CN113046410A - 乙二胺四乙酸二钠的微生物限度检查方法 - Google Patents
乙二胺四乙酸二钠的微生物限度检查方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113046410A CN113046410A CN202110371562.7A CN202110371562A CN113046410A CN 113046410 A CN113046410 A CN 113046410A CN 202110371562 A CN202110371562 A CN 202110371562A CN 113046410 A CN113046410 A CN 113046410A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- sterile
- culture medium
- ethylene diamine
- diamine tetraacetate
- disodium ethylene
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L EDTA disodium salt (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].OC(=O)CN(CC([O-])=O)CCN(CC(O)=O)CC([O-])=O ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L 0.000 title claims abstract description 44
- 239000003109 Disodium ethylene diamine tetraacetate Substances 0.000 title claims abstract description 40
- 235000019301 disodium ethylene diamine tetraacetate Nutrition 0.000 title claims abstract description 40
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 29
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 title claims abstract description 23
- 238000007689 inspection Methods 0.000 title claims abstract description 12
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims abstract description 38
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims abstract description 33
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims abstract description 27
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims abstract description 26
- 239000012085 test solution Substances 0.000 claims abstract description 25
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims abstract description 21
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 12
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims abstract description 11
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims abstract description 11
- 238000005303 weighing Methods 0.000 claims abstract description 6
- 238000002386 leaching Methods 0.000 claims abstract description 3
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims description 17
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 13
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 10
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 6
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 4
- 241001148470 aerobic bacillus Species 0.000 claims description 4
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims description 2
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 claims description 2
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 claims description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims 2
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 abstract description 6
- 239000002994 raw material Substances 0.000 abstract description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract description 2
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 abstract description 2
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 abstract description 2
- 239000012449 sabouraud dextrose agar Substances 0.000 description 29
- 239000006150 trypticase soy agar Substances 0.000 description 29
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 18
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 11
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 8
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 8
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 8
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 238000005374 membrane filtration Methods 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 3
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 3
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 3
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 3
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 2
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 description 2
- 238000012797 qualification Methods 0.000 description 2
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
- C12Q1/22—Testing for sterility conditions
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Public Health (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明涉及一种乙二胺四乙酸二钠的微生物限度检查方法，包括以下步骤：称取乙二胺四乙酸二钠加入无菌氯化钙溶液中制成供试液；准确量取适宜稀释级的供试液至无菌过滤器内，开启真空泵和阀门进行过滤，再用无抑菌性的淋洗液淋洗滤膜；过滤完毕，用无菌镊子将滤膜菌面朝上贴于TSA培养基、SDA培养基表面倒置培养，定时观察菌落生长情况，点计滤膜上生长的所有菌落数，取计数结果最高的菌落数平均值作为最终结果。本发明采用薄膜过滤法和中和剂来去除乙二胺四乙酸二钠的抑菌性，本发明方法能够有效检出乙二胺四乙酸二钠中的微生物污染，为该原料的质量控制提供了保障。
Description
技术领域
本发明涉及一种微生物限度检查方法，具体地说是一种乙二胺四乙酸二钠的微生物限度检查方法。
背景技术
乙二胺四乙酸二钠是常用的无菌药品所用原料之一，需对其微生物限度进行检查。根据2020版中国药典<1105非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法>的要求，供试品检查方法主要有平皿法和薄膜过滤法，其中薄膜过滤法需要供试品能完全溶解于稀释液中，乙二胺四乙酸二钠溶解度较低(约为110g/L)且在室温时溶解较慢，无法满足薄膜过滤法的要求，因此常规检验时一般采用平皿法，平皿法的具体步骤如下：
供试液的制备：准确称取10g供试品，加入100mL、pH7.0的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，混匀制成稀释度为1:10的供试液；
平皿法检查：准确量取1ml供试液转移至直径9cm的无菌平皿中，再加入15～20ml温度不超过45℃融化的TSA或SDA培养基，混匀后，在室温下冷却，待培养基凝固后倒置培养。
由于乙二胺四乙酸二钠有一定的抑菌活性，在较低的稀释倍数下，平皿法不能有效去除抑菌性，因此无法准确检出微生物的污染。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术中存在的不足，提供一种能够有效地去除供试品抑菌性、能够有效地检出乙二胺四乙酸二钠的微生物污染、确保检验结果准确的一种乙二胺四乙酸二钠微生物限度检查方法。
按照本发明提供的技术方案，所述乙二胺四乙酸二钠的微生物限度检查方法包括以下步骤：
步骤一、准确称取乙二胺四乙酸二钠，加入0.1％(g/g)～1％(g/g)无菌氯化钙溶液中，在35～45℃下加热10～60分钟，充分混匀至完全溶解，制成所需稀释级的供试液；
步骤二、准确量取适宜稀释级的供试液至无菌过滤器内，过滤器的数量取决于期望获得用于需氧菌总数计数以及霉菌和酵母菌总数计数的样品数量，开启真空泵和阀门进行过滤；过滤完毕，用无抑菌性的淋洗液淋洗滤膜；过滤完毕，关闭阀门和真空泵，打开无菌过滤器的滤缸，用无菌镊子将滤膜菌面朝上贴于TSA培养基与SDA培养基表面，一个培养基平皿内只放入一张滤膜，TSA培养基用于需氧菌总数计数，SDA培养基用于霉菌和酵母菌总数计数；
步骤三、将TSA培养基置于30～35℃、SDA培养基置于20～25℃，均倒置培养3～7天，定时观察菌落生长情况，点计滤膜上生长的所有菌落数，取计数结果最高的菌落数平均值作为最终结果。
作为优选，步骤一中，无菌氯化钙的浓度为0.3％(g/g)。
作为优选，步骤一中，加热温度控制在40～44℃，加热时间控制在45分钟。
作为优选，步骤一中，稀释度控制在1:10。
作为优选，步骤二中，所述淋洗液为pH7.0的无菌NaCl-蛋白胨缓冲液、0.1％(g/g)无菌蛋白胨水溶液或者pH7.2磷酸盐缓冲液。
作为优选，步骤三中，将TSA培养基置于30～35℃下培养5天，将SDA培养基置于20～25℃下培养5天。
本发明在供试液制备中使用了0.1％(g/g)～1％(g/g)的无菌氯化钙溶液，其中的二价钙离子能够与乙二胺四乙酸二钠进行螯合，作为中和剂可去除乙二胺四乙酸二钠的抑菌性。
本发明在供试液制备中增加了35～45℃下加热10～60分钟的步骤是由于乙二胺四乙酸二钠溶解度较低(约为110g/L)且在室温时溶解较慢，通过提高溶解温度(35～45℃)，加速了乙二胺四乙酸二钠的溶解，且冷却后也不会再次析出，从而解决了样品的难以过滤的问题。加热温度未超过45℃，符合2020版中国药典<1105非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法>中供试液制备的要求，不会产生假阴性结果。
本发明采用薄膜过滤法和加入中和剂来(无菌氯化钙溶液)去除乙二胺四乙酸二钠的抑菌性，本发明的方法能够有效检出乙二胺四乙酸二钠中的微生物污染，为该原料的质量控制提供了保障。
具体实施方式
下面结合具体验证例对本发明的有效性进行确认。
以下验证过程所使用的乙二胺四乙酸二钠由Merck/上海广牧贸易有限公司提供。
验证例1
准确称取10g乙二胺四乙酸二钠，加入100mL、0.3％(g/g)无菌氯化钙溶液中，40～44℃加热45分钟，充分混匀至完全溶解，制成稀释度为1:10的供试液。
(1.1)试验组
取制备好的上述供试液，无菌分装于试管中，每管9.9ml，分别加入0.1ml的ATCC(美国菌种保藏中心)菌种制备的挑战菌液，使每1ml供试液中含菌量不大于100cfu。取上述混合液全部转移至无菌过滤器内，开启真空泵和阀门进行过滤；过滤完毕，分别用pH7.0的无菌NaCl-蛋白胨缓冲液淋洗滤膜2次，每次100ml；滤完，关闭阀门和真空泵，打开无菌过滤器的滤缸，用无菌镊子将滤膜菌面朝上贴于胰酪大豆胨琼脂(TSA)培养基与沙氏葡萄糖琼脂(SDA)培养基表面，每种试验微生物平行制备2个培养基。
将TSA培养基置于30～35℃下倒置培养5天，将SDA培养基置于20～25℃下倒置培养5天。逐日读数读数观察并点计滤膜上生长的所有菌落数，取计数结果最高的菌落数平均值作为最终结果。
(1.2)供试品对照组
供试品对照组用于测定乙二胺四乙酸二钠本底中的含菌量。
取制备好的上述供试液，无菌分装于试管中，每管9.9ml。分别加入0.1ml的pH7.0的无菌NaCl-蛋白胨缓冲液。取上述混合液全部转移至无菌过滤器内，开启真空泵和阀门进行过滤；过滤完毕，分别用pH7.0的无菌NaCl-蛋白胨缓冲液淋洗滤膜2次，每次100ml；滤完，关闭阀门和真空泵，打开无菌过滤器的滤缸，用无菌镊子将滤膜菌面朝上贴于胰酪大豆胨琼脂(TSA)培养基与沙氏葡萄糖琼脂(SDA)培养基表面。
将TSA培养基置于30～35℃下倒置培养5天，将SDA培养基置于20～25℃下倒置培养5天。逐日读数读数观察并点计滤膜上生长的所有菌落数，取计数结果最高的菌落数平均值作为最终结果。
(1.3)菌液对照组
菌液对照组用于测定加入的挑战微生物的含菌量。
取pH7.0的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液无菌分装于试管中，每管9.9ml，分别加入0.1ml的ATCC(美国菌种保藏中心)菌种制备的挑战菌液，使每1ml供试液中含菌量不大于100cfu。取上述混合液全部转移至无菌过滤器内，开启真空泵和阀门进行过滤；过滤完毕，分别用pH7.0的无菌NaCl-蛋白胨缓冲液淋洗滤膜2次，每次100ml；滤完，关闭阀门和真空泵，打开无菌过滤器的滤缸，用无菌镊子将滤膜菌面朝上贴于胰酪大豆胨琼脂(TSA)培养基与沙氏葡萄糖琼脂(SDA)培养基表面，每种试验微生物平行制备2个培养基。
将TSA培养基置于30～35℃下倒置培养5天，将SDA培养基置于20～25℃下倒置培养5天。逐日读数读数观察并点计滤膜上生长的所有菌落数，取计数结果最高的菌落数平均值作为最终结果。
(1.4)稀释剂对照组
稀释剂对照组用于确认加入的稀释液是否对微生物无毒性。
取0.3％(g/g)无菌氯化钙溶液，无菌分装于试管中，每管9.9ml，分别加入0.1ml的ATCC(美国菌种保藏中心)菌种制备的挑战菌液，使每1ml供试液中含菌量不大于100cfu。取上述混合液全部转移至无菌过滤器内，开启真空泵和阀门进行过滤；过滤完毕，分别用pH7.0的无菌NaCl-蛋白胨缓冲液淋洗滤膜2次，每次100ml；滤完，关闭阀门和真空泵，打开无菌过滤器的滤缸，用无菌镊子将滤膜菌面朝上贴于胰酪大豆胨琼脂(TSA)培养基与沙氏葡萄糖琼脂(SDA)培养基表面，每种试验微生物平行制备2个培养基。
将TSA培养基置于30～35℃下倒置培养5天，将SDA培养基置于20～25℃下倒置培养5天。逐日读数读数观察并点计滤膜上生长的所有菌落数，取计数结果最高的菌落数平均值作为最终结果。
合格标准
实验结果应标明，细菌培养不超过3天、真菌培养不超过5天时，试验组的挑战微生物的回收率在50％～200％范围内。稀释剂对照组的菌回收率在50％～200％范围内。
表1.ATCC挑战微生物的回收率
验证例2
准确称取10g乙二胺四乙酸二钠，加入100mL、0.3％(g/g)无菌氯化钙溶液中，40～44℃加热45分钟，充分混匀至完全溶解，制成稀释度为1:10的供试液。
(2.1)试验组
取制备好的供试液，无菌分装于试管中，每管9.9ml。分别加入0.1ml的CMCC(中国医学微生物菌种保藏中心)菌种制备的挑战菌液，使每1ml供试液中含菌量不大于100cfu。取上述混合液全部转移至无菌过滤器内，开启真空泵和阀门进行过滤；过滤完毕，分别用pH7.0的无菌NaCl-蛋白胨缓冲液淋洗滤膜2次，每次100ml；滤完，关闭阀门和真空泵，打开无菌过滤器的滤缸，用无菌镊子将滤膜菌面朝上贴于胰酪大豆胨琼脂(TSA)培养基与沙氏葡萄糖琼脂(SDA)培养基表面，每种试验微生物平行制备2个培养基。
将TSA培养基置于30～35℃下倒置培养5天，将SDA培养基置于20～25℃下倒置培养5天。逐日读数读数观察并点计滤膜上生长的所有菌落数，取计数结果最高的菌落数平均值作为最终结果。
(2.2)供试品对照组
供试品对照组用于测定乙二胺四乙酸二钠本底中的含菌量。
取制备好的上述供试液，无菌分装于试管中，每管9.9ml。分别加入0.1ml的pH7.0的无菌NaCl-蛋白胨缓冲液。取上述混合液全部转移至无菌过滤器内，开启真空泵和阀门进行过滤；过滤完毕，分别用pH7.0的无菌NaCl-蛋白胨缓冲液淋洗滤膜2次，每次100ml；滤完，关闭阀门和真空泵，打开无菌过滤器的滤缸，用无菌镊子将滤膜菌面朝上贴于胰酪大豆胨琼脂(TSA)培养基与沙氏葡萄糖琼脂(SDA)培养基表面。
将TSA培养基置于30～35℃下倒置培养5天，将SDA培养基置于20～25℃下倒置培养5天。逐日读数读数观察并点计滤膜上生长的所有菌落数，取计数结果最高的菌落数平均值作为最终结果。
(2.3)菌液对照组
菌液对照组用于测定加入的挑战微生物的含菌量。
取pH7.0的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液无菌分装于试管中，每管9.9ml，分别加入0.1ml的CMCC(中国医学微生物菌种保藏中心)菌种制备的挑战菌液，使每1ml供试液中含菌量不大于100cfu。取上述混合液全部转移至无菌过滤器内，开启真空泵和阀门进行过滤；过滤完毕，分别用pH7.0的无菌NaCl-蛋白胨缓冲液淋洗滤膜2次，每次100ml；滤完，关闭阀门和真空泵，打开无菌过滤器的滤缸，用无菌镊子将滤膜菌面朝上贴于胰酪大豆胨琼脂(TSA)培养基与沙氏葡萄糖琼脂(SDA)培养基表面，每种试验微生物平行制备2个培养基。
将TSA培养基置于30～35℃下倒置培养5天，将SDA培养基置于20～25℃下倒置培养5天。逐日读数读数观察并点计滤膜上生长的所有菌落数，取计数结果最高的菌落数平均值作为最终结果。
(2.4)稀释剂对照组
稀释剂对照组用于确认加入的稀释液是否对微生物无毒性。
取0.3％(g/g)无菌氯化钙溶液，无菌分装于试管中，每管9.9ml，分别加入0.1ml的CMCC(中国医学微生物菌种保藏中心)菌种制备的挑战菌液，使每1ml供试液中含菌量不大于100cfu。取上述混合液全部转移至无菌过滤器内，开启真空泵和阀门进行过滤；过滤完毕，分别用pH7.0的无菌NaCl-蛋白胨缓冲液淋洗滤膜2次，每次100ml；滤完，关闭阀门和真空泵，打开无菌过滤器的滤缸，用无菌镊子将滤膜菌面朝上贴于胰酪大豆胨琼脂(TSA)培养基与沙氏葡萄糖琼脂(SDA)培养基表面，每种试验微生物平行制备2个培养基。
将TSA培养基置于30～35℃下倒置培养5天，将SDA培养基置于20～25℃下倒置培养5天。逐日读数读数观察并点计滤膜上生长的所有菌落数，取计数结果最高的菌落数平均值作为最终结果。
合格标准
实验结果应标明，细菌培养不超过3天、真菌培养不超过5天时，试验组的挑战微生物的回收率在50％～200％范围内。稀释剂对照组的菌回收率在50％～200％范围内。
表2.CMCC挑战微生物的回收率
以上验证例1和验证例2的结果显示：稀释剂对照组的菌回收率在83％～126％，在50％～200％范围内，说明无菌氯化钙溶液作为稀释剂对微生物无毒性。试验组的菌回收率在77％～135％，在50％～200％范围内，说明本方法可以有效检出乙二胺四乙酸二钠中的微生物。
本发明方法的微生物限度检查方法适用性验证结果合格，可以用该方法进行乙二胺四乙酸二钠的微生物限度检查。
Claims (6)
1.一种乙二胺四乙酸二钠的微生物限度检查方法，其特征是该检查方法包括以下步骤：
步骤一、准确称取乙二胺四乙酸二钠，加入0.1%(g/g)~1%(g/g)无菌氯化钙溶液中，在35~45℃下加热10~60分钟，充分混匀至完全溶解，制成所需稀释级的供试液；
步骤二、准确量取适宜稀释级的供试液至无菌过滤器内，过滤器的数量取决于期望获得用于需氧菌总数计数以及霉菌和酵母菌总数计数的样品数量，开启真空泵和阀门进行过滤；过滤完毕，用无抑菌性的淋洗液淋洗滤膜；过滤完毕，关闭阀门和真空泵，打开无菌过滤器的滤缸，用无菌镊子将滤膜菌面朝上贴于TSA培养基与SDA培养基表面，一个培养基平皿内只放入一张滤膜，TSA培养基用于需氧菌总数计数，SDA培养基用于霉菌和酵母菌总数计数；
步骤三、将TSA培养基置于30~35℃、SDA培养基置于20~25℃，均倒置培养3~7天，定时观察菌落生长情况，点计滤膜上生长的所有菌落数，取计数结果最高的菌落数平均值作为最终结果。
2.如权利要求1所述的乙二胺四乙酸二钠的微生物限度检查方法，其特征是：步骤一中，无菌氯化钙的浓度为0.3%(g/g)。
3.如权利要求1所述的乙二胺四乙酸二钠的微生物限度检查方法，其特征是：步骤一中，加热温度控制在40~44℃，加热时间控制在45分钟。
4.如权利要求1所述的乙二胺四乙酸二钠的微生物限度检查方法，其特征是：步骤一中，稀释度控制在1:10。
5.如权利要求1所述的乙二胺四乙酸二钠的微生物限度检查方法，其特征是：步骤二中，所述淋洗液为pH7.0的无菌NaCl-蛋白胨缓冲液、0.1%（g/g）无菌蛋白胨水溶液或者pH7.2磷酸盐缓冲液。
6.如权利要求1所述的乙二胺四乙酸二钠的微生物限度检查方法，其特征是：步骤三中，将TSA培养基置于30~35℃下培养5天，将SDA培养基置于20~25℃下培养5天。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110371562.7A CN113046410A (zh) | 2021-04-07 | 2021-04-07 | 乙二胺四乙酸二钠的微生物限度检查方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110371562.7A CN113046410A (zh) | 2021-04-07 | 2021-04-07 | 乙二胺四乙酸二钠的微生物限度检查方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN113046410A true CN113046410A (zh) | 2021-06-29 |
Family
ID=76517703
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202110371562.7A Pending CN113046410A (zh) | 2021-04-07 | 2021-04-07 | 乙二胺四乙酸二钠的微生物限度检查方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN113046410A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113621051A (zh) * | 2021-07-20 | 2021-11-09 | 浙江诸暨聚源生物技术有限公司 | 重组人源化胶原蛋白的微生物限度检查方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107164454A (zh) * | 2017-07-03 | 2017-09-15 | 中国大冢制药有限公司 | 苯扎氯铵溶液微生物限度检查方法 |
| CN109580319A (zh) * | 2019-01-18 | 2019-04-05 | 中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所 | 中药液体样品微生物限度检测仪 |
-
2021
- 2021-04-07 CN CN202110371562.7A patent/CN113046410A/zh active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107164454A (zh) * | 2017-07-03 | 2017-09-15 | 中国大冢制药有限公司 | 苯扎氯铵溶液微生物限度检查方法 |
| CN109580319A (zh) * | 2019-01-18 | 2019-04-05 | 中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所 | 中药液体样品微生物限度检测仪 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| "乙二胺四乙酸二钠检验标准操作流程", 百度文库, pages 2 * |
| 于桂兰;杨建春;阚淑月;王春艳;张琦;: "乙二胺四乙酸钠铁口服液微生物限度检查方法验证", 中国药师, no. 06, pages 633 - 635 * |
| 邢亚非;张健;黄波;沈莉莉;: "含洁尔灭类消毒剂微生物限度检查方法的探讨", 中国医药指南, no. 27, pages 196 - 54 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113621051A (zh) * | 2021-07-20 | 2021-11-09 | 浙江诸暨聚源生物技术有限公司 | 重组人源化胶原蛋白的微生物限度检查方法 |
| CN113621051B (zh) * | 2021-07-20 | 2023-07-21 | 浙江诸暨聚源生物技术有限公司 | 重组人源化胶原蛋白的微生物限度检查方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN119552939B (zh) | 用于检测牛乳房炎中革兰氏阴性菌的显色培养基及其测试板 | |
| CN116334170A (zh) | 一种针对牛源无乳链球菌的鉴别培养基 | |
| CN113046410A (zh) | 乙二胺四乙酸二钠的微生物限度检查方法 | |
| CN112481350A (zh) | 用于快速检测霉菌和酵母菌总数的复合培养基及其制备方法 | |
| CN112608973A (zh) | 一种饮用天然矿泉水中产气荚膜梭菌的检验方法 | |
| CN116004430A (zh) | 一株植物乳杆菌NHE-LpE9及应用 | |
| CN104946724B (zh) | 用于检测中药口服液体制剂中乳杆菌的培养基和检测方法 | |
| CN110819570A (zh) | 一种血琼脂平板及其制备方法 | |
| CN114645072B (zh) | 一种液态b群链球菌选择性显色培养基及其制备方法 | |
| CN116376763A (zh) | 一种针对口罩中致病性化脓菌的共生增菌培养基 | |
| CN112680499B (zh) | 一种厌氧微生物的体外检测试剂盒 | |
| CN111235213A (zh) | 一种盐酸雷尼替丁胶囊的需氧菌总数检查法 | |
| CN113151081A (zh) | 一种百日咳鲍特菌培养基及其制备方法 | |
| CN111500669A (zh) | 一种酵母定性检测方法和应用 | |
| CN112831539A (zh) | 一种需氧微生物的体外检测试剂盒 | |
| CN113122611A (zh) | 蒙脱石散微生物限度检查方法 | |
| Bono et al. | Detection of Foodborne Gram-Positive Bacteria by Cultural Methods | |
| Blondeau et al. | Evaluation of aerobic Bactec 6A non-resin-and 16A resin-containing media for the recovery of microorganisms causing peritonitis | |
| CN107365828B (zh) | 用于快速鉴别卡他莫拉菌的显色培养基 | |
| CN117778522A (zh) | 一种尼麦角林的生物限度检验方法 | |
| CN118064538A (zh) | 一种新制的流感嗜血杆菌无血源性鉴定培养基 | |
| CN118109550A (zh) | 双歧杆菌活菌数检测培养基及检测方法和应用 | |
| CN110791455A (zh) | 一种巧克力色琼脂平板及其制备方法 | |
| CN110747144A (zh) | 一种淋球菌琼脂平板及其制备方法 | |
| CN117802197A (zh) | 一种乳酸菌素非致病性杂菌检查方法及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20210629 |
|
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |