JPS5929621A - Ａ ４７９３４ 抗生物質およびその製造 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は抗生物質の性質を持つ新規発酵生産物およびこ
れらの抗生物質を従来未知であった微生物Ｓｔｒｅｐｔ
ｏｍｙｃｅｓ　ｔｏｙｏｃａｅｎｓｉｓ　ＮＲＲＬ　１
５００９の培養により製造する方法に関する。

＋□□□□□□吟□□ 多くの微生物は病原性を持ちヒトおよび動物に病的状態
を起こす原因となる。

これまで多数の抗生物質が開発され、そのあるものは１
個乃至多数の病原性微生物に有効であった。然し、それ
ぞれの抗生物質に対して特異な病原微生物の耐性株が出
現する可能性の大きいことおよびその絶えざる脅威とか
ら、新しい抗生物質を開発する必要性は大きい。特にグ
ラム陽性の病原菌に属するブドウ球菌およびレンサ球菌
はペニシリンおよびエリスロマイシンの如き通常よく使
用される抗生物質に対ししばしは耐性を示す〔例えばＷ
、０．　Ｆｏｙｅ、　Ｐｒ１ｎｃｉｐｌｅｓ　ｏｆ　Ｍ
ｅｄｉｃｉｎａｌＣｈｅｍｉｓＬｒｙ、　６８４〜６８
６頁（１９７４）参照〕。

グリコペプタイド抗生物質に属する抗生物質Ａ４７９３
４はグラム陽性微生物に対し活性を示す。

この分野で知られているグリコペプタイド抗生物質には
、バンコマイシン〔アメリカ合衆国特許第３，０６７，
０９９号、その構造はＷｉ　ｌ　ｌ　ｉａｍｓｏｎらに
より報告されている（　Ｊ　、　Ａｍ’、　Ｃｈｅｍ、
　ｓｏｃ、　Ｉ　Ｑ　３゜６５８０〜６５８５（１９８
１））〕：アクタプラニン〔（抗生物質　Ａ−４６９６
）、合衆国特許第３，９５２，０９５号、その構造の一
部は合衆国特許第４，３２２，３４３号に報告されてい
る〕；リストセチン〔英国特許第７６５，８８６号、リ
スト七チン複合体の１因子であるリストセチンＡの構造
はＫａｌｍａｎらにより報告されている（Ｊ、ノーＣｈ
ｅｍ、　Ｓｏｃ、　１０２．８９７〜９０５（１９８０
））〕；アボパルシン〔合衆国特許第３，３３８．７８
６号、その構造についてはＥｌｌｅｓｔｅｄらにより記
載されティる（　Ｊ　、　Ａｍ、Ｃｂｅｍ、　Ｓｏｃ　
、　１０３゜６５２２〜６５２４（１９８１））］など
が包含される。

本発明に基づく抗生物質Ａ４７９３４またはその薬学的
に許容し得る塩は有用な抗生物質である。

抗生物質Ａ４７９３４は同化し得る炭素源、窒素源、無
機塩を含む培地中で、従来記載のない微生物ＳＬｒｅｐ
ｔｏｍｙｃｅｓ　ｔｏｙｏｃａｅｎｓｉｓ　ＮＲＲＬ　
１５００９またはＡ４７９３４を生産するその変異株ま
たは変種を深部ｃ液中）培養下に好気的発酵条件で培養
することにより生産することができる。

抗生物質Ａ４７９３４の赤外吸収スペクトル（ＫＢｒ法
）は添付の第１図に示した。

本発明は下記に示す構造式を有する新規抗生物質および
その製法および薬学的に許容し得るその塩に関する。

ＯＨＣノ 抗生物質Ａ４７９３４は融点２２５℃以上（分解）の白
色結晶性の化合物である。本抗生物質は、高速原子衡撃
質量分析により測定したところ、約１３１１の分子量を
もつことがわかった。　　　　−抗生物質Ａ４７９３４
の１Ｈ核磁気共鳴スペクトルをジメチルスルホキサイド
中、室温で測定した。

構造式中の６員環は次式に示す如くアルファベットの文
字により区別した。

化学シフトの表を次に示す。

第１表（そのｌ）化学シフト９ 第１表（そのｌ）　続き ＊可変性プロトンは表から省いた。

分子量、核磁気共鳴および元素分析値がら、抗生物質Ａ
４７９３４にはＣ５８Ｈ４４Ｃノ３Ｎ７０２□Ｓの実験
式が与えられた。

この新規抗生物質は、６６％ジメチルホルムアミド水溶
液中における電位差選定で、約５．８５．７．９、およ
び１０．３のｐＫａ値をもつ３個の選定可能な基を有す
ることがわかった（初期ｐＨ６，４４）。連室装置のｐ
Ｈ４，Ｑ以下は選定限度外であるので一８ｏ３Ｈ基に相
当するｐＫａ値は測定できなかった。選定結果から、抗
生物質Ａ４７９３４は塩基類と容易に塩を形成できるこ
とがわかった。本抗生物質はまたｐＨ３またはそれ以下
の強酸とも塩を作る。

５０ 抗生物質Ａ４７９３４の比旋光度は〔α〕０−−１．９
９°（Ｈ２Ｏ，Ｃ＝　１０　ｍｙ／ｍｉ　）である。

抗生物質Ａ４７９３４のＫＢｒ法での赤外吸収スペクト
ルは添付の第１図に示されるが、下記の特徴的な吸収極
大が認められる：　３７００〜２７００　（非常に幅広
く、強い）、１６５８　（強）、１６１５（中間）、１
５９０（中間）、１５１Ｏ（強）、１４９１（中間）、
１４７２（弱）、１４２９（中間）、１３９８（中間）
、１３２６　（非常に弱）、１２５６（中間）、１２３
１（強）、１２０５　（弱）、１１６３（弱）、１１４
０　（中間）、１０５８（弱）、１０４５（中間）、ｔ
００５（中間）、８４９（中間）、７５４（弱）、およ
び７１９（弱）１ １１０ 抗生物質Ａ−４７９３４の酸性および中性水溶液中での
紫外部吸収スペクトルでは共に２８１ｎｍに吸収極太を
示す（ε、１０，８５０）。塩基性水溶液中での抗生物
質Ａ４７９３４の紫外部吸収スペクトルでは２９７０ｍ
に吸収極大を示す（ε、１８，９００）。

Ａ４７９３４抗生物質は今まで記載されていないＳｔｒ
ｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｔｏｙｏｃａｅｎｓｉｓ　ＮＲＲ
Ｌ　　１５００９株の培養により生産される。

本発明は更に、今まで記載されていないＳｔｒｅ−ｐｔ
ｏｍｙｃｅｓ　ｔｏｙｏｃａｅｎｓｉｓ　ＮＲＲＩ−１
５００９株の生物学的に純粋な培養株に関するものであ
る。便宜上、この培養株を本発明者らの研究所ではＡ４
７９３４．１と呼んでいる。

Ａ４７９３４．１株は最初、ワシントン州りレイトン湾
から採取された干潮時の砂のサンプルから分離されたＡ
４７９３４株から、自然選別により得られたｌ変異株で
ある。

本発明の抗生物質は便宜的にＡ４７９３４抗生物質と命
名された。

Ａ４７９３４．１培養株ハ５ｈｉｒｌ　ｉｎｇおよびＧ
ｏｔ−ｃｌｉｅｂによるＳＥｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｇ
ｒｉｓｅｏｆｌａｖｕｓＡＴＣＣ２５４５６に関する公
開された記述’Ｃｏｏｐ−ｅｒａｔｉｖｅ　１）ｅｓｃ
ｒｉｐｖｉｏｎ　ｏｆ　Ｔｙｐｅ　Ｃｕ１ｔｕｒｅｓ　
ｏｆＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ”、　［Ｉｎｔ、Ｊ、５
ｙｓｔ、ｌ５ａｃｔｅｒｉｏｌ。

１９ｔ４）、　３９１〜５１２（１９６９））およびＳ
ｌｌｉｒｌｉｎｇおよびＧｏｔｃｌｉｅｂによるＳｔｒ
ｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｔｏｙｏｃａｅｎｓ−ｉｓ　Ｎｉ
ｓｂＮ１５ｂｉ、　Ｋａｔａｇｉｒｉ　、　５ａｔｏ、
　ＭａｙａｍａおよびＳｈｉｍａｏｋａ、　ＡＴＣＣ１
ｇＢ１４　Ｈ（関する公開された記述’Ｃｏｏｐｅｒａ
ｔｉｖｅ　Ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　ｏｆ’ｒｙｐｅ　
Ｃｕ１ｔｕｒｅｓ　ｏｆ　Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ”
、［Ｉｎｔ、Ｊ。

５ｙｓＥ、１３ａｃｔｅｒｉｏｌ　、１８（２１，１７
４（１９６８）　］　　との比較に基づき、更にいくつ
かの試験を追加してＳｃｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｒｏｙ
ｏｃａｅｎｓｉｓの１株として分類された。

Ａ　４７９３４．１株は灰色系の色（Ｇｙ）の胞子塊を
有し、この点がＷａ　ｋ　ｓｍａ　ｎにより記載されて
いるＳ。

ｇｒｉｓｅｏ日ａｖｕｓの帯黄灰色の胞子塊と異なる〔
１Ｔｈｅ　ＡｃｉｉｎｏｍＡｃｌｌｎｏ　Ｖｏｌ　、　
ＩＩ、　２２２頁１、ＴｈｅＷｉｌｌｉａｍｓ　ａｎｄ
　Ｗｉｌｋｉｎｓ　Ｃｏ、、　１３ａｌｔｉｍｏｒｅ　
　（１９６１）１゜もう一つの違いはＳ８ｇｒｉｓｅｏ
ｆｌａｖｕｓはマンニットおよびラムノースを利用する
のに対しＡ４７９３４．１株は利用しないことである。

Ａ４７９３４．１株は培養学的、形態学的および生理学
的にＳ、ｔｏｙｏｃａｅｎｓｊｓ　ＮｉｓｈＮ１５ｈｊ
、　Ｋａｔａｙ−ａｍａ、　５ａｃｏ、　Ｍａｙａｍａ
およびＳｈｉｍａｏｋａ　ＡＴＣＣ１９８１４に類似し
ている。

Ａ４７９３４．ＩＰ　−の特性鑑別 壓憇− Ａ４７９３４．１株は車軸分校のよく発達した断片を作
らない気中菌糸を産生ずる。胞子体は開いて、短くゆる
やかな２〜３のコイルのらせん状に並んでおり、それ故
、Ａ４７９３４はＰｒｉｄｈａｍ　　ラ（Ｆ）Ｓｐｉｒ
ａｌｅｓ（Ｓ）　　５ｅｃｔｉｏｎｊｃ位置づ゛けられ
る［ＩＡＧｕｉｄｅ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　Ｃ１ａｓｓｉｆ
ｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｓｔｒｅｐ−ｔｏｍｙｃｅｔｅ
ｓ　Ａｃｃｏｒｄｉｎｇ　ｔｏ　５ｅｌｅｃｔｅｄ　Ｇ
ｒｏｕｐ’。

Ａｐｐｌ　、　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ　、　６．５２〜７
９（１９５７）　）。

この形態はＩＳＰ培地畜３および！４上で最も良（観察
される。成熟した胞子鎖は一般に鎖当り１０〜５０個の
胞子を含んでいる。胞子の形は長楕円形〜卵円形をなし
、胞子の表面は椋状突起に富んでいる。胞子の大きさは
幅０．５８〜０．７１μＭ、長さは０．７５〜０．８８
μＭの範囲であり、平均値は幅０．６５μＭ、長す０．
８３　μＭ　テアル。

培養特性 を第１表に示す。色調の名前はｔｈｅ　ｌ５ＣＣ−ＮＢ
Ｓ△ ＣｅｎＬｒｏｉｄ　Ｃｏ１ｏｒ　Ｃｈａｒｔｓ　Ｓａｍ
ｐｌｅ　Ｎｏ、　２１０６（Ｎａｔ−４ｏｎａｌ　Ｂｕ
ｒｅａｕ　ｏｆ　５ｔａｎｄａｒｄｓ、　Ｕ、Ｓ、Ｄｅ
ｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆＣｏｍｍｅｒｃｅ、　１９５８
　）とｔｈｅ　ＣｏＪｏｒ　Ｈａｒｍｏｎｙ　Ｍａｎｕ
ａ＋。

４ｔｈ　Ｅｄｉｔｉｏｎ　（Ｃｏｌｏｒ　５ｔａｎｄａ
ｒｄｓ　Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ、Ｃｏｎ−ｔａｉｎｅｒ
　Ｃｏｒｐｏｒａｖｉｏｎ　ｏｆ　Ａｍｅｒｉｃａ、　
Ｃｈｉｃａｇｏ、ｌ１ｌｉｎｏ−ｊｓ　１９５８　）と
に従って決定した。

濾過滅菌した炭素源を最終濃度１．０％となるように加
えたＩＳＰＪｇ基礎培地を用いてＡ４７９３４゜１株と
Ｓｔｏｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　　ｔｏｙｏｃａｅｎｓｉ
ｓ　ＡＴＣＣ１９８１４株との炭素利用の様式を比較し
た。平板を３０’Ｃで■４日間培養した後検査した。結
果を＠２表に示す。

第２表Ａ、４７９３４．１とＳ、ｔｏｙｏｃａｅｎｓｉ
ｓ−一利用なし 十−利用 ±−利用は疑わしい 実施例 細胞壁の検討 微生物の加水分解した全細胞を用いて鑑別に役立つ糖の
存在を調べた。細胞壁の糖はＭ、Ｐ、ｒ、ｅｃｈ−ａｖ
ａｌｉｅｒの方法の変法を用いて測定した〔１放線菌類
の属分類のための化学的方法の基準１゜これらの方法は
ｔｈｅ　Ｓｕｂｃｏｍｉｔｅｅ　Ｏｎ　Ａｃｔｉｎｏｍ
ｙｃｅｔ−ｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ａｍｅｒｉｃａｎ　５
ｏｃｉｅｔｙ　ｏｆ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏ−１ｏｇｙ　（
Ｄｒ、　Ｔｈｏｍａｓ　Ｇ、Ｐｒｉｄｈａｍ、）が援助
する研修会で開発され、ｔｈｅ　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ　
ｏｆ　Ｍｉｃｒｏ−ｂｉｏｌｏｇｙ、　Ｒｕｔｇｅｒｓ
　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、　Ｔｈｅ　５ｔａｔｅＵｎｉ
ｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｎｅｗ　Ｊｅｒｓｅｙ、　Ｎｅ
ｗ　Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ。

ＮＪ、、　（１９７１）において維持されている〕。

全細胞壁の加水分解物はジアミノピメリン酸異性体の測
定に使用した。ジアミノピメリン酸異性体の測定にはＢ
ｅｃｋｅｒらの方法を用いたＣ　Ａｐｐｌ　。

Ｍｉｃｒｏｂｉｏ＋　、１１．４２１−４２３　（１９
６４）　］。

これらの検討結果を下記に示す。

アミノピメリン殻興牲俸　　　Ｌ　Ｌ　−興江俸Ａ４７
９３４．１株とＳ、ｔｏｙｏｏａｅｎｓｉｓ　ＡＴＣＣ
１９８１４の特性の比較を第３表に示す。

第３表　続き Ｎ１）−実施ぜす。

Ａ４７９３４．１株とＳｉｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　　ｔ
ｏｙｏｃａｅｎｓ−ｉｓ　ＡＴＣＣ１９８１４株との類
似点と相違点の要約を第４表に示す。

第　　４　　表 Ａ４７９３４．１株とＳ、ｔｏｙｏｃａｅｎｓｉｓ　Ａ
Ｔ（：Ｃ１ｇ８１４株との類似点と相違点 Ａ４７９３４．１株は、ｔｈｅ　Ｎｏｒｔｈｅｒｎ　Ｒ
ｅ５ｅａｒｃｈＣｅｎｓｅｒ、Ｕ、Ｓ、Ｄｅｐａｒｔｍ
ｅｎｔ　　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ。

ＡｇｒｉｃｕｌＥｕｒａｌ　　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　５ｅ
ｒｖｉｃｅ、Ｐｅｏｒｉａ。

ｒｌｌｉｎｏｉｓ　６１６０４に寄託され（１９８２年
１月２５日）、その保存株の−きつとして貯蔵され、Ｎ
ＲＲＬ１５００９の番号のもとに誰でも利用できる。

抗生物質Ａ４７９３４は１個のカルボヤシ基とｌ△ 個の−５０３Ｈ基を含んでいるので酸性であり、塩基類
と容易に塩を形成することができる。本抗生物質はまた
アシノ基を含み、ｐＨ３またはそれ以下の強酸とのみ塩
を形成する。生成した薬学的に許容し得る塩類も本発明
の一部をなす。′薬学的に許容し得る１塩とは、温血動
物の化学療法に有用な塩をいう。代表的な、そして好適
な抗生物質Ａ４７９３４の塩には、ｐＨ３またはそれ以
下の硫酸、塩酸および燐酸の如き酸とアミン基との反応
によって形成される塩、および水酸化ナトリウム、炭酸
ナトリウム、炭酸カリウム、水酸化カルシウム、水酸化
カリウム、トリメチルアミン、水酸化アンモニウム、ジ
ェタノールアミンの様な塩基とカルボキシ基または−５
０３Ｈ基との標準的な反応に△ よって形成される付加塩が含まれる。

抗生物質Ａ４７９３４はグラム陽性菌に対して活性を示
す。本抗生物質はまた家禽、豚および牛の成長促進と飼
料効率の向上にも活性を示す。

抗生物質Ａ４７９３４の微生物発育阻止濃度は種々の試
験法を用いて測定した。

抗生物質Ａ　４７９３４を第５表に示す様な幾らかの嫌
気性微生物に対し試験したところ、これらに活性を示し
た。最小発育阻止濃度Ｃ以下ＭＩＣと略す）は寒天希釈
法により測定した。

抗生物質Ａ４７９３４はまた、寒天希釈法により測定し
たところ、多数（７）Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ　ｄｉｆ
ｆｉｃ−ｉｌｅ株に対し活性を示した。試験の結果を第
６表に示す。

抗生物質Ａ４７９３４を標準寒天希釈法により測定した
ところ、多数の病原性グラム陽性菌に対し活性を示した
。第７表に測定したＭＩＣ値を示す。

第６表　Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ　ｄ汀ｆｉｃｉｌｅに
対する抗生物質Ａ４７９３４の活性 抗生物質Ａ４７９３４はｉｎ　ｖｉｖｏ　　での実験的
細菌感染に対し、抗微生物活性を示した。表に掲げた感
染症に感染させたマウスに２投与量の試験化合物を皮下
注射で投与し、その活性をＥＤ５ｏ値〔試験動物の５０
パーセントを防禦する有効量を〜／に９で表わしたもの
。Ｗａ　ｒ　ｒｅｎ　Ｗｉ　ｃｋら、Ｊ　、Ｂａｃ−ｔ
ｅｒｉｏｌ　、８１＋　２３３〜２３５　（１９６１）
参照〕で表わした。抗生物質Ａ４７９３４について観察
されたＥＤ５ｏ値を第８表に示す。

第８表Ａ４７９３４ 抗生物質Ａ４７９３４をマウスに腹腔内投与した場合の
急性毒性は３００〜／Ｋｙ以上であった。

本発明はまた、ヒトまたは動物に抗生物質として有効な
量である約２５〜から約２，０００　ｍＷの間の抗生物
質Ａ　４７９３４またはその薬学的に許容し得る塩を投
与することからなる、ヒトまたは動物の感染症の治療法
を提供するものである。

ヒトの感染症の治療には、本抗生物質は非経口的投与、
例えば筋注または静脈内注入により投与してよい。注射
に際しては、本抗生物質またはその薬学的に許容し得る
塩を生理学的に許容し得る希釈液に所望の濃度で溶解し
て投与する。適当な希釈液としては、例えば注射用精製
水、０．９％食塩液、５％ブドウ糖液、リンガ−氏液、
その他、一般に使用されている希釈液を含む。静脈内注
入による投与には、本抗生物質またはその塩は適当な濃
度で生理的溶液または希釈栄養液に調合し、例えば約５
％〜約１０％の濃度に調製し、溶液とともに徐々に注入
することができる。またその代りとして“ピギーバッグ
１法により本抗生物質を投与してもよい。

本抗生物質またはその薬学的に許容し得る塩は無菌密閉
バイアル、ゴム栓バイアルまたはプラスチックバッグ入
りの１同量投薬剤形に作ることができる。このような１
同量投薬剤形には抗酸化剤、溶解補助剤、分散剤、緩衝
剤およびそれに類する賦形剤を含まぜることができる。

１個の１同量投薬剤形は、Ａ４７９３４抗生物質または
薬学的に許容し得るその塩１００〜をゴム栓（ブチルゴ
ム）バイアルに含有しているものであってよい。その他
の１ｆＦｉｌ量投薬剤形としては、抗生物質Ａ　４７９
３４またはその塩２５０　ｍｇを無菌密閉バイアルに含
有させたものであってもよい。本発明の静脈内投与用１
同量投薬剤形としては、抗生物質Ａ４７９３４または薬
学的に許容し得るその塩５７をプラスチックバッグに含
有せしめたものであってよい。

Ａ４７９３４を抗生物質として使用する場合、経口的に
あるいは非経口的に投与することができる。

当業者には容易に理解されるであろうが、Ａ４７９３４
抗生物質は一般に薬学的に許容し得る賦形剤または希釈
剤と共に投与される。Ａ４７９３４抗生物質の投与量は
、例えば治療すべき特定の感染の種類および重篤度の如
き種々の点を考慮して行なわれる。適切な投与量の範囲
および／または投与単位は、ＭＩＣ，ＥＤ５ｏおよび毒
性データと共に、患者または宿主の特性の如き要因およ
び感染微生物をも併せ考慮することにより決定されるこ
とは当業者には明らかであろう。

Ａ　４７９３４抗生物質は腸管の偽膜性大腸炎を起こす
Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ　ｄｉｆｆｉｃｉｌｅの発育抑
制に有用である。本抗生物質およびその薬学的に許容し
得る塩は、薬学的に許容し得る剤形の形に製剤し、その
有効量を経口投与することにより、偽膜性大腸炎の治療
に用いることができた。このような使用には、本抗生物
質をゼラチンカプセルまたは懸濁液の形にして投与する
ことができる。

本発明の抗生物質はまた、家畜および農耕動物の乳房炎
の如き感染性疾患の治療に獣医薬として用いることがで
きる。Ａ４７９３４抗生物質はまた動物飼育、例えば牛
およびその他の反部動物の成長促進にも有用である。こ
れらの用途もまた本発明の一部を構成しており、以下の
文節に史に詳細に記述する。

本発明者らは、抗生物質Ａ４７９３４が、発達した第−
腎機能を持った反濁動物の第−胃において生産される揮
発性脂肪酸類（ＶＦＡ）の割合を改善する効果があるこ
とを見出した。反濁動物の第−胃の細菌叢を刺激して酢
酸または酪酸化合物よりも、むしろプロピオン酸化合物
を生成させる処置により、反部動物の炭水化物の利用効
率が増大するので（Ｃｈｕｒｃｈら”　Ｄｉｇｅｓｔｉ
ｖｅ　　Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙａｎｄ　Ｎｕｔｒｉｔｉ
ｏｎ　ｏｆ　Ｒｕｍ１ｎａｎｔｓ”第２巻１９７１．６
２２頁および６２５頁参照）、抗生物質Ａ４７９３４は
このような動物の飼料利用効率を向上させる働きをもっ
ている。

試験　ｌ 抗生物質Ａ４７９３４の反椰胃における揮発性脂肪酸類
の生成率を変化させる効果を合衆国特許第３．９２８，
５７１号に記載されている試験管内試験法を用いて試験
した。抗生物質Ａ４７９３４について行なった試験結果
を第９表に示す。

第９表 第９表のデータは、処理フラスコ中に生成したＶＦＡの
、未処理の対照フラスコ中に生成したＶＦＡに対する比
を示している。このデータの表わし方は、本発明に係る
新しい飼料利用改善方法によってもたらされた反椰胃の
化学的な変化の結果を最も明瞭に示している。

第９表に示された結果は、抗生物質Ａ　４７９３４が反
勢胃中のプロピオネート産生増加に有効であることを示
している。

本発明の抗生物質の投与により、飼料利用の改善許りで
はなく、ケト−シスの予防と治療も行なわれる。ケト−
シスの発症の機序はプロピオネート化合物の生成が欠乏
することにある。現在推奨されている治療法は、プロピ
オン酸の投与か、プロピオネート類をよく生成するよう
な飼料を与える方法である。普通の飼料でプロピオネー
トの生成を高める今回の方法は、明かにケト−シスの発
症頻度を低下させるであろう。

抗生物質Ａ４７９３４は他のグリコペプタイド抗生物質
と構造的に関係しており、それらのグリコペプタイド抗
生物質は発達した反部作用を持った哺乳動物の乳の生産
向上に有用であるから、抗生物質Ａ４７９３４もまたこ
の有用性が期待される。

われわれは本発明の抗生物質が反部動物の飼料利用効率
を高めることを発見した。この抗生物質を最も容易に投
与する方法はそれを動物の飼料に混ぜることである。

即ち、Ａ４７９３４抗生物質は普通の酪農用配合飼料と
容易に混合することができる。このようにして作られた
配合飼料はよく知られている方法に従って家畜に与えら
れる。

酪農動物用の通常の飼料にはとうもろこしおよび燕麦の
ような種々の穀物および穀物の混合物、および乾草、綿
実殻、籾殻、牧草のような飼葉が含まれる。Ａ４７９３
４抗生物質はこのような飼料組成物に１トン当り約３０
グラムから約３００グラム（乾燥重量基準で）の割合で
混合することができる。

抗生物質Ａ４７９３４を産乳改善用として商業的に利用
するには、飼料添加用プレミックスまたは濃厚飼料添加
物の形でこの有効成分を用いること質 が望ましい。このような製剤においては、抗生物△ Ａ４７９３４はとうもろこし粉、大麦、大豆粉、小麦、
精製大豆粉、その他、類似の安価な食用成分のような入
手し易い有機あるいは無機の動物飼料材料に完全に均一
に分散させる。次いで、毎日普通の飼料を哺乳反部動物
の食餌として与える前にこのプレミックスを加えて均等
に混合する。プレミックスは、プロピオネートを増加せ
しめるに足る抗生物質Ａ４７９３４の量が動物に与えら
れるよう十分な割合で加えられる。

次の組成物は、補乳反鈴動物に与える典型的な配合飼料
で、この飼料にＡ、４７９３４の産乳増進量が添加され
る。

とうもろこし　　　　　　　　　　　　３２．１５大麦
　　　　　　　１０．０ 糖みっ　　　　　　　　　　　　　　　７．５燕麦　　
　　　　　１０．０ 太豆油粉（４８％蛋白含有）　　　　　　　　１３．８
ビート大根パルプ　　　　　　　　　　　２．５とうも
ろこしグルテン飼料　　　　　　１２．５蒸留酒製造用
穀類　　　　　　　　　　　７．５混合微量元素　　　
　　　　　　　　　　０．０５塩　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　１，０燐酸シカルシウム
　　　　　　　　　　　２．０１００．００ 上記の成分を均等によくブレンドした後、抗生物質Ａ４
７９３４を補乳反濁動物（この例の場合は牛）に約６０
０■７１頭／１日となるよう添加する。

然しなから、本抗生物質化合物は別途の方法で有効に投
与できる。例えば錠剤、経口液剤、大型火剤またはカプ
セルに入れて動物・＼与えることができる。本抗生物質
化合物のこのような投与剤形は一般公知の方法により調
製することができる。

それぞれ１個当りの投与単位には、処置する動物の各々
１日分に直接関係する量の飼料利用効率改善剤を含有す
るようにすべきである。

カプセル剤は、本抗生物質が如何なる形であっても、ゼ
ラチンカプセルに充填することにより容易に製造できる
。所望ならば、本抗生物質はカプセルに充填するのによ
り便利なように増量するたｙ）、砂糖、澱粉または精製
結晶セルローズの如き不活性の粉末性希釈剤で薄めるこ
とが可能である。

本抗生物質の錠剤は通常の製薬学的手法により製造され
る。錠剤の製造は一般公知の高度に進歩した技術である
。有効成分に加えて、錠剤には通常、基剤、崩壊剤、吸
収剤、結合剤および滑沢剤が含まれる。典型的な基剤と
しては乳糖、糖衣用精製しよ糖、食塩、澱粉およびマン
ニットが含まれる。澱粉はまたアルギン酸と同様、良い
崩壊剤でもある。ラウリル硫酸ナトリウムおよびジオク
チルスルホコハク酸ナトリウムのような界面活性剤も用
いられる。一般に用いられる吸収剤には澱粉、乳糖があ
るが、炭酸マグネシウムも油状物質に対し有用である。

よく使われる結合剤はゼラチン、ガム、澱粉、デキスト
リンおよび種々のセルローズ誘導体である。一般に使わ
れる滑沢剤にはステアリン酸マグネシウム、タルク、パ
ラフィンろう、種々の金属せつけんおよびポリエチレン
グリコールがある。

この新規方法は、本抗生物質化合物を徐放性の大型火剤
として投与することによっても実施できる。このような
火剤は抗生物質の溶出を遅らせる手段を設けていること
を除けば錠剤と同じ方法で製造される。火剤は長時間か
けて遊離するように作られている。溶出を遅らせるには
、水に非常に溶解しにくい形の本抗生物質を選ぶことが
役立つ。鉄の充填剤の如き物質が、火剤の密度を高め、
それによって反部胃の底部に火剤を安定に保たせるため
に加えられることがある。

本抗生物質の溶出は、薬物を埋蔵する不溶性物質のマト
リックスを用いることにより遅らされる。例えは植物ろ
う、精製した鉱物性のろう、水に不溶性の重合体のよう
な物質が有用である。

本抗生物質の経口液剤は本抗生物質の水溶性の形を選ぶ
ことにより容易に調製される。もし何かの理由で不溶性
の形が望ましいならば懸濁剤を作ってもよい。さもなけ
れば、ポリエチレングリコールのような生理学的に許容
し得る溶媒の溶液として経口液剤を調製してもよい。

本抗生物質の不溶性の形の懸濁剤はビーナツツ油、トウ
モロコシ浦またはゴマ油のような植物油の如き非溶剤、
プロピレングリコールまたはポリエチレングリコールの
ようなグリコール、または選択した抗生物質の形によっ
ては水に入れて製造できる。

本抗生物質を懸濁させておくためには、適当な生理学的
に認容される補助剤が必要である。補助剤は、カルボキ
シメチルセルローズ、ポリビニルピロリドン、ゼラチン
、アルギン酸塩のような懸濁化剤の中から選ぶことがで
きる。また各種の界面活性剤も抗生物質の懸濁化に役立
つ。例えばレシチン、アルキルフェノール−ポリエチレ
ンオキサイド付加物、ナフタレンスルホネート、アルキ
ルベンゼンスルホネート、ポリオキシエチレンソルビタ
ンエステルは非溶剤液体中の懸濁液を作るのに有用であ
る。

更に、液体の親水性、密度および表面張力に影響を与え
る多くの物質が、個々の場合に、懸濁液を作ることに役
立つ。例えばシリコン消泡剤、グリコール類、ソルビト
ールおよび糖類は有用な懸濁化剤である。

懸濁化抗生物質は、動物飼育者に、懸濁液の形で、また
は使用前に希釈して用いる抗生物質と補助剤の乾燥混合
物として提供される。

吸入投与用粉剤または粉末製剤を製造するには、本抗生
物質に、典型的には、タルク、珪藻土またはその他の不
活性物質を補助剤として混合する。

水溶性または水懸濁性の形の本抗生物質の適当附を反邦
動物の飲料水中に加えることができる。

飲料水中に加えるための抗生物質の製剤化は、経口液剤
のそれと同じ原理で行なう。

本抗生物質で動物を処置する最も実際的な方法は化合物
を飼料製品の中へ組み入れることである。一般乾燥飼料
、液体飼料、ペレット飼料を含む如何なる形の飼料も、
本抗生物質化合物を混入することができる。

動物飼料に用いるためには、培地成分と菌糸体とを含む
培養固形物を、水分は除くことが望ましいが抽出分離を
行なわず、そのま＼Ａ４７９３４抗生物質源として使用
することができる。例えば、Ａ４７９３４抗生物質活性
体を生産後、培養液を許過し、Ａ４７９３４を含む濾過
残滓を乾燥する。更に、乾燥菌糸体固形物をｐＨ１０，
５のアルカリ水溶液で抽出後、抽出液を中和し、抽出物
を乾燥することによりＡ４７９３４抗生物質を得ること
ができる。また、全培養液を凍結乾燥、回転ドラム乾燥
、または共沸蒸留と乾燥により乾燥することができる。

この様にして乾燥したブロスを飼料プレミックスに直接
混合してもよい。

薬物を動物用飼料の形に製剤イヒする方法はよく知られ
ている。通常、薬物添加飼料用の粗物質として、濃厚な
薬物プレミックスが作られる。例えば典型的な薬物プレ
ミックスは、プレミックスのポンド当り約ｌ！ｉｌから
４００７の薬物を含む。最終飼料に期待される薬物濃度
の巾が広いことから、この様にプレミックスの濃度範囲
も広い。プレミックスは液状でも固形でもよい。

治療に役立つ適量の本抗生物質化合物を含む動物飼料を
作ることは主として算術の問題である。

動物が１日に食べる飼料の量と、使用するプレミックス
中に含まれる抗生物質の量を勘案し、各動物に投与すべ
き化合物の鼠を決定し、次いで飼料に含まれる抗生物質
化合物の適量を計算しさえすればよい。

飼料の調製、混合、火剤の作り方に関して知られている
方法は、すべて本抗生物質化合物を含有する飼料を製造
するのに完全に適している。

本発明の範囲は、何ら特別の調製法および投与法に限定
されるものではない。本発明の目的とするところは、あ
る特定の抗生物質を経口で投与することにより、反部動
物の飼料の利用効率を増加させるという方法を提供する
ことにある。従って、どのような投与型式であっても本
発明の範囲内に入るものと見做される。

抗生物質Ａ　４７９３４はまた、ひな鳥の成長促進剤と
しても活性を示す。これについて実施した試験は下記の
通りである。

試験　２ 生後８日のＰｅｎｏｌ）ｓｃｏｔ　　ブロイラーのひな
をこの試験に用いた。合計５６０羽のひなを各群７羽ず
つの群に分けた。対照として３５群を置き、５群の飼料
トン当り抗生物質Ａ４７９３４を２０ｇの割合で加えた
ブロイラー・スターター飼料で処理した。このブロイラ
ー・スターター飼料は次の組成をもつ： 一口　微量元素プレミックスは完全飼料Ｉ　Ｋｇ当りマ
ンガン７５ｍ！？、亜鉛５０ｒｎｆ！、鉄２５ｍ７、ヨ
ード１ｍｇを提供する。

ｊＪ　　ビタミンプレミックスは完全飼料Ｉ　Ｋｇ当り
、ビタミンＡ３０００ＩＵ、ビタミンＤ　９００１ＣＩ
Ｊ。

ビタミ７Ｅ４０ｍ９、ビタミンＫＯ１７ｍｇ、コリン１
０００■、ナイアシン７０■、パントテン酸４Ｗ１１　
　リボフラビン４ｒｎｇ、ビタミ７　Ｂ　ｔ　２ｉｏｏ
ｍｃｙ、ビオチン１００　ｍｃｐを提供する。

食餌と水は金側２１日間、自由に摂らせた。活性の判定
規準二体重増加で３％の増量、またあるいは飼料利用効
率で２％の増加。

この試験の結果を第１０表に示す。

第１０表 Ｆ／Ｇ＝消費した飼料合計／増加体重合計抗生物質Ａ４
７９３４は、薬学的に許容し得る塩の形でひなの飲料水
に加えて投与してもよい。

このようにＡ４７９３４抗生物質またはその薬学的に許
容し得る塩をひなの餌に飼料１トン当り約５〜約３０７
の割合で加えて与えると、ひなの生長促進剤として用い
ることができる。

抗生物質Ａ４７９３４はまた、離乳した豚に投与すると
成長促進剤として作用する。この活性については以下の
試験３で説明する。

試験　３ 初期体重平均約２３ポンドの豚の飼料に抗生物質Ａ　４
７９３４を１０および５０　ｐｐｍの濃度で添加し、Ｔ
ｙｌａｎｏ（チｏ　’）　７、Ｅｌ　ａｎｃｏ　）　ヲ
１１０　ＰＰ−の濃度で飼料に加えて投与したものと比
較した。

実験は床を針金の網にした、囲いをもつ、よく管理され
た環境の飼育施設で行なわれた。■処置につき４組、１
組４頭の豚を含む組合せで２８日間の実験が行なわれた
。対照群は薬を加えない飼料が与えられ、１組４匹の豚
を６組設けた。豚に、以下に示す組成をもつ１８パーセ
ントの蛋白質を含むとうもろこし一大豆配合飼料を自由
に摂取させた。

１」　プレミックス各Ｉ　ＫＳ’には次のものが含まれ
る：硫酸マンガンとしてマンガン５０９；炭酸亜鉛とし
て亜鉛１００Ｐ；硫酸鉄として鉄５０７；酸化銅として
銅５Ｌｉ；ヨー化カリとしてヨード１．５５’；炭酸カ
ルシウムとしてカルシウム最高１５０ｇ、最低１３０ｆ
Ｆ。

２」　プレミックス各Ｉ　Ｋ９には次のものが含まれる
：ビタミンＤ２７７．１６１１Ｕ　；ビタミンＥ２，２
０５ＩＵｉｌＪボフラビン４１１ｍ’ｉ／；パントテン
酸１，６２０ｍ？；ナイアシン２，２０５■；ビタミン
Ｂ１２４．４　ｍｆ／　；ビタミンに４４１”ｌｉ？；
コリン１９．１８０ｍ９ｉ葉酸１１（１＠ｉピリドキシ
７１６５ｍ７：チアミン１１０ｍｇ；ビオチア２２ｍ９
゜３」　プレミックス各Ｉ　Ｋ９にはビタミンＡ　６，
６１３，８００ＩＵを含む。

４」　プレミックス各Ｉ　Ｋ９にはナトリウムセレナイ
トとしてセレン２００　”Ｉｆを含む。計算分析値は単
にセレンとして加えている。

計算分析値 粗蛋白質％　　　　１９．１０ エーテル抽出物　％　　　　　　　　　　２，８３粗　
　繊　　維　％　　　　　　　　　　　　　１，８９灰
　　分　％　　　　　　　　　　　　　　　　　５．６
０カルシウム　％　　　　　　　　　　　　０．９０燐
　　％　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０・６
５Ｄｉｇ、　Ｅ、Ｋｃａｌ／に９＋、　　　　　　　　
　３５４５．５９Ｍｅｔ、　Ｅ、　Ｋｃａｌ／に！７．
　　　　　　　　３２７０．００リボフラビン　■／〜
　　　　　　　　　７．８８ニ　ア　　シ　　ン　　■
／に９　　　　　　　　　　　　　　　２７．３８ハン
トテン酸　ｍ？／Ｋｙ２４．９６ コ　　　　　リ　　　　　７　　　ｍｇ／に９　　　　
　　　　　　　　　　　　１２２４．９５ビタミ７　Ｂ
　１２　　ｍｃ　ｇ　、／”’９　　　　　　　　　５
　ｏ、５４葉　　　酸　　　　〜／即　　　　　　　　
　　　　　１，９９ピリドキシン　■／〜　　　　　　
　　　８．３７チ　　ア　　ミ　　ン　　■／即　　　
　　　　　　　　　　　　　　　４．３０ビオチン■／
〜　　　　　０．３５ ビタミン　Ｄ　　ＩＵ／Ｋｙ　　　　　　　　　　　８
１１．６１ビタミンＡ　　Ｉ　Ｕ　／　Ｋ９３９０４．
０５ビタミンＥ　　　ＩＵ／ＫＬ９２３．６１ビタミン
Ｋ　　■／に９４．４１ 銅　　　　　　　■／〜　　　　　　　　　　　　１５
．４３鉄　　　　　　　■／即　　　　　　　　　　　
　９８．１２ヨ　　　ウ　　素　　　　■／に９　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　１．５０マグネシウ
ム　■／ＫＳＩ　　　　　　　　１６２７．７０亜　　
　鉛　　　　■／に９　　　　　　　　　　　１１９．
６１マンガフ　　　　ｍｇ／Ｋｙ　　　　　　　　　　
６１．７４セＬ／　７　　　ｍｙ／Ｍ　　　　　　　ｏ
、ｌｏ’Ｊリシン％　　　　　　　　　１．０２ メチオニン　％　　　　　　　　　　　　０．５３シス
チン　　％　　　　　　　　　　　　　０．２９トリプ
トフアン　％　　　　　　　　　　　０．２３インロイ
シン　％　　　　　　　　　　　　１．０３アルギニン
　　％　　　　　　　　　　　１，１５ヒスチジン　　
％　　　　　　　　　　　０．４４０イシン　　％　　
　　　　　　　　　　　１．７２フエニルアラニン　％
　　　　　　　　　０．９７チロシン　　％　　　　　
　　　　　　　　０．５２スレオニン　％　　　　　　
　　　　　　０７７バ　　リ　　　ン　　％　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．９８試験
終了時、各豚の平均重量は５３ポンドまで増討した。試
験成績を第１１表に示す。

即ち、本発明はまた、豚の飼料にＡ４７９３４抗生物質
または薬学的に許容し得るその塩を約ｌＯ〜約５０　ｐ
ｐｍ加えて投与することからなる離乳豚の成長促進方法
を提供するものである。Ａ　４７９３４抗生物質はまた
、薬学的に許容し得る塩の形で飲料水に加えて豚に投与
することもできる。

Ａ４７９３４の利用は離乳豚の成長促進だけではなく、
その他にも市場に出せる大きさの例えば約２００ボンド
にもなる成豚を含む種々の大きさの豚の成長促進に対し
有用性が期待される。

一般に、反部動物を含む経済動物はその一生を通じて種
々の成長促進剤、疾病予防剤、および疾病治療剤で処理
される。これらの薬剤はしばしば組合せて用いられる。

ここに示した方法もまた他の処置法と組合せて実施して
もよい。

」１記の結果に示される如く、抗生物質Ａ　４７９３４
は反部胃でのアセテートの生成を都合よく変化させる。

同じ処置が、線維質植物を盲腸で発酵する単−胃動物で
も有効である。ここで言う単−胃動物とは線維質植物飼
料を消費し、少なくともその一部を微生物発酵によって
盲腸で消化する動物のことである。盲腸での発酵は、反
椰胃での発酵と類似の化学経路を辿る。

馬、豚、兎はその食餌の一部を盲腸での発酵によって消
化する典型的な動物である。このような動物の全般的な
飼料利用効率は、プロピオネート／アセテートの比率に
有益な変化を起こすこれらの抗生物質の経口投与により
改善される。馬と兎では盲腸での発酵が全消化経路の主
要な部分をなし、従ってこれら抗生物質が特に効果的で
ある典型的な動物である。

Ａ４７９３４抗生物質はＳｔｒｅｐｉｏｍｙｃｅｓ　　
ｔｏｙｏ−ｃａｅｎｓｉｓ　ＮＲＲＬ　１５ＱＱ９、ま
たはＡ　４７９３４を産出するその変異株または変種を
、同化し得る炭素源、窒素源、無機塩を含む培地中で、
好気的深部培養発酵条件下に、抗生物質活性が十分に得
られるまで培養することにより生産される。

他の微生物の場合と同様、Ａ４７９３４を産生する培養
株、ＮＲＲＬ１５００９の特性は変異しやすい。

例えば、ＮＲＲＬ１５００９株の、またはこの株に由来
する、天然変異株、突然変異株（自然発生または誘発性
）、形質接合体（ｔ　ｒａｎｓ　ｃｏｎ　ｊｕｇａｎ　
ｔ　）または遺伝子組換え体（プラスミド上の組換えＤ
ＮＡを含む）であって、Ａ４７９３４抗生物質を産生ず
るものは全て本発明に使用できる。

Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　　ｔｏｙｏｃａｅｎｓｉｓ
　ＮＲＲＬ　１５ＱＱ９より抗生物質Ａ４７９３４を製
造するには多数の異なる培地が使用される。然し、生産
、最適収率、生産物の分離の容易さにおける経済性の面
からある一定の培地が望ましい。これらの培地には、同
化し得る炭素源、窒素源および無機塩類が含まれている
。炭素源として適しているものにはブドウ糖、馬鈴薯デ
キストリン、タピオカ・デキストリン、とうもろこし澱
粉、および糖蜜がある。窒素源として適しているものに
は大豆粗粒、カゼイン酸氷解物、牛肉エキス、および大
豆粉がある。

微生物の生育に不可欠な必須微量元素はとうもろこし浸
漬液を用いることにより得られるが、また培地の他の構
成成分に含まれている不純物に、微生物の成長と生合成
に必要な量に見合う十分量が含まれている。然しなから
培地中に更にナトリウム、カリウム、マグネシウム、カ
ルシウム、アンモニウム、塩素、炭酸、燐酸、硫酸、硝
酸およびその他のイオンを生成することができる可溶性
無機塩栄養分を添加することは効果的である。

ＮＲＲＬ　　１５００９から十分量の抗生物質Ａｌ４７
９３４を製造するには、タンク中で好気的深部培養発酵
を行なう。少量の抗生物質Ａ　４７９３４は、振盪フ７
−ｘ、　コ培養により得られる。タンク培養には、増殖
接種法が好ましい。増殖接種法とは、少量の培地に微生
物を胞子形、菌糸体断片または微生物を凍結乾燥した小
球を接種することにより、新鮮で発育の盛んな培養株を
得ることである。増殖接種物は次いで大きいタンクに移
し、そこで適当な培養時間をかけ、Ａ４７９３４抗生物
質を最適収量で製造する。

接種前の発酵培地のｐＨは製造に用いる培地により異な
るが、発酵が始まるとすべての培地のｐＨは約ｐＨ６，
４〜約７，０の範囲に入って終う。

このＡ４７９３４産生微生物は、約２０°から約４０℃
の幅広い温度範囲でよく生育できる。Ｎ　ＲＲＬ１５０
０９による抗生物質Ａ４７９３４の至適産生は約３０℃
の温度で起こるものと思われる。

好気的深部培養法で通常行なわれる如く、無菌空気を培
地中に拡散させる。微生物の効率よい生育のために、タ
ンク生産に用いられる通気量（空気）は培地附当り１分
間約０．１〜約０．５の範囲で行なう（Ｖ／Ｖ／ｍ）。

１６５リツトルの容器における至適割合は、約２５０Ｒ
ＰＭ回転の普通の攪拌器で攪拌した場合、約０．２５　
ｖ／ｖ／ｍである。大容量の発酵培地に於いてもし泡の
発生が問題となるなら、プロピレングリコールの如き消
泡剤を少量〔例えば０．２ｍｌ／Ｌ）加えてもよい。

Ａ　４７９３４抗生物質は発酵の間中、寒天希釈法（例
：寒天井戸平板試験）または濁度測定法のいずれかの方
法により、生産の度合をモニターできる。試験菌にはＢ
ａｃｉｌｌｕｓ　５ｕｂｔｉｌｉｓ　　ＡＴＣＣ６６３
３を用いた。全培養液検体は試験前に水酸化ナトリウム
水溶液でｐＨ１０，５に調節し、遠心分離にかける。

抗生物質活性は一般に約３６時間後には存在し、発酵期
間中最低７日間またはそれ以上残存する。抗生物質の最
大生産は発酵期間の約４〜５日目に起こるよ Ａ４７９３４抗生物質は次に示す方法により発酵培地か
ら回収できる。Ａ４７９３４抗生物質の大部分は細胞上
または細胞内に吸着しているので、抗生物質を細胞から
遊離させるため、全培養液を水酸化ナトリウムのような
塩基性水溶液で約ｐＨ１０，５ニ調節すル＝。珪藻土（
Ｉ（ｙｆｌｏ　　５ｕｐｅｒ−ｃｅｌ　。

Ｊｏｈｎｓ−ｍａｎｖｉｌｌｅ　　Ｃｏｒｐ、）を濾過
助剤として加えた後、濾過する。濾過には圧搾濾過が適
している。抗生物質活性を含んでいるＰ液を中性ｐＨ１
例えばｐＨ７，０に合わせ、Ｄｉａｉｏｎ　ＨＰ−２０
（多孔性の小球型のスチレンジビニルベンセン共重合体
、三菱化学工業株式会社、東京、日本国）と混合し、約
６０分はどの一定期間攪拌する。抗生物質活性体は樹脂
上に吸着されているので、水層を樹脂から吸引またはン
濾過により分離する。その他の適した吸着剤としては活
性炭、シリカゲル、ポリアミド、アルミナ、巨大網目状
樹脂（ＸＡＤ−２、ＸＡＩ）−４など）およびイオン交
換樹脂、特に陰イオン交換樹脂（例えばＩＲＡ６８、Ｄ
ｏｗｅｘ　１）など、当分野で知られているすべてが含
まれる。

Ａ４７９３４の活性体を吸着しているＩ（Ｐ−２０樹脂
は水および水：メタノール（４：１）で洗滌し、濾過す
る。次に溶出液として水：メタノール（１：ｌ）を用い
、抗生物質を樹脂から溶出する。

溶出液を濃縮し、凍結乾燥して薄茶色の粗製Ａ４７９３
４の粉末を得る。水晶は更に既知のクロマトグラフ法に
より精製することができる。

抗生物質Ａ４７９３４はまた、培養Ｐ液を酸によって約
ｐＨ３に調節して完全に沈澱させ、濾過することにより
、培養Ｐ液から除くことができる。Ａ４７９３４は約ｐ
Ｈ６，５で沈澱し始め、約ｐＨ３で沈澱が完結する。塩
酸、硫酸、燐酸の如き無機酸、酢酸、ぎ酸の如き有機酸
が酸性化に適している。

このようにして得られた粗製Ａ４７９３４は既知のクロ
マトグラフ法により更に精製することができる。

本発明を更に詳細に説明するため、以下に実施例を挙げ
る。但し本発明はこれらの実施例に限定されるものでは
ない。

実施例１　第一段階の菌接種物の製造 Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　　ｔｏｙｏｃａｅｎｓｉｓ
　ＮＲＲＬ　１５００９の寒天斜面培養に用いるため、
次の培地を用意した。

成　　分　　　　　　　　　　　　　量（グ／Ｌ）トマ
ト・ペースト　　　　　　　　　　２０．０予じめ調理
したオートミル　　　　　２０．０寒　　　天　　　　
　　　　　　　　　　　　　　２０．０上記成分をよく
混和すると、作られた培地はｐ１１５．０を示す。培地
は滅菌する前に５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を用いてｐ
Ｈ５，７に調節する。滅菌後の培地はｐＨ６，５を示す
。

Ｓｔｏｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　　ｔｏｙｏｃａｅｎｓｉ
ｓ　ＮＲＲＬ　１５００９の胞子を上に示した成分で構
成されている寒天斜面培地上に接種し、接種した培地を
約ｌＯ日間、３０℃の温度で培養した。次いでこの培地
から培養物の凍結乾燥品を作り、これを以下の組成をも
つ種培地への接種に用いた。

成　　　分　　　　　　　　　　　　　量（グ／Ｌ）ブ
ドウ糖　　　　　　　　　　　　　　　１５．０馬鈴薯
デキストリン　　　　　　　　２０．０犬豆粗粒　　　
　　　　　　　　　　　１５・０酵母エキス　　　　　
　　　　　　　　　１．０トウモロコシ浸漬ｅ、１０．
Ｏ Ｃａ　ＣＯ３２，０ 上記成分をよく混和すると、作られた培地はｐＨ５，６
を示す。この培地を滅菌する前に５Ｎ水酸化ナトリウム
水溶液を用いてｐＨ６，５に調整する。

滅菌後の培地はｐＨ６，５〜６．７を示す。

種培地（５０−）を、２５０−の広ロエルレンマイヤー
・フラスコ中、直径２インチの弧を画く２５０　ＲＰＭ
の回転振盪機上、約３０℃で約４８時間培養した。この
培養した培地は、小型発酵装置に接種する（接種量は培
地の量に対し約１％とする）か、または比較的大量の培
養を生産するため、第二段階の培地へ接種するのに用い
られる。

Ａ４７９３４．１の発酵 培養された第二段階の培地（８００ｍ／）は以下の組成
をもつ無菌生産培地１００　リットルへ接種するのに用
いられた。

成　　　分　　　　　　　　　　　　　附（ｆｉ’／Ｌ
）消泡剤１０２ ブドウ糖　　　　　　　　　　　　　　　２５．０馬鈴
薯デキストリン　　　　　　　　　３０，０糖　　　蜜
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　３．０大豆
粗粒　　　　　　　　　　　　　　１５．０カゼイン・
酸水解物　　　　　　　　　１，０＊　Ｄｏｗ　Ｃｏｒ
ｎｉｎｇ　Ａｎｔｉｆｏａｍ　ｌＡ’上記成分をよく混
和すると、出来上った培地はｐＨ６，５を示した。この
培地を滅菌する前に５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を用い
てｐＨ７，５に調節する。滅菌後の培地はｐＨ６，９を
示した。

接種された生産培地は１６５１Ｊツトルの発酵タンク中
で約４〜４．７５日間、約３０℃の温度で発酵を行なっ
た。発酵培地に無菌空気を０．２５Ｖ／Ｖ／ｍの速度で
通気し、通常の攪拌機で約２００〜２５０ＲＰＭの回転
で攪拌した。

実施例２　　Ａ４７９３４の分離 １４１リツトルの発酵液に５Ｎ水酸化ナトリろム水溶液
を加えてｐＨ１０，５に調節し、３％濾過助剤（Ｉ（ｙ
ｆｌｏ　　５ｕｐｅｒ−ｃｅｌｌ、珪藻上、Ｊｏｈｎ５
ｏｎ−Ｍａｎｖｉｌｌｅ　　Ｃｏｒｐ、）を加え、この
混合物を約１時間攪拌する。混合物を圧搾濾過にかけて
濾過し、抗生物質活性を含有する透明な涙液ｉ　０６　
ＩＪットルを得た。このＰ液を５Ｎ希塩酸水溶液でｐｌ
Ｉ７．０に調節し、１０．６リツトルのＤａｉａｉｏｎ
　ＨＰ−２０樹脂（多孔性の小球型のスチレンジビニル
ベンゼン共重合体、三菱化学工業株式会社、東京、日本
国）をＰ液に加えた。混合物を約６０分間攪拌し、吸引
または濾過によって水層を樹脂から分離した。

抗生物質の活性を吸着している樹脂を水３０リットル、
次いで水層メタノール（４：１）の混合液３０リツトル
で２回、バッチ方式で洗浄する。

その都度溶媒と共に約３０分間攪拌し、濾過して洗滌す
る。洗滌を終った樹脂はメタノール：水（１：１）の混
合液３０リツトルと約３０分間攪拌し、同じ操作をもう
１回繰返して抗生物質活性体を樹脂から溶離させる。メ
タノール：水（１：１）のｐ液を合わせて減圧下に約４
〜５リツトルの容量まで濃縮しく約６〜１２％の固形物
を含む）、凍結乾燥することにより、約３０〜４０％の
純度の抗生物質Ａ４７９３４と同定される薄茶色の粉末
７９．１１を収得した。通算収率は４４〜４９％であっ
た。

実施例３　粗製Ａ４７９３４の酸沈澱による製造Ａ４７
９３４の発酵液４５０ＪをｐＨ１０，５に調節して菌糸
体からＡ４７９３４抗生物質を抽出し、この溶液を濾過
した。Ａ４７９３４抗生物質を含有するＦ液を２００ｒ
ｎｌずつに分け、沈澱を最大に得るためにそれぞれを５
Ｎ希塩酸水溶液でＰＩ（２，５に調節する。沈澱を遠心
分離により回収し、水洗し、もう一度遠心分離する。１
区分から得られた結晶を水に懸濁し、凍結乾燥すること
により水に不溶性の粗製Ａ　４７９３４．１８６ｒｎ？
を得た（純度２０％）。

他の区分から得られた結晶は水５０ｉに懸濁し、５Ｎ水
酸尤トリウム水溶液でｐｉ（７，５に調節し、凍結乾燥
した。水に可溶性の粗製Ａ　４７９３４抗生物質を２２
６ｍｇの収量で得た（純度２０％）。

これらのＡ４７９３４抗生物質の粗製品は例えばＤｉａ
ｉｏｎ　Ｉ（Ｐ−２０樹脂を用い、逆層ＨＰＬＣ（７）
様な既知の方法により精製することができる。

実施例４　逆層クロマトグラフィーによるＡ４７９３４
の精製 粗製抗生物質Ａ４７９３４の３０〜４０ｇを水：アセヤ
ニ小・リル（１２：８）３５０イにｐＨ３で溶解し、こ
れを、酢酸アンモニウム２５’／Ｌ含有する水ニアセト
ニトリル（８６：１４）の混液で平衡に達せしめた逆層
樹脂（Ｗｈａｔｍａｎ　ＳｉｌｉｃａｇｅｌＬｐ−１／
Ｃｘ５）４リツトルを充填したＣｈｒｏｍａｔｏ−ｓｐ
ａｃ　　１００−ｕｎｉｔ　Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ　
　ＳＡ、　Ｉｎｃ、。

ｍｅｔｕｃｈｅｎ、Ｎ、Ｊ、）に適用した。検体を透用
後、同じ溶媒系で展開し、４００−ずつ分画採取し、溶
出液を２５４　ｎｍでモニターした。各分画は分析用Ｈ
ＰＬ（：　ＣＺｏｒｂａｘ　ＯＤＳ樹脂（０，２５Ｘ２
５ａ＋１　　カラム）；酢酸アンモニウム２ｆＩ／Ｌ含
有の水ニアセトニトリル（８２：１８）；　　２２５ｎ
ｍ（ａｕｆｓ　Ｏ，２）］で試験し、Ａ４７９３４のみ
を含む分画を集め（例；異なった粗製Ａ４７９３４０ツ
トの３２〜６０゜３７〜７５．および５１〜７６の範囲
の分画）約１リツトルの量まで濃縮した。

同様の操作８回から得られた濃縮物を合わせた全量８リ
ツトルを、水に充填したＤｉａｉｏｎ　ＨＰ　−２０を
入れたカラムにかけた。このクロマトグラフ操作により
濃縮物から酢酸アンモニウムを除くことができる。次い
でカラムを水６リツトルで洗い、水：メタノール（４：
１）および水：メタノール（１：ｌ）６リツトルで溶出
した。この２０チメタノール溶出液を４００−まで濃縮
し、凍結乾燥することによりＡ４７９３４の高精製品１
４．８２７を収得した。５０％メタノール溶出液を１リ
ツトルまで濃縮し、凍結乾燥することによりＡ４７９３
４の高精製品５５．６Ｐを収得した。この脱塩段階の通
算収率は８１％であった。

実施例５　抗生物質Ａ４７９３４の結晶化Ａ４７９３４
の高精製品ｌｆＩをアセトニトリル：水（６０：４０）
５０ｍｌに溶解し、混濁が生じるまで更にアセ・トニト
リルを加えた。室温で１６時間静置後、分離して来た粘
着性の暗色物質を除き、溶液が混濁するまで更にアセト
ニトリルを追加した。

更に室温に静置することにより析出する結晶を濾過によ
り回収し、アセトニトリルで洗滌し乾燥する。結晶の重
量は７５０ｍｇであった。結晶をアセトニトリル：水（
６０：４０）５０　ｒｎｌに溶解し、次いでアセトニト
リル３００ｍ１を攪拌しながら加えることにより再結晶
した。静置して析出する結晶を戸別し、アセトニトリル
で洗い、真空下に乾燥した。乾燥結晶は５５０ｒｎ？で
あった。真空下に更に１００℃で乾燥し、揮発性溶媒に
よる重量減少が１１％生じた。

実施例６　　Ａ４７９３４のモノナトリウム塩の製造Ａ
　４７９３４１３０ｍ！ｉＪの水溶液１６ｍＡ’（０，
１モル、ｐＨ４，８）に水酸化ナトリウムの１０■／−
水溶液０、４　ｍｌを加えた。溶液の最終ｐＨは７．２
であった。

溶液を凍結乾燥してＡ４７９３４のモノナトリウム塩１
５３”ｌ？を得た（　Ｎａ　＝　２．４％）。

実施例７　　Ａ４７９３４のジナトリウム塩の製造水酸
化ナトリウムの１０ｒｎｇ／−水溶液０．８　、ｄ　（
０、２−Ｅ　Ｊｌ／当量）をＡ　４７９３４　ノ１３０
ｍ１ｉ＋　　水溶液１６ｍ１（０，１モル、ｐＨ４，８
）へ攪拌しツー’）加えた；最終ｐＨ８，１ｏ溶液を凍
結乾燥しＡ−４７９３４のジナトリウム塩１５６〜を得
た。（Ｎａ　＝　３．５％）実施例８　　Ａ４７９３４
のモノカリウム塩の製造水酸化カリウム水溶液０．５６
ｒｎｌ（１０■／−０゜１モル）を攪拌しつつＡ４７９
３４の１３０■を含む水溶液１６ｍ１（ｐＨ４，８，０
，１モル）に加えると最終ｐＨ７，１となった。溶液を
凍結乾燥してＡ４７９３４のモノカリウム塩１５４ｍｇ
を得た（Ｋ＝２．１４％）。

実施例９　　Ａ４７９３４のジカリウム塩の製造水酸化
カリウム水溶液１．１２ｉ（１０ｍｇ／ｍ／。

０．１モル）を攪拌しつつ、Ａ４７９３４を１３０〜含
む水溶液１６ｍ／（０，１モル。ＰＨ４，８）に加えた
。ｐＨは７．９５となる。溶液を凍結乾燥し、Ａ４７９
３４のジカリウム塩１５８■を得た（　Ｋ　＝　３．９
４％）。

実施例１０　　Ａ４７９３４のバリウム塩の製造塩化バ
リウムの飽和溶液２−をＡ４７９３４を１００〜含有す
る水溶液４−に加えるとＡ　４７９３４のバリウム塩が
沈澱して来る。沈澱を遠心分離し、水５ｄずつで２回洗
滌し、その都度遠心分離する。沈澱を再度水１０−に懸
濁し、凍結乾燥することにより水に不溶性のバリウム塩
７６ｍｇを得た。

実施例１１　　Ａ４７９３４のカルシウム塩の製造塩化
カルシウムの飽和水溶液２ｒｎｌをＡ４７９３４を１０
０ｍｇ含有する水溶液４ｒｎｌに攪拌しつつ加えると、
Ａ４７９３４のカルシウム塩の沈澱が生成し心 た。沈澱を水５ｍｌずつで２回洗滌し、その都度遠へ 分離し、洗滌した沈澱を水ＩＯ−に懸濁せしめて凍結乾
燥した。Ａ４７９３４のカルシウム塩８７■が得られた
。

【図面の簡単な説明】

第１図は抗生物質Ａ４７９３４の赤外吸収スペクトル（
ＫＢｒ法）である。 ｆ０１ １３１− 一　　　づ（←２

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １４次の構造式を有する抗生物質Ａ４７９３４または薬
   学的に許容し得るその塩。 ２、　　ＳｔｒｅｐＬｏｍｙｃｅｓ　１ｏｙｏｃａｅｎ
   ｓｉｓ　ＮＲＲＩ−１５００９またはＡ４７９４３を生
   産するその天然変異株または突然変異株を、同化し得る
   炭素源、窒素源および無機塩を含む培地中で、好気的発
   酵条件下で深部培養することを特徴とするＡ４７９３４
   抗生物質の製造方法。 ３、培地からＡ４７９３４抗生物質を分離する工程を含
   む第２項に記載の方法。 ４、　　Ａ４７９３４または薬学的に許容し得るその塩
   の化学療法的有効量を反部動物に投与することを特徴と
   する、該反部動物の飼料利用効率を増大させる方法。 ５、　　Ａ４７９３４または薬学的に許容し得るその塩
   の化学療法的有効量を温血動物に投与することを特徴と
   する温血動物の成長促進方法。 ６、Ａ４７９３４または薬学的に許容し得るその塩の化
   学療法的有効量を授乳用反部動物に投与することを特徴
   とする、該反部動物の乳生産の改善方法。 ７、　　Ａ４７９３４または薬学的に許容し得るその塩
   を活性成分とすることを特徴とする飼料用プレミックス
   。 ８−またはそれ以」−の薬学的に許容し得る賦形剤また
   は希釈剤と組合わせた、Ａ４７９３４または薬学的に許
   容し得るその塩を活性成分とする医薬製剤。 ９．−またはそれ以上の薬学的に許容し得る賦形剤また
   は希釈剤と組合わせた、Ａ４７９３４または薬学的に許
   容し得るその塩を活性成分とする動物薬製剤。 １０、微生物Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｔｏｙｏｃａ
   ｅｎｓｉｓＮ艮艮Ｌ　　１５００９　　の純培養。 １１、　　Ｓｃｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｔｏｙｏｃａｅ
   ｎｓｉｓ　ＮＲＲＬ　　１５００９゜