JPS59187264A - 抗原−抗体反応速度の測定法 - Google Patents
抗原−抗体反応速度の測定法Info
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- JPS59187264A JPS59187264A JP5454783A JP5454783A JPS59187264A JP S59187264 A JPS59187264 A JP S59187264A JP 5454783 A JP5454783 A JP 5454783A JP 5454783 A JP5454783 A JP 5454783A JP S59187264 A JPS59187264 A JP S59187264A
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- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は抗原−抗体反応速度の測定法に関する。さらに
詳しくは、本発明は抗原又は抗体感作ラテックスと対応
する抗体又は抗原との凝集反応における反応混合物の濁
度の変化を積分球式濁度計を用いて測定することを特徴
とする抗原−抗体反応速度の測定法に関する。
詳しくは、本発明は抗原又は抗体感作ラテックスと対応
する抗体又は抗原との凝集反応における反応混合物の濁
度の変化を積分球式濁度計を用いて測定することを特徴
とする抗原−抗体反応速度の測定法に関する。
従来、積分球式濁度計を用いる抗原−抗体反応の測定は
セル長１０〜５０瓢のセルを用い、抗原−抗体反応終了
後に行なわれている。しかしながら、さらに迅速で精度
の良い測定法が求められている。
セル長１０〜５０瓢のセルを用い、抗原−抗体反応終了
後に行なわれている。しかしながら、さらに迅速で精度
の良い測定法が求められている。
積分球式濁度計を用いる抗原−抗体反応の測定について
種々検討した結果、抗原又は抗体感作ラテックスと対応
する抗体又は抗原との凝集反応における反応混合物の濁
度の変化を測定することによシ、試料中の抗原又は抗体
を迅速にかつ精度良く測定できることが見い出された。
種々検討した結果、抗原又は抗体感作ラテックスと対応
する抗体又は抗原との凝集反応における反応混合物の濁
度の変化を測定することによシ、試料中の抗原又は抗体
を迅速にかつ精度良く測定できることが見い出された。
本発明方法は抗原又は抗体感作ラテックスと対応する抗
体又は抗原との凝集反応における反応混合物の濁度の変
化の速度を直接測定している為、従来の反応終了後の測
定に比べて迅速であυ、かつ測定試料中の不純物の影響
が、測定時に相殺される為、精度も良好である。
体又は抗原との凝集反応における反応混合物の濁度の変
化の速度を直接測定している為、従来の反応終了後の測
定に比べて迅速であυ、かつ測定試料中の不純物の影響
が、測定時に相殺される為、精度も良好である。
以下に本発明の詳細な説明する。
本発明における抗原又は抗体感作ラテックスを製造する
際には例えば吸着法、共有結合法が用いられる。
際には例えば吸着法、共有結合法が用いられる。
吸着法による場合には、抗原又は抗体を溶解した水性溶
媒中に水性溶媒で希釈したラテックスを加える。混合液
を攪拌後室源−４０℃で１−６時間インキニーベートし
、抗原又は抗体をラテックスに感作する。ついで、遠心
分離し抗原又は抗体感作ラテックスを得る。余剰の抗原
又は抗体は上清液中に残るので上清液と共に除去する。
媒中に水性溶媒で希釈したラテックスを加える。混合液
を攪拌後室源−４０℃で１−６時間インキニーベートし
、抗原又は抗体をラテックスに感作する。ついで、遠心
分離し抗原又は抗体感作ラテックスを得る。余剰の抗原
又は抗体は上清液中に残るので上清液と共に除去する。
又、共有結合法による場合には、カルボキシル化ラテッ
クスの懸濁液にカップリング剤として、例えば水溶性カ
ルボジイミドなどを室温〜５℃で攪拌しながら混合する
。
クスの懸濁液にカップリング剤として、例えば水溶性カ
ルボジイミドなどを室温〜５℃で攪拌しながら混合する
。
しかる後に、この液に水性溶媒に溶解した抗原又は抗体
を加え、攪拌混合した後、遠心分離し抗原又は抗体感作
ラテックスを得る。又、必要に応じて得られた抗原又は
抗体感作ラテックスをアルブミン添加水性溶媒で濃度調
整する。
を加え、攪拌混合した後、遠心分離し抗原又は抗体感作
ラテックスを得る。又、必要に応じて得られた抗原又は
抗体感作ラテックスをアルブミン添加水性溶媒で濃度調
整する。
本発明で用いられるラテックスとは、ポリスチレン、カ
ルボキシル化ポリスチレン、ポリビニルトルエン、スチ
レン−ブタジェン共重合体、カルボキシル化スチレン−
ブタジェン共重合体、アクリル酸エステル重合体、メタ
クリル酸エステル重合体等があげられる。
ルボキシル化ポリスチレン、ポリビニルトルエン、スチ
レン−ブタジェン共重合体、カルボキシル化スチレン−
ブタジェン共重合体、アクリル酸エステル重合体、メタ
クリル酸エステル重合体等があげられる。
水性溶媒としては、生理食塩水、緩衝液（グリシン緩衝
液、リン酸緩衝液、ホウ酸緩衝液など）およびそれらの
組み合わせが用いられる。
液、リン酸緩衝液、ホウ酸緩衝液など）およびそれらの
組み合わせが用いられる。
本発明の測定方法としては前記で調整した抗原又は抗体
感作ラテックス含偵液と対応する抗体又は抗原含有試料
とを混合し、得られる反応混合物の濁度の変化を積分球
式濁度計で測定する。
感作ラテックス含偵液と対応する抗体又は抗原含有試料
とを混合し、得られる反応混合物の濁度の変化を積分球
式濁度計で測定する。
使用する積分球式濁度計としては従来用いられているも
のがあげられるが、セルとしてはセル長１〜１０ｓｎ、
好ましくは２〜５瓢のものが用いられる。
のがあげられるが、セルとしてはセル長１〜１０ｓｎ、
好ましくは２〜５瓢のものが用いられる。
測定波長としては４００〜１１００ ｎｍ の範囲の
ものが用いられる。
ものが用いられる。
使用する抗原又は抗体感作ラテックス含有液濃度として
は、α０５〜［１２Ｗ／ｖ％ （以下、係はｗ／′ｖ％
を意味する。）の範囲が好ましい。
は、α０５〜［１２Ｗ／ｖ％ （以下、係はｗ／′ｖ％
を意味する。）の範囲が好ましい。
又、ラテックス粒子の粒径としてはα５μｍ以下が好ま
しい。
しい。
本発明では種々の抗原又は抗体が測定でき、例えば、α
−７エトプロテイン、Ｃ−反応性タンパク、フィブリノ
ーゲン、イムノグロブリンなどが測定できる。
−７エトプロテイン、Ｃ−反応性タンパク、フィブリノ
ーゲン、イムノグロブリンなどが測定できる。
以下に、実施例を示す。
実施例１
（１）抗体感作ラテックス含有液の調製ポリスチレンラ
テックスの１０係懸濁液をリン酸緩衝液−生理食塩水（
以下、ＰＢＳと称す。）（ｐＨ７，２）で１０倍に希釈
する。前記ＰＢＳで１ｑ／−の濃度に調整したＣ−反応
性タンパクに対する抗体含有液と前記で調整したポリス
チレンラテックス含有液とを１：３の割合で混合し、３
７℃、１８０分間インキュベートする。
テックスの１０係懸濁液をリン酸緩衝液−生理食塩水（
以下、ＰＢＳと称す。）（ｐＨ７，２）で１０倍に希釈
する。前記ＰＢＳで１ｑ／−の濃度に調整したＣ−反応
性タンパクに対する抗体含有液と前記で調整したポリス
チレンラテックス含有液とを１：３の割合で混合し、３
７℃、１８０分間インキュベートする。
余剰のＣ−反応性タンパクに対する抗体を遠心分離で除
去し、得られた抗体感作ポリエチレンラテックスを１チ
ウシ血清アルブミンを含有するＰＥＳで１％の濃度に調
整し、抗体感作ラテックス含有液（以下、ラテックス試
薬という）を得る。
去し、得られた抗体感作ポリエチレンラテックスを１チ
ウシ血清アルブミンを含有するＰＥＳで１％の濃度に調
整し、抗体感作ラテックス含有液（以下、ラテックス試
薬という）を得る。
（２）測定
ラテックス試薬をＰＢＳ（ｐＨ７，２）で所定濃度に調
整した懸濁液とコントロール血清（測定可能になるよう
に希釈する場合もある。）とを１９二１に混合した後、
この液を積分球濁度計５ＵＰ−ＦＴ−５０１Ｄ （日本
精密光学社製）で測定する。
整した懸濁液とコントロール血清（測定可能になるよう
に希釈する場合もある。）とを１９二１に混合した後、
この液を積分球濁度計５ＵＰ−ＦＴ−５０１Ｄ （日本
精密光学社製）で測定する。
測定条件
光 源 ： タングステンランプ
ラテックス粒子径 ：０．２２ μｍ
セル長 ＝５ｍ
血清希釈 ： １００倍
測定項目
Ｃ−反応性タンパク
（３）結果
濁度変化（△τ）の結果を第１表に示す。
第 １ 表
注）濁度変化（△τ）
一反応開始後１８０秒後の濁度値〔カオリン濃度（ｐｐ
ｍ ） 〕−反応開始後３０秒後の濁度値〔カオリン諷
度（ｐｐｍ）］（以下の表についても同様） ラテックス試薬の濃度を増すことによシ、はつきシした
濁度変化を取らえることができる。しかし、濃度が増し
すぎると、血清中のＣ−反応性タンパクの低濃度におけ
る△τは減少する。
ｍ ） 〕−反応開始後３０秒後の濁度値〔カオリン諷
度（ｐｐｍ）］（以下の表についても同様） ラテックス試薬の濃度を増すことによシ、はつきシした
濁度変化を取らえることができる。しかし、濃度が増し
すぎると、血清中のＣ−反応性タンパクの低濃度におけ
る△τは減少する。
以上のことからラテックス試薬濃度は［１Ｌ０５〜ａ、
２％の範囲が好ましい。
２％の範囲が好ましい。
実施例２
（１） ラテックス試薬の調整
実施例１において、Ｃ−反応性タンパクに対する抗体の
代わシに、イムノグロブリンＧに対する抗体を用いる他
は実施例１と同様にしてラテックス試薬を調製する。
代わシに、イムノグロブリンＧに対する抗体を用いる他
は実施例１と同様にしてラテックス試薬を調製する。
（２） 測定
実施例１において、測定条件および測定項目を下記にし
た他は実施例１と同様に行なう１、測定条件 光 源 ： タングステンランプ ラテックス粒子径 ： ０４６ μｍ ラテックス濃度 ： α０５チ 血清希釈 ： ２０００倍 測定項目 イムノグロブリンＧ （３）結果 濁度変化（△τ）の結果を第２表に示す。
た他は実施例１と同様に行なう１、測定条件 光 源 ： タングステンランプ ラテックス粒子径 ： ０４６ μｍ ラテックス濃度 ： α０５チ 血清希釈 ： ２０００倍 測定項目 イムノグロブリンＧ （３）結果 濁度変化（△τ）の結果を第２表に示す。
第 ２ 表
（
セル長としては１〜１０咽の範囲が好ましい。
実施例３
（１） ラテックス試薬の調整
実施例１において、Ｃ−反応性タンノくりに対する抗体
の代わシに、イムノグロブリンＡに対する抗体を用いる
他は実施例１と同様にしてラテックス試薬を調整する。
の代わシに、イムノグロブリンＡに対する抗体を用いる
他は実施例１と同様にしてラテックス試薬を調整する。
（２）測定
実施例１において測定条件および測定項目を下記にした
他は実施例１と同様に行なう。
他は実施例１と同様に行なう。
測定条件
光 源 ： タングステンランプ
ラテックス良度 ： ０１ 係
セル長 ＝５ｍ
血清希釈 ： ２００倍
測定項目
イムノグロブリンＡ
３）結果
濁度変化（△τ）の結果を第３表に示す。
第 ３ 表
粒子径を大きくすれば、濁度変化（△τ）は大きくなる
傾向を示すが、１７２μｍでは逆に減少する傾向になっ
ている。
傾向を示すが、１７２μｍでは逆に減少する傾向になっ
ている。
粒子径としては０５μｍ以下が好ましい。
実施例４
（１） ラテックス試薬の調整
実施例１において、Ｃ−反応性タンパクに対する抗体の
代わシにイムノグロブリンＭに対する抗体を用いる他は
実施例１と同様にしてラテックス試薬を調製する。
代わシにイムノグロブリンＭに対する抗体を用いる他は
実施例１と同様にしてラテックス試薬を調製する。
（２） 測定
ラテックス試薬をＰＢＳ （ｐＨ７，２）で所定濃度に
調整した懸濁液と１００倍に希釈した患者血清とを１９
：１に混合した後、この液を積分球濁度計５ＥＰ−ＦＴ
−５０１Ｄ （日本精密光学社製）および日立分光光度
計２２８型（日立製作所社製）でそれぞれ測定する。
調整した懸濁液と１００倍に希釈した患者血清とを１９
：１に混合した後、この液を積分球濁度計５ＥＰ−ＦＴ
−５０１Ｄ （日本精密光学社製）および日立分光光度
計２２８型（日立製作所社製）でそれぞれ測定する。
測定条件
ラテックス粒子径 ：０．２２ μｍラテックス濃度
＝ ０１ 係 セ ル 長 ： ５謳 濁度計の光源 ： タングステンランプ分光光度計の波
長 ：９００Ｄｍ 測定項目 イムノグロブリンＭ （３）結果 患者血清中のイムノグロブリンＭｍＷＣ■／ａＺ）
を第４表に示す。
＝ ０１ 係 セ ル 長 ： ５謳 濁度計の光源 ： タングステンランプ分光光度計の波
長 ：９００Ｄｍ 測定項目 イムノグロブリンＭ （３）結果 患者血清中のイムノグロブリンＭｍＷＣ■／ａＺ）
を第４表に示す。
第 ４ 表
積分球値と吸光度値とはほぼ一致している。
手続補正書
昭和５９年 ５月 １７日
特許庁長官 殿
１ 事件の表示
昭和５８年特許願第５４５４７号
２ 発明の名称
抗原−抗体反応速度の測定法
３ 補正をする者
事件との関係 特許出願人
郵便番号 １００
住 所 東京都千代田区人手町−丁目６番１＠名 称
（１０２）協和ｎ７酵工業株式会社（ＴＥ Ｌ ：
０３−２０１−７２１１内繻臣７５１）４ 補正の対象
（１０２）協和ｎ７酵工業株式会社（ＴＥ Ｌ ：
０３−２０１−７２１１内繻臣７５１）４ 補正の対象
Claims (1)
- 抗原又は抗体感作ラテックスと対応する抗体又は抗原と
の凝集反応における反応混合物の濁度の変化を積分球式
濁度計を用いて測定することを特徴とする抗原−抗体反
応速度の測定法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5454783A JPS59187264A (ja) | 1983-03-30 | 1983-03-30 | 抗原−抗体反応速度の測定法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5454783A JPS59187264A (ja) | 1983-03-30 | 1983-03-30 | 抗原−抗体反応速度の測定法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS59187264A true JPS59187264A (ja) | 1984-10-24 |
Family
ID=12973702
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5454783A Pending JPS59187264A (ja) | 1983-03-30 | 1983-03-30 | 抗原−抗体反応速度の測定法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS59187264A (ja) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0301584A1 (en) | 1987-07-31 | 1989-02-01 | Fujirebio Kabushiki Kaisha | Immunological measuring method |
| JPH02236453A (ja) * | 1989-03-10 | 1990-09-19 | Jeol Ltd | 免疫測定装置の発光光量検出方法 |
| JPH02242159A (ja) * | 1989-03-15 | 1990-09-26 | Jeol Ltd | 免疫測定装置の発光検出器 |
| US5198369A (en) * | 1990-04-25 | 1993-03-30 | Canon Kabushiki Kaisha | Sample measuring method using agglomeration reaction of microcarriers |
| CN101881777A (zh) * | 2010-06-30 | 2010-11-10 | 深圳市国赛生物技术有限公司 | 超敏c反应蛋白检测方法及超敏c反应蛋白检测试剂盒 |
| CN113092304A (zh) * | 2021-03-31 | 2021-07-09 | 神华神东煤炭集团有限责任公司 | 一种煤矿在用设备齿轮油中煤炭含量的检测方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS54109494A (en) * | 1978-02-16 | 1979-08-28 | Teikoku Hormone Mfg Co Ltd | Method of measuring antigennantibody reaction |
| JPS571970A (en) * | 1980-06-05 | 1982-01-07 | Sekisui Chem Co Ltd | Measuring method for agglutination for diagonostic latex reagent |
| JPS57175957A (en) * | 1981-04-24 | 1982-10-29 | Chugai Pharmaceut Co Ltd | Measuring method and device for antigen- antibody reaction |
-
1983
- 1983-03-30 JP JP5454783A patent/JPS59187264A/ja active Pending
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