JPS58183628A - インフルエンザウイルスワクチンの安定化 - Google Patents
インフルエンザウイルスワクチンの安定化Info
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- JPS58183628A JPS58183628A JP58055367A JP5536783A JPS58183628A JP S58183628 A JPS58183628 A JP S58183628A JP 58055367 A JP58055367 A JP 58055367A JP 5536783 A JP5536783 A JP 5536783A JP S58183628 A JPS58183628 A JP S58183628A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
「ンイルス表面抗原、蛋白質赤血球凝莱素及びノイラミ
ニダーゼに７１シて活性でめる保睦抗体の生ｆ！Ｌを誘
発することによってインフルエンザウィルス感染に対す
る元芋捷だは部分的免疫を供与する多数のワクチンか今
日入手可能である′ｆＪ）または文献にｈ己１ｆされて
いる。
ニダーゼに７１シて活性でめる保睦抗体の生ｆ！Ｌを誘
発することによってインフルエンザウィルス感染に対す
る元芋捷だは部分的免疫を供与する多数のワクチンか今
日入手可能である′ｆＪ）または文献にｈ己１ｆされて
いる。
完全な免疫は侵入するウィルス粒子の複製（ｒｅ−ｐｌ
ｉｃａｔ １ｏｎ）を妨害し且つそれによって病気の発
生を防ぐ抗体を生じる、種々の精製の程贋の抗原を含有
する全ウィルス粒子または分解したウィルス粒子から成
る通常のワクチンによって供与されるものと理解されつ
る。
ｉｃａｔ １ｏｎ）を妨害し且つそれによって病気の発
生を防ぐ抗体を生じる、種々の精製の程贋の抗原を含有
する全ウィルス粒子または分解したウィルス粒子から成
る通常のワクチンによって供与されるものと理解されつ
る。
部分的な免疫は、侵入するウィルス粒子の複製を許しは
するが、病気を実′ｄ的に無症状の経過に限定して自然
免疫を確立させる、揮々の精製の程度の、ウィルス粒子
の抗原を含イ１するワクチンによって供与されるものと
理ｐＩＦされうる。
するが、病気を実′ｄ的に無症状の経過に限定して自然
免疫を確立させる、揮々の精製の程度の、ウィルス粒子
の抗原を含イ１するワクチンによって供与されるものと
理ｐＩＦされうる。
抗体生産の刺激、捷たはインフルエンザワクチンウィル
スのノイラミニダーゼ抗原の免うψ原性ｄ１、腎、全免
疫の何′立における■較的小さな訣累であるが、部分的
免疫の状態の確立における比較的大きな安置で、ｂめど
みなされる［ Ｊ、 Ｉｎｆｅｃｔ。
スのノイラミニダーゼ抗原の免うψ原性ｄ１、腎、全免
疫の何′立における■較的小さな訣累であるが、部分的
免疫の状態の確立における比較的大きな安置で、ｂめど
みなされる［ Ｊ、 Ｉｎｆｅｃｔ。
１）ｉｓｅａｓｅｓ 、 １４０．８４４ （１９７７
）＃照〕。
）＃照〕。
単独活性成分としてＨ（・′を声［１したノイラミニダ
ーゼ抗原を含有するインフルエンザワクチンがＪ４９近
製造された（米国特許部４．０２９．７６３号及（］・
デ４，１３６、１６８号参照）。
ーゼ抗原を含有するインフルエンザワクチンがＪ４９近
製造された（米国特許部４．０２９．７６３号及（］・
デ４，１３６、１６８号参照）。
ノイラミニダーゼの免疫原付は、ノイラミニダーゼ分子
の１努素を古件とＷｔ接に対応することが認められてい
る。この活性の安定性はワクチンの貯蔵寿命に影響する
。このととけ４℃の貯蔵温度できわめて不安定なＩ型ノ
イラミニダーゼのインフルエンザウィルスワクチンにつ
いて特にめではまる。
の１努素を古件とＷｔ接に対応することが認められてい
る。この活性の安定性はワクチンの貯蔵寿命に影響する
。このととけ４℃の貯蔵温度できわめて不安定なＩ型ノ
イラミニダーゼのインフルエンザウィルスワクチンにつ
いて特にめではまる。
本旬明者らの試１！Ｉ！け４℃で貯蔵したこのようなイ
ンフルエンザウィルスワクチン１”、約２〜３ケ月抜に
Ｉ：１、とんどすべての検出しうるノイラミニダーゼ・
酵素油性を失なうことを示している。この短かい貯蔵寿
命はワクチンの販売に明白な問題を生じさせ月、つ真の
有効免疫投す量を計算する試みを妨害する。これについ
てはり、 Ｂｕｃｈｅｒ及びり。
ンフルエンザウィルスワクチン１”、約２〜３ケ月抜に
Ｉ：１、とんどすべての検出しうるノイラミニダーゼ・
酵素油性を失なうことを示している。この短かい貯蔵寿
命はワクチンの販売に明白な問題を生じさせ月、つ真の
有効免疫投す量を計算する試みを妨害する。これについ
てはり、 Ｂｕｃｈｅｒ及びり。
ｐａｌｅｓｅ、Ｉ’ｈｅ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ
ＡｃｔｉｖｅＰｒｏｔｅｉｎ ｏｆ Ｉｎｆｌｕｅｎｚ
ａ Ｖｉｒｕｓ：ＩＶｅｕｒａｍｉｎｉ−ｄａｓｅ［Ｔ
ｈｅ Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ｖｉｒｕｓｅｓ ａｎｄＩ
ｎｆｌｕｅｎｚａ （Ｅ、 Ｄ、 Ｋ１１ｂｏｕｒｎｔ
ｒ 編）、ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ、 Ｎ、Ｙ、
（１９７５） 、９３頁〕を参照すべきである。
ＡｃｔｉｖｅＰｒｏｔｅｉｎ ｏｆ Ｉｎｆｌｕｅｎｚ
ａ Ｖｉｒｕｓ：ＩＶｅｕｒａｍｉｎｉ−ｄａｓｅ［Ｔ
ｈｅ Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ｖｉｒｕｓｅｓ ａｎｄＩ
ｎｆｌｕｅｎｚａ （Ｅ、 Ｄ、 Ｋ１１ｂｏｕｒｎｔ
ｒ 編）、ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ、 Ｎ、Ｙ、
（１９７５） 、９３頁〕を参照すべきである。
カゼイン氷解物（消化物）は、ワクチン安定化媒質の１
成分として用いられており且つ狂犬病ウィルスの増殖を
促進させるために用いられている。
成分として用いられており且つ狂犬病ウィルスの増殖を
促進させるために用いられている。
たとえは、米国特許第４．１４７．７７２号は、不活性
化または弱毒化したウィルス、部分的に加水分解したゼ
ラチン、多価アルコール環び緩衝化した酸性媒体から成
る安ポ化ワクチンｆ：開示している。
化または弱毒化したウィルス、部分的に加水分解したゼ
ラチン、多価アルコール環び緩衝化した酸性媒体から成
る安ポ化ワクチンｆ：開示している。
米国特許第３，７８３，０９８号は、スキムミルクまた
はカゼイン及び、牛乳蛋白質の酵素消化物であシうる、
アミンによる無細胞Ｂグループ＠疹ウィルス（ｃｅｌｌ
−ｆｒｅｅ Ｇｒｏｕｐ Ｂ Ｈｅｒｐｅｓ ｖｉｒ
ｕｓ）懸濁液の抽出及び凍結乾燥中の安シピ化を開示し
ている。
はカゼイン及び、牛乳蛋白質の酵素消化物であシうる、
アミンによる無細胞Ｂグループ＠疹ウィルス（ｃｅｌｌ
−ｆｒｅｅ Ｇｒｏｕｐ Ｂ Ｈｅｒｐｅｓ ｖｉｒ
ｕｓ）懸濁液の抽出及び凍結乾燥中の安シピ化を開示し
ている。
米国特許第３．６２９．３９９号は、燐酸塩緩衝剤、カ
ゼイン及びカゼイン氷解物で安定化した弱毒化ウィルス
から成る、ハ）−口投与可を中な一１ゼリオヮンチンを
開ンドしている。
ゼイン及びカゼイン氷解物で安定化した弱毒化ウィルス
から成る、ハ）−口投与可を中な一１ゼリオヮンチンを
開ンドしている。
米国を侍許舗ａ、 １４ ニー１．４７ ＋１号は、少
なくとも３財酎係のカゼインの・ぐンクレアチン消化物
ヲハ・１イする媒体中の生きている狂犬病ウィルスの！
１（２造方法を開・１１シている。
なくとも３財酎係のカゼインの・ぐンクレアチン消化物
ヲハ・１イする媒体中の生きている狂犬病ウィルスの！
１（２造方法を開・１１シている。
＊ ト９． Ｉｒ、Ｉ：Ｎ −Ｚ ＡＡｆｌＮＥ■Ｒ
ＡＫ−ｔ−１ｃｌｒｉｌＶ−Ｚ ＡＭＩＮＥｏＡ （
Ｓｈｅｆｆｉｅｌｄ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ。
ＡＫ−ｔ−１ｃｌｒｉｌＶ−Ｚ ＡＭＩＮＥｏＡ （
Ｓｈｅｆｆｉｅｌｄ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ。
Ｍｅｍｐｈｉｓ、 ｉ’ｅｎｎｅｓｓｅｅ ） （７）
ようなカゼイン氷解物あるいはより単純なアミノ酸が、
貯蔵中のインフルエンザワクチンのノイラミニダーゼｆ
占性を効果的に安定化１．で、このようなワクチンの有
効使用期間の増大をもたらすということもまた開示され
ている。
ようなカゼイン氷解物あるいはより単純なアミノ酸が、
貯蔵中のインフルエンザワクチンのノイラミニダーゼｆ
占性を効果的に安定化１．で、このようなワクチンの有
効使用期間の増大をもたらすということもまた開示され
ている。
本発明の目的は、ノイラミニダーゼをちイ１するワクチ
ンの免疫原的活性を、できる限り長期間にわたって、で
きるだけ高い値に保持するだめの方法を提供することに
ある。どのような安５」／化ワクｆ ７は、同種の非保
絢（ｕｎｐｒｅｓｅｒｖｅｄ ）ワクチンによって達成
される期間よりも１０〜２０倍も長く、７Ｆ、 ＊ ｌ
’ｌ′ｌｌ ＶＣ当初の活性を糾持する。
ンの免疫原的活性を、できる限り長期間にわたって、で
きるだけ高い値に保持するだめの方法を提供することに
ある。どのような安５」／化ワクｆ ７は、同種の非保
絢（ｕｎｐｒｅｓｅｒｖｅｄ ）ワクチンによって達成
される期間よりも１０〜２０倍も長く、７Ｆ、 ＊ ｌ
’ｌ′ｌｌ ＶＣ当初の活性を糾持する。
本発明のもう一つの目的は、ノイラミニダーゼの免疫原
作水準を、ｔｉζ期間にわたって、はとんど−上口の・
ｋ準に保つだめの方法を提供することに４つる。
作水準を、ｔｉζ期間にわたって、はとんど−上口の・
ｋ準に保つだめの方法を提供することに４つる。
安ンＥ化したノイラミニダーゼ含有ワクチンもまた１【
発明の１・！１囲のものである。
発明の１・！１囲のものである。
今回、インフルエンザワクチンを蛋白質氷解物、アミン
ｉ′付及びそれらの紹合わ１ｔの存在下に貯蔵するとき
は、ワクチンの有用貯、嫂寿命が著るしく増大するとい
うことが見出された。好適なワクチンはインフルエンザ
ウィルスワクチンを包含し且つ好適な屯白質水解物に１
ｄカゼインの・ぞンクレアチン消化物などが包含される
。特に好適な蛋白質水ＡＭＩＩＶＥｏＡである。特に本
発明に従って沫岐しタノイラミニダーゼ抗原によって勺
、しる９ｒ！、投原性ＬＬ、答は、きわめてｊｉ共１１
１旬にわたって１祐い１直に保ノｃれることが認められ
ている。ノイラク°ニダーゼ醇系ｔＩＪ性に関して測定
した免役原性「６答は、未保護の抗原によって達成され
る期間よシも藩かに艮ルｊにわたって央寅的に当初の１
旧に保７ヒオ′Ｌな。好適形７７Ｈの保咳（ｐｒｅｓｅ
ｒｖｅｄ ）ワクチンにおいてなコ５、屹、答は未保護
抗原によって生じる応答よｐも１０〜２０倍も長期にわ
たって当初の値にＣ近く保たれる。
ｉ′付及びそれらの紹合わ１ｔの存在下に貯蔵するとき
は、ワクチンの有用貯、嫂寿命が著るしく増大するとい
うことが見出された。好適なワクチンはインフルエンザ
ウィルスワクチンを包含し且つ好適な屯白質水解物に１
ｄカゼインの・ぞンクレアチン消化物などが包含される
。特に好適な蛋白質水ＡＭＩＩＶＥｏＡである。特に本
発明に従って沫岐しタノイラミニダーゼ抗原によって勺
、しる９ｒ！、投原性ＬＬ、答は、きわめてｊｉ共１１
１旬にわたって１祐い１直に保ノｃれることが認められ
ている。ノイラク°ニダーゼ醇系ｔＩＪ性に関して測定
した免役原性「６答は、未保護の抗原によって達成され
る期間よシも藩かに艮ルｊにわたって央寅的に当初の１
旧に保７ヒオ′Ｌな。好適形７７Ｈの保咳（ｐｒｅｓｅ
ｒｖｅｄ ）ワクチンにおいてなコ５、屹、答は未保護
抗原によって生じる応答よｐも１０〜２０倍も長期にわ
たって当初の値にＣ近く保たれる。
本発明の方法は、精製したノイラミニダーゼに対して、
または亢奮もしくは部分的免疫の１０］れかの刺激のた
め（７，） ？Ｊ ％異的（ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｏ ｌ
及び単−將異的（ｍｏｎｏｓｐｅｃｉｆｉａ ）免疫原
性の両方のワクチンに対して適用することができる。本
明細書中に記載するように、単一特異性のワクチンは、
ノイラミニダーゼ抗原に対して有効な抗体の中量を刺激
するものであり、一方、複特異性ワクチンは、両方のウ
ィルス表面抗原と免疫原的に作用する抗体を誘導する。
または亢奮もしくは部分的免疫の１０］れかの刺激のた
め（７，） ？Ｊ ％異的（ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｏ ｌ
及び単−將異的（ｍｏｎｏｓｐｅｃｉｆｉａ ）免疫原
性の両方のワクチンに対して適用することができる。本
明細書中に記載するように、単一特異性のワクチンは、
ノイラミニダーゼ抗原に対して有効な抗体の中量を刺激
するものであり、一方、複特異性ワクチンは、両方のウ
ィルス表面抗原と免疫原的に作用する抗体を誘導する。
本発明は、蛋白質氷解物、アミノ酸またはそれらの混合
物であることができる安定剤を含有する、凍結乾燥した
または液状形態にある、安定化したノイラミニダーゼ含
有ワクチン；及びかかるワクチンの製造方法に関する。
物であることができる安定剤を含有する、凍結乾燥した
または液状形態にある、安定化したノイラミニダーゼ含
有ワクチン；及びかかるワクチンの製造方法に関する。
本発明の蛋白質氷解物は、たとえば複合（ｃｏｎ−ｊｕ
ｇａｔｅｄ ）蛋白質のような蛋白質から誘導されるが
、複合蛋白質の一般的な例は燐蛋白質として知られる群
のものであり、且つその特定な例は糖燐蛋白質（ｇｌｙ
ｃｏｐｈｏｓｐｈｏｐｒｏｔｔｔｉｎ）である。
ｇａｔｅｄ ）蛋白質のような蛋白質から誘導されるが
、複合蛋白質の一般的な例は燐蛋白質として知られる群
のものであり、且つその特定な例は糖燐蛋白質（ｇｌｙ
ｃｏｐｈｏｓｐｈｏｐｒｏｔｔｔｉｎ）である。
好適な糖燐蛋白質の氷解物は、カゼインの・々ンクレア
デン消化物、好ましくはＮ−Ｚ ＡＭＩＮＥ。
デン消化物、好ましくはＮ−Ｚ ＡＭＩＮＥ。
ＮＡＫ−５ｆ４はＮ−Ｚ ＡＭＩＮＥｏＡでｌ）る。
Ｎ−■
Ｚ ＡＭＩＮＥ ＮＡＫの典型的な分析値は下記のと
おシである： 分析 水分 ３５チ 全窒素 １２．ｌチ 遊離７ミ）ＩＩ／全Ｎ ５１．４％カリウム
１．２５チ ナトリウム １゜７５％ ｐＥ （２チ溶液）６．７ 溶解度（透明、３０℃）２５９／１００ＯＣＣアミノ酸
分析 リシン ６９，８ダ／２ヒスチジン
２３．３ アルギニン ２７．６ アスノセラギン酸 ６６．１ スレオニン ３８．８ セリン ５０．４ −１１− グルタミン酸 １８１．、０プ。リン
８９．６ グリシン １７．６ アラニン ２８４ シスチン 計算不能 バリン ６０．４ メチオニン ２４．６ イソロイシン ４６，４ ０イシン ７５．８ チロシン ２９．７ フエニルアラニン ４０．７ トリプトフアン １０．４ Ｎ−Ｚ ＡＡｆｌｌＶＥ＠Ａ（Ｄ分析値は、カリウム
塩が存在しないほかは、同様である。
おシである： 分析 水分 ３５チ 全窒素 １２．ｌチ 遊離７ミ）ＩＩ／全Ｎ ５１．４％カリウム
１．２５チ ナトリウム １゜７５％ ｐＥ （２チ溶液）６．７ 溶解度（透明、３０℃）２５９／１００ＯＣＣアミノ酸
分析 リシン ６９，８ダ／２ヒスチジン
２３．３ アルギニン ２７．６ アスノセラギン酸 ６６．１ スレオニン ３８．８ セリン ５０．４ −１１− グルタミン酸 １８１．、０プ。リン
８９．６ グリシン １７．６ アラニン ２８４ シスチン 計算不能 バリン ６０．４ メチオニン ２４．６ イソロイシン ４６，４ ０イシン ７５．８ チロシン ２９．７ フエニルアラニン ４０．７ トリプトフアン １０．４ Ｎ−Ｚ ＡＡｆｌｌＶＥ＠Ａ（Ｄ分析値は、カリウム
塩が存在しないほかは、同様である。
ロットによってこれらの分析値に僅かな変動が生じるこ
とがあるが、それが消化物の有効性を著るしく低）させ
ることけない。
とがあるが、それが消化物の有効性を著るしく低）させ
ることけない。
−１２一
本発明において有効なアミノ酸は、天然に存在するα−
アミノ酸、好ましくはアラニン、アスノ々ラギン酸、グ
リシン、セリン、スレオニン、トリプトファン、ノ９リ
ンまたはこれらのアミノ酸のどれか２種以上の混合物か
ら成る群から選ばれる。
アミノ酸、好ましくはアラニン、アスノ々ラギン酸、グ
リシン、セリン、スレオニン、トリプトファン、ノ９リ
ンまたはこれらのアミノ酸のどれか２種以上の混合物か
ら成る群から選ばれる。
一般に、安定化すべきワクチン中のノイラミニダーゼ活
性の低下を防止する何らかの天然または合成アミノ酸ま
れは低分子量ペプチドを用いることができる。
性の低下を防止する何らかの天然または合成アミノ酸ま
れは低分子量ペプチドを用いることができる。
本発明の方法によって効果的に安定化することができる
ワクチンは、ワクチン内に含まれる全ウィルスの成分と
してまたは単離し且つ精製した形態としての何れかとし
てウィルスノイラミニダーゼを含有するもの全部を包含
する。単−特異性及び複特異性インフルエンザウィルス
ワクチンの両方を本発明の方法によって安定化すること
ができるが、それらは、たとえば、Ｈ３Ｎ２型〔（Ａ／
ＥｎＱ／８６５／７５） Ｒ）、ＨＩＮｌ型（Ａ／ＵＳ
ＳＲ／９２／Ｔ’１）（Ｄ組換ＬＸ−４９’）イルスワ
クチン、またはＨＴＮｌ型の組換えＸ−６８ワクｆ：ｙ
［Ａ ／Ｅｑｕｉｎｇ／ｐｒａｇｕｅ１５６ （Ｈｅ
ｑｌ）−Ａ／ＵＳＳＲ／９２／７’ｉ （＃１） Ｒ
）を包含する。
ワクチンは、ワクチン内に含まれる全ウィルスの成分と
してまたは単離し且つ精製した形態としての何れかとし
てウィルスノイラミニダーゼを含有するもの全部を包含
する。単−特異性及び複特異性インフルエンザウィルス
ワクチンの両方を本発明の方法によって安定化すること
ができるが、それらは、たとえば、Ｈ３Ｎ２型〔（Ａ／
ＥｎＱ／８６５／７５） Ｒ）、ＨＩＮｌ型（Ａ／ＵＳ
ＳＲ／９２／Ｔ’１）（Ｄ組換ＬＸ−４９’）イルスワ
クチン、またはＨＴＮｌ型の組換えＸ−６８ワクｆ：ｙ
［Ａ ／Ｅｑｕｉｎｇ／ｐｒａｇｕｅ１５６ （Ｈｅ
ｑｌ）−Ａ／ＵＳＳＲ／９２／７’ｉ （＃１） Ｒ
）を包含する。
本発明の方法によって安定化することができる精製した
ノイラミニダーゼ含有インフルエンザワクチンはＮｌ型
ノイラミニダーゼまたはＮ２型ノイラミニダーゼを含有
するものを包含する。これらのワクチンのノイラミニダ
ーゼ成分は、たとえばホンコンウィルスＡ、 ／ ６
Ｂ （Ｈｓ Ａ’２） ノようなミクソウィルス・イ
ンフルエンザ（Ｍｙｘｏ−ｖｔｒｕｓ Ｉｎｆｌｕｅｎ
ｚａ）株、ウィルス、、４６ ｃｌ、＞ＮＦ２株、ウィ
ルスの株ＲＩ ／ ５＋の変異株、ウィルスＡ。
ノイラミニダーゼ含有インフルエンザワクチンはＮｌ型
ノイラミニダーゼまたはＮ２型ノイラミニダーゼを含有
するものを包含する。これらのワクチンのノイラミニダ
ーゼ成分は、たとえばホンコンウィルスＡ、 ／ ６
Ｂ （Ｈｓ Ａ’２） ノようなミクソウィルス・イ
ンフルエンザ（Ｍｙｘｏ−ｖｔｒｕｓ Ｉｎｆｌｕｅｎ
ｚａ）株、ウィルス、、４６ ｃｌ、＞ＮＦ２株、ウィ
ルスの株ＲＩ ／ ５＋の変異株、ウィルスＡ。
の株Ａ、−ＸＬ、ヒトのＡ、ウィルス／シンガポール／
１ ／ ５７、ウィルスＡｔ／イングランド／５２／
６４、ウィルスＡ２／イングランド／７６／６６、組換
えＸ−７（Ｆ−ｘ）などから、種々の方法（すガわち、
参考としてここに挙げる米国特許第４．１３６．１６８
号）によって取得することができる。
１ ／ ５７、ウィルスＡｔ／イングランド／５２／
６４、ウィルスＡ２／イングランド／７６／６６、組換
えＸ−７（Ｆ−ｘ）などから、種々の方法（すガわち、
参考としてここに挙げる米国特許第４．１３６．１６８
号）によって取得することができる。
安定化のためにウィルス製品中に混入せしめるべき蛋白
質氷解物、アミノ酸またはそれらの混合物の割合は、ワ
クチンの濃度、存在するノイラミニダーゼ抗原の相対的
不安水性及びその他の類似の因子に依存する変化を受け
る。乾燥粉末あるいは水または標準的な燐酸塩緩衝ワク
チン希釈剤中で調製した希薄水溶液の形態にある蛋白質
氷解物、アミノ酸またはそれらの混合物を、低温域だは
室温における十分な混合と共に液状のウィルス物質中に
混入して、均一な懸濁液または溶液を得ることが好都合
である。一般に、少なくとも約１．０係（重量／容量）
の濃度が好適である。最大の安定−１５− 性のためには、４０％（重量／容量）の全糊吐を用いる
。約ｏ、ｏ２％（−＋ｉ情／容情）というような低一度
で満足できることもある。本発明はそれよりも高いｍ咋
の使用を予期する。
質氷解物、アミノ酸またはそれらの混合物の割合は、ワ
クチンの濃度、存在するノイラミニダーゼ抗原の相対的
不安水性及びその他の類似の因子に依存する変化を受け
る。乾燥粉末あるいは水または標準的な燐酸塩緩衝ワク
チン希釈剤中で調製した希薄水溶液の形態にある蛋白質
氷解物、アミノ酸またはそれらの混合物を、低温域だは
室温における十分な混合と共に液状のウィルス物質中に
混入して、均一な懸濁液または溶液を得ることが好都合
である。一般に、少なくとも約１．０係（重量／容量）
の濃度が好適である。最大の安定−１５− 性のためには、４０％（重量／容量）の全糊吐を用いる
。約ｏ、ｏ２％（−＋ｉ情／容情）というような低一度
で満足できることもある。本発明はそれよりも高いｍ咋
の使用を予期する。
本発明は前ＨＩシのように液状の水性ウィルス材料のみ
でなく、上記の液体製品を乾燥することによって脚製し
うるよつな乾燥非水性製品をも包含する。本発明の方法
の使用によって、液状の、安定化した単一特異性７ｖ１
インフルエンザワクチンは約４℃において当初の活性の
少なくとも約８０％を維持しながら少なくとも５ケ月間
貯蔵することができ：液状の、安定化した接物異性Ｎｌ
インフルエンザワクチンは約４℃において当初の活性の
少なくとも７５％を維持しつつ少なくとも約９ケ月間貯
蔵することができ；月っ安定化した接待異性Ｎ２インフ
ルエンザワクチンは約３７℃において当初のｒ６件の少
なくとも７０％を維持しつつ− １６− ２４時間貯蔵することができる。安定化した精製ノイラ
ミニダーゼワクチンもｌＫＩ」様な安定性を表わすもの
と予想される。
でなく、上記の液体製品を乾燥することによって脚製し
うるよつな乾燥非水性製品をも包含する。本発明の方法
の使用によって、液状の、安定化した単一特異性７ｖ１
インフルエンザワクチンは約４℃において当初の活性の
少なくとも約８０％を維持しながら少なくとも５ケ月間
貯蔵することができ：液状の、安定化した接物異性Ｎｌ
インフルエンザワクチンは約４℃において当初の活性の
少なくとも７５％を維持しつつ少なくとも約９ケ月間貯
蔵することができ；月っ安定化した接待異性Ｎ２インフ
ルエンザワクチンは約３７℃において当初のｒ６件の少
なくとも７０％を維持しつつ− １６− ２４時間貯蔵することができる。安定化した精製ノイラ
ミニダーゼワクチンもｌＫＩ」様な安定性を表わすもの
と予想される。
通例に従って、本発明の製品は、予め無菌とした成分を
用いる無菌条件下に加工することが重重しい。貯蔵中の
無菌性は、たとえばチメロザール（ｔｈｉη１ｅｒｏｓ
ａｌ ）のような抗原適応性の殺菌物質の配置によって
維持することができる。本明細隻中では、特にことわシ
がない限り、抗原性の！ｌ／ｌ賢ｆ、Ｊ、’可能ならば
処理の間に低温（約４°Ｃ）に保つことが好ましい。
用いる無菌条件下に加工することが重重しい。貯蔵中の
無菌性は、たとえばチメロザール（ｔｈｉη１ｅｒｏｓ
ａｌ ）のような抗原適応性の殺菌物質の配置によって
維持することができる。本明細隻中では、特にことわシ
がない限り、抗原性の！ｌ／ｌ賢ｆ、Ｊ、’可能ならば
処理の間に低温（約４°Ｃ）に保つことが好ましい。
本ン６明の方法に従ってウセられる安定化ワクチンは、
製薬学的調製物、更に詳＃４１にね１、非紅日的林内投
与または経口投与に適する液状のＩＮ製物の形態で提供
される。好適な投与形態は筋肉内接４市によるものでり
る。
製薬学的調製物、更に詳＃４１にね１、非紅日的林内投
与または経口投与に適する液状のＩＮ製物の形態で提供
される。好適な投与形態は筋肉内接４市によるものでり
る。
通常の投与輩は投与する医師の判断に従って決−１７一
定されるように、患者の年令または体重及び１日当りの
回数に依存する。好適な投与匍は包装の説明相中に提示
されており、人体実験における投与応答の研究から且つ
捷た米国食品医薬凸周生物学部の要件に従って決定され
る。
回数に依存する。好適な投与匍は包装の説明相中に提示
されており、人体実験における投与応答の研究から且つ
捷た米国食品医薬凸周生物学部の要件に従って決定され
る。
本発明を更に、本発明の桓゛を念のいくつかのｖｌ−適
な実施形態並びに現任用いられている安定性の低いワク
チンとの比較を詳細にろくしている、り下の実施例を３
照することによって説明する。
な実施形態並びに現任用いられている安定性の低いワク
チンとの比較を詳細にろくしている、り下の実施例を３
照することによって説明する。
り下の実施例は本発明を例証するものであるが、しかし
本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。本
発明のその他の実施例は当業者にとって本発明の精神か
ら逸脱することなく明白でりろう。
本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。本
発明のその他の実施例は当業者にとって本発明の精神か
ら逸脱することなく明白でりろう。
安定化
第１表はＨ’ｉＮｌ型の１％異性組換え抗原的交配Ｘ−
６８（ンフルエンザ ウィルス ワクチン［Ａ／Ｅｑｕ
ｉｎｅ／Ｐｒａｇｕｅ１５６ （ＦＩＴ） −Ａ／
ＵＳＳＲ／９２／７７ （＃１１ Ｒ〕のノイラミ
ニダーゼ活性によって測ボしたときの免疫原性応答の安
だ化に対するＮ−Ｚ ＡＭＩＮＥ■ＮＡＫの効果を示
す。
６８（ンフルエンザ ウィルス ワクチン［Ａ／Ｅｑｕ
ｉｎｅ／Ｐｒａｇｕｅ１５６ （ＦＩＴ） −Ａ／
ＵＳＳＲ／９２／７７ （＃１１ Ｒ〕のノイラミ
ニダーゼ活性によって測ボしたときの免疫原性応答の安
だ化に対するＮ−Ｚ ＡＭＩＮＥ■ＮＡＫの効果を示
す。
１１７ Ｎ ｌ全ワクチア （１） ９６０ ｍｅ （
Ｚ）試料を９００−と６０−の２部分に分けた。ワクチ
ン希釈剤中で調製したＮ −Ｚ ＡＭＩＮＥ■ＮＡＫ
の２０チ溶液４７、４ ｍｌ及び水中で調製したチメロ
サールの１１゜８％溶液０．９ ｔｎｌを、９００１ｎ
ｌの部分に泳加した。
Ｚ）試料を９００−と６０−の２部分に分けた。ワクチ
ン希釈剤中で調製したＮ −Ｚ ＡＭＩＮＥ■ＮＡＫ
の２０チ溶液４７、４ ｍｌ及び水中で調製したチメロ
サールの１１゜８％溶液０．９ ｔｎｌを、９００１ｎ
ｌの部分に泳加した。
６０ｍ１のｔ１１ｓ分には３．２ ｍｌのワクチン希釈
剤と０．６ｒｎｌの１１，８％チメロザールＭ液を加え
に、。両部外を濾過によって滅菌して４〜８℃でバルク
形態で貯蔵した。試料をポ期的に無菌的に取出して、Ｉ
４’ ａｒｒｅｎ−Ａｍｉｎｏ ｆｆ法の変法〔Ｒ，Ｇ
、 Ｗｅｂｓｔｅｒ及びＩＰ’、 Ｇ、 Ｌａｕｅｒ、
Ｊ、 Ｉｍｍｕｎｏｌ、、 ９９．４９〜５４ （
１９６７）’］を用いて、ノイラミニダーゼ活性（ｌこ
ついて分析した。
剤と０．６ｒｎｌの１１，８％チメロザールＭ液を加え
に、。両部外を濾過によって滅菌して４〜８℃でバルク
形態で貯蔵した。試料をポ期的に無菌的に取出して、Ｉ
４’ ａｒｒｅｎ−Ａｍｉｎｏ ｆｆ法の変法〔Ｒ，Ｇ
、 Ｗｅｂｓｔｅｒ及びＩＰ’、 Ｇ、 Ｌａｕｅｒ、
Ｊ、 Ｉｍｍｕｎｏｌ、、 ９９．４９〜５４ （
１９６７）’］を用いて、ノイラミニダーゼ活性（ｌこ
ついて分析した。
一７０℃で貯蔵したノイラミニダーゼ対照物ツガラスア
ンプル中に封じた調製物の解凍した０、 ３−の部分を
分析することによって得た値をも示す。
ンプル中に封じた調製物の解凍した０、 ３−の部分を
分析することによって得た値をも示す。
第１ｉにこれらの試験の結果を示す。
第１ ｆｉ Ｎ −；！、 ＡＭＩＮＥ■ＩＶＡＫの
添加Ｋ ｆ 、６４℃におけるＨ ７ Ｎ １ワクチン
の安ＶＡＫ ＊ ０ ３６．３ ３４，０ ４５．８
６ ３７．７ ２６．８ ４．６．
２１２ ３３．２ １８．５ ４４
．３１３ ２８．１ １７，８ ３
８．２２１ ３４．８ １６，９
４５．７２６ ３５．２ １２
．Ｆｉ ４７．９４１ ３９．１
１０．４ ４６．９４７
４６、０ ６．１ ４７．６
５５ ４４、１ ４．３
５０．４？９ ３４．４
０，５ ４９．０９０ ３２．
１ ０，９ ４７．２１０５
２７．０ ０．７
４１．６１２８ ３］、８
０．３ ４９．１＊ワクチンｌ−当り１
分間に７エツイン（ｆｅ ｔｕｔｎ ）から遊離するＮ
−アセチル ノイラミン酸のナノモル数。
添加Ｋ ｆ 、６４℃におけるＨ ７ Ｎ １ワクチン
の安ＶＡＫ ＊ ０ ３６．３ ３４，０ ４５．８
６ ３７．７ ２６．８ ４．６．
２１２ ３３．２ １８．５ ４４
．３１３ ２８．１ １７，８ ３
８．２２１ ３４．８ １６，９
４５．７２６ ３５．２ １２
．Ｆｉ ４７．９４１ ３９．１
１０．４ ４６．９４７
４６、０ ６．１ ４７．６
５５ ４４、１ ４．３
５０．４？９ ３４．４
０，５ ４９．０９０ ３２．
１ ０，９ ４７．２１０５
２７．０ ０．７
４１．６１２８ ３］、８
０．３ ４９．１＊ワクチンｌ−当り１
分間に７エツイン（ｆｅ ｔｕｔｎ ）から遊離するＮ
−アセチル ノイラミン酸のナノモル数。
安定化したワクチンは５ケ月間にその活性の約２０％を
失なうのに対して、安菫剤なしで調製しｌ（ワクチンは
３ケ月間にその粘性のほとんどすべてを失なった。
失なうのに対して、安菫剤なしで調製しｌ（ワクチンは
３ケ月間にその粘性のほとんどすべてを失なった。
−２１−
′−）！施世」２ 作詩異性＃ｌ央１クイルス ワクチ
ンの安定化 ＨＩＮｌ （Ａ／ＵＳＳＲ／９２／’７’ｌ）全ワクチ
ンの１７３ｒｎｌの＝Ｂ分全１それぞれ８Ｇ、 ５ ｎ
ｔｌの２品分に分けた。その一方に、ワクチン希釈剤中
で調製したＡＩ −ｚ ＡＭＩｆＶＥ■ＲＡＫの２０
係溶液４゜６ ＋ｎｌと水中の１１．８係チメロサール
溶液００９−を加えた。もう一つの１４ｙ分には４．６
−のワクチン荀釈削と０．０９−の１１．８％ナメロサ
ール浴液を加えた。画部分を濾過によって滅菌して、４
〜８°Ｃにおいてそのま筐貯蔵した。試料を無菌的に取
出して、実施ド・１」１の手）瞼により約９ケ月の期間
じわたってノイラミニダーゼ＃索活性について検査した
。第２堀はこれらの試験の結果を示す。
ンの安定化 ＨＩＮｌ （Ａ／ＵＳＳＲ／９２／’７’ｌ）全ワクチ
ンの１７３ｒｎｌの＝Ｂ分全１それぞれ８Ｇ、 ５ ｎ
ｔｌの２品分に分けた。その一方に、ワクチン希釈剤中
で調製したＡＩ −ｚ ＡＭＩｆＶＥ■ＲＡＫの２０
係溶液４゜６ ＋ｎｌと水中の１１．８係チメロサール
溶液００９−を加えた。もう一つの１４ｙ分には４．６
−のワクチン荀釈削と０．０９−の１１．８％ナメロサ
ール浴液を加えた。画部分を濾過によって滅菌して、４
〜８°Ｃにおいてそのま筐貯蔵した。試料を無菌的に取
出して、実施ド・１」１の手）瞼により約９ケ月の期間
じわたってノイラミニダーゼ＃索活性について検査した
。第２堀はこれらの試験の結果を示す。
ｆｐ ２ 表Ｎ −Ｚ ＡＭ ＩＮ ＥｏＮ ＡＫ （
Ｄ 屹ｊＪＩＩ ＶＣＪ−ル４℃におけるＨＩＮ１イン
フルエンザ ワクチンの安定化 ワクチン ワクチン ＊杢 ０ ５６、０ ２２．５ ４９．０１１
５６．２ １１．２ ４７．２２６
５０．２ ６，８ ４１．４８３ ５６
、４ ０．６ ４８．９亨 ２７９ ４２．０ ０．０ ３２．０＊
抹結対照吻の新しいロットを便用 岑＊ワクチンｌ−当り１分間当りにフェツインから遊１
１＋ｎシたＮ−アセチルノイラミン酸（ＨＡ７ｖ、４）
のナノモル数。
Ｄ 屹ｊＪＩＩ ＶＣＪ−ル４℃におけるＨＩＮ１イン
フルエンザ ワクチンの安定化 ワクチン ワクチン ＊杢 ０ ５６、０ ２２．５ ４９．０１１
５６．２ １１．２ ４７．２２６
５０．２ ６，８ ４１．４８３ ５６
、４ ０．６ ４８．９亨 ２７９ ４２．０ ０．０ ３２．０＊
抹結対照吻の新しいロットを便用 岑＊ワクチンｌ−当り１分間当りにフェツインから遊１
１＋ｎシたＮ−アセチルノイラミン酸（ＨＡ７ｖ、４）
のナノモル数。
女に化したワクチンは９ケ月間ぐこ当初の活性の約２５
％を失なうのに対して、女に剤なしでルー、Ｊ 製した
ワクチンは３ケ月間Ｖ・≦その活性のほとんどすべて金
欠なった。
％を失なうのに対して、女に剤なしでルー、Ｊ 製した
ワクチンは３ケ月間Ｖ・≦その活性のほとんどすべて金
欠なった。
定化
Ｎ２型ノイラミニダーゼは４℃で安定である。
Ａ’ｌＪｊノイラミニダーゼ含有ワクチンに対するＮ−
Ｚ ＡＭＩＮＥ＠ＮＡＫの効果を実証するために３７
℃における促進女足性試験を用いた。
Ｚ ＡＭＩＮＥ＠ＮＡＫの効果を実証するために３７
℃における促進女足性試験を用いた。
Ｈ３１Ｖ２型Ｃ（Ａ／Ｅｎｇ／ ８６４ ／７ ｓ）
Ｒ）の襟特異性高収率組換えＸ−４９インフルエンザウ
イルス ワクチンの４０−の試料を１９１ｎｌ スツの
２部分に分けた。一方のｒ！１・分にワクチン希釈剤中
ノＮ −Ｚ ＡＭＩＩＶＥｏＮＡＫ ノ２０ ’％ 溶
ｇ ｌ ｍ／ヲ加えた。他の部分ｖＣはｌ ｍｌのワク
チン布釈剤舎加えた。各部分試料からｌＯ＋＋＋／ｆ：
Ｌｉ２（出して３７℃で２４（時間保ち、−力、残りの
部分金４°Ｃで貯蔵した。
Ｒ）の襟特異性高収率組換えＸ−４９インフルエンザウ
イルス ワクチンの４０−の試料を１９１ｎｌ スツの
２部分に分けた。一方のｒ！１・分にワクチン希釈剤中
ノＮ −Ｚ ＡＭＩＩＶＥｏＮＡＫ ノ２０ ’％ 溶
ｇ ｌ ｍ／ヲ加えた。他の部分ｖＣはｌ ｍｌのワク
チン布釈剤舎加えた。各部分試料からｌＯ＋＋＋／ｆ：
Ｌｉ２（出して３７℃で２４（時間保ち、−力、残りの
部分金４°Ｃで貯蔵した。
２４時間の保持時間の終９に全試料を実施例１の手順に
よってノイラミニダーゼ酵素活性について分析した。活
ゼ１−既知の対照試料について行なった分析を用いて分
析手１１ｆ４を点検した。第３表は得々−る結果を示す
。
よってノイラミニダーゼ酵素活性について分析した。活
ゼ１−既知の対照試料について行なった分析を用いて分
析手１１ｆ４を点検した。第３表は得々−る結果を示す
。
第３表 Ｎ −Ｚ ＡＭ’１ＮＥｏＩｖＡＫｔＤ’ａ加
ＩＦ−ヨ７：ｒ３７℃にオケル１１３ Ａ＋ ２インフ
ルエンワクチン Ｈ３Ｎ２ ワクチン ＊ ０ １９２ １９３ ３１
２４時間 １３５ ７３ −−＊
ワクチン１−当り１分間にフェツインから遊顧ｊしたＩ
ＶＡＮＡのナノモル数 これらの結果は、３７°Ｃにおける促進安定化試験にお
いて、安定化したＸ−４９（Ｒ３Ａ’２）インフルエン
ザ ウィルス（社）当初のｎ素？を性ｏ３゜％’（ｒ失
なうのに対して、非安ボ化ウィルスは２４時間の曲に当
初のｉ古件の６２係を失々った。
ＩＦ−ヨ７：ｒ３７℃にオケル１１３ Ａ＋ ２インフ
ルエンワクチン Ｈ３Ｎ２ ワクチン ＊ ０ １９２ １９３ ３１
２４時間 １３５ ７３ −−＊
ワクチン１−当り１分間にフェツインから遊顧ｊしたＩ
ＶＡＮＡのナノモル数 これらの結果は、３７°Ｃにおける促進安定化試験にお
いて、安定化したＸ−４９（Ｒ３Ａ’２）インフルエン
ザ ウィルス（社）当初のｎ素？を性ｏ３゜％’（ｒ失
なうのに対して、非安ボ化ウィルスは２４時間の曲に当
初のｉ古件の６２係を失々った。
Ａ、４℃における培養後のワクチン免疫原性の安Ｈ７＃
１型単−特異性ｘ−６８インフルエンザウィルス ワ
クチン［Ａ ／ Ｅ ｑｕｉｎｅ ／ ｐｒａｇｕｅ
１５６ （Ｉ１７）−Ａ７ｔｌＳＳＲ／ｑ ？／７７
／ （Ａ’１ｍ／ｌ）の全体で８５５ ｍｅのバルク６
”Ｊ製物全処方した。このル・′！１製物の６０−の試
料を取出し、ｅ過して４〜８°Ｃで貯蔵した。残りの７
９０ ＋ｎｌにワクチン祁釈剤中の４１．６ ｍＩＶの
２０％＃ −Ｚ ＡＭＩＮＥ。
１型単−特異性ｘ−６８インフルエンザウィルス ワ
クチン［Ａ ／ Ｅ ｑｕｉｎｅ ／ ｐｒａｇｕｅ
１５６ （Ｉ１７）−Ａ７ｔｌＳＳＲ／ｑ ？／７７
／ （Ａ’１ｍ／ｌ）の全体で８５５ ｍｅのバルク６
”Ｊ製物全処方した。このル・′！１製物の６０−の試
料を取出し、ｅ過して４〜８°Ｃで貯蔵した。残りの７
９０ ＋ｎｌにワクチン祁釈剤中の４１．６ ｍＩＶの
２０％＃ −Ｚ ＡＭＩＮＥ。
ＩＷ’ Ａ Ｋ−６加えた。このワタブンパルクｆ ／
濾過り、、注射斧、中に分配して４〜８℃に保った。
濾過り、、注射斧、中に分配して４〜８℃に保った。
１４４日の貯蔵後に八−Ｚ ＡＭＩＮＥ■ＩＶＡＫの
亦加目１］に採取したワクチン試料を、Ａ−ＺＡＭ Ｉ
Ｎ Ｅ■Ｎ７４Ｋを含有するワクチンと、１６匹のウ
サギ中で比較した。
亦加目１］に採取したワクチン試料を、Ａ−ＺＡＭ Ｉ
Ｎ Ｅ■Ｎ７４Ｋを含有するワクチンと、１６匹のウ
サギ中で比較した。
Ａ部 −Ｚ ＡＭＩＮＥｏＩＶＡＫ ヲ９ 有シナイ
ワタｆ ンは未′＃ｉ釈及び１：４とｌ：１６の希釈で
試験した。
ワタｆ ンは未′＃ｉ釈及び１：４とｌ：１６の希釈で
試験した。
釈及びｌ：４．１：１６．１：６４、ｌ：１２８の希釈
において試験した。谷希釈液（０，５ｄ）を２匹のウサ
ギの吉す脈円に０日及び４０日恢稚した。
において試験した。谷希釈液（０，５ｄ）を２匹のウサ
ギの吉す脈円に０日及び４０日恢稚した。
ウサギを０．１０，２１，４０及び４７日に採血しに０
これらり採血からの拙清を、７Ｖｌ型ノイラミニダービ
への抗体の発現についてノイラミニダーゼ抑制試聴によ
って検査した（（、’ｅｎｔｅｒ ｆｏｒＤｉｓｅａｓ
ｅ Ｃｏｎｔｒｏｔ、１９７５、ＡｄｖａｎｃｅｄＬａ
ｂｏｒａｔｏｒｙ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ Ｆｏｒ Ｉ
ｎｆｌｕｅｎｚａＤｉａｇｎｏｓｉｓ、Ｉｍｗｖｒｂｎ
ｏｌｏｇｙ Ｓ ｅｒｉｅｓ Ａ ６ 。
これらり採血からの拙清を、７Ｖｌ型ノイラミニダービ
への抗体の発現についてノイラミニダーゼ抑制試聴によ
って検査した（（、’ｅｎｔｅｒ ｆｏｒＤｉｓｅａｓ
ｅ Ｃｏｎｔｒｏｔ、１９７５、ＡｄｖａｎｃｅｄＬａ
ｂｏｒａｔｏｒｙ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ Ｆｏｒ Ｉ
ｎｆｌｕｅｎｚａＤｉａｇｎｏｓｉｓ、Ｉｍｗｖｒｂｎ
ｏｌｏｇｙ Ｓ ｅｒｉｅｓ Ａ ６ 。
Ｃ’ｇｎｔｅｒ Ｆｏｒ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｏｎｔｒ
ｏｌ、 Ａｔｔａｎｔａ。
ｏｌ、 Ａｔｔａｎｔａ。
Ｇａ、 ）。 ｌ：３２の抗体力価紮ボした血清は血清
−２７− ノイラミニダーゼ抑制抗体の存在Ｇ・（一対して陽性と
みなされる。検査したウサギの５０％が陽性の応答を示
すワクチン希釈度を第４表に示す。
−２７− ノイラミニダーゼ抑制抗体の存在Ｇ・（一対して陽性と
みなされる。検査したウサギの５０％が陽性の応答を示
すワクチン希釈度を第４表に示す。
第４表 Ｎ−Ｚ ＡＭＩＮＥ＠ＮＡＫ含有及び非含有Ｉ
Ｉ ７ Ｎ １組換えワクチンの４℃で１４４日間貯蔵
後のウサギの抗原性 ＲＡＭ宮有 択＊＊６４ＩＶ
ＡＫ非含有 ４
＊１希釈度について２匹のウサギに対して０及び４０日
にワクチンを接種した。
Ｉ ７ Ｎ １組換えワクチンの４℃で１４４日間貯蔵
後のウサギの抗原性 ＲＡＭ宮有 択＊＊６４ＩＶ
ＡＫ非含有 ４
＊１希釈度について２匹のウサギに対して０及び４０日
にワクチンを接種した。
＊＊接種したウサギの５０チが陽性の抗体応答を示す希
釈度 −２８− これらの結果は、約２６単位（ナノモル／ ｍｅ ７分
）のノイラミニダーゼ酵素活性を有する安雉化したワク
チンは、ウサギ中に、６単位未満の活性を有する非安定
化部分試料で（ま不可能な第一次の抗体ｔｒ；答を刺激
すること、Ｃバ可能でろることを示している。ｉｌＪ二
の接種による第二次すなわちブースタ一応答は、安定化
したワクチンによる接種後には非安定化ワクチンによる
接種後よりも１６倍も筒い。
釈度 −２８− これらの結果は、約２６単位（ナノモル／ ｍｅ ７分
）のノイラミニダーゼ酵素活性を有する安雉化したワク
チンは、ウサギ中に、６単位未満の活性を有する非安定
化部分試料で（ま不可能な第一次の抗体ｔｒ；答を刺激
すること、Ｃバ可能でろることを示している。ｉｌＪ二
の接種による第二次すなわちブースタ一応答は、安定化
したワクチンによる接種後には非安定化ワクチンによる
接種後よりも１６倍も筒い。
Ｂ、３７℃における接種後のワクチン免疫原性のＨ７Ｎ
ｌ型の単一特異性Ｘ−６８インフルエンｆｆｙイル、；
＜ ｒ）クチン〔Ａ／Ｅｑｕｉｎｅ／Ｐｒａｇｕｅ１
５６ （Ｈｑ） −Ａ／Ｕ ＳＳＲ／ｌａ ７／７
７ ＜Ｎ１）Ｒ〕の７８ｍ１の試料から１９−ずつの
２部分試料を調製した。一方の部分試料しはワクチン希
釈剤中（ＤＮ−Ｚ ＡＭＩＮＥｏｖＡＫ（０２０％溶
液１−２９− ｍｌ ？：加えた。他方のｔ９Ｂ分試利にはｌｔｎ！、
のワクチンィ０釈剤を加えた。各試料から１０−の部分
を取出して３７°Ｃで２２時間保った。２２時間の装置
の終りに両試料を実施例１の方法によってノイラミニダ
ーゼ活性について分析し、４℃で２４時間保存したのち
、上記Ａ部で用いた手ｊ＠によってウサギにおける抗体
応答について試験した。その結果を第５表に示す。
ｌ型の単一特異性Ｘ−６８インフルエンｆｆｙイル、；
＜ ｒ）クチン〔Ａ／Ｅｑｕｉｎｅ／Ｐｒａｇｕｅ１
５６ （Ｈｑ） −Ａ／Ｕ ＳＳＲ／ｌａ ７／７
７ ＜Ｎ１）Ｒ〕の７８ｍ１の試料から１９−ずつの
２部分試料を調製した。一方の部分試料しはワクチン希
釈剤中（ＤＮ−Ｚ ＡＭＩＮＥｏｖＡＫ（０２０％溶
液１−２９− ｍｌ ？：加えた。他方のｔ９Ｂ分試利にはｌｔｎ！、
のワクチンィ０釈剤を加えた。各試料から１０−の部分
を取出して３７°Ｃで２２時間保った。２２時間の装置
の終りに両試料を実施例１の方法によってノイラミニダ
ーゼ活性について分析し、４℃で２４時間保存したのち
、上記Ａ部で用いた手ｊ＠によってウサギにおける抗体
応答について試験した。その結果を第５表に示す。
第５表 Ｎ−Ｚ ＡＭＩＮＥ＠１ＶＡＫ含有及び非含有
Ｈ７Ｎ１組換えワクチンの３７℃で ２２時間温＃後のウサギ抗原性 −３０− ＮＡＫ非含有 ５００００１：２ ＊１希釈度当り２匹のウサギに対してワクチンをＯ及び
４０日に接梼した。
Ｈ７Ｎ１組換えワクチンの３７℃で ２２時間温＃後のウサギ抗原性 −３０− ＮＡＫ非含有 ５００００１：２ ＊１希釈度当り２匹のウサギに対してワクチンをＯ及び
４０日に接梼した。
亨＊接種したウサギの５０チが陽性の抗体応答を示すワ
クチン希釈度。
クチン希釈度。
これらの結果は、比較的高いノイラミニダーゼ＃素活性
（３１単位）ケ有するワクチンは比較的低い活例二（５
単位）會ゼするものよシもウサギの第−次及び第二次ｔ
ｌ゛、；谷に関して免疫原性が藺いことを１ｊＪ−現し
ている。紀−次Ｌ６、答は安だ化したワクチンにおいて
のみ見られ、また第二次ｒし答はワクチンの非安定化試
料よりも、やはり１６倍も筒い。
（３１単位）ケ有するワクチンは比較的低い活例二（５
単位）會ゼするものよシもウサギの第−次及び第二次ｔ
ｌ゛、；谷に関して免疫原性が藺いことを１ｊＪ−現し
ている。紀−次Ｌ６、答は安だ化したワクチンにおいて
のみ見られ、また第二次ｒし答はワクチンの非安定化試
料よりも、やはり１６倍も筒い。
Ｎ−Ｚ ＡＪイＩＲＥ＠ＮＡＫの分析において一般的に
認められる１６ｉ１ｊｉ＋のアミノ酸を安定化活性につ
いて試験した。氷解物のＩ Ａ−セント溶液の典型的な
全アミノ酸分析において割められる濃度で各アくノ酸を
使用した。
認められる１６ｉ１ｊｉ＋のアミノ酸を安定化活性につ
いて試験した。氷解物のＩ Ａ−セント溶液の典型的な
全アミノ酸分析において割められる濃度で各アくノ酸を
使用した。
１１’ ７ Ｎ ｌ型巣−特異性Ｘ−６８インフルエン
ザウイ／１．ス’７クチン［Ａ ／ Ｅ ｑｕｉｎｅ
／ Ｐｒａｇｕｅ １５６ （、Ｚｒ２）−Ａ／ＵＳ
ＳＲ／９７／’Ｉ’ｌ （Ｎｌ）Ｒ〕の７５ｍｅの欅
分子：３．８−ずつの１９部分試料に分けた。これらの
中の１６部分試料を用いて、典型的なアミノ酸分析に基
づくｆｉ／−Ｚ ＡＭＩＩＶＥ＠）ＮＡＫ の１％溶液
中で予測される＃度に類似する濃度の各アミノ酸を含有
する試料を調製した。これは、０．２−の原アミノ酸浴
液を各部分試料に加えることによって行なった。Ｎ−Ｚ
ＡＭＩＮＥ＠）ＮＡＫを含有するものとしないものと
の２部分試料をも調製した。これらの１８試料を３７℃
で２４時間温装した。１９番目のワクチン部分試料を対
照として４℃で保存した。２４時間の温置後に全試料を
実施例１の手順によってノイラミニダーゼ活性について
分析した。第６表は試験濃度における各アミノ酸に対し
て賭出いれた活性を示す。
ザウイ／１．ス’７クチン［Ａ ／ Ｅ ｑｕｉｎｅ
／ Ｐｒａｇｕｅ １５６ （、Ｚｒ２）−Ａ／ＵＳ
ＳＲ／９７／’Ｉ’ｌ （Ｎｌ）Ｒ〕の７５ｍｅの欅
分子：３．８−ずつの１９部分試料に分けた。これらの
中の１６部分試料を用いて、典型的なアミノ酸分析に基
づくｆｉ／−Ｚ ＡＭＩＩＶＥ＠）ＮＡＫ の１％溶液
中で予測される＃度に類似する濃度の各アミノ酸を含有
する試料を調製した。これは、０．２−の原アミノ酸浴
液を各部分試料に加えることによって行なった。Ｎ−Ｚ
ＡＭＩＮＥ＠）ＮＡＫを含有するものとしないものと
の２部分試料をも調製した。これらの１８試料を３７℃
で２４時間温装した。１９番目のワクチン部分試料を対
照として４℃で保存した。２４時間の温置後に全試料を
実施例１の手順によってノイラミニダーゼ活性について
分析した。第６表は試験濃度における各アミノ酸に対し
て賭出いれた活性を示す。
第６表 ３７℃におけるＨ７Ｎ１ノイラミニダーゼ酵累
活性の各種アミノ酸による安 −ｆラーン３フ°ｃｏ、ｏａ％ ９．０アメ・ン
ラギン酸 ＃ ０．０’Ｊチ ５．９グルタ
ミン酸 ’ ｏ、’ｉｇチ ４．５グリシ
ン ｚ ｏ、ｅａチ ８，５イソロイ
シン ｌ ０．Ｏｓチ ５．２０イシン
＃ ０．０８％ ７．３リシン
ｌ ００７％ ８５ヒス−ｒｓ／ンＩ
Ｏ，０２％ １３．１メチオニン Ｉ
Ｏ，０２％ ８．９フエニルアラニンＩ ０
０４％ ９．１＝ ３３− プロリン ３７℃ ０．０９％ ｌＺ３セリ
ン ０．０５％ ９．１トレオニン
０．０４％ ６．７トリプト７７ン
’ ０．０１％ １０．４チロシン
’ ０．０３％ ｔ４バリン
０．０６チ ６．７な し
−−４，８ＡＫ ３８．９ な し ４° −一＊ｌ−当
り１分間についてフェツインから遊離するＡ−アセチル
ノイラミン酸のナノモル数。
活性の各種アミノ酸による安 −ｆラーン３フ°ｃｏ、ｏａ％ ９．０アメ・ン
ラギン酸 ＃ ０．０’Ｊチ ５．９グルタ
ミン酸 ’ ｏ、’ｉｇチ ４．５グリシ
ン ｚ ｏ、ｅａチ ８，５イソロイ
シン ｌ ０．Ｏｓチ ５．２０イシン
＃ ０．０８％ ７．３リシン
ｌ ００７％ ８５ヒス−ｒｓ／ンＩ
Ｏ，０２％ １３．１メチオニン Ｉ
Ｏ，０２％ ８．９フエニルアラニンＩ ０
０４％ ９．１＝ ３３− プロリン ３７℃ ０．０９％ ｌＺ３セリ
ン ０．０５％ ９．１トレオニン
０．０４％ ６．７トリプト７７ン
’ ０．０１％ １０．４チロシン
’ ０．０３％ ｔ４バリン
０．０６チ ６．７な し
−−４，８ＡＫ ３８．９ な し ４° −一＊ｌ−当
り１分間についてフェツインから遊離するＡ−アセチル
ノイラミン酸のナノモル数。
第６表は、３種のアミノ酸を除けばインフルエンザウィ
ルスへの単独のアミノ酸の添加が記載の濃度において活
性に対して多少の安定化効果を有してはいるけれども、
明らかに、対照として用いたＮ −Ｚ ＡＭＩＮＥ＠Ｎ
ＡＫと同じ程度ではないという− ３４ − ことを示している。３７℃における７・１揮の〉１２０
チの安定化は有意々ものとみなした。更に尚い７ ミ／
酸１１１１ハ、Ｎ−Ｚ ＡＡｆｌＮＥｏＮＡＫ ドア
ミ、ｉ酸の組合わせにおけると同様に、史に商い安定
化効果を提供するものと思われる。
ルスへの単独のアミノ酸の添加が記載の濃度において活
性に対して多少の安定化効果を有してはいるけれども、
明らかに、対照として用いたＮ −Ｚ ＡＭＩＮＥ＠Ｎ
ＡＫと同じ程度ではないという− ３４ − ことを示している。３７℃における７・１揮の〉１２０
チの安定化は有意々ものとみなした。更に尚い７ ミ／
酸１１１１ハ、Ｎ−Ｚ ＡＡｆｌＮＥｏＮＡＫ ドア
ミ、ｉ酸の組合わせにおけると同様に、史に商い安定
化効果を提供するものと思われる。
ンの安定化
高い安定化活性をイ１する２神のアミノ酸を増大した＃
！度で月つ相互に組合わせて使用するために迅択して、
インフルエンザ ウィルス ノイラミニダーゼ活性に対
する安定化効果を測定した。
！度で月つ相互に組合わせて使用するために迅択して、
インフルエンザ ウィルス ノイラミニダーゼ活性に対
する安定化効果を測定した。
Ｈ’ｌＮｌ型の単一特異性Ｘ−６８インフルエンサウイ
ルスワクｆ ７ ＣＡ ／ Ｅ ｑｕｉｎｅ ／ Ｐｒ
ａｇｕｅ１５６ （ＩＩ ７） −Ａ／ＵＳＳＲ／
９７／７７ （Ｎｌ）Ｒ〕の４８ｍｅの部分を３８ゴ
ずつの１１の部分試料に分けた。その中の８試料にヒス
チジンとゾ０１Ｊンの種々の原液０．２ ｍｌを加える
ことによつるものと含有しないものとの２部分試料をも
調製した、１．８ ｍｌのヒスチジンとゾロリンの試料
の部分試料を掛合して、第７表に示し／こ濃度の４混合
物を調製した。これらの１４試料を３７℃で２４時間？
＆Ａ ｆｔｊした。対照としてのワクチンのみの部分試
料は４℃に保った。２４時間の温随時間の終りに、実施
例１の手順によってノイラｉニダーゼ「静累活性につい
て分析した。その結果を第７表に示す。
ルスワクｆ ７ ＣＡ ／ Ｅ ｑｕｉｎｅ ／ Ｐｒ
ａｇｕｅ１５６ （ＩＩ ７） −Ａ／ＵＳＳＲ／
９７／７７ （Ｎｌ）Ｒ〕の４８ｍｅの部分を３８ゴ
ずつの１１の部分試料に分けた。その中の８試料にヒス
チジンとゾ０１Ｊンの種々の原液０．２ ｍｌを加える
ことによつるものと含有しないものとの２部分試料をも
調製した、１．８ ｍｌのヒスチジンとゾロリンの試料
の部分試料を掛合して、第７表に示し／こ濃度の４混合
物を調製した。これらの１４試料を３７℃で２４時間？
＆Ａ ｆｔｊした。対照としてのワクチンのみの部分試
料は４℃に保った。２４時間の温随時間の終りに、実施
例１の手順によってノイラｉニダーゼ「静累活性につい
て分析した。その結果を第７表に示す。
−３７一
対照値：ウィルスのみ、３７℃において御粘性一４．７
１ ％ 、Ａ’ −Ｚ ＡＭＩＩＶＥｏＩＩＡＫ 含有
ウィルス、 ３７℃において御粘性−４０，０ ウィルスのみ、４℃において御粘性＝４６８第７表は、
アミノ酸の増大する濃ｊにが安定化効果を篩め、月つ２
種のアミノ酸の併用は常にどちらかのアミノ酸申独よシ
も商い値を与えることを示している。
ウィルス、 ３７℃において御粘性−４０，０ ウィルスのみ、４℃において御粘性＝４６８第７表は、
アミノ酸の増大する濃ｊにが安定化効果を篩め、月つ２
種のアミノ酸の併用は常にどちらかのアミノ酸申独よシ
も商い値を与えることを示している。
この分野の熟達者には、Ｎ−Ｚ ＡＭｌ、ＮＥ［相］Ｎ
ＡＫが好適な安定剤ではあるが、他の蛋白質氷解物及び
ペプチド類、並ひにアミノ酸単独−または神々の組合わ
せ及び護展が、ノイラミニダーゼ酵素活性の安定化に作
用するということは明白であろう。
ＡＫが好適な安定剤ではあるが、他の蛋白質氷解物及び
ペプチド類、並ひにアミノ酸単独−または神々の組合わ
せ及び護展が、ノイラミニダーゼ酵素活性の安定化に作
用するということは明白であろう。
本発明の詳細な説明するために、いくつかの代表的々、
＋発明の実施形態を示したけれども、当業省には、本発
明の４１Ｄ囲及び精神から逸脱するととなしに、これら
の実施形態の種々の変更及び修飾が司能であることは明
白であろう。
＋発明の実施形態を示したけれども、当業省には、本発
明の４１Ｄ囲及び精神から逸脱するととなしに、これら
の実施形態の種々の変更及び修飾が司能であることは明
白であろう。
ｑ＊ Ｗｐ出願人 アメリカン・ザイアナミド・カンノ
ぐ二〜 − ３９− ２０３−
ぐ二〜 − ３９− ２０３−
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、 メイラミニダーゼと、蛋白質氷解物、アミノ酸及
びそれらの組合わせから成る群より選ばれるノイラミニ
ダーゼを安定化するために有効な試剤とから成るノイラ
ミニダーゼｍ品。 ２、哺乳動物における免疫抗体の生産を誘引するのに有
効なノイラミニダーゼ含有ワクチンと蛋白質氷解物、ア
ミノ酸及びそれらの組合わせから成る群より選ばれる該
ワクチンのノイラミニダーゼ活性を安定化するために有
効な試剤とから成る生物学的製品。 ３、 ワクチンがインフルエンザ・ウィルスΦワクチン
である特許請求の範囲第２項記載の製品。 ４、ノイラミニダーゼ活性の安定化のために有 １− 効な試剤が約０．２〜４．０重量％のワクチンの濃度で
存在する特許請求の範囲第２項記載の製品。 ５、蛋白質氷解物がカゼインの酵素的消化物である特許
請求の範囲第２項記載の製品。 ６、 カゼインの酵素的消化物が＃ −ｚ ＡＭｒｓｉ
？ＮＡＫ４．たは＃ −Ｚ ＡＭＩＮＥ”Ａである特許
請求の範囲第５ＪＪ２記載の製品。 ７、 アミノ酸がアラニン、アスノＪ？ラギン酸、ダリ
シン、ヒスチジン、ロイシン、リシン、メチオニン、フ
ェニルアラニン、フロリン、セリン、トレオニン、トリ
プトファン、・９リン及びそれらの組合わせから成る群
より選ばれる特許請求の範囲第２項記載の製品。 ８、蛋白質氷解物、アミノ酸及びそれらの組合わせから
成る群より選ばれる安定剤の有効量をノイラミニダーゼ
に添加することを特徴とするノイラミニダーゼの安定化
方法。 ９、市白質水匣′物、アミノ酸及びそれらの糾合わせか
ら成る群より選ばれる安定剤の有効量をワクチンに添加
することを特徴とするノイラミニダーゼ含有ワクチンの
安定化方法。 １０、有効量が約０２〜４０重量係のワクチンである時
ｔ１Ｈ〜求の範囲第９項記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US06/366,296 US4537769A (en) | 1982-04-06 | 1982-04-06 | Stabilization of influenza virus vaccine |
| US366296 | 1982-04-06 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58183628A true JPS58183628A (ja) | 1983-10-26 |
Family
ID=23442454
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58055367A Pending JPS58183628A (ja) | 1982-04-06 | 1983-04-01 | インフルエンザウイルスワクチンの安定化 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4537769A (ja) |
| EP (1) | EP0090886B1 (ja) |
| JP (1) | JPS58183628A (ja) |
| AT (1) | ATE33558T1 (ja) |
| CA (1) | CA1213215A (ja) |
| DE (1) | DE3278344D1 (ja) |
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| WO2008111532A1 (ja) * | 2007-03-09 | 2008-09-18 | Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. | インフルエンザワクチン含有凍結乾燥製剤、及びその製造方法 |
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1982
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