MX2008010184A

MX2008010184A - Metodo para producir leche fermentada usando novedosa bacteria de acido lactico.

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Publication number: MX2008010184A
Application number: MX2008010184A
Authority: MX
Inventors: Kanetada Shimizu; Kazuhiro Miyaji; Kouichi Ogawa; Yoshiaki Kiso; Takako Ishida
Original assignee: Morinaga Milk Industry Co Ltd
Priority date: 2007-02-13
Filing date: 2007-11-01
Publication date: 2009-03-05
Also published as: DK1989942T3; EP1989942A4; US20090035416A1; WO2008099543A1; EP1989942B1; CN101378662B; CN101378662A; KR101141781B1; MY146385A; JPWO2008099543A1; AU2007333620B2; CA2647756A1; HK1119910A1; KR20080098605A; ES2393375T3; NZ569737A; JP4772131B2; AU2007333620A1; CA2647756C; EP1989942A1

Abstract

La presente invención se refiere a un método para producir leche fermentada, que incluye: realizar fermentación utilizando tanto bacterias que pertenecen al género Bifidobacterium como bacterias que pertenecen al género Lactococcus como bacterias de ácido láctico, en donde las bacterias que pertenecen al género Lactococcus tienen las siguientes propiedades bacteriológicas: (1) capacidad de fermentación que cuaja a un medio de leche descremada reconstituido al 10% (P/P) cuando se cultiva a una temperatura de 25 grados C a 37 grados C por 16 horas; (2) propiedades promotoras de crecimiento de Bifidobacterium longum que llevan a un conteo viable de Bifidobacterium longum de 5 x 108 CFU/g o más, cuando se co-cultivan con Bifidobacterium longum en el medio de leche descremada reconstituido al 10% (P/P), hasta que su pH es 4.4 a 4.6; y (3) propiedades de mejora de supervivencia de Bifidobacterium longum durante almacenamiento, lo que lleva a una taza de supervivencia de Bifidobacterium longum de 30% o más, después de co-cultivo con Bifidobacterium longum en el medio de leche descremada reconstituido de 10% (P/P), hasta que su pH es 4.4 a 4.6, enfriamiento rápido, y almacenamiento por dos semanas a 10 grados C y también se refiere a una leche fermentada preparada por el método de producción.

Description

MÉTODO PARA PRODUCIR LECHE FERMENTADA USANDO NOVEDOSA BACTERIA DE ÁCIDO LÁCTICO CAMPO TÉCNICO La presente invención se refiere a un método para producir leche fermentada usando novedosas bacterias de ácido láctico que pertenecen al género Lactococcus, y a leche fermentada preparada de acuerdo con el método de producción. Se reclama prioridad de la solicitud de patente japonesa No. 2007-032646, presentada en febrero 13, 2007, los contenidos de la cual aquí se incorporan por referencia. TÉCNICA PREVIA Bacterias que pertenecen al género Bifidobacteríum (a continuación abreviado como "Bifidobacterium"), tales como Bifidobacteríum Longum es una de las cepas bacterianas predominantes en microflora intestinal formada en el tracto intestinal humano. Se conoce que Bifidobacterium tienen una actividad reguladora de la función intestinal, una actividad inmunoestimuladora y actividad anti-cáncer. De acuerdo con esto, son crecientes las demandas para productos alimenticios que contengan Bifidobacterium viable tales como leche fermentada con Bifidobacterium o semejantes de acuerdo con un aumento en la conciencia por la salud de los consumidores. Bifidobacteríum exhibe una pobre potencia de proliferación en medio de leche. De acuerdo con esto, diversas sustancias que estimulan el crecimiento en general se formulan en leche fermentada de manera tal que Bifidobacteríum contenida ahí está a un contenido constante tal como 1 x 107 CFU/ml. Sin embargo, las sustancias que estimulan el crecimiento en general son costosas y pueden deteriorar el gusto. Además, la conservación de Bifidobacteríum bajo condiciones acídicas es difícil y tiende a resultar en muerte de Bifidobacteríum. De esta manera, el conteo viable de Bifidobacteríum en productos de leche fermentada disminuye con velocidad acelerada durante la distribución de los productos de leche fermentada. De acuerdo con esto, se espera que una promoción de crecimiento de Bifidobacteríum o una mejora de su supervivencia durante almacenamiento no sólo permitirá preparación de leche fermentada que contiene una gran cantidad de Bifidobacteríum viable, sino también la preparación de leche fermentada que puede mantener una cantidad abundante de Bifidobacteríum viable de inmediatamente después de preparación, hasta ser consumida. Diversos métodos para promover el crecimiento en Bifidobacteríum o mejorar su supervivencia durante almacenamiento por fermentación con Bifidobacteríum y otras bacterias de ácido láctico sin agregar sustancias que estimulen el crecimiento o semejantes quedan descritas. Por ejemplo, (1 ) yogur que contiene Lactococcus lactis subsp. lactis, Lactococcus lactis subsp. cremorís, y Bifidobacteríum, y un método para preparar el yogur se ha descrito (ver por ejemplo, Documento de Patente 1 ), con respecto a un método para promover el crecimiento de Bifidobacteríum para preparar leche fermentada. Por ejemplo, (2) un método para fermentar leche con Bifidobacteríum, incluyendo cultivar Bifidobacteríum breve junto con Lactococcus lactis subsp. lactis, que no forma diacetilo ni acetoína, en un medio que contiene leche como su componente principal se ha descrito (ver por ejemplo, Documento de Patente 2), con respecto a un método para mejorar la supervivencia de Bifidobacteríum durante almacenamiento de leche fermentada.

Documento de Patente 1 : Publicación de Patente Japonesa Número 3,364,491. Documento de Patente 2: Publicación de Patente Japonesa Número 3,068,484. DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN [Problemas a Resolver por la Invención] Aunque el crecimiento de Bifidobacteríum es promovido y el tiempo de fermentación es recortado de acuerdo con el método anterior mencionado (1 ), no hay descripción respecto a la supervivencia de Bifidobacteríum durante almacenamiento en el Documento de Patente 1. En contraste, aunque tanto los efectos estimulantes de crecimiento como los efectos de mejora de supervivencia se reconocen al utilizar una mezcla compuesta de un Bifidobacteríum específico y una bacteria de ácido láctico especifica de acuerdo con el método anteriormente mencionado (2), no hay descripción respecto a Bifidobacteríum diferente a Bifidobacteríum breve tal como Bifidobacteríum longum, que en general se formula en productos alimenticios. La presente invención tiene como su objetivo el proporcionar un método para producir leche fermentada utilizando bacterias de ácido láctico que estimulan el crecimiento de Bifidobacteríum y mejorar su supervivencia durante almacenamiento, y a leche fermentada preparada de acuerdo con el método de producción. [Medios para Resolver los Problemas] Los inventores de la presente invención investigaron intensamente para resolver los problemas anteriormente mencionados y realizar una prueba de fermentación por co-cultivo con Bifidobacteríum longum para encontrar cepas bacterianos de ácido láctico que exhiben excelente fermentabilidad en medio de leche descremada reconstituido al 10% (P/P). Como resultado, los inventores encontraron que cepas de bacterias de ácido láctico que pueden promover el crecimiento de Bifídobacterium longum a un conteo viable de 5x108 CFU/g cuando el pH es 4.4 a 4.6, y mejorar la velocidad de supervivencia de Bifidobacterium longum a 30% o más después del fin de la fermentación, rápido enfriamiento, y dos semanas de almacenamiento a 10°C. Además, los presentes inventores encontraron que leche fermentada que contiene una gran cantidad de Bifídobacterium y que tiene excelente supervivencia durante almacenamiento pueden producirse al usar las bacterias de ácido láctico y de esta manera se ha completado la presente invención. Esto es, la presente invención proporciona un método para producir leche fermentada que incluye: efectuar la fermentación usando, como bacterias de ácido láctico, tanto bacterias que pertenecen al género Bifídobacterium como bacterias que pertenecen al género Lactococcus que tiene las siguientes propiedades bacteriológicas: (1 ) fermentabilidad que cuaja un medio de leche descremada reconstituido al 10% (P/P) cuando se cultiva a una temperatura de 25 at 37°C por 16 horas; (2) Propiedades promotoras de crecimiento de Bifidobacterium longum que llevan a un conteo viable de Bifídobacterium longum de 5x108 CFU/g o más, cuando se co-cultiva con Bifidobacterium longum en el medio de leche descremada reconstituido al 10% (P/P) hasta que su pH es 4.4 o 4.6; y (3) propiedades de mejora de supervivencia en Bifidobacterium longum durante almacenamiento, lo que llevan a una velocidad de sobrevivencia de Bifidobacterium longum de 30% o más, después de co- cultivo con Bifidobacterium longum en el medio de leche descremada reconstituido al 10% (P/P) hasta que su pH es 4.4 o 4.6, enfriamiento rápido, y dos semanas de almacenamiento a 10°C. La presente invención también proporciona un método para producir leche fermentada, caracterizado porque las bacterias que pertenecen al género Lactococcus no tienen habilidad para fermentar xilosa y producir ni diacetilo ni acetoina. La presente invención también proporciona un método para producir leche fermentada, caracterizado porque las bacterias que pertenecen al género Lactococcus, son Lactococcus lactis subsp. lactis. La presente invención también proporciona un método para producir leche fermentada, caracterizado porque las bacterias que pertenecen al género Lactococcus, incluyen al menos una cepa bacteriana seleccionada del grupo que consiste de Lactococcus lactis subsp. lactis MCC852 (FERM BP-10742), Lactococcus lactis subsp. lactis MCC857 (FERM BP-10757), Lactococcus lactis subsp. lactis MCC859 (FERM BP-10744), Lactococcus lactis subsp. lactis MCC865 (FERM BP-10745), y Lactococcus lactis subsp. lactis MCC866 (FERM BP-10746). La presente invención también proporciona un método para producir leche fermentada, caracterizado porque las bacterias que pertenecen al género Bifidobacterium son Bifidobacterium longum. La presente invención también proporciona un método para producir leche fermentada, caracterizado porque una cepa bacteriana de Bifidobacterium longum es Bifidobacterium longum FERM BP-7787. La presente invención también proporciona un método para producir leche fermentada, caracterizado porque ambas Streptococcus thermophilus y Lactobacillus bulgaricus se emplean adicionalmente como las bacterias de ácido láctico. La presente invención también proporciona leche fermentada preparada por cualesquiera de los métodos anteriormente mencionados para producir leche fermentada. [Efectos de la Invención] De conformidad con el método para producir leche fermentada de acuerdo con la presente invención, leche fermentada que contiene una gran cantidad de Bifidobacterium particularmente Bifidobacterium longum puede producirse eficientemente como nunca antes. Además, la leche fermentada de conformidad con la presente invención mantiene un conteo viable suficiente de Bifidobacterium, particularmente Bifidobacterium longum aun durante el curso de distribución, por tanto la leche fermentada exhibe adicionales efectos reguladores de la función intestinal y es útil para el control de la salud. MEJOR MODO PARA LLEVAR A CABO LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a un método para producir leche fermentada, caracterizado porque la leche se fermenta tanto con Bifidobacterium como con bacterias que pertenecen al género Lactococcus que tiene las propiedades anteriormente mencionadas (1 ), (2), y (3). En particular, el método es adecuado para producción de leche fermentada al fermentarla usando Bifidobacterium longum. Ejemplos de Bifidobacterium longum disponibles en la presente invención incluyen Bifidobacterium longum FERM BP-7787, cepa tipo Bifidobacterium longum ATCC 15707, y semejantes. Bifidobacterium longum FERM BP-7787 es particularmente preferible, ya que Bifidobacterium longum FERM BP-7787 exhibe excelente capacidad de fermentación en un medio de leche, excelente resistencia a ácidos durante el curso de distribución, y excelente resistencia a ácidos gástricos. Bifidobacterium longum FERM BP-7787 fue aceptada por el Depósito de Organismos de Patentes Internacionales, Instituto Nacional de Ciencia y Tecnología Avanzadas (International Patent Organism Depositary, National Institute of Advanced Industrial Science and Technology, (Central 6, 1-1 , Higashi I-Chome Tsukuba-shi, Ibaraki-ken, JAPÓN (código postal no.: 305-8566)) en octubre 31 , 2001. Las bacterias que pertenecen al género Lactococcus a emplearse en la presente invención tienen las propiedades (1 ), (2), y (3). La propiedad (1 ) se refiere a la capacidad de fermentación. Si las bacterias de ácido láctico pueden proliferar rápidamente y tener una fuerte capacidad de fermentación, suficiente para cuajar un medio de leche descremada reconstituido al 10% (P/P) cuando se cultiva a una temperatura entre 25 y 37°C por 16 horas, las bacterias de ácido láctico pueden promover efectivamente el crecimiento Bifidobacterium particularmente de Bifidobacterium longum, al tiempo de preparar leche fermentada. Cómo se utiliza aquí, la frase "cuajar un medio de cultivo" se refiere a un fenómeno en el que el pH del medio de cultivo disminuye por debajo de un punto isoeléctrico de su proteína de leche por fermentación ácida y de esta manera la proteína de leche se aglomera y se cuaja el medio de cultivo. El "medio de leche descremada reconstituido al 10% (P/P)" puede prepararse por ejemplo al disolver 10% en masa leche en polvo descremada (fabricado por Morinaga Milk Industry Co., Ltd., por ejemplo) en agua. Aunque el intervalo de temperatura adecuado para fermentación con bacterias que pertenecen al género Lactococcus en general está entre 20 y 30°C, la bacteria que pertenecen al género Lactococcus de conformidad con la presente invención exhibe una fuerte capacidad de fermentación a una temperatura entre 25 y 37°C. En otras palabras, las bacterias que pertenecen al género Lactococcus a usarse en la presente invención exhiben una capacidad de fermentación suficiente dentro de un intervalo de temperatura adecuado para fermentación con Bifidobacterium particularmente con Bifidobacterium longum (30 a 40°C). La propiedad (2) se refiere a propiedades promotoras de crecimiento en Bifidobacterium longum. Un medio de leche tal como medio de leche descremada reconstituido al 10% (P/P) exhibe excelente gusto, sensación en la boca, y apariencia externa, cuando su pH alcanza aproximadamente 4.6, caseína si otros componentes ahí contenidos en general se precipitan y el medio de cultivo se cuaja por completo. De acuerdo con esto, la fermentación en general se detiene por rápido enfriamiento o semejante cuando el pH alcanza aproximadamente 4.6, para preparar los productos de leche fermentada. Por lo tanto, las bacterias de ácido láctico que tiene las propiedades promotoras de crecimiento que pueden llevar el conteo viable de Bifidobacterium longum tienen un alto conteo de 5 x 108 CFU/g o más cuando se co-cultivan con Bifidobacteríum longum en el medio de leche descremada reconstituido al 10% (P/P) hasta que su pH es 4.4 a 4.6 puede aumentar efectivamente el conteo viable de Bifidobacterium, particularmente de Bifídobacterium longum en leche fermentada al tiempo de preparación de la leche fermentada. La propiedad (3) se refiere a las propiedades que mejoran la supervivencia de Bifidobacterium longum durante almacenamiento. El período para conservación de calidad de los productos de leche fermentada en general es de aproximadamente dos semanas cuando se almacena a 10°C o menos. De acuerdo con esto, leche fermentada que mantiene un conteo viable suficiente de Bifidobacterium, particularmente de Bifidobacterium longum, incluso al final del período de tiempo por el cual se asegura la conservación de calidad, puede producirse, siempre que las bacterias de ácido láctico tengan las propiedades que mejoran la supervivencia durante almacenamiento pueden llevar a una velocidad de supervivencia de Bifidobacterium longum que es de 30% o más después de co-cultivo con Bifidobacterium longum en el medio de leche descremada reconstituido al 10% (P/P) hasta que su pH es 4.4 a 4.6, rápido enfriamiento y dos semanas de almacenamiento a 10°C. Las bacterias que pertenecen al género Lactococcus a emplearse de conformidad con la presente invención, pueden prepararse de acuerdo con el siguiente método, por ejemplo. Primero, se aislan cepas bacterianas de diversas muestras y cepas que exhiben excelente capacidad de fermentación en el medio de leche descremada reconstituido al 10% (P/P) más específicamente capacidad de fermentación suficiente para cuajar el medio de leche descremada reconstituido al 10% (P/P) cuando se cultivan a una temperatura de 25 a 37°C por 16 horas, se eligen de las cepas bacterianas aisladas. Después, las cepas bacterianas selectas se co-cultivan con Bifidobacterium longum, y cepas bacterianas que tienen propiedades promotoras de crecimiento de Bifidobacterium longum y sus propiedades de mejora de supervivencia durante almacenamiento definidas como las propiedades anteriormente mencionadas (2) y (3) se eligen. Es además preferible que se elijan cepas bacterianas que no tienen una habilidad para fermentar xilosa y producir ni diacetilo ni acetoína. A continuación, la presente invención se explicará con más detalle. 1 . Aislamiento de cepas bacterianas. A fin de aislar cepas bacterianas que tienen las propiedades anteriormente mencionadas del mundo natural, los presentes inventores recolectaron muestras del mundo natural en Japón, diluyeron las muestras con un amortiguador de dilución anaeróbico ("The World of Enterobacteria" publicado por Soubunsha Co., Ltd., escrito por Tomotari Mitsuoka, Pag 322, 1980: a continuación abreviada como "Reference 1 ti), inocularon las muestras diluidas en cada placa de caldo de hígado Briggs (ver la referencia anteriormente mencionada 1 , Pag 319), y después cultivaron las muestras inoculadas a 30°C bajo condiciones anaeróbicas. Entre las colonias así obtenidas, cepas bacterianas que muestran características morfológicas de bacterias de estreptococos se reconocieron como bacterias Gram-positivas por observación en microscopio de especímenes aplicados, fueron seleccionadas. Las cepas selectas cada una fueron incubadas por rallado y cada placa plana de agar BL y después cultivaron repetidamente bajo condiciones anaeróbicas en la misma forma que se describió anteriormente para obtener cepas bacterianas puramente aisladas. Las cepas bacterianas aisladas se sometieron a una prueba de fermentación en un medio de leche descremada reconstituido al 10% (P/P) como se describió a continuación para obtener 20 cepas bacterianas con capacidad de fermentación definida como la propiedad anteriormente mencionada (1 ). Después, las cepas bacterianas obtenidas se co-cultivaron con Bifidobacteríum longum para obtener 5 cepas bacterianas que tienen tanto las propiedades promotoras de crecimiento que desarrollan el conteo viable de Bifidobacteríum longum a un pH de 4.4 a 4.6 a 5x108 CFU/g o mas y las propiedades que mejoran la capacidad de supervivencia durante almacenamiento que elevan la velocidad de supervivencia de Bifidobacteríum longum a 30% o mas cuando se almacenan a 10°C por dos semanas después de rápido enfriamiento a pH de 4.4 a 4.6. Las 5 cepas bacterianas se denominan como "MCC852", "MCC857", "MCC859", "MCC865", y "MCC866", respectivamente. 2. Propiedades bacteriológicas Las propiedades bacteriológicas de las 5 cepas bacterianas se ilustrarán a continuación. Las pruebas para determinar las propiedades bacteriológicas se realizaron con referencia al Bergey's Manual of Systematic Bacteriology editado por Peter H. A. Sneath, Vol. 2, publicado por Williams and Wilkins Company, 1986). (I) Morfología bacteriana (observada a través de un microscopio óptico después de cultivo anaeróbico en una placa de agarre L a 30°C por 72 horas) Tamaño: 1 to 2 pm (diámetro) Morfología: Bacterias de Estreptococos (II) Tinción Gram: Positiva (III) Leche-Litmo: cuajada (IV) Formación de endoesporas: Negativa (V) Producción de gas de glucosa: Negativa (VI) Movilidad: Negativa (VII) Actividad de Catalasa: Negativa (VIII) Prueba de arginina descarboxilasa: Positiva (IX) Producción de gas a partir de ácidos cítrico: Negativa (X) Susceptibilidad de temperatura (a 60°C por 30 minutos y a 65°C por 35 minutos): Positiva en ambos casos. (XI) Producto de degradación de glucosa: Ácido L-láctico. Cepa Bacteriana MCC MCC MCC MCC MCC ATCC 852 857 859 865 866 19435 XII Temperatura 10°C +S +S + +S +S +S de Creci40°C + + + + + + miento 45°C - - - - - - XIII Resistencia a 2% + + + + + + Sal 3% + + + + + + 4% + + + + + + 6.5% (+)S - - (+)S (+)S - XIV Resistencia a 9.2 + + + + + . + PH 9.6 +s + + + - - XV Resistencia a 0.01% + + + + + + Azul de 0.1% + + + + + + Metileno 0.3% ± +s + +s + - XVI Capacidad de + + + + + + producción de amoníaco a partir de arginina XVII Fer- Arabinosa - - - - - - men- Xilosa - - - - - + ta- Ramnosa - - - - - - ción Ribosa + + +s + + + de Glucosa + + + + + + azúMañosa + + + + + + car Fructosa + + + + + + Galactosa + + + + + + Sacarosa - - - - - - Maltosa + + + + + + Celobiosa + + + + + + Lactosa + + + + + + Trialosa + + + + + + Melibiosa - - - - - - Rafinosa - - - - - - Melezitosa - - - - - - Dextrina + + + + + + Almidón +S + - + + ±s Glicógeno - - - - - - Inulina - - - - - - Manitol (+)S + + - - - Sorbitol - - - - - - Inositol - - - - - - Esculina + + (+)S + + +s Salicina + + +s + + + Amigdalina - - (+)S (+)S - Metil - - - - - - glucósido Gluconato de - ± + - - - sodio +: Positivo. (+): Ligeramente-positivo. ±: Ligeramente-positivo en extremo. -: Negativo s: Reacción lenta Las propiedades bacteriológicas anteriormente mencionadas (I) a (XI) son comunes a todas las 5 cepas bacterianas y la cepa tipo Lactococcus lactis subsp. lactis ATCC 19435. La temperatura de crecimiento (XII) la resistencia a sal (XIII), la resistencia a pH (XIV), la resistencia a azul de metileno (XV), la capacidad de producción de amoniaco a partir de arginina (XVI), y la capacidad de fermentación de azúcar (XVII) de cada cepa se ilustran en la tabla 1. La fermentación de azúcar se examina respecto a 28 tipos de azúcar utilizando un medio para fermentación de azúcar descrito por Mitsuoka (Tomotari Mitsuoka, The bacteriology of lactic acid bacteria", Clinical Examination 18, páginas 1163 a 1172, 1974). Es aparente de los resultados anteriormente mencionados que todas las 5 cepas bacterianas tienen las propiedades bacteriológicas comunes a las cepas bacterianas Lactococcus lactis subsp. lactis. De esta manera, las 5 cepas bacterianas se han reconocido como las cepas bacterianas Lactococcus lactis subsp. lactis. Por otra parte, es aparente de las propiedades bacteriológicas anteriormente mencionadas (XII) a (XVII) que las 5 cepas bacterianas son diferentes de la cepa tipo Lactococcus lactis subsp. lactis ya que las 5 cepas bacterianas no tienen capacidades algunas para fermentar xilosa. Las 5 cepas bacterianas se depositaron por el solicitante en el Depósito de Organismos de Patente Internacional, Instituto Nacional de Ciencia y Tecnología Industrial Avanzada (International Patent Organism Depositary, National Institute of Advanced Industrial Science and Technology) (Central 6, 1-1 , Higashi 1-Chome Tsukuba-shi, Ibaraki-ken, Japón (número de código postal: 305-8566)) como cepas bacterianas novedosas. El número de acceso de lactis subsp. lactis MCC852 es FERM BP-10742, el de Lactococcus lactis subsp. lactis MCC857 es FERM BP- 10757, el de Lactococcus lactis subsp. lactis MCC859 es FERM BP-10744, el de Lactococcus lactis subsp. lactis MCC865 es FERM BP-10745, y el de Lactococcus lactis subsp. lactis MCC866 es FERM BP-I0746. Las Lactococcus lactis subsp. lactis MCC852, 859, 865, y 866 se depositaron en Diciembre 1 , 2006, y la Lactococcus lactis subsp. lactis MCC857 se depositó en enero 10, 2007. 3. Prueba respecto a capacidad de fermentación en medio de leche descremada reconstituido al 10% (P/P). Cada iniciador de cepas bacterianas al 3% (V V) fue inoculado en un medio de leche descremada reconstituido al 10% (P/P) esterilizado a 95°C por 30 min y después cultivado a 25, 30 o 37°C por 16 horas. Después de que el medio de cultivo obtenido se enfrió rápidamente, se observó el estado cuajado, y el pH y conteo viable de las bacterias de ácido láctico contenidas se midieron. El conteo viable se midió utilizando agar para conteo de placas planas BCP comercialmente disponible (fabricado por Eiken Chemical Co., LTD.). Los resultados de medición se ilustran en la Tabla 2. La cepa tipo Lactococcus lactis subsp. Lactis ATCC 19435 descrita en el documento de patente 2 se utilizó como una cepa de control. TABLA 2 Cepa Condiciones de Cultivo Baca 25°C por 16 horas a 30°C por 16 horas teriana Conteo PH Conteo Viable PH Viable (CFU/g) (CFU/g) MCC852 2.0x108 4.53 Cuajado 1.5x109 4.44 MCC857 1.7x109 4.53 Cuajado 1.5x109 4.41 MCC859 1.4x109 4.54 Cuajado 8.5x108 4.44 MCC865 2.0x109 4.52 Cuajado 1.5x109 4.42 MCC866 2.0x109 4.52 Cuajado 1.3x109 4.4 ATCC 5.2x108 5.93 Sin cuajar 4.4x108 5.65 19435 Tabla 2 (continúa) Cuando se utilizó cada cepa bacteriana de Lactococcus lactis subsp. lactis MCC852, 857, 859, 865, y 866, esto es, la bacteria del género Lactococcus a emplearse en la presente invención, el pH del medio de cultivo se disminuyó a entre 4.4 a 4.6 bajo todas las condiciones de temperatura, y el medio de cultivo se cuajó. Además, el conteo viable de las bacterias de ácido láctico contenidas fue aproximadamente 1 x 109 CFU/g, y de esta manera se reconocieron condiciones de capacidad de fermentación y proliferación favorable.

Por otra parte, cuando la cepa tipo Lactococcus lactis subsp. lactis ATCC 19435 se utilizó, el pH del medio de cultivo fue 5.5 o más y el medio de cultivo no se cuajó bajo cualesquiera condiciones de temperatura. Además, el conteo viable de las bacterias de ácido láctico fue significativamente menor a 30°C o superior, particularmente que el de bacterias del género Lactococcus de conformidad con la presente invención. 4. Prueba de co-cultivo con Bifidobacterium longum. (1 ) Prueba de co-cultivo con Bifidobacterium longum FERM BP-7787. La cepa de tipo Lactococcus lactis subsp. Lactis ATCC 19435 se utiliza como una cepa de control. Primero, cada cultivo de las 5 cepas bacterianas (Lactococcus lactis subsp. lactis MCC852, 857, 859, 865, y 866) y Bifidobacterium longum FERM BP-7787 se prepara de acuerdo con el método descrito en el siguiente Ejemplo 1. Además, 1 ,000 mL de un medio de leche descremada reconstituido al 10% (P/P) que contiene extracto de levadura al 0.2% (P/P) (fabricado por DiFco) se esterilizó a 90°C por 30 minutos. Después, 30 mL de un cultivo de la cepa tipo Lactococcus lactis subsp. Lactis ATCC 19435 se inocula en el medio de leche descremada reconstituido y cultiva a 30°C por 16 horas para preparar un cultivo de la cepa tipo Lactococcus lactis subsp. Lactis ATCC 19435. 1% (V/V) de cada cultivo de las cepas de Lactococcus lactis subsp. Lactis preparado como con anterioridad se inoculó con 1 % (V/V) del cultivo de Bifidobacterium longum FERM BP-7787 en un medio de leche descremada reconstituido a 10% (P/P) esterilizado a 90°C por 10 minutos, y la mezcla se cultivó a 37°C por 16 horas para obtener leche fermentada. La leche fermentada se enfría rápidamente y su pH y el conteo viable de Bifidobacterium longum contenido de midieron. Después, la resultante se almacenó adicionalmente a 10°C por dos semanas, y el conteo viable de Bifidobacterium se midió a una semana y dos semanas después de inicio de almacenamiento. El conteo viable de Bifidobacterium longum se midió utilizando placas planas de agar TOS propionato (fabricadas por YAKULT PHARMACEUTICAL INDUSTRY CO., LTD.). Los resultados de medición se ilustran en la tabla 3. TABLA 3.

Cada leche fermentada preparada al utilizar las Lactococcus lactis subsp. lactis MCC852, 857, 859, 865, o 866 tuvieron un pH de aproximadamente 4.5 y un conteo viable de Bifidobacterium de 5xl08 CFU/g o más después de fermentación. Cuando toda la leche fermentada se almacenó a 10°C por dos semanas, la tasa de supervivencia de Bifidobacterium longum fue 80% o más. Por otra parte, la fermentación de leche no procede con la cepa tipo Lactococcus lactis subsp. Lactis ATCC 19435, y el pH de la leche fermentada fue de 5.0 o más y su almacenamiento a 10°C fue imposible. Además, el conteo viable de Bifidobacterium longum inmediatamente después del final de la fermentación fue aproximadamente x 108 CFU/g, que fue significativamente pequeño en comparación con el caso en donde se emplearon las bacterias del género Lactococcus de conformidad con la presente invención. De esta manera, es aparente que las 5 cepas bacterianas (Lactococcus lactis subsp. lactis MCC852, 857, 859, 865, y 866) son superiores a las otras cepas bacterianas conocidas de Lactococcus lactis subsp. lactis en términos de las propiedades que promueven el crecimiento de Bifidobacterium longum FERM BP-7787 y las propiedades que mwejroan su superviviencia durante almacenamiento. También es aparente que en el caso en que Bifidobacterium longum se co-cultiva con Lactococcus lactis subsp. Lactis, que no forma ni diacetilo ni acetoína como se describió en el documento de patente 2 es diferente al caso donde Bifidobacterium breve se emplea, y ni estos efectos promotores de proliferación de Bifidobacterium longum ni lo efectos que mejoran su supervivencia como se describió en el documento de patente 2 se exhiben. (2) Prueba de co-cultivo con cepa tipo Bifidobacterium longum ATCC 15707. Las propiedades promotoras de crecimiento Bifidobacterium longum de las bacterias del género Lactococcus de conformidad con la presente invención y sus propiedades de mejora de supervivencia Bifidobacterium durante almacenamiento se verificaron utilizando Bifidobacterium longum FERM BP-7787 y la cepa tipo Bifidobacterium longum ATCC 15707.

Primero, un cultivo de Lactococcus lactis subsp. lactis MCC857 y un cultivo de Bifidobacteríum longum FERM BP-7787 se prepararon de acuerdo con el método descrito en el siguiente ejemplo 1. Además, un cultivo mixto de Streptococcus thermophilus y Lactobacillus bulgaricus se prepara de acuerdo con el método descrito en el siguiente ejemplo 21. Además, un medio de leche descremada al 11% (P/P) que contiene extracto de levadura al 0.2% (P/P) se esterilizó a 90°C por 30 minutos. Después, 10% (V/V) de la cepa tipo Bifidobacteríum longum ATCC 15707 se inocula como un iniciador en el medio de leche descremada, y cultiva a 37°C hasta que el pH alcanza 4.6 para preparar un cultivo de cepa tipo Bifidobacteríum longum ATCC 15707. 1 % (VA/) del cultivo de Lactococcus lactis subsp. lactis MCC857 preparado como se describió anteriormente, ya sea 1 % (VA/) del cultivo de Bifidobacteríum longum FERM BP-7787 o 1 % (VA/) de la cepa de tipo Bifidobacteríum longum ATCC 15707, y 0.01 % (VA/) del cultivo mixto de Streptococcus thermophilus y Lactobacillus bulgaricus se inocularon en medio de leche descremada reconstituido al 10% (P/P) esterilizada a 90°C por 10 minutos y cultivado a 37°C hasta que el pH alcanza 4.6 para obtener leche fermentada. Después de que la leche fermentada obtenida se enfrió rápidamente, el conteo viable de Bifidobacteríum se midió. Además, la leche fermentada se almacenó a 10°C por dos semanas y el conteo viable de Bifidobacteríum longum se midió a una semana o a dos semanas después de inicio de almacenamiento. Por otra parte, cualquiera de 1.5% (VA/) del cultivo de Bifidobacteríum longum FERM BP-7787 preparado como se describió anteriormente o 1.5% (VA/) de cultivo de la cepa tipo Bifidobacteríum longum ATCC 15707, y 0.4% (V/V) del cultivo mixto de Streptococcus thermophilus y Lactobacillus bulgaricus se inocularon en un medio de leche descremada reconstituido al 10% (P/P) esterilizado a 90°C por 10 minutos y cultivado hasta que el pH alcanzó 4.6 para obtener leche fermentada como un control. El conteo Bifidobacteríum viable en la leche fermentada se midió en la misma forma. Los resultados de medición se ilustran en la Tabla 4. TABLA 4.

Ambos conteos viables de Bifidobacteríum longum FERM BP-7787 y cepa tipo Bifidobacteríum longum ATCC 15707 en leche fermentada se incrementaron significativamente por co-cultivo con Lactococcus lactis subsp. lactis MCC857. Además, la tasa de supervivencia de todo Bifidobacteríum longum almacenado a 10°C por dos semanas fue 30% o más: el de Bifidobacteríum longum FERM BP-7787 fue 71 % y el de la cepa tipo Bifidobacteríum longum ATCC 15707 fue 31 %.

En contraste, la tasa de supervivencia de Bifidobacterium longum FERM BP-7787 almacenado a 10°C por dos semanas después de cultivo en la ausencia de Lactococcus lactis subsp. lactis MCC857 fue 20% y no hubo cepa tipo Bifidobacterium longum ATCC 15707 viable almacenada a 10°C por dos semanas después de cultivo en la ausencia de Lactococcus lactis subsp. lactis MCC857 fue detectada. Se obtuvieron los mismos resultados cuando todo Lactococcus lactis subsp. lactis MCC852, 859, 865, y 866 se utilizaron en lugar de Lactococcus lactis subsp. lactis MCC857. De esta manera, es aparente que todas Lactococcus lactis subsp. lactis CC852, 857, 859, 865, y 866 tienen tanto propiedades excelentes para promover el crecimiento de las cepas de Bifidobacterium longum diferentes a Bifidobacterium longum FERM BP-7787 que tienen una excelente capacidad de supervivencia durante almacenamiento y propiedades para mejorar la supervivencia de las cepas Bifidobacterium longum diferentes a Bifidobacterium longum FERM BP-7787 durante almacenamiento. 5. Prueba comparativa con mezcla de Lactococcus lactis subsp. lactis y Lactococcus lactis subsp. Cremoris descritas en el documento de patente 1. El cultivo de Lactococcus lactis subsp. lactis MCC857, el cultivo de la cepa tipo Bifidobacterium longum ATCC 15707, y el cultivo mixto de Streptococcus thermophilus y Lactobacillus bulgaricus se prepararon de acuerdo con el método descrito previamente en 4(2). 1% (VA/) del cultivo de Lactococcus lactis subsp. lactis MCC857, 1 % (V V) del cultivo de la cepa tipo Bifidobacterium longum ATCC 15707, y 0.01 % (V V) del cultivo mixto de Streptococcus thermophilus y Lactobacillus bulgaricus, como se preparó en la forma anterior, se inocularon en un medio de leche descremada reconstituido a 10% (P/P) esterilizado a 90°C por 10 minutos. La mezcla se cultivó a 37°C hasta que el pH alcanzó 4.6 para preparar leche fermentada. La leche fermentada se enfrió rápidamente y el conteo viable de Bifidobacteríum contenido se midió. En contraste, 1% (V/V) de la cepa tipo Bifidobacterium longum ATCC 15707 preparada en la forma anterior y 2% (VA/) de la mezcla "EZAL MA14" compuesta por Lactococcus lactis subsp. lactis y Lactococcus lactis subsp. Cremoris (fabricado por Rhodia) se inocularon en un medio de leche descremada reconstituido al 10% (P/P) esterilizada a 90°C por 10 minutos, como un control. La mezcla se cultivó a 38°C hasta que el pH alcanzó 4.6 para preparar leche fermentada. El conteo viable de Bifidobacterium longum en la leche fermentada se midió. La mezcla "EZAL MA14" corresponde a un producto "EZAL MR014" (fabricado por Rhodia) descrito en el documento de patente 1. El conteo de Bifidobacterium viable en leche fermentada, preparado utilizando Lactococcus lactis subsp. lactis MCC857 fue 5.5x108 CFU/g. En contraste, no se detecto Bifidobacterium longum viable en una solución diluida que se obtiene al diluir leche fermentada que se prepara utilizando la mezcla "EZAL MA14" en 106 veces, y de esta manera el conteo viable de Bifidobacterium longum presente en la leche fermentada se revelo que es 1 x 106 CFU/g o menos. En otras palabras, se reveló que no se lograron efectos de promover el crecimiento de Bifidobacterium ni efectos de acortar el tiempo de fermentación, como se menciona en el documento de patente 1 , cuando se co-cultivó Bifidobacterium longum con Lactococcus lactis subsp. lactis y Lactococcus lactis subsp. cremoris.

Como se describió anteriormente, Lactococcus lactis subsp. lactis MCC852, 857, 859, 865, y 866 (las bacterias que pertenecen al género Lactococcus a emplearse en la presente invención) exhiben fuerte capacidad de fermentación en el medio de leche a una temperatura conveniente para fermentación con Bifidobacterium y también exhiben excelentes efectos de promover el crecimiento de Bifidobacterium y mejorar la capacidad de su supervivencia durante almacenamiento, cuando se co-cultivan con Bifidobacterium longum. De esta manera, es aparente que las bacterias tienen propiedades que no se acompañan con cepas bacterianas convencionalmente conocidas que pertenecen al género Lactococcus. Además, se espera que las bacterias a usarse en la presente invención pueden producir productos fermentados con sabor favorable, ya que las bacterias no producen diacetilo ni acetoína. Aunque un medio de pre-cultivo utilizado para cultivar Bifidobacterium y las bacterias que pertenecen al género Lactococcus con anticipación no se limita particularmente siempre que el medio de pre-cultivo usualmente se utilice, el medio de pre-cultivo de preferencia es un medio de leche. El medio de pre-cultivo más preferiblemente es un medio de leche descremada reconstituido, ya que el medio de leche descremada reconstituido se maneja fácilmente. Es preferible que la concentración del medio de leche descremada reconstituido sea 3% (P/P) o más y más preferiblemente 8% (P/P) o más. Además, el medio de pre-cultivo puede contener substancias que estimulan el crecimiento tales como extracto de levadura o agentes reductores tales como L-cisteína. Es particularmente preferible que una sustancia que estimula el crecimiento se formule en el medio de pre-cultivo, ya que Bifidobacterium exhibe un nivel bajo de proliferación en el medio de leche. Específicamente, un medio de cultivo que contiene 0.1 a 1% (P/P) de extracto de levadura puede utilizarse. El medio de pre-cultivo se somete a esterilización para uso. La esterilización puede realizarse de acuerdo con un método convencional, específicamente realizada al calentar a 80 a 122 grados C por 5 a 40 minutos, de preferencia a 85 a 95 grados C por 5 a 35 minutos. No se limita particularmente el medio base de fermentación a usarse tanto con Bifidobacterium como bacterias que pertenecen al género Lactococcus, siempre que el medio base de fermentación sea empleado usualmente para producir leche fermentada. El medio base de fermentación puede prepararse por ejemplo al formular un endulzante tal como sacarosa, pectina, fruta, jugo de fruta, agar, gelatina, aceite y grasa, sabor, agente colorante, estabilizante, agente reductor o semejantes, en leche de vaca, leche descremada, crema fresca, mantequilla, polvo de leche entera, leche descremada en polvo o semejantes, según se requiera, seguido por esterilización, homogeneización, enfriamiento y semejantes, de acuerdo con métodos convencionales. Aunque la proporción de inoculación de Bifidobacterium a la bacteria que pertenece al género Lactococcus, a inocularse en el medio base de fermentación como iniciadores, no se limita particularmente, la proporción de inoculación de preferencia es 100: 1 a 1 : 10, y más preferiblemente 10:1 a 1 :1. Aunque ambas cantidades de Bifidobacterium y la bacteria que pertenece al género Lactococcus a inocularse en el medio base de fermentación no están limitadas particularmente, es preferible que su cantidad en suma sea 0.01 a 10% (V V), más preferible 0.1 a 5% (V/V), con respecto a la cantidad del medio base de fermentación. Las bacterias de ácido láctico a utilizarse en la presente invención además pueden contener otras bacterias de ácido láctico además de Bifidobacterium y las bacterias que pertenecen al género Lactococcus, a menos que los efectos de las bacterias que pertenecen al género Lactococcus en el estímulo de crecimiento del Bifidobacterium o su mejora en supervivencia durante almacenamiento, se perturben. Aunque las otras bacterias de ácido láctico no se limitan particularmente, siempre que las otras bacterias de ácido láctico se emplean usualmente para producir leche fermentada, las otras bacterias de ácido láctico de preferencia son Streptococcus thermophilus y Lactobacillus bulgaricus. La proporción de inoculación del contenido total de Bifidobacterium y las bacterias que pertenecen al género Lactococcus al contenido total de las otras bacterias de ácido láctico a inocularse como iniciadores en un medio base de fermentación, no se limita particularmente, a menos que los efectos de las bacterias que pertenecen al género Lactococcus en Bifidobacterium se perturben, es preferible que la proporción de inoculación esté dentro del intervalo de 1 ,000:1 a 10:1. Es preferible que la temperatura de co-cultivo en el método para producir leche fermentada de acuerdo con la presente invención esté en un intervalo de 30°C a 40°C, más preferiblemente 36°C a 38°C. Tanto Bifidobacterium como las bacterias que pertenecen al género Lactococcus a utilizarse en la presente invención, pueden proliferar lo suficiente en el intervalo de temperatura anteriormente mencionado. Aunque el periodo de tiempo de cultivo se determina convenientemente dependiendo del tipo de leche fermentada a preparar, el periodo de tiempo de cultivo de preferencia está dentro de un intervalo de 5 a 18 horas. La leche fermentada que se obtiene por cultivo puede proporcionarse como un producto alimenticio, o puede procesarse homogéneamente en un estado líquido. Además, jugo de frutas, fruta o semejantes, pueden formularse convenientemente en la leche fermentada. La leche fermentada puede ponerse en un recipiente por un método convencionalmente empleado sin ningunas limitaciones particulares. A continuación, la presente invención se explicará circunstancialmente al indicar algunos ejemplos. Sin embargo, la presente invención no se limita a los siguientes ejemplos. EJEMPLO 1 1000 mL de medio de leche descremada reconstituido al 10% (P/P), preparado al disolver 10% en masa de polvos de leche descremada (fabricado por Morinaga Mi1 k Industry Co., Ltd.) en agua, se esteriliza a 90°C por 30 minutos, y después 30 mL de un cultivo de siembra de Lactococcus lactis subsp. lactis MCC857 se inoculan seguido al cultivar a 25°C por 16 horas. Por otra parte, 1000 mi de un medio de leche descremada al 1 1% (P/P) que contiene 0.2% (P/P) de extracto de levadura, se esterilizó a 90°C por 30 minutos, y 100 mL de un cultivo de siembra de Bifidobacterium longum FERM BP-7787 se inoculan ahí, seguido por cultivo a 37°C por 6 horas. Aparte de lo anterior, 50 L de un medio de base preparado al mezclar y disolver materias primas compuestas por polvos de leche descremada, polvo de leche entera, pectina y sacarosa al medio base que contiene 0.5% (P/P) de grasa de manteca, 8.0% (P/P) de componentes sólidos de leche no grasos, 5.0% (P/P) de sacarosa, y 0.2% (P/P) de pectina, se esteriliza a 90°C por 10 minutos seguido por enfriamiento a 40°C. 50 mL del cultivo anteriormente obtenido de Lactococcus lactis subsp. lactis MCC857 precultivado y 500 mL del cultivo anteriormente obtenido de Bifidobacterium longum FERM BP-7787 precultivado, se inocularon en el medio base de esterilizado, seguido por cultivo a 37°C por 16 horas para obtener leche fermentada. La leche fermentada se enfrió inmediatamente con agitación, y la leche fermentada fría se homogeniza a una presión de 15 MPa, seguido al poner el resultante en un recipiente de vidrio que tiene 200 ml_ de capacidad y después sellar el recipiente para obtener una bebida de yogur. La bebida de yogur obtenida tiene un contenido de ácido láctico de 0.68%, un pH de 4.64, y una viscosidad de 75 mPa.s, y que contiene 7.0x108 CFU/g de Bifidobacterium. Cuando la bebida de yogur se almacena a 10°C por 21 días, el conteo viable de Bifidobacterium fue 5.2x108 CFU/g, y su velocidad o proporción de supervivencia fue 74%. EJEMPLO 2 30 mL de un cultivo de siembra de Lactococcus lactis subsp. lactis MCC866 se inoculan en 1000 mL de un medio de leche descremada reconstituido al 10% (P/P) esterilizado a 90°C por 30 minutos, y después cultivado a 25°C por 16 horas. Por otra parte, 1000 mL de un medio de leche descremada al 11% (P/P) que contiene extracto de levadura al 0.2% (P/P) se esterilizó a 90°C por 30 minutos, y 100 mi de un cultivo de siembra de Bifidobacterium longum FERM BP-7787 se inoculan, seguido por cultivo a 37°C por 6 horas. Aparte de lo anterior, 50 mL de un cultivo mixto de Streptococcus thermophilus (fabricado por HANSEN) y Lactobacil/us bulgaricus (fabricado por HANSEN) se inoculó en 1500 mi de un medio de leche descremada reconstituido al 10% (P/P) esterilizado a 90°C por 30 minutos, y después cultivado a 37°C por 5 horas. Aparte de lo anterior, 50 L de leche cruda que contiene 3.0% (P/P) de grasa de manteca y 9.0% (P/P) de componentes sólidos de leche no grasos, se calentaron a 70°C, homogeneizaron a una presión de 15 MPa, esterilizaron a 90°C por 10 minutos, y después se enfriaron a 40°C. En el medio base así esterilizado, 500 mL de cultivo de Lactococcus lactis subsp. lactis MCC866 precultivado como se describió anteriormente, 500 mL del cultivo de Bifidobacterium longum FERM BP- 7787, y 5 mL del medio mixto de Streptococcus thermophilus y Lactobacillus bulgarícus, se inocularon. El resultante se coloca en un recipiente de resina que tiene una capacidad de 500 mL y después el recipiente fue sellado. Las bacterias se cultivaron a 37°C por 7 horas, y después enfriaron inmediatamente. La leche fermentada así obtenida tuvo un contenido de ácido láctico de 0.72%, y un pH de 4.55, y contiene 5.8x108 CFU/g de Bifidobacterium. Cuando se almacenó la leche fermentada a 10°C por 21 días, el conteo viable de Bifidobacterium fue 3.6x108 CFU/g, y su proporción de sobrevivencia fue 62%. EJEMPLO 3 30 mL de un cultivo de siembra de Lactococcus lactis subsp. lactis MCC865 se inoculan en 1000 mL de un medio de leche descremada reconstituido al 10% (P/P) esterilizada a 90°C por 30 minutos, y después cultivado a 25°C por 16 horas. Por otra parte, 1000 mL de un medio de leche descremada al 11% (P/P) que contiene extracto de levadura al 0.2% (P/P) se esteriliza a 90°C por 30 minutos, y 100 mi de un cultivo de siembra de Bifidobacterium longum FERM BP-7787 se inoculan ahí, seguido por cultivo a 37°C por 6 horas. Aparte de lo anterior, 50 mL de un cultivo mixto de Streptococcus thermophilus (fabricado por HANSEN) y Lactobacillus bulgarícus (fabricado por HANSEN) inoculado en 1500 mi de un medio de leche descremada reconstituido al 10% (P/P) esterilizada a 90°C por 30 minutos, y después cultivado a 42°C por 5 horas. Aparte de lo anterior, 500 L de leche cruda que contiene 3.4% (P/P) de grasa de manteca y 12.2% (P/P) de componentes sólidos de leche no grasos, se calentaron a 70°C, homogeneizaron a una presión de 15 MPa, esterilizaron a 90°C por 10 minutos, y después se enfriaron a 40°C. En el medio base así esterilizado, 5 L de cultivo de Lactococcus lactis subsp. lactis MCC865 precultivado como se describe anteriormente, 5 L de cultivo de Bifidobacterium longum FERM BP-7787, y 50 mL del contenido mixto de Streptococcus theimophilus y Lactobacillus bulgarícus se inocularon, y después cultivaron a 37°C por 7.5 horas, seguido por enfriamiento inmediato. La leche fermentada así obtenida se agitó adicionalmente para pulverizar el cuajo y la leche fermentada pulverizada se mezcló con conserva de arándano azul preparado por un método convencional en una proporción de 7:3. La mezcla se homogeneizó por agitación, y después colocó en un recipiente de papel con barrera a oxidación que tiene una capacidad 120 mL. La leche fermentada así obtenida con pulpa de arándano azul tuvo un contenido de ácido láctico de 0.80%, y un pH de 4.45, y que contiene 5.5x108 CFU/g de Bijidobacterium. Cuando la leche fermentada con pulpa de arándano azul se almacena a 10°C por 21 días, el conteo viable de Bijidobacterium fue 3.9xl08 CFU/g, y su proporción de supervivencia fue 71%. APLICABILIDAD INDUSTRIAL Ya que la leche fermentada contiene un conteo de Bifidobacterium viable mayor que nunca antes, incluso inmediatamente antes del fin de la fecha de caducidad, puede producirse de acuerdo con el método de producción según la presente invención, el método de producción está disponible en el campo de producción de leche fermentada o semejantes.

Claims

REIVINDICACIONES 1. Un método para producir leche fermentada, caracterizado porque comprende: realizar fermentación utilizando tanto bacterias que pertenecen a un género Bifidobacterium y bacterias que pertenecen a un género Lactococcus como bacterias de ácido láctico, en donde las bacterias pertenecen al género Lactococcus tienen propiedades bacteriológicas de: (1 ) capacidad de fermentación que cuaja a un medio de leche descremada reconstituido al 10% (P/P) cuando se cultiva a una temperatura de 25 grados C a 37 grados C por 16 horas; (2) propiedades promotoras de crecimiento de Bifidobacterium longum que llevan a un conteo viable de Bifidobacterium longum de 5 x 108 CFU/g o más, cuando se co-cultivan con Bifidobacterium longum en el medio de leche descremada reconstituido al 10% (P/P), hasta que su pH es 4.4 a 4.6; y (3) propiedades de mejora de supervivencia de Bifidobacterium longum durante almacenamiento, lo que lleva a una taza de supervivencia de Bifidobacterium longum de 30% o más, después de co-cultivo con Bifidobacterium longum en el medio de leche descremada reconstituido de 10% (P/P), hasta que su pH es 4.4 a 4.6, enfriamiento rápido, y almacenamiento por dos semanas a 10 grados C.
2. El método para producir leche fermentada de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado porque las bacterias que pertenecen al género Lactococcus no tienen capacidad para fermentar xilosa y producir ni diacetilo ni acetoína.
3. El método para producir leche fermentada de conformidad con la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque las bacterias que pertenecen al género Lactococus son Lactococus lactis subsp. lactis.
4. El método para producir una leche fermentada de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque las bacterias que pertenecen al género Lactococcus comprenden al menos una cepa bacteriana seleccionada del grupo que consiste de Lactococcus lactis subsp. lactis MCC852 (FERM BP-10742), Lactococcus lactis subsp. lactis MCC857 (FERM BP-I0757), Lactococcus lactis subsp. lactis MCC859 (FERM BP-10744), Lactococcus lactis subsp. lactis MCC865 (FERM BP-10745), y Lactococcus lactis subsp. lactis MCC866 (FERM BP-10746).
5. El método para producir leche fermentada de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 caracterizado porque las bacterias que pertenecen al género Bifidobacterium son Bifidobacterium longum.
6. El método para producir leche fermentada de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado porque una cepa bacteriana de Bifidobacterium longum es Bifidobacterium longum FERM BP-778
7. 7. El método para producir una leche fermentada de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 caracterizado porque ambas Streptococcus thermophilus y Lactobacillus bulgarícus además se utilizan como bacterias de ácido láctico.
8. Una leche fermentada preparada por el método para producir leche fermentada de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7.