JPS59192084A - 血中細菌の分離培養法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ■９発明の背景 技術分野 本発明は、血液中の細菌を分離し、培養する新規な方法
に関するものである。

敗血症や菌血症等重篤な全身感染症においては患者血液
中に細菌が存在しているので、これら感染症の診断には
血液の細菌検査が行なわれる。また抗菌剤の動物試験に
よる薬効判定においても血液の細菌検査が行なわれる。

これらの細菌検査には先ず検体血液から細菌を培養およ
び分離することが必要であり、次いで菌数の測定や菌の
同定等が行なわれる。本発明の方法はこのよう々細菌検
査に利用される。

（先行技術および問題点） 従来、血中細菌の培養および分離は、採取した血液を液
体栄養培地と混合して培地が増殖した菌で濁るまで培養
し゛、次に増殖した菌を採取分離して血液寒天平板、チ
ョコレート寒天平板って菌種ごとのコロニー育成が行な
われている。

このように従来法においては血液から少ない細菌を直接
分離して培養することが困難であシ、コロニーを育成す
る前処理として増菌培養という付加的操作で菌数を増す
ことを必要とするため繁雑な操作と時間を要している。

特に上記のような液体中での増菌培養は一般に１日ない
し１０日の長時間を要するし更にコロニー育成に１日〜
２日を要していた。また血液はそれ自体菌の増殖を抑制
する作用を有し、抗菌剤が投与されている場合には血液
中での菌の増殖は一層困難であり、検体中の細菌数が少
ない場合には検出不可能な場合もある。さらに菌を分離
培地へ移植する際、環境汚染や培地への雑菌混入のおそ
れもある。

■１発明の目的 従って本発明の目的は、血中細菌の増菌培養等の付加的
操作を必要とせず、直接血液中の細菌を集め、他の培地
に分離移植することなくその′ｉ！を細菌を分離培養し
て短時間でコロニーを育成することが可能な方法を提供
することにある。

■１発明の詳細な説明 本発明は第１に、細菌浪人血液を溶血剤および抗血液凝
固剤からなる溶液と混合し、該混合物を、液体培地を含
浸乾燥させた吸水体と該吸水体の上面に接着された細菌
を通さない大きさの孔を有するフィルタとを容器に収容
してなるろ過培養器でろ過し、ろ過されたフィルタ上の
細菌をそのまま培養することを特徴とする血中細菌の分
離培養法からなる。

本発明は第２に、細菌浪人血液を溶血剤、抗血液凝固剤
および液体培地からなる溶液と混合し、該混合物を、吸
水体と該・吸水体の上面に接着された細菌を通さない大
きさの孔を有するフィルタとを容器に収容してなるろ過
培養器でろ過し、ろ過されたフィルタ上の細菌をそのま
ま培養することを特徴とする血中細菌の分離培養法から
なる。

本発明の方法を実施するに際しては、先ず、採血した細
菌浪人血液を溶血剤および抗血液凝固剤からなる溶液と
混合する。この操作は、次のろ過操作のための前処理で
あυ、赤血球の溶血と凝血の防止を目的として行なわれ
る。使用される溶血剤および抗血液凝固剤には特に制限
はなく、それ自体公知のものが用いられる。例えば溶血
剤としてはサポニンが好適に使用され、抗凝固剤として
は、アミロ硫酸ナトリウム、ポリアネトール硫酸ナトリ
ウム等が使用される。

かくして前処理された血液は、ろ過培養器でろ過され、
ろ過された細菌は他の培地に移植することなくその′！
、まフィルタ上で培養される。

本操作で使用されるろ過培養器は、第１図に示す如く、
液体培地を含浸乾燥させた吸水体１と、該吸水体１の上
面に接着された細菌を通さない大きさの孔を有するフィ
ルタ２とを収容する容器３および該容器３の開口部を被
う蓋４とからなる。容器３には、フィルタ２の上方にろ
過前の血液を貯留する空間５が、吸水体１の下方にろ過
後の血液を貯留する空間６および通気孔７がそれぞれ設
けられている。

吸水体１は、ろ過する検体をほぼ全量吸収する吸収能を
もつことが望ましく、材質としてはセルロース系のろ紙
、不織布等が適当である。

吸水体には液体培地が含浸乾燥されている。液体培地と
しては、細菌の増菌培養用としてそれ自体公知のものが
使用される。本発明の方法においては、培地を上記のよ
うに吸水体に含浸させる代りに、これを前述した溶血剤
および抗血液凝固剤の溶液に加えておくこともできる。

フィルタ２の孔径は細菌を実質的に通さないものとし、
０７５ミクロン以下、好ましくは０．４５ミクロン程度
にするのがよい。フィルタの材質は血液に対して不活性
であれば特に制限はないが、代表例としてニトロセルロ
ース、ポリカーボネート、ポリアミド、セルロースエス
テルなどをあげることができ、市販のものとしてはミリ
デア（ミ・ノボアコ−ポレーション製品）メトリセル（
ゲルマンインストルメントカンノやニー製品）などがあ
げられる。これらのフィルタは、血液のろ過が容易なよ
うにそれ自体公仰の方法によって親水処理されているの
が望ましい。フィルタと吸水体との接着は接着剤によシ
行うのがよく、接着剤としてはナイロンなどの低融点重
合体繊維が好適である。

前処理された血液をフィルタ２の上に注ぐことにより血
液中の細菌はフィルタ２の上にろ別され、血液は吸水体
１に吸収され過剰の血液は空間６に貯留する。ろ液によ
シ圧迫された空気は通気孔７から外気へ抽出される。吸
収された血液は吸水体１に含有されている培地成分を溶
解し、フィルタ上の細菌に養分を提供する。ろ過終了後
、該ろ過培養器を恒温に保つことにより血液中の細菌を
フィルタ上で培養してコロニーを育成することができる
。

かくして培養された細菌は、コロニーの観察、菌数測定
、菌の同定、薬剤感受性試験等に供される。

次に実施例を示して本発明の方法をさらに詳しく説明す
る。

実施例 フィルタとしてはポアサイズ０．４５μｍのニトロセル
ロース製メンブンンフィルタ−（ｉ洋Ｆ紙社製）、吸水
体としてはセルロース製ろ紙Ｎｏ−６３Ｆ　（東洋ｐ紙
社製）を用い、フィルタと吸水体の接着は、低融点す・
イロンをフィルタと吸水体の間に介在させ熱融着を行々
った。フィルタと吸水体の径はφ５０關であり、これを
第１図のごとく作製する。実際に従来法との比較を行な
った。すなわち、あらかじめ培地、抗凝固剤、溶血剤（
計１０ｍ１）を含んだ容器に血液２．０　ｙｎｌ。

を分注し、これを濾過培養器に分注し、培養を行なう方
法と従来の液体培養（栄研５号（栄研社製）、バキュテ
イナ−３０（ＢＤ社製））との比較を行なった。結果を
表１に示すが、Ｎ−ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓでは従来
の液体培養にて検出不可能であったが、本発明の方法で
は１日で検出可能であり、血中細菌数も測定できる。さ
らにコロニーとして分離されていることから直ちに同定
試験、薬剤感受性試験が行なえる。また他の菌種につい
ても従来の液体培養よりすぐれていた。

表　　１ 表１　従来法との比較 十　陽性　　−陰性 ■０発明の作用効果 以上詳述したように、本発明の方法は、増菌培養の前処
理をすることなく、検体血液中の線菌全部を直接分離し
コロニーの育成培養するため従来法に比較して操作が簡
便であり血液中のすべての菌を培養するので複数の菌が
存在する場合の各々の菌の検出率も高い。また検体中の
菌数をコロニー数より測定することも可能である。

さらに本発明の方法ではフィルタ上で菌を増菌培養と同
時にコロニー育成をするので従来の液体増菌培養に比較
して培養時間がコロニー育成に必要な約１日と著しく短
縮される。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明の方法で使用されるろ過培養器の断面図
である。 １　・吸水体、２・・・フィルタ、３・・容器、４・・
・容器の蓋、７・・・通気孔

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （１）細菌混入血液を溶血剤および抗血液凝固剤からな
   る溶液と混合し、該混合物を、液体培地を含浸乾燥させ
   た吸水体と該吸水体の上面に接着された細菌を通さない
   大きさの孔を有するフィルタとを容器に収容してなるろ
   過培養器でろ過し、ろ過されたフィルタ上の細菌をその
   まま培養することを特徴とする血中細菌の分離培養法。 （２〕　　細菌混入血液を溶血剤、抗血液凝固剤および
   液体培地からなる溶−液と混合し、該混合物を、吸水体
   と該吸水体の上面に接着された細菌を通さない大きさの
   孔を有するフィルタとを容器に収容してなるろ過培養器
   でろ過し、ろ過されたフィルタ上の細菌をそのまま培養
   することを特徴とする血中最近の分離培養法。