CN111500669A - 一种酵母定性检测方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种酵母定性检测方法，所述方法包括以下步骤：(1)在无菌操作下量取样品，加入无菌稀释液中，混匀，制成样品匀液；(2)取步骤(1)所得样品匀液，加入无菌培养皿中，向培养皿中加入VRBA培养基，将培养基与样品匀液混合均匀，待凝固后，再加入VRBA培养基覆盖在凝固样品的表层，得到培养平板；翻转平板，置于36±1℃培养；(3)培养结束后，将平板放置到显微镜下观察，判断是否有酵母菌群。该方法能简单且有效的在24h内检测出酵母菌落，检测周期短，特别是应用于乳饮品及其加工过程和环境的检测，有利于生产的质量控制。
Description
技术领域
本发明涉及微生物学检测技术领域，具体为一种酵母定性检测方法和应用。
背景技术
在食品加工过程中时有造成酵母污染的情况，是造成发酵型含乳饮料胀包、变质的主要原因，因此食品生产企业对原料、生产过程和环境、产品具有严格的微生物管控，在食品检测和卫生评定中，酵母菌落的检测已经成为一项重要的检测项目。目前，霉菌和酵母的检测标准为GB 4789.15-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验霉菌和酵母计数》，标准中采用的是平板法，培养基采用的是马铃薯葡萄糖琼脂或孟加拉红琼脂，加入了氯霉素作为杂菌抑制剂，使用该方法判读出具结果的周期为120h左右，检测周期过长。
现有技术中，为解决酵母检测周期长的问题，中国专利文献CN109929903A 中提出了一种霉菌和酵母检测用培养基及其制备方法，该方法提供的培养基包括脱脂乳粉、琼脂、菌种和增稠剂等主要原料，不包括传统的氯霉素等抑菌剂，避免了抑菌剂对霉菌和酵母生长的抑制，缩短了检测时间、能够明显缩短风险判读时间，检测周期由国标法120h缩短至72h，该检测方法适用于发酵乳及其加工环境中霉菌和酵母的检测。中国专利文献CN208218871U提出了一种检测食品中霉菌与酵母微生物的装置，包括杯体、贴片、检测卡和盖子，杯体内底端加工有凹槽，贴片贴在凹槽内，检测卡贴在贴片上端，盖子设置在杯体上，检测卡内含有霉菌与酵母生长基础培养基、特异性指示剂，使用该装置能在72h 内观察到结果，检测效率高，添加了霉菌和酵母的特异性指示剂，省去了传统方法中需要现配培养基、倒平板等一系列繁琐的过程。
从现有文献中报道的一些酵母菌检测方法来看，虽一定程度上缩短了酵母的检测周期和检测流程，但对食品生产企业来说，检测周期还是较长，无法对产品的新鲜度进行实时管控，容易出现食品安全风险，因此，行业内仍缺少能快速检测酵母的方法。
发明内容
针对现有技术存在上述采用国标法检测周期长、对产品的新鲜度很难实时管控等问题，本发明的目的在于提供一种酵母定性检测方法。
为了实现上述发明的目的，本发明提供：
一种酵母定性检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)在无菌操作下量取样品，加入无菌稀释液中，混匀，制成样品匀液。
(2)取步骤(1)所得样品匀液，加入无菌培养皿中，向培养皿中第一次加入VRBA(结晶紫中性红胆盐琼脂)培养基，将培养基与样品匀液混合均匀，待凝固后，第二次加入VRBA培养基覆盖在凝固样品的表层，得到培养平板；翻转平板，置于36±1℃培养。
(3)培养结束后，将平板放置到显微镜下观察，判断是否有酵母菌群。
本发明提出了一种酵母定性检测方法，采用VRBA培养基(结晶紫中性红胆盐琼脂培养基)培养酵母，在显微镜下判断培养不同时间后平板上是否出现酵母菌落形态。由于VRBA培养基成分适合酵母生长，酵母在平板上能快速生长，将采用国标法检测酵母的时间从120h缩短到24h内即可观察到结果，实现了酵母的快速检测，对食品生产企业具有指导作用。
作为本发明的优选方案，所述样品均液的制备步骤为：用无菌吸管量取1～ 10ml样品原液，加入含有0～100ml生理盐水或磷酸盐缓冲液的灭菌玻璃瓶中，充分混合均匀，制成样品匀液。
作为本发明的优选方案，所述生理盐水的制备方法为：称取8.5g氯化钠固体溶于1000ml蒸馏水中，121℃高压灭菌15min，备用。优选地，所述生理盐水是无菌生理盐水。
作为本发明的优选方案，所述磷酸盐缓冲液的制备方法为：称取34.0g的磷酸二氢钾固体溶于500ml蒸馏水中，用170～180ml的1mol/L氢氧化钠溶液调节pH至7.2±0.2，用蒸馏水定容至1000ml，121℃高压灭菌15min，备用。优选地，所述磷酸盐缓冲液是无菌磷酸盐缓冲液。
作为本发明的优选方案，所述1mol/L氢氧化钠溶液的制备方法：称取40g氢氧化钠固体溶于1000mL蒸馏水中。
作为本发明的优选方案，所述VRBA培养基通过以下制备步骤制得：称取 41.5gVRBA产品溶于1000ml去离子水中，静止10min，充分搅拌溶解，调节 pH至7.4±0.2。煮沸2min，并将培养基恒温在45℃～50℃后备用。优选地，VRBA 培养基制备为使用前临时制备，不得超过3h。
作为本发明的优选方案，所述第一次加入VRBA培养基的体积为15～20ml。
作为本发明的优选方案，所述第二次加入VRBA培养基的体积为3～4ml，再次加培养基是为了防止表面其他细菌的生长，以免影响实验结果的观察。
作为本发明的优选方案，所述平板置于36±1℃培养的时间为10～24h，随时观察平板内是否有酵母菌落。
作为本发明的优选方案，所述在显微镜下观察，若在平板上没有观察到酵母菌落则判定为未检出，若在平板上观察到酵母菌落则判定为该样品检出酵母。
上述酵母定性检测方法应用于乳饮品及其加工过程和环境的检测。本发明方法简单易行，有利于生产过程的质量控制。VRBA培养基适合于需氧及兼性厌氧菌生长，酵母是需氧及兼性厌氧菌，同时VRBA培养成分中含有抑制革染氏阳性菌的成分，该平板上除了长大肠菌群外还有可能长其他革染氏阴性的杂菌及霉菌酵母，此外VRBA培养基成分中含有酵母粉、乳糖成分的特征，适合多种含葡萄糖量高的产品菌在此平板生长，乳饮料中蔗糖高达13％～14％。所以在VRBA培养基便于含有高糖样品中的酵母快速生长，对酵母更易检出，检出时间更短。
与现有技术相比，本发明的有益效果：
1、本发明在VRBA培养基生长酵母，用显微镜观察菌落形态，可以在10～24h内观察到结果。该方法简单、快捷，明显地减少酵母的检测周期，实现了快速测试。
2、本发明的快速定性检测方法将检测周期缩短到小于24h，有利于提前掌握基料、半成品及生产环境的溯源情况，缩短预警时间，规避食品安全风险。
3、本发明的快速定性检测方法实现了产品生产状况掌握，对产品的新鲜度进行实时管控，确保食品安全的同时，避免因为检测周期长导致的成本浪费，提高了生产效率。
附图说明
图1为实验10h后VRBA培养基上出现酵母菌落。
图2为实验24h后VRBA培养基上酵母菌落数量明显增加。
图3为VRBA培养基上培养酵母的镜检结果。
具体实施方式
下面对本发明作详细的说明。
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例1
用无菌吸管量取5ml活性益生菌乳饮品，加入含有45ml磷酸盐缓冲液的无菌锥形瓶中，振摇使其充分混合均匀，制成稀释度为10-1的样品匀液。取上述样品匀液1ml，加入100mm无菌培养皿中，向培养皿中第一次加入15ml VRBA 培养基，将培养基与样品混合均匀。待凝固后，第二次加入3ml VRBA培养基覆盖在凝固样品的表层，得到培养平板；翻转平板，置于36±1℃培养10～24h。培养不同时间后，将VRBA平板放到显微镜下观察。
从图1中可以看到，用VRBA培养基培养10h后平板上出现典型酵母菌落，随着培养时间的延长，培养24h后平板上型酵母菌落数量明显增加，如图2所示。
为了判断VRBA平板上生长的是酵母菌落，将平板上的菌落采用3％KOH (氢氧化钾)拉丝、镜检、BGLB(煌绿乳糖胆盐肉汤)验证、沙门/金黄色葡萄球菌测试片进行验证检测。表1为测试结果。
表1 VRBA平板上菌落测试结果
从表1中可以看到，单独培养菌落，菌落3％KOH拉丝结果为阳性，为革兰阳性菌。镜检结果如图3所示，可以看到椭圆形菌落，有芽殖，边缘比较光滑。采用BGLB验证，结果是不产气。采用沙门/金黄色葡萄球菌测试片培养测试，测试片上未长菌。综上所述，确认VRBA平板上的菌落为酵母。
对比例实验
孟加拉红琼脂配制：称取36.6g孟加拉红产品于1000ml蒸馏水中，搅拌加热煮沸至完全溶解，121℃高压灭菌15min，备用。
用无菌吸管量取5ml活性益生菌乳饮品，加入含有45ml磷酸盐缓冲液的无菌锥形瓶中，振摇使其充分混合均匀，制成稀释度为10-1的样品匀液。用1ml 无菌吸管或微量移液器吸取10-1样品匀液1ml，沿管壁缓慢注入含有9ml磷酸盐缓冲液的灭菌试管中，振摇试管使其充分混合均匀，制成稀释度为10-2的样品匀液。在上述准备做10倍递增样品匀液中，每稀释一次，换用一支1ml灭菌吸管。
选择原液100，10-1，10-2的样品均液，各吸取1ml分别加到100mm无菌培养皿中，每种样品均液制作2个平行样，同时分别吸取1ml无菌磷酸盐缓冲液加入2个培养皿中作为空白对照，及时取用25ml冷却到46±1℃的孟加拉红琼脂倾注培养皿中，转动培养皿使其混合均匀。待琼脂凝固后，正置平板，将平板置于28±1℃培养48h、72h。选取菌落数在10CFU～150CFU的平板，用肉眼观察，记录稀释倍数和相应的菌落数。根据菌落的形态判断菌落为酵母，表2中为菌落计数结果。
表2不同稀释度样品、不同平板培养出的酵母菌落数计数结果
从上表2中的数据可知，用孟加拉红琼脂培养酵母在48h内可以看到酵母菌落的形成，随着时间的延长到72h，酵母菌落数有不明显的增加。采用VRBA 培养基培养酵母，在培养10h后可以看到酵母菌落形态，延长培养时间平板上酵母形态更明显，能在24h内能实现酵母的检测。
实施例2
用无菌吸管量取5ml活性益生菌乳饮品，加入含有45ml磷酸盐缓冲液的无菌锥形瓶中，振摇使其充分混合均匀，制成稀释度为10-1的样品匀液；用无菌吸管量取10-1样品匀液5ml，沿管壁缓慢注入含有5ml磷酸盐缓冲液灭菌试管内，振摇试管使其充分混合均匀，制成稀释度为5*10-2的样品匀液；用无菌吸管量取10-1样品匀液1ml，沿管壁缓慢注入含有9ml磷酸盐缓冲液灭菌试管内，振摇试管使其充分混合均匀，制成稀释度为10-2的样品匀液；用无菌吸管量取10-2样品匀液5ml，沿管壁缓慢注入含有5ml磷酸盐缓冲液灭菌试管内，振摇试管使其充分混合均匀，制成5*10-3的样品匀液；用无菌吸管量取10-2样品匀液1ml，沿管壁缓慢注入含有9ml磷酸盐缓冲液灭菌试管内，振摇试管使其充分混合均匀，制成稀释度为10-3的样品匀液。
选取原液100、10-1、5*10-2、10-2、5*10-3、10-3的样品均液，各吸取1ml分别加到100mm无菌培养皿中，每种样品均液制作2个平行样，向培养皿中第一次加入20ml VRBA培养基，将培养基与样品混合均匀。待凝固后，第二次加入 4ml VRBA培养基覆盖在凝固样品的表层，得到培养平板；翻转平板，置于36±1℃培养。培养不同时间后，将VRBA平板放到显微镜下观察。表3为用VRBA培养基测试不同稀释度的样品的检测结果。
表3不同稀释度样品酵母检测结果
| 样品稀释度 | 10<sup>0</sup> | 10<sup>-1</sup> | 5*10<sup>-2</sup> | 10<sup>-2</sup> | 5*10<sup>-3</sup> | 10<sup>-3</sup> |
| 酵母检测时间 | 10h | 10h | 16h | 20h | 26h | 30h |
从表3中可以看到，随着样品的稀释，酵母检测时间在增加。没有稀释和稀释度为10-1样品在培养10h后在显微镜在观察到酵母形态，稀释度为5*10-2和10-2样品的酵母检测时间分别为16h和20h，均在24h内检测到酵母形态，当稀释度为5*10-3和10-3时，样品的酵母检测时间分别为26h和30h，超过24h，在显微镜下观察到的酵母菌落很少。因此，本发明的酵母检测方法中的样品稀释度为100～10-2。
实施例3
取市售某品牌低温含乳饮料5瓶，每瓶用无菌吸管吸取5ml样品，酵母加标，分别加入含有45ml磷酸盐缓冲液的无菌锥形瓶中，振摇使其充分混合均匀，制成稀释度为10-1样品匀液。取上述样品匀液1ml倒入100mm无菌培养皿中，在培养皿中加入15ml VRBA培养基，将培养基与样品混合均匀。待凝固后，再加入3ml VRBA培养基，翻转平板，置于36±1℃培养。培养结束后，将平板放到显微镜下观察。通过显微镜观察，5个样品平板在培养10h～16h后观察到酵母菌落，实现在24h内检测出酵母。
实施例4
取市售某品牌活菌性含乳饮料5瓶，每瓶用无菌吸管吸取5ml样品，酵母加标，分别加入含有45ml磷酸盐缓冲液的无菌锥形瓶中，振摇使其充分混合均匀，制成为10-1样品匀液。取上述样品匀液1ml倒入100mm无菌培养皿中，在培养皿中倒入15mlVRBA培养基，将培养基与样品混合均匀。待凝固后，再加入3ml VRBA培养基，翻转平板，于36±1℃培养。培养结束后，将平板放到显微镜下观察。通过显微镜观察，5个样品平板在培养10h～14h内观察到酵母菌落，实现在24h内检测出酵母。
综上所述，本发明提供的酵母快速检测定性分析方法能在24h内检测出酵母菌落，检测周期短，有利于食品生产过程的质量控制。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (6)
1.一种酵母定性检测方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)在无菌操作下量取样品，加入无菌稀释液中，混匀，制成样品匀液；
(2)取步骤(1)所得样品匀液，加入无菌培养皿中，向培养皿中第一次加入VRBA培养基，将培养基与样品匀液混合均匀；待凝固后，第二次加入VRBA培养基覆盖在凝固样品的表层，得到培养平板；翻转平板，置于36±1℃培养；
(3)培养结束后，将平板放置到显微镜下观察，判断是否有酵母菌群。
2.根据权利要求1所述的酵母定性检测方法，其特征在于，所述样品均液的制备步骤为：用无菌吸管量取1～10ml样品原液，加入含有0～100ml生理盐水或磷酸盐缓冲液的灭菌玻璃瓶中，充分混合均匀，制成样品匀液。
3.根据权利要求1所述的酵母定性检测方法，其特征在于，所述第一次加入VRBA培养基的体积为15～20ml。
4.根据权利要求1所述的酵母定性检测方法，其特征在于，所述第二次加入VRBA培养基的体积为3～4ml。
5.根据权利要求1所述的酵母定性检测方法，其特征在于，所述平板培养的时间为10～24h。
6.将权利要求1-5任意一项所述的酵母定性检测方法应用于乳饮品及其加工过程和环境的检测。
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| CN202010378066.XA CN111500669A (zh) | 2020-05-07 | 2020-05-07 | 一种酵母定性检测方法和应用 |
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|---|---|---|---|---|
| CN114854817A (zh) * | 2022-01-24 | 2022-08-05 | 江苏雅博动物健康科技有限责任公司 | 一种活性酵母菌的检测方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2500681A1 (en) * | 2004-03-17 | 2005-09-17 | Becton, Dickinson And Company | Method of making microorganism sampling tube containing slanted culture medium and sample tube tray therefor |
| CN111057739A (zh) * | 2018-10-17 | 2020-04-24 | 上海新型烟草制品研究院有限公司 | 口含烟中大肠菌群的检测方法 |
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Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2500681A1 (en) * | 2004-03-17 | 2005-09-17 | Becton, Dickinson And Company | Method of making microorganism sampling tube containing slanted culture medium and sample tube tray therefor |
| CN111057739A (zh) * | 2018-10-17 | 2020-04-24 | 上海新型烟草制品研究院有限公司 | 口含烟中大肠菌群的检测方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 许蓉;孙健;高冬妮;黄守锋;宋刚;: "东北酸菜发酵过程菌群变化偶联酸菜品质的初步探究" * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114854817A (zh) * | 2022-01-24 | 2022-08-05 | 江苏雅博动物健康科技有限责任公司 | 一种活性酵母菌的检测方法 |
| CN114854817B (zh) * | 2022-01-24 | 2023-12-19 | 江苏雅博动物健康科技有限责任公司 | 一种活性酵母菌的检测方法 |
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