JPH0648956A - ヒト免疫不全ウィルス感染・増殖抑制剤 - Google Patents

ヒト免疫不全ウィルス感染・増殖抑制剤

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JPH0648956A
JPH0648956A JP4220635A JP22063592A JPH0648956A JP H0648956 A JPH0648956 A JP H0648956A JP 4220635 A JP4220635 A JP 4220635A JP 22063592 A JP22063592 A JP 22063592A JP H0648956 A JPH0648956 A JP H0648956A
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Abstract

(57)【要約】 【構成】 鉄結合性たんぱく質、鉄結合性たんぱく質の
化学修飾物あるいは鉄結合性たんぱく質の分解物を有効
成分とするヒト免疫不全ウィルス感染・増殖抑制剤。 【効果】 副作用の心配がなく、大量に調節でき、経済
的に安価なヒト免疫不全ウィルス感染・増殖抑制剤を提
供することができる。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、鉄結合性たんぱく質、
鉄結合性たんぱく質の化学修飾物、または鉄結合性たん
ぱく質の分解物を有効成分とする、ヒト免疫不全ウィル
スの感染・増殖抑制剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ、エイ
ズ）は、ヒト免疫不全ウィルス（ＨＩＶ）の感染によっ
て起こる重篤な免疫不全症状の呼称である。平成３年７
月現在、世界保健機構には３７万人の患者が報告されて
おり、それを上回るＨＩＶ感染者が存在すると推測され
ている。当初ＨＩＶ感染は、同性愛者、麻薬常習者等に
特徴的な感染症であると考えられていたが、現在では異
性間交渉による感染が最も重要な感染経路となってい
る。エイズの治療法として開発が進められているものに
は、逆転写酵素阻害剤、ウィルス吸着阻害剤、プロテア
ーゼ阻害剤、糖鎖合成阻害剤、中和抗体・受動免疫法、
ワクチン、アンチセンス剤、免疫調節剤、遺伝子治療法
などがある。これらの治療法の中で、感染の最も初期に
作用する吸着阻害剤を用いた方法は、個体にＨＩＶを進
入させない、あるいは生体内で他の細胞にＨＩＶを感染
させないという意味で非常に重要である。
【０００３】吸着阻害剤を用いた開発の多くは、ＨＩＶ
のレセプターである白血球分化抗原のＣＤ４に関するも
のである。ＣＤ４そのものや、毒素や抗体で修飾したＣ
Ｄ４分子を用いて、ＨＩＶ感染を阻害することを狙って
いる（特開平３−５３８９４、特開平３−３５７８１、
特開平２−３１１４９３、ニッケイバイオテクノロジー
アニュアルレポート１９９１／９２、２５１−２６
０）。このような研究開発の他に、ペプチドＴと呼ばれ
るペプチドを用いたウィルス吸着競合阻害剤、カブトガ
ニ由来の生体防御ペプチドのタキプレシン・ポリフェム
シン類縁体であるＴ２２などを投与する方法が開発され
つつある〔（中島、山本、医学会新聞、１９９１号（１
９９２年４月２０日）〕。しかし、これらの吸着阻害物
質は、遺伝子組み替えや、化学合成によって製造された
ものであり、人体に投与した場合の安全性は未知であ
る。また、製造コストも比較的高く、全世界的にエイズ
に対する予防が必要なことから、安全で安価なＨＩＶ吸
着阻害方法の開発が強く望まれていた。
【０００４】
【本発明が解決しようとしている課題】本発明は、上に
述べたような既存のＨＩＶ吸着阻害療法に見られる問題
を解決し、ＨＩＶによる感染、ＨＩＶの増殖を効率よく
阻止することを目的としてなされたものである。すなわ
ち、比較的安価な原料から得られ、ＨＩＶ感染・増殖阻
止効果が良好な有効成分を用いて、エイズの予防あるい
は治療を行う方法を提供することを課題とする。ＨＩＶ
はリンパ球の細胞表面上に発現されているＣＤ４分子を
レセプターとして細胞の中に入り込むと考えられてい
る。ＣＤ４を発現している細胞の多くはＴ細胞と呼ばれ
る一群の免疫担当細胞であるが、ＨＩＶはＣＤ４を表現
した他の細胞にも感染することが明らかにされている。
ＨＩＶのウィルス粒子上にはｇｐ１２０と呼ばれる糖た
んぱく質が存在し、ｇｐ１２０が標的細胞上のＣＤ４と
結合することで感染が始まる。ウィルスは細胞に感染す
ると、宿主細胞表面にｇｐ１２０を表現させるようにな
る。ＨＩＶに感染してウィルスを産生しようとする細胞
は、細胞表面にｇｐ１２０を表現している。したがっ
て、ｇｐ１２０発現の有無をもって、ＨＩＶの感染・増
殖抑制効果を判定することができる。
【０００５】本発明者らはラクトフェリンがインフルエ
ンザウィルスやサイトメガロウィルスの感染防御効果を
有することを見出し特許出願を行った。この出願は特開
平２−２３３６１９号として開示されている。これとは
別に、乳たんぱく質を用いた抗ウィルス剤に関する特許
出願（特開平１−２３３２２６）があり、ラクトフェリ
ンがエンベロープウィルスおよび非エンベロープウィル
スに対して有効であると記載されている。ＨＩＶはエン
ベロープウィルスの一種であるが、特開平１−２３３２
２６に例示されているウィルスは、単純ヘルペスウィル
ス１型、単純ヘルペスウィルス２型、サイトメガロウィ
ルス、水疱性口内炎ウィルス、ラブドウィルス属であ
り、ＨＩＶについてはその作用が記載されていない。ま
たＨＩＶはこれらのウィルスとは生物学的性状が大きく
異なっている。さらに、ＨＩＶ感染者の唾液中のラクト
フェリン濃度が低いことから、ＨＩＶ感染とラクトフェ
リンの間に何らかの関係を示唆する報告（ミューラー
他、ジャーナル オブ アクイアード イミューンデフ
ィシェンシー シンドロームズ、第５巻 ４６−５１
頁、１９９２年）もあるが、ラクトフェリンのＨＩＶ感
染・増殖抑制作用については何ら示されていない。本発
明者らは、ラクトフェリンの抗ウィルス作用について研
究を進める過程でラクトフェリンなどの鉄結合性たんぱ
く質がＨＩＶに対しても作用し強い感染防御効果を有す
ることを初めて見出した。本発明者らは、再現性のよい
ＨＩＶウィルス感染判定系を用い、種々の天然成分のス
クリーニングを行った結果、鉄結合性たんぱく質、その
化学修飾物あるいは分解物にＨＩＶ感染・増殖抑制作用
が存在することを見出して本発明を完成するに至った。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明は、鉄結合性たん
ぱく質、その化学修飾物あるいは分解物を有効成分とす
るヒト免疫不全ウィルスの感染および増殖抑制剤に関す
る。本発明の有効成分としては、ラクトフェリン、トラ
ンスフェリン、オボトランスフェリンなどの鉄結合性た
んぱく質が用いられる。ラクトフェリンは哺乳類の乳汁
や分泌液等から、トランスフェリンは動物血液や組織等
から、オボトランスフェリンは鳥類の卵等から、それぞ
れ公知の方法によって調製することができる。例えばラ
クトフェリンは哺乳類の乳から分離される鉄結合性たん
ぱく質であるが本発明の実施においてはどのような種、
由来のものでも差し支えない。また必要に応じて、遺伝
子組み換えにより生産することもできる。また現在最も
安価でかつ容易に入手できるものとしては牛乳より分離
したものである。牛乳より分離する場合は、特開昭６１
─１４５２００号公報に開示された抗ラクトフェリン抗
体を使用する方法が採用しうる。
【０００７】オボトランスフェリンはニワトリ卵白中に
含まれる分子量７７，０００〜８７，０００の糖たんぱ
く質でラクトフェリンに良く似た鉄結合性のたんぱく質
である。オボトランスフェリンを得るためには、公知の
クロマトグラフィー等の分離精製が可能である。例え
ば、カルボキシメチルセルロースによる方法（ギャリア
ン他「ジャーナル オブ フードサイエンス」４５巻４
６０頁、１９８０年）、金属固定化親和クロマトグラフ
ィーを用いる方法（アルーマシキ他「アグリカルチャル
バイオロジカルケミストリー」５１巻、２８８１〜２
８８７頁、１９８７年）等の方法を採用し得る。またト
ランスフェリンについても血液等の材料からクロマト操
作により回収精製することができる。
【０００８】また、これらのたんぱく質の分解処理は、
トリプシン、ペプシン、パパイン、サーモライシン、サ
ブチリシンンなどのたんぱく質分解酵素によって、ある
いは塩酸、硫酸、水酸化ナトリウムなどの化学物質によ
って行うことができる。例えば、ラクトフェリンを０．
０２５Ｍ塩化カルシウムを含む０．１Ｍトリス塩酸緩衝
液（ｐＨ８．２）に１％濃度に溶解し、トリプシンをラ
クトフェリン溶液に対し１：５０の割合で加え、３７℃
で４時間加水分解することによって、ラクトフェリンを
限定酵素分解することができる。これを１０％酢酸中で
ゲル濾過することにより、分子量３万および５万の断片
を得ることができる（レグランド他「バイオキミカ エ
ト バイオフィジカ アクタ」７８７巻、９０〜９６
頁、１９８４年）。また、８０ｍｇのラクトフェリンを
８ｍｌの水に溶解し、ｐＨを濃塩酸で１．４とした後、
１．６ｍｇのペプシンで３７℃、６時間加水分解した
後、煮沸して酵素を失活させた後、凍結乾燥させてペプ
シン分解物とすことができる（タニ他「アグリカルチャ
ル バイオ ケミストリー」５４巻、１８０３〜１８１
０頁、１９９０年）。さらに、水に５％溶液となるよう
溶解したラクトフェリンを濃塩酸でｐＨ２に調整し、こ
れを１２０℃で１５分間加熱することによって、ラクト
フェリンの酸加水分解ペプチドを得ることができる（サ
イトー他「ジャーナル オブ デイリー サイエンス」
７４巻、３７２４〜３７３０頁、１９９１年）。
【０００９】またラクトフェリンは、特開平２−２０７
１００号公報に開示された方法により、ラクトフェリン
分子中のアミノ基にアミジン化、グアニジル化などの化
学修飾やアルギニン、リジンなどの塩基性アミノ酸を含
有するペプチドをペプチド結合させたり、あるいは特開
平２−２１１３８６号公報に開示された方法によりアミ
ノ基、またはカルボキシル基にスペルミンやスペルミジ
ンなどを導入し修飾させ、細胞親和性が向上したものを
用いることもできる。
【００１０】上述の鉄結合性たんぱく質その他化学修飾
物あるいは部分加水分解物はＨＩＶ感染及び増殖防御剤
として単独であるいは混合して使用することができる。
このようなＨＩＶ感染及び増殖防御剤は、様々な形態で
投与することができる。経口投与用、注射用、皮膚科
用、眼科用、耳科用、膣灌注剤用、口内洗剤用、坐剤用
などの用途に、粉末、錠剤、溶液、ゼリー、クリームな
ど種々の形態の製剤とすることができる。また、性交時
のＨＩＶ感染予防のため、避妊具等へ塗布することもで
きる。通常、感染予防及び増殖防御のためには成人一人
あたり、ラクトフェリン、トランスフェリンまたはオボ
トランスフェリンとして１ｍｇ〜１０００ｍｇを１日１
ないし３回投与することができる。また効果・症状によ
り投与量は増減させることができる。本発明に係る鉄結
合性たんぱく質であるラクトフェリン、トランスフェリ
ン、オボトランスフェリンはそれぞれ、乳、卵白、血液
に含まれておりその安全性も確認されている。
【００１１】以下に本発明のＨＩＶ感染、増殖防御剤に
関し、実施例実験例により詳細に説明する。
【実施例１】ウシラクトフェリンの調製 ウシラクトフェリンは「ジャーナル・オブ・ディリイ・
サイエンス」２０巻、７５２〜７５９頁（１９８７年）
に開示された抗ウシラクトフェリン抗体アフィニティー
カラムを用い牛乳より調製した。脱脂乳を抗ウシラクト
フェリンモノクローナル抗体アフィニティーカラムに負
荷し、ウシラクトフェリンを吸着させ、次いでｐＨ７．
３のＰＢＳで十分洗浄した。その後、０．５Ｍ食塩を含
むｐＨ７．３のＰＢＳで洗浄し、さらに０．２Ｍ酢酸ナ
トリウム緩衝液（ｐＨ３．７、０．１５Ｍ食塩を含む）
でカラムに吸着したラクトフェリンを溶出した。溶出後
ｐＨを中性付近に調整し、脱イオン水に対して３日間透
析した後凍結乾燥し、ラクトフェリンを得た。得られた
ウシラクトフェリンは電気泳動により純度を確認した。
【００１２】
【実施例２】ヒトラクトフェリンの調製 ヒトラクトフェリンはヘパリン─セファロースＣＬ６Ｂ
カラムを用い、人乳より調製した。脱脂人乳をヘパリン
─セファロースＣＬ６Ｂカラムに負荷し、ヒトラクトフ
ェリンを吸着させ、次いでｐＨ７．３の０．０１Ｍリン
酸緩衝液で十分洗浄した。その後、１．０Ｍ食塩を含む
ｐＨ７．３の０．０１Ｍリン酸緩衝でカラムに吸着した
ラクトフェリンを溶出した。溶出後ｐＨを中性付近に調
整し、脱イオン水に対して３日間透析した後凍結乾燥
し、ラクトフェリンを得た。得られたヒトラクトフェリ
ンは電気泳動により純度を確認した。
【００１３】
【実施例３】オボトランスフェリンの調製 卵白に硫安を２．５Ｍとなるように加えて、たんぱく質
を沈殿させた。遠心により沈殿を集め、ｐＨ６．０の
０．０１Ｍリン酸緩衝液に再溶解させ、ジエチルアミノ
エチルセルロースカラムに負荷した。卵白中のオボトラ
ンスフェリンをカラムに吸着させた後、ｐＨ６．０の
０．０１Ｍリン酸緩衝液で洗浄しついで、０．１Ｍの食
塩を含むｐＨ６．０のリン酸緩衝液でオボトランスフェ
リンを溶出した。溶出後ｐＨを中性付近に調整し、脱イ
オン水に対して３日間透析した後凍結乾燥し、オボトラ
ンスフェリンを得た。得られたオボトランスフェリンは
電気泳動により純度を確認した。
【００１４】
【実施例４】結合性たんぱく質分解物の調製 トリプシン処理、ペプシン処理および酸処理によるラク
トフェリンの分解を行った。 （１）トリプシン処理 ラクトフェリン１００ｍｇを１０ｍｌの２５ｍＭ塩化カ
ルシウムを含む０．１Ｍトリス塩酸緩衝液（ｐＨ８．
２）に溶解し、トリプシン（シグマ社）２ｍｇを加えて
３７℃で４時間インキュベーションした。トリプシンは
２倍量の大豆トリプシンインヒビターで不活性化した
後、１０％酢酸で平衡化したバイオゲルＰ−３０（バイ
オラッド社）による分子ふるいクロマトグラフィーによ
って分画した。分画された画分を凍結乾燥し、分子量５
万のＣフラグメントおよび分子量３万のＮフラグメント
がそれぞれ約３ｍｇづつ得られた。 （２）ペプシン処理 ラクトフェリン１００ｍｇを１０ｍｇの０．０１Ｍ塩酸
に溶解し、ｐＨを１．４に調整した後、ペプシン（シグ
マ社）を２ｍｇ加え３７℃で６時間インキュベーション
した。加水分解終了後、水酸化ナトリウムでｐＨを７．
０として反応を停止させた。この処理によって、高度に
加水分解されたラクトフェリン９ｍｇが得られた。分解
物中の低分子画分（６％トリクロロ酢酸可溶性部分）は
約６０％であった。 （３）酸処理 ラクトフェリン１ｇを２０ｍｌの水に溶解し、濃塩酸
（１２規定）でｐＨを２．０に調整した。この溶液を耐
圧性ガラス容器に密封し、オートクレーブで１２０℃、
１５分間加熱した。加熱後ただちにオートクレーブの蒸
気を排出し、ラクトフェリン溶液の温度を室温に戻し
た。不溶物を１００００×ｇ、２０分間の遠心により除
き、上清を凍結乾燥することにより０．６ｇのラクトフ
ェリン酸加水分解ペプチドを得た。
【００１５】
【実施例５】化学修飾ラクトフェリンの調製 （１）テトラペプチド導入ラクトフェリンの調製 特開平２−２０７１００号公報に開示された方法に従っ
て、テトラペプチドを導入し、細胞親和性を高めたヒト
ラクトフェリンを調製した。下記の配列を有するペプチ
ドについてＣ末端アミノ酸のカルボキシル基をＮ−ヒド
ロキシスクシンイミドで活性化しＮ末端アミノ酸のアミ
ノ基をメチル−スルホニル−エチル−オキシカルボニル
で保護したものを用いた。 Gly-Arg-Arg-Gly Gly-Arg-Arg-Arg-Arg-Gly Gly-Arg-Lys-Gly Gly-Lys-Lys-Gly ヒトラクトフェリン１モルに対して２００〜１０００等
量の上記ペプチドを添加し、０〜１０℃で一晩攪拌し、
ペプチドを導入した。反応終了後、０．１Ｎ水酸化ナト
リウムでｐＨ１２に調整し、さらに０．１Ｎ塩酸でｐＨ
を５〜６に下げることによりアミノ基の保護基をはずし
た。さらにｐＨ７．３のＰＢＳに対して３日間透析し、
遊離のペプチドを除去した。この結果、ペプチド１分子
に対しラクトフェリンを１０〜１５分子導入し、細胞親
和性の向上したラクトフェリンを調製した。
【００１６】（２）ポリアミン導入ラクトフェリンの調
製 特開平４−９５１００号公報に開示された方法に従っ
て、ポリアミンを導入し、細胞親和性を高めたヒトラク
トフェリンを調製した。スペルミン４塩酸塩３４８ｍｇ
（１ｍＭ）又はスペルミジン３塩酸塩（１ｍＭ)を用
い、これをジメチルホルムアミド３ｍｌに溶かし、氷冷
下トリエチルアミン(Et3N)０．５６ｍｌを加えた。これ
にさらに２−（メチルスルホニル) −エチル−Ｎサクシ
ミジルカーボネート２６６ｍｇを氷冷下３０分間ごとに
3 回に分けて加えた。６時間後、Ｎ−ヒドロキシコハク
酸イミド１１５ｍｇ及び、１−エチル−３−（３−ジメ
チルアミノプロピル) カルボジイミド塩酸塩１８０ｍｇ
を加え室温で８時間攪拌した後、反応液を減圧濃縮し残
渣として目的の化学修飾試薬を得た。この試薬に脱イオ
ン水１ｍｌに溶かし保存した。ヒトラクトフェリン８ｍ
ｇを０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．８）１ｍｌに溶か
し、氷冷下、上記試薬２００μl を加え１２時間攪拌し
た。反応後、反応液を０．１Ｍ水酸化ナトリウムでｐＨ
１２に調整し、その後直ちに０．１Ｍ塩酸でｐＨ５〜７
とすることで保護基を除去した。さらにｐＨ７．３のリ
ン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）に対して３日間透析し遊
離の修飾剤を除去し、ポリアミン導入ラクトフェリンを
得た。
【００１７】
【実施例６】ＨＩＶ感染・増殖抑制剤の製造 本実施例においては、上記実施例１〜３の方法により得
ることのできた鉄結合性たんぱく質の注射製剤の生産例
を示した。 （１）ウシラクトフェリン 100 ｍｇ ヒト血清アルブミン 100 ｍｇ 上記組成をＰＢＳで溶解し、全量を２０ｍｌに調製し、
滅菌後、バイアル瓶に２ｍｌずつ分注し、凍結乾燥密封
した。 （２）ヒトラクトフェリン 100 ｍｇ ツイーン80 １ｍｇ ヒト血清アルブミン 100 ｍｇ 上記組成を注射用生理食塩水に溶解し、全量を20mlに調
製し、滅菌後、バイアル瓶に2ml ずつ分注し、凍結乾燥
密封した。 （３）オボトランスフェリン 100 ｍｇ ツイーン80 1 ｍｇ ソルビトール 4 ｍｇ 上記組成をＰＢＳで溶解し、全量を２０ｍｌに調製し、
滅菌後、バイアル瓶に２ｍｌずつ分注し、凍結乾燥密封
した。
【００１８】（４）ウシラクトフェリン 4 ｇ ツイーン80 2 ｍｇ グリシン 2 ｇ 上記組成を注射用生理食塩水に溶解し、全量を２０ｍｌ
に調製し、滅菌後、バイアル瓶に２ｍｌずつ分注し、凍
結乾燥密封した。 （５）ヒトラクトフェリン 4 ｇ ツイーン80 1 ｍｇ ソルビトール 2 ｇ グリシン 1 ｇ 上記組成を注射用生理食塩水に溶解し、全量を２０ｍｌ
に調製し、滅菌後、バイアル瓶に２ｍｌずつ分注し、凍
結乾燥密封した。 （６）オボトランスフェリン 4 ｇ ソルビトール 4 ｇ ヒト血清アルブミン 50 ｍｇ 上記組成をＰＢＳで溶解し、全量を２０ｍｌに調製し、
滅菌後、バイアル瓶に２ｍｌずつ分注し、凍結乾燥密封
した。
【００１９】
【実験例１】ラクトフェリン、トランスフェリンの抗ＨＩＶ活性の測
定 〔方法〕ＭＯＬＴ−４／ＨＴＬＶ− IIIB 細胞（ＨＩＶ
の一株であるＨＴＬＶ− IIIB持続感染株)(生田他、メ
デカルトピックス、第４号、ｐ４１、１９８８年）の培
養上清をウィルス液として用いた。上清は−８０℃に保
存した。検定に用いる細胞はヒトＴ細胞系のＭＴ−４を
用いた。ＭＴ−４は１０％牛胎児血清（ＦＣＳ）を含む
ＲＰＭＩ１６４０培地を用いて継代した。試料（ヒトラ
クトフェリン、ウシトランスフェリン）は培地（ＲＰＭ
Ｉ１６４０）に溶解し、フィルター滅菌して細胞に添加
した。２４穴マイクロカルチャープレートに種々の濃度
に希釈した試料を１ｍｌ加えた。ＨＩＶをｍｏｉ（細胞
／感染ウィルス比）＝０．０１となるようにＭＴ−４細
胞に感染させ、３×１０5 ／ｍｌに調製した細胞液を１
ｍｌ加えた。細胞を３日間培養後、ＨＩＶ感染細胞を間
接蛍光抗体法を用いて測定した。ＨＩＶ感染細胞は、Ｈ
ＩＶ感染患者血清を一次抗体とした間接蛍光抗体法で測
定した。蛍光顕微鏡下で細胞５００個以上を観察し、蛍
光染色された細胞の割合を算出した。なお、陽性コント
ロールとして試料を加えずに培養したＨＩＶ感染ＭＴ−
４細胞、陰性コントロールとしてウィルス液を添加しな
い細胞培養を同時に行った。
【００２０】〔結果〕実験結果を表１に示す。結果は染
色された細胞の割合を示している。なお、陽性コントロ
ールのＨＩＶ感染ＭＴ−４細胞の染色率は２６．０％、
ＨＩＶを添加していないＭＴ−４細胞の染色率は０％で
あった。ヒトラクトフェリンは１２５μｇ／ｍｌの濃度
で感染率を１／３に減少させた。ウシトランスフェリン
は若干感染率を下げることができた。
【００２１】
【表１】 ヒトラクトフェリンとウシトランスフェリンの抗ＨＩＶ作用 ──────────────────────────────────── 添加濃度（μｇ／ｍｌ） 試料 ─────────────────────────── 1000 500 250 125 63 ──────────────────────────────────── ヒトラクトフェリン 3.1 5.8 7.3 8.6 17 ウシトランスフェリン 20 20 18 19 23 ──────────────────────────────────── 単位：感染率（％）
【００２２】
【実験例２】試料の投与時期による抗ＨＩＶ作用の違い 〔方法〕実験例１と同じウィルスと細胞を用いた。ＭＴ
−４細胞をあらかじめ試料（１ｍｇ／ｍｌ）と６０分間
インキュベーションした後、試料存在下でｍｏｉ＝１の
ＨＩＶを１時間接触させ、細胞を洗浄して試料とウィル
スを除去した後、３日間培養したもの（実験１）、ウィ
ルス接触時にのみ試料を添加したもの（実験２）、ウィ
ルス接触後の培養時に試料を添加したもの（実験３）、
それぞれの感染細胞の割合を蛍光抗体法で測定し、実験
例１と同様にしてＨＩＶ感染率を求めた。
【００２３】〔結果〕表２に結果を示す。＋は試料の添
加を、また−は試料の無添加を示す。この実験ではｍｏ
ｉ＝１のＨＩＶを用いたため、陽性コントロールは染色
率は１００％であった。また、陰性コントロールでは０
％であった。試料は前もってＭＴ−４細胞に添加してお
いた方が、抗ＨＩＶ効果が高かった。ウシラクトフェリ
ンは特に強力な抗ＨＩＶ作用を持っており、感染前に作
用させることによって、ｍｏｉ＝１の高力価のＨＩＶの
感染を完全に抑制した。また、ヒトラクトフェリンにも
強い抗ＨＩＶ効果があった。
【００２４】
【表２】 試料の添加時期の影響 ──────────────────────────────────── 添加時期 試料 ──────────────────ＨＩＶ感染率 （実験１） （実験２） （実験３） 感染前 感染時 感染後 （％） ──────────────────────────────────── ヒトラクトフェリン ＋ ＋ − ９．９ − ＋ − ４．９ − − ＋ ５２ ウシラクトフェリン ＋ ＋ − ０ − ＋ − ３．４ − − ＋ １７ ヒトトランスフェリン ＋ ＋ − ２２ − ＋ − ８６ − − ＋ ５２ ────────────────────────────────────
【００２５】
【実験例３】オボトランスフェリンの抗ＨＩＶ作用 〔方法〕実験例２の（実験１）の方法を用い、実施例３
の方法で得られたオボトランスフェリン、抗ＨＩＶ活性
を測定した。オボトランスフェリンの添加濃度は１ｍｇ
／ｍｌとした。ＨＩＶはｍｏｉ＝１で添加した。 〔結果〕表３に結果を示す。オボトランスフェリンの抗
ＨＩＶ作用はラクトフェリンに比べると、若干弱いが、
抗ＨＩＶ活性が認められた。
【００２６】
【表３】 オボトランスフェリンの抗ＨＩＶ作用 ──────────────────────── 試料 ＨＩＶ感染率（％） ──────────────────────── オボトランスフェリン １８ ────────────────────────
【００２７】
【実験例４】ラクトフェリン分解物の抗ＨＩＶ作用 〔方法〕実験例２の実験１の方法を用い、実施例３の方
法で得られたヒトラクトフェリンの限定トリプシン分解
物、ペプシン分解物および酸加水分解物の抗ＨＩＶ活性
を測定した。それぞれの添加濃度は１ｍｇ／ｍｌであっ
た。ＨＩＶはｍｏｉ＝１で添加した。 〔結果〕表４に結果を示す。いずれの分解物も抗ＨＩＶ
活性を保持しており、分解物中に抗ＨＩＶ活性のあるフ
ラグメントが含まれることを示唆している。
【００２８】
【表４】 ラクトフェリン分解物の抗ＨＩＶ作用 ──────────────────────── 試料 ＨＩＶ感染率（％） ──────────────────────── ラクトフェリン トリプシン分解物 １４ ペプシン分解物 ２６ 酸加水分解物 ３３ ────────────────────────
【００２９】
【発明の効果】本発明の実施により、ＨＩＶ感染・増殖
抑制剤が提供される。本発明のＨＩＶ感染・増殖剤は次
の効果を奏する。 （１）ＨＩＶの感染を防ぐことができ、また、既感染者
に対しては、体内でさらにウィルスが増殖して感染細胞
が増加することを防ぐことができる。 （２）すでに通常食品として摂取している成分を有効成
分とする組成であるため、投与することによる副作用の
心配が少ない。 （３）原料が比較的大量に存在するため、従来の抗ＨＩ
Ｖ製剤に比べて製造コストが非常に安い。 （４）従来の抗ＨＩＶ製剤に比べて比較的容易に、しか
も大量に調製できるため、特定の患者の治療に使用が限
定されることがなく、広くＨＩＶ感染・ウィルス増殖を
予防することもできる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 田中 重明 神奈川県綾瀬市小園1431−６ (72)発明者 堂迫 俊一 埼玉県浦和市北浦和５丁目15番39−616号 (72)発明者 新本 洋士 埼玉県川越市旭町２丁目13−２−416

Claims (4)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 鉄結合性たんぱく質、鉄結合性たんぱく
    質の化学修飾物及び鉄結合性たんぱく質の分解物よりな
    る群から選択される少くとも１種を有効成分とする、ヒ
    ト免疫不全ウィルス感染・増殖抑制剤。
  2. 【請求項２】 鉄結合性たんぱく質が、ラクトフェリ
    ン、トランスフェリンまたはオボトランスフェリンであ
    る請求項１記載の感染・増殖抑制剤。
  3. 【請求項３】 鉄結合性たんぱく質の分解物が、たんぱ
    く質の酵素分解物または化学分解物である請求項１記載
    の感染・増殖抑制剤。
  4. 【請求項４】 鉄結合性たんぱく質の化学修飾物が、ラ
    クトフェリンに塩基性アミノ酸含有ペプチドを結合させ
    るか、あるいはポリアミンを結合させて細胞親和性を向
    上させたものである請求項１記載の感染・増殖抑制剤。
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