明細書の「発明の詳細な説明」の欄 ８、？ｉｌｉ正の内容（別紙のとおり）補正の内容 明細書の記載を次のとおり補正する。 （１）第１６頁１５行目ｒ１．５　ＸＩＯＪをｒｌ、５
　ＸＩＯＪと訂正する。 （２）第１７頁６行目ｒ５　Ｘ］、ＯＪをｒ５　ＸＩＯ
’　Ｊと訂正する。 （３）第１８頁１２行目ｒ　ＨＯＪを ｒ　ＨａＯ２Ｊと訂正する。 （４）第１９頁１９行目ｒＭｇｃ］Ｊを「ＭｇＣｌ２」
と訂正する。 代理人　弁理士　星　野　　透 ３６３−

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １１１　　（ａ）一つの固体マトリックス（ｂｌ該マト
    リックスに担持された多数の蛋白質分子 （Ｃ１該蛋白質分子のそれぞれに結合した多数の抗原分
    子、 （ｄｌ該抗原分子の一部のみに結合した多数の抗体分子 （Ｑ）該抗体分子のそれぞれに結合した多数の酵素、 からなる抗原検定要素。 （２）　　抗体が単一クローナル抗体である特許請求の
    範囲第１項記載の要素。 ＜３）抗原がジゴキシン及びジギトキシンの少なくとも
    一つである特許請求の範囲第１項記載の要素。 （４）抗原がプロゲステロンである特許請求の範囲第１
    項記載の要素。 （５）抗原がチロキシンである特許請求の範囲第１項記
    載の要素。 （６）抗原が少なくとも一つのエストロゲンからなる特
    許請求の範囲第１項記載の要素。 （７）抗原がシランチンである特許請求の範囲第１項記
    載の要素。 （８）　　抗原がテイオフィリンである特許請求の範囲
    第１項記載の要素。 （９）抗原がペプチドである特許請求の範囲第１項記載
    の要素。 Ｑｌ　　抗原がサツカライドである特許請求の範囲第１
    項記載の要素。 （１１）抗原がグリコプロティンである特許請求の範囲
    第１項記載の要素。 （１２）抗原がプロティンである特許請求の範囲第１項
    記載の要素。 （１３）抗原がステロイドである特許請求の範囲第１項
    記載の要素。 （１４）抗原がグリコリピドである特許請求の範囲第１
    項記載の要素。 （１５）抗原が核酸である特許請求の範囲第１項記載の
    要素。 （１６）固体マＩ・リソクスがプラスチック又は他の抗
    原固定用物質である特許請求の範囲第１項記載の要素。 （１７）固体マトリックスがポリスチレンである特許請
    求の範囲第１６項記載の要素。 （１８）蛋白質がアルブミンである特許請求の範囲第１
    項記載の要素。 （１９）蛋白質がウシ血清アルブミンである特許請求の
    範囲第１８項記載の要素。 （２０）酵素がβ−ガラクトシダーゼである特許請求の
    範囲第１項記載の要素。 （２１）酵素がアルカリフォスファターゼである特許請
    求の範囲第１項記載の要素。 （２２）　酵素がパーオキシダーゼである特許請求の範
    囲第１項記載の要素。 （２３）酵素がエステラーゼである特許請求の範囲第１
    項記載の要素。 （２４）　（ａ）既知量の抗原を担持している固体マト
    リックス、 （ｂｌ該抗原に対して特異的な抗体の既知量を含む溶液
    、但し該抗体は酵素に結合しているものである、 Ｔｅｌ少なくとも一つの洗浄液、及び （ｄｌ該酵素による作用を受け、その性質に測定可能な
    変化を生じ得る基質の既知量を含む溶液、 からなる生物学的試料の抗原含有量の検定用具。 （２５）　（ｄｌの酵素−基質が、酵素による作用を受
    けた時透過光の波長に差異を生ずるものである特許請求
    の範囲第２４項記載の用具。 （２６）　（ｄｌの酵素−基質が、酵素の作用を受けて
    螢光に差異を生ずるものである特許請求の範囲第２４項
    記載の用具。 （２７＞　抗原がジゴキシンであり、抗体が単一クロー
    ナル抗体である特許請求の範囲第２５項記載の用具。 （２Ｂ）　ｉａｌ固体マトリックス上に抗原−蛋白質結
    合体を被覆すること、及び （ｂ）抗原に特異的な抗体分子に酵素分子を独立的に結
    合すること、 （ｃ）　（ｂｌの結合体に抗原溶液と被覆固体マトリッ
    クスを接触させて抗体−酵素結合体に抗原を結合せしめ
    、マトリックス上に担持された抗原と溶液中の抗原との
    間の平衡分配に達せしめること、但し該固体マトリック
    ス上の結合された抗原−抗体−酵素の量は抗原溶液中の
    抗原の量の指数である、 からなる特許請求の範囲第１項記載の要素の製造方法。 （２９）　＋ａ）、固体マトリックス上に抗原−蛋白質
    結合体を被覆すること、 （ｂ）、抗原に特異的な抗体に酵素を独立的に結合する
    こと、 （Ｃ１，（ｂｌの抗体−酵素結合体を含む溶液の既知量
    に、測定されるべき未知量の抗原を含む試料の特定量を
    添加すること、 （ｄ）、　（ａ）の被覆された固体マトリックスに（Ｃ
    ）の溶液を接触させ、該抗体と抗原の間に結合を生せし
    めるために培養すること、但し、抗原の酸物は該試料か
    らの物であり、酸物は該固体マトリックス上の物である
    、 （ｅ）、固体マトリックスを該溶液から除去し洗浄する
    こと、 （ｆ）、酵素による作用を受ける酵素−基質の既知量を
    含む溶液に、固体マトリックスを浸漬して該酵素と酵素
    −基質との間の反応を行わせ、次いで酵素−基質溶液か
    ら該固体マトリックスを分離すること、及び、 （屯次いで、該固体マトリックス又は酵素−基質溶液を
    予め確立された標準を用いて測定して、Ｔｅｌで添加さ
    れた試料中に存在する抗原の量を表示せしめること、 からなる試料溶液中の抗原濃度の測定方法。 （３０）実施例（ａ）及び（ｂ）の方法によって製造さ
    れたジゴキシン・単一クローナル抗体。
JP58134505A 1982-07-26 1983-07-25 抗原検定法及び検定用具 Pending JPS5972059A (ja)

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