JPH1192414A - ビタミンｋ２ 濃縮物の製造法 - Google Patents
ビタミンｋ２ 濃縮物の製造法Info
- Publication number
- JPH1192414A JPH1192414A JP9259966A JP25996697A JPH1192414A JP H1192414 A JPH1192414 A JP H1192414A JP 9259966 A JP9259966 A JP 9259966A JP 25996697 A JP25996697 A JP 25996697A JP H1192414 A JPH1192414 A JP H1192414A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- vitamin
- culture solution
- water
- micelles
- bacillus subtilis
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 納豆菌などの可食できる枯草菌からのビタミ
ンＫ2 濃縮物の製造法を提供する。 【解決手段】 枯草菌培養液のｐＨを６．０以下とする
か、培養液に塩又は有機溶媒を添加して、培養液中に存
在するビタミンＫ2 含有水溶性ミセルを不溶性化した
後、該水不溶物を分離、回収することを特徴とするビタ
ミンＫ2 濃縮物の製造法。 【効果】 菌体外の水溶性ミセルに含まれるビタミンＫ
2 を効率的に回収できる。
ンＫ2 濃縮物の製造法を提供する。 【解決手段】 枯草菌培養液のｐＨを６．０以下とする
か、培養液に塩又は有機溶媒を添加して、培養液中に存
在するビタミンＫ2 含有水溶性ミセルを不溶性化した
後、該水不溶物を分離、回収することを特徴とするビタ
ミンＫ2 濃縮物の製造法。 【効果】 菌体外の水溶性ミセルに含まれるビタミンＫ
2 を効率的に回収できる。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、枯草菌培養液か
ら、ビタミンＫを効率的に回収することを目的としたビ
タミンＫ濃縮物の製造法に関する。
ら、ビタミンＫを効率的に回収することを目的としたビ
タミンＫ濃縮物の製造法に関する。
【０００２】
【従来の技術】ビタミンＫは、血液凝固に必要な因子と
して作用する他、骨代謝にも関わりのある脂溶性のビタ
ミンである。ビタミンＫは、植物によって合成されるビ
タミンＫ1 と細菌によって作られるビタミンＫ2 があ
る。ビタミンＫ2 は側鎖の長さの異なるメナキノン−１
〜１４の同族体が存在する。従来より、ビタミンＫ2 の
発酵生産が種々試みられてきたが、その多くは可食でな
い菌から作られており、常に安全性に不安が生じるもの
であった。近年、可食である納豆菌など枯草菌からのビ
タミンＫの利用が試みられている。
して作用する他、骨代謝にも関わりのある脂溶性のビタ
ミンである。ビタミンＫは、植物によって合成されるビ
タミンＫ1 と細菌によって作られるビタミンＫ2 があ
る。ビタミンＫ2 は側鎖の長さの異なるメナキノン−１
〜１４の同族体が存在する。従来より、ビタミンＫ2 の
発酵生産が種々試みられてきたが、その多くは可食でな
い菌から作られており、常に安全性に不安が生じるもの
であった。近年、可食である納豆菌など枯草菌からのビ
タミンＫの利用が試みられている。
【０００３】一般に、微生物の菌体中に蓄積される成分
であれば、培養液から適当な方法によって集菌すれば、
目的成分を培養液から回収できる。例えば、ロドシュー
ドモナス属に属するメナキノン−７生産菌では、メナキ
ノン−７が菌体中に蓄積されるため集菌しメナキノン−
７を回収している（特開昭５７−２０２２９５号公
報）。こうして得られた菌体から有機溶媒を使ってメナ
キノン−７を抽出することが可能である。
であれば、培養液から適当な方法によって集菌すれば、
目的成分を培養液から回収できる。例えば、ロドシュー
ドモナス属に属するメナキノン−７生産菌では、メナキ
ノン−７が菌体中に蓄積されるため集菌しメナキノン−
７を回収している（特開昭５７−２０２２９５号公
報）。こうして得られた菌体から有機溶媒を使ってメナ
キノン−７を抽出することが可能である。
【０００４】枯草菌(Bacillus subtilis) はビタミンＫ
2 を生産し、その主成分はメナキノン−７であり、それ
以外にマイナーな成分としてメナキノン−６を、さらに
微量成分としてメナキノン−４，５，８などを生産す
る。菌体そのものが可食であることから安全なビタミン
Ｋ2 供給源として期待されている。ビタミンＫは脂溶性
であり、多くの微生物では細胞膜や細胞内に含まれ、通
常の培養液中には溶解することはない。ところが、枯草
菌は容易に溶菌するため、ビタミンＫ2 は菌体内にとど
まる以外に、多くのビタミンＫ2 が壊れた細胞膜成分と
ともに水溶性ミセルとなって菌体外に存在する。水溶性
ミセル中に含まれるビタミンＫ2 は、全ビタミンＫ2 量
の３０〜７０％に達する。
2 を生産し、その主成分はメナキノン−７であり、それ
以外にマイナーな成分としてメナキノン−６を、さらに
微量成分としてメナキノン−４，５，８などを生産す
る。菌体そのものが可食であることから安全なビタミン
Ｋ2 供給源として期待されている。ビタミンＫは脂溶性
であり、多くの微生物では細胞膜や細胞内に含まれ、通
常の培養液中には溶解することはない。ところが、枯草
菌は容易に溶菌するため、ビタミンＫ2 は菌体内にとど
まる以外に、多くのビタミンＫ2 が壊れた細胞膜成分と
ともに水溶性ミセルとなって菌体外に存在する。水溶性
ミセル中に含まれるビタミンＫ2 は、全ビタミンＫ2 量
の３０〜７０％に達する。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】ビタミンＫの発酵生産
が種々行われているが、例えば、上記ロドシュードモナ
ス属に属する菌株は食経験がなく安全性に問題があり、
食品としての安全性を考えると可食である納豆菌など枯
草菌の利用が望まれる。しかし、上述した様に枯草菌の
作るビタミンＫ2 のかなりの量が、菌体外の水溶性ミセ
ルに含まれるため、公知の方法により菌体を回収したと
しても、効率的にビタミンＫ2 を集めることができな
い。このため、枯草菌培養液中に含まれるビタミンＫ含
有水溶性ミセルを効率的に回収する技術の開発が望まれ
ていた。
が種々行われているが、例えば、上記ロドシュードモナ
ス属に属する菌株は食経験がなく安全性に問題があり、
食品としての安全性を考えると可食である納豆菌など枯
草菌の利用が望まれる。しかし、上述した様に枯草菌の
作るビタミンＫ2 のかなりの量が、菌体外の水溶性ミセ
ルに含まれるため、公知の方法により菌体を回収したと
しても、効率的にビタミンＫ2 を集めることができな
い。このため、枯草菌培養液中に含まれるビタミンＫ含
有水溶性ミセルを効率的に回収する技術の開発が望まれ
ていた。
【０００６】
【課題を解決するための手段】我々は、上記課題を鋭意
検討した結果、枯草菌培養液中に存在するビタミンＫ 2
含有水溶性ミセルを種々の手段により不溶性化させる
と、ビタミンＫ2 の回収率が飛躍的に向上することを見
出して本発明を完成した。すなわち本発明は、枯草菌培
養液中に存在するビタミンＫ2 含有水溶性ミセルを不溶
性化した後、生成された水不溶物を分離、回収すること
を特徴とするビタミンＫ2 濃縮物の製造法である。
検討した結果、枯草菌培養液中に存在するビタミンＫ 2
含有水溶性ミセルを種々の手段により不溶性化させる
と、ビタミンＫ2 の回収率が飛躍的に向上することを見
出して本発明を完成した。すなわち本発明は、枯草菌培
養液中に存在するビタミンＫ2 含有水溶性ミセルを不溶
性化した後、生成された水不溶物を分離、回収すること
を特徴とするビタミンＫ2 濃縮物の製造法である。
【０００７】
【発明の実施の形態】本発明において、枯草菌培養液中
に存在するビタミンＫ2 含有水溶性ミセルを不溶性化さ
せるには、１）枯草菌培養液のｐＨを６．０以下に調整
する、２）培養液中に塩を添加する、３）有機溶媒を添
加するの３種の手段がある。
に存在するビタミンＫ2 含有水溶性ミセルを不溶性化さ
せるには、１）枯草菌培養液のｐＨを６．０以下に調整
する、２）培養液中に塩を添加する、３）有機溶媒を添
加するの３種の手段がある。
【０００８】上記３種の手段により、水溶性ミセルが不
溶性化する機構についてはいまだ定かではないが、それ
ぞれ、１）枯草菌培養液のｐＨを６．０以下に調整する
と、水溶性ミセルに含まれる蛋白質や酸性リン脂質など
荷電を持つ成分の荷電状態が変化し、ミセルの凝集が惹
き起こされることにより不溶性化する、２）塩を添加し
た場合は、ビタミンＫ2 含有水溶性ミセルと結合してい
る水分子が、塩によって影響をうけ、ミセルの水親和性
が低下するために、不溶性化する、３）有機溶媒を添加
した場合は、ビタミンＫ2 含有水溶性ミセル中のタンパ
ク質などの成分が変性したり、ミセル中の疎水性成分が
露出することによりミセルの溶解度が低下する結果不溶
化するものと推定される。
溶性化する機構についてはいまだ定かではないが、それ
ぞれ、１）枯草菌培養液のｐＨを６．０以下に調整する
と、水溶性ミセルに含まれる蛋白質や酸性リン脂質など
荷電を持つ成分の荷電状態が変化し、ミセルの凝集が惹
き起こされることにより不溶性化する、２）塩を添加し
た場合は、ビタミンＫ2 含有水溶性ミセルと結合してい
る水分子が、塩によって影響をうけ、ミセルの水親和性
が低下するために、不溶性化する、３）有機溶媒を添加
した場合は、ビタミンＫ2 含有水溶性ミセル中のタンパ
ク質などの成分が変性したり、ミセル中の疎水性成分が
露出することによりミセルの溶解度が低下する結果不溶
化するものと推定される。
【０００９】枯草菌培養液のｐＨを６．０以下に調整し
て該培養液中のビタミンＫ2 含有水溶性ミセルを不溶性
化させる場合、ｐＨ調整に使用する酸については特に制
限はなく、例えば、塩酸、硫酸、炭酸、リン酸、硝酸、
トリクロロ酢酸などの無機酸や、乳酸、酢酸、クエン
酸、リンゴ酸、酪酸、脂肪酸などのカルボン酸、その
他、アスパラギン酸やグルタミン酸などの酸性アミノ酸
などが使用できる。更に、リン酸２水素ナトリウムやリ
ン酸２水素カリウム、またクエン酸カリウムやクエン酸
ナトリウムなど酸の塩類を添加しても良いし、トリス
（ヒドロキシメチル）アミノメタンや重フタル酸など緩
衝液に用いられる薬剤を使用してもかまわない。さらに
は、硫化水素や炭酸ガスなど気体を溶存させ、酸を発生
させることによりｐＨを低下させることも可能である。
また、酢酸菌、乳酸菌、酵母などの、培養が進行するに
つれてｐＨを低下させる微生物を使用して、納豆菌培養
液にこれらの微生物を繁殖させてｐＨを調整することも
できる。さらには、工業的に使用されている潜伏性のｐ
Ｈ降下剤を使用してもかまわない。
て該培養液中のビタミンＫ2 含有水溶性ミセルを不溶性
化させる場合、ｐＨ調整に使用する酸については特に制
限はなく、例えば、塩酸、硫酸、炭酸、リン酸、硝酸、
トリクロロ酢酸などの無機酸や、乳酸、酢酸、クエン
酸、リンゴ酸、酪酸、脂肪酸などのカルボン酸、その
他、アスパラギン酸やグルタミン酸などの酸性アミノ酸
などが使用できる。更に、リン酸２水素ナトリウムやリ
ン酸２水素カリウム、またクエン酸カリウムやクエン酸
ナトリウムなど酸の塩類を添加しても良いし、トリス
（ヒドロキシメチル）アミノメタンや重フタル酸など緩
衝液に用いられる薬剤を使用してもかまわない。さらに
は、硫化水素や炭酸ガスなど気体を溶存させ、酸を発生
させることによりｐＨを低下させることも可能である。
また、酢酸菌、乳酸菌、酵母などの、培養が進行するに
つれてｐＨを低下させる微生物を使用して、納豆菌培養
液にこれらの微生物を繁殖させてｐＨを調整することも
できる。さらには、工業的に使用されている潜伏性のｐ
Ｈ降下剤を使用してもかまわない。
【００１０】本発明において、枯草菌培養液のｐＨを
６．０以下に調整した後、該培養液を遠心分離処理すれ
ば、沈殿物中にビタミンＫ2 を効率的に回収することが
できるが、回収効率の点からは、より好ましくは、ｐＨ
を１．０〜ｐＨ５．５に、さらに好ましくは、ｐＨ２．
０〜４．５に調整するとよい。
６．０以下に調整した後、該培養液を遠心分離処理すれ
ば、沈殿物中にビタミンＫ2 を効率的に回収することが
できるが、回収効率の点からは、より好ましくは、ｐＨ
を１．０〜ｐＨ５．５に、さらに好ましくは、ｐＨ２．
０〜４．５に調整するとよい。
【００１１】本発明において、ビタミンＫ2 含有水溶性
ミセルを不溶性化するために枯草菌培養液中に添加する
塩類としては、前記塩類のほか、硫酸アンモニウムや硫
酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カ
ルシウム等があり、これらは１種単独又は２種以上を組
合わせて使用できる。その際には、水溶性ミセルの沈殿
を形成させるためには、１０％飽和以上で効果が現れる
が、好ましくは３０％飽和以上、より好ましくは４５％
飽和以上添加すると良い。
ミセルを不溶性化するために枯草菌培養液中に添加する
塩類としては、前記塩類のほか、硫酸アンモニウムや硫
酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カ
ルシウム等があり、これらは１種単独又は２種以上を組
合わせて使用できる。その際には、水溶性ミセルの沈殿
を形成させるためには、１０％飽和以上で効果が現れる
が、好ましくは３０％飽和以上、より好ましくは４５％
飽和以上添加すると良い。
【００１２】本発明において、ビタミンＫ2 含有水溶性
ミセルを不溶性化するために枯草菌培養液中に添加する
有機溶媒としては、メタノール、エタノール、イソプロ
ピルアルコール、ブタノールなどのアルコールや、炭素
数５〜１０の炭化水素あるいは、炭素数２〜１０のエー
テル、エステル、ケトンの群から選ばれる有機溶媒があ
り、これらは１種単独又は２種以上を組合わせて使用で
きる。その際には、水溶性ミセルの沈殿を形成させるた
めには、培養液１００容量部に対して有機溶媒を１０容
量部以上、好ましくは５０容量部以上、更に好ましくは
７０容量部以上添加すると良い。
ミセルを不溶性化するために枯草菌培養液中に添加する
有機溶媒としては、メタノール、エタノール、イソプロ
ピルアルコール、ブタノールなどのアルコールや、炭素
数５〜１０の炭化水素あるいは、炭素数２〜１０のエー
テル、エステル、ケトンの群から選ばれる有機溶媒があ
り、これらは１種単独又は２種以上を組合わせて使用で
きる。その際には、水溶性ミセルの沈殿を形成させるた
めには、培養液１００容量部に対して有機溶媒を１０容
量部以上、好ましくは５０容量部以上、更に好ましくは
７０容量部以上添加すると良い。
【００１３】なお、枯草菌培養液中のビタミンＫ2 含有
水溶性ミセルを不溶性化するための上記３種の方法につ
いては、単独のみならず、２種以上の方法を組合わせて
も良く、特に、塩あるいは有機溶媒を添加する方法は、
枯草菌培養液のｐＨを６．０以下に調整する方法と併用
すれば、ごく微量の添加でも沈殿効率を上げることがで
きる。更には、アニオン性あるいはカチオン性の凝集促
進剤を併用することもできる。本発明において、ビタミ
ンＫ2 濃縮物を製造する際には、枯草菌培養液に直接、
上記３種のビタミンＫ2 含有水溶性ミセルを不溶化する
手段を適用してもよいし、あるいは当該培養液に遠心分
離等の前処理を施してから不溶化手段を適用してもよ
い。
水溶性ミセルを不溶性化するための上記３種の方法につ
いては、単独のみならず、２種以上の方法を組合わせて
も良く、特に、塩あるいは有機溶媒を添加する方法は、
枯草菌培養液のｐＨを６．０以下に調整する方法と併用
すれば、ごく微量の添加でも沈殿効率を上げることがで
きる。更には、アニオン性あるいはカチオン性の凝集促
進剤を併用することもできる。本発明において、ビタミ
ンＫ2 濃縮物を製造する際には、枯草菌培養液に直接、
上記３種のビタミンＫ2 含有水溶性ミセルを不溶化する
手段を適用してもよいし、あるいは当該培養液に遠心分
離等の前処理を施してから不溶化手段を適用してもよ
い。
【００１４】枯草菌培養液のｐＨを６．０以下に調整し
た後、あるいは、塩、有機溶媒を添加した後、生成する
不溶性物質を分離する方法としては、遠心分離、膜分
離、デカンテーションなどがある。なかでも、遠心分離
がコストや効率の面で有利である。遠心分離に使用する
遠心分離器の種類、構造にはなんら制限がなく、バッチ
式、連続式の遠心分離器が利用できる。遠心分離にかか
る重力加速度（ｇ）は、１００ｇ以上でも充分に効果が
あるが、好ましくは、１０００ｇ以上、より好ましくは
５０００ｇ以上が効率的である。また遠心にかかる時間
は特に限定されないが、例えば５０００ｇ以上であれば
１分以上、１０００ｇであれば５分以上、１００ｇであ
れば１０分以上の遠心時間があればよい。
た後、あるいは、塩、有機溶媒を添加した後、生成する
不溶性物質を分離する方法としては、遠心分離、膜分
離、デカンテーションなどがある。なかでも、遠心分離
がコストや効率の面で有利である。遠心分離に使用する
遠心分離器の種類、構造にはなんら制限がなく、バッチ
式、連続式の遠心分離器が利用できる。遠心分離にかか
る重力加速度（ｇ）は、１００ｇ以上でも充分に効果が
あるが、好ましくは、１０００ｇ以上、より好ましくは
５０００ｇ以上が効率的である。また遠心にかかる時間
は特に限定されないが、例えば５０００ｇ以上であれば
１分以上、１０００ｇであれば５分以上、１００ｇであ
れば１０分以上の遠心時間があればよい。
【００１５】本発明に用いる培養液を製造するために使
われる菌株は枯草菌(Bacillus subtilis) に属する菌種
であればよく、汎用性という観点からは納豆の製造に使
われる納豆菌が好ましい。また、枯草菌や納豆菌を変異
処理などにより育種あるいは選抜した株により製造した
培養液についても使用でき、発酵条件や培地条件などに
制限はない。その中でも枯草菌培養液を得るために使用
される培地としては、大豆粉、大豆煮汁、コーンスチー
プリカー、廃糖蜜、グルコース、シュークロースなど一
般的に発酵工業で使用されている培地が良い。また、脱
脂大豆、挽き割り大豆あるいは丸大豆など固形の培地を
使って枯草菌を培養後、水や塩溶液などと混合して培養
液を得ることもできる。
われる菌株は枯草菌(Bacillus subtilis) に属する菌種
であればよく、汎用性という観点からは納豆の製造に使
われる納豆菌が好ましい。また、枯草菌や納豆菌を変異
処理などにより育種あるいは選抜した株により製造した
培養液についても使用でき、発酵条件や培地条件などに
制限はない。その中でも枯草菌培養液を得るために使用
される培地としては、大豆粉、大豆煮汁、コーンスチー
プリカー、廃糖蜜、グルコース、シュークロースなど一
般的に発酵工業で使用されている培地が良い。また、脱
脂大豆、挽き割り大豆あるいは丸大豆など固形の培地を
使って枯草菌を培養後、水や塩溶液などと混合して培養
液を得ることもできる。
【００１６】
【実施例】以下、実施例を示しながら、本発明を説明す
るが、実施例によって、本発明は何ら制限されない。な
お、枯草菌のビタミンＫ2 の分析は、高速液体クロマト
グラフィーで行い、メナキノン−６とメナキノン−７の
量の和をビタミンＫ2 量とした。
るが、実施例によって、本発明は何ら制限されない。な
お、枯草菌のビタミンＫ2 の分析は、高速液体クロマト
グラフィーで行い、メナキノン−６とメナキノン−７の
量の和をビタミンＫ2 量とした。
【００１７】実施例１ Brix１０％の大豆煮汁に、市販の宮城野納豆菌を植え、
３７℃で７日間通気攪拌培養し、３Ｌの納豆菌培養液を
得た。この発酵液中のビタミンＫ2 濃度は、２０．３ｍ
ｇ／Ｌであった。本培養液を、１６，２５０ｇで１０分
間遠心分離したところ、上清中には１２．４ｍｇ／Ｌの
ビタミンＫ2 が含まれ、これらは水溶性ミセル中に含ま
れており、沈殿中に回収できなかった。そこで、この上
清液のｐＨ（ｐＨ７．３）を、塩酸、酢酸、乳酸を用い
てｐＨを１．０〜６．０に調整した。同時に比較例とし
てｐＨを塩酸、水酸化ナトリウム、アンモニアによりｐ
Ｈ６．５〜１１．０に調整した。一部の条件下において
は、沈殿を促進するためにメタノールあるいは硫酸アン
モニウムを添加した。これらの試験溶液を１６，２５０
ｇで１０分間遠心分離し、得られた沈殿物中のビタミン
Ｋ2 を分析した。結果を表１に示す。
３７℃で７日間通気攪拌培養し、３Ｌの納豆菌培養液を
得た。この発酵液中のビタミンＫ2 濃度は、２０．３ｍ
ｇ／Ｌであった。本培養液を、１６，２５０ｇで１０分
間遠心分離したところ、上清中には１２．４ｍｇ／Ｌの
ビタミンＫ2 が含まれ、これらは水溶性ミセル中に含ま
れており、沈殿中に回収できなかった。そこで、この上
清液のｐＨ（ｐＨ７．３）を、塩酸、酢酸、乳酸を用い
てｐＨを１．０〜６．０に調整した。同時に比較例とし
てｐＨを塩酸、水酸化ナトリウム、アンモニアによりｐ
Ｈ６．５〜１１．０に調整した。一部の条件下において
は、沈殿を促進するためにメタノールあるいは硫酸アン
モニウムを添加した。これらの試験溶液を１６，２５０
ｇで１０分間遠心分離し、得られた沈殿物中のビタミン
Ｋ2 を分析した。結果を表１に示す。
【００１８】表１の実施例の欄に示す通り、培養液をｐ
Ｈ６．０以下に調整することにより、ビタミンＫ2 を含
む水溶性ミセルは不溶化が起こり、遠心分離によりビタ
ミンＫ2 を沈殿物中に回収することができた。ところ
が、納豆菌培養液のｐＨを調整しない条件１５（ｐＨ
７．３）を含めて、ｐＨ６．５以上の場合には、水溶性
ミセルを不溶性化することはできなかった。一方で、条
件５と条件６を比較すると、メタノールを添加すること
により、ビタミンＫ2 の沈殿が促進された。また、条件
８と９から、硫酸アンモニウムの微量添加によっても、
沈殿が促進された。なお、一般に、タンパク質は等電点
沈殿することが知られているが、タンパク質には固有の
等電点があり、沈殿を起こすｐＨの範囲は狭いものであ
る。ここで得られた結果では、沈殿の形成するｐＨの範
囲が１．０〜６．０と広く、単純にタンパク質の等電点
沈殿とは異なることがわかる。
Ｈ６．０以下に調整することにより、ビタミンＫ2 を含
む水溶性ミセルは不溶化が起こり、遠心分離によりビタ
ミンＫ2 を沈殿物中に回収することができた。ところ
が、納豆菌培養液のｐＨを調整しない条件１５（ｐＨ
７．３）を含めて、ｐＨ６．５以上の場合には、水溶性
ミセルを不溶性化することはできなかった。一方で、条
件５と条件６を比較すると、メタノールを添加すること
により、ビタミンＫ2 の沈殿が促進された。また、条件
８と９から、硫酸アンモニウムの微量添加によっても、
沈殿が促進された。なお、一般に、タンパク質は等電点
沈殿することが知られているが、タンパク質には固有の
等電点があり、沈殿を起こすｐＨの範囲は狭いものであ
る。ここで得られた結果では、沈殿の形成するｐＨの範
囲が１．０〜６．０と広く、単純にタンパク質の等電点
沈殿とは異なることがわかる。
【００１９】
【００２０】実施例２ 培地［コーンスチープリカー７％、シュクロース３％、
グリセロール８％、燐酸水素２カリウム０．１％、ｐＨ
７．３］１Ｌを５Ｌ容量の三角フラスコに入れ、オート
クレーブにて滅菌後、枯草菌(Bacillus subtilis, Marb
urg 株，ATCC6051) を植えて、３５℃で８日間振とう培
養を行った。得られた枯草菌培養液中のビタミンＫ2 総
量は、２８．５ｍｇ／Ｌ、培養後のｐＨは７．１であっ
た。この培養液を１０，０００ｇにて３０分間遠心分離
を行ったところ、上清中のビタミンＫ2 濃度は１５．３
ｍｇ／Ｌであった。この上清液に対して、１０、３０、
４５、６０％飽和となるように硫酸アンモニウムあるい
は硫酸ナトリウムを加えた。生じた沈殿物を１０，００
０ｇにて３０分間遠心して分離し、沈殿物中へのビタミ
ンＫ2 の回収率を調べた。すると、表２に示す通り、硫
酸アンモニウムおよび硫酸ナトリウムを１０％飽和以上
添加することにより、上清中のビタミンＫが沈殿物中に
回収されることがわかった。特に、硫酸アンモニウムの
場合では、４５％飽和以上の濃度でビタミンＫの回収率
が高くなった。
グリセロール８％、燐酸水素２カリウム０．１％、ｐＨ
７．３］１Ｌを５Ｌ容量の三角フラスコに入れ、オート
クレーブにて滅菌後、枯草菌(Bacillus subtilis, Marb
urg 株，ATCC6051) を植えて、３５℃で８日間振とう培
養を行った。得られた枯草菌培養液中のビタミンＫ2 総
量は、２８．５ｍｇ／Ｌ、培養後のｐＨは７．１であっ
た。この培養液を１０，０００ｇにて３０分間遠心分離
を行ったところ、上清中のビタミンＫ2 濃度は１５．３
ｍｇ／Ｌであった。この上清液に対して、１０、３０、
４５、６０％飽和となるように硫酸アンモニウムあるい
は硫酸ナトリウムを加えた。生じた沈殿物を１０，００
０ｇにて３０分間遠心して分離し、沈殿物中へのビタミ
ンＫ2 の回収率を調べた。すると、表２に示す通り、硫
酸アンモニウムおよび硫酸ナトリウムを１０％飽和以上
添加することにより、上清中のビタミンＫが沈殿物中に
回収されることがわかった。特に、硫酸アンモニウムの
場合では、４５％飽和以上の濃度でビタミンＫの回収率
が高くなった。
【００２１】
【００２２】実施例３ 滅菌した培地（Gibco 社製バクトトリプトン３％、ソイ
トン３％、グルコース５％、酵母エキス０．５％、ｐＨ
７．３）３Ｌに市販納豆より分離した納豆菌を植え、７
Ｌ容量のジャーファーメンターにて３７℃７日間通気攪
拌培養した。得られた納豆菌培養液中のビタミンＫ2 濃
度は、１５．３ｍｇ／Ｌであった。この培養液を１２，
０００ｇ１０分の遠心後、得られた上清液には８．３ｍ
ｇ／ＬのビタミンＫ2 が含まれ、これらのビタミンＫ2
は水溶性ミセルとして存在していた。この上清液１００
量部に対して、メタノールを１０、３０、５０、６０、
７０、１００量部、あるいは、エタノールを１０、３
０、５０、７０、８５、１００量部、あるいは、イソプ
ロピルアルコールを１０、３０量部、あるいは、アセト
ンを、１０、２０、３０量部加えて、軽く攪拌し１０分
後、１２，０００ｇ１０分間遠心し、分離した沈殿物中
のビタミンＫ2 量を測定した。表３に示したとおり、こ
れらの有機溶媒を添加することにより、ビタミンＫ2 水
溶性ミセルが不溶性化し、沈殿することがわかった。
トン３％、グルコース５％、酵母エキス０．５％、ｐＨ
７．３）３Ｌに市販納豆より分離した納豆菌を植え、７
Ｌ容量のジャーファーメンターにて３７℃７日間通気攪
拌培養した。得られた納豆菌培養液中のビタミンＫ2 濃
度は、１５．３ｍｇ／Ｌであった。この培養液を１２，
０００ｇ１０分の遠心後、得られた上清液には８．３ｍ
ｇ／ＬのビタミンＫ2 が含まれ、これらのビタミンＫ2
は水溶性ミセルとして存在していた。この上清液１００
量部に対して、メタノールを１０、３０、５０、６０、
７０、１００量部、あるいは、エタノールを１０、３
０、５０、７０、８５、１００量部、あるいは、イソプ
ロピルアルコールを１０、３０量部、あるいは、アセト
ンを、１０、２０、３０量部加えて、軽く攪拌し１０分
後、１２，０００ｇ１０分間遠心し、分離した沈殿物中
のビタミンＫ2 量を測定した。表３に示したとおり、こ
れらの有機溶媒を添加することにより、ビタミンＫ2 水
溶性ミセルが不溶性化し、沈殿することがわかった。
【００２３】
【００２４】実施例４ 実施例１で得られた納豆菌培養液の上清液を、ｐＨ３．
０とｐＨ７．０に調整した。得られた溶液を、ポアサイ
ズ３００Ｋの膜（膜面積０．０４ｍ２）を使って濃縮を
試みた。膜濃縮装置は、ユアサ商事製のＵＦ−２を使用
した。すると、液量を２倍に濃縮したとき、ｐＨ７．０
では約２０％のビタミンＫが膜から外へ漏れ出したが、
ｐＨ３．０に調整した培養液では、ビタミンＫ2 が膜を
通過せず、９９．９％以上のビタミンＫ2 が沈殿物とと
もに濃縮液中に濃縮された。
０とｐＨ７．０に調整した。得られた溶液を、ポアサイ
ズ３００Ｋの膜（膜面積０．０４ｍ２）を使って濃縮を
試みた。膜濃縮装置は、ユアサ商事製のＵＦ−２を使用
した。すると、液量を２倍に濃縮したとき、ｐＨ７．０
では約２０％のビタミンＫが膜から外へ漏れ出したが、
ｐＨ３．０に調整した培養液では、ビタミンＫ2 が膜を
通過せず、９９．９％以上のビタミンＫ2 が沈殿物とと
もに濃縮液中に濃縮された。
【００２５】
【発明の効果】本発明において、枯草菌培養液中に存在
するビタミンＫ2 含有水溶性ミセルを、１）培養液のｐ
Ｈを６．０以下に調整する、２）培養液中に塩を添加す
る、３）培養液中に有機溶媒を添加する３種の手段によ
り不溶性化した後、該水不溶物を分離、回収すると、著
しく効率的にビタミンＫ2 を取り出すことができる。
するビタミンＫ2 含有水溶性ミセルを、１）培養液のｐ
Ｈを６．０以下に調整する、２）培養液中に塩を添加す
る、３）培養液中に有機溶媒を添加する３種の手段によ
り不溶性化した後、該水不溶物を分離、回収すると、著
しく効率的にビタミンＫ2 を取り出すことができる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ //(Ｃ１２Ｐ 7/26 Ｃ１２Ｒ 1:125） (72)発明者 荒木 伸 長野県飯田市鼎切石4178−１ (72)発明者 村沢 久司 長野県飯田市諏訪町32−８ (72)発明者 田村 正紀 長野県飯田市駄科62
Claims (7)
- 【請求項１】 枯草菌培養液中に存在するビタミンＫ2
含有水溶性ミセルを不溶性化した後、該水不溶物を分
離、回収することを特徴とするビタミンＫ2 濃縮物の製
造法。 - 【請求項２】 ビタミンＫ2 含有水溶性ミセルを不溶性
化する方法が、培養液のｐＨを６．０以下に調整するこ
とである請求項第１項記載のビタミンＫ2 濃縮物の製造
法。 - 【請求項３】 ビタミンＫ2 含有水溶性ミセルを不溶性
化する方法が、培養液に塩類を添加することである請求
項第１項記載のビタミンＫ2 濃縮物の製造法。 - 【請求項４】 ビタミンＫ2 含有水溶性ミセルを不溶性
化する方法が、培養液に有機溶媒を添加することである
請求項第１項記載のビタミンＫ2 濃縮物の製造法。 - 【請求項５】 水不溶物を分離する手段が、遠心分離で
ある請求項第１項から第４項のいずれか１項記載のビタ
ミンＫ2 濃縮物の製造法。 - 【請求項６】 水不溶物を分離する手段が、膜濃縮であ
る請求項第１項から第４項のいずれか１項記載のビタミ
ンＫ2 濃縮物の製造法。 - 【請求項７】 枯草菌が納豆菌である請求項第１項記載
のビタミンＫ2 濃縮物の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP25996697A JP3876395B2 (ja) | 1997-09-25 | 1997-09-25 | ビタミンｋ２濃縮物の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP25996697A JP3876395B2 (ja) | 1997-09-25 | 1997-09-25 | ビタミンｋ２濃縮物の製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH1192414A true JPH1192414A (ja) | 1999-04-06 |
| JP3876395B2 JP3876395B2 (ja) | 2007-01-31 |
Family
ID=17341410
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP25996697A Expired - Lifetime JP3876395B2 (ja) | 1997-09-25 | 1997-09-25 | ビタミンｋ２濃縮物の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3876395B2 (ja) |
Cited By (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2000287676A (ja) * | 1999-04-07 | 2000-10-17 | Mitsukan Group Honsha:Kk | ビタミンｋ２高生産性納豆菌、その育種方法及び納豆 |
| JP2006061114A (ja) * | 2004-08-30 | 2006-03-09 | Chisso Corp | バチルス属細菌の培養物からビタミンｋ２を分離する方法 |
| JP2006325597A (ja) * | 2006-06-15 | 2006-12-07 | Nippon Seibutsu Kagaku Kenkyusho:Kk | ビタミンｋ２の回収方法 |
| WO2007148494A1 (ja) | 2006-06-23 | 2007-12-27 | J-Oil Mills, Inc. | テストステロン増加剤 |
| WO2008126367A1 (ja) | 2007-04-05 | 2008-10-23 | J-Oil Mills, Inc. | 精神安定剤および機能性食品 |
| US8114642B2 (en) | 2004-12-28 | 2012-02-14 | Japan Bio Science Laboratory Co., Ltd. | Method for producing vitamin K2 from culture of Bacillus natto |
| WO2014017145A1 (ja) | 2012-07-24 | 2014-01-30 | 株式会社Ｊ－オイルミルズ | 組成物 |
| JP2017178796A (ja) * | 2016-03-28 | 2017-10-05 | 不二製油株式会社 | 抗炎症用添加剤 |
| CN114315549A (zh) * | 2021-12-31 | 2022-04-12 | 南通励成生物工程有限公司 | 一种维生素k2的提取方法 |
| CN114538589A (zh) * | 2022-02-25 | 2022-05-27 | 中国科学院合肥物质科学研究院 | 一种富集发酵液中萜类化合物的方法及其使用的纤维素基絮凝剂 |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR102173340B1 (ko) * | 2018-12-27 | 2020-11-03 | 동진파마 주식회사 | 고효율의 메나퀴논―７의 정제 방법 |
-
1997
- 1997-09-25 JP JP25996697A patent/JP3876395B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2000287676A (ja) * | 1999-04-07 | 2000-10-17 | Mitsukan Group Honsha:Kk | ビタミンｋ２高生産性納豆菌、その育種方法及び納豆 |
| JP2006061114A (ja) * | 2004-08-30 | 2006-03-09 | Chisso Corp | バチルス属細菌の培養物からビタミンｋ２を分離する方法 |
| US8114642B2 (en) | 2004-12-28 | 2012-02-14 | Japan Bio Science Laboratory Co., Ltd. | Method for producing vitamin K2 from culture of Bacillus natto |
| JP2006325597A (ja) * | 2006-06-15 | 2006-12-07 | Nippon Seibutsu Kagaku Kenkyusho:Kk | ビタミンｋ２の回収方法 |
| WO2007148494A1 (ja) | 2006-06-23 | 2007-12-27 | J-Oil Mills, Inc. | テストステロン増加剤 |
| WO2008126367A1 (ja) | 2007-04-05 | 2008-10-23 | J-Oil Mills, Inc. | 精神安定剤および機能性食品 |
| WO2014017145A1 (ja) | 2012-07-24 | 2014-01-30 | 株式会社Ｊ－オイルミルズ | 組成物 |
| US9486398B2 (en) | 2012-07-24 | 2016-11-08 | J-Oil Mills, Inc. | Composition |
| US10039704B2 (en) | 2012-07-24 | 2018-08-07 | J-Oil Mills, Inc. | Composition |
| JP2017178796A (ja) * | 2016-03-28 | 2017-10-05 | 不二製油株式会社 | 抗炎症用添加剤 |
| CN114315549A (zh) * | 2021-12-31 | 2022-04-12 | 南通励成生物工程有限公司 | 一种维生素k2的提取方法 |
| CN114538589A (zh) * | 2022-02-25 | 2022-05-27 | 中国科学院合肥物质科学研究院 | 一种富集发酵液中萜类化合物的方法及其使用的纤维素基絮凝剂 |
| CN114538589B (zh) * | 2022-02-25 | 2023-08-25 | 中国科学院合肥物质科学研究院 | 一种富集发酵液中萜类化合物的方法及其使用的纤维素基絮凝剂 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3876395B2 (ja) | 2007-01-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FR2564859A1 (fr) | Procede de preparation d'acide hyaluronique par fermentation. | |
| JP3030789B2 (ja) | バシラス・サチリス突然変異株及び該変異株の使用によるサーファクチンの製法 | |
| US20080032349A1 (en) | Method for producing k5 polysaccharide | |
| JPH1192414A (ja) | ビタミンｋ２ 濃縮物の製造法 | |
| JPS60251895A (ja) | ピロロキノリンキノンの製造方法 | |
| CN101669571A (zh) | 乳酸菌混菌发酵结合酶解法生产蛋白饲料源小肽工艺 | |
| WO2001002597A1 (en) | Process for the preparation of the polysaccharides k4 and k5 from escherichia coli | |
| EP0575908B1 (de) | Pseudomonas aeruginosa und seine Verwendung zur Herstellung von L-Rhamnose | |
| US20060057688A1 (en) | Method for separating vitamin K2 from Bacillus bacterium culture | |
| CN113874090A (zh) | 用于从玉米浸渍液中水性提取生物表面活性剂的方法 | |
| JP3081901B2 (ja) | γ−ポリグルタミン酸の製造法 | |
| JPH03130084A (ja) | トレハロースの製造法 | |
| KR100991907B1 (ko) | 테아닌의 제조법 | |
| JPH044874A (ja) | フラクトシルアミノ酸分解酵素、その製造法及びその利用 | |
| JPS61247396A (ja) | ゲニステインの製造法 | |
| KR101040099B1 (ko) | 스테롤의 5-엔-3-온체 또는 3,6-디온체의 제조방법, 및 분석방법 | |
| US5792646A (en) | Process for preparing S. cerevisiae containing organically bound germanium | |
| JP2006325538A (ja) | ナットウキナーゼ製造方法とその方法で製造されたナットウキナーゼ | |
| JP2019208457A (ja) | 新規微生物及び該微生物を用いたウロリチン類の製造方法 | |
| JPH06277040A (ja) | 酵母細胞壁溶解酵素の製造法及び溶解法 | |
| JPH1156384A (ja) | 多糖類の精製方法 | |
| JP2797295B2 (ja) | 新規微生物および新規微生物を使用するメナキノン−４の製造法 | |
| JP3103883B2 (ja) | Ｅｂ−１６２物質およびその製造法 | |
| JPS61216696A (ja) | メナキノン−４の製造法 | |
| JPH1077472A (ja) | 天然型酸化防止剤およびその製造方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20040621 |
|
| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20040621 |
|
| A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A712 Effective date: 20040917 |
|
| A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20060712 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20060719 |
|
| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20060919 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20061011 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20061019 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20091110 Year of fee payment: 3 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20091110 Year of fee payment: 3 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20101110 Year of fee payment: 4 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20101110 Year of fee payment: 4 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20111110 Year of fee payment: 5 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20111110 Year of fee payment: 5 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20121110 Year of fee payment: 6 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20121110 Year of fee payment: 6 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20121110 Year of fee payment: 6 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20131110 Year of fee payment: 7 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |