JPS58144747A - Ｓ―１００タンパクの高感度測定法 - Google Patents
Ｓ―１００タンパクの高感度測定法Info
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- JPS58144747A JPS58144747A JP18193381A JP18193381A JPS58144747A JP S58144747 A JPS58144747 A JP S58144747A JP 18193381 A JP18193381 A JP 18193381A JP 18193381 A JP18193381 A JP 18193381A JP S58144747 A JPS58144747 A JP S58144747A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
関するものである。Ｓ−１００タンパクは近年神経組織
特異タンパクとして注目されており，分子量約２万の酸
性蛋白で大脳では白質に多く、細胞レベルでの分布では
主としてダリア細胞の細胞質に存在するとされている。
特異タンパクとして注目されており，分子量約２万の酸
性蛋白で大脳では白質に多く、細胞レベルでの分布では
主としてダリア細胞の細胞質に存在するとされている。
Ｓ−１００タンパクは神経組織の損傷によって体液中に
漏出する。それ故これを測定すれば神経組織損傷の有無
が推定できることになる．［ジャーナル、オブ、ザ、ニ
ューロロジカル、サイエンシス（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ
ｔｈｅＮｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ ５ｃｉｅｎｃｅｓ
） ４４巻、２５９〜２６３頁（１９８０１）これま
でＳ−１００タンパクの微量を測定する１５法として補
体結合法（Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ ｆｉｘａｔｉｏｎ法
以下略してＪＣＦＪ法という）が用いられてきたが、Ｃ
Ｆ法はバイオアッセイ法のため、又ＲＩＡ法は使用する
アイソ］・−プ（１２Ｊ）の半減期が短いｔ：め共に安
定した測定系を維持することが田無であった。神経組織
損傷の有無の推定のためには高感度測定法を確立する必
要性があり、そこで本発明者らはＳ−１００タンパクの
微量測定におけるＬ記の如き問題点を克服するために鋭
意検討を試みたものである。
漏出する。それ故これを測定すれば神経組織損傷の有無
が推定できることになる．［ジャーナル、オブ、ザ、ニ
ューロロジカル、サイエンシス（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ
ｔｈｅＮｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ ５ｃｉｅｎｃｅｓ
） ４４巻、２５９〜２６３頁（１９８０１）これま
でＳ−１００タンパクの微量を測定する１５法として補
体結合法（Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ ｆｉｘａｔｉｏｎ法
以下略してＪＣＦＪ法という）が用いられてきたが、Ｃ
Ｆ法はバイオアッセイ法のため、又ＲＩＡ法は使用する
アイソ］・−プ（１２Ｊ）の半減期が短いｔ：め共に安
定した測定系を維持することが田無であった。神経組織
損傷の有無の推定のためには高感度測定法を確立する必
要性があり、そこで本発明者らはＳ−１００タンパクの
微量測定におけるＬ記の如き問題点を克服するために鋭
意検討を試みたものである。
近年同じく微量測定法としてＲＩＡ法のラジオアイソト
ープの代わりに酵素を標識として使う酵素免疫測定法が
開発されて来た。
ープの代わりに酵素を標識として使う酵素免疫測定法が
開発されて来た。
本発明者らは、Ｓ−１００タンパクの微量測定に酵素免
疫測定法を応用したところ意外にも検体中の数ｐｇの微
量のＳ−１００タンパクが測定でき、従来報告されてい
るＣＦ法、ＲＩＡ法のいずれも測定量として９．ｉｎｇ
が限度であるのに比して数十倍の高感度測定ができ、か
つ安定した測定ができることを知り本発明を完成したも
のである。
疫測定法を応用したところ意外にも検体中の数ｐｇの微
量のＳ−１００タンパクが測定でき、従来報告されてい
るＣＦ法、ＲＩＡ法のいずれも測定量として９．ｉｎｇ
が限度であるのに比して数十倍の高感度測定ができ、か
つ安定した測定ができることを知り本発明を完成したも
のである。
即ち、本発明は抗Ｓ−１００抗体結合固体に検体中のＳ
−１００タンパクを反応せしめて得られる反応物に酵素
標識抗Ｓ−１００抗体を作用せしめるか又は検体中のＳ
−１００−タンパクと酵素標識抗Ｓ−１００抗体を反応
せしめて得られる反応物を抗Ｓ−１００抗体結合固相に
作用せしめることによって抗Ｓ−１００抗体を介してＳ
−１００タンパク及び酵素標識抗Ｓ−１００抗体を固相
に固定化せしめた後、固定化固相中の該標識酵素活性を
測定することにより検体中のＳ−１００タンパク量を求
めることを特徴とするＳ−１００タンパクの高感度測定
法である。
−１００タンパクを反応せしめて得られる反応物に酵素
標識抗Ｓ−１００抗体を作用せしめるか又は検体中のＳ
−１００−タンパクと酵素標識抗Ｓ−１００抗体を反応
せしめて得られる反応物を抗Ｓ−１００抗体結合固相に
作用せしめることによって抗Ｓ−１００抗体を介してＳ
−１００タンパク及び酵素標識抗Ｓ−１００抗体を固相
に固定化せしめた後、固定化固相中の該標識酵素活性を
測定することにより検体中のＳ−１００タンパク量を求
めることを特徴とするＳ−１００タンパクの高感度測定
法である。
本発明に使用されろ標識酵素としてはβ−Ｄ−ガラクト
シダーゼ、アルカリホスファターゼ、パーオキシダーゼ
、グルコースオキシダーゼ、リンゴ酸脱水素酵素等通常
用いられる酵素であればいずれでもよいが、特にβ−Ｄ
−ガラクトシダーゼが測定感度が高いので高感度測定の
ために好ましい。
シダーゼ、アルカリホスファターゼ、パーオキシダーゼ
、グルコースオキシダーゼ、リンゴ酸脱水素酵素等通常
用いられる酵素であればいずれでもよいが、特にβ−Ｄ
−ガラクトシダーゼが測定感度が高いので高感度測定の
ために好ましい。
酵素僚識抗Ｓ−１００抗体の調製に際して用いられる酵
素と抗Ｓ−１００抗体との結合法は、酵素、抗Ｓ−１０
０抗体の各々の活性（触媒活性、抗体結合能）が失なわ
れないような方法であればどのような方法でもよい、具
体的にはグルタルアルデヒド、カルボジイミド、Ｎ、、
Ｎ−０−フェニレンジマレイミド、ｍ−マレイミドベン
ゾイル−Ｎ−ハイドロキシサクシニミドエステル （ｍ
−Ｍａ Ｉ ｅ ｉｍｉ ｄｏｂｅｎ１４ｏｙ ｌ−Ｎ
−Ｈｙｄｒｏｘｙｓｕｃｃ ｉｎ １ｍ１ｄｅ Ｅ
ｓ ｔｅｒ ）等の既知の二官能性試薬が使用できる。
素と抗Ｓ−１００抗体との結合法は、酵素、抗Ｓ−１０
０抗体の各々の活性（触媒活性、抗体結合能）が失なわ
れないような方法であればどのような方法でもよい、具
体的にはグルタルアルデヒド、カルボジイミド、Ｎ、、
Ｎ−０−フェニレンジマレイミド、ｍ−マレイミドベン
ゾイル−Ｎ−ハイドロキシサクシニミドエステル （ｍ
−Ｍａ Ｉ ｅ ｉｍｉ ｄｏｂｅｎ１４ｏｙ ｌ−Ｎ
−Ｈｙｄｒｏｘｙｓｕｃｃ ｉｎ １ｍ１ｄｅ Ｅ
ｓ ｔｅｒ ）等の既知の二官能性試薬が使用できる。
固相（不溶性担体）としてはアガロース、デキストラン
、セルロースなどの多糖類、ポリ、スチレン等の合成樹
脂、あるいは、ガラス、ポリアクリルアミド等が用いら
れ、形態としてはビーズ状、繊維状であることが好まし
い。抗Ｓ−１００抗体と同相との結合は物理的吸着を利
用してもよいが、通常蛋白質あるいは酵素等を不溶化す
るのに用いられる方法を利用してもよい。例えば不溶性
多糖を用いる場合があれば不溶性多糖を臭化シアン、過
沃素酸ナトリウム、エピクロルヒドリン、Ｌｌ”−カル
ボニルジイミダゾール、Ｐ−トルエンスルフォニルクロ
リド等で活性化して結合反応を行なわせる。
、セルロースなどの多糖類、ポリ、スチレン等の合成樹
脂、あるいは、ガラス、ポリアクリルアミド等が用いら
れ、形態としてはビーズ状、繊維状であることが好まし
い。抗Ｓ−１００抗体と同相との結合は物理的吸着を利
用してもよいが、通常蛋白質あるいは酵素等を不溶化す
るのに用いられる方法を利用してもよい。例えば不溶性
多糖を用いる場合があれば不溶性多糖を臭化シアン、過
沃素酸ナトリウム、エピクロルヒドリン、Ｌｌ”−カル
ボニルジイミダゾール、Ｐ−トルエンスルフォニルクロ
リド等で活性化して結合反応を行なわせる。
また、固相に適当なスペーサーを導入した後、スペーサ
ーを介して抗Ｓ−１００抗体を結合させてもよい。更に
抗Ｓ−１００抗体と固相の結合を可逆的な結合、例えば
Ｓ−Ｓ結合にした場合には、測定径固相に結合した免疫
反応物を固相より切断、除去しく例えばＳ−５結合の場
合還元剤により切断される）、同相をくり返し使用する
こともできる。カラムを用いる場合には同相に不溶化す
る抗体の量は不溶性担体１ｍｔ当り０．１〜２０ｍｇが
適当であるが、可能ならば更に多量の抗Ｓ−１００抗体
を不溶化することによって測定感度、測定精度を向上さ
せることが可能である。
ーを介して抗Ｓ−１００抗体を結合させてもよい。更に
抗Ｓ−１００抗体と固相の結合を可逆的な結合、例えば
Ｓ−Ｓ結合にした場合には、測定径固相に結合した免疫
反応物を固相より切断、除去しく例えばＳ−５結合の場
合還元剤により切断される）、同相をくり返し使用する
こともできる。カラムを用いる場合には同相に不溶化す
る抗体の量は不溶性担体１ｍｔ当り０．１〜２０ｍｇが
適当であるが、可能ならば更に多量の抗Ｓ−１００抗体
を不溶化することによって測定感度、測定精度を向上さ
せることが可能である。
ここで使用される抗Ｓ−１００抗体タンパクはそのまま
でもよいが、抗原結合部位のみを分離したものでもよい
。
でもよいが、抗原結合部位のみを分離したものでもよい
。
例えば、パパイン、ペプシンなどのプロテアーゼで処理
して得られるＦａｂ’部分、Ｆ（ａｂ’）２部分などを
使用することもできる。Ｆａｂ”部分の調製法について
は、Ｅ。
して得られるＦａｂ’部分、Ｆ（ａｂ’）２部分などを
使用することもできる。Ｆａｂ”部分の調製法について
は、Ｅ。
Ｉｓｈｉｋａｗａらの報告がある〔スカンジナビアン、
ジャーナル、オブ、ザ、イム１０ジー（５ｃａｎｄ、
Ｊ、 Ｉｍｍｕｎｏ！、）８巻４３頁（１９７８年）
〕。
ジャーナル、オブ、ザ、イム１０ジー（５ｃａｎｄ、
Ｊ、 Ｉｍｍｕｎｏ！、）８巻４３頁（１９７８年）
〕。
生体体液成分による干渉作用を抑制あるいは除去するた
めに用いる疎水性蛋白質としてはゼラチンなど、塩類と
しては、食塩などが用いられる。
めに用いる疎水性蛋白質としてはゼラチンなど、塩類と
しては、食塩などが用いられる。
本発明によればこのように、測定しようとする Ｓ −
１００タンパクを生体体液成分による影響も受けず、高
Ｔｆ３度で精度の高い測定が可能となり史に、自動測定
系への応用も容易である。
１００タンパクを生体体液成分による影響も受けず、高
Ｔｆ３度で精度の高い測定が可能となり史に、自動測定
系への応用も容易である。
次に本発明の実施例を示す。
実施例１
（１）抗生Ｓ−１００タンパクの調製
牛Ｓ−１００タンパクを上材らの方法（Ｊｏｕｒｎａｌ
Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １８巻、４２９頁から
４３８頁（１９７１年）により精製し、７５％アクリル
アミドゲル電気３艇 賞動（ＰＨ８，９）で単一バンドを示す標品を得た。
Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １８巻、４２９頁から
４３８頁（１９７１年）により精製し、７５％アクリル
アミドゲル電気３艇 賞動（ＰＨ８，９）で単一バンドを示す標品を得た。
こうして得られた精製Ｓ−１００タンパクとメチル化、
牛血清アルブミンの混合物（１ｍｇ毎／動物）をウサギ
で免疫して抗血清を作製した。
牛血清アルブミンの混合物（１ｍｇ毎／動物）をウサギ
で免疫して抗血清を作製した。
（２）抗血清のＩｇＧ画分、およびＦ （ａｂ”）２フ
ラグメントの調製 ゛ 抗血清５ｍｔより硫安分画を繰り返しく５０，４０．３
３％飽和）約４０ｍｇのＩ ｇ Ｇ 肉分を得た。この
ＩｇＧ画分（４０ｍｇ／２ｍ４ＰＨ４，５）に１．６ｍ
ｇノペプシン（ブタ腸粘膜、シグマ社製）を加え、３７
８Ｃで１６時間反応後、ｌ ＮＮ ａ ＯＨを加えて中
和（ＰＨ−８，０） Ｌ、、セファデックスＧ−１５０
カラム（ＰＨ８，０）にかけてＦ（ａｂ’）２両分を分
離した（２０ｍｇ）。
ラグメントの調製 ゛ 抗血清５ｍｔより硫安分画を繰り返しく５０，４０．３
３％飽和）約４０ｍｇのＩ ｇ Ｇ 肉分を得た。この
ＩｇＧ画分（４０ｍｇ／２ｍ４ＰＨ４，５）に１．６ｍ
ｇノペプシン（ブタ腸粘膜、シグマ社製）を加え、３７
８Ｃで１６時間反応後、ｌ ＮＮ ａ ＯＨを加えて中
和（ＰＨ−８，０） Ｌ、、セファデックスＧ−１５０
カラム（ＰＨ８，０）にかけてＦ（ａｂ’）２両分を分
離した（２０ｍｇ）。
Ｆ（ａｂ’）２両分の一部（１０ｍｇ）をアミコンセン
トリフｏ、ＣＦ−２５で濃縮（約２ｍ１）し、透析（ｏ
、１Ｍ酢酸ソーダ、ＰＨ５，０）して酵素標識のために
使った。残りのＦ（ａｂ’）２は０．１Ｍ！ｊン酸ソー
タ、ＰＨ７，０の含０．１％Ｎ ａ Ｎ ｍに透析して
抗体結合固相調製のために用いた。
トリフｏ、ＣＦ−２５で濃縮（約２ｍ１）し、透析（ｏ
、１Ｍ酢酸ソーダ、ＰＨ５，０）して酵素標識のために
使った。残りのＦ（ａｂ’）２は０．１Ｍ！ｊン酸ソー
タ、ＰＨ７，０の含０．１％Ｎ ａ Ｎ ｍに透析して
抗体結合固相調製のために用いた。
（３）抗体Ｆａｂ’−Ｇａｔ複合体
抗体Ｆ（ａｂ’）２フラグメントを２−メルカプトエチ
ルアミンで還元しＦａｂ”（ＳＨ）フラグメントとして
かう、過剰のＮ−Ｎ’−Ｑ−フェニレンディマレイミド
（Ｎ−Ｎ’−０−Ｐｈｅｎｙｌｅｎｅｄｉｍａｌｅｊｍ
ｉｄｅ （アルドリノヒ社製）溶液中に加えて反応させ
、マレイミド−Ｆａｂ’を得、これをβ−Ｄ−ガラクト
シダーゼ（以下Ｇａｔと略す。ベーリンガー社）とを反
応結合させた。Ｆａｂ’−Ｇａｌ複合体量はＧａｌ活性
で表わし、１ｕｎｉｔ活性＝１μｍｏｌｅ生成物／ｍｉ
ｎである。
ルアミンで還元しＦａｂ”（ＳＨ）フラグメントとして
かう、過剰のＮ−Ｎ’−Ｑ−フェニレンディマレイミド
（Ｎ−Ｎ’−０−Ｐｈｅｎｙｌｅｎｅｄｉｍａｌｅｊｍ
ｉｄｅ （アルドリノヒ社製）溶液中に加えて反応させ
、マレイミド−Ｆａｂ’を得、これをβ−Ｄ−ガラクト
シダーゼ（以下Ｇａｔと略す。ベーリンガー社）とを反
応結合させた。Ｆａｂ’−Ｇａｌ複合体量はＧａｌ活性
で表わし、１ｕｎｉｔ活性＝１μｍｏｌｅ生成物／ｍｉ
ｎである。
こうしてｔｏｍｇのＦ（ａｂ’）２両分から調製された
素標識抗体は約１５０００検体分の測定に使用できる。
素標識抗体は約１５０００検体分の測定に使用できる。
（４）抗体結合同相の調製
シリコンゴム片（φ３ｍｍのひも、サンコープラスチ２
り社製を長さ４ｒ１ｍに切った円柱）に抗体Ｆ（ａｂ’
Ｌフラグメントを物理的吸着させた。すなわち適当に稀
釈した上記Ｆ（ａｂ’）２溶液（ＰＨ７，０、Ａ ２８
０ ：０．５ ）中に、シリコンゴム片を浸し、４°Ｃ
で一夜放置し、抗体溶液を回収した後、固相を上記リン
酸緩衝液、次いでＡ液（０，０１Ｍリン酸ソーダ、ＰＨ
７，０、含Ｑ、ＩＭＮａＣｚ、 １ｍＭ＠ ＭｇＣｌ２
．０・１％牛血清アルブミン（ＢＳ、Ａ入、０．１％Ｎ
ａＮＢ） でよく洗って、へ液中４°Ｃで２日間以し
保存後測定に用いた。
り社製を長さ４ｒ１ｍに切った円柱）に抗体Ｆ（ａｂ’
Ｌフラグメントを物理的吸着させた。すなわち適当に稀
釈した上記Ｆ（ａｂ’）２溶液（ＰＨ７，０、Ａ ２８
０ ：０．５ ）中に、シリコンゴム片を浸し、４°Ｃ
で一夜放置し、抗体溶液を回収した後、固相を上記リン
酸緩衝液、次いでＡ液（０，０１Ｍリン酸ソーダ、ＰＨ
７，０、含Ｑ、ＩＭＮａＣｚ、 １ｍＭ＠ ＭｇＣｌ２
．０・１％牛血清アルブミン（ＢＳ、Ａ入、０．１％Ｎ
ａＮＢ） でよく洗って、へ液中４°Ｃで２日間以し
保存後測定に用いた。
抗体Ｆ（ａｂ’）２溶液は反復使用が可能で、抗体結合
固相は少なくとも一ヶ月は安定であった。
固相は少なくとも一ヶ月は安定であった。
（５）測定操作
標準Ｓ−１００タンパクを含むＧ液（０，０１Ｍリン酸
ソーダ、ＰＨ７，Ｑ含０−３ＭＮａＣ１１１ｍＰＪ０−
３ＭＮａＣ１１１，０，１％ＢＳＡ、９．５％ゼラチン
、０．１％Ｎ ａ Ｎ ｓ ）９．５ｍｔに抗体結合固
相を一個ずつ入れ、３０°Ｃで振−盪した。５時間後に
反応液を吸引除去して、試験管内で固相を洗った（Ａ液
１ ｍｔ Ｘ ２回）。Ａ液＋１ｍＭＣａ の溶液で
稀釈した酵素標識抗体（３ｍ ｕｎｉｔａ／Ｑ４ｍｌ）
中に固相を移し、４°Ｃで一夜静置した。
ソーダ、ＰＨ７，Ｑ含０−３ＭＮａＣ１１１ｍＰＪ０−
３ＭＮａＣ１１１，０，１％ＢＳＡ、９．５％ゼラチン
、０．１％Ｎ ａ Ｎ ｓ ）９．５ｍｔに抗体結合固
相を一個ずつ入れ、３０°Ｃで振−盪した。５時間後に
反応液を吸引除去して、試験管内で固相を洗った（Ａ液
１ ｍｔ Ｘ ２回）。Ａ液＋１ｍＭＣａ の溶液で
稀釈した酵素標識抗体（３ｍ ｕｎｉｔａ／Ｑ４ｍｌ）
中に固相を移し、４°Ｃで一夜静置した。
翌日反応液を吸引除去し、Ａ液で固相を洗ってから、固
相上に結合したＧａｌ活性を測った。Ｇａｌ活性は、４
−メチルウンベリフェリーβ−Ｄ−ガラクトサイド（、
４−ｍｅｔｈｙｌｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｙｌ−β−Ｄ−
ｇａｌａ−ｃｔｏｉ＋ｉｄｅ ）を基質とし、生成した
４−メチルウムベリフ１０ン（４−ｍｅｔｈｙｌｕｍｂ
ｅｌｌｉｆｅｒｏｎｅ ）を蛍光光度計で測定したとこ
ろ第１図に示す検量線を得た。
相上に結合したＧａｌ活性を測った。Ｇａｌ活性は、４
−メチルウンベリフェリーβ−Ｄ−ガラクトサイド（、
４−ｍｅｔｈｙｌｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｙｌ−β−Ｄ−
ｇａｌａ−ｃｔｏｉ＋ｉｄｅ ）を基質とし、生成した
４−メチルウムベリフ１０ン（４−ｍｅｔｈｙｌｕｍｂ
ｅｌｌｉｆｅｒｏｎｅ ）を蛍光光度計で測定したとこ
ろ第１図に示す検量線を得た。
実施例２
神経系疾患等で入院加療中の患者の脳を髄液を検体とし
て用い実施例１と同様に測定した。この測定系に１１ｉ
’６介髄液検体の種々の容量を加えてみると、同相に結
合するＧａｌ活性は加えた容量に比例して増加し、少く
とも１００μを添加までは検量線と平行な曲線が各検体
ごとに得られた。すなわち１００．ｕｔ以下の脳を髄液
検体を用いれば測定系は干渉されることなく、正確に脳
を髄液中のＳ−１００タンパク量が測定できることがわ
かった。測定系の正確度を知るために、脳を髄液５０ｐ
ｌ−を使った時のＣＶ（変動係数）は１０％以下であっ
た。すなわち脳を髄液中のＳ−１００タンパクが６０ｐ
ｇ／ｍｔの微量まで測定できることがわかった。
て用い実施例１と同様に測定した。この測定系に１１ｉ
’６介髄液検体の種々の容量を加えてみると、同相に結
合するＧａｌ活性は加えた容量に比例して増加し、少く
とも１００μを添加までは検量線と平行な曲線が各検体
ごとに得られた。すなわち１００．ｕｔ以下の脳を髄液
検体を用いれば測定系は干渉されることなく、正確に脳
を髄液中のＳ−１００タンパク量が測定できることがわ
かった。測定系の正確度を知るために、脳を髄液５０ｐ
ｌ−を使った時のＣＶ（変動係数）は１０％以下であっ
た。すなわち脳を髄液中のＳ−１００タンパクが６０ｐ
ｇ／ｍｔの微量まで測定できることがわかった。
実施例３
実施例１に準じて調製した（抗生Ｓ−１００タンパク）
ＩｇＧ１０ｍｇを１０ｍｔのＣＮＢｔ活性化セファロー
スと反応させ、（抗生Ｓ−１００タンパク）ＩｇＧ不溶
と 化セファ０−スを調製し、これを０．１ｍｔ容の小カラ
ムに充填した。
ＩｇＧ１０ｍｇを１０ｍｔのＣＮＢｔ活性化セファロー
スと反応させ、（抗生Ｓ−１００タンパク）ＩｇＧ不溶
と 化セファ０−スを調製し、これを０．１ｍｔ容の小カラ
ムに充填した。
Ｓ−１００タンパクをＧ液に溶解し標準液（０〜１０ｎ
ｇ／ｍｔ）を調製し、この標準液５０ｐｌにＧ液１ｍｔ
を加えて、上記のカラムに流した後、カラムを２ｍｔの
Ｇ液で洗浄した。
ｇ／ｍｔ）を調製し、この標準液５０ｐｌにＧ液１ｍｔ
を加えて、上記のカラムに流した後、カラムを２ｍｔの
Ｇ液で洗浄した。
次に実施例１で使用した抗体Ｆａｂ’−β−Ｇａｔ１ｍ
ｌ （５ｍ ｕｎｉｔｓ／ｍｚ）をカラムに流し、更に
Ｇ液２ｍｌでカラムを洗浄した。
ｌ （５ｍ ｕｎｉｔｓ／ｍｚ）をカラムに流し、更に
Ｇ液２ｍｌでカラムを洗浄した。
次にカラムにＯ−ニトロフェニル−β−Ｄ−ガラクトシ
ド溶液（１０ｍｇ／ｍｌ ） Ｏ−２ｍｌを流し、室温
で１時間置いた後、０．０８ＭＮａ２ＣＯ３，２ｍｌで
カラムを洗浄し、洗浄後のＡ４２０ ｎｍを測定した。
ド溶液（１０ｍｇ／ｍｌ ） Ｏ−２ｍｌを流し、室温
で１時間置いた後、０．０８ＭＮａ２ＣＯ３，２ｍｌで
カラムを洗浄し、洗浄後のＡ４２０ ｎｍを測定した。
一方、脳を髄液および脳を髄液に（Ｌ５ｎｇ／ｍｔ１１
ｎｇ／ｍｔのＳ−１００タンパクを加えて上と同様に測
定し、添加したＳ−１００タンパクの回収率を調べたと
ころ、第−表の結果となった。即ちいずれの試料にても
添加量に比例してＳ−１００タンパクが回収されている
ことがわかる。
ｎｇ／ｍｔのＳ−１００タンパクを加えて上と同様に測
定し、添加したＳ−１００タンパクの回収率を調べたと
ころ、第−表の結果となった。即ちいずれの試料にても
添加量に比例してＳ−１００タンパクが回収されている
ことがわかる。
第１表
測定値
Ｓ−１００タンパク添加量
試料番号 Ｏｎｇ／ｍｔ０．５ｎｇ／ｍｔ１．’Ｏｎｇ
／ｍｔ１ ０．２１ ０．６９ １．３
０２０・４０ ０．８５ １．３３３
０．３７ ０．９０ １．４、
／ｍｔ１ ０．２１ ０．６９ １．３
０２０・４０ ０．８５ １．３３３
０．３７ ０．９０ １．４、
ｉ１図は本発明の方法によって測定した場合の牛Ｓ−１
００タンパクの標準曲線を示すものである。 第１図 Ｓ−１００プロティンＣＰｆ／検体） 手続補正書（方式） 昭和５８年４月６日 特許庁長官 若 杉 和 夫 殿 １、事件の表示 昭和５６年特許願第１８１９３３号３
、補正をする者 ５、補正の対象 「明細書の発明の名称の欄」 ６、補正の内容 発明の名称を次のごとく訂正します。
００タンパクの標準曲線を示すものである。 第１図 Ｓ−１００プロティンＣＰｆ／検体） 手続補正書（方式） 昭和５８年４月６日 特許庁長官 若 杉 和 夫 殿 １、事件の表示 昭和５６年特許願第１８１９３３号３
、補正をする者 ５、補正の対象 「明細書の発明の名称の欄」 ６、補正の内容 発明の名称を次のごとく訂正します。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 ｌ 抗Ｓ−１００抗体結合固相に検体中のＳ−１００タ
ンパクを反応せしめて得られる反応物に酵素標識抗Ｓ−
１００抗体を作用せしめるか又は検体中のＳ−１００タ
ンパクと酵素標識抗Ｓ−１００抗体を反応せしめて得ら
れる反応物を抗Ｓ−１００抗体結合同相に作用せしめる
ことによって抗Ｓ−１００抗体を介してＳ−１００タン
パク及び酵素標識抗Ｓ −１００抗体を固相に固定化せ
しめた後、同相に結合した該標識酵素活性を測定するこ
とにより検体中のＳ−１００タンパク量を求めることを
特徴とするＳ−１００タンパクの高感度測定法。 ２ 抗Ｓ−１００抗体結合固相が微粒状または繊維状で
あり、カラムに充填されて使用され、免疫反応終了後、
カラム内にて酵素活性を測定することを特徴とする特許
請求の範囲第１項記載のＳ−１００タンパクの高感度測
定法。 ３ 抗Ｓ−１００抗体をプロテアーゼ処理して得られる
Ｆ（ａｂ’）ｚフラグメントまたはＦａｂ’フラグメン
トを使用することを特徴とする特許請求の範囲第１項お
よび第２項記載のＳ−１００タンパクの高感度測定法。 ４ 反応時に高濃度の塩類と疎水性蛋白質を添加するこ
とにより検体中の干渉物質の影響を除去することを特徴
とする特許請求の範囲第１項から第３項記載の高感度測
定法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18193381A JPS58144747A (ja) | 1981-11-12 | 1981-11-12 | Ｓ―１００タンパクの高感度測定法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18193381A JPS58144747A (ja) | 1981-11-12 | 1981-11-12 | Ｓ―１００タンパクの高感度測定法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58144747A true JPS58144747A (ja) | 1983-08-29 |
| JPH0131590B2 JPH0131590B2 (ja) | 1989-06-27 |
Family
ID=16109427
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP18193381A Granted JPS58144747A (ja) | 1981-11-12 | 1981-11-12 | Ｓ―１００タンパクの高感度測定法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS58144747A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63131065A (ja) * | 1986-11-20 | 1988-06-03 | Yatoron:Kk | 抗体の精製法とアイソザイムの測定法及び試薬 |
| JPH0232261A (ja) * | 1988-06-10 | 1990-02-02 | Abbott Lab | Ｈｉｖｉ抗原の検出のためのイムノアッセイ法 |
| CN103604931A (zh) * | 2013-11-15 | 2014-02-26 | 陆上苏 | 一种人s100蛋白检测试剂及制备方法 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5347518A (en) * | 1976-10-07 | 1978-04-28 | Mochida Pharm Co Ltd | Immunologically measuring method |
-
1981
- 1981-11-12 JP JP18193381A patent/JPS58144747A/ja active Granted
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5347518A (en) * | 1976-10-07 | 1978-04-28 | Mochida Pharm Co Ltd | Immunologically measuring method |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63131065A (ja) * | 1986-11-20 | 1988-06-03 | Yatoron:Kk | 抗体の精製法とアイソザイムの測定法及び試薬 |
| JPH0232261A (ja) * | 1988-06-10 | 1990-02-02 | Abbott Lab | Ｈｉｖｉ抗原の検出のためのイムノアッセイ法 |
| CN103604931A (zh) * | 2013-11-15 | 2014-02-26 | 陆上苏 | 一种人s100蛋白检测试剂及制备方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0131590B2 (ja) | 1989-06-27 |
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