JPS58190399A - ６−アミノペニシラン酸の製造方法 - Google Patents
６−アミノペニシラン酸の製造方法Info
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- JPS58190399A JPS58190399A JP7369982A JP7369982A JPS58190399A JP S58190399 A JPS58190399 A JP S58190399A JP 7369982 A JP7369982 A JP 7369982A JP 7369982 A JP7369982 A JP 7369982A JP S58190399 A JPS58190399 A JP S58190399A
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、固定化酵素法による乙−アミｌベニソラン酸
（乙−ＡＰＡ）０）製法に関する１、従来、ペニシリン
から乙−Ａ Ｐ Ａを酵素的に生産する方法と［７て、
微生物を直接用いる方法ならびにその微生物から得られ
ｒコ酵素をとり出して使用する方法などが知られている
。酵素をとり出１７て使用する方法についても、ペニシ
リンアシラーゼを水溶性のまま使用する方法、ま１こは
不溶化して使用する方法などが報告されている。
（乙−ＡＰＡ）０）製法に関する１、従来、ペニシリン
から乙−Ａ Ｐ Ａを酵素的に生産する方法と［７て、
微生物を直接用いる方法ならびにその微生物から得られ
ｒコ酵素をとり出して使用する方法などが知られている
。酵素をとり出１７て使用する方法についても、ペニシ
リンアシラーゼを水溶性のまま使用する方法、ま１こは
不溶化して使用する方法などが報告されている。
微生物を直接用いる方法は、菌体内にあるペニシリンア
シラーゼ以恐の酵素（例えばペニシリナーゼ）の影響で
高収率に高純度の乙−ＡＰＡ＆得ることが困難であり、
ペニシリンアシラーゼを水溶性のまま使用する方法は反
応終了後の乙−ＡＰＡと酵素の分離に問題が残る。
シラーゼ以恐の酵素（例えばペニシリナーゼ）の影響で
高収率に高純度の乙−ＡＰＡ＆得ることが困難であり、
ペニシリンアシラーゼを水溶性のまま使用する方法は反
応終了後の乙−ＡＰＡと酵素の分離に問題が残る。
ペニシリンアシラーゼを不溶化して使用する方法は牛成
乙ＡＰＡの純度が高く、酵素を繰返し便用１．うろ点で
優れており、現在実用化方法の主流となっている。こＵ
）うち担体としてイオン交換樹脂を用いる方法も公・知
（１コとえば、特公昭ｊ乙２改３／乙号公報参照）であ
る。しか１．なから。
乙ＡＰＡの純度が高く、酵素を繰返し便用１．うろ点で
優れており、現在実用化方法の主流となっている。こＵ
）うち担体としてイオン交換樹脂を用いる方法も公・知
（１コとえば、特公昭ｊ乙２改３／乙号公報参照）であ
る。しか１．なから。
該公報に開示されｒコイオン交換樹脂、１コとえぽアツ
バ−ライ１． Ｉ Ｒ−、４５（ＯＴｉ型樹脂）は多孔
質でなく、スペーサ一部を有しない１こめ、固定すべき
酵素に９体障害ない［７，交叉結合が生ずる１こめ。
バ−ライ１． Ｉ Ｒ−、４５（ＯＴｉ型樹脂）は多孔
質でなく、スペーサ一部を有しない１こめ、固定すべき
酵素に９体障害ない［７，交叉結合が生ずる１こめ。
満足すべき結果が得られない。
本発明者らは、これらの問題点につき鋭意検討の結果、
スチレン／ジビニルベンゼン共重合体の交換基と１７で
ポリアミンを導入し１こ多孔質の弱塩基性陰イオン交換
樹脂が、この目的のｆコめの酵素担体としてずくれてい
ることを見出しｆこ。これをジイソシアネートま１こは
ジイソチオノアネートによって活性化すれば緩和な条件
のもとて容易にべ定 ニンリノアシラーゼを緊しうるものであることも見出し
、之にもとづいて本発明を完成１，１コ。
スチレン／ジビニルベンゼン共重合体の交換基と１７で
ポリアミンを導入し１こ多孔質の弱塩基性陰イオン交換
樹脂が、この目的のｆコめの酵素担体としてずくれてい
ることを見出しｆこ。これをジイソシアネートま１こは
ジイソチオノアネートによって活性化すれば緩和な条件
のもとて容易にべ定 ニンリノアシラーゼを緊しうるものであることも見出し
、之にもとづいて本発明を完成１，１コ。
すなオ）ち本発明によれば、固定化酵素法によるペニシ
リンを原料とする乙−アミノベニンフン酸の製造方法に
むいて、スチレン、・′シヒニルベンゼノのＪ（重合体
にポリアミンを導入しｒコ多孔質弱塩基性陰イオノ交換
樹脂担体にシイノンアナ−トマＴこはジイノチオシアナ
ーｌ□ ｋ 活性化剤トしてベニノリンアシラーゼタ・
固定化しｆこ固定化酵素り・使用この方法は以下の諸点
においてずぐれている。
リンを原料とする乙−アミノベニンフン酸の製造方法に
むいて、スチレン、・′シヒニルベンゼノのＪ（重合体
にポリアミンを導入しｒコ多孔質弱塩基性陰イオノ交換
樹脂担体にシイノンアナ−トマＴこはジイノチオシアナ
ーｌ□ ｋ 活性化剤トしてベニノリンアシラーゼタ・
固定化しｆこ固定化酵素り・使用この方法は以下の諸点
においてずぐれている。
（１）担体として、その物Ｆ１１的強度が充分であり。
ツノラム充填用に適し１コ粒子径のものが容易に入手可
能である点。
能である点。
（２）交換基として導入されているポリアミノの鎖有結
合が容易である点。
合が容易である点。
（３）担体当りの酵素活性が充分で、固定化酵素と１、
て安定性も高い点。
て安定性も高い点。
（４）担体に対するペニシリン、乙−ＡＰＡなとの非特
異的吸着がほと／ｌ、どなく、高収率で乙＝ＡＰＡが得
られる点。
異的吸着がほと／ｌ、どなく、高収率で乙＝ＡＰＡが得
られる点。
（５）ペニシリンアシラーゼ不・固定化する操作がきオ
）めて容品で、ｔ・−）再現性が良い点。
）めて容品で、ｔ・−）再現性が良い点。
本発明方法で使用するペニシリンアシラーゼは。
■：として微生物産生酵素、とくにその培養液より得ら
れるものである。充分ｊｃ活性苓・有−するベニンリノ
アンラーゼが得られる限り、いかなる菌株に由来するも
のであっても差支えない。
れるものである。充分ｊｃ活性苓・有−するベニンリノ
アンラーゼが得られる限り、いかなる菌株に由来するも
のであっても差支えない。
こうしｆこペニシリンアシラーゼ生産菌株を培養Ｌ７．
菌体内に蓄積され、あるいは菌体外に分泌され培養液中
に蓄積されＴこペニシリンアシラーゼを採取し、未精製
のまま、あるいは精製し１こものが使用できる。
菌体内に蓄積され、あるいは菌体外に分泌され培養液中
に蓄積されＴこペニシリンアシラーゼを採取し、未精製
のまま、あるいは精製し１こものが使用できる。
好マ１７いペニシリンアシラーゼ生産菌は、菌体外にペ
ニシリンアシラーゼを分泌し、これを培養液中に蓄積す
るバチルスメガテリウムに属する菌である。Ｔことえば
公知のバチルス・メガテリウム・バー・ペニンリティカ
ム（ＡＴＣＣ／１１９Ｌ５− ）あるいはバチルス・メ
カチリウム・バー・ノノシトロボラム（ＡＴＣＣ／＆９
４乙）が挙げられる。これらの菌を使用する場合、培養
は通常の培地を使用し。
ニシリンアシラーゼを分泌し、これを培養液中に蓄積す
るバチルスメガテリウムに属する菌である。Ｔことえば
公知のバチルス・メガテリウム・バー・ペニンリティカ
ム（ＡＴＣＣ／１１９Ｌ５− ）あるいはバチルス・メ
カチリウム・バー・ノノシトロボラム（ＡＴＣＣ／＆９
４乙）が挙げられる。これらの菌を使用する場合、培養
は通常の培地を使用し。
発酵温度２５〜３５″Ｃて通常の通気、攪拌条件で行い
２〜３日で終ｒオる。このようにして得た発酵液は遠心
分離により除菌し、公知の方法によ−）で精製すること
ができる。ｆコとえば上清液中の蛋白質を硫安塩析によ
り０縮するか、’Ｌｆコはセライトノような吸着剤に蛋
白質を吸着させ１強いイオン強度を持つｆこ緩衝液で溶
離し、ペニシリンアシラーゼ画分を収集し、透析を行う
ことにより部分精製ペニシリンアシラーゼ水溶液を得る
ことができる。
２〜３日で終ｒオる。このようにして得た発酵液は遠心
分離により除菌し、公知の方法によ−）で精製すること
ができる。ｆコとえば上清液中の蛋白質を硫安塩析によ
り０縮するか、’Ｌｆコはセライトノような吸着剤に蛋
白質を吸着させ１強いイオン強度を持つｆこ緩衝液で溶
離し、ペニシリンアシラーゼ画分を収集し、透析を行う
ことにより部分精製ペニシリンアシラーゼ水溶液を得る
ことができる。
本発明において固定化に使用する担体は、スチレン／ジ
ビニルベンゼン共重合体を母核として。
ビニルベンゼン共重合体を母核として。
交換基にポリアミンを導入しｆこ多孔質の弱塩基性陰イ
オン交換樹脂であり、該当する市販品を使用するのがよ
い。この担体の孔径分布は９通常の蛋白質が浸透できる
範囲（２θθ〜／３θθＸ）であればいかなるものであ
ってもよい。
オン交換樹脂であり、該当する市販品を使用するのがよ
い。この担体の孔径分布は９通常の蛋白質が浸透できる
範囲（２θθ〜／３θθＸ）であればいかなるものであ
ってもよい。
ま１コ１粒子径は１０θ〜ｌＯθθμの範囲にあること
が好ましい。さらに交換基ポリアミンとしてはいかなる
ポリアミンであってもよいが例えば−、ＮＨ（Ｃ，２Ｈ
，ＮＨ）ｎＣ２Ｈ４ｔＮＨ，を用いる場合、ｎの数は特
に制限はないが／〜／θの範囲にあることが望ましい。
が好ましい。さらに交換基ポリアミンとしてはいかなる
ポリアミンであってもよいが例えば−、ＮＨ（Ｃ，２Ｈ
，ＮＨ）ｎＣ２Ｈ４ｔＮＨ，を用いる場合、ｎの数は特
に制限はないが／〜／θの範囲にあることが望ましい。
好適な担体こしては、三菱化成工業（株）よりタイヤイ
オノＣＲ−，２θおよびＷＡ−ユθの商品名のもとに市
販されているものが挙げられる。
オノＣＲ−，２θおよびＷＡ−ユθの商品名のもとに市
販されているものが挙げられる。
■−，記担体にペニシリンアシラーゼを固定化するには
、ジイソシアナート、ジイソチオシアナートのような二
官能性試薬を用いて担体を活性化し。
、ジイソシアナート、ジイソチオシアナートのような二
官能性試薬を用いて担体を活性化し。
担体のアミノ基と、ペニシリンアシラーゼのアミノ残基
（リジンあるいはアルギニンのアミノ残基）ま１こはチ
ロジノのフェノール性水酸基とを共有結合させることに
より行う。ジイソシアナート、ジイソチオシアナートを
用いて担体を活性化する場合、前もって担体を極性溶媒
で十分洗浄し、脱水しておく必要があるのは当然である
。
（リジンあるいはアルギニンのアミノ残基）ま１こはチ
ロジノのフェノール性水酸基とを共有結合させることに
より行う。ジイソシアナート、ジイソチオシアナートを
用いて担体を活性化する場合、前もって担体を極性溶媒
で十分洗浄し、脱水しておく必要があるのは当然である
。
このようにして得られＴこ固定化ペニシリンアシラーゼ
を用いてペニシリンより乙−ＡＰＡを生産する場合、固
定化酵素をタンクの中に入れてペニシリン水溶液と混合
攪拌しながら反応を行うこともできるが、固定化酵素を
カラムに充填してペニシリン水溶液を貯槽とカラムの間
を循環させながら反応することも出来る。この反応によ
って高純度の乙−ＡＰＡを得るには原料ペニシリンを含
む反応溶液に当初から加える緩衝剤の濃度は低くしなけ
ればならない。し１こがって１反応溶液には反応の進行
中連続的に水酸化アルカリを添加して。
を用いてペニシリンより乙−ＡＰＡを生産する場合、固
定化酵素をタンクの中に入れてペニシリン水溶液と混合
攪拌しながら反応を行うこともできるが、固定化酵素を
カラムに充填してペニシリン水溶液を貯槽とカラムの間
を循環させながら反応することも出来る。この反応によ
って高純度の乙−ＡＰＡを得るには原料ペニシリンを含
む反応溶液に当初から加える緩衝剤の濃度は低くしなけ
ればならない。し１こがって１反応溶液には反応の進行
中連続的に水酸化アルカリを添加して。
を貯槽とカラムとの間を循環させながら反応を行う場合
、この調整はカラム流出液について貯槽内で行うことが
好ましい。まｆコ循環流速は毎時９反応溶液の７０〜．
５０倍とする。担体はこうし１こ高流速でカラム内を液
が流下１．でも、圧損失があまりかからないように選ば
れているため、カラムの設計には特別の工夫はいらない
。通常循環反応はペニシリンの９ｊ％以上が乙−ＡＰＡ
に転換されるまで続け９反応は７０時間以内で終了する
。反応終点は上記水酸化アルノノリの所要量が減少し。
、この調整はカラム流出液について貯槽内で行うことが
好ましい。まｆコ循環流速は毎時９反応溶液の７０〜．
５０倍とする。担体はこうし１こ高流速でカラム内を液
が流下１．でも、圧損失があまりかからないように選ば
れているため、カラムの設計には特別の工夫はいらない
。通常循環反応はペニシリンの９ｊ％以上が乙−ＡＰＡ
に転換されるまで続け９反応は７０時間以内で終了する
。反応終点は上記水酸化アルノノリの所要量が減少し。
はとＡ２ど要しなくなる点である。ま１こ反応温度はユ
θ〜ｔｔｏ”Ｃの間で、ペニシリンの濃度は３〜ｌｊｗ
ｔ％の範囲で使用するのがよい。
θ〜ｔｔｏ”Ｃの間で、ペニシリンの濃度は３〜ｌｊｗ
ｔ％の範囲で使用するのがよい。
上記のようにして得１：反応終了液から、６−ＡＰＡｉ
とり出す１こめには１反応終了液中のカルボッ酸（ペニ
シリンがペニシリンＧであるとき、カルボン酸はフェニ
ル酢酸となる）及び残存しているペニシリンを抽出によ
り除いＴこのち、乙−ＡＰＡう・晶析してもよいが９反
応終了液か’Ｍ”ｌ−Ａ Ｐ Ａを直接とり出す方法も
用いられる。後者の場合。
とり出す１こめには１反応終了液中のカルボッ酸（ペニ
シリンがペニシリンＧであるとき、カルボン酸はフェニ
ル酢酸となる）及び残存しているペニシリンを抽出によ
り除いＴこのち、乙−ＡＰＡう・晶析してもよいが９反
応終了液か’Ｍ”ｌ−Ａ Ｐ Ａを直接とり出す方法も
用いられる。後者の場合。
反応終了液と適当な溶媒（メタノール、エタノールなど
）を混合１２．乙−ＡＰＡを等電点＼沈澱させることに
より得られる。
）を混合１２．乙−ＡＰＡを等電点＼沈澱させることに
より得られる。
次の参考例および実施例によって本発明の実施態様をさ
らに詳細に説明する。
らに詳細に説明する。
参考例（ベニシリノアシラーゼ扮調製）グルコース０７
％、コーン・スチーブ・リカー〇ｊ％、結合アミノ酸粉
末（味の素（株）製）θｊ％、リン酸−カリウム０／ｊ
％およびＮａ（４０２３；％を含む種培養培地（ｐＨ７
０，／ユ０″ｃ、ｉｓ分滅菌）０１１１！？２（ｔフラ
スコに分取し、これにバチルス・メカチリウムＡＴＣＣ
／１４５を／白金耳植菌し、ｌＳ時間振とう培養１．ｒ
＝。この種培養液／乙ｌを種培養培地と同じ組成の培地
７３／に植菌＋、、１ｏｏＩ′容の発酵槽で３日間培養
し１コ（通気量θ、５ＶＶＭ、攪拌、２ Ｋ Ｏｒｐｍ
、温度ｕ、ｒ”ｃ）。
％、コーン・スチーブ・リカー〇ｊ％、結合アミノ酸粉
末（味の素（株）製）θｊ％、リン酸−カリウム０／ｊ
％およびＮａ（４０２３；％を含む種培養培地（ｐＨ７
０，／ユ０″ｃ、ｉｓ分滅菌）０１１１！？２（ｔフラ
スコに分取し、これにバチルス・メカチリウムＡＴＣＣ
／１４５を／白金耳植菌し、ｌＳ時間振とう培養１．ｒ
＝。この種培養液／乙ｌを種培養培地と同じ組成の培地
７３／に植菌＋、、１ｏｏＩ′容の発酵槽で３日間培養
し１コ（通気量θ、５ＶＶＭ、攪拌、２ Ｋ Ｏｒｐｍ
、温度ｕ、ｒ”ｃ）。
この培養液を遠心分離により除菌Ｉ７．上清液のｐＨを
７．５に調整１７．セライトど０θｇ（ジョーノス・マ
ンヒル セールス社ＩＪｊ 、 Ａ、 ３ ’ｌ 、５
）’ｆｅ 加え。
７．５に調整１７．セライトど０θｇ（ジョーノス・マ
ンヒル セールス社ＩＪｊ 、 Ａ、 ３ ’ｌ 、５
）’ｆｅ 加え。
ゆるやかに攪拌しなか；）７時間室温で吸着させｆコ。
吸着後吸引沖過してセライトを集め、少量の蒸留水で水
洗夜中ライトｉｔの約２倍の蒸留水にセライトを懸濁し
てカラムに充填し、２４％硫酸アンモニウムを含む０／
Ｍホウ酸緩衝液（ｐＨ＆、ｔ）でペニシリンアシラーゼ
をｉ出Ｌ１こ。ペニシリンアシラーゼ活性を示す溶出区
分を集め（溶出液量／乙θ肩ｔ、ペニンリンアシラーゼ
活性３２ Ｕ／ｍｌ ）００２Ｍホウ酸緩衝液（ｐＨｇ
、θ）で透析を行いペニシリンアシラーゼ水溶液（２０
Ｕ／Ｍｌ）２．！；θｙｐｔｌを得１こ。
洗夜中ライトｉｔの約２倍の蒸留水にセライトを懸濁し
てカラムに充填し、２４％硫酸アンモニウムを含む０／
Ｍホウ酸緩衝液（ｐＨ＆、ｔ）でペニシリンアシラーゼ
をｉ出Ｌ１こ。ペニシリンアシラーゼ活性を示す溶出区
分を集め（溶出液量／乙θ肩ｔ、ペニンリンアシラーゼ
活性３２ Ｕ／ｍｌ ）００２Ｍホウ酸緩衝液（ｐＨｇ
、θ）で透析を行いペニシリンアシラーゼ水溶液（２０
Ｕ／Ｍｌ）２．！；θｙｐｔｌを得１こ。
ここで、／ＵとはＪ、、ｒ”（”’：、θ／ Ｍ ＩＩ
ン酸緩衝液（ｐＨ’７５）を用いｆことき７分間に／μ
Ｍの乙−ＡＰＡを生成オる酵素量と定義１７ている。
ン酸緩衝液（ｐＨ’７５）を用いｆことき７分間に／μ
Ｍの乙−ＡＰＡを生成オる酵素量と定義１７ている。
実施例／
（１）ペニシリンアシラーゼの固定化
ダイヤイオンＣＲ−１０（三菱化成工業Ｃ株）製）ろ・
ジノチルホルムアミドで充分洗浄し、脱水しｔこ。
ジノチルホルムアミドで充分洗浄し、脱水しｔこ。
この担体、！；０９（湿重量）をｌ〆−ジイソシアナ−
１・ヘキサノ３３ｍ１／ジメチルホルムアミド３７ｊｖ
ｔｌに加λ−９室温で、２時間攪拌１，１コ。反応、後
ジ、メチルホルムアミドでよく洗浄り、未反応のジイソ
シアナートヘキサンをとり除き、参考例で得１こ酵素Ｆ
ｔ２ ！； Ｏｘｔ （２０Ｕ／＊ｌ）中に懸濁し、２
♂”ｃ。
１・ヘキサノ３３ｍ１／ジメチルホルムアミド３７ｊｖ
ｔｌに加λ−９室温で、２時間攪拌１，１コ。反応、後
ジ、メチルホルムアミドでよく洗浄り、未反応のジイソ
シアナートヘキサンをとり除き、参考例で得１こ酵素Ｆ
ｔ２ ！； Ｏｘｔ （２０Ｕ／＊ｌ）中に懸濁し、２
♂”ｃ。
を時間反応させｙ、＝。反応後７濾過し、ｏ／Ｍｌｌン
酸緩衝液（ｐＴ（ｚ ） 及（Ｆ Ｏ／ Ｍ リン酸緩
衝液（０！；ＭＮａＣＩ！含有、 ｐＨざ）でよく洗浄
１／ ｌ固定化ペニシリンアシラーゼを得１こ（湿潤担
体の活性：４ｔｊＵ／ｇ）。
酸緩衝液（ｐＴ（ｚ ） 及（Ｆ Ｏ／ Ｍ リン酸緩
衝液（０！；ＭＮａＣＩ！含有、 ｐＨざ）でよく洗浄
１／ ｌ固定化ペニシリンアシラーゼを得１こ（湿潤担
体の活性：４ｔｊＵ／ｇ）。
（２） ｇ−アミノペニシラン酸の生成（１）で調整し
１こ固定化ペニシリンアシラーゼｊθカリウムコθｇを
００２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨｆ）２ｇθｍｌに溶解し、
ＤＨとｊに調節し１こもの）をｎ１１１１７分で流１
２．熱交換器を用いて反応液をユｇ″ＣにＦ１節Ｌ１こ
。カラム流出液はｐＨが下がって出てくる１こめ１反応
液貯槽内で／ｊＮ水酸化ナトリウムを用いてＩ）Ｈ，５
’：４ｔ〜９に調節し１こ。この操作を３ノ時間継続１
７て水酸化ナトリウムの添加をほとんど要１７なくなっ
７５時点を反応の終点とＬｒこ。この反−ルを加え、７
０°Ｃまで冷却、６Ｎ塩酸でＴ）ＨＩＡ３まで低下させ
ｒコ。この液を冷蔵庫で一夜熟成し。
１こ固定化ペニシリンアシラーゼｊθカリウムコθｇを
００２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨｆ）２ｇθｍｌに溶解し、
ＤＨとｊに調節し１こもの）をｎ１１１１７分で流１
２．熱交換器を用いて反応液をユｇ″ＣにＦ１節Ｌ１こ
。カラム流出液はｐＨが下がって出てくる１こめ１反応
液貯槽内で／ｊＮ水酸化ナトリウムを用いてＩ）Ｈ，５
’：４ｔ〜９に調節し１こ。この操作を３ノ時間継続１
７て水酸化ナトリウムの添加をほとんど要１７なくなっ
７５時点を反応の終点とＬｒこ。この反−ルを加え、７
０°Ｃまで冷却、６Ｎ塩酸でＴ）ＨＩＡ３まで低下させ
ｒコ。この液を冷蔵庫で一夜熟成し。
析出１． ｒ、ｍ結晶を瀘取１２．メタノールで洗浄、
乾燥１ノてＡ−ＡＰＡの結晶／θ／ｇ（収率ざ７％、純
度９９％）を得た。この反応を１０ｇ回くり返１７ｆこ
ところ、固定化ペニシリンアシラーゼの活性は初期活性
の約％にまで低下しｒこが、／１．−ＡＰＡの収率及び
純度の低下は認められなかった。
乾燥１ノてＡ−ＡＰＡの結晶／θ／ｇ（収率ざ７％、純
度９９％）を得た。この反応を１０ｇ回くり返１７ｆこ
ところ、固定化ペニシリンアシラーゼの活性は初期活性
の約％にまで低下しｒこが、／１．−ＡＰＡの収率及び
純度の低下は認められなかった。
実施例ユ
実施例／に記載と同様の方法を実施ｔ、ｙ、＝。
但し、実施例／で使用１，１こダイヤイオンＣＲ−２０
に代え同社製のダイヤイオンＷＡ−，２θを用い。
に代え同社製のダイヤイオンＷＡ−，２θを用い。
湿潤担体活性： ２０ Ｕ／９の固定化ペニシリンアシ
ラーゼを得ｆこ。
ラーゼを得ｆこ。
この固定化ペニシリンアシラーゼユθ９（Ｈ＄量）をカ
ラム（内径３θ×ｔｊα）に充填ｊ７．ベニノリンＧカ
リウム溶液（ペニシリンＧ 乙Ｏｆ ヲθθｕＭＩＪン
酸緩衝液（ｐＨ♂）ざ３ｘｌに溶解、ｐＨｆ３に調節）
を３θｘｉ／分で流し、実施例／記載の操作と同様の操
作を行つｆコところ、乙−ＡＰＡの結晶３θｇを得ｆこ
。
ラム（内径３θ×ｔｊα）に充填ｊ７．ベニノリンＧカ
リウム溶液（ペニシリンＧ 乙Ｏｆ ヲθθｕＭＩＪン
酸緩衝液（ｐＨ♂）ざ３ｘｌに溶解、ｐＨｆ３に調節）
を３θｘｉ／分で流し、実施例／記載の操作と同様の操
作を行つｆコところ、乙−ＡＰＡの結晶３θｇを得ｆこ
。
（収率ざ３％、純度９ざ５％）
この反応を７０回繰返（７１コが収率、純度の低下はみ
られなかつｆこ。
られなかつｆこ。
実施例３
実施例／と同様の操作をＸ乙−ジイソシアナートヘキサ
ンに代えジイソチオシアノ酸バラフェニレンを使用して
行い１次の結果を得ｆコ。
ンに代えジイソチオシアノ酸バラフェニレンを使用して
行い１次の結果を得ｆコ。
担体：ダイヤイオンＣＲ−ユθ、ｓｏｙ活性化剤ニジイ
ソ千オシアン酸バラフェニレン、３０ｇ 湿潤担体活性：３！；Ｕ／９ 乙−ＡＰＡ収率：ｇ乙％ 純度＝９と５％ この結果は反復回数７０回後でも不変であつｆコ。
ソ千オシアン酸バラフェニレン、３０ｇ 湿潤担体活性：３！；Ｕ／９ 乙−ＡＰＡ収率：ｇ乙％ 純度＝９と５％ この結果は反復回数７０回後でも不変であつｆコ。
Claims (3)
- （１）固定化酵素法によるペニシリンを原料とする６−
アミツベニシフン酸の製造方法において、スチレン／ジ
ビニルベンゼンの共重合体にポリアミンを導入しＴコ多
孔質弱塩基性陰イオン交換樹脂担体にジイソシアナート
ま１こはジイソチオシアナートを活性化剤としてペニシ
リンアンラーゼを固定化した固定化酵素を使用すること
を特徴とする方法。 - （２）ペニシリンアシラーゼがバチルス・メカチリウム
に属する微生物の産生酵素であることを特徴とする特許
請求の範囲（１）記載の方法。 - （３）ペニシリンがペニシリンＧであるｎ 許請求の範
囲（１）記載の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7369982A JPS58190399A (ja) | 1982-04-30 | 1982-04-30 | ６−アミノペニシラン酸の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7369982A JPS58190399A (ja) | 1982-04-30 | 1982-04-30 | ６−アミノペニシラン酸の製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58190399A true JPS58190399A (ja) | 1983-11-07 |
Family
ID=13525717
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7369982A Pending JPS58190399A (ja) | 1982-04-30 | 1982-04-30 | ６−アミノペニシラン酸の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS58190399A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4981789A (en) * | 1987-03-18 | 1991-01-01 | Merck & Co., Inc. | One-step enzymatic conversion of cephalosporin C and derivatives to 7-aminocephalosporanic acid and derivatives |
| US5104800A (en) * | 1989-06-27 | 1992-04-14 | Merck & Co., Inc. | One-step cephalosporin c amidase enzyme |
| US5229274A (en) * | 1989-06-27 | 1993-07-20 | Merck & Co., Inc. | Gene encoding one step cephalosporin C amidase and expression thereof in recombinant bacillus |
-
1982
- 1982-04-30 JP JP7369982A patent/JPS58190399A/ja active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4981789A (en) * | 1987-03-18 | 1991-01-01 | Merck & Co., Inc. | One-step enzymatic conversion of cephalosporin C and derivatives to 7-aminocephalosporanic acid and derivatives |
| US5104800A (en) * | 1989-06-27 | 1992-04-14 | Merck & Co., Inc. | One-step cephalosporin c amidase enzyme |
| US5229274A (en) * | 1989-06-27 | 1993-07-20 | Merck & Co., Inc. | Gene encoding one step cephalosporin C amidase and expression thereof in recombinant bacillus |
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