JPS5857160B2 - 新規抗生物質ａｍ−１０４２物質およびその製造法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規抗生物質ＡＭ−１０４２物質およびその製
造法に関するものである。

本発明の抗生物質ＡＭ−１０４２物質は次に示すような
理化学的性質を有する新規な抗生物質である。

■ 炭素、水素、窒素、酸素から成り、イオウ、ハロゲ
ンを含まない。

本物質の元素分析値は下に示すとおりである。

Ｃ：６８．１３％、Ｈ：６．２６％。

Ｎ：４．９２％、０：２０．６９係 ■ 比旋光度 〔α虎＋ １７５〜１８４°（ｃ ｏ、５ ｔ ＣＨＣ
ｌ３ ）平均＋１８１°（ｃ Ｏ，５、ＣＨＣｌ ａ
）■融 点 １８５−１９０℃、 ■ 紫外部吸収スペクトル 第１図に示すようにメタノール溶液中では３１５ｎｍ附
近および２６５ｎｍ附近（肩）に吸収を示す。

これらの吸収はアルカリ性メタノール溶液中では３０５
ｎｍ附近および２６０ ｎｍ附近（肩）に、また酸性
メタノール溶液中では３２０ｎｍ附近に移動する。

■ 赤外部吸収スペクトル 第２図に示すように、アミンまたは水酸基（３３３０−
３３４０ｚ ｌ）、メチルおよびメチレン基（２９２５
，２８５０ｃｒｒＩ ’）、カルボニル基および二重結
合（１６６０，１６００Ｃｒｒ１ ’）・メチル基（１
３６５ｃｒｒ１’）に由来する吸収の存在が示される。

■ 呈色反応 本抗生物質はエールリッヒ反応、ドラーゲンドルフ反応
、ヨウ素反応による呈色反応に陽性を示し、モーリッシ
ュ反応、フェーリング反応、ニンヒドリン反応、パイル
シュタイン反応、ライドン・ス□ス反応に陰性を示す。

■ 本物質は黄橙色である。

この抗生物質ＡＭ−１０４２物質は以上の他に次のよう
な理化学的性質を有する。

■ 分子量および分子式 本抗生物質の分子量はＦＤマススペクトルにより５４６
が求められ、この分子量と先に示した元素分析値から求
めた分子式はＣ３１Ｈ３４Ｎ２０７である。

■ 溶剤に対する溶解性 ジメチルスルフォキサイド、ジメチルホルムア＊黄ミド
に対しては易溶、アセトン、クロロホルム、酢酸エチル
、エタノール、メタノール等に対しては可溶であるが、
石油エーテル、ｎ−へキサン水などに対しては不溶であ
る。

ＯクロマトグラフィーによるＲｆ値 本抗生物質のシリカゲル薄層クロマトグラフィー（メル
ク社キーゼルゲルＧ ｔ ０．３ ｍｍ ）を通常法に
て行なった時のＲｆ値は次のとおりである。

Ｒｆ値 １）ベンゼン ：アセトン（１３ニア）０．４０１１）
クロロホルム：メタノール（１０：１） ０．５６１
１１）酢酸エチル：メタノール（８７：１３）０．６６
本抗生物質は下記の構造式を有する。

抗生物質ＡＭ−１０４２物質の生物学的性質について述
べると次の如くである。

■ 抗菌性 寒天希釈法による抗菌・抗カビスペクトル（最小発育阻
止濃度を示す）は第１表に示すとおりである。

■毒性 本抗生物質のマウスによる急性毒性試験では、ＬＤ５０
は腹腔内投与で４８．５η／Ｋｑであり、経口投与では
４５０η／Ｋｇでも異常は認められなかった。

以上のように、本抗性物質はスタフィロコッカス・オウ
レウス、バチルス・セレウス、ノカルディア・アステロ
イデス等に抗菌力を有するので、これらの細菌によって
おこる細菌感染症の予防および治療に医薬品として用い
ることが可能である。

上記した抗生物質ＡＭ−１０４２物質の理化学的性質の
うちで抗生物質の比較検討に通常用いられる紫外部吸収
スペクトルおよび呈色反応などを指標として、既知の抗
性物質の中から類似するものを検索すると、３１５ｎｍ
附近に紫外部吸収スペクトルを有する抗性物質としてア
ミセチンＢＣＰ 、 Ｓ ｅｎｓｉ ｅｔａ ｌ 、
ｊ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ＆ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ−
ａｐｙ： ７，６４５（１９５７）］、アゾマイシン〔
Ｋ。

Ｍａｅｄａ ｅｔ ａｌ ｔ Ｊ 、Ａｎｔｉｂｉｏｔ
ｉｃｓ Ａ６ ｔ １８２（１９５３）］などがあげら
れる。

しかしアミセチンＢは３２１ｎｍの他に２４９ｎｍ（Ｐ
Ｈ７、緩衝液中）に明確な吸収極大を示し、この吸収は
塩基性下では３３１ｎｍ、酸性下では３１５ｎｍと２５
６ ｎｒｎに移動することなど本抗生物質とは異なる挙
動を示す。

またアミセチンＢは分子中にアミド結合を有するが、本
抗生物質は呈色反応においてライドン・スミス反応が陰
性であることからア□ド結合を含まないことが明らかで
あるので、両物質は互いに異なる抗生物質であることが
わかる。

つぎにアゾマイシンは３１３〜３１４ｎｍに吸収極大を
示すが、その結晶の色は白色であり、また光学的に不活
性（旋光性を示さない）であるなどの点で本抗性物質と
は明らかに区別される。

以上述べたとおり、本抗生物質の理化学的性状は、既知
の抗生物質のいずれとも一致するところがなく、したが
って抗生物質ＡＭ−１０４２物質は新規抗生物質である
と判定した。

本発明の抗生物質ＡＭ−１０４２物質は、抗生物質ＡＭ
−１０４２物質を生産するストレプトミセス属に属する
微生物を培地に培養し、培養物より該抗生物質ＡＭ−１
０４２物質を採取することにより製造される。

本発明に使用される抗生物質ＡＭ−１０４２物質を生産
するストレプトミセス属の微生物としては、一例として
本発明者らによって奈良県明日香村の土壌より新たに分
離されたストレプトミセス（Ｓ ｔｒ−ｅｐｔｏｍ ｙ
ｃｅｓ ）属に属する菌株ＡＭ−１０４２が挙げられる
。

この菌の菌学的性状を示すと、次のとおりである。

■、形態的特徴 気菌糸は直線状に伸び、その先端の胞子鎖はループ状な
いしはラセン状に伸びている。

胞子は数個から１０数個程度の連鎖を形成するが、総括
的には短かく分断しているものが多く認められ、胞子嚢
、菌核、遊走子等の存在は認められない。

胞子の大きさは０．５〜０．８μ×０．８〜１．０μの
やや角のある円柱形で、胞子表面は平滑である。

■、各種培地上での性状 下記の性状はいずれも２７’Ｃ，において１０〜１４日
間培養後の観察である。

…・生理的性状 ■ 生育温度範囲：１５〜４０℃。

■ メラニン色素の生成 イ）トリプトン・酵母エキス液：陰性 口）ペプトン・酵母エキス・鉄寒天：陰性ハ）チロシン
寒天：陰性 ■ ゼラチンの液化：陽性 ■ 澱粉の加水分解反応：陽性 ■ 脱脂乳の擬固：疑陽性 ■ 脱脂乳のペプトン化：陽性 ■ 硫化水素生成反応：陰性 ■ 亜硝酸生成反応：陽性 ■ セルロース加水分解反応：縦隔性 ■・各種炭素源の利用性 （プリドハム・ゴツト１１−プ寒天培地上での観察） 利用スる：Ｄ−グルコース、Ｄ−キシロース、Ｌ−ラム
ノース やや開田する：Ｄ−フラクトース、Ｄ−７ライノース、
Ｌ−アラビノース 利用シナい：Ｄ−マンニット、シュークロース、Ｌ−イ
ノシトール 以上、本革の菌学的性状を要約すると、次のようになる
。

気菌糸は直線状に伸び先端は鉤形ないしは短かいラセン
形の胞子鎖を形成し、胞子はやや角のある円柱形でその
表面は平滑である。

合成培地、天然培地とも発育は中程度あるいは良好で、
無色から黄茶色の色調を帯び、気菌糸は白色から灰茶色
の色調を呈する。

可溶性色素としては一部の培地で淡黄色から黄茶色の色
素を生産しく黄色系）、非りロモゲニツク型の菌種であ
る。

したがって本革はストレプトミセス属に属する菌種であ
ることは明らかで、本革を「バーシーズ・マニュアル・
オブ・デタ□ネーテイブ・バクテリオロジー」第８版、
１９７４年あるいは「インターナショナル・ジャーナル
・オブ・システマテイツク・バクテリオロジーＪ １９
６８−１９７２年に記載の菌株と照合すると、本革に類
縁するものとしてストレプトミセス・ノドサス（Ｓ ｔ
ｒｅｐｔａｎｙｃｅｓｎｏｄｏｓｕｓ ） ＣＩ ｎｔ
ｅｒｎａｔｉｏｎａ Ｉ ＪＬ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ
Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ： ８ 、３５３ （１９６
８） 〕が挙げられる。

この菌種のＩＳＰ標準標準木革とを比較検討すると、ス
トレプトミセス・ノドサスおよび本革はいずれも発育は
無色または微呈色をなし、気菌糸は灰茶色、可溶性色素
は黄色系であるなど極めて一致するところが多く、とく
に澱粉・無機塩寒天においてはほとんど同一の性状を示
す。

また生理曲性状においてはストレプトミセス・ノドサス
は非りロモゲニツク型であり、硫化水素の生産（羽雲性
、亜硝酸生成反応は陽性、澱粉の加水分解反応は陽性で
あり、これらの諸性状に関しても本革とよく一致する。

しかしながら糖の利用性において両者には若干異なった
挙動が認められる。

すなわちストレプトミセス・ノドサスはＤ−マンニット
、Ｌ−イノシトールを利用するが、本革はこれらを利用
しない。

以上の結果を総括すると、本革はその形態学的および生
理的諸性状から判断してストレプトミセス・ノドサスに
分類することができる。

しかしながら若干の糖の利用性の差異を考慮すると、本
革はストレプトミセス・ノドサスの亜種と判定される。

よってこのストレプトミセス属に属する菌株ＡＭ−１０
４２をストレプトミセス・ノドサス・サブスペーシスＡ
Ｍ−１０４２（Ｓ ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｎｏｄｏ
ｓｕｓ ｓｕｂｓｐ−ＡＭ−１０４２）と命名した０な
お本革は工業技術院微生物工業技術研究所に微工研菌寄
第３４２９号として寄託されている。

本発明における使用菌として、ストレプトミセス・ノド
サス・サブスペーシスＡＭ１０４２はそのｌ具体例であ
って、この菌をたとえば紫外線、エックス線、放射線、
化学薬剤等を用いる人工的変異手段で変異して得られる
変異株は勿論、ストレプトミセス属に属する微生物であ
って抗生物質ＡＭ−１０４２物質の生産能を有するもの
はすべて本発明に用いることができる。

本発明において抗生物質ＡＭ−１０４２物質を生産する
微生物を培養する培地としては、炭素源、窒素源、無機
物等を含む、微生物の培養に通常用いられる培地が広く
使用されうる。

培地の炭素源としては同化可能な炭素化合物であればよ
く、例えばブドウ糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、澱粉、デキ
ストリン、グリセリン、糖蜜などが使用される。

また培地の窒素源としては利用可能な窒素化合物であれ
ばよく、例えば大豆粉、コーンスチープリカー、綿実粉
、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、酵母、カゼイン加
水分解物、アンモニウム塩、硝酸塩などが利用される。

その他に、培地の調製にあたり、リン酸塩、マグネシウ
ム、カリウム、カルシウム、ナトリウム、鉄、マンガン
などの塩類が必要に応じて使用される。

培養は通常好気的に行われ、通気攪拌培養が好適である
。

培養温度は微生物が発育し抗生物質ＡＭ−１０４２物質
を生産する範囲内で適宜変更しうるが、特に好ましいの
は２５−３０℃、である。

ＰＨは６〜７が好ましい。培養時間は種々の条件によっ
て異なるが、通常７０−１５０時間程度であって、抗生
物質ＡＭ−１０４２物質が最高力価に達する時間を見計
って適当な時間に培養を終了する。

このようにして得られたストレプトミセス属に属する抗
生物質ＡＭ−１０４２物質生産微生物の培養物からの抗
生物質ＡＭ−１０４２物質の採取は、微生物の培養物よ
り抗生物質を分離精製する公知の手段を適宜選択組合わ
せて行うことができる。

そして本抗生物質は前記の理化学的性状から明らかなよ
うに脂溶性物質であるから、一般に脂溶性物質を採取す
るために用いられる方法、たとえば適当な溶媒を用いて
溶媒抽出するのが好ましい。

なお抗生物質ＡＭ−１０４２物質は、菌体を除去しない
培養物自体からも、あるいは菌体からも、また培養物か
ら菌体を除去した培養浮渣からも採取することができる
。

培養物から抗生物質ＡＭ−１０４２物質を分離精製する
手段の一例を示すと次の如くである。

即わちストレプトミセス属に属する抗生物質ＡＭ−１０
４２物質生産微生物を前述したようにして培養して得た
培養物から菌体を炉別する。

この培養Ｐ液を希塩酸で酸性（約ＰＨ３）にし、酢酸エ
チルで抗生物質ＡＭ−１０４２物質を抽出する。

抽出液を減圧下で濃縮乾固し、エチルエーテルで洗浄し
た後、クロロホルムに溶解し、不溶の不純物を除去した
のち、これをシリカゲル（メルク社製、キーゼルゲルＧ
）のカラムにかげ、クロロホルム：メタノール溶媒系を
用いて活性物質を分取し、これを減圧濃縮乾固すると抗
生物質ＡＭ−１０４２物質の黄橙色粉末を得る。

この粉末を少量のクロロホルム：メタノールに溶解し結
晶化させると抗生物質ＡＭ−１０４２物質の黄色針状晶
を得る。

なお生産された抗生物質ＡＭ−１０４２物質の定量はバ
チルス・ズブチリスを被験菌として通常の方法で行なわ
れる。

次に本発明の実施例を示すが、本発明はこれにより制限
されるものではない。

実施例 １ グルコース０．１％、澱粉２．４％、ペプトン０．３係
、肉エキス０．３係、酵母エキス０．５ ％、炭酸カル
シウム０．４係を含有する培地（ＰＨ７，０）１００−
を５００ｒｎｌ容坂ロフラスコに分注し、１２０℃１．
２０分間滅菌する。

これにストレプトミセス・ノドサス・サブスペーシスＡ
Ｍ−１０４２（微工研菌寄第３４２９号）を接種し、２
７℃、で４８時間、毎分１２０回転で往復振盪培養を行
なう。

この培養物をデキストリン２．０係、グルコース０．２
％、大豆粉１．５％、酵母エキス０．３係、炭酸カルシ
ウム０．３ ％を含有する抗生物質ＡＭ−１０４２物質
生産用培地（ＰＨ７，０）２ｏｚを含む３０１容ジヤー
・ファメンターに移植し、２７℃６、毎分２５０回転で
毎分ｌＯｔの無菌空気を送り９６時間通気攪拌培養を行
なって抗生物質ＡＭ−１０４２物質を含有する培養物を
得た。

この培養物から遠心分離によって菌体を除去し、培養Ｐ
液１５７を得た。

この培養Ｆを希塩酸でＰＨ３，０に補整した後、酢酸エ
チル５１を加え室温にて約１時間攪拌抽出し、この操作
を再度くり返す。

この酢酸エチル層（１０７）を回収し減圧濃縮乾固して
粗製の黄橙色粉末４３？を得た。

この粉末を約２００−のエチルエーテルで洗浄して油脂
類を除去したものを約１５０７ｎｌのクロロホルムに溶
解し冷却放置後、これに不溶の物質を炉別し、炉液は減
圧濃縮したのち、シリカゲル・カラム（メルク社製、キ
ーゼルゲルＧ、５１’）にのせ、クロロホルム：メタノ
ール（６０：ｌ）１．５１で展開する。

活性物質を含む溶出液約４００−を減圧濃縮乾固して黄
橙色粉末３５０ηを得た。

このものを少量のクロロホルム−メタノール混合液に溶
解し、一晩冷却放置して抗生物質ＡＭ１０４２物質の黄
橙色針状晶３００■を得た。

実施例 ２ 実施例１に記載したと同様にしてストレプトミセス・ノ
ドサス・サブスペーシスＡＭ−１０４２（微工研菌寄第
３４２９号）の培養を行って得た培養物１８／ｉを遠心
分離して菌体を除去後、培養ｐ液を希塩酸でＰ Ｈ３，
０に調整し、これに酢酸ブチル６１づつ２回混合攪拌し
、この酢酸ブチル層を減圧濃縮乾固して黄橙色の粗粉末
５．５１を得た。

この粉末を約４００−のクロロホルムに溶解し、不溶の
不純物を除去した後、これを減圧下で濃縮し、この濃縮
液をシリカゲル・カラム（メルク社製、キーゼルゲルＧ
、６５ｆ）にのせ、ベスゼンーアセトン（ｓ：ｉ）約２
．６ｔで展開する。

活性物質を含む溶出液約５３０ｙｄを減圧濃縮乾固し、
黄橙色粉末４８０■を得た。

コノモノヲ少量の酢酸エチル−メタノール混合液に溶解
し、一晩冷却放置して抗生物質ＡＭ−１０４２物質の黄
橙色針状晶３６０ＴＩｆ！を得た。

実施例 ３ グルコース２．０係、大豆粉２．０係、食塩０．２係を
含有する培地（ｐＨ７，０’） １００７を５００ｄ容
坂ロフラスコに分注し、１２０℃、で２０分間滅菌する
。

これにストレプトミセス・ノドサス・サブスペーシスＡ
Ｍ−１０４２（微工研菌寄第３４２９号）を接種し、２
７℃、で２０〜２４時間、毎分１２０回転で往復振盪培
養を行なう。

この培養物をグリセリン２．０％、大豆粉２．０係、食
塩０．２ ％を含有する抗生物質ＡＭ−１０４２物質生
産用培地（ｐＨ７，０）２０ｔを含む３０７容ジャーフ
ァーメンタ−に移植し、２７℃１、毎分２５０回転で毎
分１０７の無菌空気を送り、約７２時間通気攪拌培養を
行って抗生物質ＡＭ−１０４２物質を含有する培養物的
２０ｔを得た。

この培養物に酢酸エチル約２０ｔを加え、室温にて約１
時間攪拌抽出し、さらに遠心分離により酢酸エチル層を
回収する。

この酢酸エチル約１５ｔを減圧濃縮乾固して粗製の黄橙
色針状晶２５．８１を得た。

この粉末を約５００−のエチルエーテルで洗浄して油脂
類を除去したものを約５００７ｎｌのクロロホルムに溶
解し冷却放置後、不溶の物質を戸別し、Ｆ液を約２０−
まで濃縮した。

これをシリカゲルカラム（メルク社製、キーゼルゲルＧ
、２００１にのせ、クロロホルム：メタノール（６０：
１）約３ｔで展開する。

活性物質を含む溶出液約１．２１を減圧濃縮乾固して黄
橙色粉末１２１を得た。

これを約２０−のクロロホルム−メタノール混合液に溶
解し、一晩冷却放置して抗生物質ＡＭ−１０４２物質の
黄橙色針状晶１０１を得た。

【図面の簡単な説明】

第１図は抗生物質ＡＭ−１０４２物質の紫外部吸収スペ
クトルを示し、第２図は同物質の赤外部吸収スペクトル
を示す。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 下記構造式 で表わされる新規抗生物質ＡＭ−１０４２物質。 で表わされる抗生物質ＡＭ−１０４２物質を生産するス
   トレプトミセス属に属する微生物を培地に培養し、培養
   物より該抗生物質ＡＭ−１０４２物 することを特徴とする新規抗生物質ＡＭ−１０４２物質
   の製造法。 ３ ストレプトミセス属に属する微生物がストレプトミ
   セス・ノドサス・サブスペーシスＡＭ１０４２である特
   許請求の範囲第２項記載の新規抗生物質ＡＭ−１０４２
   物質の製造法。