JPS5945890A - 新規抗生物質アクミマイシンおよびその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規抗生物質アクミマイシン（Ａｃｍｉｍｙｃ
ｉｎ）またはその酸付加塩およびその製造法ｔこ関する
。

本発明者らは新規なアミノ糖抗生物質の探索葡目的とし
て種々の放線菌を純粋に分離し、その生産する代謝産物
ｅこついて研究を続けた結果、山口県美称郡秋芳町の畑
土壌から分離した放線菌ＡＣグ３Ｓ６９株の培養物中に
ダラム陽性菌およびグフム陰性菌Ｑこ対して抗菌活性を
有する物質が産生されることを見い出した。ついで、該
培養物から該有効物質を分離〜精製し、その理化学的性
質を調べた結果、後記の如き諸性質を有することが判っ
た。このような理化学的性質を有する物質は他ｅこ見当
らないことから、この物質を抗生物質アクミマイシンと
命名することにした。本発明はか＼る知見ｅこ基いて完
成されたものである。

本発明は後記の理化学的性質を有する抗生物質お アクミマイシンまたはその酸付加塩勾よびヌトレブトマ
イセス属ｔこ属する抗生物質アクミマイシン生産菌を培
地（こ培養して培養物中に抗生物質アクミマイシンを蓄
積せしめ、該培養物から抗生物質アクミマイシンを採取
することを特徴とする抗生物質アクミマインンまたはそ
の酸付加塩の製造法である。

本抗生物質アクミマイシン生産菌は、ストレブトマイセ
ス属Ｃこ属するが、例えば木発明者らが分離したストレ
ブトマイセス属Ｑこ属する菌株Ａ％グＯ ｊｊ９は本発明ｅこ最も有効ｔこ使用される菌株の一例
であって、本菌株の菌学的性質を示すと次の通りである
。

ａ．形態的特徴 ＡＣグ５５７株はスターチ・無機塩寒天培地〔ＩＳＰ培
地ＩＩ）（Ｉｎｔｅｒ．Ｊ，Ｓｙｓｔｅｍ，Ｂａｃｔ，
ｅｒｉｏ１，，−イー１３／３〜３’ＩＯＣＩ９乙乙）
〕上で２７℃、／０〜／％日間培養し、観察した所見は
次の通りである。尚、オートミーノレ寒天培地（工ＳＰ
培地３）およびベネット氏寒天培地上においてもほソ同
様な形態が観察された。

基生菌糸は曲線玉で，分校を伴って伸長し、直；ＩＫ 径０グ〜θｊμで、菌糸の分裂や胞子の着生はない。基
生菌糸より生じた気菌糸は曲線玉で単純分釈 岐をなして伸長し，直径０．４ｔ〜０．６μであり、多
数の連鎖した胞子を形成する。胞子の連鎖は螺旋を呈し
、ゆるく！〜グ回巻いたものが多い。胞子の形は短桿形
ないし卵形で、大きさはｏ．ｌｌ．〜０．乙×０．乙〜
／，０ρであり、その表面は平滑である。

鞭毛胞子や胞子のうは形成しない。

ｂ．次の各培地における生育状態 各培地上で２７℃、／グ日間培養し，観察した所見は第
ｌ表の通りである。色の表示はＣｏｌｏｒＨａｒｍｏｎ
ｙＭａｎｕａｌ第グ版ｌタｓｇ年（Ｃｏｎもａｉｎｃｒ
ＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎｏｆＡｍｅｒｉｃａ）ｔｎよる
色の分類ｅこ従った。

−５０３− Ｃ．次の各生理的性質 ｌ）．生育温度範囲；ｌ乙〜３３℃ ２）．ゼラチンの液化；陽性 ３）．ヌターチの加水分解；陽性 ク）．脱脂牛乳の凝固；陰性 脱脂牛乳のペブトン化；陽性 Ｓ）．メラニン様色素の生成；チロシン寒天培地および
ペブトン・酵母エキヌ・鉄寒天培地上で陰性 ｄ．次の炭素源の同化性（十；陽性，一；陰性） Ｌ−７ラビノーヌ；一Ｄ−マンニトーノレ；−Ｄ−７フ
クトース；−ラフィノーヌ；−Ｄ−グルコースｉ十Ｌ−
ラムノーヌ；ーンユクロース，−Ｄ−キンローヌ逼十 イノントーｌレ；一 ｅ．菌体組成 Ｂ，Ｂｅｃｋｅｒらの方法（Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉ
ｏｌ．，Ｌｌ，グ２ｌ−グ２３（ｌＦＡグ）〕により分
析したジアミノビメリン酸はＬＬ一型が検出された。

以上の菌学的性質から、本ｈｃｔ．ｔｓｓタ株は真性の
基性菌糸より多数の胞子の連鎖を有する気菌糸を形成し
、ジアミノビメリン酸がＬＬ−型であり、鞭毛胞子や胞
子のうを形成しないなどの特徴的性質を有することより
判断すると、ストレブトマイセス属ｔこ属する菌株であ
ることは明らかである。よって、本菌株をストレブトＸ
セス・ヌビシーズ（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐ．）
ＡＣＩＩ３ｊ９と称することｔこした。尚、本菌株は工
業技術院微生物工業技術研究所ｔこ受託番号微工研菌寄
第６Ｕ才号（ＦＥＲＭＰ−６６’Ａｆ）として寄託され
ている。

以上、抗生物質アクミマイシン生産菌ｔこついて説明し
たが、放線菌の一般的性状として菌学上の性質は極めて
変異し易《、一定したものではなく、自然的にあるいは
通常行われる紫外線照射，放射線照射または変異誘導剤
例えば、Ｎ−メチルーＮ−ニトローＮ−ニトロングアニ
ジン、エチルメタンスルホネートなどを用いる人工的変
異手段ｔこより変異することは周知の事実であり、この
ような人工的変異株は勿論、自然変異株も含め、ストレ
ブトマイセス属に属し、抗生物質アクミマイシンを生産
する能力を有する菌株は、すべて本発明ｔこ使用するこ
とができる。

本発明においては、先ずストレブトマイセス属に属する
抗生物質アクミマインン生産菌が適当な培地に培養され
る。木菌の培養ｅこおいては通常放線菌の培養法が一般
に用いられる。培地としては微生物が同化し得る次素源
、消化し得る窒素源、さらｅこは、必要ｅこ応じ、無機
塩などを含有させた栄養培地が使用される。同化し得る
炭素源としては、グルコース、フラクトース、ガラクト
ース、マンノース、グリセリン、糖蜜、澱粉、デキヌト
リン、コーンスチーブ・リカー、有機酸などが単独また
は組合せて用いられる。消化し得る窒素源としては、フ
ァーマ・メディア、ペプトン、肉エキ’ｅ’大豆粉、コ
ーンφヌチープ・リカー、綿実粕、カゼイン、大豆蛋白
分解物、アミノ酸、尿素などの有機窒素源、硝酸塩、ア
ンモニウム塩などの無機窒素化合物が単独または組合せ
て用いられる。その他、必要ｅこ応じ、ナトリウム塩、
カリウム塩、カルンウム塩、マグネシウム塩、リン酸塩
などの無機塩類が添加される。さらｔこ、必要に応じて
、微量栄養素，発育促進物質などを適当に添加してもよ
い。

培養は通常振とうまたは通気攪拌培養などの好気的条件
下で行うのがよい。工業的ｔこは深部通気攪拌培養が好
ましい。培地のｐＨはや＼酸性ないし中性附近で培養を
行うのが好ましい。培養温度は通常２２〜３２℃付近ｔ
こ保つのがよい。培養時間は液体培養の場合、通常λ〜
Ｓ日培養を行うと本抗生物質が生成、蓄積される。好ま
しくは培養物中の本抗生物質の蓄積量が最大ｔこ達した
ときｔこ培養を終了すればよい。これらの培地組成、培
地の液性、培養温度、攪拌速度、通気量などの培養条件
は使用する閑株の種類や外部の条件など１こ応じて好ま
しい結果が得られるようｔこ適宜調節、選択されること
は言うまでもない。液体培養において発泡があるときは
、ンリコン油、植物油，界面活性剤などの消泡剤を適宜
使用される。

このようｅこして得られた培養物中ｔこ蓄積された本抗
生物質は主として培養枦液中ｔこ含有されるので、培養
物を炉過補助剤、例えばセライｌ・、パーライト、ハイ
ブローヌーパーセルなどを加エて瀘過するか、または遠
心分離して培養？Ｆ’液と菌体とｔこ分離し、その培養
炉液から本抗生物質を採取するのが有利である。

培養Ｐ液から本抗生物質を分離、精製するためｅこは．
アミノ糖抗生物質を分離する技術の分野で知られた種々
の方法で行い得る。例えば陽イオン交換樹脂または他の
固体吸着剤を用いるクロマトグフフイーのような方法に
よって培養液から分離できる。好ましくは、培養炉液を
ｐＨ７ｔこ調節し、アンバーライトＩＲＣ−６０、ＣＧ
−！；０などの弱酸性陽イオン交換樹脂、最も好ましく
はアンモニウム型を用いるクロマトグフフィーによる方
法アるいはＣＭ−セルロースなどのイオン交換セノレロ
ーヌ，ＣＭ−セファデックスなどのイオン交換セファデ
ックスなどを用いるクロマトグフフィーｅこよる方法で
ある。次いで吸着された本抗生物質を弱塩基の溶出剤、
例えば希薄な水酸化アンモニウム溶液で、必要に応じそ
の濃度を順序変えて，溶出すればよい。このようをこし
て得られた溶出液を同一成分を含むフフクションを合せ
，濃縮または凍結乾燥して抗生物質アクミマイシン’Ｃ
？Ｉることができる。

さらシこ、精製を−必要とする場合には、上記のクロマ
トグラフィーを繰り返し行うことにより分離，精製でき
る。

このようｔこして得られた抗生物質アクミマイシンは塩
基性物質であるから、公知の方ｒｈ＋こより酸付加塩を
形成し得る。このような塩としては、医薬的（こ許容し
得る非責性塩が挙げられる。例えは塩酸，硫酸、リン酸
などの無機酸との酸付加塩，酢酸，ブロピオン酸、リン
ゴ酸、コハク酸，酒石酸、クエン酸、Ｌ−グノレタミン
酸、Ｌ−アスパラギン酸などの有機酸との酸付加塩であ
る。

次ｔこ、本抗生物質アクミマイシンの理化学的性質およ
び生物学的性質ｔこついて述べる。

■理化学的性質 ■元素分析値ｉ”１．ｄ２６Ｎ２０７・ｌ外Ｈ２０とし
て Ｃ％Ｈ％Ｎ％ 実測値グｆ．３乙７３２Ｚど乙 理論値ｌＪｔとｌ乙’７７７７．！；／■分子量；３グ
乙（ファースト・アトム・ボンパー１’メント・マスヌ
ペクトノレヨリ）■融点；ｌ２３℃（分解） ■比旋光度；〔α〕讐＋ｌＩＩＡ．１°（ｃ＝ハ水）■
紫外部吸収ヌペクトμ；水溶液で２２０〜３乙Ｑｎｍｆ
こ特徴的な極大吸収を示さず、末端吸収を示すのみであ
る。

■赤外部吸収スペクトノレ（ＫＢｒ法）；第ｌ図の通り
であって、３ｔ００、コタ００％／乙７！、ｉｔｉ−ｓ
ｓ．ｉ３ｓｏ，ｉｘ３ｓ、／Ｏｌ．Ｏｃｍ’付近の各波
長ｔこ吸収帯を有する。

■核磁気共鳴ヌペク｝／レ（炭素核，Ｄ２０中２ＪＨＨ
ｚにてジオキサンを内部基準として測定）；／３０．！
．／０３．３、タ左３、どタグ、７／．乙、７０，２、
乙乙．ｇ，乙乙．２、乙２．０、乙ｏ．７，ｊＺ弘，５
乙．ｌ、３／．！；．３／．３およびｌ／．７ｐｐｍに
シグナルを有する。

■核磁気共鳴スペクトル（水素核，Ｄ２０中ｌｏＯＭＨ
ｚ、内部基準ＤＳＳ），第２図の通り、■溶剤ｔこ対す
る溶解性；水ｔこ可溶、メタノールなどの低級アルコー
ｌレ冫こ微溶、アセトン、ベンゼン、酢酸エチルｔこ不
溶、 ■呈色反応；二冫ヒドリン反応、過マンガン酸カリウム
脱色反応は陽性、工ｙソンモルガン反応、坂口反応は陰
性、 ■塩基性，酸性、中性の区別；塩基性、■物質の色；淡
黄色、 ０ンリカケノレ薄層クロマトグラフィ−（メルク社製Ａ
ｒｔ，ｔ７３！ｒ）ｉ Ｒｆ二ｏ．２ｑｒ−クロロホルムーメタノールーｌグ％
アンモニア水（／：２：／）） Ｒｆ＝０．７７Ｃクロロホルムーメタノールーλｇ％ア
ンモニア水（２：３：，ｚ）〕 本抗生物質アクミマイシンと類似する抗生物質としては
アクチノヌペクタシン（スペクチノマイシン）（Ａｎｔ
ｂｉｏｔｉｃｓａｎｄＣｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ，／／
，ｌｉｇ−ｉｘ２＜ｉタ乙ｌ）、特公昭３９一２Ｌ？９
３号、特開昭グどー／Ｉｌｌどタ号〕が挙げられるが、
上記の理化学的性質より本抗生物質アクミマイシンは新
規な抗生物質であることが明らかであり、その平面構造
としては次の化学構造式が推定される。

■生物学的性質 ■抗菌ヌペクトノレ 抗生物質アクミマイシンの寒天稀釈法ｅこよル微生物生
育最少阻止濃度（ＭＩＣ）（μＰ／ｍＡ’）は第２表の
通りである。

第１表 試験菌ＭＩＣ ＳＬａｐｈ．ａｕｒｅ＋＋ｓＡＴＣＣ乙３３１Ｐ’／０
０ｔｔ〃ＭＳ，２７／００ ｔｔｔｔ０１１９＞／００ ｔｔｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓｓｐ−ａｌ−／５ＱＳｔｒ
ｅｐｔ．ｐｙｏｇｅｎｅｓＩＶＪ．Ｙ，３３．／Ｂａｃ
ｉｌ］ｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓＡＴＣＣ．４７３３．２３
Ｅ．ｅｏｌｉＮＩＨＪ−ＪＣ，：ｌ６０Ｅ，ｃｏｌｉＷ
３乙３０２３ Ｅ，ｃｏｌｉＷ３１，３０ＲＧＮ／’ｌ＞／０θＣ１も
，ｆｒｅｕｎｄｉｉＧＮ３’Ｉ乙”）／００Ｋｌｅｂ．
ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅＡＴＣＣ／００３／／２．５Ｓａ
ｌＴｎ．ｅｎｔｅｒｉＬｉｄｉｓＧａｅｒｔｎｅｒ，ｌ
３−Ｓｈｉｇｅｌ］ａｓｏｎｎｅｉＥ３３２５Ｐｒｏｔ
ｅｕａｍｏｒｇａｎｉｉ（）２３タ’：）／００ｔｔｒ
ｅｔｔｇｅｒｉＡＣＲ７（）（７ＥｎＬｅｒｏｂａｃ．
ａｅｒｏｇｅｎｅｓＯ乙Ｊ！＞／００ｌｃｌｏａｃａａ
ＧＮ３３６３０ Ｓｅｒｒａｔｉａｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ２３；Ｐｓｅｕ
ｄｏ．ａａｒｕｇｉｎｏｓａＩＡＭ／０タｊ＞／ｏ？次
ｔこ実施例を挙げて本発明を具体的ｔこ説明するが、こ
れｔこより本発明を限定するものではない。

実施例 ３００ｍｌ容三角フラスコＣこグルコーヌｌ％、テキヌ
トリンｌ％、カゼイン分解物０．ｊ％、酵母エキス０．
ｊ％、炭酸カルシウム０．／％を含む液体培地＜ＰＨ７
０）／００イを分注し、ｉ２ｏ℃で２θ分間滅菌した後
、各培地／０木ｔこヌトレプトマイセヌ・スピーシーズ
ｋｃｌＩ！！９の斜面寒天培地ｅこ培養したｌ白金耳を
接種し，３０℃で７２時間往復振とう培養機上で振とう
培養して種母を得た。

３ｏｔ容ジャー・ファーメンターにデキストリンｊ％，
グノレコーヌＯ．ｊ％、大豆粉３％、炭酸力ｌレシウム
０．７％、塩化コバルト／．３ｐｐｍを含む液体培地（
ｐＨ７１））２ＯＡを仕込み、加熱滅菌した後、上記の
種母約／１を移植し、３０℃でタ乙時間、攪拌速度２０
θｒ，ｐ．ｍ，、通気量／夕ｔ／分の条件下で通気攪拌
培養して培養物／９１を得たこの培養物を炉過し、得ら
れた培養炉液をアンノ｛−ライトＩＲＣ−．５−ＱＣロ
ーム・アンド・ハースｉｆ）（アンモニウム型）ｌｔの
カラムｔこチャージし、水洗した後、２Ｎアンモニア水
３ｔで溶出した。全溶出液を／Ｑｍｌまで減圧濃縮し，
ａｍ液ｋＰＨ７．０｝こ調節した後、ＣＭ−セファデッ
クスＣ−２ＪＣファノレマシア・ファイン・ケミヵノレ
［１）（アンモニウム型）２００ｍｌのカラムにチャー
ジした。水洗した後、０がら。．／Ｈの直線型濃度勾配
ｔこよるアンモニア水２ｔで溶出した。溶出液は２９ｍ
ｌづつ分画し、各分画はクロロホノレムーメタノールー
／９％アンモニア水（／：．ｚ：／）を展開溶媒とする
シリヵゲ）ｖ（メノレク社製Ａｒも！；７３！；）薄層
クロマトグラフィーにより追跡しｂ””ヒ｝−’）ン発
色ｔこより抗生物質アクミマイン７ｆｅ確ｕしｆ．＝。

３５〜４ｔｓｒＢ分がアクミマイシンのみを含有したの
で、この両分を集めて減圧濃縮し、次いで凍結乾燥して
抗生物質アクミマイシン／００ｍ’ｉを得た。

【図面の簡単な説明】

第ｌ図は抗生物質アクミマイシンの赤外部吸収ヌヘク｝
／ｌ／、第２図は抗生物質アクミマイシンの核磁気共鳴
スペクトル（水素核）ヲ示ス。 手続補正書 昭和３ｇ年？１氏ユ７日 特許庁長官若杉和夫殿 ／．事件の表示 昭和５７年特許願第／３７タ２／号 λ，発明の名称 新規抗生物質アクミマイシンおよびその製造法 ３．補正をする者 事件との関係特許出願人 住所静岡県田方郡大仁町三福乙３２の／名称東洋醸造株
式箒 代表者高田哲 （旧代表者伊東富士馬） 久補正命令の日付 ，．．。、，，２。，．Ｃ、．。 自発 よ補正の対象 詳細な説明の欄 乙，補正の内容 （１）特許請求の範囲 別紙添付の通り訂正する。 （２）発明の詳細な説明の欄 明細書第３頁第／Ｓ行〜／乙行、第グ頁第２〜３行、グ
行、第ｇ頁第５〜乙行、第タ頁第／〜２行、５行、第７
７頁第乙〜ワ行の 「ヌトレプトマイセス」を ［７−Ｆレプトミセス」と訂正する。 同第乙頁第／表、第３行の ｒ（／ｇｇｅ〜／ｇｉｇ）Ｊを ［（／ｇｇｅ）〜／４ｉｇｊと訂正する。 同第ｇ頁第７〜ｇ行、第７７頁第７行の「ヌピーシーズ
」を 「エス・ピー」と訂正する。 同第７３頁第／７行の 「Ｄ２０中２３Ｈ」を １’−Ｄ２０中ｊ５Ｍｊと訂正する。 同第／ヴ頁第７５行の １−Ｒｆ＝０．２’ｌ」を 「Ｒｆ＝０．７３」と訂正する。 同第／７頁第タ行の 「往復」を １回転」と訂正する。 ７添付書類の目録 （１）特許請求の範囲を記載した書面 λ．特許請求の範囲 １）．次の理化学的性質を有する抗生物質アクミマイシ
ンまたはその酸付加塩。 元素分析〔Ｃ１５Ｈ２６Ｎ２０７・／”ＡＨ２０として
〕Ｃ％Ｈ％Ｎ％ 実測値グｇ３４７３２７ｇ乙 理論値Ｉｌ．！ｉ’．，！乙７．７７７３／分子量．３
’ｌ乙（マススペクトルより）、融点一７２３℃（分解
）、 比旋光度；〔α）２ｏ４＋４１１．．２°（Ｃ＝／，水
）紫外部吸収ヌペクトノレ；水溶液で２２０〜３乙Ｑｎ
ｍｔこ特徴的な極大吸収を示さず、末端吸収を示すのみ
である。 赤外部吸収ヌベクトル；第／図の通り、溶剤ｔこ対する
溶解性；水に可溶、メタノールなどの低級アルコールに
微溶、アセ卜ン、ベンゼン、酢酸エチルに不溶、 呈色反応；ニンヒドリン反応、過マンガン酸カリウム脱
色反応は陽性、エルソンモノレガン反応、坂口反応は陰
性、 塩基性、酸性、中性の区別；塩基性、 物質の色；淡黄色。 ２）．ストレプトニセヌ属に属する抗生物書アクミマイ
シン生産菌を培地に培養して培養物中に抗生物質アクミ
マイシンを蓄積せしめ、該培養物から抗生物質アクミマ
イシンを採取することを特徴とする抗生物質アクミマイ
シンまたはその酸付加塩の製造法。 ３）．抗生物質アクミマイシン生産菌がヌトレプト且セ
ス・エス・ピーＡＣｌｌｊ５タ（ＦＥＲＭＰ一乙乙グＳ
）である特許請求の範囲第２項記載の製造法。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 ｌ）．次の理化学的性質を有する抗生物質アクミマイシ
   ンまたはその酸付加塩。 元素分析〔Ｃユ５Ｈ２６Ｎ２０７・／％Ｈ２０として〕
   Ｃ％Ｈ％Ｎ％ 実測値グｇ．３６７３２７ど６ 理論値弘ど．２乙７．７７７．！；／，分子量；３ダ乙
   （マヌヌペクトノレより）、融点；ｌ２３℃（分解）， 比旋光度；〔α〕２′＋グーＡ２゜（Ｃ＝ハ水）Ｄ 紫外部吸収ヌペク｝／レ；水溶液で２２０〜３乙（；）
   ｎｍ＆こ特徴的な極太吸収を示さず、末端吸収を示すの
   みであるい 赤外部吸収スペク｝／レ；第ｌ図の通ね、溶剤１こ対す
   る溶解性；水ｔこ可溶、メタノールなどの低級アルコー
   ノレｔこ微溶，アセトン、ベンゼン、酢酸エチルｔこ不
   溶、 呈色反応；ニンヒドリン反応、過マンガン酸カリウム脱
   色反応は陽性、エルソンモルガン反応、坂口反応は陰性
   、 塩基性，酸性、中性の区別；塩基性、 物質の色；淡黄色。 ２）．ストレブトマイセヌ属に属する抗生物質アクミマ
   インン生産菌を培地ｅこ培養して培養物中ｔこ抗生物質
   アクミマイシンを蓄積せしめ、該培養物から抗生物質ア
   クミマイシンを採取することを特徴とする抗生物質アク
   ミマイシンまたはその酸付加塩の製造法。 ３）．抗生物質アクミマインン生産菌がストレブトマイ
   セスｅスビーシーズＡＣ４ｊＪ−５；’（ＦＥＲＭＰ−
   ６６’／−！；）である特許請求の範囲第２項記載の製
   造法。