JP2000287676A - ビタミンｋ２高生産性納豆菌、その育種方法及び納豆 - Google Patents
ビタミンｋ２高生産性納豆菌、その育種方法及び納豆Info
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Abstract
(57)【要約】
【解決手段】 バチルス・サチルス（Bacillus subtili
s）に属する納豆菌を、突然変異処理または自然変異処
理によってビタミンＫ２生産性を向上させた後、選択培
地を用いて、特にチロシン、フェニルアラニンのアナロ
グを含有する選択培地を用いて、これを分離し、分離し
た変異納豆菌を使用して納豆を製造する。 【効果】 本発明によれば、通常の品質とほとんど変わ
らなく風味豊かで、かつ骨強化作用があると期待できる
ビタミンＫ２を、なかでもＭＫ−７をより多く含む納豆
を提供することができる。
s）に属する納豆菌を、突然変異処理または自然変異処
理によってビタミンＫ２生産性を向上させた後、選択培
地を用いて、特にチロシン、フェニルアラニンのアナロ
グを含有する選択培地を用いて、これを分離し、分離し
た変異納豆菌を使用して納豆を製造する。 【効果】 本発明によれば、通常の品質とほとんど変わ
らなく風味豊かで、かつ骨強化作用があると期待できる
ビタミンＫ２を、なかでもＭＫ−７をより多く含む納豆
を提供することができる。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、細菌の育種及びそ
の利用に係り、更に詳細には、本発明は、ビタミンＫ
（vitamin Ｋ）、特にビタミンＫ２の生産性を向上させ
た変異納豆菌の育種、その変異納豆菌、それを使用した
ビタミンＫ２を多く含む納豆の製造方法及びその変異納
豆菌を用いて製造されたビタミンＫ２をより高濃度に含
有した納豆に関する。
の利用に係り、更に詳細には、本発明は、ビタミンＫ
（vitamin Ｋ）、特にビタミンＫ２の生産性を向上させ
た変異納豆菌の育種、その変異納豆菌、それを使用した
ビタミンＫ２を多く含む納豆の製造方法及びその変異納
豆菌を用いて製造されたビタミンＫ２をより高濃度に含
有した納豆に関する。
【０００２】
【従来の技術】天然物中から単離されたビタミンＫとし
ては、主に植物体が生合成するビタミンＫ１（フィロキ
ノンphylloquinone）と、主として微生物が生合成する
ビタミンＫ２（メナキノンmenaquinone）などがある。
さらにビタミンＫ２としては、メナキノン（ＭＫ）のキ
ノン骨格に結合するポリプレノイド側鎖の長さによって
ＭＫ−１〜ＭＫ−１４までの１４種類が知られており、
微生物の種類によって主に生産されるメナキノンの種類
が異なっている（Microbiol. Rev., Vol.45, p.316-35
4, 1981）。また、ビタミンＫ３すなわちメナジオン（m
enadione）（２−メチル−１，４−ナフトキノン）はビ
タミンＫ１及びビタミンＫ２生合成の中間物質であっ
て、かつ化学合成もされており、さらにビタミンＫ３の
ハイドロキノン型であるビタミンＫ４も化学合成されて
いる。
ては、主に植物体が生合成するビタミンＫ１（フィロキ
ノンphylloquinone）と、主として微生物が生合成する
ビタミンＫ２（メナキノンmenaquinone）などがある。
さらにビタミンＫ２としては、メナキノン（ＭＫ）のキ
ノン骨格に結合するポリプレノイド側鎖の長さによって
ＭＫ−１〜ＭＫ−１４までの１４種類が知られており、
微生物の種類によって主に生産されるメナキノンの種類
が異なっている（Microbiol. Rev., Vol.45, p.316-35
4, 1981）。また、ビタミンＫ３すなわちメナジオン（m
enadione）（２−メチル−１，４−ナフトキノン）はビ
タミンＫ１及びビタミンＫ２生合成の中間物質であっ
て、かつ化学合成もされており、さらにビタミンＫ３の
ハイドロキノン型であるビタミンＫ４も化学合成されて
いる。
【０００３】ビタミンＫはもともと血液凝固因子の１つ
として発見され、その血液凝固作用に対する１日当たり
の必要量は約１μｇ／体重ｋｇとされている。この程度
の必要量であれば、腸内細菌によってビタミンＫが生産
されるので、食品などで特別に供給しなくても充分であ
る。従って通常は血液凝固作用に関するビタミンＫ欠乏
病はほとんど観察されておらず、抗生物質の多量投与後
や生後７〜１０日の新生児のように腸内細菌の数が少な
い時に発生することがある程度である。
として発見され、その血液凝固作用に対する１日当たり
の必要量は約１μｇ／体重ｋｇとされている。この程度
の必要量であれば、腸内細菌によってビタミンＫが生産
されるので、食品などで特別に供給しなくても充分であ
る。従って通常は血液凝固作用に関するビタミンＫ欠乏
病はほとんど観察されておらず、抗生物質の多量投与後
や生後７〜１０日の新生児のように腸内細菌の数が少な
い時に発生することがある程度である。
【０００４】しかし、最近そのビタミンＫに骨強化作用
があることが解明されてきている。例えばビタミンＫ２
の一種であるＭＫ−４について骨粗しょう症治療薬とし
ての臨床試験が行われ、成人１日当たり１５〜４５ｍｇ
の投与で骨粗しょう症改善効果が認められている。ま
た、骨粗しょう症で見られる大腿骨頚部の骨折患者の血
清中のＭＫ−７やＭＫ−８の濃度は、骨折していない患
者に比べて、有意に低い値を示す事などから、日常から
ビタミンＫを摂取して血液中のビタミンＫ濃度を高濃度
に維持することが、骨粗しょう症の予防すなわち骨強化
につながるものと考えられている。
があることが解明されてきている。例えばビタミンＫ２
の一種であるＭＫ−４について骨粗しょう症治療薬とし
ての臨床試験が行われ、成人１日当たり１５〜４５ｍｇ
の投与で骨粗しょう症改善効果が認められている。ま
た、骨粗しょう症で見られる大腿骨頚部の骨折患者の血
清中のＭＫ−７やＭＫ−８の濃度は、骨折していない患
者に比べて、有意に低い値を示す事などから、日常から
ビタミンＫを摂取して血液中のビタミンＫ濃度を高濃度
に維持することが、骨粗しょう症の予防すなわち骨強化
につながるものと考えられている。
【０００５】なお、ＭＫ−４の骨強化作用は、全てのビ
タミンＫに共通する基本骨格部分がオステオカルシンを
活性化することによる骨合成の促進効果と、ＭＫ−４の
側鎖部分であるゲラニルゲラニオール部分の作用による
骨吸収（骨の分解）の抑制効果の両方の効果によるもの
であることが解明されつつある。
タミンＫに共通する基本骨格部分がオステオカルシンを
活性化することによる骨合成の促進効果と、ＭＫ−４の
側鎖部分であるゲラニルゲラニオール部分の作用による
骨吸収（骨の分解）の抑制効果の両方の効果によるもの
であることが解明されつつある。
【０００６】そしてビタミンＫの骨強化作用の発現に
は、従来から言われている血液凝固作用の場合よりも多
量のビタミンＫが必要であり、腸内細菌等による生産量
だけでは不足すると推定されることから、食品などによ
る供給が必要になるものと考えられている。
は、従来から言われている血液凝固作用の場合よりも多
量のビタミンＫが必要であり、腸内細菌等による生産量
だけでは不足すると推定されることから、食品などによ
る供給が必要になるものと考えられている。
【０００７】ビタミンＫを含有する食品としては、ビタ
ミンＫ１を含有する緑黄色野菜類や海藻類、ビタミンＫ
２を含有する納豆などが知られており、これらの食品を
摂取することでビタミンＫを補給することができる。
ミンＫ１を含有する緑黄色野菜類や海藻類、ビタミンＫ
２を含有する納豆などが知られており、これらの食品を
摂取することでビタミンＫを補給することができる。
【０００８】なかでも納豆はビタミンＫ２を最も多く含
有しており、例えば第４訂食品成分表によれば納豆中の
ビタミンＫ２は納豆１００ｇ当たり８６４μｇの濃度で
あるとされている。また、疫学的な研究からは、納豆の
消費量が多いと大腿骨頚部の骨折頻度は少ないとの関係
が見出されており、さらに納豆中の主要なビタミンＫ ２
であるＭＫ−７がＭＫ−４と同程度の能力でカルシウム
を骨芽細胞へ沈着させることができるという報告もあっ
て、骨強化作用を期待する際のビタミンＫの供給源とし
て納豆は優良な食品であると考えられている。
有しており、例えば第４訂食品成分表によれば納豆中の
ビタミンＫ２は納豆１００ｇ当たり８６４μｇの濃度で
あるとされている。また、疫学的な研究からは、納豆の
消費量が多いと大腿骨頚部の骨折頻度は少ないとの関係
が見出されており、さらに納豆中の主要なビタミンＫ ２
であるＭＫ−７がＭＫ−４と同程度の能力でカルシウム
を骨芽細胞へ沈着させることができるという報告もあっ
て、骨強化作用を期待する際のビタミンＫの供給源とし
て納豆は優良な食品であると考えられている。
【０００９】しかし、骨強化作用を期待するためには、
納豆の現状のビタミンＫ２含有量のままでは不足してい
ると考えられることから、さらに高濃度にビタミンＫ２
を含有する納豆を開発することが求められているが、納
豆中のビタミンＫ２含有量を高めようとする工夫は非常
に少なく、天然物から抽出したビタミンＫ２を亜鉛とと
もに納豆などの食品に添加する方法（特開平１０−３６
２５６）や発酵方法を改良して納豆菌による生産量を増
加させる方法（特開平８−９９１６）が知られている程
度であった。
納豆の現状のビタミンＫ２含有量のままでは不足してい
ると考えられることから、さらに高濃度にビタミンＫ２
を含有する納豆を開発することが求められているが、納
豆中のビタミンＫ２含有量を高めようとする工夫は非常
に少なく、天然物から抽出したビタミンＫ２を亜鉛とと
もに納豆などの食品に添加する方法（特開平１０−３６
２５６）や発酵方法を改良して納豆菌による生産量を増
加させる方法（特開平８−９９１６）が知られている程
度であった。
【００１０】前記のビタミンＫ２を添加する方法につい
ては、天然物からのビタミンＫ２の抽出作業が煩雑であ
り、費用もかかる上に、納豆に食品添加物を添加するこ
と自体が品質上好ましいことではなく、従って納豆製造
工程の工夫などにより自然な形でビタミンの含有量を高
めることが求められている。
ては、天然物からのビタミンＫ２の抽出作業が煩雑であ
り、費用もかかる上に、納豆に食品添加物を添加するこ
と自体が品質上好ましいことではなく、従って納豆製造
工程の工夫などにより自然な形でビタミンの含有量を高
めることが求められている。
【００１１】その点で、発酵方法を改良する特開平８−
９９１６号明細書に開示の方法はより優れた方法である
と考えられるが、この方法は、一般に納豆は高圧釜で蒸
煮した大豆に対して納豆菌胞子を植菌し、高湿度下で温
度を３７〜４５℃に制御して１５〜１８時間程度発酵さ
せる工程を経て製造されるのに対して、比較的高温（４
２〜５０℃）で長時間（２４〜４８時間）発酵させるこ
とによってビタミンＫ ２の含有量を通常の納豆の約７倍
程度まで高める方法である。
９９１６号明細書に開示の方法はより優れた方法である
と考えられるが、この方法は、一般に納豆は高圧釜で蒸
煮した大豆に対して納豆菌胞子を植菌し、高湿度下で温
度を３７〜４５℃に制御して１５〜１８時間程度発酵さ
せる工程を経て製造されるのに対して、比較的高温（４
２〜５０℃）で長時間（２４〜４８時間）発酵させるこ
とによってビタミンＫ ２の含有量を通常の納豆の約７倍
程度まで高める方法である。
【００１２】この方法によってビタミンＫの含有量が高
くなるとすれば、一応ビタミンＫ高含有納豆としては目
的が果たされていることになる。しかし、この方法は比
較的高温で長時間発酵させることが特徴であり、このよ
うな発酵を行うといわゆる過発酵の状態となってしま
い、出来上がった納豆の香りが悪化し、豆色も黒くなる
し、いわゆるシャリが発生するなど、納豆そのものの品
質がかなり劣化してしまうため、おいしく食べて健康を
維持するという食品に本来期待されるべき姿からは、逸
脱してしまうなどの充足できない点があった。
くなるとすれば、一応ビタミンＫ高含有納豆としては目
的が果たされていることになる。しかし、この方法は比
較的高温で長時間発酵させることが特徴であり、このよ
うな発酵を行うといわゆる過発酵の状態となってしま
い、出来上がった納豆の香りが悪化し、豆色も黒くなる
し、いわゆるシャリが発生するなど、納豆そのものの品
質がかなり劣化してしまうため、おいしく食べて健康を
維持するという食品に本来期待されるべき姿からは、逸
脱してしまうなどの充足できない点があった。
【００１３】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、納豆の品質
は通常のものと変わりなく風味豊かで、かつ骨強化作用
があると期待できるビタミンＫ２をより高濃度で含有す
る納豆を提供することを目的としている。
は通常のものと変わりなく風味豊かで、かつ骨強化作用
があると期待できるビタミンＫ２をより高濃度で含有す
る納豆を提供することを目的としている。
【００１４】
【課題を解決するための手段】本発明者等は、納豆の発
酵条件などを変化させる従来の方法ではなく、納豆菌自
体の生産能力を高めてやる方が、発酵条件や発酵設備な
どを大きく変える必要がなくて、品質は通常のものと変
わりなく風味豊かで、かつビタミンＫ２を高濃度で含有
する納豆を効率よく製造することができると考えて本発
明を進めた。
酵条件などを変化させる従来の方法ではなく、納豆菌自
体の生産能力を高めてやる方が、発酵条件や発酵設備な
どを大きく変える必要がなくて、品質は通常のものと変
わりなく風味豊かで、かつビタミンＫ２を高濃度で含有
する納豆を効率よく製造することができると考えて本発
明を進めた。
【００１５】納豆菌は、枯草菌バチルス・サチリス（Ba
cillus subtilis）に分類されているが、粘質物（糸引
物質）などの納豆としての特徴をつくり出すことがで
き、納豆発酵での主体をなす細菌であって、また、生育
にビオチンを要求するとされるなどの特性を有している
ことなどから、バチルス・ナットウ（Bacillus natto）
として分類されたり、枯草菌の変種としてBacillus sub
tilis var. nattoあるいはBacillus subtilis(natto）
などと枯草菌と区別して分類している文献もある。納豆
菌としては、Bacillus natto IFO3009、Bacillus subti
lis IFO3335、同IFO3336、同IFO3936、同IFO13169など
があり、また市販の納豆種菌である高橋菌(Ｔ３株、東
京農業大学菌株保存室）や宮城野菌（宮城野納豆製造
所）など各種の納豆菌がある。
cillus subtilis）に分類されているが、粘質物（糸引
物質）などの納豆としての特徴をつくり出すことがで
き、納豆発酵での主体をなす細菌であって、また、生育
にビオチンを要求するとされるなどの特性を有している
ことなどから、バチルス・ナットウ（Bacillus natto）
として分類されたり、枯草菌の変種としてBacillus sub
tilis var. nattoあるいはBacillus subtilis(natto）
などと枯草菌と区別して分類している文献もある。納豆
菌としては、Bacillus natto IFO3009、Bacillus subti
lis IFO3335、同IFO3336、同IFO3936、同IFO13169など
があり、また市販の納豆種菌である高橋菌(Ｔ３株、東
京農業大学菌株保存室）や宮城野菌（宮城野納豆製造
所）など各種の納豆菌がある。
【００１６】この納豆菌のビタミンＫ２生合成経路は完
全に解明されておらず、かつビタミンＫ２生産能力を向
上させる試みも全く行われていないのが現状であった。
一方、納豆菌以外の微生物でのビタミンＫ２の生産につ
いては、生産性の高い微生物を自然界から選抜した結果
として、フラボバクテリウム（Flavobacterium）を取得
した例（J. Ferment. Technol., Vol.62, p.321-327, 1
984）、及びコリネバクテリウム（Corynebacterium）、
ブレビバクテリウム（Brevibacterium）、ミクロバクテ
リウム（Microbacterium）、クルトバクテリウム（Curt
obacterium）、オーレオバクテリウム（Aureobacteriu
m）、フラボバクテリウム（Flavobacterium）などの細
菌を取得した例（特開昭６１−１７３７９２）などがあ
る。
全に解明されておらず、かつビタミンＫ２生産能力を向
上させる試みも全く行われていないのが現状であった。
一方、納豆菌以外の微生物でのビタミンＫ２の生産につ
いては、生産性の高い微生物を自然界から選抜した結果
として、フラボバクテリウム（Flavobacterium）を取得
した例（J. Ferment. Technol., Vol.62, p.321-327, 1
984）、及びコリネバクテリウム（Corynebacterium）、
ブレビバクテリウム（Brevibacterium）、ミクロバクテ
リウム（Microbacterium）、クルトバクテリウム（Curt
obacterium）、オーレオバクテリウム（Aureobacteriu
m）、フラボバクテリウム（Flavobacterium）などの細
菌を取得した例（特開昭６１−１７３７９２）などがあ
る。
【００１７】しかし、これらの微生物により生産される
ビタミンＫ２はＭＫ−４、ＭＫ−５やＭＫ−６であって
納豆菌が生産するＭＫ−７とは異なっていることや、か
つ納豆菌ではビタミンＫ２生合成経路が不明であること
などから、前記の各種の方法が納豆菌のビタミンＫ２の
生産能向上に有効かどうかは全く不明であった。
ビタミンＫ２はＭＫ−４、ＭＫ−５やＭＫ−６であって
納豆菌が生産するＭＫ−７とは異なっていることや、か
つ納豆菌ではビタミンＫ２生合成経路が不明であること
などから、前記の各種の方法が納豆菌のビタミンＫ２の
生産能向上に有効かどうかは全く不明であった。
【００１８】そこで本発明者らは、変異剤処理して得た
変異納豆菌をｐ−フルオロ−Ｄ，Ｌ−フェニルアラニン
含有培地で培養し得られた耐性株についてその性質を検
討したところ、全く予期せざることに、該耐性株はビタ
ミンＫ２の生産性が向上しているという新知見を得、更
に、上記アミノ酸アナログのみでなく上記ｍ−フルオロ
体その他のチロシン、フェニルアラニンのアナログ耐性
株は、いずれも上記した特性を有することも見出した。
変異納豆菌をｐ−フルオロ−Ｄ，Ｌ−フェニルアラニン
含有培地で培養し得られた耐性株についてその性質を検
討したところ、全く予期せざることに、該耐性株はビタ
ミンＫ２の生産性が向上しているという新知見を得、更
に、上記アミノ酸アナログのみでなく上記ｍ−フルオロ
体その他のチロシン、フェニルアラニンのアナログ耐性
株は、いずれも上記した特性を有することも見出した。
【００１９】すなわち本発明者らは、選択培地としてチ
ロシン、フェニルアラニンのアナログ含有培地を使用す
るビタミンＫ２高生産性納豆菌の育種に成功しただけで
なく、本育種方法は納豆菌のみでなく他のバチルス属細
菌にも適用可能である点にも着目し、本発明を完成させ
るに至った。そしてチロシン、フェニルアラニンのアナ
ログに対する耐性を有する変異納豆菌はビタミンＫ２の
うちのＭＫ−７を多く含む品質良好な納豆を発酵生産す
ることが可能であることを見出し、本発明を完成するに
至った。
ロシン、フェニルアラニンのアナログ含有培地を使用す
るビタミンＫ２高生産性納豆菌の育種に成功しただけで
なく、本育種方法は納豆菌のみでなく他のバチルス属細
菌にも適用可能である点にも着目し、本発明を完成させ
るに至った。そしてチロシン、フェニルアラニンのアナ
ログに対する耐性を有する変異納豆菌はビタミンＫ２の
うちのＭＫ−７を多く含む品質良好な納豆を発酵生産す
ることが可能であることを見出し、本発明を完成するに
至った。
【００２０】すなわち本発明は、チロシン、フェニルア
ラニンのアナログを含有する選択培地を用いて、ビタミ
ンＫ２生産性が向上した納豆菌その他のバチルス属細菌
を育種、分離する方法に係り、更に具体的態様は次のと
おりである。
ラニンのアナログを含有する選択培地を用いて、ビタミ
ンＫ２生産性が向上した納豆菌その他のバチルス属細菌
を育種、分離する方法に係り、更に具体的態様は次のと
おりである。
【００２１】本発明は、本質的には、チロシン、フェニ
ルアラニンのアナログに対する耐性を有し、且つ、ビタ
ミンＫ２を高濃度に生産するバチルス・サチルス（Baci
llussubtilis）に属する納豆菌に関し、更には、ｐ−フ
ルオロ−Ｄ，Ｌ−フェニルアラニン、ｍ−フルオロ−
Ｄ，Ｌ−フェニルアラニン、β−２−フェニルアラニ
ン、β−２−チエニルアラニン、フェニルアラニンヒド
ロキサム酸、から選ばれる少なくともひとつのアナログ
耐性を有し、且つ、ビタミンＫ２を高濃度に生産するバ
チルス・サチルス（Bacillus subtilis）に属する納豆
菌に関するものである。また、本発明は、バチルス・サ
チリス（Bacillus subtilis）に属する納豆菌を、突然
変異処理または自然変異処理によってビタミンＫ２生産
性を向上させた後、チロシン、フェニルアラニンのアナ
ログを含有する選択培地を用いて分離したビタミンＫ２
を高濃度に生産する納豆菌に関するものである。そし
て、本発明は、ビタミンＫ２を高濃度に生産する納豆菌
を使用することを特徴とする納豆の製造方法に関する。
さらに、本発明は、ビタミンＫ２を高濃度に生産する納
豆菌を用いて製造されたビタミンＫ２高含有納豆に関す
る。また、ビタミンＫ２を高生産し且つ優良な納豆を製
造できる納豆菌は、従来未知の新規微生物であって、本
発明は、上記選択方法のみに限定されることなく、他の
方法で分離された該納豆菌をすべて包含するものであ
る。
ルアラニンのアナログに対する耐性を有し、且つ、ビタ
ミンＫ２を高濃度に生産するバチルス・サチルス（Baci
llussubtilis）に属する納豆菌に関し、更には、ｐ−フ
ルオロ−Ｄ，Ｌ−フェニルアラニン、ｍ−フルオロ−
Ｄ，Ｌ−フェニルアラニン、β−２−フェニルアラニ
ン、β−２−チエニルアラニン、フェニルアラニンヒド
ロキサム酸、から選ばれる少なくともひとつのアナログ
耐性を有し、且つ、ビタミンＫ２を高濃度に生産するバ
チルス・サチルス（Bacillus subtilis）に属する納豆
菌に関するものである。また、本発明は、バチルス・サ
チリス（Bacillus subtilis）に属する納豆菌を、突然
変異処理または自然変異処理によってビタミンＫ２生産
性を向上させた後、チロシン、フェニルアラニンのアナ
ログを含有する選択培地を用いて分離したビタミンＫ２
を高濃度に生産する納豆菌に関するものである。そし
て、本発明は、ビタミンＫ２を高濃度に生産する納豆菌
を使用することを特徴とする納豆の製造方法に関する。
さらに、本発明は、ビタミンＫ２を高濃度に生産する納
豆菌を用いて製造されたビタミンＫ２高含有納豆に関す
る。また、ビタミンＫ２を高生産し且つ優良な納豆を製
造できる納豆菌は、従来未知の新規微生物であって、本
発明は、上記選択方法のみに限定されることなく、他の
方法で分離された該納豆菌をすべて包含するものであ
る。
【００２２】
【発明の実施の形態】本発明において、変異納豆菌を得
るための変異方法としてはいかなる変異方法を用いても
よい。納豆菌は特別に人工的な変異処理を施さなくても
ある程度の確率で自然に変異を起こすので、このような
自然変異によって目的のビタミンＫ２の生産性が向上し
た変異納豆菌を取得することが可能である。また、人工
的な手段による突然変異を起こさせて取得する方法もあ
る。突然変異には物理的方法と化学的方法が用いられ
る。突然変異の物理的方法としては、紫外線照射、放射
線照射などがあり、化学的方法としては、例えばエチル
メタンスルホン酸（ＥＭＳ）やＮ−メチル−Ｎ′−ニト
ロ−Ｎ−ニトロソグアニジン（ＮＴＧ）などの変異剤の
溶液に菌体を懸濁させる方法などがあり、これらの方法
を単独または組み合わせて適宜実施することができる。
るための変異方法としてはいかなる変異方法を用いても
よい。納豆菌は特別に人工的な変異処理を施さなくても
ある程度の確率で自然に変異を起こすので、このような
自然変異によって目的のビタミンＫ２の生産性が向上し
た変異納豆菌を取得することが可能である。また、人工
的な手段による突然変異を起こさせて取得する方法もあ
る。突然変異には物理的方法と化学的方法が用いられ
る。突然変異の物理的方法としては、紫外線照射、放射
線照射などがあり、化学的方法としては、例えばエチル
メタンスルホン酸（ＥＭＳ）やＮ−メチル−Ｎ′−ニト
ロ−Ｎ−ニトロソグアニジン（ＮＴＧ）などの変異剤の
溶液に菌体を懸濁させる方法などがあり、これらの方法
を単独または組み合わせて適宜実施することができる。
【００２３】本発明では、変異納豆菌の選抜培地に特色
を有するものである。即ち、選択培地にフェニルアラニ
ン、チロシンのアナログを添加することが望ましい。こ
れらのアナログとしては多くのものが知られており、任
意のものが使用できるが、特にβ−２−フェニルアラニ
ン、フェニルアラニンヒドロキサム酸などを用いるのが
望ましい。また、ｐ−フルオロ−Ｄ，Ｌ−フェニルアラ
ニン、ｍ−フルオロ−Ｄ，Ｌ−フェニルアラニン、β−
２−チエニルアラニン等も使用可能である。更に望まし
くは、これら芳香族アミノ酸のアナログを２以上添加し
た選択培地を用いて、フェニルアラニンのアナログ及び
チロシンのアナログに対する同時耐性株を取得すること
が良く、これにより効率良くビタミンＫ２を高生産する
納豆菌を得ることができる。フェニルアラニンやチロシ
ンのアナログの添加は、変異処理をする納豆菌の耐性度
を勘案して実施する必要があるが、０．３〜５０、好ま
しくは０．５〜１０、更に好ましくは数μｇ／ｍｌ程度
の濃度で選択培地に添加しておくとよい。
を有するものである。即ち、選択培地にフェニルアラニ
ン、チロシンのアナログを添加することが望ましい。こ
れらのアナログとしては多くのものが知られており、任
意のものが使用できるが、特にβ−２−フェニルアラニ
ン、フェニルアラニンヒドロキサム酸などを用いるのが
望ましい。また、ｐ−フルオロ−Ｄ，Ｌ−フェニルアラ
ニン、ｍ−フルオロ−Ｄ，Ｌ−フェニルアラニン、β−
２−チエニルアラニン等も使用可能である。更に望まし
くは、これら芳香族アミノ酸のアナログを２以上添加し
た選択培地を用いて、フェニルアラニンのアナログ及び
チロシンのアナログに対する同時耐性株を取得すること
が良く、これにより効率良くビタミンＫ２を高生産する
納豆菌を得ることができる。フェニルアラニンやチロシ
ンのアナログの添加は、変異処理をする納豆菌の耐性度
を勘案して実施する必要があるが、０．３〜５０、好ま
しくは０．５〜１０、更に好ましくは数μｇ／ｍｌ程度
の濃度で選択培地に添加しておくとよい。
【００２４】変異処理される元の納豆菌としては、基本
的に優れた納豆生産能を有している必要があるが、その
他の性質として栄養源要求性や薬剤抵抗性などを有して
いても構わない。具体的には、通常的に納豆工業で使用
されている発酵能力に優れた納豆菌や、新たに自然界か
ら分離取得された優れた納豆菌、市販の納豆から分離し
た納豆菌、及びさらに改良を重ねた納豆菌などを用いる
ことができ、市販納豆から分離されたＯ−２株や、市販
の種菌である高橋菌（Ｔ３株、東京農業大学菌株保存
室）、宮城野菌（宮城野納豆製造所）などが適宜使用で
きる。
的に優れた納豆生産能を有している必要があるが、その
他の性質として栄養源要求性や薬剤抵抗性などを有して
いても構わない。具体的には、通常的に納豆工業で使用
されている発酵能力に優れた納豆菌や、新たに自然界か
ら分離取得された優れた納豆菌、市販の納豆から分離し
た納豆菌、及びさらに改良を重ねた納豆菌などを用いる
ことができ、市販納豆から分離されたＯ−２株や、市販
の種菌である高橋菌（Ｔ３株、東京農業大学菌株保存
室）、宮城野菌（宮城野納豆製造所）などが適宜使用で
きる。
【００２５】これらの各種納豆菌から適宜選択した納豆
菌を変異処理した後、フェニルアラニンのアナログ及び
チロシンのアナログを両方含む固体培地に塗抹して、３
７℃で２日間程度培養し、そこで生じたコロニーを単コ
ロニー分離した後、納豆を製造した際にビタミンＫ２を
多く含有し、かつ風味豊かで物性的にも優れた品質の納
豆を生産する納豆菌を取得することによって目的の変異
納豆菌が取得できる。
菌を変異処理した後、フェニルアラニンのアナログ及び
チロシンのアナログを両方含む固体培地に塗抹して、３
７℃で２日間程度培養し、そこで生じたコロニーを単コ
ロニー分離した後、納豆を製造した際にビタミンＫ２を
多く含有し、かつ風味豊かで物性的にも優れた品質の納
豆を生産する納豆菌を取得することによって目的の変異
納豆菌が取得できる。
【００２６】このようにして開発されたビタミンＫ２高
生産性の変異納豆菌の納豆生産への利用は、従来から実
施されている方法を採用すれば良く、何ら制限がない。
このようにして、従来納豆と品質的に差異はなく風味豊
かで、かつビタミンＫ２を高濃度で含有する納豆が生産
可能となる。
生産性の変異納豆菌の納豆生産への利用は、従来から実
施されている方法を採用すれば良く、何ら制限がない。
このようにして、従来納豆と品質的に差異はなく風味豊
かで、かつビタミンＫ２を高濃度で含有する納豆が生産
可能となる。
【００２７】以下に本発明の実施例について述べる。
【００２８】
【実施例１】納豆菌の培養には、表１及び表２に記載の
Nutrient Broth及び改変Spizizen培地を用い、常法に従
って実施した。
Nutrient Broth及び改変Spizizen培地を用い、常法に従
って実施した。
【００２９】（表１：Nutrient Broth） ────────────────────── 成 分 濃 度 ────────────────────── 肉エキス １％ ポリペプトン １％ 塩化ナトリウム ０．５％ ────────────────────── （注）固体培地には寒天１．５％を添加した。
【００３０】（表２：改変固体Spizizen培地） ───────────────────────── 成 分 濃 度 ───────────────────────── 硫酸アンモニウム ０．２％ リン酸水素２カリウム １．４％ リン酸２水素カリウム ０．６％ クエン酸ナトリウム ０．１％ 硫酸マグネシウム７水和物 ０．０２％ ブドウ糖 ０．０５％ グルタミン酸ナトリウム ０．０１％ ビオチン（ビタミンＨ） １００μｇ／ｌ ───────────────────────── （注）固体培地には寒天１．５％を添加した。
【００３１】市販納豆から分離した納豆菌Ｏ−２株を常
法により紫外線照射（生存率１〜１０％）で変異処理
し、ジヒドロキシナフトエン酸のアナログである１−ハ
イドロキシ−２−ナフトエン酸を含有（５０ｍｇ／ｌ）
する選択培地で選択し、さらに紫外線照射（生存率１〜
１０％）と選択培地（８０ｍｇ／ｌ）での選択を繰り返
した後に得たＯＵＶ２３−ＨＮＡ９００４株を上記Nutr
ient Brothに白金耳で植菌し、一晩３７℃で振とう培養
した後、遠心分離して滅菌生理食塩水で洗浄した。
法により紫外線照射（生存率１〜１０％）で変異処理
し、ジヒドロキシナフトエン酸のアナログである１−ハ
イドロキシ−２−ナフトエン酸を含有（５０ｍｇ／ｌ）
する選択培地で選択し、さらに紫外線照射（生存率１〜
１０％）と選択培地（８０ｍｇ／ｌ）での選択を繰り返
した後に得たＯＵＶ２３−ＨＮＡ９００４株を上記Nutr
ient Brothに白金耳で植菌し、一晩３７℃で振とう培養
した後、遠心分離して滅菌生理食塩水で洗浄した。
【００３２】この約１０７ｃｆｕ／ｍｌの濃度の洗浄菌
体に、１００ｍｇ／ｌとなるようにＮ−メチル−Ｎ′−
ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジンを添加し、２０分間振
とうして、変異処理を行った。この時の生存率は１０％
前後であった。
体に、１００ｍｇ／ｌとなるようにＮ−メチル−Ｎ′−
ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジンを添加し、２０分間振
とうして、変異処理を行った。この時の生存率は１０％
前後であった。
【００３３】変異処理した菌体を上記Nutrient Brothで
培養して形質を発現させ、その後に滅菌生理食塩水で洗
浄し、さらに改変Spizizen培地に３ｍｇ／ｌとなるよう
にｐ−フルオロ−Ｄ，Ｌ−フェニルアラニン、ｍ−フル
オロ−Ｄ，Ｌ−フェニルアラニン、β−２−チエニルア
ラニンを添加した固体培地に塗沫した。
培養して形質を発現させ、その後に滅菌生理食塩水で洗
浄し、さらに改変Spizizen培地に３ｍｇ／ｌとなるよう
にｐ−フルオロ−Ｄ，Ｌ−フェニルアラニン、ｍ−フル
オロ−Ｄ，Ｌ−フェニルアラニン、β−２−チエニルア
ラニンを添加した固体培地に塗沫した。
【００３４】３７℃で２〜３日間培養した後、得られた
コロニーを、固体Nutrient Brothで単コロニー分離し、
さらに上記のチロシン、フェニルアラニンのアナログを
添加した改変固体Spizizen培地にてアナログ耐性を再確
認した。このようにして得られたアナログ耐性株の中か
らＯＵＶ２３４８１株を得た。この菌株は、ＦＥＲＭＢ
Ｐ−６６５９として、工業技術院生命工学工業技術研究
所特許微生物寄託センターに寄託されている。
コロニーを、固体Nutrient Brothで単コロニー分離し、
さらに上記のチロシン、フェニルアラニンのアナログを
添加した改変固体Spizizen培地にてアナログ耐性を再確
認した。このようにして得られたアナログ耐性株の中か
らＯＵＶ２３４８１株を得た。この菌株は、ＦＥＲＭＢ
Ｐ−６６５９として、工業技術院生命工学工業技術研究
所特許微生物寄託センターに寄託されている。
【００３５】この変異納豆菌ＯＵＶ２３４８１株の胞子
液と親株であるＯＵＶ２３−ＨＮＡ９００４株の胞子液
及び市販納豆菌胞子液を用いて、常法通り納豆を作製し
た。すなわち、浸漬した大豆を水切りし、１．８ｋｇｆ
／ｃｍ２で１８分間蒸煮した。蒸煮大豆１ｇあたり３，
０００〜４，０００個の胞子を植菌し、５０ｇずつＰＳ
Ｐトレーにいれ、薄いフィルムで表面を覆い、蓋をした
後に、バッチ式納豆発酵室へ入れ、室温４０〜４５℃で
高湿度下で発酵を行った。発酵終了後、熟成させ、その
後に納豆中のビタミンＫ２の含量を評価した。表３に
は、ビタミンＫ２の含量とチロシン、フェニルアラニン
のアナログへの耐性を示す。
液と親株であるＯＵＶ２３−ＨＮＡ９００４株の胞子液
及び市販納豆菌胞子液を用いて、常法通り納豆を作製し
た。すなわち、浸漬した大豆を水切りし、１．８ｋｇｆ
／ｃｍ２で１８分間蒸煮した。蒸煮大豆１ｇあたり３，
０００〜４，０００個の胞子を植菌し、５０ｇずつＰＳ
Ｐトレーにいれ、薄いフィルムで表面を覆い、蓋をした
後に、バッチ式納豆発酵室へ入れ、室温４０〜４５℃で
高湿度下で発酵を行った。発酵終了後、熟成させ、その
後に納豆中のビタミンＫ２の含量を評価した。表３に
は、ビタミンＫ２の含量とチロシン、フェニルアラニン
のアナログへの耐性を示す。
【００３６】 （表３：納豆菌のビタミンＫ２生産性とチロシン、フェニルアラニンのアナログ 耐性） ─────────────────────────────────── ビタミンＫ２含量 チロシン、フェニルアラニン 使用した納豆菌株 （ＭＫ−７） アナログ耐性 (μg/100g納豆) (固体培地で判定) ─────────────────────────────────── 市販納豆菌 ９０８ × OUV23-HNA9004株 １，０３７ × OUV23481株 １，７１９ ○ ───────────────────────────────────
【００３７】変異納豆菌ＯＵＶ２３４８１株は、親株で
あるＯＵＶ２３−ＨＮＡ９００４株や市販納豆菌に比較
して、チロシン、フェニルアラニンのアナログに対する
耐性を獲得しており、それと同時にビタミンＫ２生産性
が約１．７倍に向上しているのが確認された。
あるＯＵＶ２３−ＨＮＡ９００４株や市販納豆菌に比較
して、チロシン、フェニルアラニンのアナログに対する
耐性を獲得しており、それと同時にビタミンＫ２生産性
が約１．７倍に向上しているのが確認された。
【００３８】
【実施例２】常法に従い、１２０ｋｇの浸漬大豆を１．
８ｋｇｆ／ｃｍ２で２２分間加圧釜で蒸煮した。蒸煮大
豆１ｇあたり３，０００〜４，０００個の変異納豆菌Ｏ
ＵＶ２３４８１株の胞子を植菌し、以下常法に従って５
０ｇずつＰＳＰトレーにいれ、薄いフィルムで表面を覆
い、蓋をした後連続式発酵装置へ入れ、室温４０〜４４
℃で高湿度下で発酵を行った。発酵終了後、熟成されて
得られた納豆のビタミンＫ２を分析し、さらに２つの市
販納豆製品と比較して、官能的な評価を行った。その結
果を表４及び図１に示す。なお、官能評価は納豆を常用
するパネル８０名にて５段階評価法にて行い、その平均
値を示した。５点を良い、４点をやや良い、３点をどち
らでもない、２点をやや悪い、１点を悪いと評価した。
それぞれの評価項目を下表に示す。 評価項目 評価内容 ─────────────────────────────── 外観 納豆菌膜の皮膜の状態 香り アンモニア臭などがなく納豆特有の香りがある 味 苦みがなく、納豆特有の旨さがある 食感 納豆豆の適度の硬さがある 糸引き 納豆特有のかき混ぜ時の糸引きが強い 総合評価 上記５項目の総合評価
８ｋｇｆ／ｃｍ２で２２分間加圧釜で蒸煮した。蒸煮大
豆１ｇあたり３，０００〜４，０００個の変異納豆菌Ｏ
ＵＶ２３４８１株の胞子を植菌し、以下常法に従って５
０ｇずつＰＳＰトレーにいれ、薄いフィルムで表面を覆
い、蓋をした後連続式発酵装置へ入れ、室温４０〜４４
℃で高湿度下で発酵を行った。発酵終了後、熟成されて
得られた納豆のビタミンＫ２を分析し、さらに２つの市
販納豆製品と比較して、官能的な評価を行った。その結
果を表４及び図１に示す。なお、官能評価は納豆を常用
するパネル８０名にて５段階評価法にて行い、その平均
値を示した。５点を良い、４点をやや良い、３点をどち
らでもない、２点をやや悪い、１点を悪いと評価した。
それぞれの評価項目を下表に示す。 評価項目 評価内容 ─────────────────────────────── 外観 納豆菌膜の皮膜の状態 香り アンモニア臭などがなく納豆特有の香りがある 味 苦みがなく、納豆特有の旨さがある 食感 納豆豆の適度の硬さがある 糸引き 納豆特有のかき混ぜ時の糸引きが強い 総合評価 上記５項目の総合評価
【００３９】 （表４・納豆のビタミンＫ２含量と品質評価） ────────────────────────── ビタミンＫ２含量 納 豆 名 （ＭＫ−７） (μg/100g納豆) ────────────────────────── 市販納豆Ａ ８７０ 市販納豆Ｂ ７７６ OUV23481株使用納豆 １７００ ──────────────────────────
【００４０】 （表４：続き） ──────────────────────────────────── 納 豆 名 （品質評価） 外観 色 香り 糸引き 食感 味 総合評価 ──────────────────────────────────── 市販納豆Ａ 3.0 3.2 3.0 2.6 2.6 3.0 2.8 市販納豆Ｂ 3.2 3.2 3.4 3.4 2.8 3.0 3.0 OUV23481株使用納豆 2.6 2.4 3.6 3.2 2.8 3.0 3.4 ────────────────────────────────────
【００４１】変異納豆菌ＯＵＶ２３４８１株で製造した
納豆は、市販の納豆と比べてもほとんど遜色のない品質
であり、かつビタミンＫ２含量が向上した納豆であるこ
とが確認された。
納豆は、市販の納豆と比べてもほとんど遜色のない品質
であり、かつビタミンＫ２含量が向上した納豆であるこ
とが確認された。
【００４２】
【実施例３】市販納豆菌胞子液とビタミンＫ２高生産性
の変異納豆菌ＯＵＶ２３４８１株の胞子液を用い、市販
納豆菌胞子液を用いた場合は、特開平８−９９１６号公
報に開示の方法に準じ、室温４２℃と一定にして発酵時
間を１８時間（条件１）、２４時間（条件２）、４８時
間（条件３）と変化させた以外は実施例１に記載の方法
と同様にして、また変異納豆菌ＯＵＶ２３４８１株の胞
子液を用いた場合は、室温４０〜４５℃、高湿度下で発
酵時間を１８時間とする実施例１と同様の方法で、バッ
チ式納豆発酵室で納豆製造を行った。
の変異納豆菌ＯＵＶ２３４８１株の胞子液を用い、市販
納豆菌胞子液を用いた場合は、特開平８−９９１６号公
報に開示の方法に準じ、室温４２℃と一定にして発酵時
間を１８時間（条件１）、２４時間（条件２）、４８時
間（条件３）と変化させた以外は実施例１に記載の方法
と同様にして、また変異納豆菌ＯＵＶ２３４８１株の胞
子液を用いた場合は、室温４０〜４５℃、高湿度下で発
酵時間を１８時間とする実施例１と同様の方法で、バッ
チ式納豆発酵室で納豆製造を行った。
【００４３】すなわち、４℃で一晩浸漬した大豆を１．
８ｋｇｆ／ｃｍ２で１８分間蒸煮した。蒸煮大豆１ｇあ
たり３，０００〜４，０００個の胞子を植菌し、５０ｇ
ずつＰＳＰトレーにいれ、薄いフィルムで表面を覆い、
蓋をした後にバッチ式納豆発酵室で１８〜４８時間発酵
を行った。発酵終了後、熟成して得られた納豆のビタミ
ンＫ２を分析を行い、さらに官能的な評価を行った結果
を表５に示す。
８ｋｇｆ／ｃｍ２で１８分間蒸煮した。蒸煮大豆１ｇあ
たり３，０００〜４，０００個の胞子を植菌し、５０ｇ
ずつＰＳＰトレーにいれ、薄いフィルムで表面を覆い、
蓋をした後にバッチ式納豆発酵室で１８〜４８時間発酵
を行った。発酵終了後、熟成して得られた納豆のビタミ
ンＫ２を分析を行い、さらに官能的な評価を行った結果
を表５に示す。
【００４４】 （表５：納豆のビタミンＫ２含量と品質評価） ──────────────────────────────────── 発 酵 ビタミンＫ２ 揮発性アンモニア 納豆の種類 時 間 （ＭＫ−７） (ｐｐｍ） (hr) (μg/100g納豆) ──────────────────────────────────── OUV23481株納豆 １８ １７４０ ６ 市販納豆菌納豆（条件１） １８ ７１２ １５ 市販納豆菌納豆（条件２） ２４ １１１３ ６４ 市販納豆菌納豆（条件３） ４８ １５７６ １２８ ────────────────────────────────────
【００４５】 （表５：続き） ────────────────────────────────── 納豆の種類 （納豆の品質） ────────────────────────────────── OUV23481株納豆 良好（通常の品質） 市販納豆菌納豆（条件１） 良好（通常の品質） 市販納豆菌納豆（条件２） やや不良（少しアンモニア臭、苦味、 少しシャリ発生、豆色濃化、菌膜溶解気味） 市販納豆菌納豆（条件３） 不良（強いアンモニア臭、シャリ発生、 豆色こげ茶色、硬膜溶解、糸引き弱化） ───────────────────────────────────
【００４６】長時間発酵させることによって、確かに納
豆中のビタミンＫ２含量は増加することが確認された
が、発酵時間を２４時間、４８時間と長くすることによ
って、アンモニア濃度が増加するとともに、アンモニア
臭の強い納豆となり、またシャリが発生して食感が低下
するとともに、豆色が黒くなって菌膜も溶解して外観が
悪くなるなど品質は劣化することが確認された。これに
対して、変異納豆菌ＯＵＶ２３４８１株で発酵したもの
は、１８時間と通常の発酵時間であっても、市販納豆菌
で長時間の発酵を行ったものと同程度の高濃度のビタミ
ンＫ２を含有しており、かつ品質的にも通常の納豆とほ
ぼ同等の品質であることが確認された。すなわち、ビタ
ミンＫ２を高濃度で含有する高品質の納豆を通常の納豆
と同程度の発酵時間で効率良く製造できることが確認さ
れた。
豆中のビタミンＫ２含量は増加することが確認された
が、発酵時間を２４時間、４８時間と長くすることによ
って、アンモニア濃度が増加するとともに、アンモニア
臭の強い納豆となり、またシャリが発生して食感が低下
するとともに、豆色が黒くなって菌膜も溶解して外観が
悪くなるなど品質は劣化することが確認された。これに
対して、変異納豆菌ＯＵＶ２３４８１株で発酵したもの
は、１８時間と通常の発酵時間であっても、市販納豆菌
で長時間の発酵を行ったものと同程度の高濃度のビタミ
ンＫ２を含有しており、かつ品質的にも通常の納豆とほ
ぼ同等の品質であることが確認された。すなわち、ビタ
ミンＫ２を高濃度で含有する高品質の納豆を通常の納豆
と同程度の発酵時間で効率良く製造できることが確認さ
れた。
【００４７】
【発明の効果】本発明によれば、通常の品質とほとんで
変わりなく風味豊かで、かつ骨強化作用があると期待で
きるビタミンＫ２をより高濃度で含有する納豆を提供す
ることができる。また、納豆菌その他バチルス属菌にお
いて、ビタミンＫ２高生産株をきわめて効率よく育種、
分離することができる。
変わりなく風味豊かで、かつ骨強化作用があると期待で
きるビタミンＫ２をより高濃度で含有する納豆を提供す
ることができる。また、納豆菌その他バチルス属菌にお
いて、ビタミンＫ２高生産株をきわめて効率よく育種、
分離することができる。
【図１】ビタミンＫ２高含有納豆と市販納豆の品質評価
を示す。
を示す。
Claims (8)
- 【請求項１】 チロシン、フェニルアラニンのアナログ
に対する耐性を有し、且つ、ビタミンＫ２を高濃度に生
産するバチルス・サチルス（Bacillus subtilis）に属
する納豆菌。 - 【請求項２】 チロシン、フェニルアラニンのアナログ
がｐ−フルオロ−Ｄ，Ｌ−フェニルアラニン、ｍ−フル
オロ−Ｄ，Ｌ−フェニルアラニン、β−２−フェニルア
ラニン、β−２−チエニルアラニン、フェニルアラニン
ヒドロキサム酸、から選ばれる少なくともひとつである
こと、を特徴とする請求項１に記載の納豆菌。 - 【請求項３】 チロシン、フェニルアラニンのアナログ
を含有する選択培地を用いること、を特徴とするビタミ
ンＫ２生産性が向上したバチルス（Bacillus）属細菌の
育種方法。 - 【請求項４】 バチルス・サチリス（Bacillus subtili
s）に属する納豆菌について、これを突然変異処理した
後、あるいは自然界の中に存在するビタミンＫ２高生産
性菌をチロシン、フェニルアラニンのアナログ含有選択
培地で選択、分離すること、を特徴とするビタミンＫ２
生産性が向上した納豆菌の育種方法。 - 【請求項５】 チロシン、フェニルアラニンのアナログ
が、ｐ−フルオロ−Ｄ，Ｌ−フェニルアラニン、ｍ−フ
ルオロ−Ｄ，Ｌ−フェニルアラニン、β−２−フェニル
アラニン、β−２−チエニルアラニン、フェニルアラニ
ンヒドロキサム酸から選ばれる少なくともひとつである
こと、を特徴とする請求項３又は４に記載の方法。 - 【請求項６】 請求項４又は５の方法によって分離、育
種してなるビタミンＫ２高生産性納豆菌。 - 【請求項７】 請求項１、２又は６に記載のビタミンＫ
２高生産性納豆菌を使用すること、を特徴とするビタミ
ンＫ２高含有納豆の製造方法。 - 【請求項８】 請求項１、２又は６に記載のビタミンＫ
２高生産性納豆菌を用いて製造されたビタミンＫ２高含
有納豆。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP09976299A JP4264159B2 (ja) | 1999-04-07 | 1999-04-07 | ビタミンｋ２高生産性納豆菌、その育種方法及び納豆 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP09976299A JP4264159B2 (ja) | 1999-04-07 | 1999-04-07 | ビタミンｋ２高生産性納豆菌、その育種方法及び納豆 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2000287676A true JP2000287676A (ja) | 2000-10-17 |
| JP4264159B2 JP4264159B2 (ja) | 2009-05-13 |
Family
ID=14256000
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP09976299A Expired - Fee Related JP4264159B2 (ja) | 1999-04-07 | 1999-04-07 | ビタミンｋ２高生産性納豆菌、その育種方法及び納豆 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP4264159B2 (ja) |
Cited By (12)
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| JP2007181461A (ja) * | 2005-12-29 | 2007-07-19 | Gnosis Spa | ビタミンｋ２の製造方法 |
| WO2008040784A1 (fr) * | 2006-10-04 | 2008-04-10 | Compagnie Gervais Danone | Procédé de culture pour favoriser la production de vitamine k2 par les bactéries lactiques et ses applications à la préparation de produits alimentaires |
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1999
- 1999-04-07 JP JP09976299A patent/JP4264159B2/ja not_active Expired - Fee Related
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