JPS61130870A - 血漿、血清又は血液中の遊離チロキシンを定量測定する方法 - Google Patents
血漿、血清又は血液中の遊離チロキシンを定量測定する方法Info
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- JPS61130870A JPS61130870A JP60258830A JP25883085A JPS61130870A JP S61130870 A JPS61130870 A JP S61130870A JP 60258830 A JP60258830 A JP 60258830A JP 25883085 A JP25883085 A JP 25883085A JP S61130870 A JPS61130870 A JP S61130870A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明は血漿、血清又は血液中の遊離チロキシンを免疫
学的に定量測定する方法に関する。
学的に定量測定する方法に関する。
従来の技術
チロキシン（Ｔ４）は、現在の知識によれば、約８０％
がＴＢＧ （チロキシン結合グロブリン）に、約１５％
がＴＢＰＡＫかつ約５ｃｌｂが７ ／ｌ／ｌ／フミン合
されている。結合定数としては、ＴＢＧ Ｋ関Ｌ−Ｃは
約２Ｘ１０”ｌ／−２／’が、ＴＢＰＡに関しては約１
０６〜ｌＯ８が、かつアルブミンに関しては約１０５〜
１０’が挙げられる。このＴ４の非常に僅かな分が遊離
して（・て、即ち、蛋白質に結合していない形で存在し
、遊離チロキシン（ＦＴ４）と称される。ＦＴ４は明ら
かに総−Ｔ４−量に対して約０．Ｑ１〜０゜０３％の量
で存在する。１００ｎモル／ｌのＴ４−正常範囲の際は
、約１ｏｐｙ−／ｍｔもしくは１５ｐモル／ｌの濃度が
正常範囲内に相当する。屡屡、ＦＴ４ は蛋白質結合し
たＴ４とは反対に細胞膜壁を通過することができるので
実際に生理学的に有効である。ＦＴ４は、血液中で、第
１にＦＴ４−濃度の調節のための緩衝剤としての役割を
する蛋白質結合Ｔ４と平衡している。
がＴＢＧ （チロキシン結合グロブリン）に、約１５％
がＴＢＰＡＫかつ約５ｃｌｂが７ ／ｌ／ｌ／フミン合
されている。結合定数としては、ＴＢＧ Ｋ関Ｌ−Ｃは
約２Ｘ１０”ｌ／−２／’が、ＴＢＰＡに関しては約１
０６〜ｌＯ８が、かつアルブミンに関しては約１０５〜
１０’が挙げられる。このＴ４の非常に僅かな分が遊離
して（・て、即ち、蛋白質に結合していない形で存在し
、遊離チロキシン（ＦＴ４）と称される。ＦＴ４は明ら
かに総−Ｔ４−量に対して約０．Ｑ１〜０゜０３％の量
で存在する。１００ｎモル／ｌのＴ４−正常範囲の際は
、約１ｏｐｙ−／ｍｔもしくは１５ｐモル／ｌの濃度が
正常範囲内に相当する。屡屡、ＦＴ４ は蛋白質結合し
たＴ４とは反対に細胞膜壁を通過することができるので
実際に生理学的に有効である。ＦＴ４は、血液中で、第
１にＦＴ４−濃度の調節のための緩衝剤としての役割を
する蛋白質結合Ｔ４と平衡している。
従ってＦＴ４の濃度は、チロキシン結合性蛋白質の濃度
又は飽和の変化には無関係に機能的甲状腺状態に反映し
、その結果、臨床上重要である。
又は飽和の変化には無関係に機能的甲状腺状態に反映し
、その結果、臨床上重要である。
ＦＴ４の測定のための定評のある関連法は、放射能標識
Ｔ４の増大された血清の平衡透析又は予め放射能標識Ｔ
４を増大しない透析液のラジオイムノアッセイに基づ（
ＣＪ、 Ｃｌ１ｎ、 イムノアッセイ（Ｉｒｒｍｕ
ｎｏａｓｓａｙ ） 第７巻、１９８４年１９２〜２
０５頁参照〕。
Ｔ４の増大された血清の平衡透析又は予め放射能標識Ｔ
４を増大しない透析液のラジオイムノアッセイに基づ（
ＣＪ、 Ｃｌ１ｎ、 イムノアッセイ（Ｉｒｒｍｕ
ｎｏａｓｓａｙ ） 第７巻、１９８４年１９２〜２
０５頁参照〕。
しかしながらこの方法は、非常に多い時間を必要とする
（インキュベーション１２時間、透析１８時間）ので１
日常の測定には、使用できないとみなされる。
（インキュベーション１２時間、透析１８時間）ので１
日常の測定には、使用できないとみなされる。
同様に、抗−Ｔ４−抗体を用いて抽出を実施か又は１／
ＴＢＧ を掛けた総−Ｔ４により、こうして得られる値
を大抵の状況下でＦＴ４の濃度と対比する仮定の下に計
算することは、既に提案されている［Ｊ、Ｃｌ１ｎ、
イムノアッセイ（１ｍｍｕｎｏａｓｓａｙ ）第７巻
１９８４年１９５〜２０５頁〕。もう１つの方法は、抗
−Ｔ４−抗体により結合されるが血清蛋白質によって結
合されないＴ４−類縁トレーサーの使用に基づく〔米国
特許第４３６６１４３号明細書参照〕。
ＴＢＧ を掛けた総−Ｔ４により、こうして得られる値
を大抵の状況下でＦＴ４の濃度と対比する仮定の下に計
算することは、既に提案されている［Ｊ、Ｃｌ１ｎ、
イムノアッセイ（１ｍｍｕｎｏａｓｓａｙ ）第７巻
１９８４年１９５〜２０５頁〕。もう１つの方法は、抗
−Ｔ４−抗体により結合されるが血清蛋白質によって結
合されないＴ４−類縁トレーサーの使用に基づく〔米国
特許第４３６６１４３号明細書参照〕。
しかしながら、この方法の正当性及び証拠能力は疑がわ
しい〔クリニ、ケミストリイ（ＣＩｉｎ。
しい〔クリニ、ケミストリイ（ＣＩｉｎ。
Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ） ３０ 、１９８４年４９１〜
４９３頁、 Ｊ、 Ｃｌ１ｎ、 イムノ７ｙセイ
（１ｍｍｕｎ。
４９３頁、 Ｊ、 Ｃｌ１ｎ、 イムノ７ｙセイ
（１ｍｍｕｎ。
ａｓｓａｙ）第７巻１９８４年、１９２〜２０５頁参照
〕。
〕。
発明が解決しようとする問題点
従って、本発明は、高−・精度で簡単に実施しうる、殊
に自動化にも好適な方法を得ることを課題としている。
に自動化にも好適な方法を得ることを課題としている。
問題点を解決する手段
この課題は１本発明により、血漿、血清又は血液中の遊
離チロキシン（ＦＴ４）を免疫学的方法で定量測定する
方法により解決され、これは、試料を、試料中の総Ｔ４
のモル世に対して１０分の１〜２０００分の１の標識抗
−７４−抗体と共に最高１０分間インキュベートし、次
いで直ちに過剰の固定されたＴ４と一緒にし、改めてイ
ンキュベートし、相を分け、この相の１つで標識を測定
することよりなる。
離チロキシン（ＦＴ４）を免疫学的方法で定量測定する
方法により解決され、これは、試料を、試料中の総Ｔ４
のモル世に対して１０分の１〜２０００分の１の標識抗
−７４−抗体と共に最高１０分間インキュベートし、次
いで直ちに過剰の固定されたＴ４と一緒にし、改めてイ
ンキュベートし、相を分け、この相の１つで標識を測定
することよりなる。
標識抗−Ｔ４−抗体が著ろしく少ないことと過剰の固定
化Ｔ４との接触までの非常に短か（・インキュベート時
間との組合せにより、意外にも、極めて少量のＦＴ４が
非常に正確に測定することができる。
化Ｔ４との接触までの非常に短か（・インキュベート時
間との組合せにより、意外にも、極めて少量のＦＴ４が
非常に正確に測定することができる。
試料と著るしく過小量で存在する標識抗−Ｔ４−抗体と
のインキュベーション時間は、できるだけ短かく保持す
べきであり、従って１〜５分だけ実施するのが有利であ
る。更に短か（・インキュベーション時間でも本発明方
法は同様に可能であり、本発明方法のために１０〜３０
秒の範囲のインキュベーション時間も使用可能であるが
、取扱い上容易に達成できな（・０試料中の総Ｔ４のモ
ル情に対して過小量の標識抗−Ｔ４−抗体は、特に総Ｔ
４に対するＦＴ４の百分率量に相当する。１ｏ分の１〜
２０００分の１特に５０分の１〜２０００分の１が好適
であることが立証され゛た。しかしながら、この標識抗
−Ｔ４−抗体はＦＴ４に対して過小又は過剰でも使用で
きる。過剰の場合、第１インキュベーションに対して少
ない時間範囲で操作し、過小の場合は多い時間限度を利
用することもできる。
のインキュベーション時間は、できるだけ短かく保持す
べきであり、従って１〜５分だけ実施するのが有利であ
る。更に短か（・インキュベーション時間でも本発明方
法は同様に可能であり、本発明方法のために１０〜３０
秒の範囲のインキュベーション時間も使用可能であるが
、取扱い上容易に達成できな（・０試料中の総Ｔ４のモ
ル情に対して過小量の標識抗−Ｔ４−抗体は、特に総Ｔ
４に対するＦＴ４の百分率量に相当する。１ｏ分の１〜
２０００分の１特に５０分の１〜２０００分の１が好適
であることが立証され゛た。しかしながら、この標識抗
−Ｔ４−抗体はＦＴ４に対して過小又は過剰でも使用で
きる。過剰の場合、第１インキュベーションに対して少
ない時間範囲で操作し、過小の場合は多い時間限度を利
用することもできる。
過剰の固定されたＴ４との第２インキュベーションは、
上限の時間制限を下まわらないが、一般に、１分を下ま
わってはならない。１〜１０分が一般に良好であり、著
るしく長℃・インキュベーション時間を使用できるが、
利点はない。
上限の時間制限を下まわらないが、一般に、１分を下ま
わってはならない。１〜１０分が一般に良好であり、著
るしく長℃・インキュベーション時間を使用できるが、
利点はない。
４〜６分のインキュベーションが実際に非常に良好な結
果を生じた。このインキュベーション時間は、この方法
を自動分析装置で実施するためにも好適である。
果を生じた。このインキュベーション時間は、この方法
を自動分析装置で実施するためにも好適である。
抗体として、その親和性が試料中に存在する結合Ｔ４の
錯体形成定数と同じ又はそれより小さいものを使用する
のが有利である。特に、１０１０１１モル又はそれより
小さい親和性定数を有する抗−Ｔ４−抗体を使用するの
が有利である。
錯体形成定数と同じ又はそれより小さいものを使用する
のが有利である。特に、１０１０１１モル又はそれより
小さい親和性定数を有する抗−Ｔ４−抗体を使用するの
が有利である。
抗−Ｔ４−抗体は、免疫試験で公知の方法で標識付けさ
れていてよい。好適な標識付けは、例えば良好に測定可
能な酵素例えばペルオキーンダーゼ、β−ガラクトンダ
ーゼ又は類似物との共有結合、光学的に測定可能なりガ
ント例えば螢光性、燐光性又は類似の物質で又は放射能
標識付けにより行なうことができる。この方法は当業者
にとっては公知であり、これに関してはここで説述する
必要はない。酵素標識付けが有利である。
れていてよい。好適な標識付けは、例えば良好に測定可
能な酵素例えばペルオキーンダーゼ、β−ガラクトンダ
ーゼ又は類似物との共有結合、光学的に測定可能なりガ
ント例えば螢光性、燐光性又は類似の物質で又は放射能
標識付けにより行なうことができる。この方法は当業者
にとっては公知であり、これに関してはここで説述する
必要はない。酵素標識付けが有利である。
相
固與で存在する固定されたＴ４は、前記のように、過剰
に存在す＝きである。標識抗−７４−。
に存在す＝きである。標識抗−７４−。
抗体の使用モル量に対して約１０〜５０００倍量の過剰
特に１００〜１． ＯＯ０倍過剰が有利である。より著
るしく多量も使用できるが、これは結果を改良せず、経
費を高めるだけである。
特に１００〜１． ＯＯ０倍過剰が有利である。より著
るしく多量も使用できるが、これは結果を改良せず、経
費を高めるだけである。
これから約５倍までの過剰も同様に可能であるが、この
場合は、第２のインキュベーションの時間を高めること
が推奨される。
場合は、第２のインキュベーションの時間を高めること
が推奨される。
■ の固定は、例えば、慣用の免疫学的方法で実施でき
、そのうち、反応性マトリックスへの共有結合、２官能
性架橋形成体を介してのカップリング、表面吸着及び網
状化剤例えばグルタルアルデヒドを用いる表面網状化及
び免疫学的沈殿が挙げられる。
、そのうち、反応性マトリックスへの共有結合、２官能
性架橋形成体を介してのカップリング、表面吸着及び網
状化剤例えばグルタルアルデヒドを用いる表面網状化及
び免疫学的沈殿が挙げられる。
担体としては、Ｔ４の充分な結合を可能とし、他方、反
応に障害性の副作用を及ぼさないすべての不活性固体担
体を使用することができる。
応に障害性の副作用を及ぼさないすべての不活性固体担
体を使用することができる。
いずれにせよ、担体の形及び材料はあまり重要ではない
。平面状の担体例えばフリース、フオームンート及び類
似物特に紙が有利である。
。平面状の担体例えばフリース、フオームンート及び類
似物特に紙が有利である。
本発明方法の第１工程のインキュイージョン時間は、試
料と標識抗−Ｔ４−抗体とを一緒にし、この際に得られ
る混合物と固定されたＴ４とを一緒にする間の時間に相
当する。第２のインキュベーションは第１のインキュベ
ーションが終ったら開始し、相分離と共に終了する。所
定ノ短かいインキュベーション時間の保持のだめ１テ、
当業者にとって慣用の方法を使用することができ、例え
ば試料と抗体溶液との混合、インキュベーション、混合
物を固定Ｔ４を有するカラムに装入するか又は、壁結合
性Ｔ４を有する試験管内に移す。分離及び移行は遠心に
より行なうのが有利であり、このためには、特に欧州特
許（Ｅｌ−Ａ）第ｌ／３５１３号明細書中に記載の方法
及びそこに記載の装置が好適である。
料と標識抗−Ｔ４−抗体とを一緒にし、この際に得られ
る混合物と固定されたＴ４とを一緒にする間の時間に相
当する。第２のインキュベーションは第１のインキュベ
ーションが終ったら開始し、相分離と共に終了する。所
定ノ短かいインキュベーション時間の保持のだめ１テ、
当業者にとって慣用の方法を使用することができ、例え
ば試料と抗体溶液との混合、インキュベーション、混合
物を固定Ｔ４を有するカラムに装入するか又は、壁結合
性Ｔ４を有する試験管内に移す。分離及び移行は遠心に
より行なうのが有利であり、このためには、特に欧州特
許（Ｅｌ−Ａ）第ｌ／３５１３号明細書中に記載の方法
及びそこに記載の装置が好適である。
本発明によれば、ＦＴ４の測定を簡単な方法で、短時間
に、高い精度で実施することができ、これにより、日常
的かつ殊に自動分析装置で実施可能であり、ＦＴ４の診
断上の重要性を実際に完全に利用可能にする方法が得ら
れる。
に、高い精度で実施することができ、これにより、日常
的かつ殊に自動分析装置で実施可能であり、ＦＴ４の診
断上の重要性を実際に完全に利用可能にする方法が得ら
れる。
実施例
次の実施例につき本発明を更に説明する。
例１
この方法の実施のために、欧州特許（ＥＵ−Ａ）第ｌ／
３５２３号明細書に記載の方法及び第１ａ図第１ｂ図に
記載の自動゛遠心分離装置用の挿入要素（Ｅｉｎｓａｔ
ｚｅｌｅｍｅｎｔ ）を用いた。コノ挿入要素は、それ
ぞれ１個のフリース（Ｖｌｉｅｓ）を有し、順次に遠心
力の影響下に液体により通過される７個の相互に連結さ
れた室を有する。
３５２３号明細書に記載の方法及び第１ａ図第１ｂ図に
記載の自動゛遠心分離装置用の挿入要素（Ｅｉｎｓａｔ
ｚｅｌｅｍｅｎｔ ）を用いた。コノ挿入要素は、それ
ぞれ１個のフリース（Ｖｌｉｅｓ）を有し、順次に遠心
力の影響下に液体により通過される７個の相互に連結さ
れた室を有する。
次のフリース及びフリースへの含浸溶液を使用した：
フリース１：濾紙
含浸溶液： 湿潤剤（ツイーン２０） ３％０フリ
ース２：濾紙 含浸溶液ニリン酸すｌ−ＩＪウム緩衝液（ｐＨ７，２）
ＬｏｏｍモルＥＤＴＡ
５ｍモル牛血清 １チ 湿潤剤（ツイーン２０） ０．７５％０フ
リース３＝ 使用紙： 濾紙 使用含浸液： 羊の抗−Ｔ４−抗体 （基質としての０−ニトロフェニル− ガラクトシドを用いて測定した活性 １００ｍＬＩ／ｍのβ−ガラクトシダーゼ″ で標
識） 牛血清アルブミン １％アス・ｅラギン
酸マグネシウム ４ｒｒＬモルヘベスー緩衝液
（ｐ）′ｌ／．２ ） ５０ｍモルフリー
ス４： ＢｒＣＮで活性化されＴ４と反応した濾紙フリース５： 紙： 濾紙 含浸溶液：クロルフェノールレッド−ガラクトシド（Ｃ
ＰＲＧ、西ドイツ特許第 ３３４５７４８号により製造） ５ｉＭ 挿入要素の各室に次のように装入した：室 ■ ： フ
リース１ １枚 室 ■ ： フリース２ １枚 室 ■ ： フリース３ １枚 ）室
■ ： フリース４ ２枚 室 Ｖ ： ７リース５ １枚 試料溶液として使用した血清を１：１５で０゜９ ％
ＮａＣｘ溶液で稀釈した。こうして得た溶液６０μｇを
挿入要素の試料装入室内にピペット導入し、次（・で次
の遠心プログラムを実施した。
ース２：濾紙 含浸溶液ニリン酸すｌ−ＩＪウム緩衝液（ｐＨ７，２）
ＬｏｏｍモルＥＤＴＡ
５ｍモル牛血清 １チ 湿潤剤（ツイーン２０） ０．７５％０フ
リース３＝ 使用紙： 濾紙 使用含浸液： 羊の抗−Ｔ４−抗体 （基質としての０−ニトロフェニル− ガラクトシドを用いて測定した活性 １００ｍＬＩ／ｍのβ−ガラクトシダーゼ″ で標
識） 牛血清アルブミン １％アス・ｅラギン
酸マグネシウム ４ｒｒＬモルヘベスー緩衝液
（ｐ）′ｌ／．２ ） ５０ｍモルフリー
ス４： ＢｒＣＮで活性化されＴ４と反応した濾紙フリース５： 紙： 濾紙 含浸溶液：クロルフェノールレッド−ガラクトシド（Ｃ
ＰＲＧ、西ドイツ特許第 ３３４５７４８号により製造） ５ｉＭ 挿入要素の各室に次のように装入した：室 ■ ： フ
リース１ １枚 室 ■ ： フリース２ １枚 室 ■ ： フリース３ １枚 ）室
■ ： フリース４ ２枚 室 Ｖ ： ７リース５ １枚 試料溶液として使用した血清を１：１５で０゜９ ％
ＮａＣｘ溶液で稀釈した。こうして得た溶液６０μｇを
挿入要素の試料装入室内にピペット導入し、次（・で次
の遠心プログラムを実施した。
２５秒 ２５ Ｏｒ、ｐ、ｍ、：界面活性剤、緩衝液及
び共有結合物の分離； 第１インキユイージヨンの 開始 ２０秒 ２００ Ｏｒ、ｐ、ｍ。
び共有結合物の分離； 第１インキユイージヨンの 開始 ２０秒 ２００ Ｏｒ、ｐ、ｍ。
３００秒 ６００ｒ、ｐ、ｍ、試料及び抗−Ｔ４−ＡＫ
−共有結合物のインキュベ ーション ３００秒 ｏ ｒ、ｐ、ｍ、 （担体固定されたＴ
４とのインキュベーション） １５秒 ２０００ｒ、ｐ、ｍ 第２のインキュベーシ
ョンの終了 １５秒 Ｏｒ、ｐ、ｍ。
−共有結合物のインキュベ ーション ３００秒 ｏ ｒ、ｐ、ｍ、 （担体固定されたＴ
４とのインキュベーション） １５秒 ２０００ｒ、ｐ、ｍ 第２のインキュベーシ
ョンの終了 １５秒 Ｏｒ、ｐ、ｍ。
５秒 １００ｒ、ｐ、ｍ、 （９体をヤニ４ツトに移送
） ５０秒 ７２０ ｒ、ｌ）、ｍ、 ５７８ｎｍで測定前
記の遠心プログラムで、まずフリース１から液体移送を
容易にするために湿潤剤を分離させるっ引続き、緩衝液
及び共有結合物フリースその中でＦＴ４が抗−７４−Ａ
Ｋ−酵素共へ物と結合する第１の弁室内での３０Ｑ秒の
インキ二４−ジョンの後に、共有結合物の未反応分を。
） ５０秒 ７２０ ｒ、ｌ）、ｍ、 ５７８ｎｍで測定前
記の遠心プログラムで、まずフリース１から液体移送を
容易にするために湿潤剤を分離させるっ引続き、緩衝液
及び共有結合物フリースその中でＦＴ４が抗−７４−Ａ
Ｋ−酵素共へ物と結合する第１の弁室内での３０Ｑ秒の
インキ二４−ジョンの後に、共有結合物の未反応分を。
次の工程で、３００００秒間定Ｔ４に結合させる。その
上に基質（ＣＰＲＧ）が結合し、この場合に分離される
フリースの遠心の後に、液体はキュベツト中に達し、こ
こで５０秒間の吸光増加を追跡する。評価は較正曲線で
行なうつ例２ 試験原理： マイクロ滴定プレート又はプラスチック管にＴ４−、ｔ
ｒリハプテン（ＲＳＡへのＴ４の結合、西ドイツ特許第
２６３１６５１号により製造）を塗布する。試料を第１
の反応で不活性容器中で、抗体−酵素共有結合物と共に
１〜５分間インキュベートし、引続きこの溶液をマイク
ロ滴定プレートもしくはプラスチック管内にピペット導
入する。５分後に、溶液を除去し、固相又は除去された
上澄みの酵素活性を測定する。
上に基質（ＣＰＲＧ）が結合し、この場合に分離される
フリースの遠心の後に、液体はキュベツト中に達し、こ
こで５０秒間の吸光増加を追跡する。評価は較正曲線で
行なうつ例２ 試験原理： マイクロ滴定プレート又はプラスチック管にＴ４−、ｔ
ｒリハプテン（ＲＳＡへのＴ４の結合、西ドイツ特許第
２６３１６５１号により製造）を塗布する。試料を第１
の反応で不活性容器中で、抗体−酵素共有結合物と共に
１〜５分間インキュベートし、引続きこの溶液をマイク
ロ滴定プレートもしくはプラスチック管内にピペット導
入する。５分後に、溶液を除去し、固相又は除去された
上澄みの酵素活性を測定する。
塗布緩衝液
ＮａＨＣＯ３（ＰＨ９゜５）０．２モル＋牛血清アルブ
ミ ン ０．０１ ９ｂ 塗布緩衝液２００μｇ十Ｔ４−ポリハプテン１００μｍ
ｔでの塗布。
ミ ン ０．０１ ９ｂ 塗布緩衝液２００μｇ十Ｔ４−ポリハプテン１００μｍ
ｔでの塗布。
室温で１０分間のインキュベーションの後に吸引し、１
０分間、燐酸ナトリウム（ｐＨ７，２）５０ｍモル、Ｎ
ａＣｌ １００ｍモル、ＲＳＡ ｌチで後塗布し、再
び吸引濾過する。
０分間、燐酸ナトリウム（ｐＨ７，２）５０ｍモル、Ｎ
ａＣｌ １００ｍモル、ＲＳＡ ｌチで後塗布し、再
び吸引濾過する。
試料２０μノに緩衝液〔燐酸ナトリウム（ｐＨ７，２）
５０ｍモ／ｌ／、Ｎａ（Ｊ １００ ｍモ＃、Ｒ５Ａ１
％〕２００μｌ及び緩衝液８０μ！＋共有結合物１０ｒ
ｒＬＵを加え、室温で５分間インキュ４−トする。引続
き、マイクロ滴定プレートもしくはプラスチック管内に
ピペット導入し、室温での５分間のインキュベーション
の後Ｋ、２００μｊが吸収されるから、これを緩衝液２
００μｇで洗浄し、再度吸引濾過の後に基質［：ＣＰＲ
０５ｍモル／ｌ、へ被ス（ｐＨ７，２） ５０ ｍモル
〕８００μｌを添加する。λ”” ５７８ｎｍで、５分
間の吸収の増加を追跡する。この増加は、測定信号であ
り、濃度測定は、較正曲線上で行なう。
５０ｍモ／ｌ／、Ｎａ（Ｊ １００ ｍモ＃、Ｒ５Ａ１
％〕２００μｌ及び緩衝液８０μ！＋共有結合物１０ｒ
ｒＬＵを加え、室温で５分間インキュ４−トする。引続
き、マイクロ滴定プレートもしくはプラスチック管内に
ピペット導入し、室温での５分間のインキュベーション
の後Ｋ、２００μｊが吸収されるから、これを緩衝液２
００μｇで洗浄し、再度吸引濾過の後に基質［：ＣＰＲ
０５ｍモル／ｌ、へ被ス（ｐＨ７，２） ５０ ｍモル
〕８００μｌを添加する。λ”” ５７８ｎｍで、５分
間の吸収の増加を追跡する。この増加は、測定信号であ
り、濃度測定は、較正曲線上で行なう。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、免疫学的方法で血漿、血清又は血液中の遊離チロキ
シン（ＦＴ＿４）を定量測定する方法において、試料を
、試料中の総チロキシンのモル量に対して１０分の１〜
２０００分の１の標識抗−Ｔ＿４−抗体と共に最大１０
分間インキュベートし、次いで直ちに過剰の固定された
チロキシンと一緒にし、改めてインキュベートし、相を
分け、この相の１方で標識を測定することを特徴とする
、血漿、血清又は血液中の遊離チロキシンを定量測定す
る方法。 ２、第１インキュベーションを１〜５分間実施する、特
許請求の範囲第１項記載の方法。 ３、１０＾１＾０ｌ／モル又はそれより小さい親和性定
数を有する抗−Ｔ＿４−抗体を使用する、特許請求の範
囲第１項又は第２項記載の方法。 ４、標識抗−Ｔ＿４−抗体の量に対して固定されたチロ
キシン（Ｔ＿４）を１０〜５０００倍の過剰で使用する
、特許請求の範囲第１項から第３項までのいずれか１項
記載の方法。 ５、標識抗−Ｔ＿４−抗体を乾燥形で、固体担持材上に
分離可能に含浸させるか又は凍結乾燥させて使用する、
特許請求の範囲第１項から第４項までのいずれか１項記
載の方法。 ６、標識抗−Ｔ＿４−抗体を担体フリース上に配置し、
試料を、この担体フリース上に施与し、第１インキュベ
ーションの後に遠心分離し、固定されて、分離不能なＴ
＿４を有する第２の担体フリース上に施与する、特許請
求の範囲第５項記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3442817.8 | 1984-11-23 | ||
| DE19843442817 DE3442817A1 (de) | 1984-11-23 | 1984-11-23 | Verfahren und reagenz zur quantitativen bestimmung von freiem thyroxin in plasma, serum oder vollblut |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61130870A true JPS61130870A (ja) | 1986-06-18 |
| JPH0469751B2 JPH0469751B2 (ja) | 1992-11-09 |
Family
ID=6251015
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60258830A Granted JPS61130870A (ja) | 1984-11-23 | 1985-11-20 | 血漿、血清又は血液中の遊離チロキシンを定量測定する方法 |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4843018A (ja) |
| EP (1) | EP0182385B1 (ja) |
| JP (1) | JPS61130870A (ja) |
| KR (1) | KR860004313A (ja) |
| AT (1) | ATE42836T1 (ja) |
| AU (1) | AU561056B2 (ja) |
| CA (1) | CA1259912A (ja) |
| DE (2) | DE3442817A1 (ja) |
| ES (1) | ES8605106A1 (ja) |
| FI (1) | FI854627A (ja) |
| ZA (1) | ZA858955B (ja) |
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- 1985-11-22 AT AT85114863T patent/ATE42836T1/de not_active IP Right Cessation
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