JPS58170491A - アミラ−ゼｇ４，５によるオリゴ糖の製造法 - Google Patents
アミラ−ゼｇ４，５によるオリゴ糖の製造法Info
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- JPS58170491A JPS58170491A JP3753582A JP3753582A JPS58170491A JP S58170491 A JPS58170491 A JP S58170491A JP 3753582 A JP3753582 A JP 3753582A JP 3753582 A JP3753582 A JP 3753582A JP S58170491 A JPS58170491 A JP S58170491A
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- starch
- amylase
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- maltopentaose
- maltotetraose
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はでん粉からマルトテトラオースとマルトペンタ
オースを主成分とする軸化物の製造法に陶する１のであ
る。
オースを主成分とする軸化物の製造法に陶する１のであ
る。
従来、アミラーゼとしては１・−アセラーゼ、β−アミ
ラーゼ、グルコアセラーゼなどでん粉に対する分Ｗｆ様
式を異にする檎々のアセラーゼが知られ、グルコースや
！ルシースの製造に知由されて自た。そして１１１近は
より分子量の大きい、例えば、マルトトリオース（ＧＪ
）、マルトテトラオース（ＧＩＩ）、マルトペンタオ
ース（Ｇｊ）、マルトヘキサオース（Ｇｊ）などのオリ
ゴ糖ａ造技山の開４かＩ’ｍされている。これらの糖は
食品の甘味料、増量剤、賦形剤、包接剤として食品、薬
品及び檎々の工業製品に広く利用できると考えられてい
るか、本だ鋏法は確立されていな−。
ラーゼ、グルコアセラーゼなどでん粉に対する分Ｗｆ様
式を異にする檎々のアセラーゼが知られ、グルコースや
！ルシースの製造に知由されて自た。そして１１１近は
より分子量の大きい、例えば、マルトトリオース（ＧＪ
）、マルトテトラオース（ＧＩＩ）、マルトペンタオ
ース（Ｇｊ）、マルトヘキサオース（Ｇｊ）などのオリ
ゴ糖ａ造技山の開４かＩ’ｍされている。これらの糖は
食品の甘味料、増量剤、賦形剤、包接剤として食品、薬
品及び檎々の工業製品に広く利用できると考えられてい
るか、本だ鋏法は確立されていな−。
不発明者は、これらオリゴ糖生産能の遣い微生物を求め
て、広く土壌中より微生物の検索を行ってきた蛤米、パ
シルス風の微生物がでん粉をマルトブトフォース（Ｇダ
）とマルトペンタオース（ａＳ＞を主成分とする軸化物
に分解するア電ラー（を一体外に着量に生産することを
詔めた。
て、広く土壌中より微生物の検索を行ってきた蛤米、パ
シルス風の微生物がでん粉をマルトブトフォース（Ｇダ
）とマルトペンタオース（ａＳ＞を主成分とする軸化物
に分解するア電ラー（を一体外に着量に生産することを
詔めた。
マルトテトラオースを生成する＃素としては、Ｐａ＠ｗ
１ｄｏｍｏｍａｓ ｓｔｗｉ＠ｒｉ Ｏ生産するアセラ
ーゼがア竜四−スやアミロペタチンの非龜元性末端から
マルトテトラオースを砥威することが知られている （
Ａｒａｈｉｖｓ ｏｆ Ｂｉ＠＊に＊ｍｌ＠ｔｒｙ
ａｎｄ Ｂｌｏｐｈｙ−ａｉ＠ｇ第１亭ｊ看、１
０１−１１８％（１９〕／ｌが、この酵素はマルトペン
タオースを生成しない。
１ｄｏｍｏｍａｓ ｓｔｗｉ＠ｒｉ Ｏ生産するアセラ
ーゼがア竜四−スやアミロペタチンの非龜元性末端から
マルトテトラオースを砥威することが知られている （
Ａｒａｈｉｖｓ ｏｆ Ｂｉ＠＊に＊ｍｌ＠ｔｒｙ
ａｎｄ Ｂｌｏｐｈｙ−ａｉ＠ｇ第１亭ｊ看、１
０１−１１８％（１９〕／ｌが、この酵素はマルトペン
タオースを生成しない。
一方、マルトペンタオースを生成するアセラーゼとして
は、Ｉｌａｅｔｌｌｍｓ １ｌｅｈ＠ａ目ａｒｍｉｓｌ
Ｄ生舘する耐熱性榔−アミラーゼがでん粉からＧｊｔ主
成分とする馳化切を生産することが報告されて−るが、
この酵素のマルトテトラオースの生ｄ［はマルトペンタ
オースの生成能に比べ着しく少なく’ＡｉＭ度である。
は、Ｉｌａｅｔｌｌｍｓ １ｌｅｈ＠ａ目ａｒｍｉｓｌ
Ｄ生舘する耐熱性榔−アミラーゼがでん粉からＧｊｔ主
成分とする馳化切を生産することが報告されて−るが、
この酵素のマルトテトラオースの生ｄ［はマルトペンタ
オースの生成能に比べ着しく少なく’ＡｉＭ度である。
また、この−素はＧ／ＮＧ／コの各成分１同時に生成す
る連索である（Ａｒｓｈｌマ・ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍ
ｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｌｏｐｈｙｓｉｅｍ ！１１
／ ｊ ｊ巻、コ９Ｏ−２９１（／９７３＞１゜ この他、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａａｂｔｌｌｌｓ （Ｄ
ｓ−７ｔ ５−（もでん粉からマルトテトラオースやマ
ルトペンタオースを含んだ穐々の糖の混合物を生成する
が、マルトテトラオースやマルトペンタオースが主成分
ｔなすものでな―ために、これら糖の御所には直してい
な（八。
る連索である（Ａｒｓｈｌマ・ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍ
ｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｌｏｐｈｙｓｉｅｍ ！１１
／ ｊ ｊ巻、コ９Ｏ−２９１（／９７３＞１゜ この他、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａａｂｔｌｌｌｓ （Ｄ
ｓ−７ｔ ５−（もでん粉からマルトテトラオースやマ
ルトペンタオースを含んだ穐々の糖の混合物を生成する
が、マルトテトラオースやマルトペンタオースが主成分
ｔなすものでな―ために、これら糖の御所には直してい
な（八。
しかるに、本発明のアセラーゼにより生産されるでん粉
分解物の糖組成は、使用するでん粉のＤｆｆｉや糖化時
の反応条件（でん初濃度、ｐＨ，酵素製炭）によっても
共なるか、鮪宮、マルトテトラオースは１１〜３５％、
マルトペンタオースはｌｓ〜３０％を占めており、これ
ら糖の合計は３０〜６０％に辿する。
分解物の糖組成は、使用するでん粉のＤｆｆｉや糖化時
の反応条件（でん初濃度、ｐＨ，酵素製炭）によっても
共なるか、鮪宮、マルトテトラオースは１１〜３５％、
マルトペンタオースはｌｓ〜３０％を占めており、これ
ら糖の合計は３０〜６０％に辿する。
このように、本発明の生産するアミラーゼはでん粉から
マルトテトラオースとマルトペンタオースを主成分とす
る糖化物を生成するアセラーゼであり、このような特徴
のある＃素はいままで知られておらず、全く新風な・素
であり、本発明者はこの酵素をア電う−−４’Ｇ参、Ｓ
と命名した。以下に本酵素の性質を記載する。
マルトテトラオースとマルトペンタオースを主成分とす
る糖化物を生成するアセラーゼであり、このような特徴
のある＃素はいままで知られておらず、全く新風な・素
であり、本発明者はこの酵素をア電う−−４’Ｇ参、Ｓ
と命名した。以下に本酵素の性質を記載する。
（１）作用；でん粉、アミロース、アミロペクチン、デ
キストリンをマルトテトラオースとマルトペンタオース
の巣位で分解し、これら着を主成分とする糖化物を生成
する。
キストリンをマルトテトラオースとマルトペンタオース
の巣位で分解し、これら着を主成分とする糖化物を生成
する。
（２）作用１１Ｈ転囲及び最適作用ｐＨ＄ ｐＨ４１ｊ
〜Ｉ／の範囲に作用し、最適ｐＨは菰ｊ〜７ｊ（第１図
（ｂ））。
〜Ｉ／の範囲に作用し、最適ｐＨは菰ｊ〜７ｊ（第１図
（ｂ））。
（３）作用潟度範曲及び岐遥作用濃度藁約７０＠Ｃ１で
作用し、最適作用温度はｔｏ−ｊｊ”ｃ（７％でん初濃
度で１０分間反応、ＩＩ／図（ａ） ）。
作用し、最適作用温度はｔｏ−ｊｊ”ｃ（７％でん初濃
度で１０分間反応、ＩＩ／図（ａ） ）。
（４Ｊ ｌｌｉ ｉ＆定性＋（ｌＯｊＭ）９ス緩衡液（
ｐ Ｈ７，０）の存在下で加熱した場合、ｊＯ″ＣＩＯ
分１（の加熱で７０−９０％失枯する〇 ＋６１ ｐ Ｈ安定性；αＯｊＭ縫論液で３時間放置後
、残存活性を調定した結果、ｐＨ４〜ＩＯの軛Ｈでｆ定
であった（第７図（Ｃ））。
ｐ Ｈ７，０）の存在下で加熱した場合、ｊＯ″ＣＩＯ
分１（の加熱で７０−９０％失枯する〇 ＋６１ ｐ Ｈ安定性；αＯｊＭ縫論液で３時間放置後
、残存活性を調定した結果、ｐＨ４〜ＩＯの軛Ｈでｆ定
であった（第７図（Ｃ））。
（６）安定化；カルシウムイオンの存在により熱安定性
の壇加か砧めら１また（第１図（ｄ））。
の壇加か砧めら１また（第１図（ｄ））。
（７） ＩＪ１１’４４剤；本酵素＋！ ３ Ｘ ／
０−” Ｍ Ｉ） ＨｇＣ１５、Ｚｎ５ＯｎＧｕｙｏ４
、Ｆｅ２Ｏ２、ＣｏＣｈ 、ＡｇＮｏａなどにより約９
ｊ％以上失活した。
０−” Ｍ Ｉ） ＨｇＣ１５、Ｚｎ５ＯｎＧｕｙｏ４
、Ｆｅ２Ｏ２、ＣｏＣｈ 、ＡｇＮｏａなどにより約９
ｊ％以上失活した。
（８）＠一方法及び分子量；本酵素は液体培１１物のｐ
液から、懺安分画、ＤＥＡＥ−セファロースカラムク四
！トゲラフイー、セファデックスＧ−２００とセファデ
ックスＧ−１００カラムクロマトグフフイー等により、
クロマト的に単一まで精製される。セ７アデツタスＧ−
コＯＯカラ船 の小さ一成分が主成分を占めている、そして、両者の酵
素的性質には大亀な差は認められ１に−０（９）力価測
定法ｉα／ＭＩＪン拳緩衡液に溶解さ破たｌ襲可溶性で
ん粉１１！（ｐＨ７０）ｌｊ−に−量の酵素を加え、水
で全量／＠ｔとし、参〇℃で反応させる。この条件で１
時間に７１１９のグルコースに相当する還元力を生成す
る＊＊＊をＩ単位とした。
液から、懺安分画、ＤＥＡＥ−セファロースカラムク四
！トゲラフイー、セファデックスＧ−２００とセファデ
ックスＧ−１００カラムクロマトグフフイー等により、
クロマト的に単一まで精製される。セ７アデツタスＧ−
コＯＯカラ船 の小さ一成分が主成分を占めている、そして、両者の酵
素的性質には大亀な差は認められ１に−０（９）力価測
定法ｉα／ＭＩＪン拳緩衡液に溶解さ破たｌ襲可溶性で
ん粉１１！（ｐＨ７０）ｌｊ−に−量の酵素を加え、水
で全量／＠ｔとし、参〇℃で反応させる。この条件で１
時間に７１１９のグルコースに相当する還元力を生成す
る＊＊＊をＩ単位とした。
学的性質は王妃のａｈであ勢、本−株は微工研薗寄第４
コ３７号として、工業技Ｗｌ院壷生愉工業技術研究所に
豐糺されて−る。
コ３７号として、工業技Ｗｌ院壷生愉工業技術研究所に
豐糺されて−る。
（幻影ｈＡ！桿菌、大きさ、巾０７〜ａｔμ×長さλＳ
−ｔμ、２〜３個連なったものが多い。非Ｍ＃牲、ダラ
ム＠詮 （２）胞子量胞子ｌｌｌ軸胞はふくらみ、ネ形〜惰円彫
の胞子を形成する （句ゼラチンｉ液化する （４）肉汁寒ｋＩ生育良好、黄味がかった薄褐色（６，
グルコース肉汁寒天；生育不良、淡黄色（６）グルコー
ス硝酸＃Ａ寒天多わずかに生育、半透明（ア）肉汁；わ
ずかにａ濁、白〜、沈降する（８）食塩肉汁！７〜ＩＯ
％食塩゛幽度でも生育、７〜３％で生育促進 （９）ミルク；分解力強くないが、凝固、その後ペプト
ン化する、リドマス遁元 ＬＩＯＩポテト；生育普通、色素の生成なし０１）チロ
シン寒天−生育かなり良好、淡黄色、チーシナーゼ陰性 ■ダルコースーアス゛バラギン寒天番殆んど生育し１に
い に）インドール墨生成し１に１７％ ０４）アセチルメチルカルビノール菖生成しないに）硫
化水素番−一が生成する （口）＆Ａｌｌ塩の還元＄１１＃性 （ロ）ウレア−ぞ１生成しない に）カタテー七Ｉ陽性 （ロ）でん粉の加水分解基陽性 一炭水化物の利用１グルコース、７ラタシース、！ンノ
ース、ガラクトース、Ｄ−キシロース、Ｌ−アテビノー
ス、シェークリース、！ルトース、Ｌ−ソルボース、ｉ
ンエトール、でん粉を利用、１瞭するが、ガスの発生な
し。ラタ） −ス、ラフィノース、ソルビット、イヌリ
ンから１鏝は自いか、殆んどなし ■メチレンブルー嘉趨元する ■クエン盾纂利用しない 一生＃１温度Ｉ竣−生育海度は約３０℃、最高生育１５
度は３Ｏ−１７℃ に）死滅−ＩＶ ＋ ／ ００″Ｃで１０分間加熱して
も死滅しない ｂ）ｉｎ生冑ｐ Ｈ＋ ７．１Ｎｉ ｊ以゛上の菌学的
性質について、Ｂｓｒｇ＊ｙ％ Ｍａｎｎｔ＋ｍ１ｏｆ
Ｄｓｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏ
ｇｙの第７版及び＋Ｍ７版（Ｔｈ＠Ｗ１１１１ａｍ＋ｓ
＆ Ｗｉｌｋｌｎ＊ Ｃｏｍｐａｎｙ／９ｊ７年及び
／９７参年）を参閣し、本機生物ｒ才、バシルス ナー
キュッンス（Ｂａｅｌｌｌ箇１ｅｉｒｅｕｌａｎｓ ）
に近縁の微生物であると同定した。
−ｔμ、２〜３個連なったものが多い。非Ｍ＃牲、ダラ
ム＠詮 （２）胞子量胞子ｌｌｌ軸胞はふくらみ、ネ形〜惰円彫
の胞子を形成する （句ゼラチンｉ液化する （４）肉汁寒ｋＩ生育良好、黄味がかった薄褐色（６，
グルコース肉汁寒天；生育不良、淡黄色（６）グルコー
ス硝酸＃Ａ寒天多わずかに生育、半透明（ア）肉汁；わ
ずかにａ濁、白〜、沈降する（８）食塩肉汁！７〜ＩＯ
％食塩゛幽度でも生育、７〜３％で生育促進 （９）ミルク；分解力強くないが、凝固、その後ペプト
ン化する、リドマス遁元 ＬＩＯＩポテト；生育普通、色素の生成なし０１）チロ
シン寒天−生育かなり良好、淡黄色、チーシナーゼ陰性 ■ダルコースーアス゛バラギン寒天番殆んど生育し１に
い に）インドール墨生成し１に１７％ ０４）アセチルメチルカルビノール菖生成しないに）硫
化水素番−一が生成する （口）＆Ａｌｌ塩の還元＄１１＃性 （ロ）ウレア−ぞ１生成しない に）カタテー七Ｉ陽性 （ロ）でん粉の加水分解基陽性 一炭水化物の利用１グルコース、７ラタシース、！ンノ
ース、ガラクトース、Ｄ−キシロース、Ｌ−アテビノー
ス、シェークリース、！ルトース、Ｌ−ソルボース、ｉ
ンエトール、でん粉を利用、１瞭するが、ガスの発生な
し。ラタ） −ス、ラフィノース、ソルビット、イヌリ
ンから１鏝は自いか、殆んどなし ■メチレンブルー嘉趨元する ■クエン盾纂利用しない 一生＃１温度Ｉ竣−生育海度は約３０℃、最高生育１５
度は３Ｏ−１７℃ に）死滅−ＩＶ ＋ ／ ００″Ｃで１０分間加熱して
も死滅しない ｂ）ｉｎ生冑ｐ Ｈ＋ ７．１Ｎｉ ｊ以゛上の菌学的
性質について、Ｂｓｒｇ＊ｙ％ Ｍａｎｎｔ＋ｍ１ｏｆ
Ｄｓｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏ
ｇｙの第７版及び＋Ｍ７版（Ｔｈ＠Ｗ１１１１ａｍ＋ｓ
＆ Ｗｉｌｋｌｎ＊ Ｃｏｍｐａｎｙ／９ｊ７年及び
／９７参年）を参閣し、本機生物ｒ才、バシルス ナー
キュッンス（Ｂａｅｌｌｌ箇１ｅｉｒｅｕｌａｎｓ ）
に近縁の微生物であると同定した。
本−株はア電う−ゼＧダ、ｊと同時にプルラナー（を生
産し、両酵素は共同して、でん粉、アＲｇｌペクチンな
ど分肢結合（−一／、４−ダルコシド結合）のある基質
から！ルトテトツオースとマルトペンタオースを収量よ
（生産するのに型費な役割をして−る。本ｌｌＩの生産
するプルラナーゼの酵素的性質は下記に示子通りである
・ （１）作用；プルランに存在する６−ｔ６−ダルコジド
結合を分雫し、！ルトトリオースを生成する。
産し、両酵素は共同して、でん粉、アＲｇｌペクチンな
ど分肢結合（−一／、４−ダルコシド結合）のある基質
から！ルトテトツオースとマルトペンタオースを収量よ
（生産するのに型費な役割をして−る。本ｌｌＩの生産
するプルラナーゼの酵素的性質は下記に示子通りである
・ （１）作用；プルランに存在する６−ｔ６−ダルコジド
結合を分雫し、！ルトトリオースを生成する。
まえ、でん粉、アミ四ペクチン、グリコーゲン又はそ０
派生物の一−ｔ６−グルコシド結合を分解する。
派生物の一−ｔ６−グルコシド結合を分解する。
（２１作用湿度範囲及び最適作用温度ｇ＃１７０℃まで
作用し、最適作用温度は１０ ＮＺｋ”Ｃ（１％プルラ
ン、００１Ｍトリス１１ｔｌＩ液のもとで１０分間反応
）。
作用し、最適作用温度は１０ ＮＺｋ”Ｃ（１％プルラ
ン、００１Ｍトリス１１ｔｌＩ液のもとで１０分間反応
）。
（８）作用ｐＨ範妬及びＩＩｌ適作用ｐＨ番ｐＨ約３〜
約ｔｏ餘Ｈに作用し、最適作用ｐＨは７付近にある（１
％プルラン、ｄＯｊＭ）リス緩衝液の下で亭Ｏ℃で反応
）・ （４）１ｉ％ 安Ｍ性寥ａ（ＪｊＭ）ＩＪＸｍ＆液（ｐ
Ｈ７，０）のもとで、各温度で１０分間加熱後、残存
活性を測定した。その結果、１０”Ｃ１０分間の加熱で
約７３％失活し、ｓｚ”ｃｔｏ分間の加熱で約？７％失
活した。
約ｔｏ餘Ｈに作用し、最適作用ｐＨは７付近にある（１
％プルラン、ｄＯｊＭ）リス緩衝液の下で亭Ｏ℃で反応
）・ （４）１ｉ％ 安Ｍ性寥ａ（ＪｊＭ）ＩＪＸｍ＆液（ｐ
Ｈ７，０）のもとで、各温度で１０分間加熱後、残存
活性を測定した。その結果、１０”Ｃ１０分間の加熱で
約７３％失活し、ｓｚ”ｃｔｏ分間の加熱で約？７％失
活した。
＋５１ ｐ Ｈ安定性ＩｐＨ約６〜約９で安定（ｄ／Ｍ
酢＃緩衝液又はリン酸緩術液の下で、室ｆ１４（２１℃
）で放ｗｌ後、残存活性を測定）。
酢＃緩衝液又はリン酸緩術液の下で、室ｆ１４（２１℃
）で放ｗｌ後、残存活性を測定）。
（６）阻害剤＋ ４１＃素はＣ，霊＋、Ｚｎ”ｓＡｇ÷
％ Ｈｇ”◆、Ｆ♂十などにより強く阻害される。
％ Ｈｇ”◆、Ｆ♂十などにより強く阻害される。
（７） 安Ｗ化募カルシウムイオンは本酵素の熱安定性
を増加する。 ・ （８）Ｍ製方法；本＃素は培１１Ｆ液から、硫安分−１
ＤＥＡＥ−竜ファ尊−スカラムタａ！シダラフイー（Ｋ
ＣＩＱコ〜ＱｊＭでダラシエン）溶出することにより、
７ ｔチー４１Ｑ参、ｊと分離で會その後、七７アデツ
クスＧ−コＯｏカラムター −マＦダラフイーによりタ
ロマド的に均一まで精製できる。
を増加する。 ・ （８）Ｍ製方法；本＃素は培１１Ｆ液から、硫安分−１
ＤＥＡＥ−竜ファ尊−スカラムタａ！シダラフイー（Ｋ
ＣＩＱコ〜ＱｊＭでダラシエン）溶出することにより、
７ ｔチー４１Ｑ参、ｊと分離で會その後、七７アデツ
クスＧ−コＯｏカラムター −マＦダラフイーによりタ
ロマド的に均一まで精製できる。
（９）分子Ｉ１１↓セファデツタスＧ−コ０ｏゲｋｆｉ
−法による分子量は約７万であつた。
−法による分子量は約７万であつた。
（至）力価測定法ＩＱ／Ｍ！ｌン醗緩観液に溶解させた
／％プｋ ９ ＞液（ｐＨ７，０）ｌｊ−に−量の＃素
を加え、水て全量ｌ−とし、＊ｏ”ｃて反応させる。こ
の条件で１時間に／ｌ１９０ｖル）トリオースに相当す
る還元力を生成する靜素瀘をｌ単位とした。
／％プｋ ９ ＞液（ｐＨ７，０）ｌｊ−に−量の＃素
を加え、水て全量ｌ−とし、＊ｏ”ｃて反応させる。こ
の条件で１時間に／ｌ１９０ｖル）トリオースに相当す
る還元力を生成する靜素瀘をｌ単位とした。
本−の生麩するプルラナーゼ以外に１、例えばニーーバ
クーー 二−−ゲ卓ス（ム・ｒ＠ｂａｅｔ＠ｒａ＊ｒ＠
ｇｍｍＢ ）ヤス）レプ）ｉイセス（８ｔｒ＠ｐｔ＊−
ｍｙｅΦｍ ） 属の生産するプルラナー（やシュー
ド％ｆ７．７叱ａデラモサ（Ｐｍ＠ｕｄｏｍｏｎａｍａ
ｍｙｌｏｄ＊ｒａｍｏｓａ ）の生産するイソ７２ラー
イなどの＠−７．４−グルコシダーゼも同様に使用する
ことができる。
クーー 二−−ゲ卓ス（ム・ｒ＠ｂａｅｔ＠ｒａ＊ｒ＠
ｇｍｍＢ ）ヤス）レプ）ｉイセス（８ｔｒ＠ｐｔ＊−
ｍｙｅΦｍ ） 属の生産するプルラナー（やシュー
ド％ｆ７．７叱ａデラモサ（Ｐｍ＠ｕｄｏｍｏｎａｍａ
ｍｙｌｏｄ＊ｒａｍｏｓａ ）の生産するイソ７２ラー
イなどの＠−７．４−グルコシダーゼも同様に使用する
ことができる。
ａ −／、−一グルコシダーゼは１、通常、アミラーゼ
ａａ、Ｓと同時に使用されるが、アミラーゼＧ−５によ
る糖化前に、電−７，４−グルコシダーイで基質を処理
してもよい。
ａａ、Ｓと同時に使用されるが、アミラーゼＧ−５によ
る糖化前に、電−７，４−グルコシダーイで基質を処理
してもよい。
アミラーゼＧ ４１．ｊにより液化でん粉を楯化し１マ
ルトテトラオースとマルトペンタオ−ｘｔｗｉするに除
し、これら−一／、４−グルコシダーゼで処理すると、
無処坤の場合に比べ、少なくともそれぞれｊＮ１０４程
度収′ＩＩｉが増加する。
ルトテトラオースとマルトペンタオ−ｘｔｗｉするに除
し、これら−一／、４−グルコシダーゼで処理すると、
無処坤の場合に比べ、少なくともそれぞれｊＮ１０４程
度収′ＩＩｉが増加する。
本発明による＃嵩生産のための培養は、通常−用いられ
る画体培地または液体培地が使用され、液体培養のため
の培地の窒素源としては、ペプシン、肉エキス、酵母エ
キス、カゼイン、コーンステイープ リカーなど、また
炭素源としては、でん粉、デキストリン、！ルトース、
ダルコースシュークロースなどが使用され、そして、こ
れに補足する栄養−として、無機窒素源、リン絵壊、マ
グネシウム塩、金属塩を含む培地が使用される。
る画体培地または液体培地が使用され、液体培養のため
の培地の窒素源としては、ペプシン、肉エキス、酵母エ
キス、カゼイン、コーンステイープ リカーなど、また
炭素源としては、でん粉、デキストリン、！ルトース、
ダルコースシュークロースなどが使用され、そして、こ
れに補足する栄養−として、無機窒素源、リン絵壊、マ
グネシウム塩、金属塩を含む培地が使用される。
培養は、ｐＨ≦〜ｔ１温度ＪｊＮｊｊ’ｃで、通気培養
により行なわれる・ アミラー４０４１、ｊは一体外に生産される酵素である
ので、場に島Ｔ後、−過又は迦心分離して除菌し、上澄
液を一敗する。そして、会費に応じ、澱縮し、硫安、ｆ
Ｉｉ醗ナトナトリウムによる塩析によるカ、又は、アセ
トン、エタノール、メタノール、イソプ四パノールなど
の４％機溶剤を加えて、酵素を沈澱物として収得、乾燥
、保存する。
により行なわれる・ アミラー４０４１、ｊは一体外に生産される酵素である
ので、場に島Ｔ後、−過又は迦心分離して除菌し、上澄
液を一敗する。そして、会費に応じ、澱縮し、硫安、ｆ
Ｉｉ醗ナトナトリウムによる塩析によるカ、又は、アセ
トン、エタノール、メタノール、イソプ四パノールなど
の４％機溶剤を加えて、酵素を沈澱物として収得、乾燥
、保存する。
本ｕ３ｋによるでん粉の糖化は、通常ｊ−＄０≦の鹸化
でん粉に添加し、ｐＨｔ〜９、温度ダ０−≦Ｏ″Ｃで行
なわれる。
でん粉に添加し、ｐＨｔ〜９、温度ダ０−≦Ｏ″Ｃで行
なわれる。
でん粉、アミロース及びアミロペクチンは糖化に綜して
液化される。液化は酸又は細菌の６−アミラーゼを川−
て常法により行なわれるが、液化間（部ブナ分解度）は
マルトテトラオースとマルトペンタオースの収量に関係
するので、これらオリゴ勧の生産のための望ましいでん
粉の液化度ＤＩ（固形分中の還元糖をグルコースとして
表わした自分率）は／ｊ以下であり、このような液化で
ん粉１ｒ使用した場合、！ルシテトラオースとマルトト
リオースの収量の合計は約３０〜約４０％になる。
液化される。液化は酸又は細菌の６−アミラーゼを川−
て常法により行なわれるが、液化間（部ブナ分解度）は
マルトテトラオースとマルトペンタオースの収量に関係
するので、これらオリゴ勧の生産のための望ましいでん
粉の液化度ＤＩ（固形分中の還元糖をグルコースとして
表わした自分率）は／ｊ以下であり、このような液化で
ん粉１ｒ使用した場合、！ルシテトラオースとマルトト
リオースの収量の合計は約３０〜約４０％になる。
次に実施例により本発明の詳細な説明する。
実施例１
２１の三角フラスコに、ぼりペプトン８（大豆製、和光
純桑工業株式会社歇売）０％、Ｋ出Ｐ０４ＱＪ≦、Ｍｇ
ＳＯ３・７石０４７％、ＩＪ港性でん粉Ｉ憾と硫酸テン
方ニウムＱ、ｌ５ｉｐらなる液体検地（ｐＨを接種し、
１０℃で２日゛閤振盪培養した。蝙ａｍ遠心分離機で除
■し、得られ★上澄液について生いるえめ、ｊ６１１−
液から、硫安９０≦で沈鹸する区分を集め、蒸溜水で最
析豪、ａＪＭＫｃｌを含む（１）ＪｊＭトリス緩倫練で
緩論化したＤＥＡＥ−セファ四−スカラムに吸着させ、
ＱＪＭ ＫＣＩからｄｊＭ ＫＣＩまでダラシエンド
溶出することにより１ルラナーセを含まないア々ラーゼ
区分を侮た（４７＄位／ ＯＤｓｓｏ ＊μ）。
純桑工業株式会社歇売）０％、Ｋ出Ｐ０４ＱＪ≦、Ｍｇ
ＳＯ３・７石０４７％、ＩＪ港性でん粉Ｉ憾と硫酸テン
方ニウムＱ、ｌ５ｉｐらなる液体検地（ｐＨを接種し、
１０℃で２日゛閤振盪培養した。蝙ａｍ遠心分離機で除
■し、得られ★上澄液について生いるえめ、ｊ６１１−
液から、硫安９０≦で沈鹸する区分を集め、蒸溜水で最
析豪、ａＪＭＫｃｌを含む（１）ＪｊＭトリス緩倫練で
緩論化したＤＥＡＥ−セファ四−スカラムに吸着させ、
ＱＪＭ ＫＣＩからｄｊＭ ＫＣＩまでダラシエンド
溶出することにより１ルラナーセを含まないア々ラーゼ
区分を侮た（４７＄位／ ＯＤｓｓｏ ＊μ）。
ＤＥＮ＜コの液化でん粉／ｇに、該酵素９２０単位と一
化カルシウムｊＸ１０’Ｍｉｋ添加し、金蓋１０−でＰ
ＨＪ：（７，２ｕ時間＆応させた。そして得られたでん
粉朝化物中の糖組成を、液体クロマトグラフ（カラム
昭和電工＠ ｔｌＨｐａｃｋ Ｊ−ｌ／／、溶出液ア
セトニトリルによ％蓄水？ｊ％）で分離定−を行った結
果、グルコース／、７％、！ルトースｌａ？％、マルト
トリオースｉｔ％、マルトテトラオース／ ７． Ｊ’
％、マルトペンタオース、２１．７％、マルトヘキサオ
ース３２％、その他の１１７！１％＋うなる糖組成であ
った。
化カルシウムｊＸ１０’Ｍｉｋ添加し、金蓋１０−でＰ
ＨＪ：（７，２ｕ時間＆応させた。そして得られたでん
粉朝化物中の糖組成を、液体クロマトグラフ（カラム
昭和電工＠ ｔｌＨｐａｃｋ Ｊ−ｌ／／、溶出液ア
セトニトリルによ％蓄水？ｊ％）で分離定−を行った結
果、グルコース／、７％、！ルトースｌａ？％、マルト
トリオースｉｔ％、マルトテトラオース／ ７． Ｊ’
％、マルトペンタオース、２１．７％、マルトヘキサオ
ース３２％、その他の１１７！１％＋うなる糖組成であ
った。
一方、本命の生麺するプルラナーゼ１０単位の存在下で
同様に反応を行った場合の糖化物の糖組成は、ダルコー
ス２３襲、！ルトース／、ｔ＃弧、！ルトトリオースｌ
Ｑ９５．ｑルシテシラオースコ２１％、！ルトペンタオ
ースＪＩＯ憾、賃ルトヘキサオースｉ７％とその他Ｏ−
１χ９％からなる糖組成であった。
同様に反応を行った場合の糖化物の糖組成は、ダルコー
ス２３襲、！ルトース／、ｔ＃弧、！ルトトリオースｌ
Ｑ９５．ｑルシテシラオースコ２１％、！ルトペンタオ
ースＪＩＯ憾、賃ルトヘキサオースｉ７％とその他Ｏ−
１χ９％からなる糖組成であった。
第／図（ａ）、伽）、（ｅ）と（ｄ）はそれぞれアセツ
ー七〇ダ、ｊによるでん粉分解反応の最適温度、４に−
ｐＨ熱安定性とｐＨ安定性を示して−る。
ー七〇ダ、ｊによるでん粉分解反応の最適温度、４に−
ｐＨ熱安定性とｐＨ安定性を示して−る。
手続補正間 （方式）
昭和５７年７月２？日
１、 事ｆｔの表小 昭和 ５７年特許願第 ３７
５３５ 号２、 発明の名称 ７ミラーゼＧ４，５によるオリゴ糖の製造法３、 補正
をする名 事ｆ１との関係、特許出願人 住 所 東京都千代田区霞が関１丁目３番１号氏
名 （，１１４） Ｉ業技術院長 白 坂
誠 −芝）、 補１１命令の［１付 昭和５７年６
月１１日（発送日 昭和５７年６月２９日） ６、 補正により増加づる発明の数 な しｌ、 補
ＩＩの対象 別紙 明細１第１頁の発明の名称［アミラーゼＧ４５によるオ
リゴ糖の製造法１を［アミラーゼＧ４，５によるオリゴ
糖の製造法」に訂正します。
５３５ 号２、 発明の名称 ７ミラーゼＧ４，５によるオリゴ糖の製造法３、 補正
をする名 事ｆ１との関係、特許出願人 住 所 東京都千代田区霞が関１丁目３番１号氏
名 （，１１４） Ｉ業技術院長 白 坂
誠 −芝）、 補１１命令の［１付 昭和５７年６
月１１日（発送日 昭和５７年６月２９日） ６、 補正により増加づる発明の数 な しｌ、 補
ＩＩの対象 別紙 明細１第１頁の発明の名称［アミラーゼＧ４５によるオ
リゴ糖の製造法１を［アミラーゼＧ４，５によるオリゴ
糖の製造法」に訂正します。
Claims (1)
- でん粉又はその部分分解物からマルトテトテオースト！
ルトペンタオースを生成するパシルス＾のアセラーゼＧ
４１％！を、でん粉、ア電ｐ−ス、アｔｏペクチン又は
その部分分解物に作用させるに際し、ａ−ｔ４−グルコ
シダーゼの存仕下で反応することを特徴とするパシルス
ーアセラー４Ｇ参Ｊによる！ルトデトラオースと！ルト
ベンタオース含有輸液の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3753582A JPS594118B2 (ja) | 1982-03-09 | 1982-03-09 | アミラ−ゼｇ４，５によるオリゴ糖の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3753582A JPS594118B2 (ja) | 1982-03-09 | 1982-03-09 | アミラ−ゼｇ４，５によるオリゴ糖の製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58170491A true JPS58170491A (ja) | 1983-10-07 |
| JPS594118B2 JPS594118B2 (ja) | 1984-01-27 |
Family
ID=12500213
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3753582A Expired JPS594118B2 (ja) | 1982-03-09 | 1982-03-09 | アミラ−ゼｇ４，５によるオリゴ糖の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS594118B2 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63240784A (ja) * | 1987-03-28 | 1988-10-06 | Hayashibara Biochem Lab Inc | マルトテトラオ−ス生成アミラ−ゼとその製造方法 |
| JPS63267244A (ja) * | 1987-04-24 | 1988-11-04 | Nippon Shokuhin Kako Ltd | 飲食物の製造方法 |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63186667U (ja) * | 1987-05-22 | 1988-11-30 |
-
1982
- 1982-03-09 JP JP3753582A patent/JPS594118B2/ja not_active Expired
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63240784A (ja) * | 1987-03-28 | 1988-10-06 | Hayashibara Biochem Lab Inc | マルトテトラオ−ス生成アミラ−ゼとその製造方法 |
| JPS63267244A (ja) * | 1987-04-24 | 1988-11-04 | Nippon Shokuhin Kako Ltd | 飲食物の製造方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS594118B2 (ja) | 1984-01-27 |
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