JPS58201067A - ラクトフエリンの定量法 - Google Patents
ラクトフエリンの定量法Info
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- JPS58201067A JPS58201067A JP8553682A JP8553682A JPS58201067A JP S58201067 A JPS58201067 A JP S58201067A JP 8553682 A JP8553682 A JP 8553682A JP 8553682 A JP8553682 A JP 8553682A JP S58201067 A JPS58201067 A JP S58201067A
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- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/94—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving narcotics or drugs or pharmaceuticals, neurotransmitters or associated receptors
- G01N33/9486—Analgesics, e.g. opiates, aspirine
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はラクトフェリンの定量法に関するものであり、
更に詳しくは、検体のラクトフェリンを酵素標識ラクト
フェリン抗体およびラクトフェリン抗体不溶化担体と反
応せしめることにより酵素標識ラクトフェリン抗体−ラ
クトフェリン−ラクトフェリン抗体不溶化担体複合体を
形成せしめ、該担体に結合した酵素標識ラクトフェリン
抗体里を酵素活性を測定することによって定量し、これ
によりラクトフェリンを定量することを特徴とするラク
トフェリンの定量法に関する。
更に詳しくは、検体のラクトフェリンを酵素標識ラクト
フェリン抗体およびラクトフェリン抗体不溶化担体と反
応せしめることにより酵素標識ラクトフェリン抗体−ラ
クトフェリン−ラクトフェリン抗体不溶化担体複合体を
形成せしめ、該担体に結合した酵素標識ラクトフェリン
抗体里を酵素活性を測定することによって定量し、これ
によりラクトフェリンを定量することを特徴とするラク
トフェリンの定量法に関する。
ラクトフェリン（以下ＬＦと略す）は母乳等の外分泌液
において見出される鉄結合性の蛋白質であり（、生理活
性としては抗菌活性が知られている。
において見出される鉄結合性の蛋白質であり（、生理活
性としては抗菌活性が知られている。
ＬＦの詳細な性質ニツイてはＰ 、 Ｑｕｅｒｉｎ、ｊ
ｅａｎら（Ｅｕｒ、Ｊ、Ｂｉｏｃｌｉｅｍ、２０巻、４
２０−４２５頁、１９７１年）の他、多くの研究者によ
って研究されている。
ｅａｎら（Ｅｕｒ、Ｊ、Ｂｉｏｃｌｉｅｍ、２０巻、４
２０−４２５頁、１９７１年）の他、多くの研究者によ
って研究されている。
まｔコ、血液、膵液等におけるＬ Ｆ濃度は種々の疾患
に伴ない変動することが示唆されている。
に伴ない変動することが示唆されている。
イムノアッセイ法が知られているが、ラジオイムノアッ
セイ法においては標識化合物としてラジオアイソトープ
を用いるので、特殊な技術者と設備を必要とし、測定廃
棄物の処理にも厳重な注意を要する。また、ラジオアイ
ソトープは不安定であるため、ＬＦあるいはＬＦ抗体を
標識としたものを長期間保存し使用することはできない
。従って、Ｌ Ｆを臨床検査の分野に応用し、疾患の診
断、治療に役立てるには特殊な設備を必要とせず簡単に
ＬＦを定量できる方法の開発が望まれていた。
セイ法においては標識化合物としてラジオアイソトープ
を用いるので、特殊な技術者と設備を必要とし、測定廃
棄物の処理にも厳重な注意を要する。また、ラジオアイ
ソトープは不安定であるため、ＬＦあるいはＬＦ抗体を
標識としたものを長期間保存し使用することはできない
。従って、Ｌ Ｆを臨床検査の分野に応用し、疾患の診
断、治療に役立てるには特殊な設備を必要とせず簡単に
ＬＦを定量できる方法の開発が望まれていた。
本発明者らは、上のような現状を考慮し、鋭意検討した
結果、酵素を標識化合物として用い、しかも酵素標識Ｌ
Ｆ抗体とＬＦ抗体不溶化担体でＬＦをはさみ込むことに
よってＬＦを定量するサンドイッチ酵素免疫測定法（Ｓ
ａｎｄｗｉｃｈ ＥｎｚｙｍｅＩｍｍｕｎｏａｓｓａｙ
）がＬＦの定量に極めて有用であることを見出した。
結果、酵素を標識化合物として用い、しかも酵素標識Ｌ
Ｆ抗体とＬＦ抗体不溶化担体でＬＦをはさみ込むことに
よってＬＦを定量するサンドイッチ酵素免疫測定法（Ｓ
ａｎｄｗｉｃｈ ＥｎｚｙｍｅＩｍｍｕｎｏａｓｓａｙ
）がＬＦの定量に極めて有用であることを見出した。
即ち、本発明は、酵素標識Ｔ、 Ｆ抗体とＬＦ抗体不溶
化担体を用い、これらと検体ＬＦとの間で免疫化学的反
応を行なわせ、生成した酵素標識Ｌ Ｆ抗体−ＬＦ−Ｌ
Ｆ抗体不溶化担体複合体の量を酵素活性を測定すること
により定量し、これによってＬＦを定量するものである
。この方法においては、標識化合物として酵素を用いる
ため特殊な施設あるいは技術者を必要とせず、また測定
廃棄物の処理においても何ら問題はない。更に、用いる
酵素の種類と保存条件を選ぶことにより、酵素標識抗体
を１年以上保存し測定に使用することができる。また本
発明法による測定感度は０．０１〜０．１ｎｙであり、
ラジオイムノアッセイ法によるＬＦの測定感度（Ｒ，ｏ
ｂｅｒｔ Ｍ、 Ｂｅｎｎｅｔｔら、Ｊ、Ｌａｂ。
化担体を用い、これらと検体ＬＦとの間で免疫化学的反
応を行なわせ、生成した酵素標識Ｌ Ｆ抗体−ＬＦ−Ｌ
Ｆ抗体不溶化担体複合体の量を酵素活性を測定すること
により定量し、これによってＬＦを定量するものである
。この方法においては、標識化合物として酵素を用いる
ため特殊な施設あるいは技術者を必要とせず、また測定
廃棄物の処理においても何ら問題はない。更に、用いる
酵素の種類と保存条件を選ぶことにより、酵素標識抗体
を１年以上保存し測定に使用することができる。また本
発明法による測定感度は０．０１〜０．１ｎｙであり、
ラジオイムノアッセイ法によるＬＦの測定感度（Ｒ，ｏ
ｂｅｒｔ Ｍ、 Ｂｅｎｎｅｔｔら、Ｊ、Ｌａｂ。
（Ｊ’ｉｎ、Ｍｅｄ、 ８８巻、１５６〜１６６頁、
１９７６年）と同等もしくはそれ以上である。
１９７６年）と同等もしくはそれ以上である。
本発明においては、ＬＦ抗体として抗Ｌ Ｆ血清まり塩
析、イオン交換クロマトグラフィ等の方法で精製した（
抗ＬＦ）イムノグロブリンＧ（（抗ＬＦ）ＩＦＩＧ）が
用いられるが、（抗ＬＦ）ＩｇＧをペプシン、パパイン
等のプロデアーセで処理して得られるＦ（ａｂ’）ｚ部
分、Ｂ’ａｂ’部分等を用いてもよい。
析、イオン交換クロマトグラフィ等の方法で精製した（
抗ＬＦ）イムノグロブリンＧ（（抗ＬＦ）ＩＦＩＧ）が
用いられるが、（抗ＬＦ）ＩｇＧをペプシン、パパイン
等のプロデアーセで処理して得られるＦ（ａｂ’）ｚ部
分、Ｂ’ａｂ’部分等を用いてもよい。
標識用の酵素としては、′β−Ｄ−ガラクトシダーセ、
パーオキシダーゼ、リンゴ酸脱水素酵素、アセチルコリ
ンエステラーセ、グルコースオキシダーゼ等の通常用い
られる酵素が使用できる。特に、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉ
ａ Ｃｏ、５ｉ（Ｄβ−Ｄ−ガラクトシダーゼは検出感
度が高く、しかもアルブミン等の蛋白質存在下で１年以
上安定であるので標識用酵素として優れている。
パーオキシダーゼ、リンゴ酸脱水素酵素、アセチルコリ
ンエステラーセ、グルコースオキシダーゼ等の通常用い
られる酵素が使用できる。特に、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉ
ａ Ｃｏ、５ｉ（Ｄβ−Ｄ−ガラクトシダーゼは検出感
度が高く、しかもアルブミン等の蛋白質存在下で１年以
上安定であるので標識用酵素として優れている。
酵素標識抗体の調製、即ち酵素と抗体との結合方法とし
ては、酵素の活性と抗体の抗原結合力が失われないよう
な方法であればいずれの方法を用いてもよい。具体的に
は、グルタルアルデヒド、カルボジイミド、〜ＪＪ、Ｎ
’−〇−フェニレンジマレイミド等の試薬が用いられる
。
ては、酵素の活性と抗体の抗原結合力が失われないよう
な方法であればいずれの方法を用いてもよい。具体的に
は、グルタルアルデヒド、カルボジイミド、〜ＪＪ、Ｎ
’−〇−フェニレンジマレイミド等の試薬が用いられる
。
抗体を不溶化する担体としては、ポリスチレン、シリコ
ン樹脂、ガラス等のビーズあるいはチューブ、更に各種
多糖ζパル、セルロース繊維、ポリアクリルアミドゲル
等が用いられる。担体をカラムに充填して用いる場合に
は、特に微粒状あるいは繊維状であることが好ましい。
ン樹脂、ガラス等のビーズあるいはチューブ、更に各種
多糖ζパル、セルロース繊維、ポリアクリルアミドゲル
等が用いられる。担体をカラムに充填して用いる場合に
は、特に微粒状あるいは繊維状であることが好ましい。
担体と抗体との結合は、物理的吸着もしくは共有結合を
利用して行なわれる。物理的吸着を利用する場合には、
例えば、ポリスチレンビーズを一定時間抗体の溶液に浸
漬した後、ポリスチレンビーズを洗浄するだけでよい。
利用して行なわれる。物理的吸着を利用する場合には、
例えば、ポリスチレンビーズを一定時間抗体の溶液に浸
漬した後、ポリスチレンビーズを洗浄するだけでよい。
この方法は特別な試薬も不要であり優れた方法であるが
、更に条里の抗体を担体に結合させたい場合には共有結
合を用いるのが有利である。例えば、多糖ゲルを用いる
場合には、多糖ゲルをハロゲン化シアン、エピクロルヒ
ドリン、１．１’−カルボニルジイミダゾール等で活性
化した後、抗体と接触させることにより抗体不溶化多糖
ゲルが得られる。ま１こ、抗体と担体との間に適当なス
ペーサーを導入してもよい。
、更に条里の抗体を担体に結合させたい場合には共有結
合を用いるのが有利である。例えば、多糖ゲルを用いる
場合には、多糖ゲルをハロゲン化シアン、エピクロルヒ
ドリン、１．１’−カルボニルジイミダゾール等で活性
化した後、抗体と接触させることにより抗体不溶化多糖
ゲルが得られる。ま１こ、抗体と担体との間に適当なス
ペーサーを導入してもよい。
更に、抗体と担体との結合を開裂可能な結合、例えばＳ
−８結合にすることにより、測定終了後、担体を再生し
てくり返し担体を用いることもできる。
−８結合にすることにより、測定終了後、担体を再生し
てくり返し担体を用いることもできる。
担体をカラムに充填して用いる場合、カラムの大きさと
しては経済性、操作性を考えると０１〜１、０ ｍｌの
ものが好ましいが、特に限定する必要はない。
しては経済性、操作性を考えると０１〜１、０ ｍｌの
ものが好ましいが、特に限定する必要はない。
本測定法に供されるＬ Ｆ含有液としては精製あるいは
部分精製したＬＦの溶液の他、母乳、血液、膵液、多種
生体組織の抽出液等がある。この際、検体が生体体液で
ある場合には、生体体液成分によって測定が妨害される
ことがある。このような場合には、抗体としてＦ （ａ
ｂ’ ）２部分あるいはＦ ａ ｂ’部分を用いるこ
とによって妨害作用を抑制することができるが、更に反
応液に疎水性蛋白質と塩類を共存させることによってよ
り完全に妨害作用を抑制または除去することができる。
部分精製したＬＦの溶液の他、母乳、血液、膵液、多種
生体組織の抽出液等がある。この際、検体が生体体液で
ある場合には、生体体液成分によって測定が妨害される
ことがある。このような場合には、抗体としてＦ （ａ
ｂ’ ）２部分あるいはＦ ａ ｂ’部分を用いるこ
とによって妨害作用を抑制することができるが、更に反
応液に疎水性蛋白質と塩類を共存させることによってよ
り完全に妨害作用を抑制または除去することができる。
疎水性蛋白質としてはゼラチン等の蛋白質、またはこれ
らの加水分解物、塩類としては食塩等が用いられる。
らの加水分解物、塩類としては食塩等が用いられる。
以上の如く、本発明法によれば、ＬＦを簡単な操作で感
度良く定量することができるが、次に実施例によってそ
のことを説明する。
度良く定量することができるが、次に実施例によってそ
のことを説明する。
実施例１． シリコン樹脂を用いるＬＦの定量（ＩＩＬ
Ｆ抗体の調製 市販の（抗ＬＦ）血清（ウサギ）より加藤らの方法（Ｊ
、Ｂｉｏｃｈｅｍ、 ８１巻、１５５７頁、１９７７年
）に従い、硫安分画、ＤＥＡＥ−セルロースクロマトグ
ラフィにより（抗Ｌ Ｆ ） ＩｙＧ（ＬＦ抗体）を調
製しｔこ。
Ｆ抗体の調製 市販の（抗ＬＦ）血清（ウサギ）より加藤らの方法（Ｊ
、Ｂｉｏｃｈｅｍ、 ８１巻、１５５７頁、１９７７年
）に従い、硫安分画、ＤＥＡＥ−セルロースクロマトグ
ラフィにより（抗Ｌ Ｆ ） ＩｙＧ（ＬＦ抗体）を調
製しｔこ。
ｆ２）Ｆａｂ’−β−ガラクトシダーゼの調製（１）で
得られた（抗ＬＦ ）ＩｇＧを加藤らの方法（Ｊ、 Ｉ
ｍｍ、％ｎｏｊＪ、 １１６巻、１５５４頁、１９７
６年）に従いペプシンで限定分解後、セフ了テックスＧ
−１５０（ファルマシア・ファインクミカル社製）のカ
ラムでＦ（ａｂ’）２ 部分を分離した。
得られた（抗ＬＦ ）ＩｇＧを加藤らの方法（Ｊ、 Ｉ
ｍｍ、％ｎｏｊＪ、 １１６巻、１５５４頁、１９７
６年）に従いペプシンで限定分解後、セフ了テックスＧ
−１５０（ファルマシア・ファインクミカル社製）のカ
ラムでＦ（ａｂ’）２ 部分を分離した。
このＦ （ａｌ〕’ ）２部分を２−メルカプトエチル
アミンで還元し、ＳＥＩ基を持つＦａｂ’部分とした後
、天然にＳＨ基を持つ大腸菌のβ−Ｄ−ガラクトシダー
ゼ（ベーリンガー社製）とＮ、、Ｎ’ −０−フェニレ
ンジマレイミドを用いて結合させた（加藤らの方法：化
学と生物、１４巻、７８７頁）。
アミンで還元し、ＳＥＩ基を持つＦａｂ’部分とした後
、天然にＳＨ基を持つ大腸菌のβ−Ｄ−ガラクトシダー
ゼ（ベーリンガー社製）とＮ、、Ｎ’ −０−フェニレ
ンジマレイミドを用いて結合させた（加藤らの方法：化
学と生物、１４巻、７８７頁）。
（３）抗体不溶化シリコンの調製
シリコン樹脂の棒（径８朋、サンコープラスチック社Ｉ
ｆりを４絹の長さに切り、アセトンと中性洗剤にて洗浄
後、（２）と同じ方法で調製したＦ（ａｂ’）２部分の
溶液（Ａ ２８０ ｎｍ＝０．５〜０．７、ｐＨ７）に
−晩ひたした後、０．１ Ｍ ＩＪン酸緩衝液（ｐＨ７
）で洗浄後、緩衝液Ａ（０，１％牛血清アルブミン、０
．１ Ｍ Ｎａ０４ｇ 、 １ ｍ ＭＭｆ Ｃ１２
，０，１％ＮａＮ５を含むｐＨ７のＩＱｍＭＩＪン酸緩
衝液）につけて４°Ｃで８日装置いた後、測定に使用し
た。
ｆりを４絹の長さに切り、アセトンと中性洗剤にて洗浄
後、（２）と同じ方法で調製したＦ（ａｂ’）２部分の
溶液（Ａ ２８０ ｎｍ＝０．５〜０．７、ｐＨ７）に
−晩ひたした後、０．１ Ｍ ＩＪン酸緩衝液（ｐＨ７
）で洗浄後、緩衝液Ａ（０，１％牛血清アルブミン、０
．１ Ｍ Ｎａ０４ｇ 、 １ ｍ ＭＭｆ Ｃ１２
，０，１％ＮａＮ５を含むｐＨ７のＩＱｍＭＩＪン酸緩
衝液）につけて４°Ｃで８日装置いた後、測定に使用し
た。
（４）測定
ＬＦ（ヘキスト社製）を緩衝液Ｇ（緩衝液Ａに０５％の
ゼラチンを添加し１食塩濃度を０．８Ｍとしたもの）に
て溶解、希釈しＬＦ標準液（０゜０．１，０．８，１．
：Ｉｔ、１０，８０，１００，８００゜１０００．８０
００，１００００ｎｙ／ｌ）を調製した。
ゼラチンを添加し１食塩濃度を０．８Ｍとしたもの）に
て溶解、希釈しＬＦ標準液（０゜０．１，０．８，１．
：Ｉｔ、１０，８０，１００，８００゜１０００．８０
００，１００００ｎｙ／ｌ）を調製した。
Ｌ Ｆ標準液ｏ、 １ｍｌと緩衝液Ｇ Ｏ，２ｔｔｔｌ
を混合し、抗体不溶化シリコン１個を加え、３０°Ｃで
３時間振盪した。次に抗体不溶化シリコンを冷した緩衝
液Ａにて洗浄後、Ｆａ、ｂ’ −β−ガラクトシダーゼ
溶液０．２ ｍｌ中に入れ、４°Ｃで一装置いた。抗体
不溶化シリコンは上と同じく緩衝液Ａで洗浄後、ａ ｍ
液０．１ ｍｌの中に入れ、４−メチルウンベリフェ
リル−β−Ｄ−ガラクトシド溶液５０μｌを加え、３０
°Ｃで１０分間反応後、０．１Ｍグリシン−Ｎａ ＯＨ
緩衝液（ｐＨ１０，８）２．５ ｍｌを加え酵素反応を
停止した。この液について２Ｘ１０ Ｍ、４−メチ
ルウンベリフェロン溶液を標準として蛍光（励起波長８
６０ ｎｍ、測定波長４５００ｍ）を測定したところ第
１図に示す検量線を得た。
を混合し、抗体不溶化シリコン１個を加え、３０°Ｃで
３時間振盪した。次に抗体不溶化シリコンを冷した緩衝
液Ａにて洗浄後、Ｆａ、ｂ’ −β−ガラクトシダーゼ
溶液０．２ ｍｌ中に入れ、４°Ｃで一装置いた。抗体
不溶化シリコンは上と同じく緩衝液Ａで洗浄後、ａ ｍ
液０．１ ｍｌの中に入れ、４−メチルウンベリフェ
リル−β−Ｄ−ガラクトシド溶液５０μｌを加え、３０
°Ｃで１０分間反応後、０．１Ｍグリシン−Ｎａ ＯＨ
緩衝液（ｐＨ１０，８）２．５ ｍｌを加え酵素反応を
停止した。この液について２Ｘ１０ Ｍ、４−メチ
ルウンベリフェロン溶液を標準として蛍光（励起波長８
６０ ｎｍ、測定波長４５００ｍ）を測定したところ第
１図に示す検量線を得た。
実施例２、 シリコン樹脂を用いるＬ Ｆの定量（変法
） 実施例１と同じＬＦ標準液０．１ ｍｌとＦａｂ’−β
−ガラクトシダーゼ溶液０．２ ｔｅｌを混合し、３０
°Ｃで１時間反応させた後、反応液に抗体不溶化シリコ
ン１個を入れ４°Ｃで１晩置いた。この抗体不溶化シリ
コンを洗浄後、実施例１と同様に酵素活性を測定したと
ころ第１図とほぼ同じ検量線が得られｔこ。
） 実施例１と同じＬＦ標準液０．１ ｍｌとＦａｂ’−β
−ガラクトシダーゼ溶液０．２ ｔｅｌを混合し、３０
°Ｃで１時間反応させた後、反応液に抗体不溶化シリコ
ン１個を入れ４°Ｃで１晩置いた。この抗体不溶化シリ
コンを洗浄後、実施例１と同様に酵素活性を測定したと
ころ第１図とほぼ同じ検量線が得られｔこ。
実施例８． カラムを用いるＬＦの定量実施例１で調製
した（抗ＬＦ）ＩｐＧ ２０〜をＯＩＭホウ酸緩衝液（
ｐＨ８）に溶解し、ＣＮＢｒＮＢｒ活性化セフフロース
ルマシア・）了インケミカル社Ｗ ） １０ ｔｅｌを
加えて４°Ｃで１晩攪拌した。得られた抗体不溶化セフ
ァロースは洗浄後、０．１ ｍｌ容のポリスチレン製カ
ラムに充填し、４１ｉ［ＮＧにて平衡化した。
した（抗ＬＦ）ＩｐＧ ２０〜をＯＩＭホウ酸緩衝液（
ｐＨ８）に溶解し、ＣＮＢｒＮＢｒ活性化セフフロース
ルマシア・）了インケミカル社Ｗ ） １０ ｔｅｌを
加えて４°Ｃで１晩攪拌した。得られた抗体不溶化セフ
ァロースは洗浄後、０．１ ｍｌ容のポリスチレン製カ
ラムに充填し、４１ｉ［ＮＧにて平衡化した。
実施例１と同じＬ Ｆ標準液とヒト血清（緩衝液Ｇにて
５０倍に希釈したもの）５検体の各々０．１ｍｌにＦａ
ｂ’−ρ−ガラクトシダーゼ溶液０．５πｌを混合して
３７°Ｃで１時間反応させた後、反応液を上述ツカラム
に流した。カラムを洗浄後、０−二トロフェニルーβ−
Ｄ−ガラクトシドＨ液（３／ｎ’ｊ／ｍｌ緩衝液Ｇ）
０．１ ｍｌをカラムに流し、カラムを３７’Ｃで５時
装置イタ。次に、カラムを０．０８ＭＮｌ７２００３溶
液２ｍｌで洗浄し、酵素反応生成物（０−二トロフェノ
ール）を溶出し、溶出液のＡ４２０ｎｍを測定した。
５０倍に希釈したもの）５検体の各々０．１ｍｌにＦａ
ｂ’−ρ−ガラクトシダーゼ溶液０．５πｌを混合して
３７°Ｃで１時間反応させた後、反応液を上述ツカラム
に流した。カラムを洗浄後、０−二トロフェニルーβ−
Ｄ−ガラクトシドＨ液（３／ｎ’ｊ／ｍｌ緩衝液Ｇ）
０．１ ｍｌをカラムに流し、カラムを３７’Ｃで５時
装置イタ。次に、カラムを０．０８ＭＮｌ７２００３溶
液２ｍｌで洗浄し、酵素反応生成物（０−二トロフェノ
ール）を溶出し、溶出液のＡ４２０ｎｍを測定した。
本測定法によると０．８１ｉ２ 以上のＬＦが定量さ
れ、ヒト血清５検体のＬＦ濃度は各々０．７８゜０．５
９．１．５，０．２６，０．９２μｇ／ノｌｌ であ
った。
れ、ヒト血清５検体のＬＦ濃度は各々０．７８゜０．５
９．１．５，０．２６，０．９２μｇ／ノｌｌ であ
った。
実施例４． ヒト血清のＬＦ濃度の定量実施例１と同じ
方法で正常人血清、肺癌患者血清、膵癌患者血清各１検
体のＬＦ濃度を定量した。
方法で正常人血清、肺癌患者血清、膵癌患者血清各１検
体のＬＦ濃度を定量した。
各血清を５０〜１００倍希釈して測定しｔこところ、Ｌ
Ｆａ度は正常人血清０５７μ９／ｙｎｌ、肺癌患者血清
４．６μダ／ｌｎｌ、膵癌患者血清１．６ 、ｕ ｆ／
／ｍｌであった。
Ｆａ度は正常人血清０５７μ９／ｙｎｌ、肺癌患者血清
４．６μダ／ｌｎｌ、膵癌患者血清１．６ 、ｕ ｆ／
／ｍｌであった。
実施例５ 各種疾患と血中Ｔ、 Ｆ濃度実施例１に準じ
て正常人および癌患者、肝硬変患者の血清についてＬＦ
濃度を測定し、表−■の結果を得た。血中Ｌ Ｆ濃ＩＷ
は正常人に比べて癌患者で高く、特に肺癌患者１名につ
いてはｉＥ常人の５〜１０倍の値を示した。肝硬変では
特に高値を示さなかった。この結果より、ＬＦ血中濃度
の定量は癌の診断への応用が期待される。
て正常人および癌患者、肝硬変患者の血清についてＬＦ
濃度を測定し、表−■の結果を得た。血中Ｌ Ｆ濃ＩＷ
は正常人に比べて癌患者で高く、特に肺癌患者１名につ
いてはｉＥ常人の５〜１０倍の値を示した。肝硬変では
特に高値を示さなかった。この結果より、ＬＦ血中濃度
の定量は癌の診断への応用が期待される。
（以下余白）
表−１
第１図は実施例１において得られたＬＦの検量線を示す
。 特許出願人 天野製薬株式会社
。 特許出願人 天野製薬株式会社
Claims (2)
- （１） ラクトフェリン含有液にラクトフェリン抗体
不溶化担体を接触せしめてラクトフェリン−ラクトフェ
リン抗体不溶化担体複合体を形成せしめ、次いで該複合
体と酵素標識ラクトフェリン抗体を接触せしめるか又は
ラクトフェリン含有液と酵素標識ラクトフェリン抗体を
反応せしめ生成した酵素標識ラクトフェリン抗体−ラク
トフェリン複合体をラクトフェリン抗体不溶化担体に結
合せしめることによりラクトフェリン抗体不溶化担体−
ラクトフエリンー酵素標識ラクトフェリン抗体複合体を
形成せしめた後、該担体に結合した標識酵素の活性を測
定することによりラクトフェリン量を求めることを特徴
とするラクトフェリンの定量法。 - （２） ラクトフェリン抗体不溶化担体がカラムに充
填されて用いられ、酵素反応もカラム内で行われること
を特徴とする特許請求の範囲第１項記載のラクトフェリ
ンの定量法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8553682A JPS58201067A (ja) | 1982-05-19 | 1982-05-19 | ラクトフエリンの定量法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8553682A JPS58201067A (ja) | 1982-05-19 | 1982-05-19 | ラクトフエリンの定量法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58201067A true JPS58201067A (ja) | 1983-11-22 |
Family
ID=13861597
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8553682A Pending JPS58201067A (ja) | 1982-05-19 | 1982-05-19 | ラクトフエリンの定量法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS58201067A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105131111A (zh) * | 2015-07-30 | 2015-12-09 | 中国检验检疫科学研究院 | 一种人乳铁蛋白单克隆抗体对 |
| CN105158478A (zh) * | 2015-07-30 | 2015-12-16 | 中国检验检疫科学研究院 | 一种人乳铁蛋白双抗夹心酶联免疫检测试剂盒 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5347518A (en) * | 1976-10-07 | 1978-04-28 | Mochida Pharm Co Ltd | Immunologically measuring method |
-
1982
- 1982-05-19 JP JP8553682A patent/JPS58201067A/ja active Pending
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5347518A (en) * | 1976-10-07 | 1978-04-28 | Mochida Pharm Co Ltd | Immunologically measuring method |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105131111A (zh) * | 2015-07-30 | 2015-12-09 | 中国检验检疫科学研究院 | 一种人乳铁蛋白单克隆抗体对 |
| CN105158478A (zh) * | 2015-07-30 | 2015-12-16 | 中国检验检疫科学研究院 | 一种人乳铁蛋白双抗夹心酶联免疫检测试剂盒 |
| CN105131111B (zh) * | 2015-07-30 | 2018-03-27 | 中国检验检疫科学研究院 | 一种人乳铁蛋白单克隆抗体对 |
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