JPS58146293A - 抗腫瘍性糖蛋白質の製造方法 - Google Patents
抗腫瘍性糖蛋白質の製造方法Info
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- JPS58146293A JPS58146293A JP57028993A JP2899382A JPS58146293A JP S58146293 A JPS58146293 A JP S58146293A JP 57028993 A JP57028993 A JP 57028993A JP 2899382 A JP2899382 A JP 2899382A JP S58146293 A JPS58146293 A JP S58146293A
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- cell
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、抗腫腸性糖蛋白質の製造方法に関する。
抗腫瘍性糖蛋白質（Ｈ＊劫破壊吻寅Ｘ１すなわら、Ｃａ
ｒｃｉｎｏ−Ｂｒｅａｋｅｒ Ｘ ％以下Ｃｋ３ｘと略
称する。）は、正常細胞６口実質的には障害を与えず、
腫傷細胞に選択的Ｇこ障害を与える作用、分化誘導作用
などで特徴づけられる極めて強力な腫瘍治療作用を有す
る新規な糖蛋白質である。
ｒｃｉｎｏ−Ｂｒｅａｋｅｒ Ｘ ％以下Ｃｋ３ｘと略
称する。）は、正常細胞６口実質的には障害を与えず、
腫傷細胞に選択的Ｇこ障害を与える作用、分化誘導作用
などで特徴づけられる極めて強力な腫瘍治療作用を有す
る新規な糖蛋白質である。
本発明者は、生体防県機能の中で重要な役割を果してい
る網内系′ａ胞が腫瘍を治療しつる物質を産生じている
ｉＪ能性かあると考え、多年にわたり研究全続けて来た
。既に、網内糸［胞からは、リンホトキシンや腫瘍壊死
因子などと称する腫傷治療効果の期待できる細胞障害因
子が採取され、それぞれ、グランジャーら（ｄｒａｎｇ
ｅｒＧ−Ａ−ｅｔ １１．、Ｃｅ１ｌｕｌａｒ Ｉｍ
ｍｕｎｏｌｏｇｙ、５８巻、６８８〜４０２頁、１９７
８年）およびカースウェルら（Ｃａｒｓｗｅｌｌ）
Ｅ、Ａ、ｅｔａｌ、、Ｐｒｏｃ、１Ｎａｔ１．Ａｃａｄ
。
る網内系′ａ胞が腫瘍を治療しつる物質を産生じている
ｉＪ能性かあると考え、多年にわたり研究全続けて来た
。既に、網内糸［胞からは、リンホトキシンや腫瘍壊死
因子などと称する腫傷治療効果の期待できる細胞障害因
子が採取され、それぞれ、グランジャーら（ｄｒａｎｇ
ｅｒＧ−Ａ−ｅｔ １１．、Ｃｅ１ｌｕｌａｒ Ｉｍ
ｍｕｎｏｌｏｇｙ、５８巻、６８８〜４０２頁、１９７
８年）およびカースウェルら（Ｃａｒｓｗｅｌｌ）
Ｅ、Ａ、ｅｔａｌ、、Ｐｒｏｃ、１Ｎａｔ１．Ａｃａｄ
。
Ｓｃｉ、Ｕ’、８．Ａ、、 ７２巻、９号、５６６６〜
３６７０Ｑ、１９７５年）により報告されている。また
、最近、本発明者は、免疫能を弱めたハムスターに増殖
させたリンパ芽球の培養液中から、前記したリンホトキ
シンおよ０＼腫膓壊死因子などを併せ含有する混合組成
物として腫瘍破壊因子（Ｃａｒｃｉｎｏ−Ｂｒｅａｋｉ
ｎｇ Ｆａｃｔｏｒ、以下Ｃｆ３ｆＩ”と略称する。Ｊ
を多量に、かつ、容易に採取することができ、このＣＢ
Ｆ’が動物に移植した実験腫瘍に有効であると発表（読
売新聞、１９８１年、１１月２２日、朝刊）して来た。
３６７０Ｑ、１９７５年）により報告されている。また
、最近、本発明者は、免疫能を弱めたハムスターに増殖
させたリンパ芽球の培養液中から、前記したリンホトキ
シンおよ０＼腫膓壊死因子などを併せ含有する混合組成
物として腫瘍破壊因子（Ｃａｒｃｉｎｏ−Ｂｒｅａｋｉ
ｎｇ Ｆａｃｔｏｒ、以下Ｃｆ３ｆＩ”と略称する。Ｊ
を多量に、かつ、容易に採取することができ、このＣＢ
Ｆ’が動物に移植した実験腫瘍に有効であると発表（読
売新聞、１９８１年、１１月２２日、朝刊）して来た。
本発明者は、このＣＢｋ’の研究過程において、さらに
、温血動物の網内系ｆＩＩＩ胞、リンパ芽球、白血病細
胞もしくは線維芽細胞の抽出液または培養上清に、前記
した細胞障害因子などの物質とは異なる糖蛋白質である
ＣＢｘを見出した。そこで、本発明者は、ヒトの治療に
供しうるＣＢｘの工業規模で容易に実施しうる製遣方法
について鋭意研究して来た。その結果、ヒトまたはヒト
以外の網内系細胞、リンパ芽球、白血病細胞もしくは線
維芽細胞より、ＣＢｘを容易に製造しつる方法を見出し
、本発明を完成した。
、温血動物の網内系ｆＩＩＩ胞、リンパ芽球、白血病細
胞もしくは線維芽細胞の抽出液または培養上清に、前記
した細胞障害因子などの物質とは異なる糖蛋白質である
ＣＢｘを見出した。そこで、本発明者は、ヒトの治療に
供しうるＣＢｘの工業規模で容易に実施しうる製遣方法
について鋭意研究して来た。その結果、ヒトまたはヒト
以外の網内系細胞、リンパ芽球、白血病細胞もしくは線
維芽細胞より、ＣＢｘを容易に製造しつる方法を見出し
、本発明を完成した。
このようにして製造されたＣＢｘは新規物質であって、
Ｆ記の物理的、化学的ならびに生物学的諸性質を有する
ものである。
Ｆ記の物理的、化学的ならびに生物学的諸性質を有する
ものである。
■ 分子ｍ；セファデックスＵ−１００（ファルマシア
社）を用い、αＧＩＭＩＪン酸緩衝液 ゛（ｐＨ７
，２）を溶媒としてゲル濾過を行ない分子量を測定した
ところ、この分子量は、１２，０００〜１７．０００で
ある。
社）を用い、αＧＩＭＩＪン酸緩衝液 ゛（ｐＨ７
，２）を溶媒としてゲル濾過を行ない分子量を測定した
ところ、この分子量は、１２，０００〜１７．０００で
ある。
■ 呈色反応； ＣＢｘの水ｍ液について呈色反応を試
験した結果を第１表に示す。なお、ローリ−およびニン
ヒドリン反応は、生化学実験講座、１巻、蛋白質定量法
゛、１９７１年記載の方法、フェノール硫酸法、アンス
ロン硫酸、ナフトール硫酸、インドール硫酸およびトリ
プトファン硫酸反応は、生化学実験講座４巻・糖質定量
法、１９７１年記載の方法、ホルン反応は、生化学実験
講座、３巻、脂質定量法、１９７１年記載の方法に従っ
て行なった。
験した結果を第１表に示す。なお、ローリ−およびニン
ヒドリン反応は、生化学実験講座、１巻、蛋白質定量法
゛、１９７１年記載の方法、フェノール硫酸法、アンス
ロン硫酸、ナフトール硫酸、インドール硫酸およびトリ
プトファン硫酸反応は、生化学実験講座４巻・糖質定量
法、１９７１年記載の方法、ホルン反応は、生化学実験
講座、３巻、脂質定量法、１９７１年記載の方法に従っ
て行なった。
以上のように、ＣＢｘはタンパク質および糖質の呈色を
示し、脂質の呈色は示さない。
示し、脂質の呈色は示さない。
■ 性状、溶解性；□白色粉末であり、水、塩化す）
ＩＪウム水溶液およびリン酸緩衝液に口ｆ溶であり、ベ
ンゼン、ヘキサンおよびクロロホルムにはとんど溶けな
い。
ＩＪウム水溶液およびリン酸緩衝液に口ｆ溶であり、ベ
ンゼン、ヘキサンおよびクロロホルムにはとんど溶けな
い。
、■ 糖含有ｊｄ ； ＣＢＸの糖含有量およびその組
成をスピロ（Ｓｐ＋ｒｏｊ（、ん、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉ
ｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ。
成をスピロ（Ｓｐ＋ｒｏｊ（、ん、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉ
ｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ。
８巻、５〜２６貝、１９６６年）の方法に準じて測定し
た結果、本物質の糖含有蓋は２７〜３３％であり、さら
にその糖成分はヘキソース１７〜２０％、ヘキソサミン
５〜７％、シアル酸５〜６％である。
た結果、本物質の糖含有蓋は２７〜３３％であり、さら
にその糖成分はヘキソース１７〜２０％、ヘキソサミン
５〜７％、シアル酸５〜６％である。
■ 等電点；アンホラインを用いた等電点電気泳動にお
いて、ＣＢｘの等電点を測定したところ、４．２〜７．
５である。
いて、ＣＢｘの等電点を測定したところ、４．２〜７．
５である。
■ ウレックス ヨーロベウスアグルチニン結合セファ
デックスを用いた分画操作において、０．０１ＭＩＪン
酸緩衝液（ｐＨ７，２３中で吸着性である。
デックスを用いた分画操作において、０．０１ＭＩＪン
酸緩衝液（ｐＨ７，２３中で吸着性である。
■ ｐ ｌ−１２，０、ｐ ｌ（７，０もしくはｐ）（
１１，０の水溶液中、４℃において２４時間以上、また
、ｐＨ７，０の水溶液中、６１３℃において３時間以上
、ＣＢｘのゲル沖過法による分子量および腫傷細胞障害
活性が安定である。
１１，０の水溶液中、４℃において２４時間以上、また
、ｐＨ７，０の水溶液中、６１３℃において３時間以上
、ＣＢｘのゲル沖過法による分子量および腫傷細胞障害
活性が安定である。
■ 正常細胞には実質的に障害を与えず、ｋｉ楊細胞に
選択的に障害を与える。
選択的に障害を与える。
Ｃｋ３にの細胞障害性は、１０５個の細胞に本物質添加
下に、６７℃、５％炭酸ガス含有酸素ガス通気下にて４
８時間培養し、トリバンブルーにまって染色されない生
残細胞数を計数し、５０％増殖抑制濃度で示した。本物
質の１単位は１０５個のＫＨ細胞の増殖を５０％抑制す
る濃度Ｃある。
下に、６７℃、５％炭酸ガス含有酸素ガス通気下にて４
８時間培養し、トリバンブルーにまって染色されない生
残細胞数を計数し、５０％増殖抑制濃度で示した。本物
質の１単位は１０５個のＫＨ細胞の増殖を５０％抑制す
る濃度Ｃある。
■ 骨髄性白血病細胞Ｍ−１を用いて、棚積らの方法（
Ｈｏｚｕｍｉ ｅｔ ａｌ、、Ｃａｎｃｅｒ １（ｅｓ
ｅａｒｃｂ、４０巻、２ソ１９〜２９２４頁、１９８０
年）に準じた試験において、Ｉ１ｍ場細胞の分化誘導作
用すなわち、種湯細胞を正常に復する作用を有する。
Ｈｏｚｕｍｉ ｅｔ ａｌ、、Ｃａｎｃｅｒ １（ｅｓ
ｅａｒｃｂ、４０巻、２ソ１９〜２９２４頁、１９８０
年）に準じた試験において、Ｉ１ｍ場細胞の分化誘導作
用すなわち、種湯細胞を正常に復する作用を有する。
かかる性質を有するＣＢｘは、次に示しｌことおり公知
０／／Ｊ質と明らかに区別できる。
０／／Ｊ質と明らかに区別できる。
ＣＢｘは網内系細胞、リンパ芽球、白血病、ｌ１ＩＩＩ
側もしくは線維芽細胞から取得されるリンホトキシンや
腫瘍壊死因子あるいはこれらの混合物であるＣＢＦとは
次の点で明確に区別することができ、明らかに異なる物
質である。リンホトキシンは、その分子量から、７０，
０００〜９０，０００．３５．ｏＯＯ〜５Ｑ、０００．
１ｏ、ｏｏｏ〜２ＱＯＯＯの６櫨、すなわち、α、βお
よびγ−リンホトキシンが存在「ルことか知られている
（Ｃｏｈｅｎら’Ｈ４１”Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈ
ｅＬｙｍｐｂｏｋｉｎｅｓＪ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒ
ｅｓｓ、 １９７９年）。この内、αわよびｐ −リン
ホトキシンはその分子量から明らかにＣＢｘと異なる。
側もしくは線維芽細胞から取得されるリンホトキシンや
腫瘍壊死因子あるいはこれらの混合物であるＣＢＦとは
次の点で明確に区別することができ、明らかに異なる物
質である。リンホトキシンは、その分子量から、７０，
０００〜９０，０００．３５．ｏＯＯ〜５Ｑ、０００．
１ｏ、ｏｏｏ〜２ＱＯＯＯの６櫨、すなわち、α、βお
よびγ−リンホトキシンが存在「ルことか知られている
（Ｃｏｈｅｎら’Ｈ４１”Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈ
ｅＬｙｍｐｂｏｋｉｎｅｓＪ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒ
ｅｓｓ、 １９７９年）。この内、αわよびｐ −リン
ホトキシンはその分子量から明らかにＣＢｘと異なる。
さらに、γ−リンホトキンンは分子ｉｊＯ，０００〜２
０．０００ の糖蛋白とグランジャーらにより報告され
ている（Ｇｒａｎｇｅｒｅｔ ａｌ、Ｃｅ１ｌｕｌａｒ
Ｉｍｒｎｕｎｏｌｏｇｙ、 ３８巻、３８８〜４０２
Ｍ、、１９７８年）が、ＣＢｘとは異なり５６℃、ｐＨ
１Ｏの水溶液中、６０分で不安定な物質であり、グラン
ジャーらの方法に従って調製した分子量１０．０００〜
２０．０００のリンホトキシンはウレックスヨーロペウ
ス了グルチニン結合セファデックスに対して、０．０１
ＭＩＪン酸裟衝液中で非吸看であり、Ｊ産湯細胞にも正
常細胞にも障害を与え細胞障害性において選択性は認め
つれない。
０．０００ の糖蛋白とグランジャーらにより報告され
ている（Ｇｒａｎｇｅｒｅｔ ａｌ、Ｃｅ１ｌｕｌａｒ
Ｉｍｒｎｕｎｏｌｏｇｙ、 ３８巻、３８８〜４０２
Ｍ、、１９７８年）が、ＣＢｘとは異なり５６℃、ｐＨ
１Ｏの水溶液中、６０分で不安定な物質であり、グラン
ジャーらの方法に従って調製した分子量１０．０００〜
２０．０００のリンホトキシンはウレックスヨーロペウ
ス了グルチニン結合セファデックスに対して、０．０１
ＭＩＪン酸裟衝液中で非吸看であり、Ｊ産湯細胞にも正
常細胞にも障害を与え細胞障害性において選択性は認め
つれない。
腫瘍Ｊ裏死因子は通釈的Ｇこ腫瘍細胞Ｇこ対して障害作
用付示すここは前記のとおりだが、その分子量は５３，
０００〜６３，０００ 、糖含有量は０％（Ｃａｒｓ
ｗｅｌｌ、Ｅ、Ａ、ｅｔ ａｌ 、、Ｐｒｏｃ、Ｎａ
ｔｌ、Ａｃ１ｄ、ｓｃｉ、Ｕ。
用付示すここは前記のとおりだが、その分子量は５３，
０００〜６３，０００ 、糖含有量は０％（Ｃａｒｓ
ｗｅｌｌ、Ｅ、Ａ、ｅｔ ａｌ 、、Ｐｒｏｃ、Ｎａ
ｔｌ、Ａｃ１ｄ、ｓｃｉ、Ｕ。
Ｓ、Ａ、、 ７２巻、９号、５６６６〜６６７０貝、１
ラフ５年）または分子量３９．０００ 、糖含有量か
４０％（日本経済新聞、１９８１年、８月２６日、朝刊
）であり、前者の糖含量Ｑ％のものは、ｗｊ蛋白質でな
い点で、後者の糖含有量４０％のものは、グｇ含有量の
点で、また、両者とも分子量において、い釘れも、ＣＢ
Ｘとは異なっている。
ラフ５年）または分子量３９．０００ 、糖含有量か
４０％（日本経済新聞、１９８１年、８月２６日、朝刊
）であり、前者の糖含量Ｑ％のものは、ｗｊ蛋白質でな
い点で、後者の糖含有量４０％のものは、グｇ含有量の
点で、また、両者とも分子量において、い釘れも、ＣＢ
Ｘとは異なっている。
さらに、これらの細胞障害因子を混有するＣＢＩｉ”は
、インターフェロンより分子量の大キナ物質（静岡新聞
、１９８１年、１１月２２日、朝刊）で、分子量が約３
５，０００（日本経済新聞、１９８１年、１１月２１日
、朝刊）であり、明らかにＣＢＸと異なっている。
、インターフェロンより分子量の大キナ物質（静岡新聞
、１９８１年、１１月２２日、朝刊）で、分子量が約３
５，０００（日本経済新聞、１９８１年、１１月２１日
、朝刊）であり、明らかにＣＢＸと異なっている。
次に本発明の細胞について述べる。
本発明において使用されるヒトまたはヒト以外の温血動
物由来の細胞は、網内系細胞、リンパ芽球、白血病ｍ胞
もしくは繊維芽細胞であれば良く、初代培養または培養
株化された細胞のいずれを用いることもでき、好よしく
は、ヒトの治療６．：ＣＢｘ’？−供するには、ヒト由
来の細胞であることが、治療上に生じる抗原性などの副
作用向において尋安全である。このような細胞としては
、例んば、ミＢ シ（１，Ｍｉｙｏｓｈｉ、Ｎａｔｕｒ
ｅ。
物由来の細胞は、網内系細胞、リンパ芽球、白血病ｍ胞
もしくは繊維芽細胞であれば良く、初代培養または培養
株化された細胞のいずれを用いることもでき、好よしく
は、ヒトの治療６．：ＣＢｘ’？−供するには、ヒト由
来の細胞であることが、治療上に生じる抗原性などの副
作用向において尋安全である。このような細胞としては
、例んば、ミＢ シ（１，Ｍｉｙｏｓｈｉ、Ｎａｔｕｒ
ｅ。
２６７巻、８４６〜８４４ ＠、 １９７７年）により
報告されたＢＡＬＬ−１１ＩｌｌＩＩ胞、’１’Ａ１，
１．−１ ｍ胞、ＮＡｉ、Ｌ−１細側、ジャーナル オ
ブ クリニカルマイクロバイオロジー（Ｊ、Ｃｌ１ｎ、
Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、、 １巻、１１６〜１１７頁、
１９７５年）に記載されたＮａｍａｌｖａ細胞、ジャー
ナル オブ イム７０ジ＝（Ｊ。
報告されたＢＡＬＬ−１１ＩｌｌＩＩ胞、’１’Ａ１，
１．−１ ｍ胞、ＮＡｉ、Ｌ−１細側、ジャーナル オ
ブ クリニカルマイクロバイオロジー（Ｊ、Ｃｌ１ｎ、
Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、、 １巻、１１６〜１１７頁、
１９７５年）に記載されたＮａｍａｌｖａ細胞、ジャー
ナル オブ イム７０ジ＝（Ｊ。
Ｉｍｍｕｎｏ １ 、、１１３巻、１３５４〜１３４５
貞、１９７４年）に記載されたＭ−７００２細胞、Ｂ−
７１０１細胞、フロウ７０００細側（７０つ社）、「組
織培養」第６巻、第１６号、５２７〜５４６頁（ｊ９Ｂ
Ｄ年）に記載されているＪＢＬ細胞、ＥＪＪＶ−８ａ１
１１Ｉ飽、ＥＢＶ−Ｗａ細胞、ＥＢＶ−ＨＯ細胞や、そ
の他ＢＡ、Ｌｒｖ１２細胞、ＣＣＦＬＦ−８Ｂ細胞（Ａ
ＴＣＣＣＣ，Ｌ、１２０）などの株化細胞、ヒト由来の
リンパ球、マクロファージ、更には、ヒト由来のリンパ
球、マクロファージを各種ウィルス、薬剤、放射線など
で処理し培養株化させた細胞などが自由に開用できる。
貞、１９７４年）に記載されたＭ−７００２細胞、Ｂ−
７１０１細胞、フロウ７０００細側（７０つ社）、「組
織培養」第６巻、第１６号、５２７〜５４６頁（ｊ９Ｂ
Ｄ年）に記載されているＪＢＬ細胞、ＥＪＪＶ−８ａ１
１１Ｉ飽、ＥＢＶ−Ｗａ細胞、ＥＢＶ−ＨＯ細胞や、そ
の他ＢＡ、Ｌｒｖ１２細胞、ＣＣＦＬＦ−８Ｂ細胞（Ａ
ＴＣＣＣＣ，Ｌ、１２０）などの株化細胞、ヒト由来の
リンパ球、マクロファージ、更には、ヒト由来のリンパ
球、マクロファージを各種ウィルス、薬剤、放射線など
で処理し培養株化させた細胞などが自由に開用できる。
また、ヒト以外の溢血動物由来の細胞としては、例えば
、マウスＢ ａ Ｉ ｂ／Ｃ３’ｆ ５細胞（フロラ社
）、マウス白血病細胞であるＬ１２１０細胞（，１゜Ｎ
ａｔｌ、 Ｃａｎｃｅｒ １ｎｓｔ、、 １５巻、１
５２８ ｉ４．１９５３年）やＰ３８Ｂ細胞（Ｓｃｉｅ
ｎｔｉｆｉｃ Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ。
、マウスＢ ａ Ｉ ｂ／Ｃ３’ｆ ５細胞（フロラ社
）、マウス白血病細胞であるＬ１２１０細胞（，１゜Ｎ
ａｔｌ、 Ｃａｎｃｅｒ １ｎｓｔ、、 １５巻、１
５２８ ｉ４．１９５３年）やＰ３８Ｂ細胞（Ｓｃｉｅ
ｎｔｉｆｉｃ Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ。
Ｐａｔｈｏｌｏｇｉｓｔｓ ＆ Ｂａｃｔｅｒｊｏｌｏ
ｇｊｓｔｓ、 ３３巻、６０３頁、１９５７年）、マウ
ス黒色腫％Ｊ Ｃ１ｏｎｅ Ｍ−５（７０つ社）、ラッ
ト腫瘍ＬＬＣ−ＷＲＣ２ｓ ６ （７０つ社）ハムスタ
ー黒色腫％ ＲＰＭＩ １８４６ （７０つ社）のほか
、リンパ球、マクロファージなどが使用できるが、本発
明で用い得る細胞は、前記のものに限定されるものでは
ない。
ｇｊｓｔｓ、 ３３巻、６０３頁、１９５７年）、マウ
ス黒色腫％Ｊ Ｃ１ｏｎｅ Ｍ−５（７０つ社）、ラッ
ト腫瘍ＬＬＣ−ＷＲＣ２ｓ ６ （７０つ社）ハムスタ
ー黒色腫％ ＲＰＭＩ １８４６ （７０つ社）のほか
、リンパ球、マクロファージなどが使用できるが、本発
明で用い得る細胞は、前記のものに限定されるものでは
ない。
次に本発明のＣＢＸの生成方法を述べる。
前記したヒトまたはヒト以外の溢血動物由来の細胞より
ＣＢｘを生成させる方法は自由であり、細胞より直接そ
のまま、または、培養増殖させてＣＢＸを採取すること
もできるが、さらに多量のＣＢｘを所望するなら、誘導
剤をそれらの細胞に作用させることもできる。例えば、
ヒトまｌこはヒト以外の温血動物由来の細胞を適当な培
地に浮遊させ、誘導剤を直接細胞に作用させてＣＢｘを
誘導生成させ、その浮遊液からＣＢｘを採取すれば良い
。
ＣＢｘを生成させる方法は自由であり、細胞より直接そ
のまま、または、培養増殖させてＣＢＸを採取すること
もできるが、さらに多量のＣＢｘを所望するなら、誘導
剤をそれらの細胞に作用させることもできる。例えば、
ヒトまｌこはヒト以外の温血動物由来の細胞を適当な培
地に浮遊させ、誘導剤を直接細胞に作用させてＣＢｘを
誘導生成させ、その浮遊液からＣＢｘを採取すれば良い
。
ＣＢｘの誘導剤としては、通常、例えば、フィトヘマグ
ルチニン、コンカナバリンＡ１ボークウイードミトーゲ
ン、リボポリサツカリドなどのレクチン、ホスホマンナ
ン、デキストランリン酸すどの多糖類、エンドトキシン
、菌体成分、細菌、ウィルス、核酸およびポリヌクレオ
チドなどの一柚もしくは二種以上が用いら４”Ｌる。ま
た、感作化された細胞にとっては抗原もＣＢＸ誘導剤で
ある。
ルチニン、コンカナバリンＡ１ボークウイードミトーゲ
ン、リボポリサツカリドなどのレクチン、ホスホマンナ
ン、デキストランリン酸すどの多糖類、エンドトキシン
、菌体成分、細菌、ウィルス、核酸およびポリヌクレオ
チドなどの一柚もしくは二種以上が用いら４”Ｌる。ま
た、感作化された細胞にとっては抗原もＣＢＸ誘導剤で
ある。
このようにして生成されたＣＢＸは公知の精製分離法、
例えば、塩析、透析、：′濾過、遠心分離、―権、凍結
乾燥などを行なうことによって容易に採取できる。さら
に高度には、イオン交換体への吸着、溶出、ゲル濾過、
電気泳動、または、抗体もしくはウレックス ヨーロベ
ウス γグルチニン結合セファデックスなどを用いたγ
フィニティクロマトグラフイーを用いても良い。
例えば、塩析、透析、：′濾過、遠心分離、―権、凍結
乾燥などを行なうことによって容易に採取できる。さら
に高度には、イオン交換体への吸着、溶出、ゲル濾過、
電気泳動、または、抗体もしくはウレックス ヨーロベ
ウス γグルチニン結合セファデックスなどを用いたγ
フィニティクロマトグラフイーを用いても良い。
次に培養株化された細胞を温血動物の体内で増殖させる
方法について述べる。
方法について述べる。
本発明において使用されるヒトまたはヒト以外の溢血動
物由来の培養株化された細胞は網内系細胞、リンパ芽球
、白血病細胞もしくは線維芽細側であれば良く、好まし
くは、ヒトの治療にＣ］３Ｘを供するＧこは、ヒト由来
の細胞であることが、治療上に生じる抗原性なとの副作
用１川において安全である。この」；うな細胞としては
、先に述べたように、例えば、ＢＡＬＬ−１細胞、ＴＡ
Ｌ Ｉｉ−１細胞、ＮＡＬ、Ｉｌ、−１細胞、Ｎａｒｎ
ａ ｌ ｖ ａ細ｌｉｄ、Ｍ−７００２細胞、Ｂ−７１
０１細胞、７０つ７０００細胞、Ｂａ１ｂ／Ｃ３’ｌ”
５細胞、Ｌ１２１０細胞、Ｐ６８８糸ＩＩＩ胞、リンパ
球、マクロファージ／７どが自由（こ使用できる。
物由来の培養株化された細胞は網内系細胞、リンパ芽球
、白血病細胞もしくは線維芽細側であれば良く、好まし
くは、ヒトの治療にＣ］３Ｘを供するＧこは、ヒト由来
の細胞であることが、治療上に生じる抗原性なとの副作
用１川において安全である。この」；うな細胞としては
、先に述べたように、例えば、ＢＡＬＬ−１細胞、ＴＡ
Ｌ Ｉｉ−１細胞、ＮＡＬ、Ｉｌ、−１細胞、Ｎａｒｎ
ａ ｌ ｖ ａ細ｌｉｄ、Ｍ−７００２細胞、Ｂ−７１
０１細胞、７０つ７０００細胞、Ｂａ１ｂ／Ｃ３’ｌ”
５細胞、Ｌ１２１０細胞、Ｐ６８８糸ＩＩＩ胞、リンパ
球、マクロファージ／７どが自由（こ使用できる。
また、かかる細胞を直接移植するか、または、細胞を拡
散チャンバーに接種して植込む温血動物は、これらのヒ
トまたはヒト以外の温血動物由来の培養株化された細胞
が増殖しうるも・・）であれば、同ａよたは異種の動物
であっても良く、例えば、ニワトリ、ハトなどの鳥類、
イヌ、ネコ、サル、ウサギ、ヤギ、ブタ、ウマ、ウシ、
モルモット、ラット、ハムスター、普通マウス、ヌード
マウスなどの哺乳類が使用できる。
散チャンバーに接種して植込む温血動物は、これらのヒ
トまたはヒト以外の温血動物由来の培養株化された細胞
が増殖しうるも・・）であれば、同ａよたは異種の動物
であっても良く、例えば、ニワトリ、ハトなどの鳥類、
イヌ、ネコ、サル、ウサギ、ヤギ、ブタ、ウマ、ウシ、
モルモット、ラット、ハムスター、普通マウス、ヌード
マウスなどの哺乳類が使用できる。
なお、これらの動物に異種の動物由来の培養化された細
胞を移植する場合には、好ましくない免疫反応を生じる
おそれがあるので、その反応をできるだけ抑えるため、
使用する動物はできるだけ幼若な状態、すなわち、卵、
胚、胎児、または新生期、幼少期のものの方が好適であ
る。
胞を移植する場合には、好ましくない免疫反応を生じる
おそれがあるので、その反応をできるだけ抑えるため、
使用する動物はできるだけ幼若な状態、すなわち、卵、
胚、胎児、または新生期、幼少期のものの方が好適であ
る。
また、これらの動物に例えば、２００〜６００レム程度
のエックス線、もしくは、免疫抑制剤などを注射するな
どの前処理をほどこし、免疫反応を抑えることもできる
。
のエックス線、もしくは、免疫抑制剤などを注射するな
どの前処理をほどこし、免疫反応を抑えることもできる
。
使用する動物がヌードマウスまたはヒト以外の溢血動物
由来の培養株化されたＩＩＩＩ胞にとっても同種であの
場合には、成長したものであっても免疫反応が弱いので
、前記した前処置を必要とすることなく、ヒトまたはヒ
ト以外の溢血動物由来の培養株化された細胞が移植でき
、急速に増殖させることができるので、特に好都合であ
る。
由来の培養株化されたＩＩＩＩ胞にとっても同種であの
場合には、成長したものであっても免疫反応が弱いので
、前記した前処置を必要とすることなく、ヒトまたはヒ
ト以外の溢血動物由来の培養株化された細胞が移植でき
、急速に増殖させることができるので、特に好都合であ
る。
また、ヒトまたはヒト以外の温血動物由来の細胞を、例
えば、まず、ハムスターＧこ移植して増殖させた後、こ
の細胞をさらＯこヌードマウスに移植するなどのように
、ヒト以外の温血動物間で移植して細胞の増殖をより安
定化したり、さらにそれから生成されるＣＢｘ量を増加
させることも自由である。
えば、まず、ハムスターＧこ移植して増殖させた後、こ
の細胞をさらＯこヌードマウスに移植するなどのように
、ヒト以外の温血動物間で移植して細胞の増殖をより安
定化したり、さらにそれから生成されるＣＢｘ量を増加
させることも自由である。
この場合、同種間、同属間は勿論のこと同州間、同門間
移植であってもよい。ヒト由来−／〕細胞を移植する動
物体内の部位は、移植した。１１ＪＪ胞が増殖しつる部
位であればよく、例えば尿液腔、静脈、腹腔、皮下など
自由に選ばれる。
移植であってもよい。ヒト由来−／〕細胞を移植する動
物体内の部位は、移植した。１１ＪＪ胞が増殖しつる部
位であればよく、例えば尿液腔、静脈、腹腔、皮下など
自由に選ばれる。
また、直接動物体内Ｇこヒトまたはヒト以外の温血動物
由来の培養株化さ７ｔた細胞を移植することなく、動物
細胞の通過を阻止し得る多孔性の濾過膜、例えば、孔径
約１０”−’〜１０−３ｍを有するメンブランフィルタ
−１限外と過膜またはフォローファイバーなどを設けた
公知の各種形状、大きさの拡散チャンバーを動物体内、
例えば１１！！詮内Ｇこ埋設して、動物体からの栄蚕物
を含む体液の供給を受けつつ、そのチャンバー内で＋ｊ
ｔｌ述の培養株化されたヒト由来の細胞を何れも増殖さ
せることができる。
由来の培養株化さ７ｔた細胞を移植することなく、動物
細胞の通過を阻止し得る多孔性の濾過膜、例えば、孔径
約１０”−’〜１０−３ｍを有するメンブランフィルタ
−１限外と過膜またはフォローファイバーなどを設けた
公知の各種形状、大きさの拡散チャンバーを動物体内、
例えば１１！！詮内Ｇこ埋設して、動物体からの栄蚕物
を含む体液の供給を受けつつ、そのチャンバー内で＋ｊ
ｔｌ述の培養株化されたヒト由来の細胞を何れも増殖さ
せることができる。
また、必要Ｇこ応じて、このチャンバー内Ｉｂ栄養物を
含む溶液を！ｌ！ＩＩ吻体内の体液１−接続し、油流さ
せるよ方こしたチャンバーを、例えば動物体表に収伺け
、チャンバー内のヒト由来の細胞の増殖状Ｉル全透視で
きるようにすることも、また、このチャンバ一部分のみ
を涜脱交換できるようにして動物を屠殺せずに寿命一杯
細胞を増殖させて、動物個体当りの細胞生産量を更に高
めることもでざる。
含む溶液を！ｌ！ＩＩ吻体内の体液１−接続し、油流さ
せるよ方こしたチャンバーを、例えば動物体表に収伺け
、チャンバー内のヒト由来の細胞の増殖状Ｉル全透視で
きるようにすることも、また、このチャンバ一部分のみ
を涜脱交換できるようにして動物を屠殺せずに寿命一杯
細胞を増殖させて、動物個体当りの細胞生産量を更に高
めることもでざる。
これらの拡散チャンバーを利用する方法は、ヒトまたは
ヒト以外の温血動物由来の株化された細胞が動物細胞と
直接接触しないので、この細胞のみが容易に採取できる
だけでなく、好ましくない免役反応を起す心配も少ない
ので、免疫反応を抑制する前処置の必要もなく、各柾濡
血動物を自由に利用できる特徴を有している。
ヒト以外の温血動物由来の株化された細胞が動物細胞と
直接接触しないので、この細胞のみが容易に採取できる
だけでなく、好ましくない免役反応を起す心配も少ない
ので、免疫反応を抑制する前処置の必要もなく、各柾濡
血動物を自由に利用できる特徴を有している。
移植した動物の維持管理は、その動物の通常の飼育管理
と続ければよく、移植後とい乙ども特別の取扱いは何ら
必要としないので好都合である。
と続ければよく、移植後とい乙ども特別の取扱いは何ら
必要としないので好都合である。
ヒトまたはヒト以外の混血動物の培養株化された細胞を
増殖させるための期間は通常１〜１０週の期間で目的を
達成することができる。
増殖させるための期間は通常１〜１０週の期間で目的を
達成することができる。
このようにして得られるヒトまたはヒト以外の温血動物
由来の培養株化された細胞数は動物個体当り約１０７〜
１０１２個、またはそれ以上に達することも見出した。
由来の培養株化された細胞数は動物個体当り約１０７〜
１０１２個、またはそれ以上に達することも見出した。
換百すれば、本発明で使用するＣｆＪｘの製造方法によ
り増殖させたヒトまたはヒト以外の温血動物由来の培養
株化された細胞数は、ＩＩＪ物個体当り移植した細胞数
の約１０２〜１０７倍、またはそれ以上にも達し、生体
外の栄誉堵地に接極して増殖させる場合の約１０１〜１
０６倍、またはそれ以上にも達して、ＣＢｘの製造のた
めに極めて好都合である。
り増殖させたヒトまたはヒト以外の温血動物由来の培養
株化された細胞数は、ＩＩＪ物個体当り移植した細胞数
の約１０２〜１０７倍、またはそれ以上にも達し、生体
外の栄誉堵地に接極して増殖させる場合の約１０１〜１
０６倍、またはそれ以上にも達して、ＣＢｘの製造のた
めに極めて好都合である。
このようにして増殖させたヒトまたはヒト以外の溢血動
物由来の培養株化された細胞から、ＣＢＸを生成させる
方法は自由である。そＪ’Ｌが増殖した動物体内のまま
で採取することもできる。
物由来の培養株化された細胞から、ＣＢＸを生成させる
方法は自由である。そＪ’Ｌが増殖した動物体内のまま
で採取することもできる。
例えは、腹腔内の腹水Ｏこ浮遊状で増殖したヒトまたは
ヒト以外の温血動物由来の培養株化８れた細胞に、また
は皮Ｆに増殖させた細胞より、直接そのままＣＢＸを採
取すればよい。
ヒト以外の温血動物由来の培養株化８れた細胞に、また
は皮Ｆに増殖させた細胞より、直接そのままＣＢＸを採
取すればよい。
また、ヒトまたはヒト以外の溢血動物由来の培養株化さ
れた細胞を動物体内に増殖させたまま、または、体外に
取り出し、生体外で誘導剤を作用させてＣＢＸ ｆｊ：
誘導生成させることもできる。例えば、腹水中で増殖し
たヒトまたはヒト以外の溢血動物由来の培養株化された
細胞を分取し、また皮下Ｇこ生じたヒトまたはヒト以外
のｌ晶面動物由来の培養株化された細胞を含む腫傷を摘
出、分散し、得られる細胞を約２０〜４０℃Ｇこ保った
栄葺培地に細胞濃度が約１０５〜１０８／−になるよう
に浮遊させ、これＯこＣＢｘの誘導剤を作用させること
によってＣＢｘを誘導生成させ、これを採取すればよい
。
れた細胞を動物体内に増殖させたまま、または、体外に
取り出し、生体外で誘導剤を作用させてＣＢＸ ｆｊ：
誘導生成させることもできる。例えば、腹水中で増殖し
たヒトまたはヒト以外の溢血動物由来の培養株化された
細胞を分取し、また皮下Ｇこ生じたヒトまたはヒト以外
のｌ晶面動物由来の培養株化された細胞を含む腫傷を摘
出、分散し、得られる細胞を約２０〜４０℃Ｇこ保った
栄葺培地に細胞濃度が約１０５〜１０８／−になるよう
に浮遊させ、これＯこＣＢｘの誘導剤を作用させること
によってＣＢｘを誘導生成させ、これを採取すればよい
。
さらに、ヒトまたはヒト以外の溢血動物由来の培養株化
された細胞を拡散チャンバー内で増殖させた場合は、増
殖させた細胞をチャンバー内のままで、またはチャンバ
ーから取り出して、直接そのまま、または、誘導剤を作
用させＣＢＸを採取することもできる。
された細胞を拡散チャンバー内で増殖させた場合は、増
殖させた細胞をチャンバー内のままで、またはチャンバ
ーから取り出して、直接そのまま、または、誘導剤を作
用させＣＢＸを採取することもできる。
また、例えば増殖させたヒトまたはヒト以外の温血動物
由来の培養株化された細胞に士づ動物体内のままでＣＢ
Ｘを誘導生成させた後、次いで同一動物個体の特定の部
位または全体から採取したヒトまたはヒト以外の温血動
物由来の培養株化された細胞に動物体外でＣＢＸを誘導
生成させる方法、また再度ＣＢＸの誘導生成に使用する
方法、または動物体内に埋設、もしくは接続するチャン
バーを交換して得られる細胞数を増刑させる方法などに
よって、使用する動物個体当りのＣＢｘ生戒量全史・−
高めることも自由である。
由来の培養株化された細胞に士づ動物体内のままでＣＢ
Ｘを誘導生成させた後、次いで同一動物個体の特定の部
位または全体から採取したヒトまたはヒト以外の温血動
物由来の培養株化された細胞に動物体外でＣＢＸを誘導
生成させる方法、また再度ＣＢＸの誘導生成に使用する
方法、または動物体内に埋設、もしくは接続するチャン
バーを交換して得られる細胞数を増刑させる方法などに
よって、使用する動物個体当りのＣＢｘ生戒量全史・−
高めることも自由である。
なお、ｃｒｓｘを誘導生成するＯこは、先に述べたＣＢ
ｘの訪導剤を用いれば良く、このようにして生成された
ＣＢｘも先に述べた公知の精製分離法、さらＧこ高度な
精製分離法などを用いても良い。
ｘの訪導剤を用いれば良く、このようにして生成された
ＣＢｘも先に述べた公知の精製分離法、さらＧこ高度な
精製分離法などを用いても良い。
次（こ、このようにして採取されたＣＢＸの有効性、安
全性、用法４６よび用量について詳述する。
全性、用法４６よび用量について詳述する。
実験例１細胞障害作用の選択性
腫瘍細胞であるＫＢ（昇咽腔癌）細胞、ＭＸ−１（乳癌
） ＋ｌｌ＋廁（癌イυ［死金、塚越曵１ミ゛）士より
分与）、ｆ−ＬＥ、−２（咽頭癌）、ＨＥＬ （肝癌）
細＋１’ＰＬ（フロラ社）、正常細胞である小１助（Ｉ
ｎｔｅｓ−ｔｉｎｅ） ４０７細胞、ジラルディ心Ｍ
（Ｇｉｒａｒｄｉｌ−１ｅ ａ ｒ ｔ ）細ｉｒｍ、
チャンダ肝（Ｃｈａｎｇ Ｌｉｖｅｒ） ＊＋ｌｌ＋＋
ｔｔ、べｏ（Ｖｅｒｏｓ サルｌ１ｌｆ）ホ川ｔｌｑ、
Ｍｌ）ＣＫ （イヌ腎）細胞（７０つ社）盆、そ才Ｉ、
ぞノ′１１．１０５個あらかじめ２４時間培うｅ後、Ｐ
２Ｓ５およヒ’ｌ、１２１０（臼血店）細胞（瑚イｖｆ
冗会、塚越戊Ｉ専士より分与）１０５個を直ちに、僅検
物袈を添加した１０釦仔牛血醒含肩イーグル培地ｉ ｄ
中で、３７℃、５係炭醒カスを含む酸素ガスフ出気下に
４８時１■培養した。
） ＋ｌｌ＋廁（癌イυ［死金、塚越曵１ミ゛）士より
分与）、ｆ−ＬＥ、−２（咽頭癌）、ＨＥＬ （肝癌）
細＋１’ＰＬ（フロラ社）、正常細胞である小１助（Ｉ
ｎｔｅｓ−ｔｉｎｅ） ４０７細胞、ジラルディ心Ｍ
（Ｇｉｒａｒｄｉｌ−１ｅ ａ ｒ ｔ ）細ｉｒｍ、
チャンダ肝（Ｃｈａｎｇ Ｌｉｖｅｒ） ＊＋ｌｌ＋＋
ｔｔ、べｏ（Ｖｅｒｏｓ サルｌ１ｌｆ）ホ川ｔｌｑ、
Ｍｌ）ＣＫ （イヌ腎）細胞（７０つ社）盆、そ才Ｉ、
ぞノ′１１．１０５個あらかじめ２４時間培うｅ後、Ｐ
２Ｓ５およヒ’ｌ、１２１０（臼血店）細胞（瑚イｖｆ
冗会、塚越戊Ｉ専士より分与）１０５個を直ちに、僅検
物袈を添加した１０釦仔牛血醒含肩イーグル培地ｉ ｄ
中で、３７℃、５係炭醒カスを含む酸素ガスフ出気下に
４８時１■培養した。
培＊終了佐、トリパンフルーで染色されない生残細胞数
？光学顕徴税下に計数し、対陽を１００として仏＠＃ｌ
質の５０係細胞死俄濃度ケ計算した。
？光学顕徴税下に計数し、対陽を１００として仏＠＃ｌ
質の５０係細胞死俄濃度ケ計算した。
被恢物質とじてＱゴ、後Ｊ、ｉする実施し１」２（製造
例）で＜４１ｘＣＢＸ、公知の方法（Ｇｒａｎｇｅｒ
、 Ｇ、 Ａ、 ｅｔａｌ、 、 Ｃｅ１ｌｕｌａｒ
Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ 、 ３８ 巻、 ６８
８〜４０２貞−１９７８年）により取得したγ−リンホ
トキシン、後述する実７／ｉｎ ９１１２ （製造例）
でＣＢ工と分離さｒＬｙｃｃＢＦならびにマイトマイシ
ンＣを用いた。また、リンホトキシンおよびＣＢＦの１
単位は、マ ・ウスＬ細胞に対する障害性を指標と
する公知の （方法（Ｂｌｏｏｍ ＊ Ｂ、 Ｌ
＆ Ｇｒａｄｅ＋ Ｐ、 Ｒ，共編［Ｉｎｖｉｔｒｏ
ｒｎｅｔｈｏｄａ ｉｎ ｃｅｌｌ−ｍｅｄｉａｔｅｄ
ｉｒｒｍｕｎｉｔｙ ＪＡｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓ
ｓ 、 １９７９年）により表示Ｌｍ。
例）で＜４１ｘＣＢＸ、公知の方法（Ｇｒａｎｇｅｒ
、 Ｇ、 Ａ、 ｅｔａｌ、 、 Ｃｅ１ｌｕｌａｒ
Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ 、 ３８ 巻、 ６８
８〜４０２貞−１９７８年）により取得したγ−リンホ
トキシン、後述する実７／ｉｎ ９１１２ （製造例）
でＣＢ工と分離さｒＬｙｃｃＢＦならびにマイトマイシ
ンＣを用いた。また、リンホトキシンおよびＣＢＦの１
単位は、マ ・ウスＬ細胞に対する障害性を指標と
する公知の （方法（Ｂｌｏｏｍ ＊ Ｂ、 Ｌ
＆ Ｇｒａｄｅ＋ Ｐ、 Ｒ，共編［Ｉｎｖｉｔｒｏ
ｒｎｅｔｈｏｄａ ｉｎ ｃｅｌｌ−ｍｅｄｉａｔｅｄ
ｉｒｒｍｕｎｉｔｙ ＪＡｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓ
ｓ 、 １９７９年）により表示Ｌｍ。
＃８魁を編２次に示した。
七
５１１−
以上の結果から明らかなとふ・す、ＣＢｘｒ、Ｊ−ＣＢ
Ｆと同様に止常細ＩＩ′已に実質的には障害を与え０こ
となく、腫瘍細胞に、選択的に１寸、Ｌ害葡与え罠。
Ｆと同様に止常細ＩＩ′已に実質的には障害を与え０こ
となく、腫瘍細胞に、選択的に１寸、Ｌ害葡与え罠。
ａだし、各々の）座噛細１１ｉｉ、！に×１する１寧害
作川りＩｉｔ＋ｉグ、ＣＢｘとｅ Ｂ Ｆとの１１で異
なっていｌヒ。こオ′１．ＶＣぺし、γ−リンホトギ７
ンおよびマイトマイシンＣは、いり一れも、１Ｅ′は卸
ｊ側および）ｉ重ｊ易細１１ｉ・選にに１し、選択性の
ないｉ早Ｊ作用ケ示した。
作川りＩｉｔ＋ｉグ、ＣＢｘとｅ Ｂ Ｆとの１１で異
なっていｌヒ。こオ′１．ＶＣぺし、γ−リンホトギ７
ンおよびマイトマイシンＣは、いり一れも、１Ｅ′は卸
ｊ側および）ｉ重ｊ易細１１ｉ・選にに１し、選択性の
ないｉ早Ｊ作用ケ示した。
’Ｉｚ 喉ｆｉｌ ２ ザルコーマ１８０およびエー
リノヒ局移植マウスに及ぼす影！− ザルコーマ１８０ ＋ｉ：ｌＩ側、エーリソヒＭｔ ｌ
Ｉ′、ｌｄ ｌ＋＋９． ’ｅｘ： 。
リノヒ局移植マウスに及ぼす影！− ザルコーマ１８０ ＋ｉ：ｌＩ側、エーリソヒＭｔ ｌ
Ｉ′、ｌｄ ｌ＋＋９． ’ｅｘ： 。
体重２５〜６０ｙのｄ ｄ ｙ禾ｊ’ｍマウスに１匹当
り６ＸＩＱ６個ケ収腔１／ｉ移４１ａ Ｌ、生存日数ケ
１曳奈した。
り６ＸＩＱ６個ケ収腔１／ｉ移４１ａ Ｌ、生存日数ケ
１曳奈した。
後述する笑施し１ｊ１（製端し１１）で柘たＣＢＸケ、
１［ｆ５匹のマワスにＩ＋！！瘍移植翌日より夕す亡Ｉ
Ｃ１目Ｊ萱で連日靜脈江’ｙｓ４ した。腟１朱を灼照
柚の平均生存畝奮１００として第３次に示した。
１［ｆ５匹のマワスにＩ＋！！瘍移植翌日より夕す亡Ｉ
Ｃ１目Ｊ萱で連日靜脈江’ｙｓ４ した。腟１朱を灼照
柚の平均生存畝奮１００として第３次に示した。
四
第 ６ 衣
以上の和泉より、ＣＢｘはザルコーマ１８０およびエー
リノヒ癌のいずれ會＄殖したマウスにおいても、明らか
な抗腫瘍作用ケ示した 実験［＋ｊ１５ＥＪ皿柄マウスの生存日数に及ぼす影響 棒組２０〜２５）のＢＤｔ′ｌ 糸雄マウスの腹腔内に
１匹当り１０５１面のマウス口器浩 Ｌ １２１０又は
１０６（（１１リマウス白血り丙 Ｐ６８８會移植し、
生存日紅ケ１硯祭した。１群ケ５匹とし゛Ｃ後述する火
ｉ 施り１２（＃造例）でイ豹こＣＢけ、移柿、イＨ
より以上り紹朱より、ＣＢＸけ、マウス口器う内Ｌ １
２１０および、ウス出血う内Ｐ６８８のいず７しの担癌
マウスにおいても、ψ」［）かな抗１匝場作用を示した
、実験？ｌ１４ 肺癌マウスの／＋：、存日数に及は
す影響俸鬼２０〜２５′／のＢ Ｄ Ｆ１糸峨マウスの
右大腿部筋肉内に２Ｘ１０’個のルイス肺癌細胞ケ移植
し、生存日数を観察した。１＃會６匹として、後述する
実施？１Ｊ５（製造例）で得た（、’Ｂｘ會移植翌日よ
り死亡直前１で連日静脈注射した。結果を、対照抑の平
均生存日数金１００として、第５衣に示した。
リノヒ癌のいずれ會＄殖したマウスにおいても、明らか
な抗腫瘍作用ケ示した 実験［＋ｊ１５ＥＪ皿柄マウスの生存日数に及ぼす影響 棒組２０〜２５）のＢＤｔ′ｌ 糸雄マウスの腹腔内に
１匹当り１０５１面のマウス口器浩 Ｌ １２１０又は
１０６（（１１リマウス白血り丙 Ｐ６８８會移植し、
生存日紅ケ１硯祭した。１群ケ５匹とし゛Ｃ後述する火
ｉ 施り１２（＃造例）でイ豹こＣＢけ、移柿、イＨ
より以上り紹朱より、ＣＢＸけ、マウス口器う内Ｌ １
２１０および、ウス出血う内Ｐ６８８のいず７しの担癌
マウスにおいても、ψ」［）かな抗１匝場作用を示した
、実験？ｌ１４ 肺癌マウスの／＋：、存日数に及は
す影響俸鬼２０〜２５′／のＢ Ｄ Ｆ１糸峨マウスの
右大腿部筋肉内に２Ｘ１０’個のルイス肺癌細胞ケ移植
し、生存日数を観察した。１＃會６匹として、後述する
実施？１Ｊ５（製造例）で得た（、’Ｂｘ會移植翌日よ
り死亡直前１で連日静脈注射した。結果を、対照抑の平
均生存日数金１００として、第５衣に示した。
第５次
以上の粕呆より、ＣＢｘは、ルイス肺癌ａ涌マウスにお
いて、明らかに抗腫瘍作用を示した。
いて、明らかに抗腫瘍作用を示した。
来ｍ ？ｌＪ ５ 黒色腫マウスの生存日数に及はす
影響 体重２０〜２５ｒのＢＤＦｔ糸雄マウスの゛ｉ都都下１
１０６個マウス黒色腫Ｂ１６’ｉ移植し、生存日鮎ケ親
祭した。１群７匹として、後述する実施例２（製造例）
で得たＣＢｘ葡移植翌日より死亡直前°よで連日静脈注
射した。結来會対照群の平均生石日数を１００として、
第６衣にボした。
影響 体重２０〜２５ｒのＢＤＦｔ糸雄マウスの゛ｉ都都下１
１０６個マウス黒色腫Ｂ１６’ｉ移植し、生存日鮎ケ親
祭した。１群７匹として、後述する実施例２（製造例）
で得たＣＢｘ葡移植翌日より死亡直前°よで連日静脈注
射した。結来會対照群の平均生石日数を１００として、
第６衣にボした。
以上の結果よすｃＢｘは、マウス黒色腫Ｂ１６担病マウ
スにふいて、明らかに抗腫瘍作用金示した。
スにふいて、明らかに抗腫瘍作用金示した。
実験例６ 癌の肺転移におよはす影響
１ ｍ ６ 四〇） Ｋ ）ｉ ２０〜３０ｆ’ （１
） ＢＤＦ’ｌ 雄？ ウス（Ｄ背部皮下に、ルイス肺
癌２咽角片を移植し、９Ｈ後より１２日１■、後述する
実施例１（製造例）で傅たＣＢｘお、よひＣＢ ｈ″ケ
１日１回靜脈注躬し、４多４Ｉｆｈ ２１日後に原兄東
帥瘍血前および肺転移粘ｍｄｋウエクスラ（Ｗｅｘｌｅ
ｒ、 ｋＬ ）の方法（Ｊ’、 Ｎａｔｌ。
） ＢＤＦ’ｌ 雄？ ウス（Ｄ背部皮下に、ルイス肺
癌２咽角片を移植し、９Ｈ後より１２日１■、後述する
実施例１（製造例）で傅たＣＢｘお、よひＣＢ ｈ″ケ
１日１回靜脈注躬し、４多４Ｉｆｈ ２１日後に原兄東
帥瘍血前および肺転移粘ｍｄｋウエクスラ（Ｗｅｘｌｅ
ｒ、 ｋＬ ）の方法（Ｊ’、 Ｎａｔｌ。
Ｃａｎｃｅｒ １ｎａｔ＋ｔｕｔｅ 、 ３６巻、６４
１貞、１９６６年）に従って其疋した。鮎未全第７衣に
示す。
１貞、１９６６年）に従って其疋した。鮎未全第７衣に
示す。
肌７衣
表甲の結果は平均埴土標準誤差で示した。
・危険率５係以［で刈囮解に比し、袖計字的に情意の左
あり。
あり。
・・廊灰率１％以Ｆで対照群に比し、（１［計学的に情
意の走あり。
意の走あり。
以上の結末よす、ＣＢＸは原元来の腫瘤および肺転移全
像めて艮く抑制したが、ＣＢＦは肺転移ＶＣはとんど効
果かなかった。
像めて艮く抑制したが、ＣＢＦは肺転移ＶＣはとんど効
果かなかった。
実、・状し１」７ 腫瘍細胞の分化訪纏・１［用Ｗｌ
４Ｎらのガｌｌｉ （Ｈｏｚｕｍｉ、 ＮＬ ｅｔ
ａｌ、 、 Ｃａｎｃｅｒｌｔｅｓｅａｒｃｈ 、 ４
０ ＠ 、 ２９１９〜２９２４ ＠、１９８０年）
に（追った。志１ｑ二骨髄性白皿柄細ｊ（包（付１−１
細Ｉ敗、構玉ガ・センター、傅績本男博士より分４）５
×１０５個ケ、めらかじめ僅横吻負τ６５加したに用の
２１台社のアミノ酸ならひにビタミン領苫１」ずろ１０
９ｂウシ皿消含・目イーグル吊地ｉ ｒａｅにａ透させ
、４８１＃ｊ藺、３７Ｃ，５≠炭ｊ秩ガス含制酸系力ス
曲気ドに堵髪した。堵省終ｒ波、０．２％小リすチレン
ラテックス、ＦＶ子（ダワケミカル社）官有培地に再浮
遊させ、６７Ｃ４時１−抹（島後、バーチクル紫徴食で
きるようになった細胞数と全細廁欲勿、光′＋−顕倣鏡
トに計数し、両ｄｊｌ旧Ｉ瓜献の比から分化＄τｄ１算
し、精米ｒ第８衣に示す。
４Ｎらのガｌｌｉ （Ｈｏｚｕｍｉ、 ＮＬ ｅｔ
ａｌ、 、 Ｃａｎｃｅｒｌｔｅｓｅａｒｃｈ 、 ４
０ ＠ 、 ２９１９〜２９２４ ＠、１９８０年）
に（追った。志１ｑ二骨髄性白皿柄細ｊ（包（付１−１
細Ｉ敗、構玉ガ・センター、傅績本男博士より分４）５
×１０５個ケ、めらかじめ僅横吻負τ６５加したに用の
２１台社のアミノ酸ならひにビタミン領苫１」ずろ１０
９ｂウシ皿消含・目イーグル吊地ｉ ｒａｅにａ透させ
、４８１＃ｊ藺、３７Ｃ，５≠炭ｊ秩ガス含制酸系力ス
曲気ドに堵髪した。堵省終ｒ波、０．２％小リすチレン
ラテックス、ＦＶ子（ダワケミカル社）官有培地に再浮
遊させ、６７Ｃ４時１−抹（島後、バーチクル紫徴食で
きるようになった細胞数と全細廁欲勿、光′＋−顕倣鏡
トに計数し、両ｄｊｌ旧Ｉ瓜献の比から分化＄τｄ１算
し、精米ｒ第８衣に示す。
第８衣
ＣＢ ｘ ｆ／Ｌは分１ヒ肪＃作用が与られたい実験ρ
０８ 完熱性試験 日本楽局ガ紀域の試験法に従い、白色家兎に欽述する笑
）Ｍ？ｌＩ６で得ｆｃｃＢｘｉ、１６当す１００早位静
祇／Ｅ射し、６時間後葦での直腸温を熱電Ａ″ｒ式１’
ｌ’ （ｆＡ ｉｌｌで測定したｔ５来を第９次にボす
。
０８ 完熱性試験 日本楽局ガ紀域の試験法に従い、白色家兎に欽述する笑
）Ｍ？ｌＩ６で得ｆｃｃＢｘｉ、１６当す１００早位静
祇／Ｅ射し、６時間後葦での直腸温を熱電Ａ″ｒ式１’
ｌ’ （ｆＡ ｉｌｌで測定したｔ５来を第９次にボす
。
第９次
ＣＢｘは、発熱性ケ不さなかった。
実験？ｊｌ ８ 霞性試諌（１回投与）体重２０〜２
５ｆ／″のＢｒ）Ｆ’＋ 系雄マウスヶ１右１１０匹と
し、後部する実験例２（製造例）で得たＣＢｘをＦ仲１
υＮ注射して７日１１ｉの死亡匹数全親祭したｎその鮎
釆、ＣＢｘ １０，０００早位／ Ｋ７ ’に投与して
も、体重、一般症状に変化なく、１０匹全例が生存した
。
５ｆ／″のＢｒ）Ｆ’＋ 系雄マウスヶ１右１１０匹と
し、後部する実験例２（製造例）で得たＣＢｘをＦ仲１
υＮ注射して７日１１ｉの死亡匹数全親祭したｎその鮎
釆、ＣＢｘ １０，０００早位／ Ｋ７ ’に投与して
も、体重、一般症状に変化なく、１０匹全例が生存した
。
実験例９４性試験（５０日間遵続投与）体、１２０〜２
５ ？ （Ｄ ＢＤＦ’＋ 糸環マｒｙス２１群１゜
匹とし、後述する実施例１（製造例）で得たＣＢｘ全６
全６蘭 化、一般症状の親祭紮行なった。１不貞は午前９時から
１０時の間に測足し、一般症状の岐祭は、アーヴインの
万ｌ去（Ｓｃｉｅｎｃｅ， １ ３ ６ 巻， １
２３ 貴１９６２年）に準じ、１ ０， ２０． ３０
日間に行なった。
５ ？ （Ｄ ＢＤＦ’＋ 糸環マｒｙス２１群１゜
匹とし、後述する実施例１（製造例）で得たＣＢｘ全６
全６蘭 化、一般症状の親祭紮行なった。１不貞は午前９時から
１０時の間に測足し、一般症状の岐祭は、アーヴインの
万ｌ去（Ｓｃｉｅｎｃｅ， １ ３ ６ 巻， １
２３ 貴１９６２年）に準じ、１ ０， ２０． ３０
日間に行なった。
結末として、ＣＨｘ？（、１，０００早位／ ｊｔｙ
／ 日Ｇ ４によって３０日間に死亡ψりはなく、不生
増加曲線も対照群と寿が与らｒ＋− ｙ’ｘかった。ま
た、一般ラボ状においても灯照群と同様に、異′酵に４
めなかった。
／ 日Ｇ ４によって３０日間に死亡ψりはなく、不生
増加曲線も対照群と寿が与らｒ＋− ｙ’ｘかった。ま
た、一般ラボ状においても灯照群と同様に、異′酵に４
めなかった。
以上の実り例から明かなように、ＣＢｘは陣瘍細掴に画
引的な増殖抑制作用會示し、癌細胞をＩＦ常細側に分１
ヒ場ぜる作用をＭし、しかも楠転移金者明に旧１制する
はかりでなく、惨めで多種箒株の腫瘍に、有効であった
にもかかわら−４、こ几らの楽理作用ケ示す用量に比し
て充分商い用量においても、１つたく安全であり、腫瘍
の治療に用いて惇めて有用でめる。
引的な増殖抑制作用會示し、癌細胞をＩＦ常細側に分１
ヒ場ぜる作用をＭし、しかも楠転移金者明に旧１制する
はかりでなく、惨めで多種箒株の腫瘍に、有効であった
にもかかわら−４、こ几らの楽理作用ケ示す用量に比し
て充分商い用量においても、１つたく安全であり、腫瘍
の治療に用いて惇めて有用でめる。
ＣＢｘは、１！す常用いられる投与法である注射剤、点
眼剤、点棒剤、吸入剤、外用剤、経１」投与用剤、直動
、投与用剤、膣内投与用沖ｊなどに用いることができる
。１ｋ、ＣＢｘの成人１１−１当りの治療量６．’ｉ、
ｓその安全性から考えて、時に限定する萱でもないが
、０，５年位〜５００．０００年位であり、ちらに好１
しくに、局所通用においては０５〜ｓ、ｏｏｏ卑位、静
脈圧ｊ相、筋肉注射などの全身注射Ｖ（−おいては２０
〜１００，０００年位、経口投与においては、５０〜５
００，０００年位であり、用法あるいは３．Ｅ秋に応じ
て適宜増減することができる。
眼剤、点棒剤、吸入剤、外用剤、経１」投与用剤、直動
、投与用剤、膣内投与用沖ｊなどに用いることができる
。１ｋ、ＣＢｘの成人１１−１当りの治療量６．’ｉ、
ｓその安全性から考えて、時に限定する萱でもないが
、０，５年位〜５００．０００年位であり、ちらに好１
しくに、局所通用においては０５〜ｓ、ｏｏｏ卑位、静
脈圧ｊ相、筋肉注射などの全身注射Ｖ（−おいては２０
〜１００，０００年位、経口投与においては、５０〜５
００，０００年位であり、用法あるいは３．Ｅ秋に応じ
て適宜増減することができる。
以下、本蛇明のＣ−Ｂｘの磨漬方ぬの央細例１な・７ト
す。
す。
実施十タリ １
ヒト末梢血リンパ球ｌＸ１０１０個紫４，０００〃７の
１０％仔牛＋＋ｕ ｒ＃ ＊有イークル培地に浮遊８せ
、３７’Ｃ。
１０％仔牛＋＋ｕ ｒ＃ ＊有イークル培地に浮遊８せ
、３７’Ｃ。
５循炭酸ガス含有酸素力ス通気−ト、４８時出ＩＪ音養
す／ｂｏ培誉終了恢、上清ゲ０．０１ Ｍ ＩＩン酸緩
両液（ｐ）［７２）に透析後、４０〜８０％値安堪析画
分會得る。この両分を、書び前記のリン酸緩債１敵１／
（−ｓ ｌｒ 後、セファテックス０．−１ｏｏ （フ
ァルマシア針）金柑いてケル濾過を竹ない、分子端１２
．０００〜１７，０００の両分を得１．ｊｌＪｃＢＸｌ
ｌｉｌ１分とし、七ｒ＋−以前にＭ出した両分を租ＣＢ
ｔ＋’画分とした。
す／ｂｏ培誉終了恢、上清ゲ０．０１ Ｍ ＩＩン酸緩
両液（ｐ）［７２）に透析後、４０〜８０％値安堪析画
分會得る。この両分を、書び前記のリン酸緩債１敵１／
（−ｓ ｌｒ 後、セファテックス０．−１ｏｏ （フ
ァルマシア針）金柑いてケル濾過を竹ない、分子端１２
．０００〜１７，０００の両分を得１．ｊｌＪｃＢＸｌ
ｌｉｌ１分とし、七ｒ＋−以前にＭ出した両分を租ＣＢ
ｔ＋’画分とした。
Ｋ’Ａ ＣＢｘ＋１１１ｉ 分’ｒ： 、ウレソクス
ヨーロベウス アクルチニン（丸善石油）粘付セファテ
ックスに吸席δぜ、０．５ Ｍフコース含／ＦｉＱ、θ
１１〜１リン酸稜１耐腋で溶出後、透析によりフコース
’Ｋｌ’ｔいて書ヒ、ウレンクス ヨーロペウス アグ
ルチニン粕曾セファテックスに吸ｌ鹸さゼてリン酸緩偵
１液（ｐｌ−１７，２）の＃東會保々に高める、いわゆ
るクラジエント方式でＣＢＸｋｆｆｊ出した。このよう
にして、ＣＢｘα０２１ｎｆｋ得る。このようにして得
られたＣＢｘの活性は、１５Ｑ＃Ｉ−位でるり、蛋白１
〜当りの比を内性は７，５００年位／巧であった。
ヨーロベウス アクルチニン（丸善石油）粘付セファテ
ックスに吸席δぜ、０．５ Ｍフコース含／ＦｉＱ、θ
１１〜１リン酸稜１耐腋で溶出後、透析によりフコース
’Ｋｌ’ｔいて書ヒ、ウレンクス ヨーロペウス アグ
ルチニン粕曾セファテックスに吸ｌ鹸さゼてリン酸緩偵
１液（ｐｌ−１７，２）の＃東會保々に高める、いわゆ
るクラジエント方式でＣＢＸｋｆｆｊ出した。このよう
にして、ＣＢｘα０２１ｎｆｋ得る。このようにして得
られたＣＢｘの活性は、１５Ｑ＃Ｉ−位でるり、蛋白１
〜当りの比を内性は７，５００年位／巧であった。
実施例２
ウシ末梢血リンパ球２Ｘ１０”個ｆ １，０００ ｄの
１０％仔牛血清含有イーグル培地に浮遊ちぜ、６７℃、
５係炭酸力ス含有酸素ガス通気丁、４８時１１１１ｉＪ
＠養する。Ｊ＠誉終ｒ後、培養上清を実施例１の方法に
従って梢製した。このようにしてＣＢｘ Ｏ，０１ｍｇ
−ｑ侍ることができる。このようにして侍らＩしたＣ
Ｂ ｘ （／Ｊ活性は２０年位でおり、蛋白１ｑ当りの
比活性は礼０００率位／僧であった。
１０％仔牛血清含有イーグル培地に浮遊ちぜ、６７℃、
５係炭酸力ス含有酸素ガス通気丁、４８時１１１１ｉＪ
＠養する。Ｊ＠誉終ｒ後、培養上清を実施例１の方法に
従って梢製した。このようにしてＣＢｘ Ｏ，０１ｍｇ
−ｑ侍ることができる。このようにして侍らＩしたＣ
Ｂ ｘ （／Ｊ活性は２０年位でおり、蛋白１ｑ当りの
比活性は礼０００率位／僧であった。
実施列６
マウス末梢血リンパｇ ５ Ｘ １０１Ｏ個ｆ ５，０
００ｍＡの１０％仔牛血清苫有イーグル冶地に浮遊さザ
、ｓ７Ｌ、 ｓ％炭酸カス含有酸素カス通気下、４８
時間場讐する。′ｊ＠＊終了後、培養上渭全夾施例１の
方法に従って梢衷した。このようにして、ＣＢｘｏ、１
２ｍｙを得る。このようにして得らｆＬ７’ＣＣＢｘの
活性は、４００年位であり、蛋白ｉ ’ｒｌＬｌ当りの
比ｌ内性ｆ−Ｊ、６，６５５沖位／ ｎｙであった。
００ｍＡの１０％仔牛血清苫有イーグル冶地に浮遊さザ
、ｓ７Ｌ、 ｓ％炭酸カス含有酸素カス通気下、４８
時間場讐する。′ｊ＠＊終了後、培養上渭全夾施例１の
方法に従って梢衷した。このようにして、ＣＢｘｏ、１
２ｍｙを得る。このようにして得らｆＬ７’ＣＣＢｘの
活性は、４００年位であり、蛋白ｉ ’ｒｌＬｌ当りの
比ｌ内性ｆ−Ｊ、６，６５５沖位／ ｎｙであった。
実施Ｖ１１４
細胞培養で咽旭芒ゼたヒ） ＢＡＬＩＬ、−１細胞（Ｍ
ｉＶｏａｈｉ著、Ｎａｔｕｒｅ 、 ２６７巻、８４３
〜８４４貝、１９７７年）１×１０１０個全２，０００
ｍ／？の１ｏ％仔午血消含巾゛イーグル培地に＃遊させ
、３７’Ｃ，５％炭酸ガス含南限素ガス］ＩＪ１気下、
４８時間培養する。
ｉＶｏａｈｉ著、Ｎａｔｕｒｅ 、 ２６７巻、８４３
〜８４４貝、１９７７年）１×１０１０個全２，０００
ｍ／？の１ｏ％仔午血消含巾゛イーグル培地に＃遊させ
、３７’Ｃ，５％炭酸ガス含南限素ガス］ＩＪ１気下、
４８時間培養する。
ｊ＠誉終了後、」音食上悄葡実施例１の方法に１年って
精製した。このようにして、ＣＢＸ［１７７ダ葡イｎる
。このようにして得られたＣＢｘの宿性は、４．０００
年位でめり、蛋白１フダ当りの比活性に５．７１４単位
／ ｔｎｇであツタ。
精製した。このようにして、ＣＢＸ［１７７ダ葡イｎる
。このようにして得られたＣＢｘの宿性は、４．０００
年位でめり、蛋白１フダ当りの比活性に５．７１４単位
／ ｔｎｇであツタ。
実施例５
細廁培誉で増殖さぜたヒト線維芽細胞（フロクツ０００
細胞（フロラ社））５ ｘ １ｇ９個ｆ ６００ｔｔｔ
ｌの１０％仔十皿消含南イーグル増地に浮ａ８ぜ、６７
℃、５チ炭酸力ス含有ｖｇ累カス通気下、４８時間培養
する。培養終了後、堵誉上渭を実施例１の方法に従って
、ｆ＃製した。このようにして、Ｃｌ５ｘ Ｏ，００
５哩を得る。このようにして傅らｆ＋−たＣＢｘの粘性
は、１０単位であり、蛋白１′ｎｖＪ当りの比活性は２
，０００単位／１ｎｙＴ：あった。
細胞（フロラ社））５ ｘ １ｇ９個ｆ ６００ｔｔｔ
ｌの１０％仔十皿消含南イーグル増地に浮ａ８ぜ、６７
℃、５チ炭酸力ス含有ｖｇ累カス通気下、４８時間培養
する。培養終了後、堵誉上渭を実施例１の方法に従って
、ｆ＃製した。このようにして、Ｃｌ５ｘ Ｏ，００
５哩を得る。このようにして傅らｆ＋−たＣＢｘの粘性
は、１０単位であり、蛋白１′ｎｖＪ当りの比活性は２
，０００単位／１ｎｙＴ：あった。
￥施１９０６
ヒト末梢リンパ体２Ｘ１０１０個金４，０００．ｄの１
０％仔牛血醒言有イーグル堵地に浮遊１せ、フィトヘマ
グルチニン（ティフコ社）ｆｉｌ磯［５０μグ／ｌｕＪ
になるように添加し、６７鳥５係Ｃ０２−９５％（）２
曲気下、４８時間培灸する。培僕終ｒ後−ヒ清２０．［
ｌ １ ＋ｖＪす７１＊Ｒ債液（ｐＨ７，２） ニｒＮ
析した候、４０〜８０％硫安塩析画分ケ得る。この両分
ゲ再び［］、Ｏ４ＭＩＪン酸緩備液（ｐ）ｆ７．２）に
透析後、セファテックスＧ −１００（ファルマシ７社
）ｋ用いてゲルー過會行ない、分子財１２，０００〜１
７，０００の両分ケ得、柑ＣＢＸ画分とし、そｎ以前に
浴出した両分全相ＣＢＦ’画分とした。４ｉＣＢｘ画分
全１ウレックス ヨーロベウス アグルチニン（丸得石
ｒ山）Ｍせセファテックスに吸着させ、０．５Ｍフコー
ス言有０．０１ＭＩＩンｌ設緩備液で浴出後、透析によ
りフコースＷ＝いて丹びウレノクス ヨーロペウス ア
ダルチニン結８ヒファテックスに吸看芒せてリン酸緩衝
液（ｐＨ，７，２）の濃度を１な々に旨める、いわゆる
グラジェント８式でＣＢＸケ浴出した。このようにして
、ＣＢｘｌ、Ｏ町を得ろ。このようにして得られたＣＢ
ｘのｌ占件Ｑま、１０．０００単位であり、蛋白１〜当
りの比活性Ｃよ１０．０００単位／ツであった。
０％仔牛血醒言有イーグル堵地に浮遊１せ、フィトヘマ
グルチニン（ティフコ社）ｆｉｌ磯［５０μグ／ｌｕＪ
になるように添加し、６７鳥５係Ｃ０２−９５％（）２
曲気下、４８時間培灸する。培僕終ｒ後−ヒ清２０．［
ｌ １ ＋ｖＪす７１＊Ｒ債液（ｐＨ７，２） ニｒＮ
析した候、４０〜８０％硫安塩析画分ケ得る。この両分
ゲ再び［］、Ｏ４ＭＩＪン酸緩備液（ｐ）ｆ７．２）に
透析後、セファテックスＧ −１００（ファルマシ７社
）ｋ用いてゲルー過會行ない、分子財１２，０００〜１
７，０００の両分ケ得、柑ＣＢＸ画分とし、そｎ以前に
浴出した両分全相ＣＢＦ’画分とした。４ｉＣＢｘ画分
全１ウレックス ヨーロベウス アグルチニン（丸得石
ｒ山）Ｍせセファテックスに吸着させ、０．５Ｍフコー
ス言有０．０１ＭＩＩンｌ設緩備液で浴出後、透析によ
りフコースＷ＝いて丹びウレノクス ヨーロペウス ア
ダルチニン結８ヒファテックスに吸看芒せてリン酸緩衝
液（ｐＨ，７，２）の濃度を１な々に旨める、いわゆる
グラジェント８式でＣＢＸケ浴出した。このようにして
、ＣＢｘｌ、Ｏ町を得ろ。このようにして得られたＣＢ
ｘのｌ占件Ｑま、１０．０００単位であり、蛋白１〜当
りの比活性Ｃよ１０．０００単位／ツであった。
実施例７
ヒト醜維芽ｍ１Ｉｌｌ胞フロウ７０００細肥（フロラ４
１：）３Ｘ１０’個ｆ ６００ＩｆＬＪ （０１０％仔
牛血１Ｍ含有イーグルノ音池に浮遊層ぜ、フィトヘマグ
ルチニンを終＃厩５０μｆＡｗｌになるように冷加して
、６７℃、５帖炭酸カス含有酸素カス３Ｊ３Ｊ気１ζ、
４８時間堵１硬後、上ｒ〃盆実施例１の方法に従って祠
製した。
１：）３Ｘ１０’個ｆ ６００ＩｆＬＪ （０１０％仔
牛血１Ｍ含有イーグルノ音池に浮遊層ぜ、フィトヘマグ
ルチニンを終＃厩５０μｆＡｗｌになるように冷加して
、６７℃、５帖炭酸カス含有酸素カス３Ｊ３Ｊ気１ζ、
４８時間堵１硬後、上ｒ〃盆実施例１の方法に従って祠
製した。
このようにしてＣＢｘ６０μ）を得ることができる。
このようにして得られたＣＢｘの活性は４８０単位であ
り、比活性は８．（１００単位／噌であった。
り、比活性は８．（１００単位／噌であった。
実施例８
細胞培養で増殖さ一＋！：たヒ） ’ｒＡＬＬ−１細胞
ｆＭｉｙｏｓｈｉ者、Ｎａｔｕｒｅ 、 ２６７巻、
８４３〜８４４Ｌ１９７７年１９ Ｘ １０ＩＩ個’＜
１，８００ ｍｌの１０チ仔牛血、Ｈ言置イーグル培
地に浮遊層せ、フィトヘマグルチニン（ティフコ社）葡
５０μＷ／ｌｎ／！となるように冷加し、６７Ｃ１５循
炭酸カス宮有酸索カス刑気Ｆ１４８時聞啼賀する。培誉
終了佐、培舎上消葡実施例の方法にイ疋って梢裳する。
ｆＭｉｙｏｓｈｉ者、Ｎａｔｕｒｅ 、 ２６７巻、
８４３〜８４４Ｌ１９７７年１９ Ｘ １０ＩＩ個’＜
１，８００ ｍｌの１０チ仔牛血、Ｈ言置イーグル培
地に浮遊層せ、フィトヘマグルチニン（ティフコ社）葡
５０μＷ／ｌｎ／！となるように冷加し、６７Ｃ１５循
炭酸カス宮有酸索カス刑気Ｆ１４８時聞啼賀する。培誉
終了佐、培舎上消葡実施例の方法にイ疋って梢裳する。
このようにして、ＣＢｘ ０．８７ｎＩ２伜る。このよ
うにして侍られたＣ Ｂ ｘ （Ｄ活性は７，５００単
位であり、蛋白１哩当りの比を重性は９，５７５単位／
巧であった。
うにして侍られたＣ Ｂ ｘ （Ｄ活性は７，５００単
位であり、蛋白１哩当りの比を重性は９，５７５単位／
巧であった。
実施例９
成長した普通マウスに約４００レムのエックス＃を予め
照射してマウスの免投能を弱めた債、そのマウスの皮ド
にＪ＠誉休体さｆ′したヒト由来のＴＡＬＬ−１細胞を
移植し、ヤの抜通常の方法で６鴫曲飼角した。皮下に生
じた約１１の朦ｄｔ ｋ １＋’ｌ＋ｆｆｌした後、ト
リプンン含有の生理食堪水に懸濁して細胞奮分散分取し
た。この細胞を実施例１と同坤に処理してＣＢｘ奮肪尋
生成δぜ、以恢、実〃亀例１と同殊に梢装し一絶してＣ
Ｂｘケ有する痛節敢奮得た。得られたＣＢｘは、普通マ
ウス１匹当り約１９０単位であった。
照射してマウスの免投能を弱めた債、そのマウスの皮ド
にＪ＠誉休体さｆ′したヒト由来のＴＡＬＬ−１細胞を
移植し、ヤの抜通常の方法で６鴫曲飼角した。皮下に生
じた約１１の朦ｄｔ ｋ １＋’ｌ＋ｆｆｌした後、ト
リプンン含有の生理食堪水に懸濁して細胞奮分散分取し
た。この細胞を実施例１と同坤に処理してＣＢｘ奮肪尋
生成δぜ、以恢、実〃亀例１と同殊に梢装し一絶してＣ
Ｂｘケ有する痛節敢奮得た。得られたＣＢｘは、普通マ
ウス１匹当り約１９０単位であった。
実施側」１０
成長したヌードマウスの皮Ｆに、＠誉株化烙れたＢＡＬ
Ｌ−１細胞ケ移植した佐、憫常の方ＩＬ−で３詞間制有
した。皮下に生じた約１１の呻１→ｒ摘出し細切した後
、トリプシン含躬の生理胃堪水に阿２蜀して細馴、會分
散分取した。この細１１−を５悌ヒト而清含有イーグル
用地で代浄し、６７℃に保った同じ組成の培地２，００
０ｍｇに細胞２ＸＩＧ’１固ゲ浮遊さぜ、３７’（：、
５％炭酸カス言七酸系カス遡気Ｆ、４８時間培養す
る。培養終了佐、培誉上消ケ実施倒１の方法に従って鞘
般、礒絹してＣＨｘ葡市゛する【燵縮沿奮得た。侍らＩ
したＣＢｘは、ヌードマウス１西当り約２００単位であ
った。
Ｌ−１細胞ケ移植した佐、憫常の方ＩＬ−で３詞間制有
した。皮下に生じた約１１の呻１→ｒ摘出し細切した後
、トリプシン含躬の生理胃堪水に阿２蜀して細馴、會分
散分取した。この細１１−を５悌ヒト而清含有イーグル
用地で代浄し、６７℃に保った同じ組成の培地２，００
０ｍｇに細胞２ＸＩＧ’１固ゲ浮遊さぜ、３７’（：、
５％炭酸カス言七酸系カス遡気Ｆ、４８時間培養す
る。培養終了佐、培誉上消ケ実施倒１の方法に従って鞘
般、礒絹してＣＨｘ葡市゛する【燵縮沿奮得た。侍らＩ
したＣＢｘは、ヌードマウス１西当り約２００単位であ
った。
実施例１１
孔イφ幻０．５ミクロンのメンフランフィルターを設け
た内＃ｉ°約１１０ｎ１のプラスチンクー製円面型チャ
ンバー内に、培誉株１ヒさ′ｎたヒト由来のＪＢＬに（
ｕ］胞紫生」！１賞塩水でγ″ＹＪｊさぜ、こｎヶ１７
ｋ １愛したラットの腹腔内に押設した。このラット會
通常のノｉ／２ｉで４時間明けした倭、このチャンバー
ケバＶり出した。
た内＃ｉ°約１１０ｎ１のプラスチンクー製円面型チャ
ンバー内に、培誉株１ヒさ′ｎたヒト由来のＪＢＬに（
ｕ］胞紫生」！１賞塩水でγ″ＹＪｊさぜ、こｎヶ１７
ｋ １愛したラットの腹腔内に押設した。このラット會
通常のノｉ／２ｉで４時間明けした倭、このチャンバー
ケバＶり出した。
こ扛により侍らで１、たヒト白米の＃Ｉ側１１処貼は、
利５ Ｘ １ （Ｊ９Ａｍであって、生捧外の栄誉用地
に５係炭酸カス含有酸裕カス佃ズ下で増殖させる場合の
約−１０３１冷以上にも達することかわかった。
利５ Ｘ １ （Ｊ９Ａｍであって、生捧外の栄誉用地
に５係炭酸カス含有酸裕カス佃ズ下で増殖させる場合の
約−１０３１冷以上にも達することかわかった。
この細Ｉｌｉ！２１ Ｘ １０１（１個葡１０％仔牛即
漬含有イークル増ｊｌ！＋４，０００ ｔｎｅ Ｋ ＃
Ｊｉさぜ、６７℃、５噛炭酸ガス含Ｍ酸索カス辿気斗
、４８時間」曽ｒｂする。培沓終ｒ佐、堵僕上ｌＨケ実
施例１の方法に従って千゛ａ棟、（昶Ｉ伯してＣＢｘ紫
有する＃縮液を侍だ。傅Ｅ） ｆｌ、 Ｌ （’、”、
単３ ｘ ｒ：１、ラット１匹当す約６５０卑位テア
−〕だ。
漬含有イークル増ｊｌ！＋４，０００ ｔｎｅ Ｋ ＃
Ｊｉさぜ、６７℃、５噛炭酸ガス含Ｍ酸索カス辿気斗
、４８時間」曽ｒｂする。培沓終ｒ佐、堵僕上ｌＨケ実
施例１の方法に従って千゛ａ棟、（昶Ｉ伯してＣＢｘ紫
有する＃縮液を侍だ。傅Ｅ） ｆｌ、 Ｌ （’、”、
単３ ｘ ｒ：１、ラット１匹当す約６５０卑位テア
−〕だ。
火Ｉ／ｉＩ＋１夕１」１ン
ｌＪｙ、艮したヌードマウスの腹１摩内に培地４未化８
１したヒ［（＋１来のＲＡＬ、Ｌ−１＃Ｉ廁を移植後、
ｔｌｆｉ常の方法Ｔ ５ Ｊ司間珂Ｇした。この腹腔内
へフィトへマクルナエン１ηヂを壮大し、２４時ＩＬ４
１後に屠殺してＩｊｋ水をイ４１り。こ；ｎ ｆ ４
Ｃ，１，００Ｏｆ ”Ｔ： ｇ ｒ９分４ｋ Ｌ、侍ら
マ゛ｌ−ｆｒ、上で青ｋ Ｔ）ｌ−１７，２，［ＬＯＩ
Ｍリン酸塙緩酸液緩衝液する生理賞穐水で１５時曲焙４
Ｊｒシ、史に梢什７ ？Ｆ Ｉｊ蹟してイ尋たＹ戸Ｍ葡
余β６してＣＢ ｘ會言有する浴液紮得た。侍ら几た（
二Ｈｘは、ター１１９フ１匹当１７ボー１８．００［］
単１立であった。
１したヒ［（＋１来のＲＡＬ、Ｌ−１＃Ｉ廁を移植後、
ｔｌｆｉ常の方法Ｔ ５ Ｊ司間珂Ｇした。この腹腔内
へフィトへマクルナエン１ηヂを壮大し、２４時ＩＬ４
１後に屠殺してＩｊｋ水をイ４１り。こ；ｎ ｆ ４
Ｃ，１，００Ｏｆ ”Ｔ： ｇ ｒ９分４ｋ Ｌ、侍ら
マ゛ｌ−ｆｒ、上で青ｋ Ｔ）ｌ−１７，２，［ＬＯＩ
Ｍリン酸塙緩酸液緩衝液する生理賞穐水で１５時曲焙４
Ｊｒシ、史に梢什７ ？Ｆ Ｉｊ蹟してイ尋たＹ戸Ｍ葡
余β６してＣＢ ｘ會言有する浴液紮得た。侍ら几た（
二Ｈｘは、ター１１９フ１匹当１７ボー１８．００［］
単１立であった。
処施辺」１６
孔径約０．５ミクロンのメンフランフィルター光・設ｖ
Ｔた内谷虐約１０σｃｌのプラスチック′し円向型ナヤ
ノバー内に、培償（未１ヒされたヒト白米のＮＡＬＬ−
１副施忙生理・健堪水で浮遊δぜ、こｒｌ、紮ｊ戎艮し
尺ラットの腹腔内に即設した。このラット？＋）ｌ常の
−ｈ法で４ ｉｌ場１０Ｊ飼角した抜、このチャンバー
留取り出しｆＣｏＣ（ＤシｔｒｉＩ座娑５係ヒト血清含
有イーク′ル −葺しカミａ−ｇ−１・ ・＝−培地で
洸浄し３７’Ｃに保った１０］じ組成の培地に４４１１
施譲汲が杓５Ｘ１０５乙ｎｌ になるように希釈し、こ
ｒｌ−７４フイトヘマク゛ルチニンを約２０ｕμＶＡｕ
ｇの割付で加えて２日間保ちＣＢｘケ訪冴牛１ｊＺ芒ゼ
しめ相−ＪＡＩ函顛し、凍結乾燥してＣＢｘを七−する
初末を１↓トた。侍らｆしたＣＢＸは、ラット１匹当り
約ｉ５，０００単位であった。
Ｔた内谷虐約１０σｃｌのプラスチック′し円向型ナヤ
ノバー内に、培償（未１ヒされたヒト白米のＮＡＬＬ−
１副施忙生理・健堪水で浮遊δぜ、こｒｌ、紮ｊ戎艮し
尺ラットの腹腔内に即設した。このラット？＋）ｌ常の
−ｈ法で４ ｉｌ場１０Ｊ飼角した抜、このチャンバー
留取り出しｆＣｏＣ（ＤシｔｒｉＩ座娑５係ヒト血清含
有イーク′ル −葺しカミａ−ｇ−１・ ・＝−培地で
洸浄し３７’Ｃに保った１０］じ組成の培地に４４１１
施譲汲が杓５Ｘ１０５乙ｎｌ になるように希釈し、こ
ｒｌ−７４フイトヘマク゛ルチニンを約２０ｕμＶＡｕ
ｇの割付で加えて２日間保ちＣＢｘケ訪冴牛１ｊＺ芒ゼ
しめ相−ＪＡＩ函顛し、凍結乾燥してＣＢｘを七−する
初末を１↓トた。侍らｆしたＣＢＸは、ラット１匹当り
約ｉ５，０００単位であった。
Claims (5)
- （１） 下記の性質： ■ 分子量；１２，０００〜１７，０００、■ 呈色反
応；ローリ−反応により蛋白質の呈色を示し、＃！酸加
水分解後のニンヒドリン反応にわいてペプチド結合およ
びアミノ酸の呈色を示し、フェノール硫酸反応、アン
スＯン硫酸反応、インドール硫ｆｉｌｌ 反９’Ｊ５、
ドリフトファン硫酸反応により糖類の呈色を示す、 ■ 性状、溶解性；白色粉末であり、水、塩化す） Ｉ
Ｊウム水溶液およびリン酸緩衝液に可溶であり）ベンゼ
ン％ ”ｌｔ／お【びクロロホルムには１とん・ど溶け
ない、■ 糖含有量が２７〜６６％であり、その組成力
、ヘキソース１７〜２０％、へＶソサミン５〜７％、シ
アル酸５〜６％である、■ 等電点；４．２〜Ｚ６、 ■ ウレソクス ヨーロヘウス アグルチニン（Ｕｌｅ
ｘ ｅｕｒｏｐｅｕｓ ａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ）結合セ
フ７デツクスを用いた分画操作において、０，０１Ｍ１
〕ン酸緩価液（ｐＨ７，２）中で吸看性である、■ ｐ
Ｈ２，０、ｐＨ７ＯもしくはｐＦｉ １１．０の水溶液
中、４℃において１４時間以上安定であり、また、ｐＨ
７，０の水溶中、６０℃において３時間以上安定である
、 ■ 正常細胞には実質的に障害を与えず、腫瘍細胞に選
択的に障害を与える、 ■ 腫瘍細胞の分化誘導作用を有する、を有する抗腫瘍
性糖蛋白質の産生能を有するヒトまたはヒト以外の混血
動物由来の細胞より、直接そのまま、または＠誉増殖さ
せて該糖蛋白質を採取することを特徴と引る抗腫瘍性糖
蛋白質の製造方法。 - （２）温血動物由来の細胞が、培養株化されたものであ
る特許請求の範囲第１項記載の抗）匣場性糖蛋白質の製
造方法。 - （３）温血動物由来の細胞にめ導剤を作用させる特許請
求の範囲第１項記載の抗腫瘍性糖蛋白質の製造方法。 - （４） 下記の性質： ■ 分子量；１２，０００〜１７，０００゜■ 呈色反
応；ローリ−反応により蛋白質の呈色を示し、塩酸ノＪ
目水分解後のニンヒドリン反応においてペプチド結合お
よびアミノ酸の呈色を示し、フェノール硫酸反応、アン
スロン硫酸反応、インドール硫酸反応、トリプトファン
硫酸反応により糖類の呈色を示す、 ■ 注状、溶解性−白色粉末であり、水、塩化ナトリウ
ム水溶液およびリン酸緩＠液にｕＪ溶であり、ベンゼン
、ヘキナンおよびクロロホルムに＃１とんど溶けない、 ■ 糖含有量が２７〜０３％であり、その組成が、ヘキ
ソース１７〜２０％、ヘキソサミン５〜７％、シアル酸
５〜６％である、■ 等電点；４．２〜Ｚ３、 ■ ウレソクス ヨーロペウスアグルチニン結合セファ
デックスを用いた分画操作において、００１Ｍリン酸緩
衝液（ｐＨ７，２）中で吸着性である、 ■ ｐ ）１２．０、ｐＨ７、ｏモジくハｐＦ１１１、
ｏの水溶液中、４℃Ｇこおいて２４時間以上安定であり
、また、ｐ Ｈ７，０の水溶液中、６０℃において５時
間以上安定である、 ■ 正常細胞には実質的０こ障害を与えず、腫瘍細胞に
選択的に障害を与える、 ■ 腫瘍細胞の分化誘導作用を有する、を有する抗腫瘍
性糖蛋白質の産生能を有するヒトまｌこはヒト以外の温
血動物由来の培養株化された細胞を、ヒト以外の同権も
しくは異種の温血動物体内に直接移植するが、または、
その温血動物の体液の供給を受は得るようＧここの細胞
を接種した拡散チャンバーを動物に植込み、増殖させて
得られる細胞より、直接そのまま、または、さらに培養
増殖させ゛Ｃ該糖蛋白質を採取することを特徴とする抗
腫瘍性糖蛋白質の製造方法。 - （５）温血動物由来の培養株化された細胞Ｇこ誘導剤を
作用させる特許請求の範囲第４項記載の抗腫瘍性糖蛋白
質の製造方法。
Priority Applications (20)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57028993A JPS58146293A (ja) | 1982-02-26 | 1982-02-26 | 抗腫瘍性糖蛋白質の製造方法 |
| US06/467,840 US4481137A (en) | 1982-02-26 | 1983-02-18 | Glycoproteins and processes for their production |
| DE19833306297 DE3306297A1 (de) | 1982-02-26 | 1983-02-23 | Neue glykoproteine, verfahren zu deren herstellung und therapeutische mittel, die solche glykoproteine enthalten, gegen tumore |
| GR70607A GR78097B (ja) | 1982-02-26 | 1983-02-24 | |
| BR8300933A BR8300933A (pt) | 1982-02-26 | 1983-02-25 | Forma substancialmente purificada de uma glicoproteina (cb) e processo para sua producao |
| FI830638A FI830638L (fi) | 1982-02-26 | 1983-02-25 | Foerfarande foer framstaellning av glykoproteiner |
| BE210211A BE896027A (fr) | 1982-02-26 | 1983-02-25 | Nouvelles glycoproteines, procedes de production et agents therapeutiques pour le traitement de tumeurs en contenant |
| NO830669A NO830669L (no) | 1982-02-26 | 1983-02-25 | Nye glykoproteiner, fremgangsmaater for deres fremstilling og terapeutiske preparater for tumorer som inneholder slike glykoproteiner |
| NL8300727A NL8300727A (nl) | 1982-02-26 | 1983-02-25 | Nieuwe glycoproteinen, werkwijzen ter bereiding daarvan alsmede therapeutische anti-tumormiddelen die dergelijke glycoproteinen bevatten. |
| PL83240784A PL240784A1 (en) | 1982-02-26 | 1983-02-25 | Process for preparing novel glycoproteins |
| AU11850/83A AU543634B2 (en) | 1982-01-26 | 1983-02-25 | Production of novel glycoproteins and therapeutic compositions containing them |
| GB08305330A GB2117385B (en) | 1982-02-26 | 1983-02-25 | Antitumor glycoprotein |
| LU84662A LU84662A1 (fr) | 1982-02-26 | 1983-02-25 | Nouvelles glycoproteines,procedes pour leur preparation et agents therapeutiques contenant ces glycoproteines en vue de combattre les tumeurs |
| SE8301073A SE8301073L (sv) | 1982-02-26 | 1983-02-25 | Nya glykoproteiner, forfaranden for framstellning derav och terapeutiska medel innehallande desamma |
| PT76296A PT76296B (en) | 1982-02-26 | 1983-02-25 | Novel glycoproteins processes for their production and therapeutic agents for tumors which contain such glycoproteins |
| ES520105A ES8500323A1 (es) | 1982-02-26 | 1983-02-25 | Un procedimiento para obtener una glicoproteina (cb) que tiene un efecto anti-tumoral. |
| DK93383A DK93383A (da) | 1982-02-26 | 1983-02-25 | Glycoproteiner samt fremgangsmaade til fremstilling heraf |
| RO110170A RO85901B (ro) | 1982-02-26 | 1983-02-26 | Procedeu de obtinere a unei glicoproteine cu actiune antitumorala |
| FR8303274A FR2522267A1 (fr) | 1982-02-26 | 1983-02-28 | Glycoproteines a activite antitumorale, leur procede de preparation et leur application therapeutique |
| DD83248327A DD209634A5 (de) | 1982-02-26 | 1983-02-28 | Verfahren zur herstellung neuer glykoproteine und deren verwendung in therapeutischen mitteln gegen tumore |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57028993A JPS58146293A (ja) | 1982-02-26 | 1982-02-26 | 抗腫瘍性糖蛋白質の製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58146293A true JPS58146293A (ja) | 1983-08-31 |
Family
ID=12263933
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57028993A Pending JPS58146293A (ja) | 1982-01-26 | 1982-02-26 | 抗腫瘍性糖蛋白質の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS58146293A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1984002912A1 (en) * | 1983-01-31 | 1984-08-02 | Otsuka Pharma Co Ltd | Protein with oncostatic effect, process for its preparation, and oncostatic drug containing it |
| US4994556A (en) * | 1985-09-18 | 1991-02-19 | Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku | Novel lymphokine and its production and uses |
| EP0821969A2 (en) | 1992-07-16 | 1998-02-04 | Snow Brand Milk Products Co., Ltd. | Medicinal Composition comprising TCF-II |
-
1982
- 1982-02-26 JP JP57028993A patent/JPS58146293A/ja active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1984002912A1 (en) * | 1983-01-31 | 1984-08-02 | Otsuka Pharma Co Ltd | Protein with oncostatic effect, process for its preparation, and oncostatic drug containing it |
| US4994556A (en) * | 1985-09-18 | 1991-02-19 | Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku | Novel lymphokine and its production and uses |
| EP0821969A2 (en) | 1992-07-16 | 1998-02-04 | Snow Brand Milk Products Co., Ltd. | Medicinal Composition comprising TCF-II |
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