CS235045B2 - Method of antibiotic a47934 production - Google Patents

Method of antibiotic a47934 production Download PDF

Info

Publication number
CS235045B2
CS235045B2 CS834990A CS499083A CS235045B2 CS 235045 B2 CS235045 B2 CS 235045B2 CS 834990 A CS834990 A CS 834990A CS 499083 A CS499083 A CS 499083A CS 235045 B2 CS235045 B2 CS 235045B2
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
antibiotic
feed
culture
water
medium
Prior art date
Application number
CS834990A
Other languages
English (en)
Inventor
Robert L Hamill
Ralph E Kastner
Original Assignee
Lilly Co Eli
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Lilly Co Eli filed Critical Lilly Co Eli
Publication of CS235045B2 publication Critical patent/CS235045B2/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
    • C12P1/06—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes by using actinomycetales
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
    • A23K20/10—Organic substances
    • A23K20/195—Antibiotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
    • A23K50/30—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for swines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K9/00—Peptides having up to 20 amino acids, containing saccharide radicals and having a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K9/006—Peptides having up to 20 amino acids, containing saccharide radicals and having a fully defined sequence; Derivatives thereof the peptide sequence being part of a ring structure
    • C07K9/008—Peptides having up to 20 amino acids, containing saccharide radicals and having a fully defined sequence; Derivatives thereof the peptide sequence being part of a ring structure directly attached to a hetero atom of the saccharide radical, e.g. actaplanin, avoparcin, ristomycin, vancomycin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/465—Streptomyces
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y10S435/886—Streptomyces
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S930/00—Peptide or protein sequence
    • Y10S930/01—Peptide or protein sequence
    • Y10S930/19—Antibiotic
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S930/00—Peptide or protein sequence
    • Y10S930/01—Peptide or protein sequence
    • Y10S930/27—Cyclic peptide or cyclic protein

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Animal Husbandry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Description

Vynález se týká nového fermentačního způsobu antibiotika kultivací dříve neznámého mikroorganismu Streptomyces toyocaensis NRRL 15009.
Řada mikroorganismů je pathogenní a způsobuje onemocnění u lidí i u zvířat.
Je známá řada antibiotik, z nichž některá jsou účinná proti jednomu nebo proti většímu počtu pathogenních mikroorganismů, Je však zapotřebí nacházet nová antibiotika, protože existuje stálá možnost vzniku pathogenních kmenů, které jsou odolné proti známým antibiotikům. Zejména mikroorganismy gram-pozitivního typu rodů Staphylococcus a Streptococcus jsou často odolné proti běžně užívaným antibiotikům, například v publikaci W. O. Foye, Principles of Medicinal Chemistry, str. 684 až 686 (1974).
Antibiotikum A 47934 patří do skupiny glykopeptidových antibiotik a je účinné proti · celé · 1 řadě grampozitivních mikroorganismů.
Ze známých glykopeptidových antibiotik je možno uvést například vancomycin, popsaný v US patentu č. 3 067 099, jeho struktura byla popsána v publikaci Williamson a další, J. Am. Chem. Soc. 103, 6580 až 6585 (1981), actaplanin (antibiotikum A-4696), popsané v US patentovém spisu č. 3 952 095, jeho struktura byla částečně popsána v US patentovém spisu č. 4 322 343, ristocetin, popstný v britském patentovém spisu číslo 765 886, struktura ristocetinu A, který je jedním faktorem ristocetinového komplexu, byla popsána v publikaci Kalman a další, J. Am. Chem. Soc. 102, 897 až 905 (1980), a avopracin, popsaný v US patentu č. 3 338 786, jehož struktura byla popsána v publikaci Ellestad a další, J. Am. Chem. Soc. 103, 6522 až 6524 (1981).
Při provádění způsobu podle vynálezu je možno získat antibiotikum A 47934 a/nebo jeho z farmaceutického hlediska přijatelnou sůl.
Antibiotikum A 47934 je možno získat tak, že se pěstuje při teplotě 15 až 40 °C, při pH 6,4 až 7,0 po dobu 1,5 až 10 dnů kmen Streptomyces toyocaensis NRRL 15009 v živném prostředí s obsahem využitelných zdrojů uhlíku, dusíku a anorganických solí v submerzní kultuře za aerobních podmínek, načež se popřípadě antibiotikum ze živného prostředí izoluje.
Absorpční spektrum antibiotika A 47934 v infračerveném světle v bromidu draselném je uvedeno· na výkresu.
Vynález se tedy týká způsobu výroby nového antibiotika, které je možno vyjádřit
HO
\ Z
NH
I CO
I
CH- HH
CH \ NH \
Antibiotikum, získané způsobem podle ·vynálezu je možno užít ve volné formě nebo ve formě solí, přijatelných z farmaceutického hlediska.
Antibiotikum A 47934 je bílá krystalická sloučenina o teplotě tání vyšší než 225 °C za rozkladu. Molekulová hmotnost tohoto antibiotika je přibližně 1311, jak je možno pro kázat hmotovou spektrometrií ostřelováním rychlými atomy.
tH NMR spektrum antibiotika A 47934 bylo stanoveno při teplotě místnosti v dimethylsulfoxidu. Šestičlenné kruhy strukturního vzorce antibiotika byly k tomuto účelu označeny velkými písmeny, jak je zřejmé z následujícího strukturního vzorce
Chemický posun je uveden v následující tabulce:
Tabulka 1
Chemické posuny*
Kruh A Chemický posun Kruh E Chemický posun
—NH 6,78 —NH 8,64
—2‘ 4,12 —Γ 4,55
—1 5,02 —2 7,24
—2 7,63 —6 6,78
—5 7,19
—6 7,45
Kruh B Chemický posun Kruh F Chemický posun
—NH 7,62 —NH 7,64
—Γ 5,57 —2‘ 5,21
—2 5,67 —2 6,38
—6 5,03 —4 6,35
—6 6,30
Kruh C Chemický posun Kruh G Chemický posun
—NH 7,45 —Γ 4,76
—2‘ 4,86 —2 6,57
—Γ 3,30 —5 7,65
—1 2,82 —6 7,12
—2 7,68
—3 7,16
—6 7,20
Kruh D Chemický posun
—NH 8,29
—Γ 4,43
—2 6,26 w -
—4 6,37
Vyměnitelné protony nejsou uvedeny
V závislosti na molekulové hmotnosti, nukleární magnetické resonanci a elementární analýze byl antibiotiku A 47934 připsán empirický vzorec C58H44CI5N7O21S.
Při potenciometrické titraci nového antibiotika v 66% dimethylformamidu ve vodě je možno prokázat tři titrovatelné skupiny o pKa 5,85, 7,9 a 10,3 (počáteční pH 6,44). Protože titrační zařízení nezaznamenává pH nižší než 4,0, nebylo možno stanovit hodnotu pKa pro skupinu —SOsH. Výsledky titrace prokazují, že antibiotikum A 47934 snadno tvoří soli se zásadami. Antibiotikum může tvořit soli také se silnými kyselinami o· pH 3 nebo nižším.
Antibiotikum A 47934 má specifickou 0táčivost (ajo25 = —1,99° (H2O, c = 10 mg na ml).
Absorpční spektrum antibiotika A 47934 v infračerveném světle v bromidu draselném je znázorněno na obr. 1. Je možno pozorovat následující odlišitelná absorpční maxima:
3700 až 2700 (velmi široké, intenzívní), 1658 (silné), 1615 (střední), 1590 (střední), 1510 (silné), 1491 (střední), 1742 (slabé), 1429 (střední), 1398 (střední), 1326 (velmi slabé), 1265 (střední), 1231 (silné), 1205 (slabé), 1163 (slabé), 1140 (střední), 1058 (slabé), 1045 (střední), 1005 (střední), 849 (střední), 754 (slabé) a 719 (slabé) cm1.
V absorpčním spektru antibiotika A 47934 v ultrafialovém světle v kyselém i neutrálním vodném roztoku je možno· pozorovat absorpční maxima při 281 nm (ε 10 850). V ultrafialovém světle má antibiotikum A 47934 v zásaditém vodném roztoku maximum při 297 nm (ε 18 900).
Antibiotikum A 47934 je produkováno dosud nepopsaným kmenem Streptomyces toyocaensis NRRL 15009.
S výhodou se k tomuto účelu užije biologicky čisté kultury nového kmene Streptomyces toyocaensis NRRL 15009. Tato kultura byla v laboratoři označována jako kultura A 47934.1.
Kultura A 47934.1 je variantou, odvozenou přírodní selekcí z kultury A 47934, která byla izolována ze vzorku písku z Clayton Bay, Washington.
Antibiotikum, získané způsobem podle vynálezu bude dále označováno jako antibiotikum A 47934.
Kultura A 47934.1 byla klasifikována jako kmen Streptomyces toyocaensis podle srovnání ze známého popisu kmene Streptomyces griseoflavus ATCC 25456 podle publikace Shirling a Gottlieb, „Cooperative Des cription of Type Cultures of Streptomyces“, Int. J. Syst. Bacteriol. 19(4), 391 až 512 (1969) a podle uveřejněného popisu · Streptomyces toyocaensis v publikaci Nishimura, Katagiri, Sáto, Mayama a Shimaoka, ATCC 19814 v Shirling a Gottlieb, „Cooperative Description of Type Cultures of Streptomyces“, Int. J. Syst. Bacteriol. 18(2), 174 (1968), v této publikaci jsou uvedeny také některé doplňkové zkoušky.
Kultura A 47934.1 má šedě zbarvené spory (GY), které se svým zbarvením liší od žlutošedých 9por S. griseoflavus, jak bylo popsáno v publikaci Waksman, „The Actinomycetes sv. II, str. 222“ vydáno· Williams a Wilkins Co., Baltimore (1961). Dalším rozdílem je skutečnost, že S. griseoflavus využívá mannitol a rhamnozu, kdežto kultura A 47934.1 tyto látky nevyužívá.
Kultura A 47934.1 je pokud jde o vlastnosti kultury, morfologii a fyziologii podobná S. toyocaensis Nishimura, Katagisi, Sáto, Mayama a Shimaoka ATCC 19814.
Vlastnosti kultury A 47934.1
Morfologie
Kmen A 47934.1 · produkuje dobře vyvinuté vzdušné mycelium, které se větví a není fragmentováno. Sporofory tvoří otevřené, krátké, volné spirály o 2 až 3 závitech a kmen A 47934.1 je proto zařazen do kmenů, tvořících spirály (S) podle publikace Priidham a další „A Guide for the Classification of Streptomycetes According to Selected Groups“, Appl. Mlcrobiol. 6, 52 až 79 (1957).
Uvedené morfologické znaky je možno nejlépe pozorovat na ISP prostředí č. 3 a 4. Zralé řetězce spor obvykle obsahují 10 až 50 spor v jednom řetězci. Spory jsou podlouhlé až vejčité a mají ostnatý povrch. Rozměr spor je šířka 0,58 · až 0,71 mikrometru a délka 0,75 až 0,88 mikrometru, průměrný rozměr je šířka 0,65 a délka 0,83 mikrometru.
Vlastnosti kultury
Vlastnosti kultury A 47934.1 na různých prostředcích jsou uvedeny v následující tabulce 1.
Názvy barev byly voleny podle ISCC-NBS Centroid Color Charts vzorek č. 2106 (National Buresau of Standards, U.S. Department of Commerce, 1958), a podle Color Harmony Manual, 4. vydání (Color Standards Department, Container ·Corporation of America, Chicago, Illinois, 1958).
Vlastnosti kultury :na různých prostředích
Prostředí Vlastnost
Agar s extraktem z kvasnic a ze sladu (ISP prostředí č. 2) G
R
Am
Sp
Agar s ovesnou moukou (ISP prostředí č. 3) G
R
Am
Sp
Agar s anorganickými solemi a škrobem (ISP prostředí č. 4) G
R Am
Sp
Agar s glycerolem a asparaginem (ISP prostředí č. 5) G
R
Am
Sp
Czapkův agar G
R
Am
Sp
Agar s rajským protlakem a ovesnou moukou G
R
Am
Sp
Vysvětlivky:
G = růst
Bohatý
68,S.OY
Dobře vyvinuté 2ih světle olivově šedé
Nevytváří se
Dobrý
91.d.gy.Y
Dobře vyvinuté 2ih světle olivově šedé
Nevytváří se
Bohatý
94.1.01Br
Velmi bohatě vyvinuté 2ih světle olivově šedé
Nevytváří se
Bohatý
67.brill. OY
Dobře vyvinuté 2ih světle olivově šedé Nevytváří se
Dobrý
91.id.gy.Y
Dobře vyvinuté 2ih světle olivově šedé
Nevytváří se
Bohatý
91.1.01ВГ
Velmi bohatě vyvinuté 2ih světle olivově šedé
Nevytváří se
R = zadní strana kultury
Am = mycelium na vzduchu
Sp = rozpustný pigment
Srovnání schopnosti využít zdroje uhlíku pro kulturu A 47934.1 a Streptomyces toyocaensis ATCC 19814 bylo prováděno při použití ISP prostředí č.9, lk němuž byly přidávány zdroje uhlíku, sterilizované filtrací do výsledné koncentrace 1,0. Plotny byly odečítány po inkubaci 14 dnů při teplotě 30 °C.
Výsledky jsou uvedeny v následující tabulce 2.
Tabulka 2
Využití uhlíkových zdrojů kulturami A 47934.1 a S. Toyocaensis ATCC 19814
Zdroj uhlíku A 47934.1 ATCC 19814
bez uhlíku — —
D-glukóza + +
L-arabinóza + +
cellobióza + ND
D-fruktóza +
D-galaktóza + ND
i-lnositol + +
D-mannitol — +
malibióza — ND
rafinóza — —
D-rhamnóza — —
ribóza ND
salicin —— ND
sacharóza — —
D-xylóza + ±
Poznámka: 4- = využívá se
+ = využití pochybné
— — nevyužívá se ND = neprovedeno
Studie buněčné stěny
Užitím celých hydrolyzovaných buněk mikroorganismu byla stanovena přítomnost některých cukrů. Cukry, obsažené v buněčné stěně byly stanoveny modifikací způsobu podle publikace Μ. P. Lechavalier „Chemical Methods as Criteria for the Separation of Actinomycetes IntoGenera“. Tento způsob byl vyvinut v 'laboratořích Subcommittee on Actinomycetes of the Američan Society of Microbiology, (Dr. Thomas G. Pridham, Convenorj na Institute of Microbiology, Retgers University, The Statě University of New Jersey, New Brunswick, N. J., (1971).
Hydrolyzované buněčné stěny byly užity také ke stanovení ' isomerů kyseliny diami nopimelové. Tyto isomery byly stanoveny způsobem podle publikace Becker a další, Appl. Microibiol. 11, 421 až 423 (1964).
Výsledky jsou uvedeny v následující tabulce.
I
Test Výsledek
Průkaz cukrů
Stanovení isomerů kyseliny 2,6-diaminopime,lové glukóza, ribóza
LL isomer
Srovnání kultur A 47934.1 a S. toyocaensis ATCC 19814 je uvedeno v následující tabulce 3.
Tabulka 3
Srovnání vlastností kultur A 47934.1 a ATCC 19814
Vlastnost A 47934.1 ATCC 19814
Barva spor na vzduchu šedá šedá
Využití uhlíku + +
D-mannitol — +
D-xylóza +
Zkapalnění želatiny + +
Tvorba melanoidního pigmentu — —
ISP č 1 — —
ISP č. 6 — —
ISP č. 7 — —
ISP č.7 — modifikované — ND
Morfologie s S
Tolerance chloridu sodného v % 9 ND
Redukce nitrátů 4 . 4
Barva zadní strany kultury Y-Br Y-Br
Hydrolýza odstředěného mléka ± 4
Tvorba rozpustného pigmentu — —
Tvar spor podlouhlý podlouhlý
Povrch spor ostnitý ostnitý
Hydrolýza škrobu 4’ 4
Teplotní rozmezí (°C) 15 až 40 ND
ND = nebylo provedeno
Shrnutí podobných vlastností a rozdílů mezi kulturami A 47934.1 a Streptomyces toyocaensis ATCC 19814 je provedeno v následující tabulce 4.
Tabulka 4
Shrnutí podobných a rozdílných vlastností kultura A 47934.1 a S. Toyocaensis ATCC 19814
Podobné vlastnosti Rozdíly využiti mannitolu a xylózy na S. toyocaensis
Barva spor na vzduchu (GY) Využití uhlíku Nepřítomnost pigmentu Zkapalnění želatiny Nepřítomnost melanoidních pigmentů Morfologie (S ] Redukce nitrátu Působení na odstředěné mléko Nepřítomnost rozpustného pigmentu Délka řetězce spor (10 až 50] Povrch spor (SPy) Hydrolýza škrobu
Kultura A 47934.1 byla uložena 25. ledna 1982 do veřejné sbírky kultur Northern Regional Research Center, U. S. Department of Agriculture, Agricultural Research Service, Peoria, Illinois 61604, odkud je možno· ji získat pod číslem NRRL 15009.
Antibiotikum A 47934 má kyselou povahu, protože obsahuje karboxylovou skupinu a mimoto ještě skupinu —SO3H, takže snadno· tvoří soli se zásadami. Antibiotikum také obsahuje aminoskupinu, která tvoří soli pouze se silnými kyselinami o pH 3 nebo nižším. Taikto získané, z farmaceutického hlediska přijatelné soli rovněž spadají do· oboru vynálezu. Pod tímto· pojmem se rozumí soli, které je možno využít při chemoterapii teplokrevných živočichů.
Příkladem vhodných solí tohoto typu s antibio-tikem A 47934 jsou ty adiční soli, které se tvoří běžnou reakcí karboxylové funkce nebo funkce SOaH se zásadami, například hydroxidem sodným, uhličitanem sodným, uhličitanem draselným, hydroxidem vápenatým, hydroxidem draselným, trimethylaminem, hydroxidem amonným a · diethanolaminem a také soli, vytvořené reakční aminoskupiny s kyselinami s pH 3 nebo nižším, například s kyselinou sírovou, chlorovodíkovou a fosforečnou.
Antibiotikum A 47934 je účinné proti grampozitivním mikroorganismům. Toto antibiotikum rovněž podporuje růst a zlepšuje využití krmivá a drůbeže, vepřů a Skotu.
Při použití různých pokusů byly stanoveny koncentrace, v nichž antibiotikum A 47934 způsobuje inhibici růstu mikroorganismu.
Antibiotikum A 47934 je účinné proti celé řadě anaerobních bakterií, jak je uvedeno v následující tabulce 5. V tabulce jsou uvedeny minimální inhibiční koncentrace stanovené ředěním na agaru.
Tabulka 5 Účinnost antibiotika A 47934 proti anaerobním bakteriím
Mikroorganismus MIC (^g/ml)
Clostridium difficile 2994 0,5
Clostridium perfringens 81 0,5
Clostridium septicum 1128 0,5
Eubacterium aerofaciens 1235 1,0
Peptococcus asaccharolyti-
cus 1302 0,5
Peptococcus prevoti 1281 1,0
Peptostreptococcus anaero-
bius 1428 0,25
Peptostreptococcus interme-
idius 1264 1,0
Propionibacterium acnes 79 1,0
Bacteroides fragilis 111 32,0
Bacteroides fragilis 1877 32,0
Bacteroides fragilis 1936B 32,0
Bacteroides thetaiotaomicron
1438 32,0
Bacteroides melaninogenicus
1856/28 >128,0
Bacteroides melaninogenicus
2736 16,0
Bacteroides vulgatis 1211 32,0
Bacteroides corrodens 1874 32,0
Fusobacterium symbiosum
1470 2,0
Fusobacterium necrophorum
6054A 0,25
Antibiotikum A 47934 je účinné také pro-
ti řadě kmenů Clostridium difficile, jak by-
lo stanoveno ředěním na agaru. Výsledky
jsou uvedeny v tabulce 6.
Tabulka 6
Účinnost antibiotika A 47934 proti Clostri-
dium difficile
MIC
Clostridium .difficile ÍMg/ml)
8484 á0,5
6890 á0,5
2634 šl,0
78 <0,5
A-194 SO,5
A-195 á0,5
A-196 á0,5
A-279 ál,0
A-280 á0,5
A-281 <0,5
WAL-2112 <0,5
WAL-3657 ž0,5
WAL-4268 g0,5
107B á0,5
111F S0,5
1153 <0,5
3424-5 В <0,5
3816 S0.5
3950D ž0,5
Antibiotikum А 47934 je účinné proti řadě grampozitivních pathogenních bakterií, jak bylo stanoveno běžným ředěním na agaru. Takto získané MIC hodnoty jsou uvedeny v tabulce 7.
Tabulka 7
Účinnost antibiotika A 47934 proti různým bakteriím
Mikroorganismus
MIC (<ug/ml)
Staphylococcus aureus XI.1 0,06
Staphylococcus aureus V41 0,125
Staphylococcus aureus X400 0,25
Staphylococcus aureus S13E 0,125
Staphylococcus epidermidis
EPI1 0,25
Staphylococcus epidermidis
EPI2 2,0
Streptococcus pyogenes C203 0,25
Streptococcus pneumoniae
Park 1 0,06
Streptococcus skupina D X66 0,5
Streptococcus skupina D 9960 0,5
Haemophilus influenza C. L. 2,0
Haemophilus influenza 76 4,0
Shigella sonnei N9 > 128,0
Escherichia coli N10 > 128,0
Escherichia coili EC14 > 128,0
Escherichia coli TEM > 128,0
Klebsiella pneumoniae X26 > 128,0
Klebsiella pneumoniae KAE > 128,0
Klebsiella pneumoniae X68 >128,0
Enterobacter aerogenes C32 > 128
Enterobacter aerogenes EB17 > 128
Enterobacter cloacae EB5 > 128
Enterobacter cloacae 265A > 128
Salmonella typhi X514 > 128
Salmonella typhi 1335 > 128
Pseudomonas aeruginosa
C528 > 128
Pseudomonas aeruginosa
X239 > 128
Pseudomonas aeruginosa
Psl8 > 128
Pseudomonas aeruginosa Ps72 > 128
Serratia marcescens X99 > 128
Serratia marcescens SF3 > 128
Próteus morganii PR15 > 128
Próteus inconstans PR23 > 128
Próteus rettgeri PR7 > 128
Próteus rettgeri C24 > 128
Citrobacter freundii CF17 > 128
Antibiotikum A 47934 je účinné invivo proti experimentálním bakteriálním infekcím. V případě, že se podá zkoumaná látka podkožně ve divou dávkách myším, infikovaným některými bakteriemi, je možno vyjádřit jako EDso dávku, která v mg/kg chrání proti infekci 50 % pokusných zvířat. Způsob stanovení je uveden v publikaci Warren
A 47934 jsou uvedeny v následující tabulce 8.
Wick a další J. Bacteriol. 81, 233 až 235 (1961). Hodnoty EDio pro antibiotikum
Tabulka 8 ,
ED50 antibiotika A 47934 in vivo v mg/kg X 2
Antibiotikum S. pyogenes
C 203
A 47934 3,38
Akutní toxicita antibiotika A 47934 při intraperitoneálním podání u myši je vyšší než 300 mg/kg.
Antíbiotikem, získaným způsobem podle vynálezu je možno léčit infekce u lidí i zvířat tak, že se lidem i zvířatům podá účinná dávka antibiotika v rozmezí 25 až 2000 mg antibiotika A 47934 nebo jeho soli, přijatelné z farmaceutického^ hlediska.
Při léčbě infekcí u lidí je možno podat antibiotikum parenterálně, například nitrosvalovou injekcí nebo nitrožilní infuzí. Pro injekční podání se antibiotikum nebo jeho sůl, přijatelná z farmaceutického hlediska rozpustí iv· ředidle, přijatelném z fyziologického hlediska v požadované koncentraci. Vhodným ředidlem je například voda pro· injekční podání, 0,9 % chlorid sodný, 5 % dextróza, Ringerův roztok nebo další běžně užívaná ředidla. Pro τ.ΤΤτ imzi τ maž ее antibiotikum nebo jeho· sůl rozpustit ve vhodné koncentraci v ředidle, přijatelném z fyziologického hlediska, které popřípadě obsahuje další složky, například živné látky. Obvyklá koncentrace antibiotikaje 5 až 10 %. '
Antibiotikum nebo· jeho sůl, přijatelná z farmaceutického hlediska se zpracovává běžným způsobem na jednotlivé dávky, například na hermeticky uzavřené lékovky, ampule, sterilní zazátkované lékovky nebo se uzavírá do balíčků z plastické hmoty. Tyto formy mohou obsahovat pomocné látky, například antioxidační činidla, činidla, usnadňující rozpustnost, dispergační činidla, ipufry a podobně. Jednotlivá dávka obvykle obsahuje 100 mg antibiotika A 47934 nebo jeho soli, přijatelné z farmaceutického · hlediska v lékovce, zazátkované butylovou pryží. Jiná léková forma může například obsahovat 250· mg antibiotika A 47934 nebo jeho soli ve · sterilní zatavené ampuli. Pro· nitrožilní podání se dodává 5 g antibiotika A 47934 nebo jeho soli, přijatelné z farmaceutického hlediska v balíčku · z plastické hmoty.
Antibiotikum A 47934 je možno· podávat perorálně nebo parenterálně. Je zřejmé, že i v tomto případě je možno užít nosiče nebo ředidla, přijatelného z farmaceutického hlediska. Dávka antibiotika A 47934 bude záviset na radě okolností, například na pova-
S. pneumoniae S. aureus
(Park I) (3055)
1,77 < 0,3
ze a závažnosti infekce. Příslušná rozmezí dávek a/nebo jednotlivé dávky je možno· stanovit tak, že se vezme v úvahu minimální inhibiční koncentrace a dávka EDso spolu s dalšími faktory, například vlastnostmi nemocného· nebo infekčního organismu.
Antibiotikum A 47934 je možno užít k potlačení růstu Clostridium difficile, které způsobuje pseudomembranózní colitis střeva. V tomto případě se užije antibiotikum perorálně v ' účinné dávce, stejným způsobem je možno užít také jeho sůl, přijatelnou z farmaceutického hlediska. V tomto případě je výhodné podání ve formě želatinové kapsle nebo ve formě suspenze.
Antibiotikum, vyrobené způsobem podle vynalezu, je možno užít také ve veterinárním lékařství k léčbě infekčních onemocnění domácích i hospodářských zvířat, · například proti zánětu mléčné . žlázy. Antibiotikum A 47934 je možno užít také při chovu domácích zvířat, například k podpoře růstu Skotu a dalších přežvýkavců. Příklady tohoto použití budou dále podrobněji rozvedeny.
Bylo prokázáno, že antibiotikum A 47934 může modifikovat poměr těkavých alifatických kyselin (VFAj v bachoru zvířat s vyvinutou bachorovou funkcí. Protože využití . zdroje uhlíku u přežvýkavců se zvyšuje látkami, které podporují mikroflóru bachoru při produkci propionátu na úkor acetátu nebo butyrátu, jak bylo uvedeno v publikaci Church a další, „Digestive Physiology and Nutrition of Ruminants“, sv. 2, 1971, str. 622 až 625, je možno užít antibiotikum A 47934 ke zlepšenému využití krmivá u uvedených zvířat.
Toto použití antibiotika bylo ověřeno v následujících pokusech.
Pokus 1
V tomto pokusu byla účinnost antibiotika A 47934 modifikovat vzájemný poměr těkavých alifatických kyselin, produkovaných v bachoru stanovena in vitro při použití testu uvedeného v US patentovém spisu číslo 3 928 571. Výsledky tohoto pokusu při použití antibiotika A 47934 jsou uvedeny v· následující tabulce 9.
Údaje v tabulce · 9 jsou uvedeny jako po235045 měr těkavých alifatických kyselin v lahvích s obsahem antibiotika k poměru v kontrolních lahvích. Tímto způsobem je možno jas ně prokázat změny, které v tomto poměru jsou způsobeny podáním nového antibiotika.
Tabulka 9
Sloučenina Dávka (mik.rogramy/ml) acetát propionát butyrát
A 47934 4 0,81 1,32 1,03
A 47934 10 0,95 1,12 1,00
A 47934 2 1,09 1,10 1,03
A 47934 1 0,99 1,11 1,01
Výsledky, uvedené v tabulce 9 ukazují, že antibiotikum A 47934 zvyšuje produkci propionátu v bachoru.
Podání tohoto antibiotika chrání zvířata proti vzniku ketózy a zlepšuje využití krmivá. Příčinou ketózy je malá produkce propionátu. V současné době se doporučuje podávat kyselinu propionovou nebo krmivá, z nichž přednostně vzniká propionát. Je zřejmé, že podáváním antibiotika, vyrobeného způsobem podle vynálezu je s výhodou možno snížit výskyt ketózy.
Protože antibiotikum A 47934 má strukturu příbuznou s jiným antibiotikem glykopeptidového typu, která se užívají ke zlepšení produkce mléka u zvířat s vyvinutou bachorovou funkcí, bylo by možno očekávat, že antibiotikum A 47934 bude mít obdobný Učinek.
Bylo prokázáno, že antibiotikum, vyrobené způsobem podle vynálezu, zvyšuje využití krmivá u přežvýkavců. Nejjednodušším způsobem podání je smísení tohoto antibiotika s krmivém pro uvedená hospodářská zvířata.
Antibiotikum A 47934 je možno' běžně mísit s krmivém pro skot. Toto krmivo se pak podává zvířatům běžným způsobem.
Běžné krmivo pro skot sestává z různých zrnin a jejich směsí, například kukuřice . a ovsa a mimoto z hrubé vlákniny, například ze sena, slupek bavlníkových semen, rýžových plev a ze siláže. Antibiotikum A 47934 je možno mísit . s tímto krmivém v poměru 30 až 300 g/tuma krmivá, vztaženo na sušinu.
Pro obchodní využití antibiotika A 47934 v krmivech zlepšujících produkci mléka je výhodné užít předběžné směsi nebo. přídatného krmivá s. obsahem tohoto antibiotika. V těchto typech krmivá je možno. rozptýlit stejnoměrně antibiotikum A 47934 ve vhodném organickém nebo anorganickém nosiči, jako je kukuřice, ječmen, sójová mouka, pšenice, stejně jako podobné levné · poživatelné složky. Přídatné krmivo· se pak stejnoměrně promísí s běžným krmivém před podáním skotu. Užije se takového množství přídatného. krmivá, aby bylo zvířatům dodáno Učinné, produkci propionátu zvyšující množství . antibiotika.
Dále je uvedeno typické krmivo pro podání skotu ke zvýšení produkce mléka s obsahem antibiotika A 47934.
Hmnotnostní %
Složka
kukuřice 32,15
ječmen 10,0
melasa 7,5
oves 10,0
sójová mouka
(48 % bílkoviny J 13,8
řepné řízky 2,5
kukuřičný gluten 12,5
lihovarské výpalky 7,5
směs stopových prvků 0,05
chlorid sodný 1,0
hydrogenfosforečnan
vápenatý 2,0
100,00
Svrchu uvedené složky se stejnoměrně promísí a pak je možno přidat antibiotikum A 47934 tak, aby krávy obdržely 600 mg antibiotika denně.
Uvedené antibiotikum je však možno podávat i jiným způsobem. Účinnou látku je možno zpracovat na tablety, kapsle nebo jiné lékové formy a podávat je zvířatům. Výroba těchto forem je zcela běžná, jednotlivá dávka by měla obsahovat takové množství Učinné látky, které je v přímém vztahu k denní potřebě zvířete.
Kapsle je možno získat tak, že se želatinové kapsle naplní . antibiotikem v jakékoli formě. Pro tento, Učel je možno antibiotikum zředit inertním práškovaným ředidlem jako je cukr, škrob nebo čištěná krystalická .celulóza ke zvýšení celkového· . objemu kapsle.
Tablety je rovněž možno . získat běžným způsobem. Výroba tablet je známa, kromě Učinné látky obsahuje tableta obvykle ještě nosič, dezintegrační činidlo, absorpční činidlo·, pojivo a kluznou látku. Typickým nosičem může být laktóza nebo jiný cukr, chlorid sodný, škrob a mannitol.
Škrob je rovněž dobrým dezintegračním činidlem stejně jako kyselina alginová. Je možno přidávat také smáčedla, například laurylsíran sodný nebo -dioktylsulfojantaran sodný. Použitelná jsou také běžná absorpční činidla, například škrob a laktóza, pro olejovité prostředky je výhodné použití uhličitanu horečnatého. Vhodným pojivém je želatina, pryžovité látky, škrob, dextrin a různé deriváty celulózy. Z kluzných látek je možno uvést stearan hořečnatý, mastek, parafinový vosk, různá kovová mýdla a polyethylenglykol.
Je možno užít také prostředků, které uvolňují antibiotikum pomalu v průběhu delší doby. Tyto prostředky se vyrábějí stejně jako tablety s tím rozdílem, že je zajištěno pomalé rozpouštění a uvolňování -antibiotika. Toho se . dosahuje použitím ve vodě nerozpustné formy antibiotika, je také možno užít například železného jádra k tomu účelu, aby takto získané prostředky klesly na dno bachoru a zůstaly v bachoru delší časové období.
Rozpuštění antibiotika je možno zpomalit použitím matrice nerozpustného- materiálu, do níž je zavázána účinná látka. Matrice může být vyrobena z různých látek jako jsou rostlinné vosky, čištěné minerální vosky a různé ve vodě nerozpustné polymerní materiály.
Kapalné prostředky se vyrábějí z těch forem antibiotika, které jsou rozpustné ve vodě. Je však možno užít i suspenze nerozpustné formy. Může také jít o roztok v rozpouštědle, přijatelném z - fyziologického hlediska, například iv polyethylenglykolu.
Suspenze nerozpustných forem antibiotika je možno připravit z látek, které antibiotikum nerozpouštějí jako je například rostlinný olej jako arašídový, kukuřičný -nebo sezamový olej, glykol, například propylenglykol nebo- polyethylenglykol nebo v závislosti na použité fonmě antibiotika je možno použít i vodu.
Obvykle -se přidávají ještě vhodná, z fyziologického hlediska přijatelná pomocná činidla, která napomáhají vzniku -suspenze antibiotika. Jde o zahušťovadla, jako karboxymethylcelulózu, polyvinylpyrrolidon, želatinu a algináty, může -táké jít o smáčedla, jako jsou lecitin, -adiční produkty alkylfenolu a polyethylenoxidu, naftalensulfonáty, alkylbenzensulfonáty a estery polyoxyethylensorbitanu.
V jednotlivých -případech je možno užít i dalších látek, které ovlivňují hydrofilní vlastnosti, hustotu a povrchové napětí kapaliny. Jde například o protipěnivá -činidla typu -silikonu, o glykoly, sorbitol a o cukry.
Antibiotikum ve formě suspenze je možno podávat rostoucím zvířatům nebo je možno užít také suché -směsi antibiotika a pomocných -činidel, tato směs se pak ředí těsně před použitím.
V případě, že má být použito prášků nebo poprašků, mísí se antibiotikum obvykle s mastkem, infusoriovou -hlinkou -nebo- jinou inertní látkou jako pomocným činidlem.
Antibiotikum je možno včlenit do pitné vody pro přežvýkavce tak, -že se do vody přidá ve vodě rozpustná forma nebo forma, kterou je možno uvést ve vodě do suspenze. Jinak se příprava pitné vody s obsahem antibiotika řídí stejnými principy jako výroba kapalných prostředků.
Nejjednodušším způsobem podání antibiotika zvířatům je zpracování antibiotika na přídatné krmivo. Pak je toto krmivo možno přidat do jakéhokoli suchého, kapalného nebo peletovaného krmivá.
Pro toto- použití -se většinou postupuje tak, že -se pevný podíl fermentačního prostředí včetně složek prostředí a mycelia užije jako zdroj antibiotika bez extrakce nebo dalšího dělení, -s výhodou se však odstraní alespoň voda. Po- ukončení fermentace antibiotika A 47934 se například celé fermentační prostředí zfiltruje a filtrační koláč s -obsahem antibiotika se usuší. Mimoto je možnoex-trahovat sušené mycelium alkalickým vodným roztokem o pH 10,5, extrakt se pak neutralizuje a suší, čímž se získá antibiotikum A 47934. Je také možno celé fermentační prostředí sušit lyofilizací, sušením v bubnu, -azeotropní destilací a běžným sušením. Sušené prostředí- je pak možno přímo mísit s předběžným krmivém.
Způsob misemi účinných látek s krmivém pro zvířata je -znám. Obvykle se nejprve vyrobí koncentrovaná předběžná směs účinné látky jako výchozí materiál pro výrobu krmiv s obsahem této látky. Typická směs může obsahovat 2 až 800 g účinné látky v 1 kg. Široké rozmezí je užito z toho důvodu, - že možné rozmezí pro- výsledné krmivo je - rovněž -velmi široké. Předmětné směsi mohou být kapalné nebo pevné.
Výroba výsledného krmivá s obsahem příslušného -množství antibiotika závisí pak pouze na příslušném výpočtu. Je nutno stanovit množství sloučeniny, - které má 'být podáno každému zvířeti -a vzít v- úvahu množství krmivá podaného denně jednomu zvířeti v koncentraci antibiotika v předběžné směsi a tím i potřebná koncentrace antibiotika ve výsledném krmivu.
Výsledné krmivo se vyrábí běžným míšením a poletováním.
Vynález -nemá být omezen na jakýkoli zvláštní přípravek nebo jakoukoli zvláštní cestu podání. Podstata vynálezu -spočívá v tom, že je možno získat antibiotikum, které účinně zvyšuje využití krmivá u přežvýkavců při perorálním podání. Způsob podání se může měnit od případu k případu.
Antibiotikum A 47934 je účinné také k podpoře růstu u - kuřat. Pokusy byly prováděny následujícím způsobem.
Pokus 2
- dnů stará kuřata [brojleři Penobscot) byla užita v množství 560 kuřat a rozdělena -do -skupin po 14 kuřatech. Vzniklo 35 skupin kontrolních -a 5 -skupin, jimž bylo
2«? £‘. iTO r‘
VjJ Q_’j Í'.J ‘.Ϊ tj άύίΛ podáno antibiotikum spolu s krmivém v dávce 20 g antibiotika A 47934 na tulku krmivá.
Použité krmivo pro mladé brojlery mělo následující složení:
Krmivo pro brojlery
Složka Procenta AMT/363 kg AMT/1362 kg
Žlutá mletá kukuřice 65,53 52,42 1965,9
Sójová mouka 49%, zbavená
slupek a extrahovaná roz-
pouštědlem 25,36 20,29 760,8
hovězí lůj 5,00 4,00 150,0
Krmný hydrogonfosforečnan •
vápenatý 2,15 1,72 64,5
Vápenec 0,83 0,66 24,9
Směs stopových prvků TK-01
(1,02)1. 0,10 0,08 3,0
Chlorid sodný 0,35 0,28 10,5
Směs vitamínů Tk-04 (1,00) 2 0,50 0,40 15,0
Hydroxyanalog methioninu 0,18 0,14 5,4
100,00 79,99 3000,0
1. Směs stopových prvků zajišťuje 75 mg manganu, 50 mg zinku, 25 mg železa a 1 mg
jodu v 1 kg výsledného krmivá.
2. Směs vitamínů zajišťuje 3000 mezinárodních jednotek vitamínu A, 900 mj vitamínu D, 40 mg vitamínu E, 0,7 mg vitamínu K, 1000 mg cholinu, 70 mg niacinu, 4 mg kyseliny pantothenové, 4 mg riboflavinu, 100 mikrogramů vitamínu B12 a 100 mikrogramů biotinu v 1 kg výsledného krmivá.
Při analýze krmivá byly získány následu- kyselina pantothenová, mg/kg 11,1
jící hodnoty: vitamín Вб, mg/kg 7,5
riboflavin, mg/kg 5,5
Bílkovina, % 18,00 thiamin, mg/kg 2,8
metabolizovatelná energie J/kg 13 000,00 kyselina listová, mg/kg 1,1
poměr ME/P 179,94 (81,79) vitamín Bi2, mikrogramy/kg 100,00
tuk, % 7,37 biotin, mikrogramy/kg 233,00
vláknina, % 2,66 arginin, % 1,305 (7,25)3J
popel, % 5,14 lysin, % 0,956 (5,31)
vápník, % 0,85 glycin, % 0,901 (5,01)
fosfor, % 0,73 methionin, o/o 0,433 (2,41)
dostupný fosfor, °/o 0,50 cystin, % 0,273 (1,52)
mangan mg/kg 85,00 celkový obsah aminokyselin
železo, mg/kg 72,00 s obsahem síry, °/o 0,706 (3,92)
měď, mg/kg 11,00 tryptofan, % 0,252 (1,40)
zinek, mg/kg 72,00 kyselina linoleová, °/o 1,25
selen, mikrogramy/kg 74,00
hořčík, mg/kg 1693,00 Poznámka:
draslík, mg/kg 7158,00
sodík, mg/kg 1682,00 3) Hodnoty v závorkách znamenají % ami-
jód, mg/kg 1,00 nokyselin v bílkovině potravy.
vitamín A, mezinárodní
jednotky/kg 5162,00 Voda a krmivo byly podávány ] podle li-
vitamín D, jednotky/kg 900,00 bosti všem skupinám kuřat celkem 21 dnů.
vitamín E, mg/kg 56,2 Krmivo bylo pokládáno za účinné v pří pa-
vitamín K, mg/kg 0,7 dě, že došlo к 3l% zvýšení přírůstku a/nebo:
cholin, mg/kg 1450,00 к 2% zlepšení využití krmivá. Výsledky po-
niacin, mg/ikg 85,00 kusů jsou uvedeny v následující tabulce 10.
Tabulka 10
Skupina
Koncentrace v g
Přírůstek g zlepšení v °/o
Využití krmivá
F/G zlepšení - v % kontrola A 47934
484 — 1,791
519 7,23 1,707 4,69
F/G = .celková spotřeba krmivá, dělená celkovým přírůstkem.
Antibiotikum A 47934 je možno podávat také v pitné vodě ve formě soli, přijatelné z farmaceutického hlediska.
Je tedy zřejmé, že antibiotikum A 47934 je možno užít k podpoře růstu u kuřat při podání v krmivu v množství 5 až 30 g tohoto antibiotika nebo jeho soli, přijatelné z farmaceutického hlediska, na 1 tunu podávaného krmivá.
Antibiotikum A 47934 podporuje růst také u selat. Tato účinnost byla ověřena následujícími pokusy.
Pokus 3 dávce 10 až 50 ppm v krmivu - selatům s počáteční hmotností 11 kg, -toto ošetření bylo srovnáno s výsledky, které byly dosaženy při podávání prostředku TylanR (tylosin, Elancoj v dávce 110 ppm. Selata byla chována v klecích s -drátěnými podlahami. ' Bylo užito- 4 -selat ve skupině, pro každou dávku byly užity 4 skupiny, pokus trval 28 dnů. Kontrolní skupinu tvořilo 6 skupin po 4 selatech, těmto selatům bylo podáváno krmivo bez jakékoli účinné látky. Krmivo bylo podáváno podle libosti, obsahovalo 18 % bílkovin z kukuřice a sóji, bylo užito- krmivá -s následujícím složením:
Antibiotikum A 47934 bylo podáváno v
Krmivo pro selata
Složka ·% kg/900 kg krmivá
mletá žlutá kukuřice 66,35 609,30
50% sójová mouka po extrakci
rozpouštědlem 19,35 174,30
sušené odstředěné mléko 10,00 90,00
uhličitan vápenatý 1,20 10,8
krmný hydrogenfosforečnan
vápenatý 1,20 10,8
chlorid sodný 0,50 4,5
směs -stopových prvků, AN-03:l) 0,10 0,9
směs vitamínů pro selata,
SW-0321 1,00 9,00
vitamín A3) 0,05 0,45
hydroxyanalog methioinlnu
o koncentraci 93 % 0,20 1,8
směs s obsahem selenu4' 0,05 0,45
100,00
J) Každý kg předběžné směsi obsahoval 50 gramů manganu ve formě síranu -manganatého, 100 g zinku ve formě uhličitanu zinečnatého, 50 g železa ve formě síranu železnatého, 5 g mědi ve formě oxidu měďnatého, 1,5 g jodu ve formě jodidu draselného -a maximálně 150, minimálně 130 g vápníku ve formě uhličitanu vápenatého.
2) Každý kg směsi obsahoval 77 161 -mezinárodních jednotek vitamínu Dz, 2205 mezinárodních jednotek vitamínu E, 411 mg riboflavinu, 1620 mg kyseliny pantothenové, 2205 mg niacinu, 4,4 mg vitamínu Β1Σ, 411 mg vitamínu K, 19180 mg choli nu, 110 mg kyseliny listové, 165 mg pyridoxinu, 110 mg thiaminu a 22 mg biotinu.
3> Každý kg směsi obsahuje 6 613 800 mezinárodních jednotek vitamínu A.
4) Každý kg směsi obsahuje 200 mg selenu ve formě selenitu -sodného, analýza je vypočítána pouze na selen.
Analýzou krmivá byly zjištěny následující hodnoty:
surová bílkovina, %19,10 etherový extrakt, %2,83 surová vláknina, %1,89 г
25 2 3
popel, % 5,60
vápník, % 0,90
fosfor, o/o 0,65
vstřebatelná energie J/kg 15 500,00
metabolizovatelná energie J/kg 14 500,00
riboflavin, mg/kg 7,88
niacin, mg/kg 27,38
kyselina pantothenová, mg/kg 24,96
cholin, mg/kg 1 224,95
vitamín B12, mikrogramy/kg 50,54
kyseliny listové, mg/kg 1,99
pyrídoxin, mg/lkg 8,37
thiamin, mg/kg 4,30
biotin, mg/kg 0,35
vitamín D, mezinárodní
jednotky/kg 811,61
vitamín A, mezinárodní
jednotky/kg 3 904,05
vitamín E, mezinárodní
jednotky/kg 23,61
vitamín K, mg/kg 4,41
měd, mg/kg 15,43
železo, mg/kg 98,12
jód, mg/kg 1,50
hořčík, mg/kg 1 627,70
zinek, mg/kg 119,61
mangan, mg/kg 61,74
selen, mg/ikg 0,104) lysin, °/o1,02 methionin, %0,53 cystin, %0,29 tryptofan, %0,23 isoleucin, %1,03 arginin, o/o1,15 histidin, %0,44 leucln, %1,72
fenylalanin, % 0,97
tyrosin, % 0,52
threonin, °/o 0,77
valin, ·0/ο 0,98
Na konci pokusu stoupla průměrná hmotnost selat na 25 kg. Výsledky tohoto pokusu jsou shrnuty v následující tabulce 11.
Tabulka 11
Skupina Množství v ppm ADG kg Zvýšení v % ADF kg Zvýšení v % F/G Zlepšení v %
Kontrola 0 0,44 0,85 1,97
A 47934 10 0,45 3,1 0,82 —3,2 1,82 7,6
A 47934 50 0,48 10,3 0,90 4,7 1,85 6,1
Tylan 110 0,46 4,1 0,88 2,6 1,92 2,5
ADG = průměrný denní přírůstek
ADF = průměrná denní spotřeba krmivá
F/G = poměr spotřeby krmivá k přírůstkům
Při použití antibiotika, vyrobeného způsobem podle vynálezu je . tedy možno· zlepšit růst selat talk, že se jim podá v krmivu 10 až 50 ppm antibiotika A 47934 nebo jeho· soli, přijatelné z farmaceutického hlediska. Antibiotikum A 47934 ve formě soli, přijatelné z farmaceutického hlediska, je možno selatům podávat také v pitné vodě.
Kromě využití antibiotika A 47934 k zlepšení růstu selat je možno očekávat, že toto antibiotikum lze využít ke zlepšení růstu vepřů různých hmotností až do jateční hmotnosti přibližně 100 kg.
Běžně dochází k tomu, že hospodářská zvířata, včetně přežvýkavců, v průběhu svého života jsou ošetřována látkami к prevenci onemocnění a k léčbě těchto onemocnění nebo jsou těmto zvířatům podávány růstové látky. Tyto látky jsou obvykle užívány také v různých směsích. Antibiotikum, vyrobené způsobem podle vynálezu, je rovněž možno zařadit do některé z běžně užívaných směsí.
Jak je zřejmé ze svrchu uvedených výsledků, mění antibiotikum A 47934 výhodným způsobem produkci acetátu v bachoru. Stejným způsobem zlepšuje trávení u zvířat s jedním žaludkem, která tráví vláknitý rostlinný materiál v tlustém střevě. Zvířa ta s jedním žaludkem jsou taková zvířata, která přijímají vláknitou rostlinnou potravu a alespoň její část tráví mikrobiologickou fermentací v tlustém střevě. Fermentace v tlustém střevě probíhá obdobným způsobem jako fermentace v bachoru.
Jako příklad těchto zvířat je možno uvést koně, vepře a králíky. Celkové využití krmivá u těchto zvířat je rovněž možno zlepšit perorálním podáním antibiotik, která příznivě ovlivňují poměr propionátu k acetátu. U koní a králíků tvoří fermentace v tlustém střevě většinu trávicích pochodů, z tohoto důvodu je u těchto zvířat · vliv uvedených · antibiotik zvláště příznivý.
Antibiotikum A 47934 je produkováno při pěstování · kmene Streptomyces toyocaensis NRRL 15009 nebo jeho mutanty nebo varianty produkující antibiotikum A 47934 v živném prostředí, které obsahuje využitelné zdroje uhlíku, dusíku a anorganických solí v submerzní kultuře za aerobních podmínek, fermentace se provádí až do nahromadění dostatečného · množství antibiotika.
Tak · jako· tomu je v případě dalších organismů, je .kultura · mikroorganismu NRRL 15009, produkující antibiotikum A 47934 variabilní. Je tedy samozřejmé, že všechny přírodní varianty, spontánní nebo indukované mutanty, transkonjuganty a rekombinanty, včetně těch, které jsou vyvolány včleněním plasmidu, spadají do oboru vynálezu.
К výrobě antibiotika A 47934 pěstováním Strepíomyces toyocaensis NRRL 15009 je možno užít celou řadu různých živných prostředí. Některá prostředí však jsou zvláště výhodná z hlediska hospodárnosti, optimálního výtěžku a izolace výsledného produktu. Živné prostředí by vždy mělo obsahovat využitelný zdroj uhlíku, dusíku, a anorganické soli. Z vhodných zdrojů uhlíku je možno uvést glukózu, bramborový dextrin, tapiokový dextrin, kukuřičný šikrob a melasu. Vhodnými zdroji dusíku jsou například, sójové pokrutiny, kasein, hydrolyzovaný kyselinami, extrakt z hovězího masa a sójová mouka.
Základní stopové prvky, nutné pro růst a vývoj mikroorganismů je možno dodat například ve formě kukuřičného výluhu, stopové prvky jsou přítomny talké jako nečistoty dalších složek živného prostředí v dostatečném množství ke splnění růstových a biosyntetických požadavků mikroorganismů. V některých případech může být žádoucí včlenit do živného prostředí další rozpustné živné anorganické soli, které obsahují sodík, draslík, hořčík, vápník, amonný ion, ion chloridový, uhličitanový, fosforečnanový, síranový, dusičnanový nebo některé další ionty.
Pro výrobu většího množství antibiotika A 47934 při použití kmene NRRL 15009 je vhodné provádět submerzní fermentaci za aerobních podmínek ve fermentačním tanku. Malá množství antibiotika A 47934 je možno získat pěstováním ve třepacích lahvích. Při použití fermentace v tanku je výhodné užít vegetativního očkovacího materiálu.
Vegetativní očkovací materiál je možno získat tak, že se naočkuje malé množství živného prostředí sporami, myceliálními fragmenty nebo lyofilizovanými peletami organismu, čímž se získá čerstvá, aktivně rostoucí kultura mikroorganismu. Vegetativní očkovací materiál se přenese do většího tanku, kde po určité době inkubace se nahromadí antibiotikum A 47934 v optimálním výtěžku.
Fermentační nenaočkované prostředí má pH, které závisí na použitém produkčním prostředí, obecně však se pohybuje pH všech živných prostředí v rozmezí 6,4 až 7,0.
Mikroorganismus, produkující antibiotikum A 47934 je možno pěstovat v širokém teplotním rozmezí 20 až 40 °C. К optimální produkci antibiotika A 47934 při použití kmene NRRL 15009 dochází při teplotě 30 stupňů C.
Jak je to obvyklé při pěstování v submerzní kultuře za aerobních podmínek, je zapotřebí vhánět do živného prostředí sterilní vzduch. К dobrému růstu organismu se má objem vzduchu při produkci v tanku pohybovat v rozmezí 0,1 až 0,5 objemu vzduchu na objem živného prostředí za minutu (v/v/mj. Optimální hodnota při použití nádoby o objemu 165 litrů je 0,25 v/v/m za stálého míchání rotačním míchadlem při 250 otáčkách za minutu. Malá množství protipěnivého prostředku v tomto případě napomáhají snížit pěnění tam, kde je toho zapotřebí. Je možno užít například propylenglykol v množství 0,2 ml/litr.
Produkci antibiotika A 47934 je možno sledovat v průběhu fermentace, například na agarových plotnách nebo turbidimetricky. V tomto případě se jako zkušebního organismu užije mikroorganismu Bacillus substilís ATCC 6633. Vzorek se upraví na pH 10,5 vodným roztokem hydroxidu sodného a před stanovením se odstředí.
Antibiotikum se obvykle vyprodukuje již po 36 hodinách a zůstává přítomno 7 nebo více dní v průběhu fermentace. К nejvyšší produkci dochází mezi 4. až 5. dnem fermentace.
Antibiotikum A 47934 je možno z fermentačního prostředí izolovat běžným způsobem. Protože většina antibiotika A 47934 je adsorbována nebo v buňkách, upraví se celé fermentační prostředí na hodnotu pH 10,5 přidáním vodného roztoku zásady, například hydroxidu sodného, čímž se antibiotikum z buněk uvolní. Pak se přidá infusoriová hlinka (Hyflo Super-cel, Johns-Manv-ille Corp.) jako pomocný prostředek pro filtraci a směs se promísí a pak se zfiltruje, s výhodou pod tlakem. Filtrát, který Obsahuje antibiotikum se upraví na neutrální pH, tj. 7,0, smísí se s vysoce porézním kopolymerem styrenu a divinylbenzenu v částicové formě (Diaion HP-20 Missubishi Chemical Industries, Ltd., Tokyo, Japonsko] a určitou dobu se míchá, například 60 minut. Vodná fáze se od pryskyřice oddělí, na pryskyřici je adsorbováno antibiotikum. Dalšími vhodnými adsorpčními činidly jsou aktivní uhlí, silikagel, polyamid, kysličník hlinitý, makroretikulární pryskyřice (XAD-2, XAD-4 a podobně] a ointoměničové pryskyřice, zvláště aniontoměničové pryskyřice (například IRA 68, Dowex 1).
Pryskyřice HP-20 s adsorbovaným antibiotikem A 47934 se promyje směsí vody a methanolu v poměru 4:1a oddělí se filtrací. Antibiotikum se pak vymývá z pryskyřice při použití směsi vody a methanolu v poměru 1 : 1 jako elučního činidla. Eluát se koncentruje a lyofilizuje, čímž se získá surové antibiotikum A 47934 jako světle hnědý prášek, který je možno dále čistit chromat-ografií.
Antibiotikum A 47934 je také možno izolovat z filtrátu tak, že se pH filtrátu upraví na hodnotu 3 přidáním kyseliny, čímž dojde ke vzniku sraženiny, která se oddělí filtrací. Antibiotikum A 47934 se začíná srážet při pH 6,5 a při pH 3 je vysrážení úplné. К okyselení živného prostředí je možno užít anorganické kyseliny, například kyselinu chlorovodíkovou, sírovou, fosforečnou a také organické kyseliny, například kyselinu octovou a kyselinu mravenčí. Takto získané surové antibiotikum A 47934 je možno čistit chromatografickými postupy.
Vynález bude osvětlen následujícími příklady.
Příklad 1
Příprava očkovacího materiálu pro první stupen
Následující prostředí bylo použito pro
šikmý agar, užitý к pěstování Streptomyces toyocaensis NRRL 15009.
Složka g/litr
rajský protlak 20,0
předvarená ovesná mouka 2.0,0
agar 20,0
deionizovaná voda do 1,0 litru
Po smísení svrchu uvedených složek má vzniklé živné prostředí pH 5,0, toto pH se upraví na 6,7 přidáním 5N vodného roztoku hydroxidu sodného před sterilizací. Po sterilizaci má živné prostředí pH 6,5.
Spory Streptomyces toyocaensis NRRL 15009 se naočkují na šikmý živný agar s obsahem svrchu uvedených složek a naočkovaný šikmý agar se inkubuje přibližně 10 dnů při teplotě 30 °C. Ze šikmého agaru se připraví lyofilizovaná kultura a tato kultura se užije к naočkování dalšího prostředí s následujícím složením.
Složka g/litr glukóza15,0 bramborový dextrin20,0 sójové pokrutiny15,0 extrakt z kvasnic1,0 kukuřičný výluh10,0 uhličitan vápenatý2,0 studená voda z vodovodu do 1,0 litru
Svrchu uvedené složky se smísí, po smísení má živné prostředí pH 5,6, toto· pH se upraví na 6,5 přidáním 5N vodného roztoku hydroxidu sodného před sterilizací. Po sterilizaci má živné prostředí pH 6,5 až 6,7.
ml tohoto prostředí se inkubuje v Erlenmeyerově baňce se širokým hrdlem o objemu 250 ml ipři teplotě 30 °C celkem 48 hodin na rotační třepačce s výkyvem 5 cm při 250 otáčkách za minutu. Pak se toto prostředí užije к naočkování malých fermentorů, které se očkují 1 % tohoto prostředí, nebo se užije к naočkování druhého stupně téhož prostředí к získání většího množství očkovacího materiálu.
i,
Fermentace kultury A 47934.1
800 ml živného prostředí z druhého stupně se po inkubaci užije к naočkování 100 litrů sterilního produkčního prostředí s následujícím složením.
Složka g/litr protipěnivé činidlo*0,2 glukóza25,0 bramborový dextrin30,0 melasa3,0 sójové pokrutiny15,0 kasein hydrolyzovaný kyselinou1,0 uhličitan vápenatý2,5 studená voda z vodovodu do 10,0 litrů * Dow Corning Antifoam‘Á
Po smísení svrchu uvedených složek má živné prostředí pH 6,5, toto pH se upraví na hodnotu 7,5 přidáním 5N vodného roztoku hydroxidu sodného před sterilizací. Po sterilizaci má živné prostředí pH 6,9.
Naočkované produkční prostředí se inkubuje ve fermentačním tanku o objemu 165 litrů 4 až 4,75 dnů při teplotě 30 °C. Živné prostředí se provzdušňuje sterilním vzduchem rychlostí 0,25 v/v/m a míchá se běžnými míchadly při 200 až 250 otáčkách za minutu.
Příklad 2
Izolace antibiotika A 47934
141 litrů fermentačního prostředí se upraví na ipH 10,5 přidáním 5N vodného roztoku hydroxidu sodného, 3 % pomocného· prostředku pro filtraci (infusoriová hlinka Eyflo Super-cel, Johns-Manville Corp.) a směs se hodinu míchá. Pak se směs zfiltruje pod tlakem, čímž se získá 106 litrů čirého filtrátu s obsahem antibiotika, tento filtrát se upraví na 7,0 přidáním 5N vodného roztoku kyseliny chlorovodíkové a pak se к filtrátu přidá 10,6 litrů vysoce porézního styrendivinylbenzenového kopolymerů v částicové formě (Diaion HP-20, Mitsubisha Chemical Industries, Limited, Tokyo, Japonsko). Směs se 60 minut míchá, načež se vodná fáze oddělí filtrací za odsávání.
Pryskyřice s obsahem antibiotika se postupně promývá 30 litry vody, pak dvakrát 30 litry směsi vody a methanolu v ipoměru 4 : 1, přičemž pokaždé se směs 30 minut míchá a pak se zfiltruje. Promytá pryskyřice se přibližně 30 minut míchá s 30 litry směsi methanolu a vody v poměru 1:1a pak se zfiltruje a tentýž postup se ještě jednou opakuje к vymytí antibiotika z pryskyřice. Filtráty směsi methanolu a vody v poměru 1: 1 se slijí a odpaří ve vakuu na objem 4 až 5 litrů s obsahem 6 až 12 % pevného po dílu a pak .se koncentrát lyofilizuje, čímž se získá 79,1 g světle hnědého prášku, který sestává ze surového antibiotika A 47934 o čistotě 30 až 40 %. Celkový výtěžek je 44 až 49 %.
Příklad 3
Příprava surového antibiotika A 47934 srážením kyseliny
450 ml fermentačního prostředí s obsahem antibiotika A 47934 se upraví na pH 10,5 k extrakci antibiotika A 47934 z mycelia a roztok se zfiltruje. Filtrát s obsahem antibiotika A 47934 se rozdělí na podíly po 200 ml a každý z těchto podílů se upraví na pH 2,5 přidáním 5N vodného roztoku kyseliny chlorovodíkové k dobrému vysrážení. Sraženina se oddělí odstředěním, promyje se vodou a znovu se oddělí odstředěním. Sraženina se uvede v suspenzi ve vodě a lyofilizuje, čímž se z jednoho podílu získá 186 mg ve vodě nerozpustného surového antibiotika A 47934 o čistotě 20 %.
Sraženina z dalšího podílu se uvede v suspenzi v 50 ml vody, .suspenze se upraví na pH 7,5 přidáním 5N vodného . roztoku hydroxidu sodného a lyofilizuje se, tímto způsobem se získá 226 mg ve vodě rozpustného surového antibiotika A 47934 o čistotě 20 %.
Takto získané podíly surového antibiotika A 47934 je možno dále čistit známými způsoby, například použitím ' pryskyřice Diaion HP-20 a použitím vysokotlaké kapalinové chromatografie v reverzní fázi.
Příklad 4
Čištění antibiotika A 47934 chromatografií při použití reverzní fáze až 40 g antibiotika A 47934 v surovém stavu se rozpustí ve 350 ml směsi vody a acetonitrilu v poměru 12 : 8 při pH 8 a roztok se nanese do jednotky Chromatospac 100 [Instruments SA, lne., Metuchen, N. J.) s obsahem 4 .litrů pryskyřice v reverzní fázi (Whatman Silica gel LP-l/Cie) v rovnovážném stavu ve směsi vody a acetonitrilu v poměru 86 : 14 s . obsahem 2 g octanu amonného. v 1 litru. Sloupec se vyvíjí tímtéž rozpouštědlem po nanesení vzorku a odebírají se frakce po 400 ml, eluce se sleduje při 254 nm. Každá frakce se analyzuje analytickou vysokotlakou kapalinovou chromatografií na sloupci o rozměrech 0,25 X
X 25 . cm s náplní pryskyřice (Zorbax ODS) při použití směsi vody a acetonitrilu v poměru 82 :18 s obsahem 2 g octanu amonného. v 1 litru, eluát se sleduje při 225 nm a frakce, které obsahují pouze antibiotikum A 47934 se slijí, jde například .o frakce 32 až 60) 37 až 75 a 51 až 76 y případech různých vzorků surového antibiotika A 47934 a směs frakcí se zahustí přibližně na .objem litru.
Koncentráty z 8 surových vzorků se slijí, celkový objem je tedy přibližně 8 litrů, a tento vzorek se nanese na sloupec .s obsahem 2 litrů pryskyřice Diaon HP-20 ve vodě k odstranění octanu amonného z koncentrátu. Pak se sloupec promyje 6 litry vody a vymývá postupně 4 litry .směsi vody a methanolu v poměru 4:1a 6 litry směsi vody a -methanolu v poměru 1 :1. 20% methanolový eluát se zahustí na .objem 400 ml a lyofilizuje se, čímž se získá 14,82 g vysoce čistého antibiotika A 47934. 50% methanolový eluát se zahustí na objem 1 litr a lyofilizuje, čímž ise získá 55,6 g vysoce čistého antibiotika A 47934. Tímto* způsobem se antibiotikum získá v celkovém výtěžku 81 %.
P ř í k 1 a . d 5
Krystalizace antibiotika A 47934 g vysoce čistého antibiotika A 47934 se rozpustí v 50 mil směsi acetonitrilu a vody v poměru 60 : 40 a palk se dále přidává acetonitril až do. vzniku zákalu. Směs se nechá stát 16 hodin při teplotě místnosti, načež se tmavě zbarvený lepkavý vyloučený materiál oddělí a k roztoku se znovu přidá acetonitril až do vzniku zákalu.
Krystaly, které se vytvoří dalším stáním, při teplotě místnosti se Oddělí filtrací, promyjí se acetonitrilem a usuší. Získá se 750 miligramů krystalů, které se nechají překrystalovat tak, že se rozpustí v 50 ml směsi acetonitrilu a vody v poměru 60 : 40 a pak se za míchání přidá ještě 300 ml acetonitrilu. Krystaly se odfiltrují, promyjí acetonitrilem a usuší ve vakuu. Usušené krystaly váží 550 mg, dalším sušením při 100 °C ve vakuu dojde ještě ke ztrátě 11 % vzhledem k rozkladu těkavých solvátů.
Příklad 6
Příprava monosodné soli antibiotika A 47934
K 16 ml vodného roztoku 140 mg (0,1 mol) antibiotika A 47934 o pH 4,8 se přidá 0,4 ml hydroxidu sodného v koncentraci 10 mg/ml (0,1 mol). Výsledný roztok má pH 7,2. Tento roztok se lyofilizuje, čímž se získá 153 mg monosodné soli antibiotika A . 47934 (Na = 2,4 %).
Příklad 7
Příprava disodné soli antibiotika A 47934
0,8 ml hydroxidu sodného o koncentraci 10 mg/ml ve vodě (0,2 mol) se přidají k 16 .mi vodného roztoku 130 mg (0,1 mol) antibiotika A 47934 o pH 4,8 za stálého· ’ mícháni. Výsledné pH je 8,1. Roztok se lyofili zuje, čímž ,se získá 156 mg disodné soli antibiotika A 47934 (Na — 3,6%).
Příklad 8
Příprava -monodraselné soli antibiotika A 47934
0,56 ml (0,1 mol) roztoku hydroxidu draselného o koncentraci 10 mg/ml se přidá za míchání k 16 ml vodného roztoku 130 mg (0,1 molu) antibiotika A 47934 o pH 4,8. Výsledné pH je 7,1. Roztok se lyofilizuje, čímž se získá 154 mg monodraselné soli antibiotika A 47934 (K = 2,14%).
J.W.XÍ:,,
Příklad 9
Příprava didraselné soli antibiotika A 47934
1,12 ml (0,1 mol) roztoku hydroxidu -draselného o koncentraci 10- mg/ml se přidá za míchání k 16 ml vodného roztoku 130 mg (0,1 mol) antibiotika A 47934 -o pH 4,8. Výsledné -pH je 7,95. Roztok se lyofilizuje, čímž se získá 158 - mg didraselné soli antibiotika A 47934 (K = 3,94·%).
Příklad 10 ridu barnatého se přidají ke 4 ml vodného roztoku, který -obsahuje 100 mg -antibiotika A 47934 k vysrážení barnaté soli antibiotika A 47934. Získaná sraženina se oddělí odstředěním, dvakrát -se promyje vždy 5 ml vody a pokaždé - se znovu odstředí. Získaná sraženina se znovu uvede v suspenzi v 10 ml vody a pak se lyofilizuje, čímž se 76 mg ve vodě nerozpustné barnaté soli.
Příklad 11
Příprava vápenaté - soli antibiotika A 47934 ml nasyceného vodného roztoku chloridu vápenatého se za stálého míchání přidá ke 4 -ml vodného roztoku, který - obsahuje 100 mg antibiotika A 47934, čímž vznikne sraženina vápenaté soli antibiotika A 47934. Získaná sraženina se dvakrát promyje vždy 5 ml vody a pokaždé se odstředí, načež se promytá sraženina uvede v -suspenzi v- 10 mililitrech vody a pak se lyofilizuje. Tímto způsobem se získá - vápenatá sůl antibiotika A 47934 ve výtěžku 87 mg.

Claims (2)

2 ml nasyceného vodného roztoku chloPŘEDMĚT VYNALEZU
1. Způsob výroby antibiotika A 47934 vzorce jakož i solí, přijatelných z farmaceutického hlediska, vyznačující se tím, že se pěstuje při teplotě 15 až 40 °C, při pH 6,4 až 7,0 po dobu 1,5 až 10 -dnů kmen Streptomyces toyocaensis NRRL 15009 v živném prostředí s obsahem využitelných -zdrojů uhlíku, dusíku a anorganických solí v submerzní kultuře za aerobních podmínek, -načež se po235045 případě antibiotikum ze živného prostředí 3. Způsob podle bodu 1 nebo 2, vyznačuizoluje. jící se tím, že <se pěstuje Streptomyces toyo-
2. Způsob podle bodu 1, vyznačující se caensis NRRL 15009.
tím, že se antibiotikum A 47934 z živného prostředí izoluje.
CS834990A 1982-07-30 1983-07-01 Method of antibiotic a47934 production CS235045B2 (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US06/403,842 US4462942A (en) 1982-07-30 1982-07-30 A47934 Antibiotic and process for production thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CS235045B2 true CS235045B2 (en) 1985-04-16

Family

ID=23597185

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS834990A CS235045B2 (en) 1982-07-30 1983-07-01 Method of antibiotic a47934 production

Country Status (23)

Country Link
US (1) US4462942A (cs)
EP (1) EP0100605B1 (cs)
JP (1) JPS5929621A (cs)
KR (1) KR860001231B1 (cs)
AR (1) AR231842A1 (cs)
AT (1) ATE22802T1 (cs)
AU (1) AU557782B2 (cs)
CA (1) CA1202261A (cs)
CS (1) CS235045B2 (cs)
DD (1) DD210072A5 (cs)
DE (1) DE3366836D1 (cs)
DK (1) DK310683A (cs)
ES (1) ES8504250A1 (cs)
FI (1) FI832429L (cs)
GB (1) GB2124620B (cs)
GR (1) GR77578B (cs)
HU (1) HU192162B (cs)
IL (1) IL69142A0 (cs)
NZ (1) NZ204800A (cs)
PL (1) PL242777A1 (cs)
PT (1) PT77007B (cs)
RO (1) RO86844B (cs)
ZA (1) ZA834938B (cs)

Families Citing this family (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4537879A (en) * 1982-07-30 1985-08-27 Eli Lilly And Company A47934 Antibiotic and process for production thereof
AU579120B2 (en) * 1983-12-16 1988-11-17 Gruppo Lepetit S.P.A. Chemical process for preparing antibiotic L 17392 (deglucoteicoplanin) and its salts
GB8415092D0 (en) * 1984-06-13 1984-07-18 Lepetit Spa Ester derivatives
GB8415093D0 (en) * 1984-06-13 1984-07-18 Lepetit Spa Antibiotic l 17392
IL78597A0 (en) * 1985-04-25 1986-08-31 Lilly Co Eli Novel glycopeptide derivatives
GB8608798D0 (en) * 1986-04-11 1986-05-14 Lepetit Spa Recovery of glycopeptide antibiotics from aqueous solutions
US4742045A (en) * 1986-07-30 1988-05-03 Smithkline Beckman Corporation Glycopeptide antibiotics
US4880735A (en) * 1986-09-24 1989-11-14 Eli Lilly And Company Process for producing antibiotic A47934
GB8624806D0 (en) * 1986-10-16 1986-11-19 Pfizer Ltd Glycopeptide antibiotic
US4845194A (en) * 1987-02-27 1989-07-04 Eli Lilly And Company Glycopeptide recovery process
PT90176B (pt) * 1988-03-30 1994-06-30 Rowe James Baber Processo para a preparacao de um agente de tratamento de gado equideo
US7570028B2 (en) * 2007-04-26 2009-08-04 Advanced Energy Industries, Inc. Method and apparatus for modifying interactions between an electrical generator and a nonlinear load
US8716984B2 (en) 2009-06-29 2014-05-06 Advanced Energy Industries, Inc. Method and apparatus for modifying the sensitivity of an electrical generator to a nonlinear load
WO2014150338A1 (en) * 2013-03-15 2014-09-25 Genzyme Corporation Amine functional polyamides
FR3013436B1 (fr) * 2013-11-18 2018-12-07 Valeo Systemes Thermiques Collecteur pour echangeur de chaleur
PL410247A1 (pl) * 2014-11-25 2016-06-06 Jamroży Marek Bio-Koncept Sposób sanityzacji otoczenia mikrobiologicznego

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB765886A (en) * 1953-08-11 1957-01-16 Abbott Lab A new antibiotic ristocetin and a method of producing same
US3067099A (en) * 1955-09-16 1962-12-04 Lilly Co Eli Vancomycin and method for its preparation
US3338786A (en) * 1966-07-29 1967-08-29 American Cyanamid Co Antibiotic av290 and production thereof
US3952095A (en) * 1972-06-02 1976-04-20 Eli Lilly And Company Novel antibiotic and a process for the production thereof
JPS5831196B2 (ja) * 1975-10-29 1983-07-04 明治製菓株式会社 Ｓｆ−１７７１ ブツシツノ セイゾウホウ
US4322406A (en) * 1980-12-18 1982-03-30 Eli Lilly And Company Antibiotic A-4696 factors B1, B2, B3, C1a, C3 and E1
US4322343A (en) * 1980-12-18 1982-03-30 Eli Lilly And Company Pseudo-aglycone of actaplanin

Also Published As

Publication number Publication date
ES523761A0 (es) 1985-04-16
JPH0443079B2 (cs) 1992-07-15
DE3366836D1 (en) 1986-11-20
EP0100605A1 (en) 1984-02-15
GB2124620A (en) 1984-02-22
AR231842A1 (es) 1985-03-29
EP0100605B1 (en) 1986-10-15
PL242777A1 (en) 1984-08-13
KR840005483A (ko) 1984-11-14
KR860001231B1 (ko) 1986-08-30
DD210072A5 (de) 1984-05-30
NZ204800A (en) 1987-02-20
ATE22802T1 (de) 1986-11-15
AU557782B2 (en) 1987-01-08
RO86844B (ro) 1985-05-31
GB2124620B (en) 1985-11-27
JPS5929621A (ja) 1984-02-16
DK310683A (da) 1984-01-31
ZA834938B (en) 1984-03-28
IL69142A0 (en) 1983-11-30
GR77578B (cs) 1984-09-24
US4462942A (en) 1984-07-31
PT77007B (en) 1986-04-11
GB8318056D0 (en) 1983-08-03
DK310683D0 (da) 1983-07-05
FI832429L (fi) 1984-01-31
AU1649383A (en) 1984-02-02
RO86844A (ro) 1985-05-20
FI832429A0 (fi) 1983-07-01
HU192162B (en) 1987-05-28
ES8504250A1 (es) 1985-04-16
PT77007A (en) 1983-08-01
CA1202261A (en) 1986-03-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CS235045B2 (en) Method of antibiotic a47934 production
CA1238316A (en) Aglycone and pseudo-aglycones of the aad 216 antibiotics
JP2603047B2 (ja) 抗生物質ａａｄ２１６複合体を生産するキブデロスポランジウム・アリダム株
KR860001048B1 (ko) A41030 항생물질의 제조방법
US4430328A (en) Ruminant lactation improvement
US4537879A (en) A47934 Antibiotic and process for production thereof
US4659660A (en) A47934 antibiotic and process for production thereof
US4670260A (en) Antibiotic for animal feeds
EP0063491B1 (en) Ruminant lactation improvement
US4713331A (en) Microbial production of A41030 antibiotics
US4672036A (en) Pure cultures of Kibdelsporangium aridum Shearer gen. nov., sp. nov. ATCC 39323 and mutants thereof
KR950013454B1 (ko) 동물 성장 촉진제
SE461101B (sv) Anvaendning av stammar fraan gruppen bacillus foer utvinning av sackarasinhibitorer samt saett att framstaella sackarasinhibitorer
US4237120A (en) Antibacterial agent BM123-gamma, pharmaceutically acceptable salts, complexes and alkylated derivatives as animal food additives
CS226162B2 (en) Method of producing antibiotics
US4797280A (en) Antibiotics produced by Kibdelosporangium aridum Shearer gen. nov., sp. nov. ATCC 39323
JPH01240196A (ja) 新規グリコペプチド系抗生物質ｐａ−４５０５２
CS209848B2 (cs) Způsob přípravy polyetberických antibiotik A-28086
CS203115B2 (en) Process for preparing antibiotic
JPS58107141A (ja) 家畜の発育促進・飼料効率改善剤
CS227691B2 (cs) Krmivo pro hospodářská zvířata, zvláště přežvýkavce