JPS63240784A - マルトテトラオ−ス生成アミラ−ゼとその製造方法 - Google Patents

マルトテトラオ−ス生成アミラ−ゼとその製造方法

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JPS63240784A JP62074878A JP7487887A JPS63240784A JP S63240784 A JPS63240784 A JP S63240784A JP 62074878 A JP62074878 A JP 62074878A JP 7487887 A JP7487887 A JP 7487887A JP S63240784 A JPS63240784 A JP S63240784A
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哲也 仲田
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〈産業上の利用分野〉 本発明は、新規マルトテトラオース生成アミラーゼとそ
の製造方法並びに用途に関する。
〈従来の技術〉 グルコースやマルトースは、澱粉を各種アミラーゼで糖
化することによって工業的に製造されている。
近年、より高分子のマルトオリゴを製造するための各種
アミラーゼに関する研究が活発になってきた。
とりわけ、マルトテトラオースが、低甘味、低糖度の澱
粉部分分解物として注目されており、その工業的製造方
法の確立が望まれている。
澱粉からマルトテトラオースを生成する酵素、すなわち
マルトテトラオース生成アミラーゼ（ＥＣ３，２，１，
６０）については、古くからシュードモナス　スッッツ
ェリ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｔｕｔｚｅｒｉ）　Ｎ
ＲＲＬ　　Ｂ−３３８９から産生されることが知られて
いる。例えば、米国特許第３．６５４，０８２号明細書
に記載されており、またジョン　エフ　ロビト　アンド
　ロザリエゼイ　アッカーマン（Ｊｏｈｎ　Ｆ、Ｒｏｂ
ｙｔ　ａｎｄ　ＲｏｓａｌｉｅＪ、Ａｃｋｅｒｍａｎ）
か、アーカイブス　オブ　バイオケミストリー　アンド
　バイオフィジックス（Ａｒｃｈ−４ｖｅｓ　ｏｆ　Ｂ
ｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ａｎｄ　Ｂｉｏｐｈｉｓｉｃ
ｓ）、第１４５巻、第１０５乃至１１４頁（１９７１年
）に報告し、ユルゲン　シュミット　アント　ミハエル
ジョン（Ｊｕｒｇｅｎ　Ｓｃｈｍｉｄｔ　ａｎｄ　Ｍｉ
ｃｈａｅｌ　Ｊｏｈｎ）が、ビオキミカ　エト　ビオフ
ィジカ　アクタ（Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ　ｅｔ　Ｂｉｏ
ｐｈｉｓｉｃａ　Ａｃｔａ）、第５６６巻、第８８乃至
９９頁（１９７９年）に報告し、更に、坂野好幸等が、
澱粉科学、第２９巻、第２号、第１３１乃至１３７頁（
１９８２頁）、アグリカルチエラル　アンド　バイオロ
ジカル　ケミストリー（Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　ａ
ｎｄ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｃｈｅｍｉｓ−ｔｒｙ）
、第４６巻、第３号、第６３９乃至６４６頁（１９８２
年）および同誌、第４７巻、第８号、第１７６１乃至１
７６８頁（１９８３年）に報告している。
しかしながら、これら報告に見られるシュードモナス　
スツッツェリ　ＮＲＲＬ　　Ｂ−３３８９からのマルト
テトラオース生成アミラーゼは、至適温度、安定温度か
低く、工業的に利用する上で耐熱性が不充分である。
その上、このマルトテトラオース生成アミラーゼについ
て小林昭−等が、特開昭６１−２０２６８７号公報、第
２頁右上欄第１乃至４行において、「この酵素は、シュ
ードモナス　スツエチェリ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　
５ｔｕｔｚｅｒｊ）から生産されるものであるが、生産
性が低い（２〜５１０／ｍｕ）　、　Ｊと記載している
ことからも明らかなように、工業的に利用する上できわ
めて不利である。
く問題点を解決するための手段〉 本発明者等は、工業的に有利に使用しつるマルトテトラ
オース生成アミラーゼについて鋭意研究を続けた。
その結果、意外にも、シュードモナス　スツッツェリか
ら耐熱性の向上した新規なマルトテトラオース生成アミ
ラーゼが産生じつることを見いだし、その製造方法並び
に用途を確立して本発明を完成した。
以下、本発明のマルトテトラオース生成アミラーゼの理
化学的性質について述べる。
（ａ）作　用 澱粉に作用して、主にマルトテトラオースを生成する。
（ｂ）基質特異性 澱粉、アミロース、アミロペクチン、グリコーゲンおよ
びβ−リミットデキストリンに作用し、シクロデキスト
リン、デキストラン、プルランおよびエルシナンには、
実質的に作用しない。
（ｃ）至適ｐＨ ４０℃、２０分間で、ｐＨ７，０乃至７．５附近。
（ｄ）安定ｐＨ ４０℃、１時間で、ｐ）（６，５乃至９．５附近。
（ｅ）至適温度 ｐＨ７，０，２０分間で、５０℃附近。
（ｆ）安定温度 ｐＨ７，０，１時間で、４５℃附近まで、但し、カルシ
ウムイオン共存下では、ｓｏ”ｃ附近まで活性を完全に
残存し、５５℃附近で約７０％の活性を残存する。
（ｇ）阻害、安定化 水銀イオンにより活性が阻害される。
カルシウムイオンにより熱安定性か向上する。
（ｈ）分子量 ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動法により、４
６，０００±１，００００ 超遠心分析法により、４７，０００±２゜００００ （ｉ）等電点 ポリアクリルアミドゲル等電点電気泳動法により、ｐｉ
　　４．８附近。
（ｊ）紫外部吸収 ２７５乃至２８０ｎｍ附近。
（ｋ）精製方法 通常の酵素の精製方法に準じて行うことができる。その
具体例は、実施例２で述べる。
（見）活性測定方法 １、ＯＷ／ｖ！可溶性澱粉（ｐ　Ｈ７、０）　５　ｍ　
ｌに酵素液０．２ｍｌを加え４０℃で２０分間反応させ
、反応液にソモジー（Ｓｏ■ｏｇｙ　ｉ　）試薬を加え
て反応を停止させた。
生成した還元糖をネルソンーソモジ− （Ｎｅｌｓｏｎ−３ｏｓｏｇｙｉ）法で測定し、１分間
にｌマイクロモルのグルコシド結合を切断する酵素量を
１単位とした。
以上の理化学的性質のうち、その主な性質について、ア
グリカルチエラル　アント　バイオロジカル　ケミスト
リー第４７巻、第８号、第１７６１乃至第１７６８頁（
１９８３年）に報告されているシュードモナス　スツッ
ツェリ　ＮＲＲＬＢ−３３８９からのマルトテトラオー
ス生成アミラーゼの性質と比較すると、次の通りである
。
（１）至適ｐＨでは、本発明の酵素がｐＨ７゜０乃至７
．５附近と広いｐＨ範囲であるのに対し、ＮＲＲＬ　　
Ｂ　−３３８９からのそれは、ｐＨ８，０附近である。
（２）安定ｐＨでは、本発明の酵素がｐＨ６゜５乃至９
．５附近と広いｐＨ［囲であるのに対し、ＮＲＲＬ　　
Ｂ　−３３８９からのそれはｐＨ６，５乃至８．５附近
である。
（３）至適温度では、本発明の酵素が５０℃附近と高温
であるのに対し、ＮＲＲＬ　　Ｂ−３３８９からのそれ
は４５℃附近である。
（４）安定温度では、本発明の酵素が４５℃附近（カル
シウムイオン共存下ては５０℃附近）までと高温である
のに対し、ＮＲＲＬ　　Ｂ−３３８９からのそれは４０
℃附近までである。
（５）分子量では、ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電
気泳動法において、本発明の酵素が４６゜０００±１，
０００であるのに対して、ＮＲＲＬ　　Ｂ　−３３８９
からのそれは５５゜０００である。
（６）等電点では、本発明の酵素が４．８附近であるの
に対し、ＮＲＲＬ　　Ｂ−３３８９からのそれは５．６
または５．３である。
以上にように、本発明のマルトテトラオース生成アミラ
ーゼは、ＮＲＲＬ　　Ｂ−３３８９からのそれと比較し
て、ＰＨ安定性、耐熱性に優れ、工業的に有利に使用し
うる新規なマルトテトラオース生成アミラーゼというこ
とかできる。
本発明のマルトテトラオース生成アミラーゼを産生させ
る微生物は問わない。以下に例示するシュードモナス　
スツッツェリ　ＭＯ−１９または、その変異株などは、
本発明に有利に用いることができる。
シュードモナス　スツッツェリ　ＭＯ−１９は、岡山県
上房郡賀陽町の土壌から発見、分離されたものであり、
昭和６２年２月１７日、工業技術院微生物工業技術研究
所に寄託申請され、微生物受託番号ＦＥＲＭ　　Ｐ−９
２０３で寄託されている。
以下、ショートモナス　スッッツェリ ＭＯ−１９の菌学的性質を記載する。
Ａ、形態的性質 （ａ）細胞の形及び大きさ 桿菌、０．５乃至０．６ｘ１．０乃至１．２ルｍ 第１図に電子顕微鏡写真（ＸＩｏ、０００）を示す。
（ｂ）細胞の多形性の有無 無 （ｃ）運動性の有無 有 （ｄ）鞭毛の着性状態 極毛て１本 （ｅ）胞子及び胞子のう 胞子、胞子のうば形成せず （ｆ）クラム染色性 陰性 （ｇ）抗酸性 陰性 Ｂ、培養的性質 （ａ）肉汁寒天平板培養（２８℃、２日）菌の生育は速
く、ｌ乃至３ｍｍのコロニーを形成する。コロニーは、
不透明で混光をもち、褐色がかった黄色の円形で、表面
は平滑である。
（ｂ）肉汁寒天斜面培養（２８℃、２日）菌の生育は中
程度である。コロニーは、不透明で混光をもち、褐色か
かった黄色の羽毛状で、扁平状の隆起を持つ。可溶性色
素は生成しない。
（ｃ）肉汁液体培養（２８℃５２日）培養１日では、や
や濁る程度だが、培養２日では強く濁り、よく生育する
。
表面は膜状のものを形成し、ガス、色素は生成しない。
（ｄ）肉汁穿刺培養（２８℃、２日） 穿刺部に連鎖状の生育をする。
（ｅ）肉汁ゼラチン穿刺培養 ゼラチンは液化しない。
（ｆ）リトマスミルり（２８℃、５日）培養５日までに
アルカリ性となり、ミルクは凝固する。
Ｃ１生理学的性質 （ａ）硝酸塩の還元　　　　陽性 （ｂ）脱窒反応　　　　　　陽性 （ｃ）ＭＲテスト　　　　　陰性 （ｄ）ＶＲテスト　　　　　陰性 （ｅ）インドールの生成　　陰性 （ｆ）硫化水素の生成　　　陽性 （ｇ）デンプンの分解　　　分解する （ｈ）クエン酸の利用　　　利用する （ｉ）無機態窒素の利用法　アンモニウム塩、硝酸塩共
に利用する （ｊ）色素の生成　　　　　可溶性色素は生成しない （ｋ）オキシダーゼ　　　　陽性 （見）カタラーゼ　　　　　陽性 （ｍ）生育の範囲 ｐＨ４乃至７でよく生育し、ｐＨ２以下またはｐＨ８以
上では生育せず、温度１６乃至３５℃でよく生育し、２
℃以下または４２℃以上では生育せず。
（ｎ）酸素に対する態度　　好気性 （０）Ｏ−Ｆテスト　　　　酸化型（０）（ｐ）糖類か
らの酸及びガス生成の有無Ｄ−グルコース、Ｄ−マンノ
ース、乳糖、マルトース、デンプンから酸が生成される
が、Ｌ−アラビノース、Ｄ−キシロース、Ｄ−フラクト
ース、ショ糖、グリセロールからは酸が生成されない、
Ｄ−マンノースからガスの生成がみられるが、他の前記
の糖類からはガスが生成されない。
（ｑ）生育ｐＨ ＰＨ７，７（プロテオース　ペプトン　グルコース培地
） （ｒ）セルロースの分解　　　陰性 以上の菌学的性質について、バーシーズ　マニュアル　
才ブ　デターミネイティブ　バクテリオロシー（Ｂｅｒ
ｇｅｙ’ｓ　Ｍａｎｎｕａｌ　ｏｆ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎ
ａｔｉｖｅＢａｃ　ｔｅ　ｒ　ｉｏ　ｌｏｇｙ）第７版
（１９５７年）および第８版（１９７４年）を参照して
分類すれば、シュードモナス　スツッツェリと同定され
、木菌をシュードモナス　スツッツェリ　ＭＯ−１９と
命名した。
本発明のマルトテトラオース生成アミラーゼを製造する
ための培養は、細菌の通常の培養方法に準して液体培養
、固体培養などが行なわれる。
液体培養の場合には、静置でもよいが、振どう培養また
は通気攪拌培養の方が好ましい。培養に用いられる培地
としては、シュードモナス属に属する細菌か必要とする
栄養源を含有するものであればよく、炭素源、窒素源、
無機塩などを含有する合成培地、半合成培地、天然培地
などが適宜選ばれる。特に、本発明のマルトテトラオー
ス生成アミラーゼの産生量を高めるためには、澱粉、ア
ミロペクチン、アミロース、澱粉部分加水分解物などの
澱粉質やカルシウム塩などを含有する培地が好ましい。
一般にはＰＨを中性乃至微アルカリ性にした培地にシュ
ードモナス属に属する細菌を植菌し、約２０乃至３５℃
で約０．５乃至５日間培養が行われる。
以上のようにして得られる培養物は、通常、そのまま用
いられるか、または培養物から菌体を除去した上清また
は吐液が用いられる。
必要ならば、常法に従って、硫安、硫酸ナトリウムなど
による塩析法、アセトン、エタノールなどによる沈殿法
、その他、ゲル濾過法、イオン交換クロマトグラフィー
、アフィニティクロマトグラフィーなどにより精製して
利用することも、更にこれら酵素を常法に従って、担体
結合法、架橋法、包括法などによって固定化して利用す
ることも有利に実施てきる。
本発明のマルトテトラオース生成アミラーゼを利用して
マルトテトラオース高含有物を製造するに際しては、工
業的には、澱粉、アミロペクチン、アミロース、・澱粉
部分加水分解物などの澱粉質を基質として反応させるの
が好ましい。
また、必要ならば、澱粉質含有飲食物の製造に際して、
マルトテトラオース生成アミラーゼを作用させ、飲食物
にマルトテトラオース生成アミラーゼを作用させ、飲食
物にマルトテトラオースを含有せしめ、澱粉質の老化を
防止し、飲食物の日持ちを延長することもできる。
一般的には、５乃至４５　ｗ／ｗ＄程度の澱粉質溶液に
、本発明のマルトテトラオース生成アミラーゼを澱粉質
グラム当り約１乃至２０単位の割合で加え、ＰＨ５乃至
９、反応温度約４０乃至７０℃で０．５乃至３日間反応
させる。
この際、反応液に塩化カルシウムなどのカルシウム塩を
濃度ｏ、ｏｏｏｓ乃至０．０５モル程度共存させること
によって、マルトテトラオース生成アミラーゼの耐熱性
を向上させ、反応をより容易に進めることも有利に実施
できる。
また、反応物中のマルトテトラオース含量をできるだけ
高めるためには、澱粉質の酸またはα−アミラーゼによ
る液化の程度をできるたけ低く、ＤＥ１５未満、望まし
くはＤＥ６未満にとどめたものに、マルトテトラオース
生成アミラーゼを作用させるのか好ましい。
また、反応に際して、マルトテトラオース生成アミラー
ゼとともに、他の澱粉質関連酵素、例えば、シクロデキ
ストリングルカノトランスフェラーゼ（ＥＣ２，４，１
，２９）、α−アミラーゼ（ＥＣ３，２，１，１）、β
−アミラーゼ（ＥＣ３，２，１，２）、グルコアミラー
ゼ（ＥＣ３゜２．１．３）、α−グルコシダーゼ（ＥＣ
３，２，１，２０）、プルラナーゼ（ＥＣ３，２，１−
４１）、インアミラーゼ（ＥＣ３，２，１゜６８）など
を併用して、得られるマルトテトラオース高含有物の組
成を変えたり、マルトテトラオース含量を高めたりする
ことも自由である。
このようにして得られるマルトテトラオース含量か固形
物当り４０乃至８０ｗ八２へ度のマルトテトラオース高
含有物を原料として、分画法などにより挟敲する糖類、
デキストリンなどを除去し、マルトテトラオースの含量
を更に高めることも自由である。
分画法としては、例えば、特開昭４８−４６４７号公報
に記載される半透膜の利用、特開昭４９−１０２８５４
号公報に記載される有機沈殿剤の利用、特開昭５９−１
４８７９４号公報に記載される強酸性カチオン交換樹脂
の利用などが適宜選択され、必要ならば、９８’／Ｊ以
上の最高純度のマルトテトラオース高含有物を採取する
ことも容易に実施できる。
次いで、これらのマルトテトラオース高含有物は、通常
、濾過し、活性炭による脱色およびＨ型、ＯＨ型イオン
交換樹脂による脱塩などの精製工程を経た後、濃縮し、
シラツブ状製品にする。
必要ならば、更に乾燥し、粉末状製品にすることも自由
である。
このようにして得られるマルトテトラオース高含有物に
は、通常、マルトテトラオースを固形物当り４０　’／
Ｊ以上含有する。
更に、マルトテトラオース高含有物を還元して、化学的
により安定なマルトテトライトール高含有物を製造する
ことも有利に実施できる。
例えば、マルトテトラオース高含有物を、濃度約４０乃
至６０％水溶液にし、オートクレーブに入れ、触媒とし
てラネーニッケルを約８乃至１０％添加し、攪拌しなが
ら温度を９０乃至１４０℃に上げ、水素圧を２０乃至１
５０　”／ｅ、”に上げて水素添加を完了させた後、ラ
ネーニッケルを除去し、次いで、マルトテトラオース高
含有物製造の場合と同様に、活性炭、イオン交換樹脂で
精製し、濃縮してシラツブ状製品とするか、更に乾燥し
て粉末状製品とする。
このようにして製造されるマルトテトライトール高含有
物には、通常、マルトテトライトールを固形物当り４０
　’／Ｊ以上含有する。
以上述べた方法で製造されるマルトテトラオース高含有
物またはマルトテトライトール高含有物は、低甘味の甘
味剤として、また、ボディー付与剤、粘度調節剤、保湿
剤、照付与剤、接着剤、保香剤、結晶防止剤、キャンデ
ィ−のダレ防止剤、澱粉老化防止剤などとして、更には
、栄養補給用剤などとして広く飲食物に利用される。
例えば、マルトテトラオース高含有物またはマルトテト
ライトール高含有物のシラツブ品を加熱し、食品表面に
塗布するなどの利用方法では、他の糖質甘味料と比較し
て、その硬化、乾きが速く、だれが少ない特徴を有する
。しかも、その表面の照、艶は良好である。
また、甘味剤としての利用は、単品で利用されるばかり
でなく、必要ならば、他の甘味剤１例えば、グルコース
、マルトース、異性化糖、砂糖、蜂蜜、メープルシュガ
ー、ソルビトール、マルチトール、パラチノース、ジヒ
ドロカルコン、ステビオシト、α−グリコシルステビオ
シド、ラカン力せ味物、グリチルチリン、Ｌ−アスパラ
チルし一フェニルアラニンメチルエステル、サッカリン
、グリシン、アラニンなどと配合して使用することも自
由である。
マルトテトラオース高含有物またはマルトテトライトー
ル高含有物は、酸味、塩から味、渋味、旨味、苦味など
他の呈味な有する各種物質とよく調和し、耐熱性も大き
いので、広く飲食物の甘味性に、呈味改善に、調味に自
由に利用できる。
例えば、醤油、粉末醤油、味噌、粉末味噌、もろみ、ひ
しお、フリカケ、マヨネーズ、トレッシング、食酢、三
杯酢、粉末すし酢、中華の素、天つゆ、麺つゆ、ソース
、ケチャツプ、焼肉のタレ、カレールウ、シチューの素
、スープ素、ダシの素、複合調味料、みりん、新みりん
、テーブルシラツブ、コーヒーシュガーなど各種調味料
として自由に使用できる。
また、例えば、せんべい、あられ、おこし、餅類、まん
じゅう、ついろう、あん類、羊莫、水羊英、錦玉、ゼリ
ー、カステラ、飴玉などの各種和菓子、パン、ビスケッ
ト、クラッカー、クツキー、パイ、プリン、バタークリ
ーム、カスタードクリーム、シュークリーム、ワツフル
、スポンジケーキ、ドーナツ、チョコレート、チューイ
ンガム、キャラメル、キャンディ−などの各種洋菓子、
アイスクリーム、シャーベットなどの氷菓、果実のシロ
ップ漬、水蜜などのシロップ類、麺類、米飯類１人造肉
などの穀類−加工品類、フラワーペースト、ビーナツツ
ペースト、フラーペースト、スプレッドなどのペースト
類、ジャム、マーマレード、シロップ漬、糖果などの果
実、野菜の加工食品類、福神漬、べったら漬、千枚漬、
らっきよう漬などの漬物類、たくあん漬の素、白菜漬の
素などの漬物の索類、ハム、ソーセージなどの畜肉製品
類、魚肉ハム、魚肉ソーセージ、カマボコ、チクワ、天
ぷらなどの魚肉製品、ウニ。
イカの塩辛、酸コンブ、さきするめ、ふぐのみりん干し
などの各種珍味類、のり、山菜、するめ、小魚、貝など
で製造されるつくだ魚類、煮豆、ポテトサラダ、コンブ
巻などのそう菜類、乳製品、魚肉、畜肉、果実、野菜の
ビン詰、缶詰類、合成酒、果実酒、洋酒などの酒類、コ
ーヒー、ココア、ジュース、炭酸飲料、乳酸飲料、乳酸
菌飲料などの清涼飲料水、プリンミックス、ホットケー
キミックス、即席ジュース、即席コーヒー、即席しるこ
、即席スープなど即席飲食品などの各種飲食品への甘味
剤、呈味改良剤、物性改良剤などとして自由に利用でき
る。
また、これら飲食品を正常に摂取することの困難な病人
や病後の虚弱者などに対しては、本発明のマルトテトラ
オース高含有物やマルトテトライトール高含有物を経管
流動食や透析用栄養剤などの栄養補給用剤として利用す
ることも有利に実施できる。
その際、液状の栄養補給用剤を製造し、そのままの形状
で利用することも、また、固状の栄養補給用剤を製造し
、水、塩類溶液、果汁、牛乳などに溶解して利用するこ
とも自由である。
また、マルトテトラオース高含有物または、マルトテト
ライトール高含有物を例えば、家畜、家禽、その他、蜜
蜂、蚕、魚など飼育動物のための飼料、餌料などの嗜好
性を向上させる目的に利用することもできる。
その他、タバコ、線画みがき、口紅、リップクリーム、
内服薬、トローチ、肝油ドロップ、口中清涼剤、口中香
錠、うがい薬などの味覚を味わうことのできる嗜好物、
化粧品、医薬品などへの甘味剤、呈味改良剤、品質改良
剤などとしても利用することができる。
以上述べたように、本発明でいる飲食物とは、味覚を味
わうことのできる経口摂取物のみならず、経管流動食な
どの栄養補強用剤をも意味する。
また、これら飲食物に、本発明のマルトテトラオース高
含有物または、マルトテトライトール高含有物を含有せ
しめる方法は、その製品が完成するまでの工程で含有せ
しめればよく、例えば、混和、混捏、溶解、融解、浸漬
、浸透、散布、塗布、噴霧、注入などの公知の方法が適
宜選ばれる。
以下、本発明の実施例と債れた効果を述べる。
実施例１．マルトテトラオース生成アミラーゼ溶性澱粉
３ｗへ２、コーン　ステイープ　リカー０．５’／Ｊ、
ポリヘプトンＯ−２’／Ｊ、リン酸二カリウム　０．２
’／Ｊ、塩化カルシウム・２水塩０．０５’八２および
水からなる液体培地をｐＨ７，２に調整し、この１００
１７１ｉずつを５００ｍ見容振とうフラスコにとり、１
２０℃で２０分間オートクレーブした後、シュードモナ
ス　スツッツェリ　ＭＯ−１９を１白金耳ずつ植菌し、
２７℃で３日間振どう培養した。
培養液のマルトテトラオース生成アミラーゼ活性は、ｍ
ｌ当り約２５０単位であった。
培養液を遠心分離し、得られる上清の酵素液は、澱粉質
からのマルトテトラオース高含有物製造に有利に利用で
きる。
実施例２．マルトテトラオース生成アミラーゼ液化澱粉
４１八ｔ、コーン　ステイープ　リカー１．０’／Ｊ、
ポリペプトン　０．５’／Ｊ、硝酸アンモニウム０．２
’／Ｊ、リン酸二カリウム０．２０八２．塩化カルシウ
ム・２水塩ｏ、ｏｓ’八２へおよび水からなる液体培地
を３０４９．容ジャーファーメンタ−に１５４１１１入
れ、ｐＨ７，０に調整し、１２０℃で２０分間殺菌した
後、シュードモナススツッツェリ　ＭＯ−１９の種培養
液ｌｖ／ｖｚ植菌し、２８℃で４日間、通気攪拌培養し
た。培養液のマルトテトラオース生成アミラーゼ活性は
、ｍｌ当り約２２０単位であった。培養液を膜濾過し、
得られる濾液を硫安で塩析し、０．２乃至０．４飽和沈
殿画分を採取して透析し、次いで、陰イオン交換クロマ
トグラフィー（東洋曹達株式％式％ １　６５０！３を使用し、更に、スウェーデン国ファル
マシア社製造、商品名ＭｏｎｏＱを使用）を行ってポリ
アクリルアミドゲル電気泳動で単一ハントを示す高純度
マルトテトラオース生成アミラーゼ溶液を採取した。
この精製工程によって比活性は、約４．３倍に増加し、
マルトテトラオース生成アミラーゼの回収率は約４８％
であった。
なお、得られたマルトテトラオース生成アミラーゼは、
比活性６８０±６０（単位／ｍｇ蛋白質）を示し、次の
ような理化学的性質を有する。
（ａ）作　用 澱粉に作用して、主にマルトテトラオースを生成する。
（ｂ）基質特異性 澱粉、アミロース、アミロペクチン、グリコーゲンおよ
びβ−リミットデキストリンに作用し、シクロデキスト
リン、デキストラン、プルランおよびエルシナンには、
実質的に作用しない。
（ｃ）至適ｐＨ ４０℃、２０分間で、ｐＨ７，０乃至７．５附近。
（ｄ）安定ｐＨ ４０℃、１時間で、ｐＨ６，５乃至９．５附近。
（ｅ）至適温度 ｐＨ７，０，２０分間で、５０℃附近。
（ｆ）安定温度 ｐＨ７，０，１時間で、４５℃附近まで、但し、カルシ
ウムイオン共存下では、５０℃附近まで活性を完全に残
存し、５５℃附近で約７０％の活性を残存する。
（ｇ）阻害、安定化 水銀イオンにより活性が阻害される。
カルシウムイオンにより熱安定性が向上する。
（ｈ）分子量 ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動法により、４
６，０ＯＯｆ：ｌ、００００ 超遠心分析法により、４７．ｏｏｏ±２゜００００ （ｉ）等電点 ポリアクリルアミドゲル等電点電気泳動法により、ｐｉ
　　４．８附近。
（ｊ）紫外線吸収 ２７５乃至２８０ｎｍ附近。
また、この高純度マルトテトラオース生成アミラーゼを
約１．０’八２含有する１０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐ
Ｈ８，０）を４℃で１ケ月間放置したところ、結晶が析
出した。本結晶の顕微鏡写真（ｘ２２０）を第２図に示
す。
更に、この高純度マルトテトラオース生成アミラーゼな
用いて、ジャーナル　オブ　バイオロジカル　ケミスト
リー　（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ
（：ｈｅｍｉｓｔｒｙ）、第２５６巻、第７９９０乃至
７９９７頁（１９８１年）の記載に準じて、気相プロテ
ィン　シークエンサーによりエドマン分解し、その分解
物を高速液体クロマトグラフィーで同定した。
その結果、本酵素のＮ末端アミノ酸から２０個までのア
ミノ酸配列は、アスパラギン酸−グルタミン−アラニン
−グリシン−リジン−セリン−プロリン−アスパラギン
−アラニン−バリン−アルギニン−チロシン−ヒスチジ
ン−グリシン−アスパラギン酸−グルタミン酸−イソロ
イシン−イソロイシン−ロイシン−（但し、いずれのア
ミノ酸残基もＬ−アミノ酸残基を示す、）の順であった
。本実施例で得られる高純度マルトテトラオース生成ア
ミラーゼも、実施例１の酵素液の場合と同様に、澱粉質
からのマルトテトラオース高含有物の製造に有利に利用
できる。
実施例３．マルトテトラオーＡ有物 コーンスターチ１重量部を澱粉当り０．１’／、Ｊの割
合にα−アミラーゼ（デンマーク、ノボ社、商品名ター
マミール６０Ｌ）を含む水３．０重量部に攪拌混合し、
ｐＨ６，５に調整後、この懸濁液を９５乃至１００℃に
保ち糊化と液化を同時に起させ、さらに反応を進めてＤ
Ｅ４．５になった時に、１２０℃に５分間加熱し、これ
を６０℃にまで急速に冷却し、これに実施例１の方法で
得たアルドテトラオース生成アミラーゼ液（上清）を澱
粉ダラム当り４単位の割合で加え、ｐＨ６，５，５５℃
で４６時間糖化した。
本糖化物を加熱し、酵素を失活させ、濾過し、活性炭に
て脱色し、Ｈ型、ＯＨ型イオン交換樹脂にて脱塩し、濃
縮して水分２５′八２のシラツブ状マルトテトラオース
高含有物を原料澱粉固形物当り９５％の収率で得た。
水晶は、マルトテトラオースを固形物当り、約５５％含
有しており、また、その甘味度は砂糖のそれの約２５％
であった。
水晶は、低甘味、低糖度甘味剤として、また、ボディー
付与剤、粘度調節剤、保湿剤、照付与剤、接着剤、保香
剤、結晶防止剤、キャンディ−のダレ防止剤などとして
広く飲食物に利用される。
実施例４．マルトテトラオース高含有物馬鈴薯澱粉１重
量部を澱粉当り０．０１’／Ｊの割合にα−アミラーゼ
（ナガセ生化学工業株式会社、商品名、ネオスピターゼ
）を含む水６重量部に攪拌混合し、ｐＨ６，０に調整後
、この懸濁液を８５乃至９０に保ち、糊化と液化を同時
に起させ、直ちに１２０℃に５分間加熱してＤＥｌ、０
未満にとどめ、これを５５℃に急冷し、ｐＨ７，０に調
整し、これに株式会社林原生物化学研究所製造、商品名
プルラナーゼ（ＥＣ３，２゜１．４１）および実施例２
の方法で得た高純度マルトテトラオース生成アミラーゼ
溶液をそれぞれ澱粉ダラム当り１５０単位および８単位
の割合で加え、ｐＨ７，０，５０℃で３６時間糖化した
。
本糖化物を、実施例３と同様に精製濃縮し、更に噴霧乾
燥して水分１ｗ八へ未満の粉末状マルトテトラオース高
含有物を原料澱粉固形物当り約９３％の収率で得た。
氷晶は、マルトテラオースを固形物当り約７６％含有し
ており、また、その甘味度は砂糖のそれの２５％であっ
た。
氷晶は、低甘味、低糖度甘味剤として、実施例３の場合
と同様に広く飲食物に利用できる。
実施例５．マルトテトラオース高含有物実施例４の方法
で得たマルトテトラオース高含有物を強酸性カチオン交
換樹脂を用いて、そのマルトテトラオース含量を高めた
。
実施例４の方法で製造したマルトテトラオース高含有物
を濃度６０　’／Ｊにして原糖液とした。
樹脂は、アルカリ金属型強酸性カチオン交換樹脂（東京
有機化学工業株式会社製造、商品名ＸＴ−１００７、Ｎ
ａＩ型、架橋度６％）を使用し、内径５．４ｃｍのジャ
ケット付ステンレス製カラム４本を連結して樹脂層全長
を２０ｍとした。カラム内温度を５５℃に維持しつつ、
原糖液を樹脂に対して５　ｖ／Ｊ加え、これに５５℃の
温水をＳＶｏ、１３で流して分画し、マルトテトラオー
ス含量９０％以上のマルトテトラオース高含有画分を採
取し、実施例３と同様に精製し、濃縮して、水分２５　
’／Ｊのシラツブ状マルトテトラオース高含有物を原糖
固形物当り約６０％の収率で得た。
氷晶は、マルトテトラオースを固形物当り約９３％含有
しており、また、その甘味度は砂糖のそれの約２５％で
あった。
氷晶は、低甘味、低糖度甘味剤として、実施例３の場合
と同様に広く飲食物に利用できる。
実施例６．マルトテトライトール高含有物実施例３の方
法で得たマルトテトラオース高含有物を８縮５０％水溶
液にし、オートクレーブに入れ、触媒としてラネーニッ
ケル１０％を添加し、攪拌しながら温度を９０乃至１２
５℃に上げ、水素圧を２０乃至１０Ｏ口八、へに上げて
水素化を完了させた０次いで、ラネーニッケルを除去し
た後、実施例３と同様に精製し濃縮して、水分２５ｗ八
２のシラツブ状マルトテトライトール高含有物を原料の
マルトテトラオース高含有物固形物当り約９２％の収率
で得た。
氷晶は、マルトテトライトールを固形物当り約５５％含
有しており、また、その甘味度は砂糖のそれの約３０％
であった０本品は、低甘味、非還元性甘味剤として、ま
た、ボディー付与剤、粘度調節剤、保湿剤、照付与剤、
接着剤、保香剤、結晶防止剤、キャンディ−のダレ防止
剤などとして広く飲食物に利用される。
実施例７．マルトテトライトール高含有物実施例４の方
法で得たマルトテトラオース高含有物を実施例６の方法
で準じて水素化し、精製濃縮して水分２５’八２のシラ
ツブ状マルトテトライトール高含有物を原料のマルトテ
トライトール高含有物固形物当り約９２％の収率で得た
。
氷晶は、マルトテトライトールを固形物当り約７６％含
有しており、また、その甘味度は砂糖のそれの約３０％
であった。
氷晶は、低甘味、非還元性甘味剤として、実施例６の場
合と同様に広く飲食物に利用できる。
実施例８．　甘味料 実施例６の方法で得たシラツブ状マルトテトラオース高
含有物１重量部にα−グリコジルステビオシト（東洋精
糖株式会社製造、商品名α−Ｇスィート）０．０２重量
部を均一に混合して得たシラツブ状甘味料は、甘味の質
がすぐれ、砂糖の約２倍の甘味を有し、カロリーは甘味
度当り砂糖の約局となる。従って、本甘味料は、低カロ
リー甘味料として、カロリーの摂取を制限している人、
例えば、肥満者、糖尿病者などのための低カロリー飲食
物などに対する甘味付に好適である。
また、本甘味料は、虫歯誘発菌によって酸の生成も少な
く、不溶成グルカンの生成も少ないことより、虫歯を抑
制する飲食物などに対する甘味付にも好適である。
実施例９．　カスタードクリーム コーンスターチ５００重量部、実施例４の方法で得た粉
末状マルトテトラオース高含有物４００重量部、マルト
ース５００重量部および食塩５重量部を、篩を通して充
分に混合し、鶏卵１，４００重量部を加えて攪拌し、こ
れに沸騰した牛乳ｓ、ｏｏｏ重量部を徐々に加え、更に
これをとろ火にかけて、攪拌を続け、コーンスターチが
完全に糊化して全体が半透明になったとき火をＩＥめ、
これを冷却して少量のバニラ香料を加えることによりカ
スタードクリームを製造した。
水晶は、なめらかで光沢を有し、甘味が強すぎず美味で
ある。
実施例１０．　　ういろう 米粉９０重量部に、コーンスターチ２０重量部、砂糖２
０重量部、抹茶粉末１重量部、実施例７の方法で得たシ
ラツブ状マルトテトライトール高含有物９０重量部およ
び水の適量を加えて混練した後、これを容器に入れて６
０分間蒸して抹茶ついろうを製造した。
水晶は、照り、口当りも良好で、風味もよかった。また
、澱粉の老化も抑制され、長期間安定であった。
実施例１１．　　ハードキャンディ− 実施例５の方法で得たシラツブ状マルトテトラオース高
含有物７０重量部に砂糖９０重量部を混合溶解し、減圧
下で水分的２ｗへ２未満になるまで加熱濃縮して、これ
にクエン酸０．１５重量部および少量のレモン香料と着
香料とを混和し、次いで、常法に従って成形し　ハード
キャンディ−を製造した。
水晶は、吸湿性少なく、ダレを起しにくい歯切れのよい
ハードキャンディ−である。
実施例１２．　　つくだ煮 常法に従って砂取り、酸処理して角切りした昆布２５０
重量部に、醤油２１２重量部、アミノ酸液３００重量部
、砂糖４０重量部および実施例３の方法で得たシラツブ
状マルトテトラオース高含有物２０重量部を加えて煮込
みつつ、更にグルタミン酸ソーダ１２重量部、カラメル
８重量部および味淋２１瓜量部を加えて煮き上げて昆布
の佃煮を製造した。
水晶は、味、薫りだけでなく１色、艶も充分で食欲をそ
そる昆布のつくだにである。
実施例１３．　べったら漬 実施例８の方法で得たシラツブ状甘味料４重量部、甘草
製剤Ｏ，ＯＳ重量部、リンゴ酸０゜００８重量部、グル
タミン酸ナトリウム０゜０７重量部、ソルビン酸カリウ
ム０．０３重量部およびプルラン０．２重量部を均一に
混合してべったら漬の素を製造した。
大根３０Ｋｇを常法に従って食塩により下漬けし１次い
で砂糖で中漬したものを、本べったら漬の素４Ｋｇで調
製した調味液に漬けて、べったら漬を製造した。水晶は
、色艶、香気共に良好で、適度の甘味を有し歯切れもよ
かった。
実施例１４．　経管流動食 実施例４の方法で得た粉末状マルトテトラオース高含有
物５５０重量部、無水結晶マルトース（林原株式会社製
造、登録商標ファイントース）５０重量部、乾燥卵黄１
９０重量部、脱脂粉乳２０９重量部、塩化ナトリウム４
．４重量部、塩化カリウム１．８５重量部、硫酸マグネ
シウム４重量部、チアミン０．０１重量部、アスコルビ
ン酸ナトリウム０．１重量部、ビタミンＥアセテート０
．６重量部及びニコチン酸アミド０゜０４重量部からな
る配合物を調製する。
この配合物２５ｇずつをラミネートアルミ製小包に充填
し、ヒートシールして固状の栄養補給用剤を製造した。
水晶は、低温貯蔵の必要もなく、室温下で長期間安定で
あり、流動性、溶解分散性も良好である。
水晶は、１袋分を約１５０乃至３００ｍＪＬの水に溶解
して経管流動食とし、経管方法により、鼻腔、食道、胃
、腸などへ投与して使用する。
実施例１５．　　　錠剤 アスピリン５０重量部に実施例４の方法で得た粉末状マ
ルトテトラオース高含有物６重量部およびコーンスター
チ８重量部を充分に混合した後、常法に従って、打錠機
により打錠して、厚さ５゜２５ｍｍ、１錠６８０　ｍ　
ｇの錠剤を製造した。
水晶は、吸湿性が低く、物理的強度も充分にあリ、しか
も水中での崩壊はきわめて良好であった。
〈発明の効果〉 上記したことから明らかなように、本発明は、新規マル
トテトラオース生成アミラーゼを解明し、その製造方法
並びに用途を確立するものである。
本発明の新規マルトテトラオース生成アミラーゼは、至
適ＰＨ１安定ｐＨにおけるｐＨ域が広く、また至適温度
、安定温度における温度が高く、更に産生微生物からの
酵素産生量も高く、澱粉質からのマルトテトラオース高
含有物およびマルトテトライトール高含有物の製造に有
利に利用しうろことが判明し、その工業的意義はきわめ
て大きい。
更に、このようにして製造されるマルトテトラオース高
含有物および、それを水素添加して得られるマルトテト
ライトール高含有物は、低甘味性の甘味剤として、また
ボディー付与剤、粘度ｍｆｆ１剤、保湿剤、照付与剤な
どとして、更には、栄養補給用剤などとして広く飲食物
に供しうろことも大きな特徴である。
【図面の簡単な説明】
第１図は、電子顕微鏡で１０，０００倍に拡大したシュ
ードモナス　スッッツェリ　ＭＯ−１９（ＦＥＲＭ−Ｐ
９２０３）の細胞の形状の一例を示す写真である。 第２図は、￥！Ｉ３ｍ鏡で２２０倍に拡大したマルトテ
トラオース生成アミラーゼの結品の一例を示す写真であ
る。

Claims (14)

    【特許請求の範囲】
  1. （１）下記の理化学的性質を有するマルトテトラオース
    生成アミラーゼ。 （ａ）作用 澱粉に作用して、主にマルトテトラオースを生成する。 （ｂ）基質特異性 澱粉、アミロース、アミロペクチン、グリコーゲンおよ
    びβ−リミットデキストリンに作用し、シクロデキスト
    リン、デキストラン、プルランおよびエルシナンには、
    実質的に作用しない。 （ｃ）至適ｐＨ ４０℃、２０分間で、ｐＨ７．０乃至７．５附近。 （ｄ）安定ｐＨ ４０℃、１時間で、ｐＨ６．５乃至９．５附近。 （ｅ）至適温度 ｐＨ７．０、２０分間で、５０℃附近。 （ｆ）安定温度 ｐＨ７．０、１時間で、４５℃附近まで。但し、カルシ
    ウムイオン共存下では、５０℃附近まで活性を安全に残
    存し、５５℃附近で約７０％の活性を残存する。 （ｇ）阻害、安定化 水銀イオンにより活性が阻害される。 カルシウムイオンにより熱安定性が向上する。 （ｈ）分子量 ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動法により、４
    ６，０００±１，０００。 超遠心分析法により、４７，０００±２， ０００。 （ｉ）等電点 ポリアクリルアミドゲル等電点電気泳動法により、ｐＩ
    ４．８附近。 （ｊ）紫外部吸収 ２７５乃至２８０ｎｍ附近。
  2. （２）マルトテトラオース生成アミラーゼが、第２図に
    示される結晶形を有していることを特徴とする特許請求
    の範囲第（１）項記載のマルトテトラオース生成アミラ
    ーゼ。
  3. （３）Ｎ末端領域のアミノ酸配列として、Ｎ末端からア
    スパラギン酸−グルタミン−アラニン−グリシン−リジ
    ン−セリン−プロリン−アスパラギン−アラニン−バリ
    ン−を有していることを特徴とする特許請求の範囲第（
    １）項または第（２）項記載のマルトテトラオース生成
    アミラーゼ。
  4. （４）シュードモナス属に属するマルトテトラオース生
    成アミラーゼ産生能を有する細菌を、栄養培地で培養し
    、下記の理化学的性質を有するマルトテトラオース生成
    アミラーゼを産生せしめ、これを採取することを特徴と
    するマルトテトラオース生成アミラーゼの製造方法。 （ａ）作用 澱粉に作用して、主にマルトテトラオースを生成する。 （ｂ）基質特異性 澱粉、アミロース、アミロペクチン、グリコーゲンおよ
    びβ−リミットデキストリンに作用し、シクロデキスト
    リン、デキストラン、プルランおよびエルシナンには、
    実質的に作用しない。 （ｃ）至適ｐＨ ４０℃、２０分間で、ｐＨ７．０乃至７．５附近。 （ｄ）安定ｐＨ ４０℃、１時間で、ｐＨ６．５乃至９．５附近。 （ｅ）至適温度 ｐＨ７．０、２０分間で、５０℃附近。 （ｆ）安定温度 ｐＨ７．０、１時間で、４５℃附近まで。但し、カルシ
    ウムイオン共存下では、５０℃附近まで活性を完全に残
    存し、５５℃附近で約７０％の活性を残存する。 （ｇ）阻害、安定化 水銀イオンにより活性が阻害される。 カルシウムイオンにより熱安定性が向上する。 （ｈ）分子量 ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動法により、４
    ６，０００±１，０００。 超遠心分析法により、４７，０００±２， ０００。 （ｉ）等電点 ポリアクリルアミドゲル等電点電気泳動法により、ｐＩ
    ４．８附近。 （ｊ）紫外部吸収 ２７５乃至２８０ｎｍ附近。
  5. （５）細菌がシュードモナス　スツッシェリであること
    を特徴とする特許請求の範囲第（４）項記載のマルトテ
    トラオース生成アミラーゼの製造方法。
  6. （６）細菌が、シュードモナス　スツッツェリＭＯ−１
    ９、ＦＥＲＭ　Ｐ−９２０３であることを特徴とする特
    許請求の範囲第（４）項または第（５）項記載のマルト
    テトラオース生成アミラーゼの製造方法。
  7. （７）マルトテトラオース生成アミラーゼが、Ｎ末端領
    域のアミノ酸配列として、Ｎ末端からアスパラギン酸−
    グルタミン−アラニン−グリシン−リジン−セリン−プ
    ロリン−アスパラギン−アラニン−バリン−を有してい
    ることを特徴とする特許請求の範囲第（４）項、第（５
    ）項または第（６）項記載のマルトテトラオース生成ア
    ミラーゼの製造方法。
  8. （８）澱粉質に下記の理化学的性質を有するマルトテト
    ラオース生成アミラーゼを作用せしめ、得られるマルト
    テトラオース高含有物を採取することを特徴とするマル
    トテトラオース高含有物の製造方法。 （ａ）作用 澱粉に作用して、主にマルトテトラオースを生成する。 （ｂ）基質特異性 澱粉、アミロース、アミロペクチン、グリコーゲンおよ
    びβ−リミットデキストリンに作用し、シクロデキスト
    リン、デキストラン、プルランおよびエルシナンには、
    実質的に作用しない。 （ｃ）至適ｐＨ ４０℃、２０分間で、ｐＨ７．０乃至７．５附近。 （ｄ）安定ｐＨ ４０℃、１時間で、ｐＨ６．５乃至９．５附近。 （ｅ）至適温度 ｐＨ７．０、２０分間で、５０℃附近。 （ｆ）安定温度 ｐＨ７．０、１時間で、４５℃附近まで、但し、カルシ
    ウムイオン共存下では、５０℃附近まで活性を完全に残
    存し、５５℃附近で約７０％の活性を残存する。 （ｇ）阻害、安定化 水銀イオンにより活性が阻害される。 カルシウムイオンにより熱安定性が向上する。 （ｈ）分子量 ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動法により、４
    ６，０００±１，０００。 超遠心分析法により、４７，０００±２， ０００。 （ｉ）等電点 ポリアクリルアミドゲル等電点電気泳動法により、ｐＩ
    ４．８附近。 （ｊ）紫外部吸収 ２７５乃至２８０ｎｍ附近。
  9. （９）マルトテトラオース生成アミラーゼがＮ末端領域
    のアミノ酸配列として、Ｎ末端からアスパラギン酸−グ
    ルタミン−アラニン−グリシン−リジン−セリン−プロ
    リン−アスパラギン−アラニン−バリン−を有している
    ことを特徴とする特許請求の範囲第（８）項記載のマル
    トテトラオース高含有物の製造方法。
  10. （１０）マルトテトラオース生成アミラーゼを他の澱粉
    質関連酵素とともに作用せしめることを特徴とする特許
    請求の範囲第（８）項または 第（９）項記載のマルトテトラオース高含有物の製造方
    法。
  11. （１１）澱粉質に下記の理化学的性質を有するマルトテ
    トラオース生成アミラーゼを作用せしめて得られるマル
    トテトラオース高含有物を水素添加することを特徴とす
    るマルトテトライトール高含有物の製造方法。 （ａ）作用 澱粉に作用して、主にマルトテトラオースを生成する。 （ｂ）基質特異性 澱粉、アミロース、アミロペクチン、グリコーゲンおよ
    びβ−リミットデキストリンに作用し、シクロデキスト
    リン、デキストラン、プルランおよびエルシナンには、
    実質的に作用しない。 （ｃ）至適ｐＨ ４０℃、２０分間で、ｐＨ７．０乃至７．５附近。 （ｄ）安定ｐＨ ４０℃、１時間で、ｐＨ６．５乃至９．５附近。 （ｅ）至適温度 ｐＨ７．０、２０分間で、５０℃附近。 （ｆ）安定温度 ｐＨ７．０、１時間で、４５℃附近まで、但し、カルシ
    ウムイオン共存下では、５０℃附近まで活性を完全に残
    存し、５５℃附近で約７０％の活性を残存する。 （ｇ）阻害、安定化 水銀イオンにより活性が阻害される。 カルシウムイオンにより熱安定性が向上する。 （ｈ）分子量 ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動法により、４
    ６，０００±１，００００ 超遠心分析法により、４７，０００±２， ０００。 （ｉ）等電点 ポリアクリルアミドゲル等電点電気泳動法により、ｐＩ
    ４．８附近。 （ｊ）紫外部吸収 ２７５乃至２８０ｎｍ附近。
  12. （１２）マルトテトラオース生成アミラーゼが、Ｎ末端
    領域のアミノ酸配列として、Ｎ末端から、アスパラギン
    酸−グルタミン−アラニン−グリシン−リジン−セリン
    −プロリン−アスパラギン−アラニン−バリン−を有し
    ていることを特徴とする特許請求の範囲第（１１）項記
    載のマルトテトライトール高含有物の製造方法。
  13. （１３）澱粉質に下記の理化学的性質を有するマルトテ
    トラオース生成アミラーゼを作用せしめて得られるマル
    トテトラオース高含有物、またはそれを水素添加して得
    られるマルトテトライトール高含有物を含有せしめるこ
    とを特徴とする飲食物の製造方法。 （ａ）作用 澱粉に作用して、主にマルトテトラオースを生成する。 （ｂ）基質特異性 澱粉、アミロース、アミロペクチン、グリコーゲンおよ
    びβ−リミットデキストリンに作用し、シクロデキスト
    リン、デキストラン、プルランおよびエルシナンには、
    実質的に作用しない。 （ｃ）至適ｐＨ ４０℃、２０分間で、ｐＨ７．０乃至７．５附近。 （ｄ）安定ｐＨ ４０℃、１時間で、ｐＨ６．５乃至９．５附近。 （ｅ）至適温度 ｐＨ７．０、２０分間で、５０℃附近。 （ｆ）安定温度 ｐＨ７．０、１時間で、４５℃附近まで。但し、カルシ
    ウムイオン共存下では、５０℃附近まで活性を完全に残
    存し、５５℃附近で約７０％の活性を残存する。 （ｇ）阻害、安定化 水銀イオンにより活性が阻害される。 カルシウムイオンにより熱安定性が向上する。 （ｈ）分子量 ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動法により、４
    ６，０００±１，０００。 超遠心分析法により、４７，０００±２， ０００。 （ｉ）等電点 ポリアクリルアミドゲル等電点電気泳動法により、ｐＩ
    ４．８附近。 （ｊ）紫外部吸収 ２７５乃至２８０ｎｍ附近。
  14. （１４）マルトテトラオース生成アミラーゼが、Ｎ末端
    領域のアミノ酸配列として、Ｎ末端からアスパラギン酸
    −グルタミン−アラニン−グリシン−リジン−セリン−
    プロリン−アスパラギン−アラニン−バリン−を有して
    いることを特徴とする特許請求の範囲第（１３）項記載
    の飲食物の製造方法。
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