CN108795734A - 一种乳酸菌检测系统及其制作方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种乳酸菌检测系统及其制作方法。该乳酸菌检测系统包括培养管，位于培养管内的干制培养基和无菌液体石蜡油。本发明采用液体培养法，上层滴加液体石蜡油可有效隔绝氧气，真正实现不需要任何厌氧设备即能实现乳酸菌检测；厌氧程度高，可检测严格厌氧的双歧杆菌；使用方便，无需检测者做额外的准备工作；判断直观，根据指示剂颜色变化即可判断阳性管；检测准确，可抑制需氧菌生长。

Description

一种乳酸菌检测系统及其制作方法
技术领域
本发明属于微生物检测领域，尤其涉及一种用于乳酸菌检测的系统及其制作方法。
背景技术
目前，我国乳酸菌检测主要采用国标法，常规检测方法需要检测者做大量的准备工作，包括准备材料，配制试剂，灭菌，处置废弃物等，增加了检测人员的劳动量。由于乳酸菌为厌氧菌，因此需要厌氧设备进行培养。目前多采用厌氧培养箱、厌氧罐等进行培养，也有文献报道采用焦性没食子酸与氢氧化钠溶液混合除氧的，但此法仅能培养微需氧的乳酸菌，无法培养严格厌氧的双歧杆菌。厌氧培养设备价格昂贵，且培养过程中还需不断的补充气体，因此乳酸菌检测在基层检测单位实施有一定的困难。
目前市场上尚无不需厌氧设备即能实现乳酸菌检测的快检产品。3M公司的菌落总数测试片（货号：6414）可以检测乳酸菌，但需要检测者事先配制MRS培养液，并且检测后需要厌氧培养。3M公司于2016年8月末推出一款不需要任何厌氧设备即能实现乳酸菌检测的测试片（货号：6461），此产品推向市场不久后发现很容易失效，并不能达到预期的效果，已停止销售。
本发明利用MPN法（最可能近似值法）检测乳酸菌，被检样液加于含有干制培养基的培养管中，上层滴加液体石蜡油隔绝氧气。每个检测样品选择3个连续的稀释度，每个稀释度接种3管。培养基中含有指示剂，当培养管中有乳酸菌生长，乳酸菌分解糖产生的酸使指示剂由红色变为黄色，同时培养液变浑浊。培养结束后根据各稀释度阳性管数查MPN表，得到样品中乳酸菌数量。本发明既可检测兼性厌氧的乳酸菌，也可检测严格厌氧的双歧杆菌。样液加入干制培养管后每管添加50µg莫匹罗星锂盐，再滴加液体石蜡油即可实现双歧杆菌的检测。本发明真正实现不需要任何厌氧设备即能实现乳酸菌检测；厌氧程度高，可检测严格厌氧乳酸菌；使用方便，无需检测者做额外的准备工作；判断直观，根据指示剂颜色变化即可判断阳性管；检测准确，可抑制需氧菌生长。
发明内容
本发明的第一个目的是提供一种乳酸菌检测系统。
本发明提供的乳酸菌检测系统包括培养管，位于培养管内的干制培养基，和无菌液体石蜡油。
上述乳酸菌检测系统中，所述培养管为5mL Ep管，一个样品10管，其中9管为检测管，1管为对照管；
上述乳酸菌检测系统中，所述位于培养管内的干制培养基为将56g MRS干粉培养基和0.1g苯酚红指示剂混合均匀后，每管添加0.056g。
上述乳酸菌检测系统中，所述无菌液体石蜡油为经γ射线灭菌的液体石蜡油。
上述的乳酸菌检测系统在乳酸菌检测中的应用也是本发明保护的范围。
本发明的第二个目的是提供制备所述乳酸菌检测系统的方法，包括如下步骤：
1）配制培养基
将56g MRS干粉培养基和0.1g苯酚红指示剂混合均匀；
2）分装
混合均匀后的培养基每管分装0.056g；
3）灭菌
分装后的培养管经γ射线灭菌后备用，同时液体石蜡油经γ射线灭菌后备用。
本发明的第三个目的是提供一种乳酸菌检测的方法。
本发明提供的方法，包括如下步骤：
1）制备样品
取25g或25mL样品加入225mL无菌生理盐水，均质器均质1min，制成10-1稀释液，吸取1mL 10-1稀释液加入到9mL无菌生理盐水中，制成10-2稀释液，以此类推，制成系列梯度稀释液。根据样品中乳酸菌数量或者双歧杆菌数量推测，选择3个连续稀释度备用；
2）接种
打开培养管盖，吸取1mL无菌生理盐水加入到对照管中。选取的3个连续稀释度样液每个稀释度接种3管检测管，每管1mL。接种后的培养管每管滴加0.8mL无菌液体石蜡油。若检测项目为双歧杆菌，则每个培养管添加50µg莫匹罗星锂盐；
3）培养
接种后的培养管于36℃±1℃需氧培养72h±2h；
4）计数
培养结束后取出培养管，观察颜色变化，和对照管比较，黄色、橘黄色为阳性，不变为阴性。根据各稀释度阳性管数查MPN表，得到样品中乳酸菌总数或者双歧杆菌数量。
本发明的实验证明，本发明采用液体培养法，滴加液体石蜡油可有效隔绝氧气。本发明真正实现不需要任何厌氧设备即能实现乳酸菌检测，厌氧程度高，可检测严格厌氧的双歧杆菌；使用方便，无需检测者做额外的准备工作；判断直观，根据指示剂颜色变化即可判断阳性管；检测准确，可抑制需氧菌生长。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1、乳酸菌检测系统
用于乳酸菌检测的系统包括培养管，位于培养管内的干制培养基和无菌液体石蜡油；
位于培养管内的干制培养基为将56g MRS干粉培养基和0.1g苯酚红指示剂混合均匀后，每管添加0.056g，得到干制培养基。
上述实施例仅用于说明本发明，凡是在本发明技术方案的基础上进行的等同变换和改进，均不应排除在本发明的保护范围之外。
实施例2、乳酸菌检测系统的制备
1、培养基的配制
将56g MRS干粉培养基和0.1g苯酚红指示剂混合均匀；
2、分装
混合均匀后的培养基每管分装0.056g；
3、灭菌
分装后的培养管经γ射线灭菌后备用，同时液体石蜡油经γ射线灭菌后备用。
实施例3、乳酸菌检测系统的应用
一、乳酸菌检测系统在乳酸菌总数检测中的应用
1、制备样品
取25g或25mL样品加入225mL无菌生理盐水，均质器均质1min，制成10-1稀释液，吸取1mL 10-1稀释液加入到9mL无菌生理盐水中，制成10-2稀释液，以此类推，制成系列梯度稀释液。根据样品中乳酸菌数量推测，选择3个连续稀释度备用。
2、接种
打开培养管盖，吸取1mL无菌生理盐水加入到对照管中。选取的3个连续稀释度样液每个稀释度接种3管检测管，每管1mL。接种后的培养管每管滴加0.8mL无菌液体石蜡油。同时以常规方法作为对照，常规检测按照GB 4789.35-2016进行。
3、培养
接种后的培养管于36℃±1℃需氧培养72h±2h，常规于厌氧培养箱中36℃±1℃厌氧培养72h±2h。
4、计数
培养结束后取出培养管，观察颜色变化，和对照管比较，黄色、橘黄色为阳性，不变为阴性。根据各稀释度阳性管数查MPN表，得到样品中乳酸菌总数；常规按标准进行计数。
表1为乳酸菌检测系统与常规法检测10份活性乳酸菌饮料中乳酸菌总数结果
（单位：乳酸菌检测系统-MPN/g，常规法-cfu/g）
注：1：蒙牛消健益生乳+益生元风味发酵乳；2：伊利原味复原乳风味发酵乳3：君乐宝益生菌风味发酵乳；4：君乐宝每日活菌； 5：伊利每益添活性乳酸菌饮品；6：伊利畅轻；7：得益鲜活菌；8：冠益乳BB-12； 9：佳宝ABLS益生菌风味发酵乳；10：伊利畅意乳酸菌饮品
经成对样本t检验分析相关系数为0.991，P=0.000,两者具有相关性。t=0.514，P=0.619，两者无显著差异，乳酸菌检测系统可代替常规方法检验样品中乳酸菌总数。
二、乳酸菌检测系统在双歧杆菌检测中的应用
1、制备样品
取25g或25mL样品加入225mL无菌生理盐水，均质器均质1 min，制成10-1稀释液，吸取1mL 10-1稀释液加入到9mL无菌生理盐水中，制成10-2稀释液，以此类推，制成系列梯度稀释液。根据样品中双歧杆菌数量推测，选择3个连续稀释度备用。
2、接种
打开培养管盖，吸取1mL无菌生理盐水加入到对照管中。选取的3个连续稀释度样液每个稀释度接种3管检测管，每管1mL，每管添加50µg莫匹罗星锂盐。接种后的培养管每管滴加0.8mL无菌液体石蜡油。同时以常规方法作为对照，常规检测按照GB 4789.35-2016进行。
3、培养
接种后的培养管于36℃±1℃需氧培养72h±2h，常规于厌氧培养箱中36℃±1℃厌氧培养72h±2h。
4、计数
培养结束后取出培养管，观察颜色变化，和对照管比较，黄色、橘黄色为阳性，不变为阴性。根据各稀释度阳性管数查MPN表，得到样品中双歧杆菌数量。常规按标准进行计数。
表2为乳酸菌检测系统与常规法检测10份活性乳酸菌饮料中双歧杆菌结果
（单位：乳酸菌检测系统-MPN/g，常规法-cfu/g）
注：1：蒙牛消健益生乳+益生元风味发酵乳；2：伊利原味复原乳风味发酵乳3：君乐宝益生菌风味发酵乳；4：君乐宝每日活菌； 5：伊利每益添活性乳酸菌饮品；6：伊利畅轻；7：得益鲜活菌；8：冠益乳BB-12； 9：佳宝ABLS益生菌风味发酵乳；10：伊利畅意乳酸菌饮品
经成对样本t检验分析相关系数为0.968，P=0.000,两者具有相关性。t=0.050，P=0.961，两者无显著差异，乳酸菌检测系统可代替常规方法检验样品中双歧杆菌数量。

Claims (5)

1.一种乳酸菌检测系统，该乳酸菌检测系统包括培养管，位于培养管内的干制培养基和无菌液体石蜡油。
2.根据权利要求1所述的乳酸菌检测系统，其特征在于：
所述培养管为5mL Ep管，每个样品10管；
所述10管培养管中1管为对照管，9管为检测管。
3.根据权利要求1所述的乳酸菌检测系统，其特征在于：
所述位于培养管内的干制培养基为将MRS干粉培养基与指示剂混合后分装到Ep管中，得到干制培养基。
4.权利要求1-3中任一所述的乳酸菌检测系统在乳酸菌检测中的应用。
5.一种乳酸菌检测的方法，包括如下步骤：
1）接种
打开培养管盖，吸取1mL无菌生理盐水加入到对照管中，选取3个连续稀释度的样品稀释液，每个稀释度接种3管培养管，每管1mL，接种后的培养管每管滴加0.8mL无菌液体石蜡油，若检测项目为双歧杆菌，则每个培养管中添加50µg莫匹罗星锂盐；
2）培养
接种后的培养管于36℃±1℃需氧培养72h±2h；
3）计数，
培养结束后取出培养管，观察颜色变化，和对照管比较，黄色、橘黄色为阳性，不变为阴性，根据各稀释度阳性管数查MPN表，得到样品中乳酸菌总数或者双歧杆菌数量。
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