JPS59205981A - 微生物の固定化方法および固定化微生物を含む寒天繊維 - Google Patents
微生物の固定化方法および固定化微生物を含む寒天繊維Info
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- JPS59205981A JPS59205981A JP59092739A JP9273984A JPS59205981A JP S59205981 A JPS59205981 A JP S59205981A JP 59092739 A JP59092739 A JP 59092739A JP 9273984 A JP9273984 A JP 9273984A JP S59205981 A JPS59205981 A JP S59205981A
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- C12P13/20—Aspartic acid; Asparagine
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- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/832—Bacillus
- Y10S435/837—Bacillus megaterium
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は触媒として活性のある微生物の１ｌｆｉｌｌ胞
を寒天ケル繊維に固定ずろ方法及び微生物の細胞を固定
した寒天繊維に関する。
を寒天ケル繊維に固定ずろ方法及び微生物の細胞を固定
した寒天繊維に関する。
酵素を触媒としてそのままあるいは細胞内の形で固定し
て使用することは化学工業における完全な一つの１弾様
どなってきた。固定化触媒は多くの化学製品および食品
の製造について開発されており、アスパルターセ、ペニ
シリンアシラーセ、グルコースイソノラーゼ、β−ガラ
クトシダーゼ、α−アミラーゼおよびアシノアシラーゼ
のような酵素系を含んでいる。そのような触媒の固（ポ
化は一般に交叉結合したゲル内に抱合、中空繊維または
マクロカプセル内に充填：不活淫支持体またはイオン交
換樹脂への吸着、多くの官能基を有する試薬による交叉
結合、および重合１住支持体への共有、請合である。こ
れら種にの方法およびそれらの適用の例は文献及び論文
（たとえばＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｃｉｑｅｍｉｓｔｒｙ
ａｎｄ Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｖｏｗ、
Ｌ ＋ Ｉ＋ｍｎｏｂｉｌｉｚｅｄＥｎｚｙｍｅ Ｐｒ
１ｎｃｉｐｌｅｓ ）に多く示されているので゛ここで
は議論しない。これらの種々の方法の工業への適用は、
大規模爆作のための選択された支持マトリックスが実際
に得られるか否かにかかっている。
て使用することは化学工業における完全な一つの１弾様
どなってきた。固定化触媒は多くの化学製品および食品
の製造について開発されており、アスパルターセ、ペニ
シリンアシラーセ、グルコースイソノラーゼ、β−ガラ
クトシダーゼ、α−アミラーゼおよびアシノアシラーゼ
のような酵素系を含んでいる。そのような触媒の固（ポ
化は一般に交叉結合したゲル内に抱合、中空繊維または
マクロカプセル内に充填：不活淫支持体またはイオン交
換樹脂への吸着、多くの官能基を有する試薬による交叉
結合、および重合１住支持体への共有、請合である。こ
れら種にの方法およびそれらの適用の例は文献及び論文
（たとえばＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｃｉｑｅｍｉｓｔｒｙ
ａｎｄ Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｖｏｗ、
Ｌ ＋ Ｉ＋ｍｎｏｂｉｌｉｚｅｄＥｎｚｙｍｅ Ｐｒ
１ｎｃｉｐｌｅｓ ）に多く示されているので゛ここで
は議論しない。これらの種々の方法の工業への適用は、
大規模爆作のための選択された支持マトリックスが実際
に得られるか否かにかかっている。
マトリックスが良好な機械的安定１律および良好な流体
力学的特性を有することにより、長く使用しても支持体
の圧縮、縮小化および／または破裂が生じないことが工
業」二の適用のためには特に重要である。上記支持体は
また適当な透過性と表面積を有し固定化された触媒（酵
素）の活性が最大となり拡散抵抗が最小となるような構
造でなければならない。
力学的特性を有することにより、長く使用しても支持体
の圧縮、縮小化および／または破裂が生じないことが工
業」二の適用のためには特に重要である。上記支持体は
また適当な透過性と表面積を有し固定化された触媒（酵
素）の活性が最大となり拡散抵抗が最小となるような構
造でなければならない。
このような要求に答えるために、Ｃｈｉｂａｔａ 等（
米国’ｉ”ｌ：許３，７９１，９２６）は合成タイプの
重合体マトリックス（たとえばポリアクリルアミド）内
に酵素または微生物をとじ込める種々の方法をｗ′にア
スパラギン酸の製造のために開発した。
米国’ｉ”ｌ：許３，７９１，９２６）は合成タイプの
重合体マトリックス（たとえばポリアクリルアミド）内
に酵素または微生物をとじ込める種々の方法をｗ′にア
スパラギン酸の製造のために開発した。
Ｎｅ１ｓｏｎ （米国特許３，９５７，５８０）は同様
に、他のタイプの合成重合体系内に酵素含有微生物細胞
をとじ込めるかあるいは交叉結合する方法であって該固
定化細胞がさらに重合体マトリックスにグルクールアル
テヒドのような多官能゛目三試薬によＱ交叉結合されて
いる方法を報告した。これらのタイプの合成重合体系は
２つの主たる欠点を有する。
に、他のタイプの合成重合体系内に酵素含有微生物細胞
をとじ込めるかあるいは交叉結合する方法であって該固
定化細胞がさらに重合体マトリックスにグルクールアル
テヒドのような多官能゛目三試薬によＱ交叉結合されて
いる方法を報告した。これらのタイプの合成重合体系は
２つの主たる欠点を有する。
第１は固定化触媒ｄ゛製造毒性ある刺激性の物質（単量
ｆ＝１＝、開・始剤、交叉結合剤等）を使用しなげれば
ならす、このことが食品級製品の製造に問題な生ぜしめ
ることである。第２は支持体７トリノクスが大規模カラ
ム反応容器系の中で長期間使用していると変形したり縮
小化したりすることである。
ｆ＝１＝、開・始剤、交叉結合剤等）を使用しなげれば
ならす、このことが食品級製品の製造に問題な生ぜしめ
ることである。第２は支持体７トリノクスが大規模カラ
ム反応容器系の中で長期間使用していると変形したり縮
小化したりすることである。
ゲル内にとじ込められた固定化触媒の特性を改善するた
めに、Ｃｈ １ｂａｔａ等は硫酸エステル化多糖類ゲル
（カンバーカラゲニン等）を支持体マドｌ）ツクスとし
て使用することを検討した（米国特許４、．１３８，２
９２ ）。これらのタイプのゲルは種々の形（ビーズ、
膜等）で使用できる。これらの適用における限界は、多
糖類が１０重量％の硫酸基を有しなげればならないこと
及びゲル硬化剤（たとえば水溶性布・機アミンまたは原
子量２４を越えろ金属イオン）を使用して安定なゲル支
持体な確保しなげればならないことである。上述の文献
には寒天ゲルマトリックス（特１ｖ昭５０−９５４７０
号）にとり込まれた微生物は特に４．０ ’Ｃ以上の温
度ではゲルの形にとどまっておらず、ゾルの形に変換し
ていることを示していう。同様に、ツノラゲニンも上述
のタイプのゲル硬化剤を使用して機械的安定性を維持し
なければ上述の寒天ゲルマトリックスと同じく形または
構造を失うことを示している。
めに、Ｃｈ １ｂａｔａ等は硫酸エステル化多糖類ゲル
（カンバーカラゲニン等）を支持体マドｌ）ツクスとし
て使用することを検討した（米国特許４、．１３８，２
９２ ）。これらのタイプのゲルは種々の形（ビーズ、
膜等）で使用できる。これらの適用における限界は、多
糖類が１０重量％の硫酸基を有しなげればならないこと
及びゲル硬化剤（たとえば水溶性布・機アミンまたは原
子量２４を越えろ金属イオン）を使用して安定なゲル支
持体な確保しなげればならないことである。上述の文献
には寒天ゲルマトリックス（特１ｖ昭５０−９５４７０
号）にとり込まれた微生物は特に４．０ ’Ｃ以上の温
度ではゲルの形にとどまっておらず、ゾルの形に変換し
ていることを示していう。同様に、ツノラゲニンも上述
のタイプのゲル硬化剤を使用して機械的安定性を維持し
なければ上述の寒天ゲルマトリックスと同じく形または
構造を失うことを示している。
本発明者等は１０重隋／重量％未滴の硫酸基を有する寒
天ゲルを使用することにより従来使用されたゲル硬化剤
を必要としない安定な触媒活性系が得られることを見出
した。さらに、このタイプの系はカラム反応器中で９繊
維触媒“の形で使用できその形を失わない。この新しく
開発された固定化方法の具体例としては、フマール酸ア
ンモニウム基質からし一アスパラギン酸を連続的流れ操
作で製造するための固定化細胞カラム反応器として使用
されるアスパルターゼ含有微生物を使用する。アスパラ
ギン酸の工業的生産は一般にアスパルターゼ含有微生物
を使用して反応を行い１回使用後捨てるバンチ発酵方法
かあるいは連続的流れ操作の中で繰返し使用できる固定
化アスパルターゼ含有微生物の使用を包含している。後
者の方法は骨動コストが低く、触媒が再使用できる形な
のでバッチタイプの系よりも一般に好ましいが、適当に
設計された（良好な活性、安定性等）固定化細胞触媒が
使用されるべきである。本発明はそのような固定化細胞
による触媒の生産を可能にするものである。
天ゲルを使用することにより従来使用されたゲル硬化剤
を必要としない安定な触媒活性系が得られることを見出
した。さらに、このタイプの系はカラム反応器中で９繊
維触媒“の形で使用できその形を失わない。この新しく
開発された固定化方法の具体例としては、フマール酸ア
ンモニウム基質からし一アスパラギン酸を連続的流れ操
作で製造するための固定化細胞カラム反応器として使用
されるアスパルターゼ含有微生物を使用する。アスパラ
ギン酸の工業的生産は一般にアスパルターゼ含有微生物
を使用して反応を行い１回使用後捨てるバンチ発酵方法
かあるいは連続的流れ操作の中で繰返し使用できる固定
化アスパルターゼ含有微生物の使用を包含している。後
者の方法は骨動コストが低く、触媒が再使用できる形な
のでバッチタイプの系よりも一般に好ましいが、適当に
設計された（良好な活性、安定性等）固定化細胞触媒が
使用されるべきである。本発明はそのような固定化細胞
による触媒の生産を可能にするものである。
本発明で使用される方法は他の固定化細胞の方法（たと
えばペニシリンアシラーゼ系）にも適用でき、酵素その
ものの固定化にも適用できる。実際の適用は本発明を実
施する者に依るであろう。
えばペニシリンアシラーゼ系）にも適用でき、酵素その
ものの固定化にも適用できる。実際の適用は本発明を実
施する者に依るであろう。
本発明は固定化された酵素含有微生物細胞及び固定化が
全細胞酵素を寒天ゲルの繊維粒子内にとじ込めることに
より行なわれる該固定化された酵素含有微生物細胞の製
造方法に関する。得られた繊維は次いで製品の連続的流
れ操作による製造のために適当に設計された反応器中で
使用できる。
全細胞酵素を寒天ゲルの繊維粒子内にとじ込めることに
より行なわれる該固定化された酵素含有微生物細胞の製
造方法に関する。得られた繊維は次いで製品の連続的流
れ操作による製造のために適当に設計された反応器中で
使用できる。
本発明は下記段階（ａ）ないしくＣ）よりなる酵素含有
微生物の細胞を固定化する方法からなる・（ａ）上記細
胞を約４５°〜６０°Ｃの温度で約１０〜８．０重量／
重量％の硫酸残基を有する寒天水溶液と接触させ。
微生物の細胞を固定化する方法からなる・（ａ）上記細
胞を約４５°〜６０°Ｃの温度で約１０〜８．０重量／
重量％の硫酸残基を有する寒天水溶液と接触させ。
（ｂ） 無機ナトリウム塩の０．１０〜５．０Ｍ溶液
を約０°〜２０°Ｃの温度で上記（ａ）で形成された混
合物の流れと接触させて細胞を含有する寒天繊維を形成
させ。
を約０°〜２０°Ｃの温度で上記（ａ）で形成された混
合物の流れと接触させて細胞を含有する寒天繊維を形成
させ。
（ｃ）上記細胞を含有する寒天繊維を回収する。
（ａ） 上記寒天が２．０〜３．０重量／重量％の硫
酸残基を有し、 （ｂ） 上記無機ナトリウム塩の溶液が塩化ナトリウ
ムの３．０〜５．０Ｍ溶液、であり、（ｃ）上記の塩溶
液が５°〜１５℃の温度である方法が好ましい。
酸残基を有し、 （ｂ） 上記無機ナトリウム塩の溶液が塩化ナトリウ
ムの３．０〜５．０Ｍ溶液、であり、（ｃ）上記の塩溶
液が５°〜１５℃の温度である方法が好ましい。
上記微生物細胞が酵素としてアスパルターゼ（アスパラ
ギン酸アンモニウム分解酵素） 、ペニシリンアシラー
ゼ、グルコースインメラーゼ、グルコースオキンダーゼ
、フマラーゼ、インベルターゼ、シスートランスマレイ
ン酸インメラーゼ、またはＬ−アスパルテートβ−テヵ
ルボキシラーゼを含有する方法が好ましい。アスパルタ
ーゼ含有微生物細胞がバチラス・メガテリウム（Ｂａｃ
ｉｌｌｕｓｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ ） ｆｌのものであ
り、一方、細胞がさらに処理される前にまず１５°〜４
５°Ｃの温度でフマレートまたはアスパルテー１− （
オフ（７）０．１〜２０Ｍ溶液と接触させる方法も好ま
しい。細胞含有寒天繊Ｋｄｆ＝ ’；ｘフマール酸アン
モニウムの０．１〜２．０Ｍ溶液とρ１ゴ８．０〜９５
で約２５°〜５５°Ｇの温度で接触させる方法もさらに
好ましい。
ギン酸アンモニウム分解酵素） 、ペニシリンアシラー
ゼ、グルコースインメラーゼ、グルコースオキンダーゼ
、フマラーゼ、インベルターゼ、シスートランスマレイ
ン酸インメラーゼ、またはＬ−アスパルテートβ−テヵ
ルボキシラーゼを含有する方法が好ましい。アスパルタ
ーゼ含有微生物細胞がバチラス・メガテリウム（Ｂａｃ
ｉｌｌｕｓｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ ） ｆｌのものであ
り、一方、細胞がさらに処理される前にまず１５°〜４
５°Ｃの温度でフマレートまたはアスパルテー１− （
オフ（７）０．１〜２０Ｍ溶液と接触させる方法も好ま
しい。細胞含有寒天繊Ｋｄｆ＝ ’；ｘフマール酸アン
モニウムの０．１〜２．０Ｍ溶液とρ１ゴ８．０〜９５
で約２５°〜５５°Ｇの温度で接触させる方法もさらに
好ましい。
酵素含有細胞、好ましくはバチルス・メガテする寒天繊
維も本発明の一部である。
維も本発明の一部である。
ペニシリンアシラーゼ含有微生物細胞がプロテウス・レ
トゲリ（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｒｅｔｔｇｅｒｉ ）種であ
る方法も好ましい。
トゲリ（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｒｅｔｔｇｅｒｉ ）種であ
る方法も好ましい。
本発明の生成物を製造する際に、酵素含有微生物細胞を
繊維状寒天７トリノクス内にとじ込められる。寒天自体
は種々の属の寒天産生海草から抽出される天然多糖類複
合体である。構造的には寒天は種々のレベルの硫酸残基
を含有するα（１−３）およびβ（Ｉ Ｌ ４）結合多
糖類の接合体混合物て゛ある。本発明で使用される寒天
の特定組成は、１〜８Ｘ、好ましくは２〜３％、もつと
も好ましくは約２５４重量／重量％の硫酸残基を含んで
おり、典型的には重機／重厳％として、０．１３％のカ
ルシウム、００１％のバリウム、０１９％のケイ素、０
４３％の塩化物〕６よび０．１７％の窒素を含有する。
繊維状寒天７トリノクス内にとじ込められる。寒天自体
は種々の属の寒天産生海草から抽出される天然多糖類複
合体である。構造的には寒天は種々のレベルの硫酸残基
を含有するα（１−３）およびβ（Ｉ Ｌ ４）結合多
糖類の接合体混合物て゛ある。本発明で使用される寒天
の特定組成は、１〜８Ｘ、好ましくは２〜３％、もつと
も好ましくは約２５４重量／重量％の硫酸残基を含んで
おり、典型的には重機／重厳％として、０．１３％のカ
ルシウム、００１％のバリウム、０１９％のケイ素、０
４３％の塩化物〕６よび０．１７％の窒素を含有する。
本発明で使用される寒天の硫酸残基の割合は従来の他の
研究者の多糖類タイプの調製物に使用された１０（また
はそれ以上）％のＩＡ酸残基より少ないことに注目ずべ
きで゛ある。
研究者の多糖類タイプの調製物に使用された１０（また
はそれ以上）％のＩＡ酸残基より少ないことに注目ずべ
きで゛ある。
促誠的に安定な支持体マトリックスとして使用パ（きろ
寒天の！′１１性は高を品で水性コロイド状ゝゝゾル“
を形成し、冷却するとゲル網状組織に転換し、はとんど
の酵素反応に使用ずろ温度でプルにもとることのない能
力で゛ある。
寒天の！′１１性は高を品で水性コロイド状ゝゝゾル“
を形成し、冷却するとゲル網状組織に転換し、はとんど
の酵素反応に使用ずろ温度でプルにもとることのない能
力で゛ある。
本発明を示すのに使用されるアスパルターゼ含有微生物
細胞はバチルス・メガテリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓｍｅ
ｇａｔｃｒｉｕｍ ）であり、これらの細胞はノマール
酸ｒセたはアスパラギン酸で前処理（ゲルにとり込ませ
る前）して細１泡内アスパルターセ・舌′准を増加さぜ
ることができる。とり込まれたアスパルター上音有バチ
ルス・ツガチリウム細胞の繊維状寒天粒子は基型的には
長さ１９〜３．７ （ｙｔｔｔ、巾ｏＩ〜ｏ２υ７１で
ある。形成した寒天ぞ、裁維のサイズは処理条件な変え
ることにより変化させられる。繊維状寒天にとり込ｌれ
た細胞は１．５Ｍフマール酸アンモニウム供給流からＬ
−アスパラギン酸を連、読的流れ操作で製造するのに使
用される。至適反応器内の条件は、ρ１−１８．．５〜
９０、温度３７℃〜４５℃、であって、９８％のモル転
化収率のレベルを達成する（（は（好適）逆流供給速度
１５５〜３０床答量／時間を必要とする。反応体カラム
は系の流体力学的特性に影響を与えることなく連続的に
操作できる。固定化された全細胞アスパルターゼ活性の
とり込みは典型的には遊離の全細胞活性７０〜１００％
であり、触媒半減期は少なくとも１３２日であり、２７
７日間は活性が高い。本発明の方法は及び全細胞アスパ
ルターゼを使用して本発明を適用することについての具
体例を下記に詳細に説明する。
細胞はバチルス・メガテリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓｍｅ
ｇａｔｃｒｉｕｍ ）であり、これらの細胞はノマール
酸ｒセたはアスパラギン酸で前処理（ゲルにとり込ませ
る前）して細１泡内アスパルターセ・舌′准を増加さぜ
ることができる。とり込まれたアスパルター上音有バチ
ルス・ツガチリウム細胞の繊維状寒天粒子は基型的には
長さ１９〜３．７ （ｙｔｔｔ、巾ｏＩ〜ｏ２υ７１で
ある。形成した寒天ぞ、裁維のサイズは処理条件な変え
ることにより変化させられる。繊維状寒天にとり込ｌれ
た細胞は１．５Ｍフマール酸アンモニウム供給流からＬ
−アスパラギン酸を連、読的流れ操作で製造するのに使
用される。至適反応器内の条件は、ρ１−１８．．５〜
９０、温度３７℃〜４５℃、であって、９８％のモル転
化収率のレベルを達成する（（は（好適）逆流供給速度
１５５〜３０床答量／時間を必要とする。反応体カラム
は系の流体力学的特性に影響を与えることなく連続的に
操作できる。固定化された全細胞アスパルターゼ活性の
とり込みは典型的には遊離の全細胞活性７０〜１００％
であり、触媒半減期は少なくとも１３２日であり、２７
７日間は活性が高い。本発明の方法は及び全細胞アスパ
ルターゼを使用して本発明を適用することについての具
体例を下記に詳細に説明する。
典型的実験として、使用される寒天をディフコ・ラボラ
トリーズ（ミシガン州テトロイ！・）製の乾燥抽出物と
して得られ、２．５４重重量型量％の（ｐｆｆ ｔＲ残
基を含有していた。′これを９０°Ｃ〜１００°Ｃの水
に撹拌しながら＠解−て水性寒天の５％コロイド状ゾル
を得た。このゾルの形成後、温度を４５℃〜６０℃に低
下させてからアスパルターゼλ有全＋？：ｌＩ胞を導入
した。ゾルの温度を４５°Ｃ以下に低下させると寒天ゾ
ルがゲル化する。６０’Ｃよりはるかにｊｊ（７Ｊい温
度は全細胞が寒天ゾルに添加されたとき１ｌｌｌ ＩＫ
Ｉ内酵；）ソの熱変性の可能性があるので！Ｉｉけなげ
ればならない。使用されたアスパルターゼ含有バチルス
・メガテリウム微生物は遠心分離により講縮Ｘ１：ｌｌ
ｌ胞ペーストまたはスラリーとして得られブこ。この糸
１■１．ｌｌｌ包ペーストまたはスラリーを０．２５〜
０．５０答量部の水対１，０重量音ｌＳのバ’ＩＩＩ
１胞（湿ｊ寺）と混合してもつと容易に加工１〜易い細
胞塊にする。
トリーズ（ミシガン州テトロイ！・）製の乾燥抽出物と
して得られ、２．５４重重量型量％の（ｐｆｆ ｔＲ残
基を含有していた。′これを９０°Ｃ〜１００°Ｃの水
に撹拌しながら＠解−て水性寒天の５％コロイド状ゾル
を得た。このゾルの形成後、温度を４５℃〜６０℃に低
下させてからアスパルターゼλ有全＋？：ｌＩ胞を導入
した。ゾルの温度を４５°Ｃ以下に低下させると寒天ゾ
ルがゲル化する。６０’Ｃよりはるかにｊｊ（７Ｊい温
度は全細胞が寒天ゾルに添加されたとき１ｌｌｌ ＩＫ
Ｉ内酵；）ソの熱変性の可能性があるので！Ｉｉけなげ
ればならない。使用されたアスパルターゼ含有バチルス
・メガテリウム微生物は遠心分離により講縮Ｘ１：ｌｌ
ｌ胞ペーストまたはスラリーとして得られブこ。この糸
１■１．ｌｌｌ包ペーストまたはスラリーを０．２５〜
０．５０答量部の水対１，０重量音ｌＳのバ’ＩＩＩ
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胞塊にする。
この時点でアスパルターゼ含有バチルス・ツガチリウム
糸１１１ノ向を任意（、でフマール酸アンモニウム基質
＋７） １．５ Ｍ、＠液とインキュベートできろ１，
０５乗軟部の細７１熊ペーストまたはスラリ一対１０容
量部の上記基質を使用して２５°Ｃで１２〜１６時間保
陽すると観察、さン冗る細ｊ胞内アスパルターに活性か
３倍迄増加する。この観察されるイ舌１生のｊ胃加が固
定化の際にも糸［ｆ持されると、至適生産性のある反応
４系の設、計が可能となる。
糸１１１ノ向を任意（、でフマール酸アンモニウム基質
＋７） １．５ Ｍ、＠液とインキュベートできろ１，
０５乗軟部の細７１熊ペーストまたはスラリ一対１０容
量部の上記基質を使用して２５°Ｃで１２〜１６時間保
陽すると観察、さン冗る細ｊ胞内アスパルターに活性か
３倍迄増加する。この観察されるイ舌１生のｊ胃加が固
定化の際にも糸［ｆ持されると、至適生産性のある反応
４系の設、計が可能となる。
ｒ＋ｄｌｌ胞ペーストまたはスラリー（前処理または未
処理）は次いで寒天ゾルと混合する前に攪拌しなから４
５’Ｃに加熱しなげればならない。この細胞ペーストま
たはスラリーを次いで０．２５〜０．７５重歌部（湿時
）の細胞対１．０容量部の５％寒天ゾルの比で撹拌しな
がら加える。温度を混合段階の間４５°Ｃ〜６０℃に維
持してゲルｆヒを防止する。
処理）は次いで寒天ゾルと混合する前に攪拌しなから４
５’Ｃに加熱しなげればならない。この細胞ペーストま
たはスラリーを次いで０．２５〜０．７５重歌部（湿時
）の細胞対１．０容量部の５％寒天ゾルの比で撹拌しな
がら加える。温度を混合段階の間４５°Ｃ〜６０℃に維
持してゲルｆヒを防止する。
均一な細胞と寒天との混合物を−１１０〜１２．０１／
時間の速度で直径０１２５インチのノズルを通して１０
°Ｃ〜１５°Ｃに維持され攪拌された０、１０〜５．０
Ｍ無機ナトリウム塩溶液に注入する。この細胞と寒天の
混合物１容量部を４容量部の上記冷塩溶液に、寒天と細
胞の混合物の連続的添加流を維持するような速度で注入
する。寒天の繊維に細胞をとじ込めて固定化したものは
上記攪拌された生理塩溶液の表面に接触するやいなや形
成する。すべての寒天と細胞との混合物を上記塩溶液に
加えた後、触媒繊維をラッグ（Ｌａｐｐ ）フィルター
を通してｆ過して集め、１０〜２０容量の水で洗った。
時間の速度で直径０１２５インチのノズルを通して１０
°Ｃ〜１５°Ｃに維持され攪拌された０、１０〜５．０
Ｍ無機ナトリウム塩溶液に注入する。この細胞と寒天の
混合物１容量部を４容量部の上記冷塩溶液に、寒天と細
胞の混合物の連続的添加流を維持するような速度で注入
する。寒天の繊維に細胞をとじ込めて固定化したものは
上記攪拌された生理塩溶液の表面に接触するやいなや形
成する。すべての寒天と細胞との混合物を上記塩溶液に
加えた後、触媒繊維をラッグ（Ｌａｐｐ ）フィルター
を通してｆ過して集め、１０〜２０容量の水で洗った。
触媒繊維中の湿めった細胞の重量は触媒全重量（湿時）
の３０〜４０％である。触媒繊維を、次いで包んだベッ
ドカラム反応器中で使用し易くなるまで］、 ５ Ｍフ
マール酸アンモニウム基質溶液中に入れておいた。
の３０〜４０％である。触媒繊維を、次いで包んだベッ
ドカラム反応器中で使用し易くなるまで］、 ５ Ｍフ
マール酸アンモニウム基質溶液中に入れておいた。
固定化細胞カラム反応器の設計はＬ−アスパラギン酸の
産生が至適にあるようにする。至適触媒充填量は典型的
には０７重量部（湿時）の触媒繊維対］０容紙部の反応
器内空間である。１．５ Ｍフマール酸アンモニウム基
質溶液は１５〜３０床容量（カラｌ、の）７時間で、ｐ
１イ８．５〜９．０で３７°Ｃ〜・１５°Ｇの’ｌｉＡ
度でカラムに通ず。良い設計のカラムでは代表的には９
８％のし一アスパラギンぷ２モル収率が・得られる。生
成物は連続的結晶化によりノＪラム溶出流から直接沈殿
する。咳連続的結晶化は、溶出流のρ１（を硫酸によっ
て３２に調節し、伺もれた■７−アスパラギン酸結晶を
３０分間顆粒化させることによる。
産生が至適にあるようにする。至適触媒充填量は典型的
には０７重量部（湿時）の触媒繊維対］０容紙部の反応
器内空間である。１．５ Ｍフマール酸アンモニウム基
質溶液は１５〜３０床容量（カラｌ、の）７時間で、ｐ
１イ８．５〜９．０で３７°Ｃ〜・１５°Ｇの’ｌｉＡ
度でカラムに通ず。良い設計のカラムでは代表的には９
８％のし一アスパラギンぷ２モル収率が・得られる。生
成物は連続的結晶化によりノＪラム溶出流から直接沈殿
する。咳連続的結晶化は、溶出流のρ１（を硫酸によっ
て３２に調節し、伺もれた■７−アスパラギン酸結晶を
３０分間顆粒化させることによる。
本発明は種々の醇素系に等しく適用できる。たトエハ、
ペニシリンアシラーゼ、グルコースイソメラーゼ、グル
コースオキシダーゼ、フマラーゼ、インベルターゼ、シ
ス−トランスマレイン酸イソメラーゼ、およびＬ−アス
パテートβ−デカルボキシラーゼなどが本発明の方法に
よって固定化できる。ペニシリンアシラーゼが必要な場
合、プロテウス・レットゲリの細胞が使用できる。グル
コースイソメラーゼ、グルコースオキシダーゼ、フマラ
ーゼ、インベルターゼ、シスートランスマレイン酸イン
メラーゼまたはＬ−アスパルテートβ−デカルボキシラ
ーゼを含有する細胞の固定化が望ましいときは、使用で
きる微生物はストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙ
ｃｅｓ ） 、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ）、アセ
トバクター（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ）、シュードモ
ナス（Ｐｓｏｕｄｏｍｏｎａｓ ） およびアスペル
ギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ）属の微生物である
。このタイプの微生物は必然的に無傷の生４＋＋＋胞で
はないが、本発明で使用する前に物理的または化学的に
処理できる。本発明の方法によって寒天繊維中に細胞外
の醇累すなわち醇素そのものをとじ込めることも可能で
ある。
ペニシリンアシラーゼ、グルコースイソメラーゼ、グル
コースオキシダーゼ、フマラーゼ、インベルターゼ、シ
ス−トランスマレイン酸イソメラーゼ、およびＬ−アス
パテートβ−デカルボキシラーゼなどが本発明の方法に
よって固定化できる。ペニシリンアシラーゼが必要な場
合、プロテウス・レットゲリの細胞が使用できる。グル
コースイソメラーゼ、グルコースオキシダーゼ、フマラ
ーゼ、インベルターゼ、シスートランスマレイン酸イン
メラーゼまたはＬ−アスパルテートβ−デカルボキシラ
ーゼを含有する細胞の固定化が望ましいときは、使用で
きる微生物はストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙ
ｃｅｓ ） 、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ）、アセ
トバクター（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ）、シュードモ
ナス（Ｐｓｏｕｄｏｍｏｎａｓ ） およびアスペル
ギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ）属の微生物である
。このタイプの微生物は必然的に無傷の生４＋＋＋胞で
はないが、本発明で使用する前に物理的または化学的に
処理できる。本発明の方法によって寒天繊維中に細胞外
の醇累すなわち醇素そのものをとじ込めることも可能で
ある。
本発明の方法の態様は下記例によって詳しく説明される
。
。
例 Ｉ
ＮＺアミンＢとコーンステイープリカー基質で２８℃、
ｐｉ−Ｉ Ｂ、 ５で１８時間好気条件下に生育させた
バチルス蕾メガテリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａ
ｔｅｒｔｕｍ）（ＡＴＣＣ２１２０９）発酵ブロスを１
５０００５’で１５分間遠心分離した。遠心分離ｌ−だ
細胞Ｎ景（湿時）は発酵プロスリットル当り３４７ｇ−
であった。細胞を固定化する前に、５６．（１−の湿っ
た細胞を約１００ ？ｎ１）１．５ Ｍフマール酸アン
モニウム溶液中で１６時間２５℃に保持した。この懸濁
液を次いで１５０００Ｐで１５分間遠心分離した。湿っ
た細［１復収景は３８．０ ｇ−（すなわちフマール酸
−アンモニウム基質中で・ｆンキーベーションしたとき
得られた細胞の湿時重連の３２％が損失した。）これら
の処理された細胞のアスパルターゼ活性は湿った細胞１
１当り１時間当り生成された約５１７ｆのＬ−アスパラ
ギン酸であった。
ｐｉ−Ｉ Ｂ、 ５で１８時間好気条件下に生育させた
バチルス蕾メガテリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａ
ｔｅｒｔｕｍ）（ＡＴＣＣ２１２０９）発酵ブロスを１
５０００５’で１５分間遠心分離した。遠心分離ｌ−だ
細胞Ｎ景（湿時）は発酵プロスリットル当り３４７ｇ−
であった。細胞を固定化する前に、５６．（１−の湿っ
た細胞を約１００ ？ｎ１）１．５ Ｍフマール酸アン
モニウム溶液中で１６時間２５℃に保持した。この懸濁
液を次いで１５０００Ｐで１５分間遠心分離した。湿っ
た細［１復収景は３８．０ ｇ−（すなわちフマール酸
−アンモニウム基質中で・ｆンキーベーションしたとき
得られた細胞の湿時重連の３２％が損失した。）これら
の処理された細胞のアスパルターゼ活性は湿った細胞１
１当り１時間当り生成された約５１７ｆのＬ−アスパラ
ギン酸であった。
９０°Ｃ〜９５℃の水６３ｍ１に、３，３ｙ−のバクト
ーアガール（Ｂａｃｔｏ −Ａｇａｒ ） （ミシガン
州テトロイトのデ１′フコラボラトリーズ製）を加え、
この混合物をコロイド状のゾルが形成するまで９０℃〜
９５℃テ攪拌した。次いでこのゾルを攪拌しながらゆっ
くりと５５℃〜６０℃に冷却した。５％寒天ゾルの５５
℃における粘度は６４０センチポイズであった。
ーアガール（Ｂａｃｔｏ −Ａｇａｒ ） （ミシガン
州テトロイトのデ１′フコラボラトリーズ製）を加え、
この混合物をコロイド状のゾルが形成するまで９０℃〜
９５℃テ攪拌した。次いでこのゾルを攪拌しながらゆっ
くりと５５℃〜６０℃に冷却した。５％寒天ゾルの５５
℃における粘度は６４０センチポイズであった。
処理されたバチルス・メガテリウム細胞３５ｇ−に９．
Ｏｍｌの水を加え、細胞スラリーを攪拌しながら４５
°〜５０°Ｃに加温した。この加熱した細胞スラリーを
次いで攪拌しながら且つ温度を５０℃以上に維持しなが
ら５％寒天ゾルに加えた。細胞寒天懸濁液をよく混合し
て細胞な均一に分散させた。
Ｏｍｌの水を加え、細胞スラリーを攪拌しながら４５
°〜５０°Ｃに加温した。この加熱した細胞スラリーを
次いで攪拌しながら且つ温度を５０℃以上に維持しなが
ら５％寒天ゾルに加えた。細胞寒天懸濁液をよく混合し
て細胞な均一に分散させた。
細胞−寒天懸濁液を５５°Ｃに維持し、直径０１２５イ
ンチのノズルを通して約１リツトル／時間の速度で１０
°〜１５°Ｃに維持され攪拌された３、０Ｍ塩化ナトリ
ウムの溶液４４．０ ｍｌに注入した。固定化アスパル
ターゼを含有するバチルス・メガテリウム細胞を寒天繊
維内にとじ込めたものは、上記寒天−細胞懸濁液を冷生
理塩溶液の表面と接触させるとすぐ形成した。この細胞
を固定化した繊維をランプ（’ Ｌａｐｐ ）フィルタ
ーで沢取し、水で洗った。この触媒繊維の湿時重量は１
０６ｇ−でそのうち約３３％（３５，０１は固定化され
たバチルス・メガテリウム細胞であった。
ンチのノズルを通して約１リツトル／時間の速度で１０
°〜１５°Ｃに維持され攪拌された３、０Ｍ塩化ナトリ
ウムの溶液４４．０ ｍｌに注入した。固定化アスパル
ターゼを含有するバチルス・メガテリウム細胞を寒天繊
維内にとじ込めたものは、上記寒天−細胞懸濁液を冷生
理塩溶液の表面と接触させるとすぐ形成した。この細胞
を固定化した繊維をランプ（’ Ｌａｐｐ ）フィルタ
ーで沢取し、水で洗った。この触媒繊維の湿時重量は１
０６ｇ−でそのうち約３３％（３５，０１は固定化され
たバチルス・メガテリウム細胞であった。
触媒繊維のアスパルターゼ活性はゲル１２当り時間当り
生成されたＬ−アスパラギン酸約１．６８１、すなわち
固定化細胞ＩＰ（湿時）当り時間当り生成されたＬ−ア
スパラギン酸５０８ｆであった。したがって寒天−触媒
繊維中の活性の保持は処理された未固定化全細胞の活性
の９８．２％であった。
生成されたＬ−アスパラギン酸約１．６８１、すなわち
固定化細胞ＩＰ（湿時）当り時間当り生成されたＬ−ア
スパラギン酸５０８ｆであった。したがって寒天−触媒
繊維中の活性の保持は処理された未固定化全細胞の活性
の９８．２％であった。
この触媒繊維なカラム反応器で使用するまでフマール酸
アンモニウム基質中に保持した。
アンモニウム基質中に保持した。
例 ２
例１において調製されたアスパルターゼ含有触媒繊維９
５？を１４７１ｒｄ！ （２，５ｔ）ｍ×３０ ｏｎｂ
）のジャケット付ガラスカラムに充填した。４５°Ｃに
維持した水を上記カラムのジャケントに還流させ、１、
５ Ｍフマール酸アンモニウム基質溶液（１０ミリモル
Ｍｇ＋＋イオン含有）を前以って加熱するのに使用した
。前以って加熱された基質をカラムを通（７て７．３’
５ ｍｌ１分（３０床容量／時間）の速度で注入（上
から下へ）し、溶出物を集めた。溶出物をＨＰＬＣ（高
速液体クロマトグラフィー）で分析したところＬ−アス
パラギン酸が９８，３％のモル収率で生成していること
がわかった。５８％硫酸溶液で溶出物をρ日調節（３，
２に）することによって生成したＬ−アスパラギン酸を
回収した。回収率は、結晶化と顆粒化温度（４５℃〜２
５°Ｃ）に依って８４％〜９４％（乾燥時重量）であっ
た。
５？を１４７１ｒｄ！ （２，５ｔ）ｍ×３０ ｏｎｂ
）のジャケット付ガラスカラムに充填した。４５°Ｃに
維持した水を上記カラムのジャケントに還流させ、１、
５ Ｍフマール酸アンモニウム基質溶液（１０ミリモル
Ｍｇ＋＋イオン含有）を前以って加熱するのに使用した
。前以って加熱された基質をカラムを通（７て７．３’
５ ｍｌ１分（３０床容量／時間）の速度で注入（上
から下へ）し、溶出物を集めた。溶出物をＨＰＬＣ（高
速液体クロマトグラフィー）で分析したところＬ−アス
パラギン酸が９８，３％のモル収率で生成していること
がわかった。５８％硫酸溶液で溶出物をρ日調節（３，
２に）することによって生成したＬ−アスパラギン酸を
回収した。回収率は、結晶化と顆粒化温度（４５℃〜２
５°Ｃ）に依って８４％〜９４％（乾燥時重量）であっ
た。
例 ３
グルコース基質の上で２８°ＣでｐＨ６，８〜７０で好
気条件下に生育させたプロテ゛ウス・レットゲリ（Ｐｒ
ｏｔｅｕｓｒｅｔｔｇｅｒｉ）（ＡＴＣＣ３１０５２（
ＡＴＣＣ９，２５０））の培養物を遠心分離１−１分離
した細胞を水で洗った。洗った細胞５０１湿時）を２５
ｍ１Ｅの水と混合し、細胞スラリーを４５℃に加熱した
。５％寒天水溶液（バクトーアガール（Ｂａｃｔｏ −
Ａｇａｒ ） （ディフコ製）１００ｉｌを９５℃で調
製し５５℃に冷却した。前以って加熱ｌ−だプロテンス
・レットゲリ（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｒｅｔｔｇｅｒｉ ）
の細胞スラリーを寒天溶液と混合し、温度を５５℃に維
持した。
気条件下に生育させたプロテ゛ウス・レットゲリ（Ｐｒ
ｏｔｅｕｓｒｅｔｔｇｅｒｉ）（ＡＴＣＣ３１０５２（
ＡＴＣＣ９，２５０））の培養物を遠心分離１−１分離
した細胞を水で洗った。洗った細胞５０１湿時）を２５
ｍ１Ｅの水と混合し、細胞スラリーを４５℃に加熱した
。５％寒天水溶液（バクトーアガール（Ｂａｃｔｏ −
Ａｇａｒ ） （ディフコ製）１００ｉｌを９５℃で調
製し５５℃に冷却した。前以って加熱ｌ−だプロテンス
・レットゲリ（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｒｅｔｔｇｅｒｉ ）
の細胞スラリーを寒天溶液と混合し、温度を５５℃に維
持した。
尽天と細胞のスラリーを日経０１２５インチの供給チー
ーブを通して１０リットル／時間の速度で７００ ｍｌ
の（党拌され５〜１０℃に維持された３、ＯＭｖＡ化す
トリウム水溶液に注入した。ペニシリン−アンラーゼを
含有するプロテウス・レットゲリ（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｒ
ｅｔｔｇｅｒｉ ）細胞を寒天繊維にとり込んだものは
寒天と細胞のスラリーを上記生理食塩水と４妾触さぜろ
とすぐ形成した。この繊維の湿時重量は］ ７３Ｆ−で
あった。
ーブを通して１０リットル／時間の速度で７００ ｍｌ
の（党拌され５〜１０℃に維持された３、ＯＭｖＡ化す
トリウム水溶液に注入した。ペニシリン−アンラーゼを
含有するプロテウス・レットゲリ（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｒ
ｅｔｔｇｅｒｉ ）細胞を寒天繊維にとり込んだものは
寒天と細胞のスラリーを上記生理食塩水と４妾触さぜろ
とすぐ形成した。この繊維の湿時重量は］ ７３Ｆ−で
あった。
ペニシリンアンラーゼの活性についての研究は２２８′
！−の繊維な５６ωＩ＃Ｘ３．３ｆｆｉＬのシリンダー
状のガラス反応器に充填された繊維触媒について行った
。この反応器の温度は３７°ＧＫ維持され、１０屯量／
容量％のペニシリンＧカリウム塩（ｐ” ｓ、ｏ ）溶
液］、、０１１ノトルな前以って３７℃に９口熱し、２
２１〜４．８．７原紙１ｔ／時間（２９，９〜６５．９
ｍ１Ｚ分）の流速で反応器に通して再循環させた。水ｉ
゛１安化アンモニウム（１，ＯＮ）を再循環させたペニ
シリンＧ基質に加えてｐＨを８．０に維持した。そして
反応の進行は、添加された水酸化アンモニウムの量を監
視すること及び残留するペニシリンＧをＨＰＬＣ分析す
ることにより追跡された。反応器を３時間操作した後の
転化収率は１９％であった。
！−の繊維な５６ωＩ＃Ｘ３．３ｆｆｉＬのシリンダー
状のガラス反応器に充填された繊維触媒について行った
。この反応器の温度は３７°ＧＫ維持され、１０屯量／
容量％のペニシリンＧカリウム塩（ｐ” ｓ、ｏ ）溶
液］、、０１１ノトルな前以って３７℃に９口熱し、２
２１〜４．８．７原紙１ｔ／時間（２９，９〜６５．９
ｍ１Ｚ分）の流速で反応器に通して再循環させた。水ｉ
゛１安化アンモニウム（１，ＯＮ）を再循環させたペニ
シリンＧ基質に加えてｐＨを８．０に維持した。そして
反応の進行は、添加された水酸化アンモニウムの量を監
視すること及び残留するペニシリンＧをＨＰＬＣ分析す
ることにより追跡された。反応器を３時間操作した後の
転化収率は１９％であった。
（外５名）
Claims (11)
- （１）下記段階（ａ）ないしくＣ）よりなる酵素含有微
生物の細胞を固定化する方法： （ａ） 上記細胞を約４５°〜６０℃の温度で約１．
０〜８．０重量／重量％の硫酸残基を有する寒天水溶液
と接触させ： （ｂ） 無機ナトリウム塩の０．１０〜５．０Ｍ溶液
を約Ｏ°〜２０℃の温度で、上記（ａ）で形成された混
合物の流れ〆接触させて細胞を含有する寒天繊維を形成
させ： （ｃ）上記細胞を含有する寒天繊維を回収する。 - （２） （ａ） 上記寒天が２０〜３０重量／重量％の
硫酸残基を有し、 （ｂ） 上記無機ナトリウム塩の溶液が塩化ナトリウ
ムの３０〜５．０Ｍ溶液であり、 （ｃ）上記の塩溶液が５°〜１５℃の温度である特許請
求の範囲第１項の方法。 - （３）上記微生物の細胞がアスパルターゼ（アスパラギ
ン酸アンモニウム分解酵素）を含有している特許請求の
範囲第１項記載の方法。 - （４）微生物の細胞がペニシリンアシラーゼを含有する
特許請求の範囲第１項記載の方法。 - （５）アスパルターゼを含有する微生物細胞がバチルス
・メガテリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉ
ｕｍ ）のものである特許請求の範囲第３項記載の方法
。 - （６）上記ペニシリンアシラーゼ含有微生物細胞がプロ
テウス・レットゲリ（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｒｅｔｔｇｅｒ
ｉ ）のものである特許請求の範囲第４項記載の方法。 - （７）バチルス・メガテリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍ
ｅｇａｔｅｒｉｕｍ）のアスパルターゼ含有細胞をまず
フマレートまたはアスパルテートイオンの０１〜２．０
Ｍ溶液と１５〜４５℃で接触させる特許請求の範囲第３
項記載の方法。 - （８）細胞含有寒天繊維をｐ＋ｉ３．０〜９５で約２５
゜〜５５℃ノ温度でフマール酸アンモニウムのＯ１〜２
．０Ｍ溶液と接触させる特許請求の範囲第３項記載の方
法。 - （９）固定化された酵素含有微生物、ｆζＩＴＩ胞を含
有する寒天繊維、。 - （１０）上記細胞がバチラス・メガテリウム（Ｂａｃｉ
ｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ ）のものである特許
請求の＆ｉｐ１間、凧９項記載の繊維。 - （１１）上記細胞がプロテウス・レットケリ（Ｐｒｏｔ
ｅｕｓ ｒｅｔｔｇｅｒｉ ）のものである特許請求の
範囲第９項記載の、（１維。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US492780 | 1983-05-09 | ||
| US06/492,780 US4578354A (en) | 1983-05-09 | 1983-05-09 | Immobilization of catalytically active microorganisms in agar gel fibers |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS59205981A true JPS59205981A (ja) | 1984-11-21 |
| JPH0257919B2 JPH0257919B2 (ja) | 1990-12-06 |
Family
ID=23957604
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59092739A Granted JPS59205981A (ja) | 1983-05-09 | 1984-05-09 | 微生物の固定化方法および固定化微生物を含む寒天繊維 |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4578354A (ja) |
| EP (1) | EP0125105B1 (ja) |
| JP (1) | JPS59205981A (ja) |
| AT (1) | ATE41675T1 (ja) |
| CA (1) | CA1215336A (ja) |
| DE (1) | DE3477401D1 (ja) |
| DK (1) | DK227184A (ja) |
| GR (1) | GR82091B (ja) |
| IE (1) | IE57369B1 (ja) |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB2189809A (en) * | 1986-05-03 | 1987-11-04 | Michael Storey Otterburn | Immobilized biological material |
| US4950601A (en) * | 1987-03-17 | 1990-08-21 | Kimberly-Clark Corporation | Immobilied blue-green algae in sheet form |
| US4879232A (en) * | 1987-03-17 | 1989-11-07 | Kimberly-Clark Corporation | Multilayered structure containing immobilized blud-green algae |
| US4921803A (en) * | 1987-03-17 | 1990-05-01 | Kimberly-Clark Corporation | Immobilized blue-green algae |
| US5053332A (en) * | 1989-07-24 | 1991-10-01 | Cook Richard B | Agarose beads, preferably incorporating biological materials |
| IL95429A (en) * | 1989-09-15 | 1997-09-30 | Organogenesis | Living tissue equivalents comprising hydrated collagen lattice and a collagen gel and their production |
| JP2664648B2 (ja) * | 1994-05-20 | 1997-10-15 | 株式会社日本触媒 | Ｌ−アスパラギン酸の製造方法 |
| EP0948784B1 (de) * | 1996-12-04 | 2002-03-20 | Erbe Elektromedizin GmbH | Künstliches gewebe |
| CN1088755C (zh) * | 1997-08-25 | 2002-08-07 | 中国科学院化工冶金研究所 | 以琼脂－明胶复合微珠为载体的固定化青霉素酰化酶及其制法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5095470A (ja) * | 1973-12-28 | 1975-07-29 | ||
| JPS5495744A (en) * | 1976-01-08 | 1979-07-28 | Showa Sangiyou Kk | Isomerizing method of glucose to fructose |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3214345A (en) * | 1958-11-20 | 1965-10-26 | Tanabe Seiyaku Co | Process for producing l-aspartic acid |
| IL32406A (en) * | 1968-06-26 | 1973-01-30 | Snam Progetti | Enzyme preparations comprising a solution or dispersion of enzyme occluded in filaments of cellulose esters or synthetic polymers |
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