JPS5951997B2 - ストレプトコツカス・サ−モフイルスに属する新規微生物及び該微生物を含有する組成物 - Google Patents
ストレプトコツカス・サ−モフイルスに属する新規微生物及び該微生物を含有する組成物Info
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- JPS5951997B2 JPS5951997B2 JP57195375A JP19537582A JPS5951997B2 JP S5951997 B2 JPS5951997 B2 JP S5951997B2 JP 57195375 A JP57195375 A JP 57195375A JP 19537582 A JP19537582 A JP 19537582A JP S5951997 B2 JPS5951997 B2 JP S5951997B2
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は高い酸素吸収能を有するストレプトコッカス・
サーモフイ/1/ ス(Streptococcust
hermophilus)に属する新規な微生物(以下
「本菌」と記載する)及び本菌の生菌菌体を含有する組
成物に関する。
サーモフイ/1/ ス(Streptococcust
hermophilus)に属する新規な微生物(以下
「本菌」と記載する)及び本菌の生菌菌体を含有する組
成物に関する。
本発明の目的は、高い酸素吸収能を有する点に有用性の
高い新規微生物を提供することにある。
高い新規微生物を提供することにある。
本発明の他の目的は、嫌気性微生物と共存させて好気的
条件下で保存したとき、嫌気性微生物の死滅を防止し得
る新規微生物を提供することにある。
条件下で保存したとき、嫌気性微生物の死滅を防止し得
る新規微生物を提供することにある。
更に本発明の他の目的は、嫌気性微生物の生菌菌体を含
有する培養物を好気的条件下で保存しても、該微生物の
死滅を防止し得る組成物を提供することにある。
有する培養物を好気的条件下で保存しても、該微生物の
死滅を防止し得る組成物を提供することにある。
本明細書における「生残率」は試験開始時の生菌数に対
する保存後の生菌数の百分率であり、「サーモフィルス
菌」はストレプトコッカス・サーモフィルスに属する公
知の微生物の総称であり、′ビフィズス菌」はビフィド
バクテリウム(Bifido bacterium)属
に属する微生物の総称である。
する保存後の生菌数の百分率であり、「サーモフィルス
菌」はストレプトコッカス・サーモフィルスに属する公
知の微生物の総称であり、′ビフィズス菌」はビフィド
バクテリウム(Bifido bacterium)属
に属する微生物の総称である。
サーモフィルス菌は、牛乳及び乳製品に広く存在し、ス
イスチーズ、ブリックチーズなどのスターター及びヨー
グルトのスターターとして利用される有用菌である(中
西武雄著、「牛乳と乳製品の微生物」、第22頁、地球
出版株式会社、昭和42年2月25日発行)。
イスチーズ、ブリックチーズなどのスターター及びヨー
グルトのスターターとして利用される有用菌である(中
西武雄著、「牛乳と乳製品の微生物」、第22頁、地球
出版株式会社、昭和42年2月25日発行)。
サーモフィルス菌の菌学的性質についてはBergey
’ s mannual of deter
minativebacteriology (R,
E、 Buchanan &N、 E、 Gibb
ons共編、第8版、第503〜5o4頁、The W
illiams & Wilkins Compa
ny、Baltimore、 U、S、 Ao、197
4年)に詳細に記載されている。
’ s mannual of deter
minativebacteriology (R,
E、 Buchanan &N、 E、 Gibb
ons共編、第8版、第503〜5o4頁、The W
illiams & Wilkins Compa
ny、Baltimore、 U、S、 Ao、197
4年)に詳細に記載されている。
一方、ストレプトコツカス属に属する微生物の酸素吸収
能についてはスI・レプトコツカス・アガラクテイエ、
ストレプトコッカス・クレモリス、ストレフ0トコツカ
ス・フェカリス、ストレフ0トコツカス・ファシウム、
ストレプトコッカス・ラクチス、ストレプトコッカス・
リケファシエンス及びストレプトコッカス・マスチチジ
スに関する報告か′あるが(Journal of B
acteriology、第56巻、第499頁、19
48年。
能についてはスI・レプトコツカス・アガラクテイエ、
ストレプトコッカス・クレモリス、ストレフ0トコツカ
ス・フェカリス、ストレフ0トコツカス・ファシウム、
ストレプトコッカス・ラクチス、ストレプトコッカス・
リケファシエンス及びストレプトコッカス・マスチチジ
スに関する報告か′あるが(Journal of B
acteriology、第56巻、第499頁、19
48年。
日本農芸化学会誌、第34巻、第272頁、1960年
。
。
I、 C,Gunsalus &R,Y、 5tai
ner共編、The Bacteria 、第425頁
、1Academic Press Inc、 196
1年。
ner共編、The Bacteria 、第425頁
、1Academic Press Inc、 196
1年。
Journal ofBacteriology 、第
94巻、第184頁、1967年。
94巻、第184頁、1967年。
Applied Microbiology、第19巻
、第608頁、1970年。
、第608頁、1970年。
The Au5tralian Journal of
DairyTechnology、第33巻、第14
8頁、1978年。
DairyTechnology、第33巻、第14
8頁、1978年。
薬学雑。誌、第99巻、第354頁、1979年)、サ
ーモフィルス菌に関する報告は、Tin5onら(Th
e Au5tralianJournal of Da
iry Technology、第37巻、第14頁、
1982年)があるのみである。
ーモフィルス菌に関する報告は、Tin5onら(Th
e Au5tralianJournal of Da
iry Technology、第37巻、第14頁、
1982年)があるのみである。
Tin5onらによればサーモフィルス菌の酸素吸収能
は、0.1%酵。
は、0.1%酵。
母エキスを含む脱脂乳を基質とした場合33.5℃にお
いて12mgの乾燥菌体重量当り90分間で7.3マイ
クロモル酸素分子であったと報告している。
いて12mgの乾燥菌体重量当り90分間で7.3マイ
クロモル酸素分子であったと報告している。
この酸素吸収能を乾燥菌体重量1mg、1分間当りに換
算すれば6.フロナノモル(n mole)酸素分子
(以下「ナノモル」と記載する)と極めて少ないのであ
る。
算すれば6.フロナノモル(n mole)酸素分子
(以下「ナノモル」と記載する)と極めて少ないのであ
る。
本発明者らは、サーモフィルス菌と嫌気性微生物との共
存について研究を行なっていたが、酸素吸収能がサーモ
フィルス菌のそれの1.5倍以上も高い新規な微生物の
存在することを発見し、本発明を完成した。
存について研究を行なっていたが、酸素吸収能がサーモ
フィルス菌のそれの1.5倍以上も高い新規な微生物の
存在することを発見し、本発明を完成した。
次に本発明について詳述する。
■) ストレフ0トコツカス・サーモフィルスに属する
菌株の分離 ストレプトコッカス・サーモフィルスに属する菌株は、
下記の小浜らの方法(農業技術研究所報告G(畜産)、
第5号、第41頁、1953年。
菌株の分離 ストレプトコッカス・サーモフィルスに属する菌株は、
下記の小浜らの方法(農業技術研究所報告G(畜産)、
第5号、第41頁、1953年。
)に従って、分離した。
即ち生牛乳を45〜50℃に4〜5日放置した凝固物又
は自然酸敗孔を多数検鏡し、その中で連鎖状球菌の存在
を認めた試料ヲ、115℃15分間滅菌シタ10%(W
/W) 還元脱脂乳培地に5%(V/V)の割合で接種
し、45〜50℃で凝固するまで培養した。
は自然酸敗孔を多数検鏡し、その中で連鎖状球菌の存在
を認めた試料ヲ、115℃15分間滅菌シタ10%(W
/W) 還元脱脂乳培地に5%(V/V)の割合で接種
し、45〜50℃で凝固するまで培養した。
さらに、同様の方法で2〜3回凝固を繰り返した後、そ
の−白金耳量を採取し、M−17寒天培地(Appli
edMicrobiology、第29巻、第6号、第
807頁、1975年。
の−白金耳量を採取し、M−17寒天培地(Appli
edMicrobiology、第29巻、第6号、第
807頁、1975年。
)に塗抹し、40℃で2〜3日培養し、生成した多数の
コロニーから、菌株を分離した。
コロニーから、菌株を分離した。
分離菌株の菌学的性質を、前記Bergey’sman
nual of determinative bac
teriology記載のサーモフィルス菌のそれと比
較し、ストレプトコッカス・サーモフィルスと同定した
40菌株を得た。
nual of determinative bac
teriology記載のサーモフィルス菌のそれと比
較し、ストレプトコッカス・サーモフィルスと同定した
40菌株を得た。
2) サーモフィルス菌の酸素吸収能
生牛乳の凝固物及び旧然酸敗乳から分離した前記のスト
レプトコッカス・サーモフィルスに属する40菌株、標
準菌株として農林水産省畜産試験場の森地氏から分譲を
受けたストレプトコッカス・サーモフィルレス9Y株(
IDF株)(日本畜産学会報、第53巻、第161頁、
1982年)及びAmerican Type Cu1
ture Co11ection (以下ATCCと略
記する)に寄託されているストレプトコッカス・サーモ
フィルス19258株の計42の菌株について、酸素吸
収能を次の方法により測定した。
レプトコッカス・サーモフィルスに属する40菌株、標
準菌株として農林水産省畜産試験場の森地氏から分譲を
受けたストレプトコッカス・サーモフィルレス9Y株(
IDF株)(日本畜産学会報、第53巻、第161頁、
1982年)及びAmerican Type Cu1
ture Co11ection (以下ATCCと略
記する)に寄託されているストレプトコッカス・サーモ
フィルス19258株の計42の菌株について、酸素吸
収能を次の方法により測定した。
まず、これらの菌株を液体培地(日本農芸化学会誌、第
45巻、第423頁、1971年)に5%(V/V)接
種し、37℃で16時間静置培養し、得られた培養液か
ら遠心分離機を用いて菌体を分離し、菌体を滅菌生理食
塩水で無菌的に洗浄し、滅菌生理食塩水1ml中に乾燥
重量にして3〜5mgの菌体量の割合で菌体を分散した
菌液を調製した。
45巻、第423頁、1971年)に5%(V/V)接
種し、37℃で16時間静置培養し、得られた培養液か
ら遠心分離機を用いて菌体を分離し、菌体を滅菌生理食
塩水で無菌的に洗浄し、滅菌生理食塩水1ml中に乾燥
重量にして3〜5mgの菌体量の割合で菌体を分散した
菌液を調製した。
各菌株の酸素吸収能をワールブルグ検圧法(吉川ら編:
化学の領域増刊第13号、「ワールブルグ検圧計」、南
江堂、1954年2月)によって測定した。
化学の領域増刊第13号、「ワールブルグ検圧計」、南
江堂、1954年2月)によって測定した。
その概略は次のとおりである。
2側室容器を使用し、反応容器の主室に、前記菌液1.
Oml 肖16.0の0.1モル滅菌リン酸緩衝液0
.5mlを入れ1、側室2個所に基質溶液として20%
(W/W)滅菌還元脱脂乳0.75m1ずつ計1.5m
lを入れ、副室に二酸化炭素吸収剤として20%(W/
V)水酸化カリウム溶液0.2mlを浸み込ませた濾紙
片を入れた。
Oml 肖16.0の0.1モル滅菌リン酸緩衝液0
.5mlを入れ1、側室2個所に基質溶液として20%
(W/W)滅菌還元脱脂乳0.75m1ずつ計1.5m
lを入れ、副室に二酸化炭素吸収剤として20%(W/
V)水酸化カリウム溶液0.2mlを浸み込ませた濾紙
片を入れた。
なお、基質溶液は、発酵乳中の酸素吸収能を推定するた
め、最終濃度10%(W/W)になるように滅菌還元脱
脂乳を用いた。
め、最終濃度10%(W/W)になるように滅菌還元脱
脂乳を用いた。
測定は37℃で行い、あらかじめ容器を5分間振とうし
て温度平衝に達した後、側室の基質溶液を加え、酸素吸
収量を3分おきに測定し、最大吸収速度を求めて酸素吸
収能とした。
て温度平衝に達した後、側室の基質溶液を加え、酸素吸
収量を3分おきに測定し、最大吸収速度を求めて酸素吸
収能とした。
供試菌株の酸素吸収能の結果を第1表に示す。
第1表から明らかなように、分離した40菌株のうち3
6菌株の酸素吸収能は18.5ナノモル以下であったの
に対し、他の4菌株の酸素吸収能は、30.0〜78.
5ナノモルであった。
6菌株の酸素吸収能は18.5ナノモル以下であったの
に対し、他の4菌株の酸素吸収能は、30.0〜78.
5ナノモルであった。
標準菌株の酸素吸収能は9Y株が19.8ナノモル、A
TCC19258株が10.1ナノモルであった。
TCC19258株が10.1ナノモルであった。
なお、本発明者らは酸素吸収能の値が高かった4菌株に
ついて前記Tin5onらと同一の方法による酸素吸収
能の測定を試みた。
ついて前記Tin5onらと同一の方法による酸素吸収
能の測定を試みた。
しかしながらこれらの4菌株の酸素吸収能が顕著に高い
ので、Tin5onらと同様に90分間の測定は不能で
あった。
ので、Tin5onらと同様に90分間の測定は不能で
あった。
従ってこれらの4菌株の酸素吸収能についてTin5o
nらが報告している7、3マイクロモル酸素分子の値に
到達するまでの所要時間をTin5onと同一の方法に
より測定した。
nらが報告している7、3マイクロモル酸素分子の値に
到達するまでの所要時間をTin5onと同一の方法に
より測定した。
その結果Tin5onらの値が90分であるのに対して
、5TH−01株及び5TH−23株は26分、5TH
−1シ株は28分、そして5TH−50株は21分(参
考までに9Y株は46分、ATCC19258株は14
0分であった)であり、いずれの菌株の酸素吸収能も他
の菌株のそれよりも顕著に高いことを認めた。
、5TH−01株及び5TH−23株は26分、5TH
−1シ株は28分、そして5TH−50株は21分(参
考までに9Y株は46分、ATCC19258株は14
0分であった)であり、いずれの菌株の酸素吸収能も他
の菌株のそれよりも顕著に高いことを認めた。
3) 本菌の菌学的性質
更に本発明者らはこれらの4菌株について菌学的性質を
試験したが、酸素吸収能が高いことを除きその他の菌学
的性質は各菌株とも前記Bergey’s mann
ual of determinativebac
teriologyに記載されたサーモフィルス菌と同
一の次のとおりで゛あった。
試験したが、酸素吸収能が高いことを除きその他の菌学
的性質は各菌株とも前記Bergey’s mann
ual of determinativebac
teriologyに記載されたサーモフィルス菌と同
一の次のとおりで゛あった。
(A)M−17寒天平板培地を用い、37℃で48時間
好気培養したときの菌の形態: ■ 大きさく直径):0.7〜0.9μm■ 形状:球
状または楕円状で連鎖 (B) M−17寒天平板培地を用い、37℃で48
時間好気培養したときのコロニーの形態 ■ 形状:円形 ■ 隆起:凸円状 ■ 周縁:円滑 ■ 大きさく直径):0.5〜1.5mm■ 色調:白
色で不透明 ■ 表面:円滑で光沢あり (C) ガス:産生せず (D) 20℃以下で生育せず (E) 45℃で生育 (F) 運動性なし く0 胞子形成せず ■ ダラム陽性 (I) ベンジジン陰性 (J) カタラーゼ陰性 ■ 65℃30分間の加熱で生存 (92%(W/V)塩化ナトリウム存在下で生育せず No、1%(W/V)メチレンブルー添加孔で生育せず (l ll(9,6で生育せず (0)糖からの酸生成 グルコース、フラクトース、シュークロース及びラクト
ースは陽性。
好気培養したときの菌の形態: ■ 大きさく直径):0.7〜0.9μm■ 形状:球
状または楕円状で連鎖 (B) M−17寒天平板培地を用い、37℃で48
時間好気培養したときのコロニーの形態 ■ 形状:円形 ■ 隆起:凸円状 ■ 周縁:円滑 ■ 大きさく直径):0.5〜1.5mm■ 色調:白
色で不透明 ■ 表面:円滑で光沢あり (C) ガス:産生せず (D) 20℃以下で生育せず (E) 45℃で生育 (F) 運動性なし く0 胞子形成せず ■ ダラム陽性 (I) ベンジジン陰性 (J) カタラーゼ陰性 ■ 65℃30分間の加熱で生存 (92%(W/V)塩化ナトリウム存在下で生育せず No、1%(W/V)メチレンブルー添加孔で生育せず (l ll(9,6で生育せず (0)糖からの酸生成 グルコース、フラクトース、シュークロース及びラクト
ースは陽性。
アラビノース、キシロース、ラフィノース、マルトース
、トレハロース、イヌリン、マニトール、ソルビトール
、サリシン及びグリセロールは陰性。
、トレハロース、イヌリン、マニトール、ソルビトール
、サリシン及びグリセロールは陰性。
枦)アルギニンからアンモニアを生成せずそしてこれら
の4菌株を20代以上継代培養しても高い酸素吸収能を
保持していた。
の4菌株を20代以上継代培養しても高い酸素吸収能を
保持していた。
従って本発明者らは、これらの微生物を新規な微生物と
設定し、5TH−01株、5TH−17株、5TH−2
3株及び5TH−50株をそれぞれストレプトコッカス
・サーモフィルスM−8202、ストレプトコッカス・
サーモフィルスM−8203、ストレプトコッカス・サ
ーモフィルスM−8204及びストレプトコッカス・サ
ーモフィルスM−8205と命名し、昭和57年10月
22日に工業技術院微生物工業技術研究所に寄託し、そ
れぞれ微工研菌寄第6777号、微工研菌寄第6778
号、微工研菌寄第6779号及び微工研菌寄第6780
号なる受託番号を得た。
設定し、5TH−01株、5TH−17株、5TH−2
3株及び5TH−50株をそれぞれストレプトコッカス
・サーモフィルスM−8202、ストレプトコッカス・
サーモフィルスM−8203、ストレプトコッカス・サ
ーモフィルスM−8204及びストレプトコッカス・サ
ーモフィルスM−8205と命名し、昭和57年10月
22日に工業技術院微生物工業技術研究所に寄託し、そ
れぞれ微工研菌寄第6777号、微工研菌寄第6778
号、微工研菌寄第6779号及び微工研菌寄第6780
号なる受託番号を得た。
次に本菌の培養物を含有する組成物について述べる。
前記のように本菌は高い酸素吸収能を有するので、嫌気
性微生物と本菌とを共存させて好気的条件下で保存した
としても、本菌が酸素を吸収するので、嫌気性微生物の
生存に望ましい条件をつくり出すことかで゛きる。
性微生物と本菌とを共存させて好気的条件下で保存した
としても、本菌が酸素を吸収するので、嫌気性微生物の
生存に望ましい条件をつくり出すことかで゛きる。
有用な嫌気性微生物は多数知られているが食品、医薬品
、飼料等に最も広く利用されているのはビフィズス菌で
ある。
、飼料等に最も広く利用されているのはビフィズス菌で
ある。
この菌は、偏性嫌気性菌であり、酸素が存在する状態で
保存した場合極めて死滅し易いことが知られている。
保存した場合極めて死滅し易いことが知られている。
本発明の組成物は、本菌の高い酸素吸収能により嫌気性
微生物の保存中における死滅を顕著に防止し得る。
微生物の保存中における死滅を顕著に防止し得る。
本発明の組成物は、嫌気性微生物の生菌菌体を含有する
培養物と本菌の生菌菌体を含有する培養物との混合物か
らなり、一般的には該混合物1g当り少なくとも1×1
08、望ましくは5×108〜2×109の本菌生菌菌
体を含有している。
培養物と本菌の生菌菌体を含有する培養物との混合物か
らなり、一般的には該混合物1g当り少なくとも1×1
08、望ましくは5×108〜2×109の本菌生菌菌
体を含有している。
、嫌気性微生物の生菌菌体を含有する培養物は、例えば
ビフィズス菌を公知の方法で培養した培養物、この培養
物の公知の方法による濃縮物、この培養物から公知の方
法で分離した菌体、又はこの菌体の懸濁液を包含する。
ビフィズス菌を公知の方法で培養した培養物、この培養
物の公知の方法による濃縮物、この培養物から公知の方
法で分離した菌体、又はこの菌体の懸濁液を包含する。
本菌の生菌菌体を含有する培養物は、本菌を公知の方法
で培養した培養物、この培養物の公知の方法による濃縮
物、この培養物から公知の方法で分離した菌体、又はこ
の菌体の懸濁液を包含する。
で培養した培養物、この培養物の公知の方法による濃縮
物、この培養物から公知の方法で分離した菌体、又はこ
の菌体の懸濁液を包含する。
そして嫌気性微生物の生菌菌体を含有する培養物と本菌
の生菌菌体を含有するそれとを混合し、得られた混合v
!IJ1g当りの本菌の生菌菌体数が嫌気性微生物の死
滅を防ぎつる数になるように調製される。
の生菌菌体を含有するそれとを混合し、得られた混合v
!IJ1g当りの本菌の生菌菌体数が嫌気性微生物の死
滅を防ぎつる数になるように調製される。
本菌を前“記のように培養して得られる培養物中には、
例えば10%(W/W)還元脱脂乳培地によす37℃で
16時間培養したとき通常培養物1g当り2×108の
生菌菌体が含まれ、液体培地(日本農芸化学会誌、第4
5巻、第423頁、1971年。
例えば10%(W/W)還元脱脂乳培地によす37℃で
16時間培養したとき通常培養物1g当り2×108の
生菌菌体が含まれ、液体培地(日本農芸化学会誌、第4
5巻、第423頁、1971年。
)により37℃で16時間培養したとき通常培養物1g
当り1×109の生菌菌体が含まれている。
当り1×109の生菌菌体が含まれている。
従って本菌の培養物の生菌数から、嫌気性微生物の培養
物に添加すべき本菌の培養物の量が決定される。
物に添加すべき本菌の培養物の量が決定される。
このようにして調製された本発明の組成物は、好気的条
件下での保存によっても嫌気性微生物の死滅が少ないの
で、嫌気性微生物の生菌数が重要な意味を有する例えば
ビフィズス菌の生菌菌体を含有する発酵乳、乳酸菌飲料
、整腸用医薬品等として利用できる。
件下での保存によっても嫌気性微生物の死滅が少ないの
で、嫌気性微生物の生菌数が重要な意味を有する例えば
ビフィズス菌の生菌菌体を含有する発酵乳、乳酸菌飲料
、整腸用医薬品等として利用できる。
次に本菌と嫌気性微生物との共存による嫌気性微生物の
死滅防止効果について試験例を示して詳述する。
死滅防止効果について試験例を示して詳述する。
(試験1)
■ 使用菌株
サーモフィルス菌として前記9Y株及び
ATCC19258株、本菌の例として前記M−820
5株(STH−50株)、そして嫌気性微生物の代表例
としてビフィズス菌、即ちビフィドバクテリウム・ロン
ガム(Bifidobacterium longum
)ATCC15708を用いた。
5株(STH−50株)、そして嫌気性微生物の代表例
としてビフィズス菌、即ちビフィドバクテリウム・ロン
ガム(Bifidobacterium longum
)ATCC15708を用いた。
■ スターターの調製
サーモフィルス菌及び本菌のスターターは、115℃で
15分間滅菌した10%(W/W)還元脱脂乳にこれら
の菌の前培養物を3%(V/V)接種し、37℃で16
時間培養して調製された。
15分間滅菌した10%(W/W)還元脱脂乳にこれら
の菌の前培養物を3%(V/V)接種し、37℃で16
時間培養して調製された。
ビフィドバクテリウム・ロンガムのスターターは、11
5℃テ15分間滅菌シタ0.25%(W/W) の酵母
エキスを含む15%(w7w)還元脱脂乳に、前培養物
を10%(V/V)接種し、37℃で5時間培養して調
製された。
5℃テ15分間滅菌シタ0.25%(W/W) の酵母
エキスを含む15%(w7w)還元脱脂乳に、前培養物
を10%(V/V)接種し、37℃で5時間培養して調
製された。
■ 培養物の調製
0.1%(W/W)のカザミノ酸を添加した牛乳を均質
後90℃で10分間殺菌し、前記■で調製したビフィド
バクテリウム・ロンガムのスターターを5%(V/V)
の割合で接種し、37℃で7時間発酵し、直ちに冷却し
、培養物を調製した。
後90℃で10分間殺菌し、前記■で調製したビフィド
バクテリウム・ロンガムのスターターを5%(V/V)
の割合で接種し、37℃で7時間発酵し、直ちに冷却し
、培養物を調製した。
一方、前記■で調製したサーモフィルス菌及び本菌のス
ターターをソイペプトン1%(W/V)、酵母エキス0
.5%(W/V)、乳糖1%(W/V)、コハク酸ナト
リウム2%(W/V)、リン酸1カリウム0.2%(W
/V)及びリン酸2カリウム0.2%(W/V)からな
る液体培地に5%(V/V)の割合でそれぞれ別個に接
種し、37℃で16時間培養し、サーモフィルス菌及び
本菌の培養物を調製した。
ターターをソイペプトン1%(W/V)、酵母エキス0
.5%(W/V)、乳糖1%(W/V)、コハク酸ナト
リウム2%(W/V)、リン酸1カリウム0.2%(W
/V)及びリン酸2カリウム0.2%(W/V)からな
る液体培地に5%(V/V)の割合でそれぞれ別個に接
種し、37℃で16時間培養し、サーモフィルス菌及び
本菌の培養物を調製した。
これらの培養物を常法により遠心分離し、サーモフィル
ス菌及び本菌の菌体をそれぞれ別個に集めた。
ス菌及び本菌の菌体をそれぞれ別個に集めた。
集めた各菌体を滅菌生理食塩水で洗浄し、4 X 10
101O7の濃度で滅菌生理食塩水に懸濁し、各菌体の
懸濁液を調製した。
101O7の濃度で滅菌生理食塩水に懸濁し、各菌体の
懸濁液を調製した。
なおサーモフィルス菌及び本菌の生菌数は■のb)記載
の方法により測定した。
の方法により測定した。
■ 試験方法
前記ビフィドバクテリウム・ロンガムの培養物1g当り
各サーモフィルス菌及び本菌を3×107.1×108
.5×108.2×109の割合でそれぞれ別個に加え
、均一に混合し、試料を調製し、通気性を有する滅菌済
の紙カップに充填し、蓋をした。
各サーモフィルス菌及び本菌を3×107.1×108
.5×108.2×109の割合でそれぞれ別個に加え
、均一に混合し、試料を調製し、通気性を有する滅菌済
の紙カップに充填し、蓋をした。
調製直後の試料及び5℃で7日間好気的(家庭用冷蔵庫
内)に保存した後の試料のビフィドバクテリウム・ロン
ガムの生菌数を次の方法により測定し、ビフィドバクテ
リウム・ロンガムの保存後の生残率を算出して試験した
。
内)に保存した後の試料のビフィドバクテリウム・ロン
ガムの生菌数を次の方法により測定し、ビフィドバクテ
リウム・ロンガムの保存後の生残率を算出して試験した
。
a) ビフィドバクテリウム・ロンガム生菌数の測定
発酵乳又は試料を光間の嫌気性菌用希釈液(臨床検査、
第18巻、第1163頁、1974年。
第18巻、第1163頁、1974年。
)で段階的に希釈した後、ビフィズス菌の選択培地であ
るMGLP寒天培地(前日ら:食品衛生学雑誌、第23
巻、第39頁、1982年。
るMGLP寒天培地(前日ら:食品衛生学雑誌、第23
巻、第39頁、1982年。
)を用いた高層寒天培養法で測定した。
b) サーモフィルス菌及び本菌の生菌数の測定
常法に従い、市販BCP加プレートカウント寒天培地を
用いた混釈平板培養法で測定した。
用いた混釈平板培養法で測定した。
■ 試験結果
ビフィドバクテリウム・ロンガムの生菌数及び生残率を
田店ともに第2表に示す。
田店ともに第2表に示す。
第2表から明らかなように、ビフィズス菌とサーモフィ
ルス菌を共存させることによって、ビフィズス菌の生残
率は向上するが、特に本菌においてその効果は顕著であ
った。
ルス菌を共存させることによって、ビフィズス菌の生残
率は向上するが、特に本菌においてその効果は顕著であ
った。
9Y株及びATCC19258株を用いた場合、ビフィ
ズス菌の生残率は、培養物1g当り1×108の添加で
1.0%以下、2×109の添加で6.3%以下である
のに対して、本菌を用いた場合には、1×108.5×
108及び2×109の添加でそれぞれ7.0%、16
.5%及び34.3%と上記2株の5〜7倍の高い生残
率を示した。
ズス菌の生残率は、培養物1g当り1×108の添加で
1.0%以下、2×109の添加で6.3%以下である
のに対して、本菌を用いた場合には、1×108.5×
108及び2×109の添加でそれぞれ7.0%、16
.5%及び34.3%と上記2株の5〜7倍の高い生残
率を示した。
このように本菌は、1g当り1×108以上の添加、望
ましくは5×108〜2×109の添加でビフィズス菌
の生残性に対して、格段の効果を有することか゛判明し
た。
ましくは5×108〜2×109の添加でビフィズス菌
の生残性に対して、格段の効果を有することか゛判明し
た。
次に本菌と種々の嫌気性微生物との共存における本菌の
効果について記載する。
効果について記載する。
(試験2)
■ 使用菌株 熾※ 本
菌の1例として前記M−8205株(STH−50株)
、そして嫌気性微生物の代表例としてビフィドバクテリ
ウム・ビフィダム ATCC15696、ビフィドバクテリウム・インファ
ンチスATCC15697及びビフィドバクテリウム・
アドレツセンチスATCC15706のビフィズス菌を
用いた。
菌の1例として前記M−8205株(STH−50株)
、そして嫌気性微生物の代表例としてビフィドバクテリ
ウム・ビフィダム ATCC15696、ビフィドバクテリウム・インファ
ンチスATCC15697及びビフィドバクテリウム・
アドレツセンチスATCC15706のビフィズス菌を
用いた。
■ スターターの調製
・前記試験1と同一の方法による。
■ 培養物の調製
前記試験1と同一の方法による。
■ 試験方法
各ビフィズス菌による培養物1g当り本菌を5X10”
の割合で加えたこと以外は、前記試験1と同一の方法に
よる。
の割合で加えたこと以外は、前記試験1と同一の方法に
よる。
■ 試験結果
ビフィズス菌の生菌数及び生残率を…凄ともに第3表に
示す。
示す。
第3表から明らかなように、いずれの゛ビフィズス菌も
本菌を培養物1g当り5×108添加することによって
5℃で7日間保存後において10%以上の生残率を示し
た。
本菌を培養物1g当り5×108添加することによって
5℃で7日間保存後において10%以上の生残率を示し
た。
このように公知の各種ビフィズス菌の生残性に対して、
本菌は、格段の効果を示し、極めて良好なビフィズス菌
の保護作用を有することが判明した。
本菌は、格段の効果を示し、極めて良好なビフィズス菌
の保護作用を有することが判明した。
実施例 1
90kgの脱脂乳に10kgの脱脂粉乳を溶解し、90
℃で30分間殺菌し、冷却し、ストレプトコッカス・サ
ーモフィルスM−8203(STH−17)の前培養物
3kgを接種し、40℃で18時間発酵した。
℃で30分間殺菌し、冷却し、ストレプトコッカス・サ
ーモフィルスM−8203(STH−17)の前培養物
3kgを接種し、40℃で18時間発酵した。
一方、90℃で30分間殺菌した酵母エキス0.2%(
W/W)及び還元脱脂乳12%(W/W)からなる培地
201に、ビフィドバクテリウム・ビフィダム ATCC15696(7)前t=養eyを5% (W/
W) の割合で接種し、37℃で8時間発酵した。
W/W)及び還元脱脂乳12%(W/W)からなる培地
201に、ビフィドバクテリウム・ビフィダム ATCC15696(7)前t=養eyを5% (W/
W) の割合で接種し、37℃で8時間発酵した。
これとは別にペクチン0.8kg、砂糖15kg、脂肪
含量50%(W/W)のクリーム5kg及び香料0.2
kgを59kgの水に溶解し、85℃で10分間殺菌し
、約40℃に冷却したシロップ液80kgに、前記のス
トレプトコッカス・サーモフィルスの発酵乳100kg
及びビフィドバクテリウム・ビフィダムの発酵乳20k
gを混合し、調乳液200kgを調製した。
含量50%(W/W)のクリーム5kg及び香料0.2
kgを59kgの水に溶解し、85℃で10分間殺菌し
、約40℃に冷却したシロップ液80kgに、前記のス
トレプトコッカス・サーモフィルスの発酵乳100kg
及びビフィドバクテリウム・ビフィダムの発酵乳20k
gを混合し、調乳液200kgを調製した。
この調乳液を150kg/cm□の条件で均質し、50
0m1の紙容器に充填し、本菌及びビフイズス菌の生菌
を含有するドリンクヨーグルト約350本を製造した。
0m1の紙容器に充填し、本菌及びビフイズス菌の生菌
を含有するドリンクヨーグルト約350本を製造した。
得られたドリンクヨーグルトはストレプトコッカス・サ
ーモフィルス2,4×108/m1、ビフィドバクテリ
ウム・ビフィダム8.5×107/m1の生菌菌体を含
有し、pH4,9、乳酸濃度0.85%であった。
ーモフィルス2,4×108/m1、ビフィドバクテリ
ウム・ビフィダム8.5×107/m1の生菌菌体を含
有し、pH4,9、乳酸濃度0.85%であった。
このドリンクヨーグルトを5℃で7日間保存した後のビ
フィドバクテリウム・ビフィダムの生菌数は1.3 X
107/mlであり生残率は15.3%であった。
フィドバクテリウム・ビフィダムの生菌数は1.3 X
107/mlであり生残率は15.3%であった。
実施例 2
市販のポリペプトン1%(WOW)、ソイペグ1〜ン1
%(WOW)、酵母エキス0.5%(w、、’w)、乳
糖1%(WOW)、リン酸1カリウム0.2%(W/
W)からなる培地(pH6,8) 2001を90℃で
30分間殺菌し、37℃に冷却レストレプトコツカス・
サーモフィルスM−8205(STH−50)の前培養
物51を接種し、37℃で18時間培養した。
%(WOW)、酵母エキス0.5%(w、、’w)、乳
糖1%(WOW)、リン酸1カリウム0.2%(W/
W)からなる培地(pH6,8) 2001を90℃で
30分間殺菌し、37℃に冷却レストレプトコツカス・
サーモフィルスM−8205(STH−50)の前培養
物51を接種し、37℃で18時間培養した。
培養後直ちに約5℃に冷却し、シャープレス型遠心分離
機(15,000rpm)により菌体を集め培地と同量
の90℃で30分間殺菌した生理食塩水に懸濁し、前記
と同様に遠心分離して、再度集菌した。
機(15,000rpm)により菌体を集め培地と同量
の90℃で30分間殺菌した生理食塩水に懸濁し、前記
と同様に遠心分離して、再度集菌した。
得られた菌体を90℃で30分間殺菌した脱脂粉乳10
%(WOW)、蔗′糖1%(WΔ■及びグルタミン酸ソ
ーダ1%(WOW)からなる溶液101に懸濁し、常法
に従って凍結乾燥し、4.5 X 1010/gの生菌
数を有する粉末的1.2kgを得た。
%(WOW)、蔗′糖1%(WΔ■及びグルタミン酸ソ
ーダ1%(WOW)からなる溶液101に懸濁し、常法
に従って凍結乾燥し、4.5 X 1010/gの生菌
数を有する粉末的1.2kgを得た。
また90℃で30分間殺菌した酵母エキス0.2%(W
OW)及び脱脂粉乳12%(WOW)からなる培地0.
51にビフィドバクテリウム・インファンチスATCC
15697の前培養物を5%(V/V)の割合で接種し
37℃で8時間発酵した。
OW)及び脱脂粉乳12%(WOW)からなる培地0.
51にビフィドバクテリウム・インファンチスATCC
15697の前培養物を5%(V/V)の割合で接種し
37℃で8時間発酵した。
これとは別に、トマトピユーレ7.5kg、砂糖0.2
kg、食塩Log、グルタミン酸ソーダ3g□及び香料
10gを水1.71と混合し、85℃で10分間殺菌し
、冷却し、この混合液に上記ストレプトコッカス・サー
モフィルスの粉末150g及びビフィドバクテリウム・
インファンチスの発酵乳500gを添加し、均一に混合
し、本菌及びビフィズス菌の生菌を含有する乳酸菌飲料
的10kgを調製し、200m1の紙容器40本に充填
した。
kg、食塩Log、グルタミン酸ソーダ3g□及び香料
10gを水1.71と混合し、85℃で10分間殺菌し
、冷却し、この混合液に上記ストレプトコッカス・サー
モフィルスの粉末150g及びビフィドバクテリウム・
インファンチスの発酵乳500gを添加し、均一に混合
し、本菌及びビフィズス菌の生菌を含有する乳酸菌飲料
的10kgを調製し、200m1の紙容器40本に充填
した。
得られた乳酸菌飲料は、ストレプトコッカス・サーモフ
ィルス6、2 X 10”/ml、ビフィドバクテリウ
ム・インファンチス1.3×108/mlの生菌菌体を
含有し、pH4,60であった。
ィルス6、2 X 10”/ml、ビフィドバクテリウ
ム・インファンチス1.3×108/mlの生菌菌体を
含有し、pH4,60であった。
この飲料を5℃で7日間保存した後のビフィドバクテリ
ウム・インファンチスの生菌数は3. I X 107
/mlであり、生残率は23.8%であった。
ウム・インファンチスの生菌数は3. I X 107
/mlであり、生残率は23.8%であった。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1 ワールブルグ検圧法により測定したとき、少なくと
も30ナノモル(n mole)酸素分子/(mg乾
燥菌体重量・分)の酸素吸収能を示すストレプトコッカ
ス・サーモフィルス。 2 ストレプトコッカス・サーモフィルスが下記の菌学
的性質を示すことを特徴とする特許請求の範囲第1項に
記載の微生物。 (A) ワールブルグ検圧法により測定したとき、少
なくとも30ナノモル(n mole)酸素分子/(
mg乾燥菌体重量・分)の酸素吸収能。 (B) M−17寒天平板培地を用い、37℃で48
時間好気培養したときの菌の形態: ■ 大きさく直径):0.7〜0.9μm■ 形状:球
状または楕円状で連鎖 (C)M−17寒天平板培地を用い、37℃で48時間
好気培養したときのコロニーの形態 ■ 形状:円形 ■ 隆起:凸円状 ■ 周縁:円滑 ■ 大きさく直径):0.5〜1.5mm■ 色調:白
色で不透明 ■ 表面:円滑で光沢あり (D) ガス:産生せず (E) 20℃以下で生育せず (F) 45℃で生育 (G) 運動性なし くEl 胞子形成せず (I> ダラム陽性 (J) ベンジジン陰性 K カタラーゼ陰性 (L) 65℃30分間の加熱で生存 M 2%(W/V)塩化ナトリウム存在下で生育せず (N)0.1%(W/V)メチレンブルー添加孔で生育
せず (0) J9.6で生育せず (P) 糖からの酸生成 グルコース、フラクトース、シュークロース及びラクト
ースは陽性。 アラビノース、キシロース、ラフィノース、マルトース
、トレハロース、イヌリン、マニトール、ソルビトール
、サリシン及びグリセロールは陰性。 Q アルギニンからアンモニアを生成せず3 ストレプ
トコッカス・サーモフィルスがストレプトコッカス・サ
ーモフィルスM−8202(微工研菌寄第6777号)
、ストレプトコッカス・サーモフィルスM−8203(
微工研菌寄第6778号)、ストレプトコッカス・サー
モフィルスM−8204(微工研菌寄第6779号)又
はストレプトコッカス・サーモフィルスM−8205(
微工研菌寄第6780号)からなる群より選択された1
種または2種以上の微生物であることを特徴とする特許
請求の範囲第1項又は第2項に記載の微生物。 4 ワールブルグ検圧法で測定したとき、少なくとも3
0ナノモル(n mole)酸素分子/ (mg乾燥
菌体重量・分)の酸素吸収能を示すストレゾ1〜コツカ
ス・サーモフィルスの生菌菌体と嫌気性微生物の生菌菌
体を含有することを特徴とする組成物。 5 ス1へレプトコツカス・サーモフィルスが下記の菌
学的性質を示すことを特徴とする特許請求の範囲第4項
に記載の組成物。 (A) ワールブルグ検圧法により測定したとき、少
なくとも30ナノモル(n mole)酸素分子/(
mg乾燥菌体重量・分)の酸素吸収能。 (B) M−17寒天平板培地を用い、37℃で48
時間好気培養したときの菌の形態: ■ 大きさく直径):0,7〜0.9μm■ 形状:球
状または楕円状で連鎖 (C)M−17寒天平板培地を用い、37℃で48時間
好気培養したときのコロニーの形態 ■ 形状:円形 ■隆起:凸円状 ■周縁:円滑 ■ 大きさく直径):0,5〜1.5mm■ 色調:白
色で不透明 ■ 表面:円滑で光沢あり (D) ガス:産生ぜず (E) 20℃以下で生育せず (F) 45℃で生育 (G) 運動性なし I 胞子形成せず (I) ダラム陽性 (J)ベンジジン陰性 K カタラーゼ陰性 (065℃30分間の加熱で生存 M 2%(W/V)塩化ナトリウム存在下で生育せず (N)0.1%(W/V)メチレンブルー添加乳で生育
せず (0) ll(9,6で生育せず (P) 糖からの酸生成 グルコース、フラクトース、シュークロース及びラクト
ースは陽性。 アラビノース、キシロース、ラフィノース、マルトース
、l−レバロース、イヌリン、マニトール、ソルビトー
ル、サリシン及びグリセロールは陰性。 (Q アルギニンからアンモニアを生成せず6 ストレ
プトコッカス・サーモフィルスがストレプトコッカス・
サーモフィルスM−8202(微工研菌寄第6777号
)、ストレプトコッカス・サーモフィルスM−8203
(微工研菌寄第6778号)、ストレプトコッカス・サ
ーモフィルスM−8204(微工研菌寄第6779号)
及びストレプトコッカス・サーモフィルスM−8205
(微工研菌寄第6780号)からなる群より選ばれる1
種又は2種以上の微生物であることを特徴とする特許請
求の範囲第4項または第5項に記載の組成物。 7 嫌気性微生物がビフィドバクテリウム属に属する微
生物であることを特徴とする特許請求の範囲第4項ない
し第6項のいずれかに記載の組成物。 8 組成物1g当り1×108〜2×109の該ストレ
プトコッカス・サーモフィルスを含有することを特徴と
する特許請求の範囲第4項ないし第7項のいずれかに記
載の組成物。
Priority Applications (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57195375A JPS5951997B2 (ja) | 1982-11-09 | 1982-11-09 | ストレプトコツカス・サ−モフイルスに属する新規微生物及び該微生物を含有する組成物 |
| US06/547,825 US4601985A (en) | 1982-11-09 | 1983-11-02 | Microorganism belonging to streptococcus thermophilus and a composition containing said microorganism |
| DE8383306780T DE3375804D1 (en) | 1982-11-09 | 1983-11-08 | A new microorganism belonging to streptococcus thermophilus and a composition containing said microorganism |
| EP83306780A EP0112020B2 (en) | 1982-11-09 | 1983-11-08 | A new microorganism belonging to streptococcus thermophilus and a composition containing said microorganism |
| FI834115A FI76372C (fi) | 1982-11-09 | 1983-11-09 | Foerfarande foer framstaellning av en komposition innehaollande en ny mikroorganism, som hoer till streptococcus thermophilus. |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57195375A JPS5951997B2 (ja) | 1982-11-09 | 1982-11-09 | ストレプトコツカス・サ−モフイルスに属する新規微生物及び該微生物を含有する組成物 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5985288A JPS5985288A (ja) | 1984-05-17 |
| JPS5951997B2 true JPS5951997B2 (ja) | 1984-12-17 |
Family
ID=16340118
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57195375A Expired JPS5951997B2 (ja) | 1982-11-09 | 1982-11-09 | ストレプトコツカス・サ−モフイルスに属する新規微生物及び該微生物を含有する組成物 |
Country Status (5)
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| JP (1) | JPS5951997B2 (ja) |
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