CN109097266A - 一种用于微生物检测的系统及其制作方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种用于微生物检测的系统及其制作方法。该微生物检测系统包括袋装改良干粉培养基和无菌容器。本发明以冷水可溶性凝胶为凝固剂，采用射线灭菌，不耐热组分可一起添加到培养基中，省去灭菌和过滤除菌步骤，使用方便；对致病菌进行分离时，一个检测系统即可完成一个稀释度的检测；凝胶硬度适中，可挑菌进行鉴定；在水大肠菌群检测中，一次可检测100mL水样，操作简单；凝胶可截留大肠菌群发酵乳糖产生的气体，结果准确。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体属于微生物快速检测领域，尤其涉及一种用于微生物检测的系统及其制作方法。
背景技术
目前，食品微生物检测主要采用国标法，卫生指标菌检测采用平板计数法和多管发酵法；致病菌检测采用平板分离法。上诉3种方法均需要检测者做大量的准备工作，包括刷洗，配制培养基，杀菌，处置废弃物等。平板计数法使用的培养基需要高压灭菌，冷却到45℃倒平板，需要操作者对温度进行严格控制，温度过高不耐热微生物和受损伤微生物易死亡，造成检测结果偏低，温度过低琼脂易凝固；多管发酵法需要检测者接种9次或者15次才能完成一个样品的检测，检测效率低；致病菌的分离采用平板分离法，致病菌定量检测采用涂布法，即1mL样液涂布到3块分离平板上，检测效率低，且成本高。很多显色培养基不耐热，需要煮沸除菌，并且不能过度煮沸，易造成耐热菌杀菌不彻底，影响检测结果的准确性；有些组分甚至加热煮沸也会遭到破坏，需要过滤除菌，临使用前再添加到培养基中，操作繁琐，且易污染。
快检产品因节省了操作者的准备时间，提高了检测效率，而受到检测者的青睐。目前市场上与平板计数法、平板分离法和多管发酵法相对应的快检产品为快检纸片、成品分离平板和成品发酵管。快检纸片法直接吸取1mL样液滴加到纸片上，没有对样液进行稀释，因此对有杀菌抑菌作用的样品，以及高渗透压样品进行检测，结果偏低，快检纸片不适用于此类样品的检测；成品分离平板和成品发酵管为厂家制备好的分离平板和发酵管，因此存在和常规法相同的弊端。
本发明以冷水可溶性凝胶取代琼脂作为凝固剂，将凝胶和培养基混合后分装于铝箔袋中，射线灭菌。使用时不必高压灭菌，也不必加热煮沸，只需撕开袋口将培养基倒入无菌容器中，再将样液倒入无菌容器中混匀，静置20分钟凝胶凝固后即可培养。本发明的微生物检测系统可用于卫生指标菌检测、致病菌分离和水样检测。在卫生指标菌检测和致病菌分离中将10mL样液直接加入到预制干粉培养基中，混匀即可。对于致病菌分离，一个检测系统即可完成一个稀释度的检测，凝胶硬度适中，可对可疑目标菌进行挑菌鉴定。在水大肠菌群的检测中，本发明以冷水可溶性凝胶为凝固剂，因此可一次检测100mL水样，一步操作即可完成水大肠菌群检测，无需过滤，操作简单。凝胶可截留大肠菌群发酵乳糖产生的气泡，结果准确。不必进行验证实验，检测时间短。因本发明的检测系统经射线灭菌，因此不会破坏不耐热的培养基组分，不耐热组分可同其他组分一起进行混合分装，而不必再进行过滤除菌，并且杀菌更彻底。因本发明的检测系统在检测过程中为常温操作， 不耐热菌和受损伤菌不会因为热激而死亡，检测结果准确。因接种量为10mL，与常规接种量接近，因此在有杀菌抑菌作用样品和高渗透压样品的检测上结果与常规吻合度高。
发明内容
本发明的第一个目的是提供一种用于微生物检测的系统。
本发明提供的微生物检测系统包括袋装改良干粉培养基和无菌容器。
上述微生物检测系统中，所述改良干粉培养基为按照国家标准中各培养基的配方添加除琼脂外的其它组分，每升中添加40.0g冷水可溶性凝胶，得到改良的干粉培养基。
所述冷水可溶性凝胶为聚丙烯酸钠。
所述改良干粉培养基中，改良乳糖蛋白胨培养液以100mL对应量分装；其它改良干粉培养基以10mL对应量分装。
所述袋装改良干粉培养基需经γ射线灭菌。
上述微生物检测系统中，所述无菌容器为灭菌的培养皿或者三角瓶。
上述微生物检测系统中，所述改良干粉培养基为改良PCA培养基、改良VRBA培养基、改良VRBA-MUG培养基、改良乳糖蛋白胨培养液、改良XLD培养基、改良MAC培养基、改良HE培养基、改良PDA培养基、改良PALCAM培养基、改良CT-sMAC培养基、改良TCBS培养基、改良MYP培养基或改良VRBGA培养基。
在本发明的实施例中，采用的改良微生物培养基为改良PCA培养基和改良乳糖蛋白胨培养液。改良PCA培养基为胰蛋白胨5.0g/L、酵母浸膏2.5g/L、葡萄糖1.0g/L、聚丙烯酸钠40.0g/L，混匀后0.485g/袋分装；改良的乳糖蛋白胨培养液为蛋白胨10.0g/L、牛肉膏3.0g/L、乳糖5.0g/L、氯化钠5.0g/L、溴甲酚紫0.016g/L、聚丙烯酸钠40.0g/L，混匀后6.3g/袋分装。
上述的微生物检测系统在微生物检测中的应用也是本发明保护的范围。
本发明的第二个目的是提供制备所述微生物检测系统的方法，包括如下步骤：
1）配制培养基
按照国家标准中各培养基的配方添加除琼脂外的其它组分，每升中添加40.0g聚丙烯酸钠，混匀；
2）分装
配制好的改良干粉培养基中，改良乳糖蛋白胨培养液以100mL对应量分装；其它改良干粉培养基以10mL对应量分装，封口；
3）灭菌
分装后的袋装改良干粉培养基经γ射线灭菌后备用，无菌容器经121℃灭菌15min后备用。
本发明的第三个目的是提供一种微生物检测的方法。
本发明提供的方法，包括如下步骤：
1）接种
将袋装改良干粉培养基以无菌方式撕开口，倒入无菌容器中，无菌容器置于水平台面。将样液倒入无菌容器中，沿桌面轻轻混匀，静置20min使凝胶完全凝固。水大肠菌群样液为100mL,其它检测项目样液为10mL；
2）培养
凝固后的无菌容器正放，按照检测标准要求的温度和时间进行培养；
3）计数
培养结束后取出培养容器，按照检测标准要求进行计数或者判断。
本发明的实验证明，本发明以冷水可溶性凝胶为凝固剂，采用射线灭菌，不耐热组分可一起添加到培养基中，使用方便；对致病菌进行分离时，一个检测系统即可完成一个稀释度的检测；凝胶硬度适中，可挑菌进行鉴定；在水大肠菌群检测中，一次可检测100mL水样，操作简单；凝胶可截留大肠菌群发酵乳糖产生的气体，结果准确。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1、用于菌落总数检测的微生物检测系统的制备及应用
一、微生物检测系统的制备
1、配制培养基
胰蛋白胨5.0g/L、酵母浸膏2.5g/L、葡萄糖1.0g/L、聚丙烯酸钠40.0g/L，混匀；
2、分装
0.485g/袋分装，封口；
3、灭菌
分装后的袋装改良干粉培养基经γ射线灭菌后备用，无菌容器经121℃灭菌15min后备用。
二、微生物检测系统检测微生物菌落总数
1、接种
分别取10份样品，每份样品按无菌操作取25g于无菌均质袋中，加入225mL无菌生理盐水，以拍击式均质器均质1min，制成10-1样液，再吸取1mL加入到9mL无菌生理盐水中，制成10-2样液，以此做10倍梯度稀释，选2-3个适宜稀释度备用。将袋装改良干粉培养基以无菌方式撕开口，倒入无菌容器中，无菌容器置于水平台面。将10mL样液倒入无菌容器中，沿桌面混匀，静置20min使凝胶完全凝固，每个稀释度2个重复。同时以常规检测作为对照，按照GB4789.2-2016标准进行操作。
2、培养
36℃±1℃培养48h±2h。
3、计数
培养结束后进行菌落计数，以平均数在30-300个菌落的2个系统平均值乘以相应稀释度再除以10作为该样品菌落总数。常规法按照GB 4789.2-2016标准进行计数。
4、统计
以微生物检测系统和常规法测得的各样品菌落总数做t-检验，以P＜0.05存在显著差异。
表1为微生物检测系统与常规法检测10份样品菌落总数结果
（单位：cfu/g）
注：1：火腿肠；2：老面包；3：月饼；4：奶粉；5：蜜饯；6：薯片；7：冷冻水饺；8：挂面；9：酱油；10：果冻
实验证明微生物检测系统与常规法检测10份样品菌落总数结果无显著差异（P=0.349＞0.05），微生物检测系统可代替常规方法检测样品菌落总数。
实施例2、用于水大肠菌群检测的微生物检测系统的制备及应用
一、微生物检测系统的制备
1、配制培养基
蛋白胨10.0g/L、牛肉膏3.0g/L、乳糖5.0g/L、氯化钠5.0g/L、溴甲酚紫0.016g/L、聚丙烯酸钠40.0g/L，混匀；
2、分装
6.3g/袋分装，封口；
3、灭菌
分装后的袋装改良干粉培养基经γ射线灭菌后备用，无菌容器经121℃灭菌15min后备用。
二、微生物检测系统检测水大肠菌群
1、接种
将袋装改良干粉培养基以无菌方式撕开口，倒入无菌容器中，无菌容器置于水平台面，将100mL水样倒入无菌容器中，沿桌面混匀，静置20min使凝胶完全凝固。常规法按照GB/T5750.12-2006第二法进行。
2、培养
凝固后的无菌容器正放，36℃±1℃培养24h±2h。
3、计数
培养结束后进行菌落计数，带泡菌落为大肠菌群。常规法计数按照GB/T 5750.12-2006第二法进行。
4、统计
以微生物检测系统和常规法测得的各样品大肠菌群数做t-检验，以P＜0.05存在显著差异。
表2为微生物检测系统与常规法检测10份水大肠菌群结果
（单位：cfu/100mL）
注：1：生活饮用水；2：娃哈哈饮用矿泉水；3：河水1；4：河水2；5：河水3；6：井水1；7：井水2；8：井水3；9：医院废水；10：工业废水
实验证明微生物检测系统与常规法检测10份水大肠菌群结果无显著差异（P=0.295＞0.05），微生物检测系统可代替常规方法检测水大肠菌群。
Claims (6)
1.一种用于微生物检测的系统，该微生物检测系统包括袋装改良干粉培养基和无菌容器。
2.根据权利要求1所述的改良干粉培养基由冷水可溶性凝胶取代琼脂；
所述改良干粉培养基按照包括如下步骤的方法制备：按照国家标准中各培养基的配方添加除琼脂外的其它组分，每升中添加40.0g冷水可溶性凝胶，得到改良的干粉培养基。
3.根据权利要求2所述的冷水可溶性凝胶为聚丙烯酸钠。
4.根据权利要求1所述的无菌容器为灭菌的培养皿或者三角瓶。
5.权利要求1-4中任一所述的微生物检测系统在微生物检测中的应用。
6.一种微生物检测方法，包括如下步骤：
1）接种
将袋装改良干粉培养基以无菌方式撕开口，倒入无菌容器中，无菌容器置于水平台面，将样液倒入无菌容器中，沿桌面混匀，静置20min使凝胶完全凝固；
2）培养
凝胶凝固后，容器正放，按照标准要求的温度和时间进行培养；
3）计数
培养结束后取出容器，按照标准要求进行计数或者判断。
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|---|---|---|---|
| CN201810976669.2A CN109097266A (zh) | 2018-08-25 | 2018-08-25 | 一种用于微生物检测的系统及其制作方法 |
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111763708A (zh) * | 2020-07-22 | 2020-10-13 | 孙百莉 | 一种微生物凝胶琼脂培养基 |
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2018
- 2018-08-25 CN CN201810976669.2A patent/CN109097266A/zh active Pending
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