FI76372B - Foerfarande foer framstaellning av en komposition innehaollande en ny mikroorganism, som hoer till streptococcus thermophilus. - Google Patents

Foerfarande foer framstaellning av en komposition innehaollande en ny mikroorganism, som hoer till streptococcus thermophilus. Download PDF

Info

Publication number
FI76372B
FI76372B FI834115A FI834115A FI76372B FI 76372 B FI76372 B FI 76372B FI 834115 A FI834115 A FI 834115A FI 834115 A FI834115 A FI 834115A FI 76372 B FI76372 B FI 76372B
Authority
FI
Finland
Prior art keywords
ferm
streptococcus thermophilus
microorganism
growth
culture
Prior art date
Application number
FI834115A
Other languages
English (en)
Swedish (sv)
Other versions
FI834115A0 (fi
FI76372C (fi
FI834115A (fi
Inventor
Shigeo Okonogi
Tsutomu Kudo
Akinori Hiramatsu
Susumu Teraguchi
Tomoko Yaeshima
Jyoji Ono
Original Assignee
Morinaga Milk Industry Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=16340118&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=FI76372(B) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Morinaga Milk Industry Co Ltd filed Critical Morinaga Milk Industry Co Ltd
Publication of FI834115A0 publication Critical patent/FI834115A0/fi
Publication of FI834115A publication Critical patent/FI834115A/fi
Publication of FI76372B publication Critical patent/FI76372B/fi
Application granted granted Critical
Publication of FI76372C publication Critical patent/FI76372C/fi

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
    • A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
    • A23C9/12—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
    • A23C9/123—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt
    • A23C9/1234—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt characterised by using a Lactobacillus sp. other than Lactobacillus Bulgaricus, including Bificlobacterium sp.
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
    • A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
    • A23C9/12—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
    • A23C9/123—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt
    • A23C9/1238—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt using specific L. bulgaricus or S. thermophilus microorganisms; using entrapped or encapsulated yoghurt bacteria; Physical or chemical treatment of L. bulgaricus or S. thermophilus cultures; Fermentation only with L. bulgaricus or only with S. thermophilus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/12—Antidiarrhoeals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/04—Preserving or maintaining viable microorganisms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P39/00—Processes involving microorganisms of different genera in the same process, simultaneously
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/46—Streptococcus ; Enterococcus; Lactococcus
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y10S435/885—Streptococcus

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Dairy Products (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Description

76372
Menetelmä koostumuksen valmistamiseksi, joka sisältää Streptococcus thermophilus1 iin kuuluvan uuden mikro-organismin 5 Tämä keksintö koskee menetelmää koostumuksen val mistamiseksi, joka sisältää Streptococcus thermophilus'iin kuuluvan uuden mikro-organismin.
Uusilla mikro-organismi-kannoilla on huomattava merkitys korkean hapenottokykynsä ansiosta.
10 Uudet mikro-organismi-kannat kykenevät estämään anaerobisia mikro-organismeja kuolemasta, kun viimeksimainittuja säilytetään ensinmainittujen läsnäollessa aerobisissa olosuhteissa.
Keksinnön mukaisesti valmistettu koostumus kykenee 15 siten estämään anaerobisia mikro-organismeja kuolemasta, kun viljelmää, joka sisältää anaerobisten mikro-organismien elävää solumassaa, säilytetään aerobisissa olosuhteissa.
Tässä tekstissä laajalti käytetty termi "thermo-20 philusbakteerit" viittaa niihin hyvin tunnettuihin mik-ro-organismeihin, jotka kuuluvat Streptococcus thermo-philus'iin. Tässä tekstissä laajalti käytetty termi "bifidobakteerit" viittaa mikro-organismeihin, jotka kuuluvat sukuun Bifidobacterium.
25 Thermophilus-bakteerit ovat hyödyllisiä baktee reita, joita esiintyy laajalti maidossa ja maitotuotteissa, ja niitä käytetään hyväksi käynnistäjäbakteereina useille erilaisille juustoille, mukaanlukien sveitsin-juusto ja brickjuusto, ja jugurtille (Takeo Nakanishi: 20 Micro-organisms for Milk and products, sivu 22, julkaissut Chikyu Publishing Co., Ltd. helmikuu 25 pnä 1967).
Thermophilus-bakteereiden mikrobiologisia ominaisuuksia on kuvattu yksityiskohtaisesti teoksessa Bergey's Manual of Determinative Bacteriology, koonneet R. E.
35 Buchanan ja N.E. Gibbons, 8. laitos, sivut 503-504, The Williams & Wilkins Company, Baltimore, USA, 1974.
76372 2
Sukuun Streptococcus kuuluvien mikro-organismien, esimerkiksi Streptococcus agalactiae'n, Streptococcus cremoris'in, Streptococcus faeclis'in, Streptococcus faecium'in, Streptococcus lactis'in, Streptococcus 5 liquefacience1 n ja Streptococcus mastitidis'in hapenottokykyä on selostettu vain julkaisuissa Journal of Bacteriology 56 (1948) 449, Journal of Agricultural Chemical Society of Japan 34, (1960) 272 I.C. Gunsalus & Ry.Y. Stainer "The Bacteria", sivu 425, Academic Press Inc. (1961), 10 Journal of Bacteriology 94 (1967) 184, Applied Microbiology 19 (1970) 608 The Australian Journal of Dairy Technology 33 (1978) 148, Journal of Pharmaceutical Society of Japan 99 (1979) 354.
Julkaisussa Austaralian Journal of Dairy Technology, 15 37 (1982) 14, Tinson et ai. esittävät, että thermophilus- bakteerien hapenottokyky oli 7,3 jimoolia happimolekyylejä 90 minuutissa 12 milligrairtnaa kuivattua solumassaa kohti 33,5°C:ssa, kun kuorittua maitoa, joka sisälsi 0,1 % hiivauutetta, käytettiin substraattina. Tämä hapen-20 ottokyky, muutettuna yksikköihin yhdessä minuutissa yhtä milligrammaa kuivattua solumassaa kohti, oli 6,76 nanomoo-lia happimolekyylejä, mikä on hyvin vähän. Hapenottokyky ilmaistaan tästä lähtien nanomooleina siten, kuin edellä on määritelty.
25 Tämän keksinnön tekijät ovat tehneet tutkimuksia thermophilus-bakteereiden ja anerobisten mikro-organismien symbioosista ja ovat eristäneet Streptococcus thermo-philus'in uudet kannat, joiden hapenottokyky on vähintään 1,5 kertaa niin korkea kuin tavanomaisten thermophilus-30 bakteereiden vastavaa kyky, ja ovat luoneet perustan tälle keksinnölle.
Tätä keksintöä kuvataan yksityiskohtaisesti alempana .
1) Uusien Streptococcus thermophilus-kantojen 35 eristäminen: 3 76372
Streptococcus thermophilus1 iin kuuluvat kannat eristettiin seuraavan menetelmän mukaisesti, kuten ovat kuvanneet Ozawa et ala /Bulletin of the National Institute of Agricultural Sciences, Series G (Animal Husbandry), no. 5 5 (1953) 41/. Koaguloitunutta maitoa, joka valmistettiin seisottamalla raakamaitoa 45-50°C:ssa 4-5 päivää, tai luonnollisesti hapantunutta maitoa tutkittiin mikros-kooppisesti. Niitä näytteitä, joissa havaittiin varmuudella Streptococcus'in olemassaolo, siirrostettiin 10 10-%:iseen (W/W) rekonstituoituun kuorittuun maitoon, joka oli steriloitu 115°C:ssa 15 minuutin ajan, konsen-traatiossa 5 % (V/V), ja viljeltiin 45-50°C:ssa, kunnes havaittiin koagluloituminen. Sitten viljelmiä siirrettiin sarjoittain viljelyväliaineeseen 2-3 kertaa samalla ta-15 valla kuin edellä, ja yksi silmukallinen viljelmää otettiin näytteeksi ja levitettiin M-17 -agarväliaineelle /Applied Microbiology 29 (1975) 6^, sivu 8077 ja inkuboi-tiin 40°C:ssa 2-3 päivän ajan. Joukko kantoja eristettiin muodostuneista pesäkkeistä. Eristettyjen kantojen bakte-20 riologisia ominaisuuksia verrattiin teoksessa Bergeys's Manual of Determinative Bacteriology julkaistujen autenttisten thermophilus-bakteereiden vastaaviin, ja saatiin 40 Streptococcus thermophilus -kantaa.
2) Thermophilus-bakteereiden hapenottokyky: 25 40 kannalle, jotka kuuluivat Streptococcus thermo philus ' eihin , jotka eristettiin koagluoituneesta kuoritusta maidosta ja luonnollisesti hapantuneesta maidosta, kannalle Streptococcus thermophilus 9Y (IDF - kanta), jonka lahjoitti tri Morichi (National Institute of 30 Animal Industry) standardikannaksi (The Japanese Journal of Zootechnical Science 53 (1982) 161), ja Streptococcus thermophilus ATCC 1958:lie, joka toimitettiin American Type Culture Collection'ista (johon tästä lähtien viitataan nimellä "ATCC"), tehtiin hapenottokyvyn määritys 35 seuraavalla tavalla: 4 7 6 3 7 2
Bakteerikantojen viljelmä siirrostettiin ravinto-väliaineeseen (Journal of the Agricultural Chemical Society of Japan 45 (1970) 423) konsentraatiossa 5 % (V/Vj , ja tehtiin stationäärinen viljely 37°C:ssa 16 tun-5 nin ajan. Solut erotettiin saadusta viljelyväliaineesta sentrifugoimalla ja pestiin steriloidulla fysiologisella suolaliuoksella steriileissä olosuhteissa. Sitten solut suspendoitiin steriloituun fysiologiseen suolaliuokseen konsentraatioon 3-5 mg kuivaa solumassaa millilitraa 10 kohti. Kunkin kannan hapenottokyky, joka määriteltiin hapen kulutuksen määrän perusteella, määritettiin mano-metrisellä menetelmällä Warburgin menettelyn mukaisesti /Yoshikawa et ai: Kagaku no Ryoiki (Journal of Japanese Chemistry), erityisnumero, nro 13, "Warburg's manometer", 15 julkaissut Nankodo, helmikuu (1954^7 kuten kuvataan alempana: Käytettiin astiaa, jossa oli kaksi sivuosaa. Yksi ml mainittua bakteerisuspensiota ja 0,5 ml steriloitua 0,1 M fosfaattipuskuriliuosta, jonka pH oli 6,0, pantiin 20 reaktioastian pääosastoon ja kaksi 0,75 ml:n erää steriloitua 20 %:sta (W/W) rekonstituoitua kuorittua maitoa pantiin vastavasti kahteen sivuosaan substraattiliuok-seksi. Suodatinpaperi, joka oli kyllästetty 0,2 ml:11a 20 %:sta (W/V) kaliumhydroksidiliuosta, pantiin lisä-25 osastoon hiilidioksidin absorboijaksi. Astioita ravisteltiin 5 minuutin ajan etukäteen lämpötilatasapainon saavuttamiseksi, ja sitten substraattiliuos lisättiin sivuosiin, mikä johti 10 %: seen konsentraatioon. Hapen-ottonopeus mitattiin joka 3. minuutti ja maksimaalinen 30 ottonopeus määriteltiin hapenottokyvyksi.
Testattujen kantojen hapenottokyky on taulukoitu taulukkoon 1.
5 76372
Taulukko 1
Kanta Hapenottokyky nanomooleina 9Y 19,8 5 ATCC 19258 10,1 STH - 01 30,0 STH - 17 37,3 STH - 23 42,3 STH - 50 78,5 10 STH - 15 14,7 STH - 32 12,1 muut 34 kantaa vähemmän kuin 18,5
Kuten taulukosta 1 ilmenee, eristetyistä 40 kannas-15 ta 36 kannan hapenottokyky oli vähemmän kuin 18,5 nano-moolia, kun taas neljän kannan hapenottoky oli 30,0-78,5 nanomoolia. Standardi-kantojen 9Y ja ATCC 19258 hapenottokyky oli 19,8 ja 10,1 nanomoolia, vastaavasti.
Tämän keksinnön tekijät yrittävät mitata korkeam-20 man hapenottokyvyn omaavien neljän kannan hapenottokykyä Tinson'in et ai. menetelmän mukaan. Näillä neljällä kannalla oli kuitenkin niin huomattavan korkea hapenottokyky, että Tinson'in et ai. 90 minuutin inkuboinnin jälkeistä määritysmenettelyä ei voitu soveltaa. Siksi ajanjaksot, 25 jotka vaaditaan 7,3 jimoolin happimolekyylejä absorptioon, siten kuin ovat kuvanneet Tinson et ai., mitattiin Tinson'in et ai. menetelmän mukaisesti. Tinson'in et ai. mukaan arvo oli 90 minuuttia, kun taas STH-01:n ja STH-23:n arvot olivat 26, STH-17:n arvo 28 ja STH-50:n 30 arvo 21 minuuttia (vertailua varten: 9Y:n ja ATCC 19258:n vastaavat arvot olivat 46 ja 140 minuuttia). Pääteltiin, että näillä neljällä STH-kannalla oli huomattavasti korkeampi hapenottokyky kuin muilla kannoilla.
3) Uusien kantojen bakteriologiset ominaisuudet: 35 Tämän keksinnön tekijät tutkivat näiden neljän 6 76372 STH-kannan bakteriologisia ominaisuuksia ja havaitsivat, että moninaiset bakteriologiset ominaisuudet, lukuunottamatta korkeaa hapenottokykyä, olivat identtiset teoksessa Bergey's Manual of Determinative Bacteriology julkaistu-5 jen thermophilus-bakteereiden vastaavien ominaisuuksien kanssa, kuten esitetään alempana: (A) 37°C:ssa 48 tunnin ajan M-17 -agarmaljalla aerobisesti inkuboidun bakteerisolun muoto: a. Koko (halkaisija): 0,7-0,9 jam 10 b. Muoto pyöreä tai soikea pareittain tai ketjuna (B) 37°C:ssa 48 tunnin ajan M-17 -agarmaljalla aerobisesti muodostuneiden pesäkkeiden muoto: a. Muoto: pyöreä b. Kohoaminen: kupera kehä 15 c. Periferia: sileä d. Koko (halkaisija): 0,5-1,5 mm e. Värisävy: vaikeahko, läpikuultamaton f. Pinta: sileä ja kiiltävä (C) Kaasu: ei tuota
20 (D) Ei kasva alemmassa lämpötilassa kuin 20°C
(E) Kasvaa 45°C:ssa (F) Liikkumaton (G) Endosporia ei muodostu (H) Gram-positiivinen 25 (I) Bentsidiini-negatiivinen (J) Katalaasi-negatiivinen (K) Säilyy hengissä kuumennettaessa 65°C:ssa 30 minuutin ajan (L) Ei kasva, kun läsnä on 2 % (W/V) natriumklori- 30 dia (M) Ei kasva maidossa, joka sisältää 0,1 % (W/V) metyleenisinistä (N) Ei kasva pH:ssa 9,6 (O) Tuottaa happoa glukoosista, fruktoosista, sakka-35 roosista ja laktoosista, mutta ei tuota happoa arabinoosis- 7 76372 ta, ksyloosista, raffinoosista, maltoosista, trehaloo-sista, inuliinista, mannitolista, sorbitolista, salisii-nista eikä glyserolista (P) Ei tuota ammoniakkia argiinista.
5 Jopa sen jälkeen, kun viljeltäessä näitä neljää kantaa oli peräkkäin siirrostettu yli 20 kertaa, niillä oli korkea hapenottoky. Kannat STH-01, STH-17, STH-23 ja STH-50 luokiteltiin uusiksi Streptococcus thermophi-lus -kannoiksi, ja ne nimettiin, tässä järjestyksessä, 10 nimillä Streptococcus thermophilus M-8202, Streptococcus thermophilus M-8203, Streptococcus thermophilus M-8204 ja Streptococcus thermophilus M-8205, jotka kannat tal-lettiin laitokseen Fermentation Research Institute,
Agency of Industrial Science and Technology, lokakuun 15 22. päivänä 1982, jolloin vastaavat tallennusnumerot oli vat FERM BP-351, FERM BP-352, FERM BP-353 ja FERM BP-354.
Keksinnön mukaiselle menetelmälle koostumuksen valmistamiseksi, joka sisältää Streptococcus thermophi-lus'iin kuuluvan uuden mikro-organismin viljeltyä vil-20 jelmää tai siitä eristettyjä eläviä soluja, on siten tunnusomaista, että viljelty viljelmä saadaan siirros-tamalla Streptococcus thermophilus-kantaa FERM BP-351, FERM BP-352, FERM BP-353 ja/tai FERM BP-354 nestemäiseen tai kiinteään viljelyväliaineeseen ja sen jälkeen vilje-25 lemällä mainittua mikro-organismia, jonka hapenottokyky on vähintään 30 nanomoolia mikro-organismin kuivattujen solujen milligrammaa kohti minuutissa, mikä määritellään hapenkulutuksen määränä Warburgin manometrimenetel-män mukaisesti määritettynä.
20 Uusilla mikro-organismeilla on kuten edellä on kuvattu korkea hapenottokyky, ja ne voivat ottaa ympäristönsä hapen jopa silloin, kun niitä pidetään aerobisissa olosuhteissa. Ne voivat täten tarjota suotuisan ympäristön yhtaikaisesti läsnä oleville anaerobi-35 sille mikro-organismeille.
β 76372
Anaerobisia mikro-organismeja käytetään hyväksi ruokaa, lääkkeitä ja karjan ja siipikarjan rehua ja niin edelleen varten. Bifidobakteerit ovat fysiologisesti ja ravitsemuksellisesti suotuisa aineosa yllä kuvattuja so-5 vellutuksia varten, vaikka samalla ovatkin obligaatteja anaerobeja ja kuolevat hapen läsnäollessa. Keksinnön mukaisesti valmisteltu koostumus voi huomattavsti estää siinä olevien anaerobisten mikro-organismien kuolemista säilytyksen aikana uusien mikro-organismien korkean ha-10 penottokyvyn ansiosta.
Keksinnön mukaisesti valmistettu koostumus voi sisältää Streptococcus thermophilus-kannan FERM BP-351, FERM BP-352, FERM BP-353 ja/tai FERM BP-354 eläviä soluja, joiden hapenottokyky on vähintään 30 nanomoolia mik-15 ro-organismin kuivattujen solujen milligrammaa kohti minuutissa, mikä määritellään hapenkulutuksen määränä Warburgin manometrimenetelmän mukaisesti määritettynä, ja anaerobisen mikro-organismin eläviä soluja.
Koostumus käsittää seoksen, joka koostuu viljel-20 mästä, joka sisältää anaerobisten mikro-organismien elävää solumassaa, ja viljelmästä, joka sisältää vähintään yhden uuden mikro-organismin elävää solumassaa konsen- o p traatiossa ainakin 1 x 10 , edullisesti 5 x 10° -
Q
2 x 10 , seoksen grammaa kohti.
25 Viljelmiin, jotka sisältävät anaerobisten mikro- organismien elävää solumassaa, kuuluvat esimerkiksi viljelmä, joka on saatu viljelemällä bifidobakteereita hyvin tunnetun menetelmän mukaisesti, hyvin tunnetun menetelmän mukaisesti saatu sellaisen viljelmän konsen-30 traatti, sellaisesta viljelmästä hyvin tunnetun menetelmän mukaisesti erotetut solut tai sellaisten solujen suspensio. Viljelmiin, jotka sisältävät uuden mikro-organismin elävää solumassaa, kuuluvat viljelmä, joka on saatu viljelemällä kyseessä olevaa mikro-organismia 35 hyvin tunnetun menetelmän mukaisesti, sellaisen viljelmän konsentraatti, joka on saatu hyvin tunnetun mene- 76372 9 telmän mukaisesti, sellaisesta viljelmästä hyvin tunnetun menetelmän mukaisesti erotetut solut tai sellaisten solujen jokin suspensio.
Viljelmä, joka sisältää anaerobisten mikro-organis-5 mien elävää solumassaa, sekoitetaan siihen, joka sisältää uuden mikro-organismin eläviä soluja sellaisen konsentraa-tion, että ne estävät anaerobisten mikro-organismien kuolemista .
Viljelmä, joka on saatu viljelemällä uutta mikro-10 organismia mainitulla tavalla, sisältää esimerkiksi 2 x
Q
10 elävää solua viljelmän grammaa kohti, kun sitä on viljelty 10-%:isessa (W/W) rekonstituoidun kuoritun maidon väliaineessa 37°C:ssa 16 tunnin ajan, ja 1 x 10^ elävää solua viljelmän grammaa kohti, kun sitä on viljelty 15 ravintolihaliemessä /Journal of the Agricultural Chemical Society of Japan 45, (1971) 4237 37°C:ssa 16 tunnin ajan. Niinpä anaerobisten mikro-organismien johonkin viljelmään lisättävän uuden mikro-organismin viljelmän määrä voidaan määrittää uuden mikro-organismin viljelmässä olevien elä-20 vien solujen lukumäärän perusteella.
Täten valmistettu koostumus aikaansaa siinä olevien anaerobisten mikro-organismien vähäisempää kuolleisuutta jopa sen jälkeen, kun koostumusta on säilytetty aerobisissa olosuhteissa, ja sitä voidaan näinollen käyttää hyväk-25 si fermentoitua maitoa, maitohappokäymisellä tuotettuja juomia, suolistohäiriöiden lääkkeitä ynnä muita sellaisia varten, joissa anaerobisen mikro-organismin, esimerkiksi bifidobakteereiden, elävillä soluilla on tärkeä merkitys.
30 Kokeellista tulosta, joka osoittaa uuden mikro-or ganismin vaikutuksen anaerobisten yhtäaikaisesti läsnäolevien mikro-organismien kuolleisuuden estämiseen, kuvataan yksityiskohtaisesti alempana.
(Testi 1) 35 A. Bakteerikannat:
Streptococcus thermophilus -kantoja 9Y ja ATCC 19258 ja uutta M-8205 käytettiin. Tyypillisenä anaerobise- 10 76372 na mikro-organismina käytettiin Bifidobacterium longum ATCC 15708.
B. Käynnistäjäviljelmien valmistus:
Thermophilus-bakteereiden ja uuden mikro-organis- 5 min käynnistäjäviljelmät valmistettiin siirrostamalla näiden mikro-organismien alaviljelmä 10-%:iseen (W/W) rekons-tituoituun kuorittuun maitoon, joka oli steriloitu 115°C:ssa 15 minuutin ajan, konsentraatiossa 3 % (V/V), ja viljelemällä niitä 37°C:ssa 16 tunnin ajan. Bifidobac-10 terium longum'in käynnistäjäviljelmä valmistettiin siirrostamalla alaviljelmää 15-% : iseen (W/W) rekonstituoituun kuorittuun maitoon, joka sisälsi 0,25 % (W/W) hiivauutet-ta ja joka oli steriloitu 115°C:ssa 15 minuutin ajan, konsentraatiossa 10 % (V/V), ja viljelemällä sitä 37°C:ssa 15 5 tunnin ajan.
C. Seoksen valmistus:
Bifidobacterium longum'in vilejlmä valmistettiin homogenisoimalla maitoa, joka sisälsi 0,1 % (W/W) kasami-nohappoa, steriloimalla maito 90°C:ssa 10 minuutin ajan, 20 siirrostamalla kohdassa B valmistettua Bifidobacterium longum'in käynnistäjäviljelmää konsentraatioon 5 % (V/V) fermentaation suorittamiseksi 37°C:ssa 7 tunnin ajan ja jäähdyttämällä viljelmä välittömästi fermentaation jälkeen .
25 Thermophilus-bakteereiden ja uuden mikro-organis min viljelmät valmistettiin siirrostamalla thermophilus-bakteereiden ja uuden mikro-organismin käynnistäjäviljel-miä, jotka valmistettiin kohdassa B, ravintolihaliemeen, joka sisälsi 1 % (W/V) soijapeptonia, 0,5 % (W/V) hiiva-30 uutetta, 1 % (W/V) laktoosia, 2 % (W/V) natriumsukkinaat-tia, 0,2 % (W/V) dikaliummonovetyfosfaattia, konsentraatioon 5 % (V/V) ja viljelemällä niitä 37°C:ssa 16 tunnin ajan. Nämä viljelmät sentrifugoitiin erillisinä tavanomaisen menetelmän mukaisesti thermophilus-bakteereiden 35 ja uuden mikro-organismin solujen kokoamiseksi. Kootut n 76372 solupelletit pestiin steriloidulla fysiologisella suolaliuoksella ja suspendoitiin steriloituun fysiologiseen suolaliuokseen konsentraatioon 4 x 10^^/ml. Thermophilus-bak-teereiden ja uuden mikro-organismin elävien solujen luku-5 määrä mitattiin kohdassa D/b) kuvatun menetelmän mukaisesti .
D. Testimenetelmä:
Thermophilus-bakteereiden ja uuden mikro-organismin solususpensiota lisättiin erillisesti Bifidobacterium lon-10 gum'in viljelmiin konsentraatioissa 3 x 10^, 1 x 10®,
O Q
5 x 10° ja 2 x 10^ viljelmän grammaa kohti ja sekoitettiin tasaiseksi. Seokset täytettiin steriloituihin paperiastioi-hin, joilla oli huomattava ilmanläpäisevyys, ja sitten astiat peitettiin kansilla.
15 Bifidobacterium longum'in elävien solujen lukumää rät seoksissa välittömästi valmistuksen jälkeen ja niissä seoksissa, joita säilytettiin 5°C:ssa 7 päivän ajan jääkaapissa, mitattiin seuraavalla tavalla. Bifidobacterium longum'in hengissä säilynyt osuus säilytyksen jälkeen las-20 kettiin.
a) Bifidobacterium longum'in elävien solujen lukumäärän mittaus: Käynnistäjäviljelmät tai seokset laimennettiin desimaalisesti anaerobisia bakteereita varten tarkoitetul-25 la laimenninliuoksella /Rinsho Kensa (Journal of Medical Technology) 18 (1974) 116J57, ja pesäkkäiden laskenta suoritettiin sen menetelmän mukaisesti, jossa käytetään MGLP-agarpylvästä bifidobakteereiden selektiiviseen laskemiseen ^.Teraguchi et ai: Shokuhin Eisei Zashi (Journal of Food 30 Hygienic Society of Japan) 23 (1982) 3_97.
b) Thmerophilus-bakteereiden ja uuden mikro-organismin elävien solujen lukumäärän mittaus:
Mittaus tehtiin sen pesäkkeidenlaskentamenettelyn mukaisesti, jossa käytetään BCP:tä sisältävää normaalia 35 ravintoagarvällainetta, jota oli kaupallisesti saatavissa.
12 7 6372 E. Testitulokset:
Elävien solujen lukumäärä ja Bifidobacterium lon-gum'in hengissäsäilymisosuus ja seoksen pH esitetään taulukossa 2.
13 7 6372 :<ö in & tn -h ω έ •H S Κ 0s rH η ^orgnmtriHootNOinm C ·Η ί (Uiltico OHm^OOiN'KNr'lD'i _ K tn O rH ro I «
ίπ E
:rQ ς e
*i i <D S
il S H5S
C tn o — [''r-r^cokor-t^oo!—cocooo OJ -X to :ra -r-ι οσοοοοοοοοοο
rX P -P rH rH rH r—I rH i-H rH i—I r—( r-H rH H
$ >i §-§o xxxxxxxxxxxx
1—1 ’"H ·Η K -X
_ *h > g HeortincrrnoiTmooN
C tr3 :ra h ------------ O CO i—ip HMtOH(J\(NinHtOHMr' *σ w -h
•H
S
-P in criOo<r>oocoooLnmLn^rotN
rX u, kOkOkCkDkOkOkOkOkOkOOkD
,5j CM T3 | 3 s S g
2 m en 'i? -H
3 X _3 -δ <^o^(T»<ric>crvo>cnc^c^(T»o> f-j P 75 y oooooooooooo 2 -P ö ,_y ^ pH I-H rI rH r-1 rl i—I H H i—I rH r—i ra tn w ·$ ^ le xxxxxxxxxxxx r-laJ S·'® § cocoto^Or^^tnoir^roH ratD'nss
ί> -X .5 rf F CNfMfM<NrO(N(N(N(N(N(NtN
+J T w H - m -P intNMOMNratNora^oo •P [^•[^•r^kor^r^r-r-r^t^r^r'
•H
-$ %
Is 2 ra r- ooooor-ooooor-oocoo
Oi Ö >, OOOOOOOOOOOO
O Φ -P rH r—I rH rH i—l rH i—t r—l t—l r—t i—t »—1 h -p ira xxxxxxxxxxxx ai ,v tn
jdra-H m HinMmHinNnHintN
H X) rH
s H 00 •h -P m jC -h m a, d o o
Q fl) Ή CN
ΕΦ >ί - oo C -p o o £ ^ <2 14 76372
Kuten taulukosta 2 ilmenee, voidaan bifidobakteerei-den henkiinjäämisosuutta suurentaa thermophilus-bakteerei-den yhtaikaisella läsnäololla, koska uuden mikro-organismin vaikutus, joka edistää Bifidobacterium'in hengissä 5 säilymistä, on selvästi huomattava.
Bifidobakteereiden hengissäsäilymisosuus, kun läsnä oli thermophilus-bakteereita Y9 ja ATCC 19258 konsentraa-tiossal xlO® ja 2 x 109 viljelmän grammaa kohti, oli vähemmän kuin 1,0 % ja 6,3 %, kun taas hengissäsäilymisosuu-10 det olivat 7,0 %, 16,5 % ja 34,3 %, kun läsnä oli uusiin mikro-organismeihin kuuluvaa M-8205:tä konsentraatioissa
Op Q
1 x 10 , 5 x 10 ja 2 x 10 grammaa kohti, vastaavasti. Pääteltiin, että Bifodobacterium'in hengissäsäilymisosuus kohosi 5-7-kertaiseksi uuden mikro-organismin läsnäolles-15 sa verrattuna tapaukseen, jossa läsnä oli tunnettuja thermophilus-bakteereita .
Näinollen on ilmeistä, että uusi mikro-organismi vaikuttaa huomattavasti bifidobakteereiden hengissä säilymiseen, kun mikro-organismia lisätään vähintään 1 x 20 10®, edullisesti 5 x 10® - 2 x 109 viljelmän grammaa kohti.
Uuden mikro-organismin vaikutusta useisiin erilaisiin anaerobisiin mikro-organismeihin kuvataan seuraavas-sa: (Testi 2) 25 A. Bakteerikannat:
Streptococcus thermophilus M-8205 (Kanta STH-50) esimerkkinä uusista mikro-organismeista ja Bifidobacterium bifidum ATCC 1596, Bifidobacterium infantis ATCC 15697 ja Bifidobacterium adolescentis ATCC 15706 tyypil-30 lisinä anaerobisina bakteereina olivat käytössä.
B. Käynnistäjäviljelmien valmistus:
Sama kuin testissä 1.
C. Seosten valmistus:
Sama kuin testissä 1.
is 76372 D. Testimenetelmä
Sama kuin testissä 1, lukuunottamatta sitä, että uutta mikro-organismia lisättiin konsentraatiossa 5 x 10 asianomaisten bifidobakteerien viljelmien grammaa 5 kohti.
E. Testitulokset:
Bifidobakteereiden elävien solujen lukumäärä ja hengissäsäilymisosuudet ja seosten pH esitetään taulukossa 3.
> 16 76372 ι—\
•H
:S
:8 tn “ ΓΜ ro £9^ LT) ' ai in öp - —j 2 c te o — g ^ 1-1 s 3 ^9 ίο ^ °°o oo oo e 5 ^ s s 9j :2 «s * x x s s s i 1 3
rH :rd r-H ,V H
S
(Λ
S
a cn m ro in r- ^
C :«J
Φ ή ro -P 3
en M
I I 1 p me e .—.
ιΗ > Φ δ -9 00 <Ti 9 φ -ro jJ O O σν Π3 -9 ,V 9 ,£ ·-< Ή 2 .tn -m o Λ x x ^ 'S 0 01 Jrt LO to B δε ^ ™ * -P ·9 | <^> £ El 5?
O H CN
00 VO 00 pj *3< r}· 9" tn $ s “ §
a sl I
<49 ‘y Q
Λ -S ^ B § § § m -H '3 ‘3 1 s S a
H u id -p t" -P VO
•ρ o σ' υ σν υ o S ui to m vo m o- ö xj 10 ja to -9 2 i s ^ e a «2,
£j ip H iw Ö P B
® Ia § ia § m < 17 76372
Kuten ilmenee taulukosta 3, ovat kaikkien tässä testattujen bifidobakteerilajien hengissäsäilymisosuudet suurempia kuin 10 % sen jälkeen, kun on säilytetty 5°C:ssa 7 päivän ajan, kun uutta mikro-organismia on lisätty vil-5 jelmiin konsentraatiossa 5 x 10^ viljelmien grammaa kohti.
Niinpä on ilmeistä, että uusi mikro-organismi vaikuttaa huomattavasti useiden erilaisten autenttisten bifi-dobakteereiden hengissäsäilymiseen ja että sillä on laaja suojaava vaikutus bifidobakteereiden elinkykyyn.
10 Esimerkki 1 10 kg kuoritun maidon jauhetta liuotettiin 90 kg:aan vettä ja seos steriloitiin 90°C:ssa 30 minuutin ajan ja jäähdytettiin. Sitten siirrostettiin seokseen 3 kg Streptococcus thermophilus M-8203 (STH-17)-alaviljelmää fermen-15 taation suorittamiseksi 40°C:ssa 18 tunnin ajan.
Bifidobacterium bididum ATCC 15696 - alaviljelmä siirrostettiin erillisesti 20 litraan viljelyväliainetta, joka sisälsi 0,2 % (W/W) hiivauutetta ja 12 % (W/W) rekonstruoitua kuorittua maitoa ja joka oli steriloitu 20 90°C:ssa 30 minuutin ajan, konsentraatioon 5 % (W/W) fer-mentaation suorittamiseksi 37°C:ssa 8 tunnin ajan.
Erillisesti liuotettiin 0,8 kg pektiiniä, 15 kg sokeria, 5 kg rasvapitoisuudeltaan 50-%:ista (W/W) kermaa ja 0,2 kg aromiainetta 59 kg:aan vettä ja tuloksena 25 on saatu siirappi steriloitiin 85°C:ssa 10 minuutin ajan.
80 kg tätä siirappia jäähdytettiin noin 40°C:seen ja sekoitettiin 100 kg:aan mainittua Streptococcus thermophilus -fermentoitua maitoa ja 20 kg:aan mainittua Bifidobacterium bifidum -fermentoitua maitoa, jolloin saatiin 30 200 kg seosta. Seos homogenisoitiin paineessa 150 kg/cm^ ja lisättiin 350:een yksittäiseen paperisäiliöön, joilla oli tilavuus 500 ml, kaupalliseen jugurttijuoman tuottamiseksi, joka sisälsi uuden mikro-organismin ja bifidobakteereiden eläviä soluja. Tämä jugurttijuoma sisälsi 35 Streptococcus thermophilus1 in elävää solumassaa 2,4 x
Q
10 /ml ja Bifidobacterium bididum'in elävää solumassaa 18 7 6 372 8,5 x 10 ΛώΙ , ja sen pH oli 4,9 ja maitohappokonsentraatio 0,85 %. Bifidobacterium bifidum'in elävien solujen lukumäärä senjälkeen, kun tuotetta oli säilytetty 5°C:ssa 7 päivän ajan, oli 1,3 x 10 /ml ja hengissäpysymisosuus 5 oli 15,3 %.
Esimerkki 2 200 ml kaupallisesti saatavissa olevaa viljely-väliainetta, joka sisälsi 1 % (W/W) polypeptonia, 1 % (W/W) soijapeptonia, 0,5 % (W/W) hiivauutetta, 1 % (W/W) 10 laktoosia ja 0,2 % (W/W) monokaliumdivetyfosfaattia (pH 6,8),steriloitiin 90°C:ssa 30 minuutin ajan ja jäähdytettiin 37°C:seen. Sitten joukkoon siirrostettiin 5 1 Streptococcus thermophilus M-8205 (STH-50) -alaviljel-mää ja inkuboitiin 37°C:ssa 18 tunnin ajan. Välittömäs-15 ti inkuboinnin jälkeen viljelmä jäähdytettiin noin 5°C:seen ja solut kerättiin Sharples-sentrifugilla (1500 kierrosta minuutissa) ja suspendoitiin samaan tilavuuteen, kuin oli ollut viljelyväliaineella, fysiologista suolaliuosta, joka oli steriloitu 90°C:ssa 30 mi-20 nuutin ajan, ja sentrifugoitiin samalla tavalla solujen keräämiseksi taas. Täten saadut solut suspendoitiin 10 litraan liuosta, joka sisälsi 10 % (W/W) kuoritun maidon jauhetta, 1 % (W/W) sakkaroosia ja 1 % (W/W) nat-riumglutamaattia ja joka oli steriloitu 90°C:ssa 30 mi-25 nuutin ajan, ja suspensio kylmäkuivattiin tavanomaisen menetelmän mukaisesti, jolloin saatiin noin 1,2 kg jauhetta, joka sisälsi 4,5 x 10·*·0 elävää solua grammaa kohti.
Erillisesti siirrostettiin bifidobacterium infantis ATCC 1597 -alaviljelmää 0,5 litraan viljelyväliainetta, 30 joka sisälsi 0,2 % (W/W) hiivauutetta ja 12 % (W/W) kuoritun maidon jauhetta, ja joka oli steriloitu 90°C:ssa 30 minuutin ajan, konsentraatioon 5 % (V/V) fermentaation suorittamiseksi 37°C:ssa 8 tunnin ajan.
Erillisesti sekoitettiin 7,5 kg tomaattisosetta, 35 0,2 kg sokeria, 10 kg natriumkloridia, 3 kg natriumgluta- » 76372 mattia ja 10 g aromiainetta 1,7 litraan vettä ja seos steriloitiin 85°C:ssa 10 minuutin ajan ja jäähdytettiin. Sitten seokseen lisättiin 150 g mainittua Streptococcus ther-mophilus -jauhetta ja 500 g edellä kuvattua Bifidobacterium 5 infantis -fermentoitua maitoa, ja sekoitettiin noin 10 kg:n fermentoitua maitojuomaa valmistamiseksi, joka sisälsi uuden mikro-organismin ja Bifidobacterium'in eläviä soluja. Juoma lisättiin 40:een yksittäiseen 200 ml:n tilavuuden omaavaan paperisäiliöön. Näin saatu fermentoitu maitojuo-10 ma sisälsi Streptococcus thermophilus'in elävää solumas-
O
saa 6,2 x 10 /ml ja Bifidobacterium infantis'in elävää so-lumassaa 1,3 x 10®/ml pHissa 4,60. Bifidobacterium infantis'in elävien solujen lukumäärä juomassa senjälkeen, kun sitä oli säilytetty 5°C:ssa 7 päivän ajan, oli 3,1 x n 15 10'/ml ja hengissäsäilymisosuus oli 23,8 %.

Claims (8)

20 7 6 372
1. Menetelmä koostumuksen valmistamiseksi, joka sisältää Streptococcus thermophilus'iin kuuluvan uuden mik-5 ro-organismin viljeltyä viljelmää tai siitä eristettyjä eläviä soluja, tunnettu siitä, että viljelty viljelmä saadaan siirrostamalla Streptococcus thermophilus-kantaa FERM BP-351, FERM BP-352, FERM BP-353 ja/tai FERM BP-354 nestemäiseen tai kiinteään viljelyväliaineeseen ja 10 sen jälkeen viljelemällä mainittua mikro-organismia, jonka hapenottokyky on vähintään 30 nanomoolia mikro-organismin kuivattujen solujen milligrammaa kohti minuutissa, mikä määritellään hapenkulutuksen määränä Warburgin manometri-menetelmän mukaisesti määritettynä.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että Streptococcus thermophilus'ilia on seuraavat bakteriologiset ominaisuudet: (A) Hapenottokyky on vähintään 30 nanomoolia mikro-organismin kuivattujen solujen milligrammaa kohti minuu- 20 tissa määriteltynä hapen kulutuksen määränä, joka on määritetty Warburgin manometrimenetelmän mukaisesti (B) 37°C:ssa 48 tunnin ajan M-17 -agarmaljalla aerobisesti inkuboidun bakteerisolun muoto: a. Koko (halkaisija); 0,7-0,9 pm 25 b. Muoto: pyöreä tai soikea, pareittain tai ketjuna (C) 37°C:ssa 48 tunnin ajan M-17 -agarmaljalla aerobisesti muodostuneiden pesäkkeiden muoto: a. Muoto: pyöreä b. Kohoaminen: kupera kehä 30 c. Periferia: sileä d. Koko (halkaisija): 0,5-1,5 mm e. Värisävy: vaikeahko, läpikuultamaton f. Pinta: sileä ja kiiltävä (D) Kaasu: ei tuota 35 (E) Ei kasva alle 20°C:n lämpötilassa (F) Kasvaa 45°C:ssa 76372 (G) Liikkumaton (H) Ei muodosta endosporia (I) Gram-positiivinen (J) Bentsidiini-negatiivinen 5 (K) Katalaasi-negatiivinen (L) Säilyy hengissä kuumennettaessa 65°C:ssa 30 minuutin ajan (M) Ei kasva, kun läsnä on 2 % (W/V) natriumklori- dia 10 (N) Ei kasva maidossa, joka sisältää 0,1 % (W/V) metyleenisinistä (O) Ei kasva pH:ssa 9,6 (P) Tuottaa happoa glukoosista, fruktoosista, sakkaroosista ja laktoosista, mutta ei tuota happoa arabinoosis- 15 ta, ksyloosista, raffinoosista, maltoosista, trehaloosis-ta, inuliinista, mannitolista, sorbitolista, salisiinista eikä glyserolista (Q) Ei tuota ammoniakkia arginiinista.
3. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen menetelmä, 20 tunnettu siitä, että Streptococcus thermophilus on vähintään yksi mikro-organismi, joka on valittu ryhmästä, jonka muodostavat Streptococcus thermophilus M-8202 (FERM BP-315), Streptococcus thermophilus M-8203 (FERM BP-352), Streptococcus thermophilus M-8204 (PERM BP-353) 25 ja Streptococcus thermophilus M-8205 (FERM BP-354).
4. Menetelmä koostumuksen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että koostumus sisältää Streptococcus thermophilus -kannan FERM BP-351, FERM BP-352, FERM BP-353 ja/tai FERM BP-354 eläviä soluja, joiden hapenotto- 30 kyky on vähintään 30 nanomoolia mikro-organismin kuivattujen solujen milligrammaa kohti minuutissa, mikä määritellään hapenkulutuksen määränä V/arburgin manometr imene te 1-män mukaisesti määritettynä, ja anaerobisen mikro-organismin eläviä soluja.
5. Patenttivaatimuksen 4 mukainen menetelmä, tun nettu siitä, että Streptococcus thermophilus1 ilia on seuraavat bakteriologiset ominaisuudet: 22 76372 (A) Hapenottokyky on vähintään 30 nanomoolia mikro-organismin kuivattujen solujen milligrammaa kohti minuutissa määriteltynä hapen kulutuksen määränä, joka on määritetty Warburgin manometrimenetelmän mukaisesti 5 (B) 37°C:ssa 48 tunnin ajan M-17 -agarmaljalla ae robisesti inkuboidun bakteerisolun muoto: a. Koko (halkaisija): 0,7-0,9 pm b. Muoto: pyöreä tai soikea, pareittain tai ketjuna (C) 37°C:ssa 48 tunnin ajan M-17 -agarmaljalla aero-10 bisesti muodostuneiden pesäkkeiden muoto: a. Muoto: pyöreä b. Kohoaminen: kupera kehä c. Periferia: sileä d. Koko (halkaisija):0,5-1,5 mm 15 e. Värisävy: vaikeahko, läpikuultamaton f. Pinta: sileä ja kiiltävä (D) Kaasu: ei tuota (E) Ei kasva alle 20°C:n lämpötilassa (F) Kasvaa 45°C:ssa 20 (G) Liikkumaton (H) Ei muodosta endosporia (I) Gram-positiivinen (J) Bentsidiini-negatiivinen (K) Katalaasi-negatiivinen 25 (L) Säilyy hengissä kuumennettaessa 65°C:ssa 30 mi nuutin ajan (M) Ei kasva, kun läsnä on 2 % (W/V) natriumkloridia (N) Ei kasva maidossa, joka sisältää 0,1 % (W/V) me-tyleenisinistä 30 (O) Ei kasva pH:ssa 9,6 (P) Tuottaa happoa glukoosista, fruktoosista, sakkaroosista ja laktoosista, mutta ei tuota happoa arabinoo-sista, ksyloosista, raffinoosista, maltoosista, trehaloo- sista, inuliinista, mannitolista, sorbitolista, salisii- 35 nista eikä glyserolista 23 7 6 3 7 2 (Q) Ei tuota ammoniakkia arginiinista.
6. Patenttivaatimuksen 4 tai 5 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että Streptococcus thermophilus on vähintään yksi mikro-organismi, joka on valittu ryhmästä, 5 jonka muodostavat Streptoccocus thermophilus M-8202 (FERM BP-351), Streptococcus thermophilus M-8203 (FERM BP-352), Streptococcus thermophilus M-8204 (FERM BP-353) ja Streptococcus thermophilus M-8205 (FERM BP-354).
7. Patenttivaatimusten 4-6 mukainen menetelmä, 10 tunnettu siitä, että anaerobinen mikro-organismi on mikro-organismi, joka kuuluu sukuun Bifidobacterium.
8. Patenttivaatimusten 4-6 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että Streptococcus thermophilus'ia p Q sisältyy koostumukseen konsentraatiossa 1 x 10° - 2 x 103 15 koostumuksen grammaa kohti. 24 7 6 3 7 2
FI834115A 1982-11-09 1983-11-09 Foerfarande foer framstaellning av en komposition innehaollande en ny mikroorganism, som hoer till streptococcus thermophilus. FI76372C (fi)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP57195375A JPS5951997B2 (ja) 1982-11-09 1982-11-09 ストレプトコツカス・サ−モフイルスに属する新規微生物及び該微生物を含有する組成物
JP19537582 1982-11-09

Publications (4)

Publication Number Publication Date
FI834115A0 FI834115A0 (fi) 1983-11-09
FI834115A FI834115A (fi) 1984-05-10
FI76372B true FI76372B (fi) 1988-06-30
FI76372C FI76372C (fi) 1988-10-10

Family

ID=16340118

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FI834115A FI76372C (fi) 1982-11-09 1983-11-09 Foerfarande foer framstaellning av en komposition innehaollande en ny mikroorganism, som hoer till streptococcus thermophilus.

Country Status (5)

Country Link
US (1) US4601985A (fi)
EP (1) EP0112020B2 (fi)
JP (1) JPS5951997B2 (fi)
DE (1) DE3375804D1 (fi)
FI (1) FI76372C (fi)

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CH663322A5 (fr) * 1985-02-28 1987-12-15 Nestle Sa Culture de bifidobacteries resistantes a l'acide.
FR2632968B1 (fr) * 1988-06-15 1991-11-29 Sodima Union Coop Agricoles Procede de selection de clones bacteriens producteurs d'exopolysaccharides et clones producteurs obtenus
RO114686B1 (ro) * 1993-02-11 1999-06-30 Gist Brocades Nv Metoda pentru detectarea de compusi antibacterieni intr-o proba test
US5776524A (en) * 1996-10-30 1998-07-07 The Iams Company Process for treating small intestine bacterial overgrowth in animals
ES2357027T3 (es) 1997-05-30 2011-04-15 Chr. Hansen A/S Método que utiliza una cepa bacteríana de ácido láctico.
ATE338812T1 (de) * 1997-10-17 2006-09-15 Nestle Sa Neuer laktobakterienstamm
US20040023361A1 (en) * 1997-10-17 2004-02-05 Nestec S.A. Lactic acid bacteria producing polysaccharide similar to those in human milk and corresponding gene
EP1443105B1 (en) * 2001-11-05 2010-10-06 Kabushiki Kaisha Yakult Honsha Bacterium of the genus bifidobacterium and fermented foods using the same

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2766176A (en) * 1953-02-11 1956-10-09 George A Jeffreys Process for culturing anaerobic bacteria
DE1948378A1 (de) * 1969-09-24 1971-04-01 Rolf Dr Schuler Verfahren zur Herstellung vitaminierter Milcherzeugnisse
DE1952361A1 (de) * 1969-10-17 1971-04-29 Rudolf Hinterwaldner Verfahren zur Herstellung eines nach einem Reifungsprozess nicht nachsaeuernden Sauermilcherzeugnisses
JPS5283974A (en) * 1976-01-01 1977-07-13 Yakult Honsha Kk Incubation mixture of milk containing living cell of bifidus strain and method of producing same
JPS53121949A (en) * 1977-03-31 1978-10-24 Yakult Honsha Kk Production of drink and food containing bifidobacterium cells
US4339464A (en) * 1978-02-24 1982-07-13 Microlife Technics, Inc. Stabilizer producing Streptococcus thermophilus
DE2939528A1 (de) * 1979-09-28 1981-04-09 Seab GmbH, Basel Verfahren zum herstellen von stichfesten sauermilchprodukten

Also Published As

Publication number Publication date
FI834115A0 (fi) 1983-11-09
DE3375804D1 (en) 1988-04-07
JPS5985288A (ja) 1984-05-17
FI76372C (fi) 1988-10-10
JPS5951997B2 (ja) 1984-12-17
EP0112020B1 (en) 1988-03-02
US4601985A (en) 1986-07-22
EP0112020A3 (en) 1985-05-29
EP0112020A2 (en) 1984-06-27
EP0112020B2 (en) 1993-06-02
FI834115A (fi) 1984-05-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US4187321A (en) Method for producing foods and drinks containing bifidobacteria
FI76373C (fi) Foerfarande foer framstaellning av en odling som innehaoller levande cellmassa av bifidobakterier och mjoelksyrabakterier.
Guetouache et al. Characterization and identification of lactic acid bacteria isolated from traditional cheese (Klila) prepared from cows milk
MX2008009568A (es) Novedosa bacteria de acido lactico.
CN112852684B (zh) 一株植物乳杆菌Lactobacillus plantarum菌株Y388及其应用
US4087559A (en) Fermented milk containing viable bifidobacteria
US4870020A (en) Preparation of compositions including acid-resistant bifidobacteria
Kneifel et al. An X-glu based agar medium for the selective enumeration of Lactobacillus acidophilus in yogurt-related milk products
EP0281467B1 (en) Method of preparation of bifidobacteria-containing fermented milk
FI76372B (fi) Foerfarande foer framstaellning av en komposition innehaollande en ny mikroorganism, som hoer till streptococcus thermophilus.
Sakai et al. Mortality of bifidobacteria in boiled yogurt
CN109423467A (zh) 一种乳酸高产的植物乳杆菌及其在食品和饲料领域的用途
JP4794592B2 (ja) 新規乳酸菌
JP3209784B2 (ja) 新規ラクトバチルス属微生物
Rada Effect of Kluyveromyces marxianus on the growth and survival of bifidobacteria in milk
玉井洋一 et al. Antimutagenic Activity of the Milk Fermented by Mixed-Cultured with Various Lactic Acid Bacteria and a Yeast.
Djeghri-Hocine et al. Growth of lactic acid bacteria on oilseed crop pea-and chickpea-based media
KR790001821B1 (ko) 비휘이도 생균을 함유하는 발효유제품의 제조법
JP3783187B2 (ja) 新規なラクトバチラス属乳酸菌およびその培養物
KR19980066785A (ko) 김치로부터 분리한 락토바실러스 펜토서스(Lactobacillus pentosus) LSDM
KR0157757B1 (ko) 내산성 및 내담즙성 비피도박테리움의 분리방법
KR790001822B1 (ko) 비휘이도 생균을 함유하는 발효유 제품의 제조법
Mbaeyi et al. Microbiological Screening of a Starter Culture of Probiotic Status from Formulated Non-Dairy Yoghurt Analogue from Natural Fermentation of Soymilk-Achamilk Blends
Reichart et al. Rapid method for selective enumeration of Bifidus essensis in ACTIVIA yogurts
Phetsomphou et al. Dairy Foods: Microbiology

Legal Events

Date Code Title Description
MA Patent expired

Owner name: MORINAGA MILK INDUSTRY CO.,_LTD.