NOVEDOSA BACTERIA DE ÁCIDO LÁCTICO CAMPO TÉCNICO La presente invención se refiere a novedosas bacterias de ácido láctico que pertenecen al género Lactococcus, a polvos bacterianos que contienen las bacterias de ácido láctico, a una composición farmacéutica que contienen las bacterias de ácido láctico y a un agente para control de la función intestinal que contiene las bacterias de ácido láctico y a un método para promover el crecimiento de Bifidobacterium longum y mejorar su supervivencia utilizando las bacterias de ácido láctico. Se reclama prioridad de la solicitud de patente japonesa No. 2007-032645, presentada en febrero 13, 2007, los contenidos de la cual aquí se incorporan por referencia. TÉCNICA PREVIA Se conoce que las bacterias de ácido láctico tales como bacterias del género Lactococcus o bacterias del género Bifidobacterium (a continuación abreviado como "Bifidobacterium") tienen una actividad reguladora de la función intestinal, actividad inmunoestimuladora y actividad anti cáncer. De acuerdo con esto, bacterias de ácido láctico tienden a menudo a formularse en alimentos de acuerdo con un aumento en la conciencia por la salud de los consumidores. En particular, Bifidobacterium tal como Bifidobacterium longum son unas de las cepas bacterianas predominantes en la microflora intestinal formada en el tracto intestinal humano, y demandas por leche fermentada u otros productos alimenticios que contienen Bifidobacterium viable están creciendo. Bifidobacterium exhibe una pobre potencia de proliferación en medio de leche. De acuerdo con esto, diversas sustancias que estimulan el crecimiento en
general se formulan en leche fermentada de manera tal que Bifidobacterium contenida ahí está a un contenido constante tal como 1 x 107 CFU/ml. Sin embargo, las sustancias que estimulan el crecimiento en general son costosas y pueden deteriorar el gusto. Además, la conservación de Bifidobacterium bajo condiciones acídicas es difícil y tiende a resultar en su muerte. De esta manera, el conteo viable de Bifidobacterium en productos de leche fermentada disminuye con velocidad acelerada durante la distribución de los productos de leche fermentada. De acuerdo con esto, se espera que una promoción de crecimiento de Bifidobacterium o una mejora de su supervivencia durante almacenamiento no sólo permitirá preparación de leche fermentada que contiene una gran cantidad de Bifidobacterium viable, sino también la preparación de leche fermentada manteniendo una cantidad abundante de Bifidobacterium viable de inmediatamente después de preparación, hasta ser consumida. Diversos métodos para promover el crecimiento en Bifidobacterium o mejorar su supervivencia durante almacenamiento por fermentación con Bifidobacterium y otras bacterias de ácido láctico sin agregar sustancias que estimulen el crecimiento o semejantes quedan descritas. Por ejemplo, (1 ) yogurth que contiene Lactococcus lactis subsp. lactis, Lactococcus lactis subsp. cremoris, y Bifidobacterium, y un método para preparar el yogurth se ha descrito (ver por ejemplo, Documento de Patente 1 ), como un método para promover el crecimiento de Bifidobacterium para preparar leche fermentada. Por ejemplo, (2) un método para fermentar leche con Bifidobacterium, incluyendo cultivar Bifidobacterium breve junto con Lactococcus lactis subsp. lactis, que no forma diacetilo ni acetoína, en un medio que contiene leche como su componente principal se ha descrito (ver por ejemplo, Documento de Patente 2),
como un método para mejorar la supervivencia de Bifidobacterium durante almacenamiento de leche fermentada. Documento de Patente 1 : Publicación de Patente Japonesa Número
3,364,491. Documento de Patente 2: Publicación de Patente Japonesa Número
3,068,484. DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN [Problemas a Resolver por la Invención] Aunque el crecimiento de Bifidobacterium es promovido y el tiempo de fermentación es recortado de acuerdo con el método anterior mencionado (1 ), no hay descripción respecto a la supervivencia de Bifidobacterium durante almacenamiento en el Documento de Patente 1. En contraste, aunque tanto los efectos estimulantes de crecimiento como los efectos de mejora de supervivencia se reconocen al utilizar una mezcla compuesta de un Bifidobacterium específico y una bacteria de ácido láctico especifica de acuerdo con el método anteriormente mencionado (2), no hay descripción respecto a Bifidobacterium diferente a Bifidobacterium breve tal como Bifidobacterium longum, que en general se formula en alimentos. La presente invención tiene como su objetivo el proporcionar bacterias de ácido láctico que estimulan el crecimiento de Bifidobacterium, de preferencia Bifidobacterium longum y mejorar su supervivencia durante almacenamiento. La presente invención tiene como objetivo el suministrar polvos bacterianos que contienen las bacterias de ácido láctico, una composición farmacéutica que contiene la bacteria de ácido láctico, un agente que controla la
función intestinal que contiene las bacterias de ácido láctico, y un método para promover el crecimiento de Bifidobacterium longum y mejorar su supervivencia utilizando la bacteria de ácido láctico. [Medios para Resolver los Problemas] Los inventores de la presente invención investigaron intensamente para resolver los problemas anteriormente mencionados y realizar una prueba de fermentación por co-cultivo con Bifidobacterium longum para encontrar cepas bacterianos de ácido láctico que exhiben excelente fermentabilidad en medio de leche descremada reconstituido al 10% (P/P). Como resultado, los inventores encontraron que cepas de bacterias de ácido láctico que pueden promover el crecimiento de Bifidobacterium longum a un conteo viable de 5x108 CFU/g cuando el pH es 4.4 a 4.6, y mejorar la velocidad de supervivencia de Bifidobacterium longum a 30% o más después del fin de la fermentación, rápido enfriamiento, y dos semanas de almacenamiento a 10°C. De esta manera, los inventores completaron la presente invención. Esto es, la presente invención proporciona bacterias de un género Lactococcus que tiene las siguientes propiedades bacteriológicas: (1 ) fermentabilidad que cuaja un medio de leche descremada reconstituido al 10% (P/P) cuando se cultiva a una temperatura de 25°C at 37°C por 16 horas; (2) Propiedades promotoras de crecimiento de Bifidobacterium longum que llevan a un conteo viable de Bifidobacterium longum de 5x108 CFU/g o más, cuando se co-cultiva con Bifidobacterium longum en el medio de leche descremada reconstituido al 10% (P/P) hasta que su pH es 4.4 o 4.6; y (3) propiedades de mejora de supervivencia en Bifidobacterium
longum durante almacenamiento, lo que llevan a una velocidad de sobrevivencia de Bifidobacterium longum de 30% o más, después de co- cultivo con Bifidobacterium longum en el medio de leche descremada reconstituido al 10% (P/P) hasta que su pH es 4.4 o 4.6, enfriamiento rápido, y dos semanas de almacenamiento a 10°C. La presente invención también proporciona las bacterias del género Lactococcus caracterizado porque la bacteria no tiene habilidad para fermentar xilosa y producir ni diacetilo ni acetoina. La presente invención también proporciona las bacterias del género Lactococcus, en donde las bacterias son Lactococcus lactis subsp. lactis. La presente invención también proporciona las bacterias del género Lactococcus, en donde al menos una cepa bacteriana de Bifidobacterium longum se eligen del grupo que consiste de Bifidobacterium longum FERM BP-7787 y la cepa tipo Bifidobacterium longum ATCC 15707. La presente invención también proporciona las bacterias del género Lactococcus, en donde las bacterias son Lactococcus lactis subsp. lactis MCC852 (FERM BP-I 0742). La presente invención también proporciona las bacterias del género Lactococcus, en donde las bacterias son Lactococcus lactis subsp. lactis MCC857 (FERM BP-I 0757). La presente invención también proporciona las bacterias del género Lactococcus, en donde las bacterias son Lactococcus lactis subsp. lactis MCC859 (FERM BP-I 0744). La presente invención también proporciona las bacterias del género Lactococcus, en donde las bacterias son Lactococcus lactis subsp. lactis MCC865 (FERM BP-I 0745).
La presente invención también proporciona las bacterias del género Lactococcus, en donde las bacterias son Lactococcus lactis subsp. lactis MCC866 (FERM BP-10746). La presente invención también proporciona polvos bacterianos que contienen cualquiera de las bacterias anteriormente mencionadas del género Lactococcus. La presente invención también proporciona una composición farmacéutica que contiene cualquiera de las bacterias anteriormente mencionadas del género Lactococcus. La presente invención también proporciona cualquiera de las bacterias anteriormente mencionadas del género Lactococcus. La presente invención también proporciona un método para promover crecimiento de Bifidobacterium longum y mejorar su supervivencia incluyendo utilizar cualquiera de las bacterias anteriormente mencionadas del género Lactococcus. [Efectos de la Invención] Las bacterias del género Lactococcus de conformidad con la presente invención, y los métodos para promover el crecimiento de Bifidobacterium longum y mejorar su supervivencia de conformidad con la presente invención logran mejora significantes del crecimiento de Bifidobacterium longum y su supervivencia durante almacenamiento, y por lo tanto productos de leche descremada que contienen una gran cantidad de Bifidobacterium longum son producidos más eficientemente que antes. Además, el conteo viable de Bifidobacterium longum en productos de leche fermentada se mantiene a un nivel suficiente incluso durante distribución. Los productos de leche fermentada aquí producidos exhiben elevados
efectos reguladores de función intestinal y son útiles para el control de la salud. MEJOR MODO PARA LLEVAR A CABO LA INVENCIÓN Bacterias de un género Lactococcus, particularmente Lactococcus lactis subsp. lactis, de conformidad con la presente invención tienen las propiedades (1 ), (2), y (3). La propiedad (1 ) se refiere a la capacidad de fermentación. Si las bacterias de ácido láctico pueden proliferar rápidamente y tener una fuerte capacidad de fermentación, suficiente para cuajar un medio de leche descremada reconstituido al 10% (P/P) cuando se cultiva a una temperatura entre 25°C y 37°C por 16 horas, las bacterias de ácido láctico pueden promover efectivamente el crecimiento de Bifidobacterium longum cuando se prepara leche fermentada. Cómo se utiliza aquí, la frase "cuajar un medio de cultivo" se refiere a un fenómeno en el que el pH del medio de cultivo disminuye por debajo de un punto isoeléctrico de su proteína de leche por fermentación ácida y de esta manera la proteína de leche se aglomera y se cuaja en el medio de cultivo. El "medio de leche descremada reconstituido al 10% (P/P)" puede prepararse por ejemplo al disolver 10% en masa leche en polvo descremada (fabricado por MORINAGA MILK INDUSTRY eo., LTD., por ejemplo) en agua. Aunque el intervalo de temperatura adecuado para fermentación con bacterias del género Lactococcus en general está entre 200e y 300e, la bacteria del género Lactococcus de conformidad con la presente invención exhibe una fuerte capacidad de fermentación a una temperatura de entre 25°C y 37°C. En otras palabras, la bacteria del género Lactococcus de conformidad con la presente invención exhibe una capacidad de fermentación suficiente dentro de un intervalo de temperatura adecuado para fermentación con Bifidobacterium longum (300e a
400e). La propiedad (2) se refiere a propiedades promotoras de crecimiento en Bifidobacterium longum. Un medio de leche tal como medio de leche descremada reconstituido al 10% (P/P) exhibe excelente gusto, sensación en la boca, y apariencia extema, cuando su pH es aproximadamente 4.6, caseína si otros componentes ahí contenidos en general se precipitan y el medio de cultivo se cuaja por completo. De acuerdo con esto, la fermentación en general se detiene por rápido enfriamiento o semejante cuando él pH alcanza aproximadamente 4.6, para preparar los productos de leche fermentada. Por lo tanto, las bacterias de ácido láctico que tiene las propiedades promotoras de crecimiento que pueden llevar el conteo viable de Bifidobacterium longum tienen un alto conteo de 5 x 108 CFU/g o más cuando se co-cultivan con Bifidobacterium longum en el medio de leche descremada reconstituido al 10% (P/P) hasta que su pH es 4.4 a 4.6 puede aumentar efectivamente el conteo viable de Bifídobacterium longum en leche fermentada al tiempo de preparación de la leche fermentada. La propiedad (3) se refiere a las propiedades que mejoran la supervivencia de Bifidobacterium longum durante almacenamiento. El período para conservación de calidad de los productos de leche fermentada en general es de aproximadamente dos semanas cuando se almacena a 10°C o menos. De acuerdo con esto, leche fermentada que mantiene un conteo viable suficiente de Bifidobacterium longum incluso en un punto extremo de su periodo de conservación de calidad puede producirse, siempre que las bacterias de ácido láctico tengan las propiedades que mejoran la supervivencia durante almacenamiento pueden llevar a la velocidad de supervivencia de Bifidobacterium longum que es de 30% o más después de co-cultivo con Bifidobacterium longum en el medio de leche descremada
reconstituido al 10% (P/P) hasta que su pH es 4.4 a 4.6, rápido enfriamiento y dos semanas de almacenamiento a 10°C. Las bacterias del género Lactococcus de conformidad con la presente invención pueden prepararse de acuerdo con el siguiente método, por ejemplo. Primero, se aislan cepas bacterianas de diversas muestras y cepas que exhiben excelente capacidad de fermentación en el medio de leche descremada reconstituido al 10% (P/P) más específicamente capacidad de fermentación suficiente para cuajar el medio de leche descremada reconstituido al 10% (P/P) cuando se cultivan a una temperatura de 25 a 37°C por 16 horas, se eligen de las cepas bacterianas aisladas. Después, las cepas bacterianas selectas se co-cultivan con Bifidobacterium longum, y cepas bacterianas que tienen propiedades promotoras de crecimiento de Bifidobacterium longum y sus propiedades de mejora de supervivencia durante almacenamiento definidas como las propiedades anteriormente mencionadas (2) y (3) se eligen. Es preferible que cepas bacterianas que no tienen una habilidad para fermentar xilosa y producir ni diacetilo ni acetonina sean adicionalmente seleccionadas. A continuación, la presente invención se explicará con más detalle. 1. Aislamiento de cepas bacterianas. A fin de aisla cepas bacterianas que tienen las propiedades anteriormente mencionadas del mundo natural, los presentes inventores recolectaron muestras del mundo natural en Japón, diluyeron las muestras con un amortiguador de dilución anaeróbico ("The World of Enterobacteria" publicado por Soubunsha Co., Ltd., escrito por Tomotari Mitsuoka, Pag 322, 1980: a continuación abreviada como "Reference 1 ti), inocularon las muestras diluidas en cada placa de
caldo de hígado Briggs (ver la referencia anteriormente mencionada 1 , Pag 319), y después cultivaron las muestras inoculadas a 30°C bajo condiciones anaeróbicas. Entre las colonias así obtenidas, cepas bacterianas que muestran características morfológicas de bacterias de estreptococos se reconocieron como bacterias Gram-positivas por observación en microscopio de especímenes aplicados, fueron seleccionadas. Las cepas selectas cada una fueron inoculadas por rallado y cada placa plana de agar BL y después cultivaron repetidamente bajo condiciones anaeróbicas en la misma forma que se describió anteriormente para obtener cepas bacterianas puramente aisladas. Las cepas bacterianas aisladas se sometieron a una prueba de fermentación en un medio de leche descremada reconstituido al 10% (P/P) como se describió a continuación para obtener 20 cepas bacterianas con capacidad de fermentación definida como la propiedad anteriormente mencionada (1 ). Después, las cepas bacterianas obtenidas se co-cultivaron con Bifidobacterium longum para obtener 5 cepas bacterianas que tienen tanto las propiedades promotoras de crecimiento que desarrollan el conteo viable de Bifidobacterium longum a un pH de 4.4 a 4.6 a 5x108 CFU/g o mas y las propiedades que mejoran la capacidad de supervivencia durante almacenamiento que elevan la velocidad de supervivencia de Bifidobacterium longum a 30% o mas cuando se almacenan a 10°C por dos semanas después de rápido enfriamiento a pH de 4.4 a 4.6. Las 5 cepas bacterianas se denominan como "MCC852", "MCC857", "MCC859", "MCC865", y "MCC866", respectivamente. 2. Propiedades bacteriológicas Las propiedades bacteriológicas de las 5 cepas bacterianas se ilustrarán a continuación. Las pruebas para determinar las propiedades bacteriológicas se realizaron con referencia al Bergey's Manual of Systematic
Bacteriology editado por Peter H. A. Sneath, Vol. 2, publicado por Williams and Wilkins Company, 1986). (I) Morfología bacteriana (observada a través de un microscopio óptico después de cultivo anaeróbico en una placa de agarre L a 30°C por 72 horas)
Tamaño: 1 to 2 !lm (diámetro) Morfología: Bacterias de Estreptococos (II) Tinción Gram: Positiva (III) Leche-Litmo: cuajada (IV) Formación de endoesporas: Negativa (V) Producción de gas de glucosa: Negativa (VI) Movilidad: Negativa (VII) Actividad de Catalasa: Negativa (VIII) Prueba de arginina descarboxilasa: Positiva (IX) Producción de gas a partir de ácidos cítrico: Negativa (X) Susceptibilidad de temperatura (a 60°C por 30 minutos y a 65°C por 35 minutos): Positiva en ambos casos. (XI) Producto de degradación de glucosa: Ácido L-láctico. Cepa Bacteriana MCC MCC MCC MCC MCC ATCC 852 857 859 865 866 19435
XII Temperatura 10°C +S +S + +S +S +S de 40°C + + + + + + Crecimiento 45°C - - - - - - XIII Resistencia a 2% + + + + + + Sal 3% + + + + + + 4% + + + + + +
6.5% (+)S - - (+)S (+)S - XIV Resistencia a 9.2 + + + + + + PH 9.6 +S + + + - - XV Resistencia a 0.01% + + + + + + Azul de 0.1% + + + + + + Metileno 0.3% ± +s + +s + - XVI Capacidad de producción + + + + + + de amoniaco a partir de arginina XVII FermenArabinosa - - - - - - tación Xilosa - - - - - + de Ramnosa - - - - - - azúcar Ribosa + + +s + + + Glucosa + + + + + + Mañosa + + + + + + Fructosa + + + + + + Galactosa + + + + + + Sucrosa - - - - - - Maltosa + + + + + + Celobiosa + + + + + + Lactosa + + + + + + Tria losa + + + + + + Melibiosa - - - - - - Rafinosa - - - - - - Melezitosa - - - - - -
Dextrina + + + + + + Almidón +S + - + + ±s Glicógeno - - - - - - Inulina - - - - - - Manitol (+)S + + - - - Sorbitol - - - - - - Inositol - - - - - - Esculina + + (+)S + + +s Salicina + + +s + + + Amigdalina - - (+)S (+)S - Metil - - - - - - glucósido Gluconato de - + + - - - sodio +: Positivo. (+): Ligeramente-positivo. ±: Ligeramente-positivo en extremo. -: Negativo s: Reacción lenta Las propiedades bacteriológicas anteriormente mencionadas (I) a (XI) son comunes a todas las 5 cepas bacterianas de la cepa tipo Lactoeoccus lactis subsp. lactis-type strain ATCC 19435. La temperatura de crecimiento (XII) la resistencia a sal (XIII), la resistencia a pH (XIV), la resistencia a azul de metileno (XV), la capacidad de producción de amoniaco a partir de arginina (XVI), y la capacidad de fermentación de azúcar (XVII) de cada cepa se ilustran en la tabla 1. La fermentación de azúcar se examina respecto a 28 tipos de azúcar utilizando un medio para fermentación de azúcar descrito por Mitsuoka (Tomotari Mitsuoka, The
bacteriology of lactic acid bacteria", examen clínico 18, páginas 1 163 a 1 172, 1974). Es aparente de los resultados anteriormente mencionados que todas las 5 cepas bacterianas tienen las propiedades bacteriológicas comunes a las cepas bacterianas Laetococeus lactis. De esta manera, las 5 cepas bacterianas se han reconocido como las cepas bacterianas Lactococcus lactis. Por otra parte, es aparente de las propiedades bacteriológicas anteriormente mencionadas (XII) a (XVII) que las 5 cepas bacterianas son diferentes de la cepa tipo Lactococcus lactis ya que las 5 cepas bacterianas no tienen capacidades algunas para fermentar xilosa. Las 5 cepas bacterianas se depositaron por el solicitante en el Depósito de Organismos de Patente Internacional, Instituto Nacional de Ciencia y Tecnología Industrial Avanzada (International Patent Organism Depositan/, National Institute of Advanced Industrial Science and Technology) (Central 6, 1 -1 , Higashi 1-Chome Tsukuba-shi, Ibaraki-ken, Japón (número de código postal: 305-8566)) como cepas bacterianas novedosas. El número de acceso de lactis subsp. lactis MCC852 es FERM BP-10742, el de Lactococcus lactis subsp. lactis MCC857 es FERM BP-10757, el de Lactococcus lactis subsp. lactis MCC859 es FERM BP-10744, el de Lactococcus lactis subsp. lactis MCC865 es FERM BP-10745, y el de Lactococcus lactis subsp. lactis MCC866 es FERM BP-I0746. Las Lactococcus lactis subsp. lactis MCC852, 859, 865, y 866 se depositaron en Diciembre 1 , 2006, y la Laetococeus lactis subsp. lactis MCC857 se depositó en Enero 10, 2007. 3. Prueba respecto a capacidad de fermentación en medio de leche descremada reconstituido al 10% (P/P). Un medio de leche descremada reconstituido al 10% (P/P) preparado al disolver polvos de leche descremada (fabricados por MORINAGA MILK
INDUSTRY CO., LTD.) en agua, se esterilizó a 95°C por 30 minutos. Cada iniciador de cepas bacterianas al 3% (VA/) fue inoculado en el medio de leche descremada reconstituido y después cultivado a 25,30, o 37°C por 16 horas. Después de que el medio de cultivo obtenido se enfrió rápidamente, se observó el estado cuajado, y el pH y conteo viable de las bacterias de ácido láctico contenidas se midieron. El conteo viable se midió utilizando agar para conteo de placas planas BCP comercialmente disponible (fabricado por Eiken Chemical Co., LTD.). Los resultados de medición se ilustran en la Tabla 2. La cepa tipo Lactococcus lactis subsp. Lactis ATCC 19435 descrita en el documento de Patente 2 se utilizó como una cepa de control. TABLA 2
Tabla 2 (continúa)
Cepa BacCondiciones de a 37 ° C por 16 horas teriana Cultivo a 30°C por 16 horas (continúa) Conteo Viable pH (CFU/g) MCC852 Cuajado 8.0x108 4.63 Cuajado MCC857 Cuajado 1.1x109 4.5 Cuajado MCC859 Cuajado 8.1x108 4.59 Cuajado MCC865 Cuajado 8.8x 08 4.63 Cuajado MCC866 Cuajado 8.5x108 4.61 Cuajado ATCC 19435 Sin cuajar 3.2x108 5.51 Sin cuajar Cuando cada cepa bacteriana de Lactococcus lactis subsp. lactis MCC852, 857, 859, 865, y 866, esto es, la bacteria del género Lactococcus de conformidad con la presente invención se utilizó, el pH del medio de cultivo se disminuyó a 4.4 a 4.6 bajo todas las condiciones de temperatura, y el medio de cultivo se cuajó. Además, el conteo viable de las bacterias de ácido láctico contenidas fue aproximadamente 1 x 1 09 CFU/g, y de esta manera se reconocieron condiciones de capacidad de fermentación y proliferación favorable. Por otra parte, cuando la cepa tipo Lactococcus lactis subsp. lactis ATCC 19435 se utilizó, el pH del medio de cultivo fue 5.5 o más y el medio de cultivo no se cuajó bajo cualesquiera condiciones de temperatura. Además, el conteo viable de las bacterias de ácido láctico fue significativamente menor a 30°C o superior, particularmente que el de bacterias del género Lactococcus de conformidad con la presente invención.
4. Prueba de co-cultivo con Bifidobacterium longum. (1 ) la prueba de co-cultivo con Bifidobacterium longum FERM BP- 7787. La cepa de tipo Lactococcus lactis subsp. Lactis ATCC 19435 se utiliza como una cepa de control. Primero, cada cultivo de las 5 cepas bacterianas (Lactococcus lactis subsp. lactis CC852, 857, 859, 865, y 866) y Bifidobacterium longum FERM BP-7787 se prepara de acuerdo con un método descrito en el siguiente Ejemplo 1. La Bifidobacterium longum FERM BP-7787 fue aceptada por el Depósito de Organismos de Patente Internacional, Instituto Nacional de Ciencia y Tecnología Industrial Avanzada (International Patent Organism Depositary, National Institute of Advanced Industrial Science and Technology (Central 6, 1-1 , Higashi 1-Chome Tsukuba-shi, Ibaraki-ken, JAPÓN (número de código postal: 305-8566)) en octubre 31 , 2001. Además, 1 ,000 mL de un medio de leche descremada reconstituido al 10% (P/P) que contiene extracto de levadura al 0.2% (P/P) (fabricado por DiFco) se esterilizó a 90°C por 30 minutos. Después, 30 mL de un cultivo de la cepa tipo Lactococcus lactis subsp. Lactis ATCC 19435 se inocula en el medio de leche descremada reconstituido y cultiva a 30°C por 16 horas para preparar un cultivo de la cepa tipo Lactococcus lactis subsp. Lactis ATCC 19435. 1 % (V/V) de cada cultivo de la cepa Lactococcus lactis subsp. Lactis preparado como con anterioridad se inoculó con 1 % (VA/) del cultivo de Bifidobacterium longum FERM BP-7787 en un medio de leche descremada reconstituido a 10% (P/P) esterilizado a 90°C por 10 minutos, y la mezcla se cultivó a 37°C por 16 horas para obtener leche fermentada. La leche fermentada se enfría
rápidamente y su pH y el conteo viable de Bifidobacterium longum contenido de midieron. Después, la resultante se almacenó adicionalmente a 10°C por dos semanas, y el conteo viable de Bifidobacterium longum se midió a una semana y dos semanas después de inicio de almacenamiento. El conteo viable de Bifidobacterium longum se midió utilizando placas planas de agar TOS propionato (fabricadas por YAKULT PHARMACEUTICAL INDUSTRY CO., LTD.). Los resultados de medición se ilustran en la tabla 3. TABLA 3.
Cada leche fermentada preparada al utilizar las Lactococcus lactis subsp. lactis MCC852, 857, 859, 865, o 866 tuvieron un pH de aproximadamente 4.5 y un conteo viable de Bifidobacterium longum de 5x108 CFU/g o más después de fermentación. Cuando toda la leche fermentada se almacenó a 10°C por dos
semanas, la tasa de supervivencia de Bifidobacterium longum fue 80% o más. Por otra parte, la fermentación de leche no procede con la cepa tipo Lactococcus lactis subsp. Lactis ATCC 19435, y el pH de la leche fermentada fue de 5.0 o más y su almacenamiento a 10°C fue imposible. Además, el conteo viable de Bifidobacterium longum después del final de la fermentación fue aproximadamente x 108 CFU/g, que fue significativamente pequeño en comparación con el caso en donde se emplearon las bacterias del género Lactococcus de conformidad con la presente invención. De esta manera, es aparente que las 5 cepas bacterianas (Lactococcus lactis subsp. lactis MCC852, 857, 859, 865, y 866) promueven en forma excelente el crecimiento de Bifidobacterium longum FERM BP-7787 y mejoran su tasa de supervivencia durante almacenamiento en comparación con otras cepas bacterianas conocidas que pertenecen a Lactococcus lactis subsp, lactis. También es aparente que el caso en donde Bifidobacterium longum se co-cultiva con Lactococcus lactis subsp. Lactis, que no forma ni diacetilo ni acetoina como se describió en el documento de patente 2 es diferente al caso donde Bifidobacterium se emplea, y ni estos efectos promotores de proliferación de Bifidobacterium longum ni lo efectos que mejoran su supervivencia como se describió en el documento de patente 2 se exhiben. (2) Prueba de co-cultivo con cepa tipo Bifidobacterium longum ATCC
15707. Las propiedades promotoras de crecimiento Bifidobacterium longum de las bacterias del género Lactococcus de conformidad con la presente invención y sus propiedades de mejora de supervivencia Bifidobacterium durante
almacenamiento se verificaron utilizando Bifidobacterium longum FERM BP-7787 y la cepa tipo Bifidobacterium longum ATCC 15707. Primero, un cultivo de Lactococcus lactis subsp. lactis MCC857 y un cultivo de Bifidobacterium longum FERM BP-7787 se prepararon de acuerdo con un método descrito en el siguiente ejemplo 1. Además, un cultivo mixto de Streptococcus thermophilus y Lactobacillus bulgaricus se prepara de acuerdo con un método descrito en el siguiente ejemplo 21. Además, un medio de leche descremada al 1 1% (P/P) que contiene extracto de levadura al 0.2% (P/P) se esterilizó a 90°C por 30 minutos. Después, 10% (V/V) de la cepa tipo Bifidobacterium longum ATCC 15707 se inocula como un iniciador en el medio de leche descremada, y cultiva a 37°C hasta que el pH alcanza 4.6 para preparar un cultivo de cepa tipo Bifidobacterium longum ATCC 15707. 1 % (V/V) del cultivo de Lactococcus lactis subsp. lactis MCC857 preparado como se describió anteriormente, ya sea 1 % (V/V) del cultivo de Bifidobacterium longum FERM BP-7787 o 1 % (V/V) de la cepa de tipo Bifidobacterium longum ATCC 15707, y 0.01 % (V/V) del cultivo mixto de Streptococcus thermophilus y Lactobacillus bulgaricus se inocularon en medio de leche descremada reconstituido al 10% (P/P) esterilizada a 90°C por 10 minutos y cultivado a 37°C hasta que el pH alcanza 4.6 para obtener leche fermentada. Después de que la leche fermentada obtenida se enfrió rápidamente, el conteo viable de Bifidobacterium longum se midió. Además, la leche fermentada se almacenó a 10°C por dos semanas y el conteo viable de Bifidobacterium longum se midió a una semana o a dos semanas después de inicio de almacenamiento. Por otra parte, cualquiera 1.5% (V/V) del cultivo de Bifidobacterium
longum FERM BP-7787 preparado como se describió anteriormente o 1.5% (VA/) de cultivo de la cepa tipo Bifidobacterium longum ATCC 15707, y 0.4% (VA/) del cultivo mixto de Streptococcus thermophilus y Lactobacillus bulgaricus se inocularon en un medio de leche descremada reconstituido al 10% (P/P) esterilizado a 90°C por 10 minutos y cultivado hasta que el pH alcanzó 4.6 para obtener leche fermentada como un control. El conteo Bifidobacterium viable en la leche fermentada se midió en la misma forma. Los resultados de medición se ilustran en la tabla 4. TABLA 4.
Ambos conteos viables de Bifidobacterium longum FERM BP-7787 y cepa tipo Bifidobacterium longum ATCC 15707 en leche fermentada se incrementaron significativamente por co-cultivo con Lactococcus lactis subsp. lactis MCC857. Además, la tasa de supervivencia de todo Bifidobacterium longum almacenado a 10°C por dos semanas fue 30% o más: el de Bifidobacterium longum FERM BP-7787 fue 71 % y el de la cepa tipo Bifidobacterium longum ATCC 15707
fue 31 %. En contraste, la tasa de supervivencia de Bifidobacterium longum FERM BP-7787 almacenado a 10°C por dos semanas después de cultivo en la ausencia de Lactococcus lactis subsp. lactis MCC857 fue 20% y no hubo cepa tipo Bifidobacterium longum ATCC 15707 viable almacenada a 10°C por dos semanas después de cultivo en la ausencia de Lactococcus lactis subsp. lactis MCC857 fue detectada. Se obtuvieron los mismos resultados cuando todo Lactococcus lactis subsp. lactis MCC852, 859, 865, y 866 se utilizaron en lugar de Lactococcus lactis subsp. lactis MCC857. De esta manera, es aparente que todas Lactococcus lactis subsp. lactis MCC852, 857, 859, 865, y 866 tienen tanto propiedades excelentes para promover el crecimiento de las cepas de Bifidobacterium longum diferentes a Bifidobacterium longum FERM BP-7787 que tienen una excelente capacidad de supervivencia durante almacenamiento y propiedades para mejorar la supervivencia de las cepas Bifidobacterium longum diferentes a Bifidobacterium longum FERM BP-7787 durante almacenamiento. 5. Prueba comparativa con mezcla de Lactococcus lactis subsp. lactis y Lactococcus lactis subsp. Cremoris descritas en el documento de patente 1. El cultivo de Lactococcus lactis subsp. lactis MCC857, el cultivo de la cepa tipo Bifidobacterium longum ATCC 15707, y el cultivo mixto de Streptococcus thermophilus y Lactobacillus bulgaricus se prepararon de acuerdo con el método descrito previamente en 4(2). 1 % (V7V) del cultivo de Lactococcus lactis subsp. lactis MCC857, 1 % (V/V) del cultivo de la cepa tipo Bifidobacterium longum ATCC 15707, y 0.01 % (V/V)
del cultivo mixto de Streptococcus thermophilus y Lactobacillus bulgaricus, como se preparó en la forma anterior, se inocularon en un medio de leche descremada reconstituido a 10% (P/P) esterilizado a 90°C por 10 minutos. La mezcla se cultivó a 37°C hasta que el pH alcanzó 4.6 para preparar leche fermentada. La leche fermentada se enfrió rápidamente y el conteo viable de Bifidobacterium longum contenido se midió. En contraste, 1% (V/V) de la cepa tipo Bifidobacterium longum ATCC 15707 preparada en la forma anterior y 2% (V/V) de la mezcla "EZAL MA14" compuesta por Lactococcus lactis subsp. lactis y Lactococcus lactis subsp. Cremoris (fabricado por Rhodia) se inocularon en un medio de leche descremada reconstituido al 10% (P/P) esterilizada a 90°C por 10 minutos, como un control. La mezcla se cultivó a 38°C hasta que el pH alcanzó 4.6 para preparar leche fermentada. El conteo viable de Bifidobacterium longum en la leche fermentada se midió. La mezcla "EZAL MA14" corresponde a un producto "EZAL MR014" (fabricado por Rhodia) descrito en el documento de patente 1. El conteo de Bifidobacterium longum en leche fermentada, preparado utilizando Lactococcus lactis subsp. lactis MCC857 fue 5.5x108 CFU/g. En contraste, no se detecto Bifidobacterium longum viable en una solución diluida que se obtiene al diluir leche fermentada que se prepara utilizando la mezcla "EZAL MA14" en 106 veces, y de esta manera el conteo viable de Bifidobacterium longum presente en la leche fermentada se revelo que es 1 x 106 CFU/g o menos. En otras palabras, se reveló que no se lograron efectos de promover el crecimiento de Bifidobacterium ni efectos de acortar el tiempo de fermentación, como se menciona en el documento de patente 1 , cuando se co-cultivó Bifidobacterium longum con Lactococcus lactis subsp. lactis y Lactococcus lactis
subsp. cremoris. Como se describió anteriormente, las bacteria del genero Lactococcus de conformidad con la presente invención exhiben fuerte capacidad de fermentación en el medio de leche descremada reconstituida al 10% (P/P) a una temperatura conveniente para fermentación con Bifidobacterium. Además, cuando las bacterias del genero Lactococcus se co-cultivan con Bifidobacterium longum; las bacterias del genero Lactococcus exhiben excelentes efectos de promover el crecimiento de Bifidobacterium longum y excelentes efectos de mejorar la capacidad de supervivencia durante almacenamiento, y tienen las propiedades que no se acompañan con cepas bacterianas convencionalmente conocidas que pertenecen al genero Lactococcus. Además, las bacterias del genero Lactococcus pueden producir eficientemente productos fermentados tales como leche fermentada debido a su capacidad de fermentación extremadamente fuerte. Además, se espera que productos fermentados con sabor favorable puedan producirse por las bacterias del genero Lactococcus, ya que las bacterias del genero Lactococcus no producen diacetilo ni acetoina. En particular, las 5 cepas bacterianas (Lactococcus lactis subsp. lactis MCC852, 857, 859, 865, y 866) pueden formularse de manera segura en diversos alimentos o bebidas tales como productos de alimentos fermentos, ya que las 5 cepas bacterianas se seleccionaron de bacterias de ácido láctico aisladas del mundo natural en términos de capacidad de fermentación favorable y posesión de propiedades promotoras de crecimiento de Bifidobacterium longum y propiedades de mejora de supervivencia de Bifidobacterium longum durante almacenamiento. Las bacterias del genero Lactococcus de conformidad con la presente invención pueden emplearse en la forma de polvos bacterianos en la
misma manera que de otras bacterias de ácido láctico. Los polvos bacterianos pueden formularse en alimentos o comidas. Las bacterias del genero Lactococcus de conformidad con la presente invención pueden también de preferencia formularse en una composición farmacéutica tal como un agente para controlar la función intestinal. En el caso en que las bacterias del género Lactococcus de conformidad con la presente invención se formulan en un agente para controlar la función intestinal, el contenido de bacterias del género Lactococcus o su dosis diaria no esta particularmente limitado, siempre que el contenido o la dosis diaria se estime que sea suficiente para exhibir efectos para controlar la función intestinal. Es preferible por ejemplo, que la cantidad ingerida diariamente de las bacterias del género Lactococcus sea aproximadamente 1 x 109 CFU. Aunque un medio de pre-cultivo utilizado para cultivar Bifidobacterium longum y las bacterias del género Lactococcus con anticipación no se limita particularmente siempre que el medio de pre-cultivo usualmente se utilice, el medio de pre-cultivo de preferencia es un medio de leche. El medio de pre-cultivo más preferiblemente es un medio de leche descremada reconstituido, ya que el medio de leche descremada reconstituido se maneja fácilmente. Es preferible que la concentración del medio de leche descremada reconstituido sea 3% (P/P) o más y más preferiblemente 8% (P/P) o más. Además, el medio de pre-cultivo puede contener substancias que estimulan el crecimiento tales como extracto de levadura o agentes reductores tales como L-cisteína. Es particularmente preferible que una sustancia que estimula el crecimiento se formule en el medio de pre-cultivo, ya que Bifidobacterium exhibe un nivel bajo de proliferación en el medio de leche. Específicamente, un medio de
cultivo que contiene 0.1 a 1 % (P/P) de extracto de levadura puede utilizarse. El medio de pre-cultivo se somete a esterilización para uso. La esterilización puede realizarse de acuerdo con un método convencional, específicamente realizada al calentar a 80 a 122 grados C por 5 a 40 minutos, de preferencia a 85 a 95 grados C por 5 a 35 minutos. El crecimiento de Bifidobacterium longum y su supervivencia durante almacenamiento puede ser mejorado en forma simple y eficiente de acuerdo con el método para promover el crecimiento de Bifidobacterium longum y mejorar su supervivencia de conformidad con la presente invención. Específicamente, las bacterias del género Lactococcus de conformidad con la presente invención y Bifidobacterium longum se co-cultivan de acuerdo con el método. Aunque la proporción de inoculación de Bifidobacterium longum a las bacterias del género Lactococcus de conformidad con la presente invención a co-cultivarse como iniciadores en el medio base no se limita particularmente, la proporción de inoculación de preferencia es 100:1 a 1 :10, y más preferiblemente 10:1 a 1 :1. Aunque su cantidad a inocular en el medio base no se limita particularmente, es preferible que la cantidad total de Bifidobacterium longum y las bacterias del genero Lactococcus inoculado con 0.01 a 10% (V/V), más preferiblemente 0.1 a 5% (VA/), con respecto a la cantidad del medio base. Aunque el medio base no esta limitado particularmente, siempre que el medio base usualmente utilizado para co-cultivar Bifidobacterium con bacterias de ácido láctico, es preferible que el medio base contenga leche como su componente principal. De acuerdo con el método para promover el crecimiento de Bifidobacterium longum y mejorar su supervivencia de acuerdo a la presente invención, la proliferación de Bifidobacterium longum y su supervivencia puede
mejorarse incluso en dicho medio de leche que usualmente no es adecuado para crecimiento de. Bifidobacterium. El medio base puede prepararse al formular un endulzante tal como sacarosa, pectina, fruta, jugo de frutas, agar, gelatina, aceite y grasa, sabor, agente colorante, estabilizante, agente reductor o semejantes, en leche de vaca, leche descremada, crema fresca, mantequilla, polvo de leche entera, leche descremada en polvo o semejantes, según se requiera, seguido por esterilización, homogenización, enfriamiento y semejantes. Es particularmente preferible que el medio base se utilice para preparar leche fermentada que contiene Bifidobacterium longum. A continuación, la presente invención se explicara circunstancialmente al indicar algunos ejemplos. Sin embargo, la presente invención no se limita a los siguientes ejemplos. EJEMPLO 1 30 mL de un cultivo siembra de Lactococcus lactis subsp. lactis MCC852 se inoculó en 1000 mi de medio de leche descremada reconstituido 10% (P/P) esterilizada a 90 grados C por 30 minutos, y después cultivado por 25 grados C por 16 horas. Por otra parte, 1000 mi de medio de leche descremada al 11 % (P/P) que contiene extracto de levadura 0.2% (P/P) se esterilizó a 90 grados C por 30 minutos, y 100 mL de un cultivo de siembra de Bifidobacterium longum FERM BP-7787 se inoculo en le medio de leche descremada, seguido por cultivo a 37 grados C por 6 horas. Aparte de lo anterior, 50L de un medio base preparado al mezclar y disolver las materias primas compuestas por leche descremada en polvo, polvo de leche entera, pectina y sacarosa, el medio base que contiene 0.5% (P/P) de grasa de manteca, 8.0% (P/P) de componente sólido de leche sin grasa, 5.0% (P/P) de
sacarosa, y 0.2% (P/P) de pectina, se esteriliza a 90 grados C por 10 minutos, seguido por enfriamiento a 40 grados C. 50 mi del cultivo anteriormente obtenido de Lactococcus lactis subsp. lactis MCC852 pre-cultivado y 500 ml_ del cultivo anteriormente obtenido de Bifidobacterium longum FERM BP-7787 pre-cultivado se inocularon en le medio base esterilizado, seguido por cultivo a 37 grados C por 16 horas para obtener la leche fermentada. La leche fermentada se enfrió inmediatamente con agitación, y la leche fermentada enfriada se homogenizó a una presión de 15 MPa, al poner el resultante en un recipiente de vidrio que tiene una capacidad de 200 mL y después sellar el recipiente para obtener una bebida de yogurt. La bebida de yogurt obtenida tuvo un pH de 4.64, y un contenido de 6.8x108 CFU/g de Bifidobacterium longum. Cuando la bebida de yogurt se almaceno a 10 grados C por 14 días, el conteo viable de Bifidobacterium longum fue 5.8x108 CFU/g, y su taza de supervivencia fue 85%. EJEMPLO 2 Bebida de yogurt o yogurt líquido se obtiene en la misma forma que para el Ejemplo 1 , excepto porque Lactococcus lactis subsp. lactis MCC857 se utiliza en lugar de Lactococcus lactis subsp. lactis MCC852. La bebida de yogurt obtenida tuvo un pH de 4.62 y contiene 8.5x108 CFU/g de Bifidobacterium longum. Cuando la bebida de yogurt se almaceno a 10 grados C por 14 días, el conteo viable de Bifidobacterium longum lúe 5.8x108 CFU/g, y la taza de supervivencia fue 89%. EJEMPLO 3 Bebida de yogurt se obtiene en la misma forma que para el Ejemplo 1 , excepto porque Lactococcus lactis subsp. lactis MCC859 se utiliza en lugar de Lactococcus lactis subsp. lactis MCC852. La bebida de yogurt obtenida tuvo un pH de 4.62 y tuvo un contenido de 7.2x108 CFU/g de Bifidobacterium longum. Cuando
la bebida de yogurt se almacena a 10 grados C por 14 días, el conteo viable de Bifidobacterium longum fue 5.8x108 CFU/g, y su taza de supervivencia fue 81%. EJEMPLO 4 La bebida de yogurt se obtiene en la misma forma que para el Ejemplo 1 , excepto porque Lactococcus lactis subsp. lactis MCC865 se utiliza en lugar de Lactococcus lactis subsp. lactis MCC852. La bebida de yogurt obtenida tuvo un pH de 4.54 y tuvo un contenido de 7.2x108 CFU/g de Bifidobacterium longum. Cuando la bebida de yogurt se almaceno a 10 grados C por 14 días, el conteo viable de Bifidobacterium longum fue 6.6x108 CFU/g, y su taza de supervivencia fue 96%. EJEMPLO 5 Bebida de yogurt que se obtiene en la misma forma que para el Ejemplo 1 , excepto porque Lactococcus lactis subsp. lactis MCC866 se utiliza en lugar de Lactococcus lactis subsp. lactis MCC852. La bebida de yogurt obtenida tuvo un pH de 4.55 y tuvo un contenido de 6.5x108 CFU/g de Bifidobacterium longum. Cuando la bebida de yogurt se almacena a 10 grados C por 14 días, el conteo viable de Bifidobacterium longum fue 6.2x108 CFU/g, y su taza de supervivencia fue 95%. EJEMPLO 6 500 mL de un cultivo siembra de Lactococcus lactis subsp. lactis MCC852 cultivado a 37 grados C por 16 horas en un medio de cultivo compuesto por 50 g de extracto de carne, 100 g de extracto de levadura, 100 g de peptona, 200g de lactosa, 50g de K2HPO4, 10 g de KH2P04, 4 g de cistina y 9.5 L de agua, se inoculo en 10 L de un medio de cultivo que tiene la misma composición que la del medio de cultivo anteriormente mencionado, y después cultivo 37 grados C por 16
horas. Además, el cultivo líquido entero así obtenido (10.5 L) se inoculó en 200 L de un medio de cultivo esterilizado a 90 grados C por 30 minutos que tiene la misma composición que la del medio de cultivo anteriormente mencionado y después cultiva a 37 grados C por 16 horas. El conteo viable después de cultivo fue 3.0x109 CFU/ml. Después, células bacterianas se recolectaron por centrifugación (15,000 rpm) utilizando un dispositivo centrífugo de tipo sharpless (fabricado por TOMY SEIKO CO., LTD., bajo el número comercial RD-20IV), y suspendido de nuevo en salino fisiológico (esterilizado a 90 grados C por 30 minutos) en la misma cantidad que la del medio de cultivo, seguido por centrifugado como se describió anteriormente para recolectar de nuevo las células bacterianas. Las células bacterianas recolectadas se suspendieron en 20 L de una solución (esterilizadas a 90 grados por 30 minutos) que contiene 10% (P/P) de leche descremada, 1 % (P/P) de sacarosa, y 1 % (P/P) de glutamato monosódico, y seca por congelamiento de acuerdo con un método convencional para obtener aproximadamente 2.2 kg de polvo que contiene 8.6x1010 CFU/g de Lactococcus lactis subsp. lactis MCC852. EJEMPLO 7 Aproximadamente 2.2 kg de polvo que contiene 9.2x1010 CFU/g de Lactococcus lactis subsp. lactis MCC857 se obtiene en la misma forma que para el EJEMPLO 6 excepto porque Lactococcus lactis subsp. lactis MCC857 se utilizó en lugar de Lactococcus lactis subsp. lactis MCC852. EJEMPLO 8 Aproximadamente 2.2 kg de polvo que contiene 8.5x1010 CFU/g de Lactococcus lactis subsp. lactis MCC857 se obtiene en la misma forma que para el EJEMPLO 6 excepto porque Lactococcus lactis subsp. lactis MCC859 se utilizó en
lugar de Lactococcus lactis subsp. lactis MCC852. EJEMPLO 9 Aproximadamente 2.2 kg de polvo que contiene 9.4x1010 CFU/g de Lactococcus lactis subsp. lactis MCC865 se obtiene en la misma forma que para el EJEMPLO 6 excepto porque Lactococcus lactis subsp. lactis MCC865 se utilizó en lugar de Lactococcus lactis subsp. lactis MCC852. EJEMPLO 10 Aproximadamente 2.2 kg de polvo que contiene 8.8x1010 CFU/g de Lactococcus lactis subsp. lactis MCC866 se obtiene en la misma forma que para el EJEMPLO 6 excepto porque Lactococcus lactis subsp. lactis MCC866 se utilizó en lugar de Lactococcus lactis subsp. lactis MCC852. EJEMPLO 1 1 Aproximadamente 2.2 kg de un agente para control de función intestinal que contiene polvo bacteriano de Lactococcus lactis subsp. lactis MCC852 se obtiene al mezclar de manera uniforme 20 g de polvo bacteriano que contiene Lactococcus lactis subsp. lactis MCC852, el polvo bacteriano se prepara en el EJEMPLO 6, con 14 kg de almidón esterilizado en seco y 6 kg de lactosa. EJEMPLO 12 Aproximadamente 20 kg de un agente para control de función intestinal que contiene polvo bacteriano de Lactococcus lactis subsp. lactis MCC857 se obtiene al mezclar de manera uniforme 20 g de polvo bacteriano que contiene Lactococcus lactis subsp. lactis MCC857, el polvo bacteriano se prepara en el EJEMPLO 7, con 14 kg de almidón esterilizado en seco y 6 kg de lactosa. EJEMPLO 13 Aproximadamente 20 kg de un agente para control de función
intestinal que contiene polvo bacteriano de Lactococcus lactis subsp. lactis MCC859 se obtiene al mezclar de manera uniforme 20 g de polvo bacteriano que contiene Lactococcus lactis subsp. lactis MCC859, el polvo bacteriano se prepara en el EJEMPLO 8, con 14 kg de almidón esterilizado en seco y 6 kg de lactosa. EJEMPLO 14 Aproximadamente 20 kg de un agente para control de función intestinal que contiene polvo bacteriano de Lactococcus lactis subsp. lactis MCC865 se obtiene al mezclar de manera uniforme 20 g de polvo bacteriano que contiene Lactococcus lactis subsp. lactis MCC865, el polvo bacteriano se prepara en el EJEMPLO 9, con 14 kg de almidón esterilizado en seco y 6 kg de lactosa. EJEMPLO 15 Aproximadamente 20 kg de un agente para control de función intestinal que contiene polvo bacteriano de Lactococcus lactis subsp. lactis MCC866 se obtiene al mezclar de manera uniforme 20 g de polvo bacteriano que contiene Lactococcus lactis subsp. lactis MCC866, el polvo bacteriano se prepara en el EJEMPLO 10, con 14 kg de almidón esterilizado en seco y 6 kg de lactosa. EJEMPLO 16 30 mL de un cultivo de siembra de Lactococcus lactis subsp. lactis MCC852 se inoculan en 1000 mi de medio de leche descremada reconstituido al 10% (P/P) esterilizado a 90 grados C por 30 minutos, y después cultivado por 25 grados C por 16 horas. Aparte de lo anterior, 50 L de leche cruda o leche fresca, compuesta por 3.0% (P/P) de grasa de manteca y 9.5% (P/P) de componente sólido de leche sin grasa desnatada o baja en grasa se calentó a 70 grados C, homogenizó a una presión de 15 MPa, esterilizó a 90 grados C por 10 minutos, y después se enfrió a
40 grados C. Después, de 500 mL de cultivo de Lactococcus lactis subsp. lactis MCC852 pre-cultivado como se describió anteriormente fue inoculado en el medio base esterilizado después puesto en un recipiente resina que tiene una capacidad de 500 mL, el recipiente fue sellado. El cultivo se cultivó a 37 grados C por 16 horas, y después se enfrió inmediatamente. La leche fermentada así obtenida tuvo un pH de 4.70, y contiene 1.3x109 CFU/g de bacterias de ácido láctico. EJEMPLO 17 Leche fermentada se obtiene en la misma forma que para el Ejemplo 16, excepto porque Lactococcus lactis subsp. lactis MCC857 se utiliza en lugar de Lactococcus lactis subsp. lactis MCC852. La leche fermentada obtenida tuvo un pH de 4.69 y contiene de 1.5x109 CFU/g de bacteria de ácido láctico. EJEMPLO 18 Leche fermentada se obtiene en la misma forma que para el Ejemplo 16, excepto porque Lactococcus lactis subsp. lactis MCC859 se utilizó en lugar de Lactococcus lactis subsp. lactis MCC852. La leche fermentada obtenida tuvo un pH de 4.65 y contiene de 1.4x109 CFU/g de bacterias de ácido láctico. EJEMPLO 19 Leche fermentada se obtiene en la misma forma que para el Ejemplo 16, excepto porque Lactococcus lactis subsp. lactis MCC865 se utilizó en lugar de Lactococcus lactis subsp. lactis MCC852. La leche fermentada obtenida tuvo un pH de 4.64 y contiene de 1.5x109 CFU/g de bacterias de ácido láctico. EJEMPLO 20 Leche fermentada se obtiene en la misma forma que para el Ejemplo 16, excepto porque Lactococcus lactis subsp. lactis MCC866 se utilizó en lugar de Lactococcus lactis subsp. lactis MCC852. La leche fermentada obtenida tuvo un pH
de 4.62 y contiene de 1.3x109 CFU/g de bacterias de ácido láctico. EJEMPLO 21 30 mL de un cultivo de siembra de Lactococcus lactis subsp. lactis MCC852 se inocula en 1000 mi de un medio de leche descremada reconstituido al 10% (P/P) esterilizado a 90 grados C por 30 minutos, y después cultivado por 25 grados C por 16 horas. Aparte de lo anterior, 50 mL de un cultivo mixto de Streptococcus thermophilus (fabricado por HANSEN) y Lactobacillus bulgarícus (fabricado por HANSEN) se inocula en 1500 mi de un medio de leche descremada reconstituido al 10% (P/P) esterilizado a 90 grados C por 30 minutos, y después cultivado por 37 grados C por 5 horas. Lo anterior, 50 L de leche fresca que contiene 3.0% (P/P) de grasa de manteca y 9.0% (P/P) de componente sólido de leche sin grasa o baja en grasa se calienta a 70 grados C, homogenizada a una presión de 15 MPa, esterilizó a 90 grados C por 10 minutos, y después se enfrió a 40 grados C. 500 mL del cultivo Lactococcus lactis subsp. lactis MCC852 pre-cultivado como se describió anteriormente y 50 mL del cultivo mixto de Streptococcus thermophilus y Lactobacillus bulgarícus se inocularon en el medio base esterilizado y después se colocan en un recipiente de resina que tiene una capacidad de 500 mL. Después de sellar el recipiente, las bacterias se cultivaran a 37 grados C por 7 horas, y después inmediatamente enfrían. La leche fermentada así obtenida tuvo un pH de 4.75, y contiene 9.8x108 CFU/g de bacterias de ácido láctico. EJEMPLO 22 Leche fermentada se obtiene en la misma forma que para el EJEMPLO 21 , excepto porque Lactococcus lactis subsp. lactis MCC857 se utiliza en lugar de Lactococcus lactis subsp. lactis MCC852. La leche fermentada obtenida
tuvo un pH de 4.74 y contiene 1.2x109 CFU/g de bacterias de ácido láctico. EJEMPLO 23 Leche fermentada se obtiene en la misma forma que para el Ejemplo MCC859, excepto porque Lactococcus lactis subsp. lactis MCC859 se utiliza en lugar de Lactococcus lactis subsp. lactis MCC852. La leche fermentada obtenida tuvo un pH 4.70 y contiene 1.6x109 CFU/g de bacteria de ácido láctico. EJEMPLO 24 Leche fermentada se obtiene en la misma forma que para el Ejemplo MCC859, excepto porque Lactococcus lactis subsp. lactis MCC865 se utiliza en lugar de Lactococcus lactis subsp. lactis MCC852. La leche fermentada obtenida tuvo un pH 4.72 y contiene 1.6x109 CFU/g de bacteria de ácido láctico. EJEMPLO 25 Leche fermentada se obtiene en la misma forma que para el Ejemplo MCC859, excepto porque Lactococcus lactis subsp. lactis MCC866 se utiliza en lugar de Lactococcus lactis subsp. lactis MCC852. La leche fermentada obtenida tuvo un pH 4.70 y contiene 1.6x109 CFU/g de bacteria de ácido láctico. APLICABILIDAD INDUSTRIAL Las bacterias del genero Lactococcus de conformidad con la presente invención permiten que Bifidobaeteríum longum en un producto de leche fermentada tal como yogurt, bebida de yogurt, bebida de leche acidica o semejantes, mantenga un alto nivel de conteo viable y taza de supervivencia durante almacenamiento y por lo tanto las bacterias del genero Lactococcus se utilizan en términos de control de la salud y producción de leche fermentada, y pueden aplicarse en el campo de fabricación de productos de leche fermentada.