JPS5925332A - 抗腫瘍性糖蛋白質の製法 - Google Patents
抗腫瘍性糖蛋白質の製法Info
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- JPS5925332A JPS5925332A JP57135852A JP13585282A JPS5925332A JP S5925332 A JPS5925332 A JP S5925332A JP 57135852 A JP57135852 A JP 57135852A JP 13585282 A JP13585282 A JP 13585282A JP S5925332 A JPS5925332 A JP S5925332A
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- glycoproteins
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- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
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- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
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- A—HUMAN NECESSITIES
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- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/91—Cell lines ; Processes using cell lines
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、抗腫瘍性糖蛋白質の製法に関し、ざらに詳し
くは、分子量１ス０００を超える抗腫瘍性糖蛋白質を還
元剤で減成処理し、ついで処理液Ｅ−ら、分子ｊｆ４０
，０００〜５０，０００の抗＋ｂｆｆ ＞６性糖蛋白質
、分子量１２，０００〜１７，０００の抗腫瘍性糖蛋白
質−または／および分子量７．０００〜９．０００の抗
；１１「温性糖蛋白質を取得することを特徴と１゛る分
子量４０，０００〜５０，０００の抗肺傷性糖イ１１白
質、分子量１２，０００〜１７，０００の抗腫瘍性糖？
１す白り（゛またば／および分子量７，０００〜９．（
１００の抗腫瘍ｆ′ｌ ｑ〕、’＋１蛋白質の製法に関
する。
くは、分子量１ス０００を超える抗腫瘍性糖蛋白質を還
元剤で減成処理し、ついで処理液Ｅ−ら、分子ｊｆ４０
，０００〜５０，０００の抗＋ｂｆｆ ＞６性糖蛋白質
、分子量１２，０００〜１７，０００の抗腫瘍性糖蛋白
質−または／および分子量７．０００〜９．０００の抗
；１１「温性糖蛋白質を取得することを特徴と１゛る分
子量４０，０００〜５０，０００の抗肺傷性糖イ１１白
質、分子量１２，０００〜１７，０００の抗腫瘍性糖？
１す白り（゛またば／および分子量７，０００〜９．（
１００の抗腫瘍ｆ′ｌ ｑ〕、’＋１蛋白質の製法に関
する。
こｉｔまで、阻昇各国の多数の研究者により多くの’：
ｍ 易治療剤が発表されて来たにもかかわらず、現在な
お腫ｊ烏の治療剤による治癒率は極めて低く、さらなる
治療剤の開発が熱望されている。
ｍ 易治療剤が発表されて来たにもかかわらず、現在な
お腫ｊ烏の治療剤による治癒率は極めて低く、さらなる
治療剤の開発が熱望されている。
本発明者らｔ−１、生体防禦機能に型費な役割を果して
いる１ｌｆＩ内系細胞がＩｋＪｆ １Ｊ７Ｊ ｋ治療し
うる物質全生産しているＯＴ能性があると考え、多年に
わたり４１１［兇を、暁けて来た結果、温血励動の網内
系細胞、リンパ芽球、白血病細胞もしくは線維閉側ＩＩ
Ｉｌｌの抽出液または培養上清より新規な抗腫瘍性糖
蛋白ＩＪ！、を見出し、腫瘍破壊物質ｘ＋Ｘｌ＋ｘ２お
よびＸ３と命名し／こ（日本特許出ｊ娘５７−０２８９
９２゜５７−（１２８Ｑ９３ 、他は日本ｌ侍許出Ａｌ
Ｏ′（中）。
いる１ｌｆＩ内系細胞がＩｋＪｆ １Ｊ７Ｊ ｋ治療し
うる物質全生産しているＯＴ能性があると考え、多年に
わたり４１１［兇を、暁けて来た結果、温血励動の網内
系細胞、リンパ芽球、白血病細胞もしくは線維閉側ＩＩ
Ｉｌｌの抽出液または培養上清より新規な抗腫瘍性糖
蛋白ＩＪ！、を見出し、腫瘍破壊物質ｘ＋Ｘｌ＋ｘ２お
よびＸ３と命名し／こ（日本特許出ｊ娘５７−０２８９
９２゜５７−（１２８Ｑ９３ 、他は日本ｌ侍許出Ａｌ
Ｏ′（中）。
これらの腫瘍破壊物質は、それぞれ、ＣＢｘ。
ＣＢ ＸＩ 、 Ｃ１１ｘ２およびＣ）Ｅｌｘ３と略称
され、以下に、それらの性質全順次示す。
され、以下に、それらの性質全順次示す。
ＣＢｘは仄の性質金有する糖蛋白質である。
■ 分子量ｉ １２，０００〜１７，０００■ 呈色反
応；ローリ−反応により蛋白質の呈色ケ示し、塩酸加水
分解後のニンヒドリン反応にお−てペプチド結合および
アミノ酸の呈色を示し、フェノール硫酸反応、アンスロ
ン硫酸反応、インドール硫酸反応、トリプトファン硫酸
反応により糖類の呈色金示す、 ■ 性状・溶解性；白色粉末であり、水、塩化ナトリウ
ム水溶液およびリン酸緩衝液に可溶であり、ベンゼン、
ヘキサンおよびクロロポルムにほとんど溶けな−、 ■ 糖含有量が２７〜３３％であり、その組成が、ヘキ
ソース１７〜２０４、ヘキソサミン５〜７％、シアル酸
５〜６％である、 ■ 等電点；４，２〜７．３ （６） ウレツクス ヨーロベウス アグルチニン（
Ｕｌｅｘ ｅｕｒＯｐｅｕ８ ａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ
）結なセファデックスケ用いｔ分画操作において、１１
、 ＯＩ Ｍリン酸緩衝液（ｐＩＩ ７．２ ）中で吸
着性でｐ）る、 ■ ｐＩＩ２．０、ｐｉｆ ７．０もしくは Ｉ）ＨＩ
Ｌ、０の水溶液中、４℃におりで２４時間以上安定で
あり、また、１ｌＨ７，（＋の水溶液中、（ｉ ０ ℃
において３時間以上安定である、 鳴）正常館！１１廁には実質的に障害？与えず、腫傷細
胞に選択的に障害を与える、 ■ ｌ１ｌｌｉ瘍細胞の分化誘導作用を有する。
応；ローリ−反応により蛋白質の呈色ケ示し、塩酸加水
分解後のニンヒドリン反応にお−てペプチド結合および
アミノ酸の呈色を示し、フェノール硫酸反応、アンスロ
ン硫酸反応、インドール硫酸反応、トリプトファン硫酸
反応により糖類の呈色金示す、 ■ 性状・溶解性；白色粉末であり、水、塩化ナトリウ
ム水溶液およびリン酸緩衝液に可溶であり、ベンゼン、
ヘキサンおよびクロロポルムにほとんど溶けな−、 ■ 糖含有量が２７〜３３％であり、その組成が、ヘキ
ソース１７〜２０４、ヘキソサミン５〜７％、シアル酸
５〜６％である、 ■ 等電点；４，２〜７．３ （６） ウレツクス ヨーロベウス アグルチニン（
Ｕｌｅｘ ｅｕｒＯｐｅｕ８ ａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ
）結なセファデックスケ用いｔ分画操作において、１１
、 ＯＩ Ｍリン酸緩衝液（ｐＩＩ ７．２ ）中で吸
着性でｐ）る、 ■ ｐＩＩ２．０、ｐｉｆ ７．０もしくは Ｉ）ＨＩ
Ｌ、０の水溶液中、４℃におりで２４時間以上安定で
あり、また、１ｌＨ７，（＋の水溶液中、（ｉ ０ ℃
において３時間以上安定である、 鳴）正常館！１１廁には実質的に障害？与えず、腫傷細
胞に選択的に障害を与える、 ■ ｌ１ｌｌｉ瘍細胞の分化誘導作用を有する。
ＣＢＸｔは次の性質を有する糖蛋白質である・■ 分子
量；７０，００（１〜９０，０００（リ 呈色反応；ロ
ーリ−反応により蛋白質の呈色全示し、ｊ盆酵加水分解
（支）のニンヒドリン反応におりでペプチド結合および
アミノ酸の呈色を示し、フェノール硫酸反応、アンスロ
ン硫１役反応、インドキール硫Ｃ反反応、トリフトノ１
７硫酸反厄により糖類の呈色才１１・ ｆ−０ ■ 性状・？ｆｖｆＩｊＩｆ性；白色粉末であり、水、
塩化ナトＩＪウム水溶液およびリン酸緩衝液に可溶であ
り、ベンゼン、ヘキサンおよびクロロホルムにほとんど
溶けない。
量；７０，００（１〜９０，０００（リ 呈色反応；ロ
ーリ−反応により蛋白質の呈色全示し、ｊ盆酵加水分解
（支）のニンヒドリン反応におりでペプチド結合および
アミノ酸の呈色を示し、フェノール硫酸反応、アンスロ
ン硫１役反応、インドキール硫Ｃ反反応、トリフトノ１
７硫酸反厄により糖類の呈色才１１・ ｆ−０ ■ 性状・？ｆｖｆＩｊＩｆ性；白色粉末であり、水、
塩化ナトＩＪウム水溶液およびリン酸緩衝液に可溶であ
り、ベンゼン、ヘキサンおよびクロロホルムにほとんど
溶けない。
＋４） 軸含佇繍が３５〜４５擺であり、その組成が
、ヘキソース２３〜２８憾、ヘキソサミン８〜１１％、
シアル酸４〜６％である。
、ヘキソース２３〜２８憾、ヘキソサミン８〜１１％、
シアル酸４〜６％である。
■ 等電点；４．３〜（８，２
■ ウレツクス・ヨーロベウス拳アグルチニン（Ｕｌｅ
ｘ ｅｕｒｏｐｅｕｓ ａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ ）結合
セファデックスケ用いた分画操作において、（１，Ｕ
Ｉ Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，２１中で吸着性である。
ｘ ｅｕｒｏｐｅｕｓ ａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ ）結合
セファデックスケ用いた分画操作において、（１，Ｕ
Ｉ Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，２１中で吸着性である。
■ ｌ１ｌ−Ｉ ２． Ｉ）、ｐ）（７，０もしくはｐ
ＩＬｉ ｉ、ｏの水溶液中、４℃において２４時間以上
安定であり、゛また、ｐＨ７，０の水溶液中、６０℃に
おいて３時曲以上安定である。
ＩＬｉ ｉ、ｏの水溶液中、４℃において２４時間以上
安定であり、゛また、ｐＨ７，０の水溶液中、６０℃に
おいて３時曲以上安定である。
■ 正常細胞には実質的に障害を与えず、肺腸ａｌ胞に
選択的に障害を力える。
選択的に障害を力える。
ＣＢｘｚは次の１″Ｕ：、ｌ！ｔ（ｉ″有する糖蛋白質
である。
である。
■ 分子ｒ、［； ４ （１，００Ｑ〜５０． ＯＯ０
（２）呈色反応； ｕ −ＩＪ−反応により蛋白質の呈
色を示し、塩酸加水分解後のニンヒドリン反応において
ペプチド結合およびアミノ酸の呈色を示し、フェノール
硫酸反応、アンスロン硫酸反応、インドール硫酸反応、
トリシトファン硫酸反応により糖類の呈色を示す。
（２）呈色反応； ｕ −ＩＪ−反応により蛋白質の呈
色を示し、塩酸加水分解後のニンヒドリン反応において
ペプチド結合およびアミノ酸の呈色を示し、フェノール
硫酸反応、アンスロン硫酸反応、インドール硫酸反応、
トリシトファン硫酸反応により糖類の呈色を示す。
（１）性状・溶解性；白色粉末であシ、水、塩化す）
＋７ウム水溶液およびリン酸緩衝液に可溶でｐｒす、ベ
ンゼン、ヘキサンおよびクロロホルムにほとんど溶＋−
ｔ 、’ｌ：い。
＋７ウム水溶液およびリン酸緩衝液に可溶でｐｒす、ベ
ンゼン、ヘキサンおよびクロロホルムにほとんど溶＋−
ｔ 、’ｌ：い。
（４）糖含■Ｊ汁が３０〜３７％であｊノ、その組成が
、ヘキソース２０〜２３％、ヘキソサミン６〜８係、シ
アル酸・１〜６噛である。
、ヘキソース２０〜２３％、ヘキソサミン６〜８係、シ
アル酸・１〜６噛である。
■ 等重点；４．２〜７．３
■ ウレソクス・ヨーロベウス・アグルチニン（Ｕｌｅ
ｘ ｅｕｒｏｐｅｕｓ ａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ ）結合
セファデックスを用いた分画■作において、０、 ＯＩ
Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，２）中で吸着性である。
ｘ ｅｕｒｏｐｅｕｓ ａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ ）結合
セファデックスを用いた分画■作において、０、 ＯＩ
Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，２）中で吸着性である。
■ ｐＨ２，０、ｐｌ（７，０もしくはｐＩ（１１，０
の水浴液中、４℃において２４時１；０以上安定であり
、ｉ ンｔ、 ｐＩ（７，０（７）水ｍ液中、６０℃に
おいて３時間以上安定である。
の水浴液中、４℃において２４時１；０以上安定であり
、ｉ ンｔ、 ｐＩ（７，０（７）水ｍ液中、６０℃に
おいて３時間以上安定である。
（ル 正常＋Ｒ田胞には実質的に障害を与えず、腫瘍細
胞に選択的に障害を与える。
胞に選択的に障害を与える。
ＣＢｘ３は次の性質を有する糖蛋白質である。
■ 分子量ｉ７．ｏｏｏ〜９．ｏｕ。
■ 呈色反応；ローリ−反応により蛋白質の呈色全示し
、塩酸加水分解後のニンヒドリン反応においてペプチド
結合およびアミノ酸の呈色を示し、フェノール硫酸反応
、アンスロン硫酸反応、インドール硫酸反応、トリシト
ファン硫酸反応により糖類の呈色を示す。
、塩酸加水分解後のニンヒドリン反応においてペプチド
結合およびアミノ酸の呈色を示し、フェノール硫酸反応
、アンスロン硫酸反応、インドール硫酸反応、トリシト
ファン硫酸反応により糖類の呈色を示す。
■ 性状・ｔａｍ性；白色粉末であり、水、塩化ナトリ
ウム水＜’ｄ ｉｌｋおよびリン酸緩衝液に可溶で多り
、ベンゼン、ヘキサンおよびクロロホルムにほとんどｒ
Ｂけない。
ウム水＜’ｄ ｉｌｋおよびリン酸緩衝液に可溶で多り
、ベンゼン、ヘキサンおよびクロロホルムにほとんどｒ
Ｂけない。
■ 帖含有ｉよが８〜１５鵠であり、その組成が、ヘキ
ソース６〜１０咄、ヘキソ′す゛ミノ１〜２鴻、シアル
戚１〜３保である。
ソース６〜１０咄、ヘキソ′す゛ミノ１〜２鴻、シアル
戚１〜３保である。
■ カルボキシメチルセルロースを用いたｆｌ、 ０５
Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ（ｉ、４ ）下におけるイオン
交１宛クロマトグラフィー（（おいて力ルポギシメチル
セルロースに吸１Ｍ性である。
Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ（ｉ、４ ）下におけるイオン
交１宛クロマトグラフィー（（おいて力ルポギシメチル
セルロースに吸１Ｍ性である。
■ ｐＨ２，（１、ｐＨ７，０もしくはｐｌ（１１，０
の水溶液中、４ＣＩ／て、−ｊで２４時１司以上安定で
あり、また、ｐ）１７．０の水溶液中、６０℃において
３時間！試上安定である。
の水溶液中、４ＣＩ／て、−ｊで２４時１司以上安定で
あり、また、ｐ）１７．０の水溶液中、６０℃において
３時間！試上安定である。
（ｖＥＩＥ常７１常用１川胞質的に障吾全与えず、腫瘍
側Ｊｌｉ：１に選択的に障害を与える。
側Ｊｌｉ：１に選択的に障害を与える。
５Ｂ、） 、：ｌＦ 白’、ぴｆのＮ末端（ＩＩＩの
アミノ彪配列が、アジごンーアラニンー、で」〕る。
アミノ彪配列が、アジごンーアラニンー、で」〕る。
これＩＩＩＩ’＋’ｔ’、 Ｉｌ・１桔ｆ１ユ、糖蛋白
質は、６１哉血り助動の第１４円系δ（１１１１１，Ｉ
Ｊンパ芽球、白血病細胞もしく１徒緑維芽利胞の拙出敢
または培養上清に混有きｔしていることから、より糾１
ｆｆｉの品い医薬品１プζは／および単一の１ｆ￥ｌＩ
瘍破壊物質全含有する医薬品の提供にμｍ１し−Ｃにし
、例えば、１ｔ−ｉＪ＋ｉ’［１度のＣＢｘあるいはＣ
Ｂｘ３の取得に当って、ＣＢＸ□やＣＢＸ２乞分１ζ［
Ｌ除去する操作金費し、しかも、この操作により取イ１
ｋ（ルも（ｊ、に少−］る。
質は、６１哉血り助動の第１４円系δ（１１１１１，Ｉ
Ｊンパ芽球、白血病細胞もしく１徒緑維芽利胞の拙出敢
または培養上清に混有きｔしていることから、より糾１
ｆｆｉの品い医薬品１プζは／および単一の１ｆ￥ｌＩ
瘍破壊物質全含有する医薬品の提供にμｍ１し−Ｃにし
、例えば、１ｔ−ｉＪ＋ｉ’［１度のＣＢｘあるいはＣ
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Ｌ除去する操作金費し、しかも、この操作により取イ１
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本ｇ ＩＩ）ｉ ”２うば、ＣＢｘ、ＣＢｘ２またｒよ
／およびＣＢＸ３の効率の良い鞘’ＪＱ取得方法につい
て鋭意研究した結果、温血！助′吻のに１４内系細ｊ泡
、リンパカニ球、白血病＋Ｔｊｌｌ胞もしくけ線維！Ｆ
細胞の抽出７戊−または培養土（ｒ’を中より；Ｉ！ｔ
られる抗１１１１ｆ搗性糖蛋白質、すなわち、！ｉ！ｉ
瘍破壊物ＪＸ（ｆ−還元剤により減成処理し、その処」
！ＩＩ液中より、分子−ｉ、１０，０００〜！５０，０
００の抗浦瘍性糖蛋白質、すｌわち、ＣＢＸ２゜分子１
−７１１２．０ （ｌ Ｏ〜１７，０００の、Ｄ’Ｃ肺
瘍性楯蛋白質、すなわら、ＣＢ ｘ−まｌこＱよ７分よ
び分子量７，０００〜’ｌ、 ０００の抗ｊ、ｑ］碕１
生糖蛋白質、すなわち、ＣＢｘ２を容易に、かつ、高収
率、尚純度で取得できることを児出し、不発明金完成し
１こ。
／およびＣＢＸ３の効率の良い鞘’ＪＱ取得方法につい
て鋭意研究した結果、温血！助′吻のに１４内系細ｊ泡
、リンパカニ球、白血病＋Ｔｊｌｌ胞もしくけ線維！Ｆ
細胞の抽出７戊−または培養土（ｒ’を中より；Ｉ！ｔ
られる抗１１１１ｆ搗性糖蛋白質、すなわち、！ｉ！ｉ
瘍破壊物ＪＸ（ｆ−還元剤により減成処理し、その処」
！ＩＩ液中より、分子−ｉ、１０，０００〜！５０，０
００の抗浦瘍性糖蛋白質、すｌわち、ＣＢＸ２゜分子１
−７１１２．０ （ｌ Ｏ〜１７，０００の、Ｄ’Ｃ肺
瘍性楯蛋白質、すなわら、ＣＢ ｘ−まｌこＱよ７分よ
び分子量７，０００〜’ｌ、 ０００の抗ｊ、ｑ］碕１
生糖蛋白質、すなわち、ＣＢｘ２を容易に、かつ、高収
率、尚純度で取得できることを児出し、不発明金完成し
１こ。
不発明の製；人における原料としては、ＣＢＸ□あるい
はＣＢ ｘ２が好適であるが、ＣＢｘ３の取得に尚って
ｔまＣＢｘもイ史月］さノする。また、これらのり、１
１０１、−５ ｉｔらの１つｉノるいｖ、ｊ仮数を溶解
せしめた緩’ｈＯｆ ７ａ 、４１＝ ノｌＪ２共」温
水、水などの俗７夜としＣ１あるいは、温血！ＪＪＪ物
の網円糸Ｍｌｌ胞、リンパ芽球、白Ｉ１１］病ｄ’［］
胞もしくケ」Ｌ」）刑しカーＡ′用胞の抽出液ま／Ｃは
培′ｌ’ｙ、：Ｊニン１“ｊ′と［、ても惧しうる。
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せしめた緩’ｈＯｆ ７ａ 、４１＝ ノｌＪ２共」温
水、水などの俗７夜としＣ１あるいは、温血！ＪＪＪ物
の網円糸Ｍｌｌ胞、リンパ芽球、白Ｉ１１］病ｄ’［］
胞もしくケ」Ｌ」）刑しカーＡ′用胞の抽出液ま／Ｃは
培′ｌ’ｙ、：Ｊニン１“ｊ′と［、ても惧しうる。
不嶺明に便用σれる逼元剤には、チオール糸１１′、Ｑ
！、勿としで２−メルカプトエタノール、ジチオ１・
レイトール、ジチオエリスリトール、チオグリコールｎ
ｈるいはモノチオリン酸などがあり、金属水漿殆化む物
として水系化ホウ素ナトリウムなとがあり、第３級フォ
スフイン類としてトリーｎ−ブチルフォスフイン、トリ
スジェチルアく゛ノエチルフォスフィンなどかあり、亜
硫敗埴とし、゛Ｃ亜硫酸ナトリウムなどがあり、青１宜
塩とし−Ｃブロムンアンなどがあり、金属イオンとして
銀・イオンなどか言−まｒする。これらの還うシ）′１
１ｊ＆シ、辿ん′、蛋白性菌分子不純物の分１ｔｉｒ−
除去の［ｊ的１りるいｉＬ蛋白員の市次構造倭破壊して
その基本蛋１臼賀と分析する目的で欧州ａれている。
！、勿としで２−メルカプトエタノール、ジチオ１・
レイトール、ジチオエリスリトール、チオグリコールｎ
ｈるいはモノチオリン酸などがあり、金属水漿殆化む物
として水系化ホウ素ナトリウムなとがあり、第３級フォ
スフイン類としてトリーｎ−ブチルフォスフイン、トリ
スジェチルアく゛ノエチルフォスフィンなどかあり、亜
硫敗埴とし、゛Ｃ亜硫酸ナトリウムなどがあり、青１宜
塩とし−Ｃブロムンアンなどがあり、金属イオンとして
銀・イオンなどか言−まｒする。これらの還うシ）′１
１ｊ＆シ、辿ん′、蛋白性菌分子不純物の分１ｔｉｒ−
除去の［ｊ的１りるいｉＬ蛋白員の市次構造倭破壊して
その基本蛋１臼賀と分析する目的で欧州ａれている。
しかるに、不発明においてこｉｔらの還元剤企減成処理
の目的に使用ターることにより、ＣＢＸ２゜ＣＢｘある
いはＣＢＸ３そのものを取得し１Ｕたことは、こ）ｔら
貞亘なる抛蛋白買の取イは法として好適である。な」？
、＋：発明で用いろノＬる減成処理とは、例えば、ジス
ルフィド結合などの分子内結付を化”ｊ ｌｊｊに切、
Ｉノミ−ｒることンこより分子洟と減する処理のことで
ある。
の目的に使用ターることにより、ＣＢＸ２゜ＣＢｘある
いはＣＢＸ３そのものを取得し１Ｕたことは、こ）ｔら
貞亘なる抛蛋白買の取イは法として好適である。な」？
、＋：発明で用いろノＬる減成処理とは、例えば、ジス
ルフィド結合などの分子内結付を化”ｊ ｌｊｊに切、
Ｉノミ−ｒることンこより分子洟と減する処理のことで
ある。
本発明を′こ用いる還元１１すの１ム処」呈温匪、処理
時間、処理ｐＨなどの減成処理の条件は、ＣＢＸ ２７
こ）ｊ：ｃＢｘｚのいず７′Ｌか一万凌）るいは両方を
同時に取イ「Ｊ−るなどの目的に応じ、適宜、自由に選
択できるが、好址しくは、２−メルカプトエタノール：
１０〜１０’Ｍ、ジナオトレイトール：工０〜１０ Ｍ
１ジチオエリスＩＪ ）−ル：１０ 〜１０ Ｍ、
モノチオリン酸：ＩＯ〜１（ｌ Ｍ、水素化ホウ
素ナトリウム＝１ ：１０ 〜ＬＵ ＩＶＬ、チオグリコールＬ戊＝１０
〜１０ Ｍである。
時間、処理ｐＨなどの減成処理の条件は、ＣＢＸ ２７
こ）ｊ：ｃＢｘｚのいず７′Ｌか一万凌）るいは両方を
同時に取イ「Ｊ−るなどの目的に応じ、適宜、自由に選
択できるが、好址しくは、２−メルカプトエタノール：
１０〜１０’Ｍ、ジナオトレイトール：工０〜１０ Ｍ
１ジチオエリスＩＪ ）−ル：１０ 〜１０ Ｍ、
モノチオリン酸：ＩＯ〜１（ｌ Ｍ、水素化ホウ
素ナトリウム＝１ ：１０ 〜ＬＵ ＩＶＬ、チオグリコールＬ戊＝１０
〜１０ Ｍである。
番へ不発明の実施に緑しては、処理液中に、例えば、イ
オン性界面１１性？＋ＩＪであるドデシル疏版ナトリウ
ム（ＳＬＩＳ）、非イオン訣界面活性ノ１すであるトリ
トン 率が＋’＋ｊｉ −２ ’）好」である。不ノらす」で
用りる界面活性剤の至適な工延度腿囲は、不発明の減成
処理に用いる原４Ｆに工゛りて異なるが、ｌＪ．００１
俤〜１。
オン性界面１１性？＋ＩＪであるドデシル疏版ナトリウ
ム（ＳＬＩＳ）、非イオン訣界面活性ノ１すであるトリ
トン 率が＋’＋ｊｉ −２ ’）好」である。不ノらす」で
用りる界面活性剤の至適な工延度腿囲は、不発明の減成
処理に用いる原４Ｆに工゛りて異なるが、ｌＪ．００１
俤〜１。
係が至捌ご瞠）乙。・ｆオン性界面活注／１！Ｉ ６で
は陰イオンｌａＥ ｉノ，）もの、ＩＷイオン性のもの
、両１生イオン性のもりが・らる。陰イオン性のものと
してＳｌ）Ｓ。
は陰イオンｌａＥ ｉノ，）もの、ＩＷイオン性のもの
、両１生イオン性のもりが・らる。陰イオン性のものと
してＳｌ）Ｓ。
コールｊ５すＡａ ；：ｔどがりり、陽イオン住のもの
としてドデシルトリメナルアンモニウムプロミドなどが
必−リ、両性イオン性のものとしてｆオキ／リノレンチ
ンなどがある。非イオン性のものとしてトリトン、ツウ
イン系、スパン、にのものがある。
としてドデシルトリメナルアンモニウムプロミドなどが
必−リ、両性イオン性のものとしてｆオキ／リノレンチ
ンなどがある。非イオン性のものとしてトリトン、ツウ
イン系、スパン、にのものがある。
以下に不発明の実施Ｈ＆こついて述べる。
央／ｌｉ！Ｉし°すＪ
必らかじ々’ ）ｌ，ｉ Ｊｕ分取したＣＢｘｌ （分
子Ｊ辻７１Ｊ，（ＨＪＩＪ〜すｏ，υす０）２（Ｊｏ，
０００単位を５ＸＩＯ’１４２−メルカグトエタノール
６５％加下に１時間、室温で減成処理後、透析１−、硫
安塩析した両分をセファデックスＧ−５０’ｉ用いてゲ
ル濾過した。
子Ｊ辻７１Ｊ，（ＨＪＩＪ〜すｏ，υす０）２（Ｊｏ，
０００単位を５ＸＩＯ’１４２−メルカグトエタノール
６５％加下に１時間、室温で減成処理後、透析１−、硫
安塩析した両分をセファデックスＧ−５０’ｉ用いてゲ
ル濾過した。
また、２−メルカプトエタノール処理と同１１３に００
：５％ＳＤＳ処理を行ない前記の操作ケ行なった。その
粕来得られるＣＢＸ２（分子ｉ４０．０Ｏｆ）〜５０，
０１）Ｕ）、ＣＢＸ （分子Ｊｔｔ１２，０００ 〜１
７，０００）およびＣＢＸ３（分子Ｑ ７，０ ０ ０
〜９．０ ０ ０ １ Ｍｃ ｋ Ｎ１１表に示す。な
お、ＣＢｘｌ．、 ＣＢＸ２、ＣＢｘおよびＣＢｘ３活
性鍍は、 １０５ １固のＫ Ｂ ボ！１ｊ泡のｊ曽Ｍ
を５０傷抑ｉｔｉｌＪする調度？１単位として表わした
。
：５％ＳＤＳ処理を行ない前記の操作ケ行なった。その
粕来得られるＣＢＸ２（分子ｉ４０．０Ｏｆ）〜５０，
０１）Ｕ）、ＣＢＸ （分子Ｊｔｔ１２，０００ 〜１
７，０００）およびＣＢＸ３（分子Ｑ ７，０ ０ ０
〜９．０ ０ ０ １ Ｍｃ ｋ Ｎ１１表に示す。な
お、ＣＢｘｌ．、 ＣＢＸ２、ＣＢｘおよびＣＢｘ３活
性鍍は、 １０５ １固のＫ Ｂ ボ！１ｊ泡のｊ曽Ｍ
を５０傷抑ｉｔｉｌＪする調度？１単位として表わした
。
第 １ 表
実用例２
あらかじめ精製分取したＣＢＸ２ ’ （分子ふ１４
０、０ ０ ０〜５ ０，０ ０ ０ ） ２００，０
００単位を５Ｘ１０’Ｍ２−メルカプトエタノール添加
下に１時間、室温で減成処理後、透析し、硫安塩析した
両分をセファデックスＧ−５０’Ｔｈ用いてゲル濾過し
た。
０、０ ０ ０〜５ ０，０ ０ ０ ） ２００，０
００単位を５Ｘ１０’Ｍ２−メルカプトエタノール添加
下に１時間、室温で減成処理後、透析し、硫安塩析した
両分をセファデックスＧ−５０’Ｔｈ用いてゲル濾過し
た。
′また、２−メルカプトエタノール処理と同時に０．０
５％ＳＤＳ処理全行なｈ前記の操作１テなつｆ？、、。
５％ＳＤＳ処理全行なｈ前記の操作１テなつｆ？、、。
その結床イ！Ｊ Ｉｚ 、１１．る＝Ｃ，Ｂ−ｘ−２
＝（才子−１１円刊下二ヶ！１．＝（＋−ｏ−０−１−
； ｃ Ｂｘ （分子針ｘｚｏｏｏ 〜１７，０（Ｉ
ｃＩ）およびＣＢｘ３（分子＊ ７，０００〜９，００
０ ） ＝＊ｚ２表に示す。
＝（才子−１１円刊下二ヶ！１．＝（＋−ｏ−０−１−
； ｃ Ｂｘ （分子針ｘｚｏｏｏ 〜１７，０（Ｉ
ｃＩ）およびＣＢｘ３（分子＊ ７，０００〜９，００
０ ） ＝＊ｚ２表に示す。
実施例３
、ららかじめ精製分取したＣＢｘ（分子足１２．ＤＯ（
１〜 １７，１１００ ）２００，０００ 単１立を
５Ｘ１０ Ｍ２−メルカプトエタノール添加
下に１時１ｉｊｌ 、室温で減成処ｙ１！後、透析（−
１硫安塩析（−だ画分をセファデックスＧ−５０を用い
てゲル０＝過した。また、２−メルカプトエタノール処
理と同時に０．０５４８ＤＳ処理ケ行ないＭｉＪ記の操
作をイｊなった。そＣＢｘ３ （分子Ｈ（７，ｕ ｏ
ｏ〜９，０ｔ）０１訊を第３衣に示ｒ０ 第３表 実ｈｉ例４ 必らかしめ＋１ｉ ’Ａ分取しｆｃＣＢ Ｘ１１ （１
０，（Ｊ Ｏ（Ｊ単位とＣ１１ｘ２１０１λ（ンＯυ単
１１の？Ｉｕ合９勿全５’ＸＩＯＭ２−メルカプトエタ
ノール添加下に１時間、室温で減成処理後、透析し、硫
安塩析した両分をセファデックスＧ−５０を用いてゲル
濾過した。また、２−メルカプトエタノール処理と同時
に０．０５％ Ｓ Ｉ） Ｈ９ＪＬ Ｅｌ ｋ行ないｎ
：Ｉｚの操ｔ′＋；をｔｉつた。その結果ＩＵらノする
（Ｊ３ｘ２、ＣＢｘおよびＣＢｘ３量金第４表りこ示す
。
１〜 １７，１１００ ）２００，０００ 単１立を
５Ｘ１０ Ｍ２−メルカプトエタノール添加
下に１時１ｉｊｌ 、室温で減成処ｙ１！後、透析（−
１硫安塩析（−だ画分をセファデックスＧ−５０を用い
てゲル０＝過した。また、２−メルカプトエタノール処
理と同時に０．０５４８ＤＳ処理ケ行ないＭｉＪ記の操
作をイｊなった。そＣＢｘ３ （分子Ｈ（７，ｕ ｏ
ｏ〜９，０ｔ）０１訊を第３衣に示ｒ０ 第３表 実ｈｉ例４ 必らかしめ＋１ｉ ’Ａ分取しｆｃＣＢ Ｘ１１ （１
０，（Ｊ Ｏ（Ｊ単位とＣ１１ｘ２１０１λ（ンＯυ単
１１の？Ｉｕ合９勿全５’ＸＩＯＭ２−メルカプトエタ
ノール添加下に１時間、室温で減成処理後、透析し、硫
安塩析した両分をセファデックスＧ−５０を用いてゲル
濾過した。また、２−メルカプトエタノール処理と同時
に０．０５％ Ｓ Ｉ） Ｈ９ＪＬ Ｅｌ ｋ行ないｎ
：Ｉｚの操ｔ′＋；をｔｉつた。その結果ＩＵらノする
（Ｊ３ｘ２、ＣＢｘおよびＣＢｘ３量金第４表りこ示す
。
第 ４ 衣
ちＬ！＝ ｉＪｉ！ｌ レリ ５
あらかじめ精製分取したＣＢｘｌｌ（ＪＯ，０Ｌ１０単
位とＣＢｘ １００．ＯＩＪυ単位の混合物を５ｘ １
＋） Ｍ ２−メルカプトエタノール添加下に１時
間、室温で減成処理後、透析し、硫安塩析した両分をセ
ファデックスＧ−５０を用いてゲルミル過した。また、
２−メルカプトエタノール処理と同時１／Ｃ０，０５係
ＳＤＳ処理を行ない前記の操作を行なった。
位とＣＢｘ １００．ＯＩＪυ単位の混合物を５ｘ １
＋） Ｍ ２−メルカプトエタノール添加下に１時
間、室温で減成処理後、透析し、硫安塩析した両分をセ
ファデックスＧ−５０を用いてゲルミル過した。また、
２−メルカプトエタノール処理と同時１／Ｃ０，０５係
ＳＤＳ処理を行ない前記の操作を行なった。
その結果得られるＣＢｘ２、ＣＢｘおよびＣＢｘ３量を
第５人に示す。
第５人に示す。
第 ５ 表
実施例６
あらかじめ精製分取したＣＢｘ １００，０００単位と
ＣＢｘ２１０（１，０υＯ単位の混合物ｆ ５ Ｘ １
０ Ｍ２−メルカプトエタノール添加下に１時間、室
温で減成処理後、透析し、硫安塩析した両分をセファデ
ックスＱ−５０’＜用いてゲル濾過した。−また、２−
メルカプトエタノール処理と同時に０６０５％ＳＤＳ処
理に行ｆｘ ｒ ｒＤＩ記の操作を行なっ７ヒ。
ＣＢｘ２１０（１，０υＯ単位の混合物ｆ ５ Ｘ １
０ Ｍ２−メルカプトエタノール添加下に１時間、室
温で減成処理後、透析し、硫安塩析した両分をセファデ
ックスＱ−５０’＜用いてゲル濾過した。−また、２−
メルカプトエタノール処理と同時に０６０５％ＳＤＳ処
理に行ｆｘ ｒ ｒＤＩ記の操作を行なっ７ヒ。
その結果イ（Ｉられる儒−ｋｆ〒ｃＢＸおよびＣ１３Ｘ
３ｉｔを第６衣に示す。
３ｉｔを第６衣に示す。
第 ６ 表
実施例７
あらかじＷ） Ｊ’ｌ ｆｆ分取り、ｒｃｃＢｘｌ ｉ
ｏｏ、ｏｏｏ単位、ＣＢ ｘ２１００，０００単位およ
びＣＢ ｘ １００，０００単位の混合物に５Ｘ１０
Ｍ２−メルカプトエタノール添加下に１時間、室温で
減成処理後、透析し、硫女塩セトした１血分をセファデ
ックスＧ−５０を用いてゲルい過した。筐た、２−メル
カプトエタノール処）！Ｉｔと同時に０．０５％８１３
Ｓ処理ｒ行ない前記の操作を行なった。その結果書られ
るＣＢｘ２、ＣＩ３ ｘおよびＣｌ５ｘ３ｉｉは１７表
ＩＣ示す。
ｏｏ、ｏｏｏ単位、ＣＢ ｘ２１００，０００単位およ
びＣＢ ｘ １００，０００単位の混合物に５Ｘ１０
Ｍ２−メルカプトエタノール添加下に１時間、室温で
減成処理後、透析し、硫女塩セトした１血分をセファデ
ックスＧ−５０を用いてゲルい過した。筐た、２−メル
カプトエタノール処）！Ｉｔと同時に０．０５％８１３
Ｓ処理ｒ行ない前記の操作を行なった。その結果書られ
るＣＢｘ２、ＣＩ３ ｘおよびＣｌ５ｘ３ｉｉは１７表
ＩＣ示す。
第 ７ 衣
実施１ンリ８
あらかじめ、ヌードマウス皮下でＪＭ 殖させたヒ ト
Ｂ Ａ Ｌ Ｌ −１細ｊｊｇ （Ｍｉｙ
ｏｓｈｉ 、 Ｎａｔｕｒｅ、２６７巻、１３１Ｉ
３〜８１１４貝、１９７７年）ｌｘｌＯ個’２２ｏｔの
ｌＯ％仔牛血でＨ含・ｈ゛イーグル培地仔遊きせ、セン
ダイウ・ｆルスＩＸＩ（Ｊ ｐｆｕ添加し、３７℃、
５係炭酸ガス含有最累ガス通気下ｅこ４８時間培誉後培
誉上清を原料として用いた。
Ｂ Ａ Ｌ Ｌ −１細ｊｊｇ （Ｍｉｙ
ｏｓｈｉ 、 Ｎａｔｕｒｅ、２６７巻、１３１Ｉ
３〜８１１４貝、１９７７年）ｌｘｌＯ個’２２ｏｔの
ｌＯ％仔牛血でＨ含・ｈ゛イーグル培地仔遊きせ、セン
ダイウ・ｆルスＩＸＩ（Ｊ ｐｆｕ添加し、３７℃、
５係炭酸ガス含有最累ガス通気下ｅこ４８時間培誉後培
誉上清を原料として用いた。
この培簀上清ば、ＣＢｘｌ（分子ＩＪ ’７０． Ｏｆ
ｌ Ｏ〜’Ｊ ｉ）、Ｌｌ Ｏ（１）、ＣＢｘｌ！ （
分子ｊｊｔ４ （１０００〜５（ｌ ０００）、ＣＢｘ
（分子量１２．０００〜１７，０００）およびＣＨＸ３
（分子ｉＪえ７．０ （１（Ｊ〜９．（ｌｔ）０１を１
ｌｌＩＸ有して−る。この原’ｆ’４ ｋ −、１０ｉ
ｖｔ ２−メルカプトエタノール、０、Ｉ ％ＳＤＳＳ
側Ｓ添加下時間、室温で減成処理１支、逍１７丁シ、硫
安塩ν「した両分をセファデックスＧ −５０ｆ用いて
ゲル’ｌｌ” ＱＭし、ＣＢｘ２、ＣＩ） ｘ訃よひＣ
Ｂｘ３を得た。請来忙凪８表に示！−０ 第 ｓ ：ｌｉｊ 収率に取イＵできた。
ｌ Ｏ〜’Ｊ ｉ）、Ｌｌ Ｏ（１）、ＣＢｘｌ！ （
分子ｊｊｔ４ （１０００〜５（ｌ ０００）、ＣＢｘ
（分子量１２．０００〜１７，０００）およびＣＨＸ３
（分子ｉＪえ７．０ （１（Ｊ〜９．（ｌｔ）０１を１
ｌｌＩＸ有して−る。この原’ｆ’４ ｋ −、１０ｉ
ｖｔ ２−メルカプトエタノール、０、Ｉ ％ＳＤＳＳ
側Ｓ添加下時間、室温で減成処理１支、逍１７丁シ、硫
安塩ν「した両分をセファデックスＧ −５０ｆ用いて
ゲル’ｌｌ” ＱＭし、ＣＢｘ２、ＣＩ） ｘ訃よひＣ
Ｂｘ３を得た。請来忙凪８表に示！−０ 第 ｓ ：ｌｉｊ 収率に取イＵできた。
実施例９
つ７末梢血リンパ球５ｘ１０（１，〜Ｉ’、ｒ１０００
面の１０偏仔牛血清含有イーグル培地に浮ｙｉさせ、３
７℃＼ ５％炭＃疲ガス言４１−酸素ガス通気下、４８
１１η間Ｊ’ａ書したＪΔ髪土ｉｔ’ｌ ｋ原イ・・ト
として）１ノいた。この培Ｊ 上ｉ’＋Ｖ ！ｄ、Ｃｌ
５ｘ１ 、 Ｃ１１ｘ２ 、 ＣＢｚ オＬヒＣＩ＋
Ｘ３４ ｉＹｔ ；ＩｊＬでいる。この原料’ｉ：、１
０−’Ｍジチオスレイト−ル添加下に２１１仔１１ｄ１
室温で減成処理後、以下実施レリ８の方法に９ｔって、
ＣＢｘハＣ１１ｘ ３ｒ・よびＣＢχ３’ｒイＱた。結
果會第９衣に示−・１−０ 第 ９ 表 実施例１（） ヒト勝維芽細廁７０つ７００１：Ｉｌｌ胞（フロラ社）
３ Ｘ ｌ Ｏ個（ｆ−６Ｌ）００ｍｌの１０％仔十皿
清含有イーグル培地に４）ｅさせ、フィトヘマグルチニ
ン會長仏Ｊ ［５Ｕ μｖ／’ｍｌにｌよるように添加
して、３７℃、５％炭故ガス合有酸素ガス通気下、４８
時間培養し７こ樹父上ｈ’ｔτｂ１γ１として）１ノい
た。この培う定上菌・は、ＣＢｘｌ、 ＣＢｘ２ 、
ＣＩ３ ｘ およびＣＢｘ、を混有している。この原
料’ｃｒ、０．１Ｍ水累化ホウ素ナトリウム添力＋＋−
Ｖに２１１４曲、ｈえ温で減成処理Ｃめ、以−ド実施例
８０方法にυｔつて、Ｃｉｌ ｘ２ 、 Ｃ１３ｘ ：
＆・、１： ヒＣｌ５ｘ３’？ａ：’ｔＪｆｃ。結呆奮
第１０表に示す。
面の１０偏仔牛血清含有イーグル培地に浮ｙｉさせ、３
７℃＼ ５％炭＃疲ガス言４１−酸素ガス通気下、４８
１１η間Ｊ’ａ書したＪΔ髪土ｉｔ’ｌ ｋ原イ・・ト
として）１ノいた。この培Ｊ 上ｉ’＋Ｖ ！ｄ、Ｃｌ
５ｘ１ 、 Ｃ１１ｘ２ 、 ＣＢｚ オＬヒＣＩ＋
Ｘ３４ ｉＹｔ ；ＩｊＬでいる。この原料’ｉ：、１
０−’Ｍジチオスレイト−ル添加下に２１１仔１１ｄ１
室温で減成処理後、以下実施レリ８の方法に９ｔって、
ＣＢｘハＣ１１ｘ ３ｒ・よびＣＢχ３’ｒイＱた。結
果會第９衣に示−・１−０ 第 ９ 表 実施例１（） ヒト勝維芽細廁７０つ７００１：Ｉｌｌ胞（フロラ社）
３ Ｘ ｌ Ｏ個（ｆ−６Ｌ）００ｍｌの１０％仔十皿
清含有イーグル培地に４）ｅさせ、フィトヘマグルチニ
ン會長仏Ｊ ［５Ｕ μｖ／’ｍｌにｌよるように添加
して、３７℃、５％炭故ガス合有酸素ガス通気下、４８
時間培養し７こ樹父上ｈ’ｔτｂ１γ１として）１ノい
た。この培う定上菌・は、ＣＢｘｌ、 ＣＢｘ２ 、
ＣＩ３ ｘ およびＣＢｘ、を混有している。この原
料’ｃｒ、０．１Ｍ水累化ホウ素ナトリウム添力＋＋−
Ｖに２１１４曲、ｈえ温で減成処理Ｃめ、以−ド実施例
８０方法にυｔつて、Ｃｉｌ ｘ２ 、 Ｃ１３ｘ ：
＆・、１： ヒＣｌ５ｘ３’？ａ：’ｔＪｆｃ。結呆奮
第１０表に示す。
第 １リ 衣
実施例１【
ヒト末梢リンパ球２×１０個を４０００ｍ１の１０％仔
牛結成含有イーグル培地に浮遊させ、フィトヘマグルチ
ニンに＃！濃１ｆｆｉ５０μゾΔｎｌになるように添刀
１１Ｌ、３７℃、５％炭１波ガス宮イ］°酸素ガス通気
下、７１８時間培養した培養土清缶原料として用いた。
牛結成含有イーグル培地に浮遊させ、フィトヘマグルチ
ニンに＃！濃１ｆｆｉ５０μゾΔｎｌになるように添刀
１１Ｌ、３７℃、５％炭１波ガス宮イ］°酸素ガス通気
下、７１８時間培養した培養土清缶原料として用いた。
この培養上清は、ＣＢＸ□、ＣＢｘ２、ＣＢ ｘおよび
Ｃ１３ｘ３’ａ−混有している。この原料ヲ５×１０
Ｍ／チオエリスリト−ル添加加工１時＋１ｉｌＸ室温で
減成処ｊＩＪｊ後、以下実施例８の方法番′こ従ってＣ
１，３ｘ ２、Ｃ，１３ｘおよびＣＢ ｘ ３ ｋ得た
。
Ｃ１３ｘ３’ａ−混有している。この原料ヲ５×１０
Ｍ／チオエリスリト−ル添加加工１時＋１ｉｌＸ室温で
減成処ｊＩＪｊ後、以下実施例８の方法番′こ従ってＣ
１，３ｘ ２、Ｃ，１３ｘおよびＣＢ ｘ ３ ｋ得た
。
戸′♂ｉ３長金第１１表に示す。
第 １１ 表
実施ν１１２
組織ＩＱ女で増夕面させたヒトＨＡ Ｌ Ｌ〜１細胞ｌ
Ｘｌ０ 個ケ２（）ｆｌＯｍｌの１０係仔牛血清含有
イーグルＪ肖Ｈｈ１２に浮遊さ・ヒー、３７℃、５係炭
酸ガスｔｊイイ酸床ガス通気下、・１８時間培養した培
養上（Ｆ＋’を原；ｒＦとして用いた。この培養上清は
、ＣＢＸＩ、ＣＢｘ２、Ｃｌ５Ｘ；Ｅ？よびＣ１３ｘ３
に混有している。
Ｘｌ０ 個ケ２（）ｆｌＯｍｌの１０係仔牛血清含有
イーグルＪ肖Ｈｈ１２に浮遊さ・ヒー、３７℃、５係炭
酸ガスｔｊイイ酸床ガス通気下、・１８時間培養した培
養上（Ｆ＋’を原；ｒＦとして用いた。この培養上清は
、ＣＢＸＩ、ＣＢｘ２、Ｃｌ５Ｘ；Ｅ？よびＣ１３ｘ３
に混有している。
Ｃ９の原ＶＦを５×１０ へ１２−メルカプトエタノ
ール−〕、ｉ加工に２時１ｊｌ ｆ ｆ’−は５分、室
諦で必ロ或処チＩＰ後、↓′Ｌ下実施１−りン３Ｇ）方
、′ノミにσＣっでＣ１３ｘ２．、 ＵＬ３ｘお工び
ＣＩＩ Ｘ３ で１ｉｊ ７こ。、）、Δ釆イＣ躬Ｊ２
表に示す。
ール−〕、ｉ加工に２時１ｊｌ ｆ ｆ’−は５分、室
諦で必ロ或処チＩＰ後、↓′Ｌ下実施１−りン３Ｇ）方
、′ノミにσＣっでＣ１３ｘ２．、 ＵＬ３ｘお工び
ＣＩＩ Ｘ３ で１ｉｊ ７こ。、）、Δ釆イＣ躬Ｊ２
表に示す。
第 １２ 次
以上、減成処理（５分）ではＣＢ ｘ２およびＣＢｘが
高収率に取得できるが、減成処理（２時間）ではＣＢｘ
およびＣＢ ｘ ３ が高収率に取得できた。
高収率に取得できるが、減成処理（２時間）ではＣＢｘ
およびＣＢ ｘ ３ が高収率に取得できた。
Claims (5)
- （１）分子１．ｔｚ、ｏｏｏを超える抗腫瘍性糖蛋白質
を還元剤で減成処理１／ 、つ−で処理液から、分子量
４０，０００〜５０．０００の抗腫瘍性糖蛋白質、分子
１ｉ１１２，０００〜１７，０００の抗腫瘍性糖蛋白質
または／および分子量７，０００〜９．０００の抗１隋
傷件ａ！！蛋白質をｊ反得することをｔ時徴七する分子
量４０，０００〜５０，０００の抗ｊ」瘍性糖１ｕ白質
、分子量１２，０００〜１７，０００Ｏ抗ＷＪｌ場性糖
蛋白り〆Ｌ菫／こは／ Ｊ＞よび分子量７，０υＯ〜Ｕ
、 ０１） （ｌの抗腫瘍性糖蛋白質の製法。 - （２）還元剤がチオール系化合物、金属水素錯化合物、
第３級ホスフィン類、亜硫酸塩、背酸塩、釜属イオンの
一利【または二種以上からなるＱ！ｊ訂請求の範囲第１
項記載の製法。 - （３）分子量１２，０００’（Ｉ：超える抗腫瘍性糖蛋
白質を界面活性剤共存下に還元剤により減成処理し、つ
いで処理液から、分子ｉ ４１３．０００〜５１）、
０００の抗腫瘍性糖蛋白質、分子量１２，０００〜１７
．０００の抗腫瘍性糖蛋白質せた１１／および分子量７
． ｆ） ００〜９．０００の抗＋１ｉｎ瘍性糖蛋白質
をＪＩＲ得するこさ′ｆｒ特徴とする分子ｉ４０，００
０〜５０．０υＯの抗腫瘍性糖蛋白質、分子量１２．０
（１０〜１７，０００（ＤＦＣＩｋｔｆ、癌性ａｌ蛋白
質またｕ ／ オｊ Ｕ分子量： ７，０００〜９，０
００ （Ｄ抗ｊＩＩｕ４１ｔｆ性楯蛋白質のＬＨ法。 - （４） 還元ハリがチオール系化合物、金属水素錯化
合物、第３級ホスフィン類、亜硫酸塩、背酸塩、金属イ
オンの一種または二種以上からなる特許請求の範囲第３
項記載の製法。 - （５） 界面活性剤が陰イオン性、陽イオン性、両性
イオン性または非イオン性である１１“″ｆ許請求の範
囲第３項記載の製法。
Priority Applications (21)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57135852A JPS5925332A (ja) | 1982-08-04 | 1982-08-04 | 抗腫瘍性糖蛋白質の製法 |
| KR1019830003525A KR840006127A (ko) | 1982-08-04 | 1983-07-28 | 항종양 당단백질의 제조방법 |
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