JPS58200165A - トキソホルモン−ｌの定量法 - Google Patents
トキソホルモン−ｌの定量法Info
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- JPS58200165A JPS58200165A JP8441282A JP8441282A JPS58200165A JP S58200165 A JPS58200165 A JP S58200165A JP 8441282 A JP8441282 A JP 8441282A JP 8441282 A JP8441282 A JP 8441282A JP S58200165 A JPS58200165 A JP S58200165A
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- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
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- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/74—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving hormones or other non-cytokine intercellular protein regulatory factors such as growth factors, including receptors to hormones and growth factors
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はトキソホルモン−Ｌ （ｔｏｘｏｈｏｒｍｏｎ
ｅ −Ｌ２以下ＴＨＬと略す）の定量法に関するもので
あり、更に詳しく ＴＨＬとＴＨＬ抗体不溶化担体を反
応せしめて得られる複合体に酵素標識ＴＨＬ抗体を反応
せしめるか、または、ＴＨＬと酵素標識ＴＨＬ抗体を反
応せしめて得られる複合体ＯこＴＨＬ抗体不溶化担体を
反応せしめ、酵素標識ＴＨＬ抗体・ＴＨＬ−ＴＨＬ抗体
不溶化担体複合体を形成せしめ、該担体に結合した酵素
活性を測定することによりＴＨＬを定量することを特徴
とするＴＨＬの定量法に関するものである。
ｅ −Ｌ２以下ＴＨＬと略す）の定量法に関するもので
あり、更に詳しく ＴＨＬとＴＨＬ抗体不溶化担体を反
応せしめて得られる複合体に酵素標識ＴＨＬ抗体を反応
せしめるか、または、ＴＨＬと酵素標識ＴＨＬ抗体を反
応せしめて得られる複合体ＯこＴＨＬ抗体不溶化担体を
反応せしめ、酵素標識ＴＨＬ抗体・ＴＨＬ−ＴＨＬ抗体
不溶化担体複合体を形成せしめ、該担体に結合した酵素
活性を測定することによりＴＨＬを定量することを特徴
とするＴＨＬの定量法に関するものである。
ＴＨＬは実用らによって発見された分子量約７５、００
ｏＪ電１范４．７（いずれもマウスの場合）の蛋白質
であり、動物の脂肪組織より脂肪酸を遊離させる作用を
持つ物質である（ ＨｏＭａｓｕｎｏら、Ｃａｎｃｅｒ
Ｒｅ５ｅａｒｃｈ ４１巻、２８４−２８８ページ、
１９８１年）。ＴＨＬは癌患者の腹水中で認められてい
るが、正常者、あるいは肝硬変変患者等では認められず
、癌の発生と密接な関係を持つ物質であると考えられる
。
ｏＪ電１范４．７（いずれもマウスの場合）の蛋白質
であり、動物の脂肪組織より脂肪酸を遊離させる作用を
持つ物質である（ ＨｏＭａｓｕｎｏら、Ｃａｎｃｅｒ
Ｒｅ５ｅａｒｃｈ ４１巻、２８４−２８８ページ、
１９８１年）。ＴＨＬは癌患者の腹水中で認められてい
るが、正常者、あるいは肝硬変変患者等では認められず
、癌の発生と密接な関係を持つ物質であると考えられる
。
ＴＨＬの定量法としては、ＴＨＬが脂肪組織より脂肪酸
を遊離させる作用を利用して、ラットの脂肪組織を用い
る方法（Ｈ，Ｍａｓｕｎｏら、ＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａ
ｒｃｈ ４１巻、２８４−２８８ページ、１９８１年）
が用いられている。しかしＩながらこの方法はラットの
新鮮な！Ｉａ肪組織組織要とし、操作が煩雑なＥ１熟練
した技術が必要である。
を遊離させる作用を利用して、ラットの脂肪組織を用い
る方法（Ｈ，Ｍａｓｕｎｏら、ＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａ
ｒｃｈ ４１巻、２８４−２８８ページ、１９８１年）
が用いられている。しかしＩながらこの方法はラットの
新鮮な！Ｉａ肪組織組織要とし、操作が煩雑なＥ１熟練
した技術が必要である。
ＴＨＬの生理的意義および癌との関連を更に研究し、臨
床に応用する上で上記のＴＨＬの定量法は極めて不利で
あり、簡単カニつ正確なＴＨＬの定量法が望まれる。
床に応用する上で上記のＴＨＬの定量法は極めて不利で
あり、簡単カニつ正確なＴＨＬの定量法が望まれる。
本発明者等は、このような現状を考慮し、鋭意検討した
結果、ＴＨＬ抗体不溶化担体と酵素標識ＴＨＬ抗体を用
いる高感度でしかも簡便なＴＨＬの定量法を完成したの
である。即ち、本発明は、ＴＨＬを不溶性担体に不溶化
せしめたＴＨＬ抗体および酵素で標識したＴＨＬ抗体と
反応せしめ、酵素標識ＴＨＬ抗体・ＴＨＬ−ＴＨＬ抗体
不溶化担体複合体を形成せしめ、該担体に結合した酵素
標識ＴＨＬ抗体の量を酵素活性を測定することによって
定量し、これによってＴＨＬを定量するものである。
結果、ＴＨＬ抗体不溶化担体と酵素標識ＴＨＬ抗体を用
いる高感度でしかも簡便なＴＨＬの定量法を完成したの
である。即ち、本発明は、ＴＨＬを不溶性担体に不溶化
せしめたＴＨＬ抗体および酵素で標識したＴＨＬ抗体と
反応せしめ、酵素標識ＴＨＬ抗体・ＴＨＬ−ＴＨＬ抗体
不溶化担体複合体を形成せしめ、該担体に結合した酵素
標識ＴＨＬ抗体の量を酵素活性を測定することによって
定量し、これによってＴＨＬを定量するものである。
本発明においてはＴＨＬ抗体として、ＴＨＬをウサギ等
の動物に免疫して得られる抗血清から塩析、ＤＥＡＥ−
セルロースクロマトグラフィ等の方法で精製したイムノ
グロブリンＧ（ＩｇＧ）フラクションが用いられる。こ
のようにして得られるＴＨＬ抗体はそのまま用いてもよ
いが、更にペプシン１パパインなどのプロテアーゼで処
理して得られるＦ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’などの抗原結
合部位 １のみを分離したものを用いてもよ
い。
の動物に免疫して得られる抗血清から塩析、ＤＥＡＥ−
セルロースクロマトグラフィ等の方法で精製したイムノ
グロブリンＧ（ＩｇＧ）フラクションが用いられる。こ
のようにして得られるＴＨＬ抗体はそのまま用いてもよ
いが、更にペプシン１パパインなどのプロテアーゼで処
理して得られるＦ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’などの抗原結
合部位 １のみを分離したものを用いてもよ
い。
ＴＨＬ抗体を不溶化する担体としては、ポリスチレン、
シリコン樹脂、ポリアクリルアミド等の各種合成ポリマ
ーの他、ガラス、各種不溶性多糖が用いられる。担体の
形状としてはビーズ状、チューブ状などのものが用いら
れるが、担体がカラムに充填されて使用される場合は特
に微粒状あるいは繊維状であることが好ましい。
シリコン樹脂、ポリアクリルアミド等の各種合成ポリマ
ーの他、ガラス、各種不溶性多糖が用いられる。担体の
形状としてはビーズ状、チューブ状などのものが用いら
れるが、担体がカラムに充填されて使用される場合は特
に微粒状あるいは繊維状であることが好ましい。
上記不溶性担体とＴＨＬ抗体との結合法としては、物理
的吸着を利用するか、または共有結合を用いることがで
きる。例えば、不溶性担体として多糖ゲルを用いる場合
には、多糖を臭化シアン、エピクロルヒドリン、１．１
’−カルボニルジイミダゾール等の活性化剤で処理する
こと番こよってＴＨＬ抗体を不溶化することができる。
的吸着を利用するか、または共有結合を用いることがで
きる。例えば、不溶性担体として多糖ゲルを用いる場合
には、多糖を臭化シアン、エピクロルヒドリン、１．１
’−カルボニルジイミダゾール等の活性化剤で処理する
こと番こよってＴＨＬ抗体を不溶化することができる。
この際、ＴＨＬ抗体と担体との間に適当なスペーサーを
導入してもよい。またＴＨＬ抗体と担体との結合を開裂
可能な結合、例えばＳ−８結合とすることにより、測定
終了後担体を再生してくり返し担体を用いることも可能
である。
導入してもよい。またＴＨＬ抗体と担体との結合を開裂
可能な結合、例えばＳ−８結合とすることにより、測定
終了後担体を再生してくり返し担体を用いることも可能
である。
ＴＨＬ抗体の標識に用いる酵素としては、通常用いられ
る酵素、例えばβ−Ｄ−ガラクトシダーゼ、パーオキク
ダーゼ、リンゴ酸脱水素酵素、アセチルコリンエステラ
ーゼ、アルカリホスファターゼなどが用いられる。
る酵素、例えばβ−Ｄ−ガラクトシダーゼ、パーオキク
ダーゼ、リンゴ酸脱水素酵素、アセチルコリンエステラ
ーゼ、アルカリホスファターゼなどが用いられる。
酵素とＴＨＬ抗体の結合法としては、各々の活性（酵素
活性あるいは抗原結合能）が阻害されないような方法で
あればいずれの方法を用いてもよい。具体的にはグルタ
ルアルデヒド、カルボジイミＦ、Ｎ、Ｎ’−０−フェニ
レンジマレイミド、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ハ
イドロキシサクシニミドエステル等の試薬を用いること
ができる。
活性あるいは抗原結合能）が阻害されないような方法で
あればいずれの方法を用いてもよい。具体的にはグルタ
ルアルデヒド、カルボジイミＦ、Ｎ、Ｎ’−０−フェニ
レンジマレイミド、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ハ
イドロキシサクシニミドエステル等の試薬を用いること
ができる。
このような免疫学的手法により生体体液中の微量成分を
定量する場合においては、生体体液成分によって測定が
妨害される場合がある。このような妨害作用（干渉作用
）を抑制、あるいは除去するためには抗体としてはＦ’
（ａｂ’）２、Ｆａｂ ’ を用いてもよいが、反応系
に疎水性蛋白質と塩類とを共存させる方法が有効である
。疎水性蛋白質としてはゼラチン等、塩類としては食塩
等が用いられる９゜ コノように、本発明によ°ればＴＨＬが高感度かつ簡哨
に電縫できるが、次に実施例によってそのことを説明す
る。
定量する場合においては、生体体液成分によって測定が
妨害される場合がある。このような妨害作用（干渉作用
）を抑制、あるいは除去するためには抗体としてはＦ’
（ａｂ’）２、Ｆａｂ ’ を用いてもよいが、反応系
に疎水性蛋白質と塩類とを共存させる方法が有効である
。疎水性蛋白質としてはゼラチン等、塩類としては食塩
等が用いられる９゜ コノように、本発明によ°ればＴＨＬが高感度かつ簡哨
に電縫できるが、次に実施例によってそのことを説明す
る。
実施例１゜
測定用試薬、の調製
（１）ＴＨＬの調製
ＨｏＭａｓｕｎｏらの方法（Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅ５ｅａ
ｒｃｈ ４１巻、２８４−２８８ページ、１９８１年）
により調製した。即ち、腹水（肝癌患者の腹水）を原料
とし、硫安塩析、ＤＥＡＥ−セルロースクロマトグラフ
ィ、セファデックスＧ−２００クロマトグラフィ等電点
分画によって精製した。得られた標品は白色粉末で、ポ
リアクリルアミドゲル電気泳動において単一バンドを示
した。
ｒｃｈ ４１巻、２８４−２８８ページ、１９８１年）
により調製した。即ち、腹水（肝癌患者の腹水）を原料
とし、硫安塩析、ＤＥＡＥ−セルロースクロマトグラフ
ィ、セファデックスＧ−２００クロマトグラフィ等電点
分画によって精製した。得られた標品は白色粉末で、ポ
リアクリルアミドゲル電気泳動において単一バンドを示
した。
（２）ＴＨＬ抗体とＦ（ａｂ’）２の調製（１）で得ら
れたＴＨＬをアジュバントとともにウサギに免疫し、Ｔ
ＨＬに対する抗血清を得た。この抗血清を加藤らの方法
（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅ −ｍｉｓｔｒ
ｙ、 ８１巻、１５５７ページ、１９７７年）に従って
処理し、（抗ＴＨＬ）Ｉ ｇＧ即ちＴＨＬ抗体を調製し
た。得られたＴＨＬ抗体の一部は、史にヘフシンで限定
分解後、セファデックスＧ−１５０（こよるカラムクロ
マトグラフィを行ない（抗ＴＨＬ）Ｆ（ａｂ’）２を分
離した。
れたＴＨＬをアジュバントとともにウサギに免疫し、Ｔ
ＨＬに対する抗血清を得た。この抗血清を加藤らの方法
（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅ −ｍｉｓｔｒ
ｙ、 ８１巻、１５５７ページ、１９７７年）に従って
処理し、（抗ＴＨＬ）Ｉ ｇＧ即ちＴＨＬ抗体を調製し
た。得られたＴＨＬ抗体の一部は、史にヘフシンで限定
分解後、セファデックスＧ−１５０（こよるカラムクロ
マトグラフィを行ない（抗ＴＨＬ）Ｆ（ａｂ’）２を分
離した。
（３） β−Ｄ−ガラクトシダーゼ標識（抗ＴＨＬ）
Ｆａｂ’の調製 β−Ｄ−ガラクトシダーゼ標識（抗ＴＨＬ）Ｆａｂ’（
以下Ｆａｂ’−β−Ｇａｌと略す）は（２）で調製した
Ｆ（ａｂ’）２を２−メルカプｒギルアミンで還元した
後、加藤らの方法（Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ Ｉｍｍｕｎｏ
ｌｏｇ）’１１６巻、１５５４ページ、１９７６年）に
従って、Ｎ、Ｎ’−０−フェニレンジマレイミドを用い
、大腸菌のβ−Ｄ−ガラクトシダーゼと結合させて調製
した。
Ｆａｂ’の調製 β−Ｄ−ガラクトシダーゼ標識（抗ＴＨＬ）Ｆａｂ’（
以下Ｆａｂ’−β−Ｇａｌと略す）は（２）で調製した
Ｆ（ａｂ’）２を２−メルカプｒギルアミンで還元した
後、加藤らの方法（Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ Ｉｍｍｕｎｏ
ｌｏｇ）’１１６巻、１５５４ページ、１９７６年）に
従って、Ｎ、Ｎ’−０−フェニレンジマレイミドを用い
、大腸菌のβ−Ｄ−ガラクトシダーゼと結合させて調製
した。
（４）抗体不溶化シリコン樹脂片の調製シリコン樹脂片
（サンコープラスチック製の径３ ｍｍのシリコン棒を
４ｍｍの長さに切ったもの）を（２で調製したＦ（ａｂ
′）ｆの溶液（Ａ２８０ｎｍ＝０．５〜０．７）に−晩
ひたし、Ｆ（ａｂ’）２を物理的に吸着させた後、シリ
コン樹脂片を０．１ Ｍ ＩＪン酸緩衝液（ｐＨ７）と
緩衝液Ａで洗浄した後、測定に使用した。（緩衝液Ａ：
０．１％牛血清アルブミン、０、１ Ｍ ＮａＣ１、１
ｍＭ ＭｇＣ１２，０１％ＮａＮＢを含むＩ）Ｈ７の１
０ｍＭリン酸緩衝液）（５）抗体不溶化カラムの調製 （２）で調製したＴＨＬ抗体の溶液を０．１Ｍホウ酸綴
衝液（１）Ｈ８）にて希釈し、１り／−の濃度とした。
（サンコープラスチック製の径３ ｍｍのシリコン棒を
４ｍｍの長さに切ったもの）を（２で調製したＦ（ａｂ
′）ｆの溶液（Ａ２８０ｎｍ＝０．５〜０．７）に−晩
ひたし、Ｆ（ａｂ’）２を物理的に吸着させた後、シリ
コン樹脂片を０．１ Ｍ ＩＪン酸緩衝液（ｐＨ７）と
緩衝液Ａで洗浄した後、測定に使用した。（緩衝液Ａ：
０．１％牛血清アルブミン、０、１ Ｍ ＮａＣ１、１
ｍＭ ＭｇＣ１２，０１％ＮａＮＢを含むＩ）Ｈ７の１
０ｍＭリン酸緩衝液）（５）抗体不溶化カラムの調製 （２）で調製したＴＨＬ抗体の溶液を０．１Ｍホウ酸綴
衝液（１）Ｈ８）にて希釈し、１り／−の濃度とした。
この液２０−に１ｍＭＨＣｌで洗浄したＣＮＢｒ活性化
セファロ・・ス４Ｂ（ファルマシア、ファインケミカル
社製）１０−を加λ、４℃で１晩攪拌した後、０．１
Ｍ Ｔｒｉｓ −Ｈｅ ｌ緩衝液（ｐＨ７，５）で洗浄
した。この抗体不溶化セフロースを緩衝液Ｇにて洗浄後
、−Ｌ部に２−容のりザーバーのついた０、１−容のポ
リスチレンカラムに充てんして、測定に使用した。（緩
衝液Ｇ：緩衝液Ａに０．５％のゼラチンを加え、更にＮ
ａＣ１を０．３Ｍとしたもの） （６）酵素基質の調製 螢光基質：４−メチルウンベリフェリル−β−Ｄ−ガラ
クトシド１０ｍｇを２ｍ／（７）Ｎ、Ｎ’ジメチルホル
ムアミドに溶解後、精製 水にて１００ｒｎｌとして用いた。
セファロ・・ス４Ｂ（ファルマシア、ファインケミカル
社製）１０−を加λ、４℃で１晩攪拌した後、０．１
Ｍ Ｔｒｉｓ −Ｈｅ ｌ緩衝液（ｐＨ７，５）で洗浄
した。この抗体不溶化セフロースを緩衝液Ｇにて洗浄後
、−Ｌ部に２−容のりザーバーのついた０、１−容のポ
リスチレンカラムに充てんして、測定に使用した。（緩
衝液Ｇ：緩衝液Ａに０．５％のゼラチンを加え、更にＮ
ａＣ１を０．３Ｍとしたもの） （６）酵素基質の調製 螢光基質：４−メチルウンベリフェリル−β−Ｄ−ガラ
クトシド１０ｍｇを２ｍ／（７）Ｎ、Ｎ’ジメチルホル
ムアミドに溶解後、精製 水にて１００ｒｎｌとして用いた。
発色＆質：０−ニトロフェニル−β−Ｄ−ガラクトシド
６０〜を１０−の緩衝液Ｇに溶 解後、精製水１０ｍ１を加λだ。
６０〜を１０−の緩衝液Ｇに溶 解後、精製水１０ｍ１を加λだ。
実施例２ 抗体不溶化シリコン樹脂片を用いるＴＨＬの
定量 試薬はすべて実施例１において調製したものを用いた。
定量 試薬はすべて実施例１において調製したものを用いた。
ＴＨＬ溶液（緩衝液Ｇに精製したＴＨＬを０〜１０．０
００ダ／−の濃度で溶解したもの）０．１−に緩衝液Ｇ
Ｏ９１−を加え各検体に抗体不溶化シリコン樹脂片１個
を入れ３０℃で４時間反応させた。次に抗体不溶化シリ
コン樹脂片を緩衝液Ｇにて洗浄後、Ｆａｂ’−β−Ｇａ
Ｌを含む０．２−の緩衝液Ｇに入３４℃で一晩静置した
。このシリコン樹脂片を洗浄後、０．１−の緩衝液Ａに
入れ、更に螢光基質０．０５ｍ７！を加えて３０℃で１
０分間反応後、０．１Ｍグリシン−ＮａＯＩ（緩衝液（
ｐＨ１Ｏ，３） ２．５−を加えて反応を停＋１−．し
た。この反応停止液について、ｌＸｌ０−７Ｍ４−メチ
ルウンベリフェロンを標準液として螢光を測定した（励
起波長３６０ ｎｍ測定波長４５０ｎｍ）。その結果、
第１図に示す検量線が得られ、ｌｎｇ以りのＴＨＬが定
量ができた。
００ダ／−の濃度で溶解したもの）０．１−に緩衝液Ｇ
Ｏ９１−を加え各検体に抗体不溶化シリコン樹脂片１個
を入れ３０℃で４時間反応させた。次に抗体不溶化シリ
コン樹脂片を緩衝液Ｇにて洗浄後、Ｆａｂ’−β−Ｇａ
Ｌを含む０．２−の緩衝液Ｇに入３４℃で一晩静置した
。このシリコン樹脂片を洗浄後、０．１−の緩衝液Ａに
入れ、更に螢光基質０．０５ｍ７！を加えて３０℃で１
０分間反応後、０．１Ｍグリシン−ＮａＯＩ（緩衝液（
ｐＨ１Ｏ，３） ２．５−を加えて反応を停＋１−．し
た。この反応停止液について、ｌＸｌ０−７Ｍ４−メチ
ルウンベリフェロンを標準液として螢光を測定した（励
起波長３６０ ｎｍ測定波長４５０ｎｍ）。その結果、
第１図に示す検量線が得られ、ｌｎｇ以りのＴＨＬが定
量ができた。
実施例３ カラムを用いるＴＨＬの定量試薬はすべて実
施例１において調製したものを用いた。
施例１において調製したものを用いた。
実施例２と同じＴＨＬ溶液０．１−を抗体不溶化カラム
に流し、室温で１時間カラムを置いた後、カラムを緩衝
液Ｇで洗浄した。−次にカラムにＦａｂ’−β−Ｇａｔ
溶液０．１−を流し、上と同じくカラムを室温で１時間
置いた後、洗浄した。洗浄したカラムに発色基質０．１
１ｎｌを流し低温（４〜８℃）で１晩置き、次にカラム
を２．５−の８０ ｍＭ ＮａｇＣＯａ溶液で洗浄し、
この洗浄液のＡ４０ｎｍを測定した。ＴＨＬＯｎｇ／−
の液を用いた場合のＡ４２０ｎｍの値を各検体のＡ４２
０ｉｙｌの値より差し引き検量線を作成したところ、第
２図の検量線が得られ、実施例２と同じ（１ｎｇ以上の
ＴＨＬが定量できた。
に流し、室温で１時間カラムを置いた後、カラムを緩衝
液Ｇで洗浄した。−次にカラムにＦａｂ’−β−Ｇａｔ
溶液０．１−を流し、上と同じくカラムを室温で１時間
置いた後、洗浄した。洗浄したカラムに発色基質０．１
１ｎｌを流し低温（４〜８℃）で１晩置き、次にカラム
を２．５−の８０ ｍＭ ＮａｇＣＯａ溶液で洗浄し、
この洗浄液のＡ４０ｎｍを測定した。ＴＨＬＯｎｇ／−
の液を用いた場合のＡ４２０ｎｍの値を各検体のＡ４２
０ｉｙｌの値より差し引き検量線を作成したところ、第
２図の検量線が得られ、実施例２と同じ（１ｎｇ以上の
ＴＨＬが定量できた。
実施例４ カラムを用いるＴＨＬの定量試薬はすべて実
施例３と同じものを用いた。ＴＨＬＩｇ液０．ＩＴｎｔ
とＦａｂ’−β−Ｇａｔ溶液０４−を混合し、３７℃で
１時間反応させた。この反応液を抗体不溶化カラムに流
した後、カラムを洗浄し、発色基質０．１−を流した。
施例３と同じものを用いた。ＴＨＬＩｇ液０．ＩＴｎｔ
とＦａｂ’−β−Ｇａｔ溶液０４−を混合し、３７℃で
１時間反応させた。この反応液を抗体不溶化カラムに流
した後、カラムを洗浄し、発色基質０．１−を流した。
カラムを３７℃で３時間置いた後、８０ ｍＭ Ｎａ２
ＣＯａ １−でカラムを洗浄しこの洗浄液について実施
例３と同じ＜ Ａ ４２０ｎｍを測定し、第３図に示す
検量線を得た。
ＣＯａ １−でカラムを洗浄しこの洗浄液について実施
例３と同じ＜ Ａ ４２０ｎｍを測定し、第３図に示す
検量線を得た。
第１図は実施例２において得られた抗体不溶化シリコン
樹脂片を用いた場合のＴＨＬの検量線を示すものであり
、第２図及び第３図は実施例３及び実施例４において得
られたカラムを用いた場合のＴＨＬの検量線をそれぞれ
示すものである。 特許出願人 天野製薬株式会社 第１図 トキソホルモンーＬ（ｎｇ／検体） 第２図 トキソホルモンーＬ（ｎｇ／検体）
樹脂片を用いた場合のＴＨＬの検量線を示すものであり
、第２図及び第３図は実施例３及び実施例４において得
られたカラムを用いた場合のＴＨＬの検量線をそれぞれ
示すものである。 特許出願人 天野製薬株式会社 第１図 トキソホルモンーＬ（ｎｇ／検体） 第２図 トキソホルモンーＬ（ｎｇ／検体）
Claims (3)
- （１）トキソホルモンーＬ含有液をトキソホ？レモン−
し抗体不溶化担体に接触せしめることζ：よりトキソホ
ルモンーＬを該担体番こ結合せしめ、トキソホルモンー
Ｌ・トキソホルモンーＬ抗体不溶化担体複合体を形成せ
しめ、次に該複合体と酵素標識ト・キソホルモンーＬ抗
体を反応せしめ該複合体と結合した酵素標識トキソホル
モンーＬ抗体を酵、素活性を測定すること番こよって定
量し、この値よりトキソホルモンーＬを定量することを
特徴とするトキソホルモンーＬの定量法。 - （２）トキソホルモンーＬ含有液と酵素標識トキソホル
モンーＬ抗体を反応せしめて得られるトキソホルモンー
Ｌ・酵素標識トキソホルモンーＬ抗体複会体をトキソホ
ルモン〜Ｌ抗体不溶化担体をこ結合せしめ、該担体番こ
結合した酵素活性を測定することによってトキソホルモ
ンーＬを定量することな特徴とするトキソホルモンーＬ
の定量法。 - （３）トキソホルモンーＬ抗体を不溶化する担体が微粒
状あるいは繊維状であってカラムに充填されて使用され
、酵素活性の測定をカラム内で行うことを特徴とする特
許請求の範囲第１項又は第２項記載のトキソホルモンー
Ｌの定量法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8441282A JPS58200165A (ja) | 1982-05-18 | 1982-05-18 | トキソホルモン−ｌの定量法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8441282A JPS58200165A (ja) | 1982-05-18 | 1982-05-18 | トキソホルモン−ｌの定量法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58200165A true JPS58200165A (ja) | 1983-11-21 |
Family
ID=13829869
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8441282A Pending JPS58200165A (ja) | 1982-05-18 | 1982-05-18 | トキソホルモン−ｌの定量法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS58200165A (ja) |
-
1982
- 1982-05-18 JP JP8441282A patent/JPS58200165A/ja active Pending
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