JPH11507912A

JPH11507912A - システインプロテアーゼインヒビターとしてのα−（１，３−ジカルボニルエノールエーテル）メチルケトン

Info

Publication number: JPH11507912A
Application number: JP9501783A
Authority: JP
Inventors: ズィマーマン，メアリー・ピー; スミス，ロバート・イー; ベッカー，マーク・ダブリュー
Original assignee: プロトテック・インコーポレーテッド
Priority date: 1995-06-07
Filing date: 1996-06-04
Publication date: 1999-07-13
Also published as: WO1996040647A1; AU6100996A; EP0863883A4; EP0863883A1; CA2223268A1; US6147188A; US5714484A; AU713934B2

Abstract

(57)【要約】システインプロテアーゼに共有結合してエノレートもしくは１，３−ジカルボニル（またはそのエノール型）を放出して、該プロテアーゼを不活性化するシステインプロテアーゼインヒビター。本発明のシステインプロテアーゼインヒビターは、目的システインプロテアーゼを標的化して該プロテアーゼの活性部位のチオレートアニオン部位にインヒビターを配置させる第一部分；および共有結合によりシステインプロテアーゼに結合し、システインプロテアーゼの活性部位のチオレートアニオンに攻撃されて、β−ジカルボニルエノールエーテル脱離基を切り離すカルボニルまたはカルボニル相当部分を提供することにより、該プロテアーゼを非可逆的に不活性化する第二部分からなる。

Description

【発明の詳細な説明】システインプロテアーゼインヒビターとしてのα−（１，３−ジカルボニルエノールエーテル）メチルケトン継続中の出願との関連本出願は米国特許１９９３年１２月８日第０８／１６４，０３１の一部継続出願である。発明の分野本発明は一般にシステインプロテアーゼインヒビターと関連し、特にジカルボニルエノールエーテル残基を含むペプチジルケトンであるシステインプロテアーゼと関連する。本発明のシステインプロテアーゼインヒビターはシステインプロテアーゼ、特にカテプシンＢ、Ｌ、Ｈ、Ｃ、カルパインＩ、II、インターロイキン１β変換酵素のｉｎｖｉｖｏでの取り扱いのために特に設計されたものであり、これらのシステインプロテアーゼの古典的酵素に相当する物である。発明の背景ヒトの疾病に関するシステインプロテアーゼは３つの部類に分類することができる。（１）リソソームカテプシン（２）細胞質ゾルカルパインとインターロイキン変換酵素のようなプロセシング酵素（３）自触媒作用を持つ原核生物酵素カテプシンＢ、ＨそしてＣは典型的なタンパク分解に関わるシステインプロテアーゼである。これはそれ自体通常細胞のリソソームに局在する。これらの酵素がリソソーム外に見られる時は、これらは合成基質技術の利用により、そして、リウマチ様関節炎、骨関節炎、ニューモシスティスカリーニ、住血吸虫症、クルーズトリパノソーマ症、ブルーストリパノソーマ症、クリチジア、マラリア、歯周病、癌転移、異染性白質萎縮症、筋ジストロフィーなどのいくつかの疾病において原因となる役割を果たしているような天然内因性インヒビターによって示された。例えば、カテプシンＢ型酵素とリュウマチ様関節炎との関連が提唱された。van Noorden and Everts Selective Inhibition of Cysteine Proteinases by Z-Phe-Ala-CH₂F Suppresses Digestion of Collagen by Fibroblasts and Oste oclasts，178 Biochemical and Biophysical Research Communications 178； Rifkin，Vernillo，Kleekner，Auszmann，Rosenberg and Zimmmerman，Catheps in B and L Activities in Isolated Osteoclasts，179 Biochemical and Bioph ysical Research Communications 63；Grinde,The Thiol Proteinase Inhibitor s，Z-Phe-Phe-CHN₂ and Z-Phe-Ala-CHN₂，Inhibit Lysosomal Protein Degrada tion in Isolated Rat Hepatocytes，757 Biochemica et Biophysica Acta 15； Mason，Bartholomew and Hardwick，The Use of Benzyl oxycarbonyl［¹²⁵I］io dotyrosylalanyldiazomethane as a Probe for Active Cysteine Proteinases i n Human Tissues，263 Biochem．J．945；van Noorden，Smith and Rasnick，Cy steine Proteinase Activity in Arthritic Rat Knee Joints and the Effects of a Selective Systemic Inhibitor，Z-Phe-Ala-CH₂F，15 J．Rheumatol．1525 ；and van Noorden，Vogels and Smith,Localization and Cytophotometric Ana lysis of Cathepsin B Activity in Unfixed and Undecalified Cryostat Secti ons of Whole Rat Knee Joints，37 J．Histochemistry and Cytochemistry 617 ．カテプシンＢと骨関節炎の関連は Dalaisse，Eeckhout，Vaseらによって提唱された。In Vivo and In Vitro Evidence for the Involvement of Cysteine Pr oteinases in Bone Resorption，125 Biochemical and Biophysical Research C ommunications 441；カテプシンＢとニューモスティスカリーニとの関連はHayes ，Stubberfield，McBride，Wilsonらによって提唱された。Alterations in Cyst eine Proteinase Content of Rat Lung Associated with Development of Pneum ocystis Carinii Infection，59 Infection and Immunity 3581；システインプロテアーゼと住血吸虫症との関連は Cohen，Gregoret，Amiri，Aldape，Railey ，McKerrow らによって提唱された。Arresting Tissue Invasion of a Parasite by Protease Inhibitors Chosen With the Aid of Computer Modeling，30 Bio chemistry 11221．システインプロテアーゼとクルーズトリパノソーマ症、ブルーストリパノソーマ症、そしてクリチジアとの関連は Ashall，Harris，Rob erts，Healy，Shaw らによって提唱された。Substrate Specificity and Inhibi tor Sensitivity of a Trypanosolnatid Alkaline Peptidase，1035 Biochimica et Biophysica Acta 293，そして／または Ashall，Angliker，Shaw らによって提唱された。Lysis of Trypanosomes by Peptidyl Fluoromethyl Ketones，17 0 Biochemical and Biophysical Research Communications 923.システインプロテアーゼとマラリアの関連が提唱された。Rosenthal，Wollish，Palmer and Ras nick,Antimalarial Effects of Peptide Inhibitors of a Plasmodium Falcipar um Cysteine Proteinase，88 J．Clin．Invest．1467，Rosenthal，Lee and Smi th,Inhibition of a Plasmodium Vinckei Cysteine Proteinase Cures Murine M alaria，91 J．Clin．Invest．1052．カテプシンＢと癌転移との関連は Smith， Rasnick，Burdick，Cho，Rose，Vahratianらによって提唱された。Visualizatio n of Time-Dependent Inactivation of Human Tumor Cathepsin B Isozymes by a Peptidyl Fluoromethyl Ketone Using a Fluorescent Print Technique，8 A nti-cancer Research 525.カテプシンＢと癌の関連は Gordon とMouradによって提唱された。2 Blood Coagulation and Fibrinolysis 735．カテプシンＢと歯周病との関連が提唱された。Cox，Cho，Eley and Smith,A Simple，Combined Fl uorogenic and Chromogenic Method for the Assay of Proteases in Gingival Crevicular Fluid，25 J．Periodont．Res．164； Uitto，Larjava，Heino and Sorsa，A Protease of Bacteroides Gingivalis Degrades Cell Surface and Matrix Glycoproteins of Cultured Gingival Fibroblasts and Induces Secret ion of Collagenase and Plasminogen Activator，57 Infection and Immunity 213；Kunimatsu，Ichimaru，Kato and Kato，Cathepsins B，H and L Activitie s in Gingival Crevicular Fluid From Chronic Adult Periodontitis Patients and Experimental Gingivitis Subjects，25 J Periodont Res 69； Beighton ，Radford and Naylor,Protease Activity in Gingival Crevicular Fluid From Discete Periodontal Sites in Humans With Periodontitis or Gingivitis；3 5 Archs oral Biol．329； Cox and Eley,Prelilllinary Studies on Cysteine and Serine Proteinase Activities in Inflamed Human Gingiva Using Diff erent 7-Amino-4-Trifluoromethyl Coumarin Substrares and Protease Inhibit ors，32 Archs oral Biol．599； Eisenhauer，Hutchinson，Javed and McDona ld，Identification of a Cathepsin B-like Protease in the Crevicular Flui d of Gingivitis Patients，62 J Dent Res 917．カテプシンＢと異染性白質萎縮症との関連は van Figura，Steckel，Conary，Hasilik，Shaw らによって提唱された。Heterogeneity in Late-Onset Metachromatic Leukodystrophy．Effect of Inhinitors of Cysteine Proteinases，39 Am J Hum Genet．371．カテプシンＢと筋白質萎縮症との関連は Valentine，Winand，Pradhan，Moise，de Lahun ta，Kornegay，Cooperらによって提唱された。Canine X-Linked Muscular Dystr ophy as an Animal Model of Duchenne Muscular Dystrophy：A Review，42 Am J Hum Genet 352．カテプシンＢとライノウイルスとの関連が Knott，Orr，Mont gomery，Sullivan，Weston らによって提唱されている。The Expression and Pu rification of Human Rhinovirus Protease 3C，182 Eur．J．Biochem．547.カテプシンＢと腎臓疾病との関連が Baricos，OユConnor，Cortez，Wu，Shahらによって提唱されている。The Cysteine Proteinase Inhibitor，E-64，Reduces Pro teinuria in an Experimental Model of Glomerulonephritis，155 Biochemical and Biophysical Research Communications 1318.カテプシンＢと多発性硬化症との関連が Dahlman，Rutschmann，Kuehn，Reinauer らによって提唱された。” Activation of the Multicatalytic Proteinase from Rat Skeletal Muscle by Fatty Acids or Sodium Dodecyl Sulphate，228 Biochem．J．171 ある疾病とカテプシンＨとＣの関連もまた確立されている。例えばカテプシンＨは、直接ニューモラティスカリーニの原因病原体に、また神経筋疾病、デュシェーヌジストロフィー、多発性筋炎、そして神経障害と結びついた。Stauber，R iggs and Schochet，Fluoresent protease Histochemistry in Neuromuscular D isease，Neurology 194（Suppl．1）March 1984； Stsuber，Schochet，Riggs ，Gutmann and Crosby,Nemaline Rod Myopathy：Evidence for a Protease Defi ciency，Neurology 34（Suppl．1）March 1984.同様に、カテプシンＣは直接ネマリンミオパシーのような筋肉の疾病、ウイルスの感染、そして骨髄セリンプロテアーゼ（エラスターゼとグランザイムＡ）のプロセシングと活性化と関連していた。McGuire，Lipsky and Thiele,Generation of Active Myeloid and Lympho d Granule Serine Proteases Requires Processing by the Granule Thiol Prot ease Dipeptidyl Peptidase I，268 J．Biol．Chem．2458-67； L.Polgar，Mec hanisms of Protease Action（1989）； Brown，McGuire and Thiele,Dipeptid yl peptidase I is Enriched in Granules of In Vitro- and In Vivo-Activate d Cytotoxic T Lymphocytes，150 Immunology 4733-42．Brown et al.らの研究は、基質特異性に基づいた他のシステイニル酵素の存在下でのカテプシンＣ（ＤＰＰ−Ｉ）の抑制の可能性を効果的に立証した。残念ながら、この研究でのジアゾケトンの使用は突然変異誘発性であり、ｉｎｖｉｖｏでの適用に充当しないと信じられている。カルパインと呼ばれる、細胞質ゾルの、もしくは膜結合性システインプロテアーゼもまた、いくつかの疾病において関わり合いが示された。例えば、カルパインインヒビターは、筋ジストロフィー、筋萎縮もしくはこれに類似するもののような筋の疾病の治療、25 Taisha（Metabolism）183（1988）；10 J．Pharm．Dyn amics 678（1987）心筋梗塞、発作などの虚血性疾病の治療、312 New Eng．J．M ed．159（1985）; 43 Saishin Igaku 783（1988）; 36 Arzneimittel Forschung /Drug Research 190，671（1986）；526 Brain Research 177（1990）脳障害によって引き起こされる意識障害、もしくは運動障害の改善、16 Neurochemical R esearch 483（1991）；65 J．Neurosurgery 92（1986）多発性硬化症、末梢神経ニューロパシー等のような神経細胞の脱髄によって引き起こされる疾病の治療、 47 J．Neurochemistry 1007（1986）白内障の治療の治療、 28 Investigative Ophthalmology & Visual Science 1702（1987）；34 Experimental Eye Resear ch 413（1982）；6 Lens and Eye Toxicity Research 725（1989）；32 Investi gative Ophthalmology & Visual Science 533（1991）に有用でありうる。カルパインインヒビターは劇症肝炎の治療剤として、トロンビンによって引き起こされる血小板の凝集にたいする抑制物質として、57 Thrombosis Research 8 47（1990）そして、乳癌、前立腺癌もしくは前立腺肥大症、これらは性ホルモンレセプターの異常活性によって引き起こされると推測されているものであるが、このような疾病の治療剤として使われる可能性もある。あるプロテアーゼインヒビターはまた、アルツハイマー病とも結びつけられた。See，e.g.，11 Scientific American 40（1991）さらに、チオールプロテアーゼインヒビターは抗炎症薬として、263 J．Biological Chem．1915（1988）；98 J．Biochem．87（1985）抗アレルギー薬として、42 J．Antibiotics 136 2（1989）; そして癌の転移を抑制するのに、57 Seikagaku 1202（1985）; Tumo r Progression and Markers 47（1982）；256 J．Biological Chemistry 8536 （1984）有用であると信じられている。さらに、インターロイキン１β変換酵素（ＩＣＥ）は、強力な慢性及び急性炎症疾病の病因の媒介物であるサイトカインＩＬ−１βの構成に関するシステインプロテアーゼであることが示された。Tocci and Schnlidt，ICOP Newsletter，S eptembern 1994．この酵素のインヒビターは最近報告された。Thornberry，Pete rson，Zhao，Howard，Griffin，and Chapman,Inactivation of Interleukin-1β -Converting Enzyme by Peptide(Acyloxy)methyl Ketones，33 Biochemistry 3 934（1994）；Dolle，Singh，Rinker，Hoyer，Prasad，Graybill，Salvino，Hel aszek，Miller and Ator,Asparty1α-((1-Phenyl-3-(trifluoromethyl)-pyrazol -5-yl)-oxy)methyl Ketonesas Interleukin-1 β Converting Enzyme Inhibito rs：Significance of the P1 and P3 Amido Nitrogens for Enzyme-Peptide Inh ibitor Binding 37 J．Med．Chem．3863；Mjalli，Chapman，MacCoss，Thornbe rry，Peterson,Activated Ketones as Potent Reversible Inhibitors of Inter leukin-1β-Converting Enzyme 4 Biooganic & Medicinal Chemistry Letters ，1965；Dolle，Singh，Whipple，Osifo，Speier，Graybill，Gregory，Harris ，Helaszek，Miller and Ator Aspartyl α-((Diphenylphosphinyl)-oxy)-met h y1 Ketones as Novel Inhibitors of Interleukin-1β-Converting Enzyme：Uti lity of the Diphenylphosphionic Acide Leaving Group for the Inhibition o f Cysteine Proteases 38 J．Med．Chem．220．最も有望なシステインインヒビターの型は、特異的にインヒビターを目的酵素の活性部位に向ける、プログラムされたペプチド配列に融合した適当なα脱離基のある活性化カルボニル基を持つ。いったん活性部位内部にはいると、インヒビターカルボニル基はシステインチオレートアニオンによって攻撃され、結果としヘミアセタールを与える。そしてこれはチオレートの１，２−熱転位と続いて起きるαケトン残基の排除を通して破壊される。酵素とインヒビター間の結合はここでは不変性になり、酵素は不可逆的に不活性化される。特定の酵素の不活性化におけるインヒビターの有用性はそれゆえ、ペプチドタンパクの「カギとカギ穴」結合のみでなく、たたみ込まれたα脱離基をインヒビターの残りの部分へ保持している結合の反応性にも依存する。脱離基が、ヘミチオアセタール中間生成物の分解における硫黄の１，２−転位による分子内置換に対してのみ反応するということが重要である。活性化されたカルボニル基、適当なα脱離基と、効果的かつ特異的にインヒビターを目的の酵素の活性部位に融合させるペプチド配列を持つシステインプロテイナーゼインヒビターに関係する最初の研究は Rasnickによる米国特許第４，５１８，５２８によって開示された。この特許はここにリファレンスとして組み込まれている。この特許は、ペプチジルフルオロメチルケトンを選択活性及び効力において新しいシステインプロテアーゼとして確立した。フルオロメチルケトンは Rasnickによって記述され、合成され、下記構造式であらわすことのできる一連の化合物である。式中、Ｒ₁とＲ₂は独立に水素、１−６炭素のアルキル、１−６炭素の置換アルキル、アリール、アルキル残基が１−４炭素であるアルキルアリールの内のいずれかである。ｎは１−４までの整数、Ｘはペプチド末端のブロッキンググループ、Ｙはアミノ酸もしくは１−６個のアミノ酸からなるペプチド鎖である。フェノール脱離基を用いたペプチジルケトンインヒビターはペプチジルフルオロケトンににている。当技術分野で知られているとおり、酸素は大きさ、および電気陰性度において最も近くフッ素に接近する。さらに酸素が芳香環に結合しているときこれらの電気陰性度の大きさはｓｐ²炭素の電子吸引効果のためにより近くなる。α水素のｐＫａによって見積もったときにα−ケトフェノール対α− ケトフルオリドの誘導効果は実験誤差の範囲内でほぼ等しいと考えられる。残念ながら、フェノキシグループを用いた先行技術インヒビターの脱離基は毒性と水溶性等の問題が存在する。水溶性はバイオアベイラビリティーがその成功の主たる基準になるよおなペプチド誘動体性の薬剤分野では特に重要である。ＦＡＤにより好ましいとされる水溶性は５mg/ml である。成功した先行技術のインヒビターのｉｎｖｉｖｏでの有用性は脱離基の不溶性によるものに限られた。今日までのｉｎｖｉｖｏでの適用はインターロイキン１β変換酵素の抑制において必要であるように、許容されているエステル、酸、フリーのアミノ酸側鎖が必要なペプチドを持つインヒビターに集中していた。 Revesz，Briswalter，He ng，Leutwiler，Mueller and Wuethrich，35 Tetrahedron Letters 9693．国際特許出願WO９３／０９１３５は、Ｎ−ヒドロキシテトラゾールが脱離基とするインターロイキン１β変換酵素のためにデザインされたインヒビターが開示された。さらに、テトラゾールは Ceforanide などのような他の薬剤物質にもつかわれている。酸素陰イオン脱離基を用いた他のシステインプロテアーゼのｉｎｖｉｖｏでの阻害は最初に Zimmerman，Bissell，Smithらにより、遊離のアミノまたは酸性側鎖の存在を必要としない選択的なペプチドの化合物をもつペプチジルα芳香族エーテルメチルケトンの利用でバイオアベイラビリティーが上昇することを示した米国特許第５，３７４，６２３において開示された。その後、リシンを側鎖に持つペプチジル（アシロキシ）メチルケトンがｉｎｖｉｖｏで効力を持つことが報告された。Wagner，Smith，Coles，Copp，Ernest and Krantz，In Vivo In hibition of Cathepsin B by Peptidyl(Acyloxy)methyl Ketones，37 J．Med． Chem．1833．残念なことに、ペプチジル（アシルオキシ）メチルケトンはエステラーゼにより分解されるエステルで、このことはα−ケトエーテルをシステインプロテアーゼインヒビターのための好ましい構造とする。上記したように、水溶性と毒性の性質を改善した、そして特にｉｎｖｉｖｏでの利用にかなうようなシステインプロテアーゼインヒビターの必要性は現存し続けると見ることができる。本発明はこのような要求に取り組んでいる。発明の概要本発明を簡潔にまとめると、システインプロテアーゼインヒビターの一つのクラスが提供されたのであるが、これらは、システインプロテアーゼに共有結合し、1,3-ジカルボニルのエノレート（enolate ）（もしくは、そのエノール型）を脱離することで、このシステインプロテアーゼを失活させる。従って、本発明のシステインプロテアーゼインヒビターは二つの部分（portion ）を含む。一つの部位は、目的のシステインプロテアーゼをターゲットとして、プロテアーゼの活性化部位であるチオレートアニオンの近くに、インヒビターを位置させる。二つめの部位は、システインプロテアーゼに共有結合し、カルボニルまたはそれに相当する基を提供し、それをシステインプロテアーゼの活性部位であるチオレートアニオンが攻撃し、引き続いてβ- ジカルボニルエノールエーテル脱離基が脱離することにより、このプロテアーゼを不可逆的に失活させることである。本発明のシステインプロテアーゼインヒビターは、以下の式によって定義されうる。式中、B はH またはN 末端保護基であり、R_1-3はそれぞれアミノ酸P_1-3のアミノ酸の側鎖であり、n は0 または1 であり、m は0 または1 であり、G は、以下の式によって定義されるβ- ジカルボニルエノールエーテル脱離基（leaving grou p ）の、５員環部分又は６員環部分である。一態様として、本発明の組成物は、次のカテプシンもしくはカルパインのインヒビターである。式中B はH またはN 末端保護基であり、R₁はアミノ酸残基P₁のアミノ酸側鎖であり、その中で、アミノ酸P₁はアスパラギン酸ではなく、Pnはそれぞれアミノ酸残基、もしくはアミノ酸の代わりの複素環式環であり、該複素環式環は、ピペラジン、デカヒドロイソキノリン、ピロリノン、ピリジン、ピリドン、カルボリノン、キナゾリン、ピリミドンなどである。m は0 または正の整数であり、R₄はヒドロキシル、アルコキシル、アシル、水素、アルキル、またはフェニルであり、R₅ とR₆は共同でカルボキシルグループであるか、もしくはアルキルまたはアリールグループとして終結する二重結合であるか、もしくは、R₅とR₆はそれぞれ独立して、R₄が水素、アルキル、フェニルである時、アシル、アリール、またはヘテロアリールであるし、それ以外であるとき、アシル、アルキル、水素、アリール、またはヘテロアリールである。そして、ＸはN 、S 、O 、またはCH₂である。その他の態様として、本発明の組成物は次式のICE インヒビターである。式中、B はH またはN 末端保護基であり、R₁はアスパラギン酸のアミノ酸側鎖であり、Pnはそれぞれアミノ酸残基、もしくはアミノ酸の代わりの複素環式環であり、該複素環式環は、ピペラジン、デカヒドロイソキノリン、ピロリノン、ピリジン、ピリドン、カルボリノン、キナゾリン、ピリミドンなどである。m は0 または正の整数であり、R₄はヒドロキシル、アルコキシル、アシル、水素、アルキル、またはフェニルであり、R₅とR₆は共同でカルボキシルグループであるか、もしくはアルキルまたはアリールグループとして終結する二重結合であるか、もしくは、R₅とR₆はそれぞれ独立して、R₄が水素、アルキル、フェニルである時、アシル、アリール、またはヘテロアリールであるし、それ以外での時、アシル、アルキル、水素、アリール、またはヘテロアリールである。そして、ＸはN 、S 、 O 、またはCH₂である。その他の態様として、システインプロテアーゼインヒビターは以下の式で定義される。式中、B はH またはN 末端保護基であり、Pnはそれぞれアミノ酸残基、もしくはアミノ酸の代わりの複素環式環であり、該複素環式環は、ピペラジン、デカヒドロイソキノリン、ピロリノン、ピリジン、ピリドン、カルボリノン、キナゾリン、ピリミドンなどである。m は0 または正の整数であり、R₄はヒドロキシル、アルコキシル、アシル、水素、アルキル、またはフェニルであり、R₁₀はH または場合により置換されたアルキル、アリール、ヘテロアリル、もしくは糖の残基であり、ＸはN 、S 、O 、またはCH₂である。その他の態様として、システインプロテアーゼインヒビターは以下の式で定義される。式中、B はH またはN 末端保護基であり、Pnはそれぞれアミノ酸残基、もしくはアミノ酸の代わりの複素環式環であり、該複素環式環は、ピペラジン、デカヒドロイソキノリン、ピロリノン、ピリジン、ピリドン、カルボリノン、キナゾリン、ピリミドンなどである。m は0 または正の整数であり、Ｒ₅とＲ₆はそれぞれ独立して水素、アルキル、またはアシルであり、そしてＸはN 、S 、O 、またはCH₂ である。その他の態様として、システインプロテアーゼインヒビターは以下の式で定義される。式中、B はH またはN 末端保護基であり、Pnはそれぞれアミノ酸残基、もしくはアミノ酸の代わりの複素環式環であり、該複素環式環は、ピペラジン、デカヒドロイソキノリン、ピロリノン、ピリジン、ピリドン、カルボリノン、キナゾリン、ピリミドンなどである。m は0 または正の整数であり、R₂とR₃はそれぞれ独立にH またはアルキルまたはアルケニルグループであり、そしてＸはN 、S 、O 、またはCH₂である。その他の態様として、システインプロテアーゼインヒビターは以下の式で定義される。式中、B はH またはN 末端保護基であり、Pnはそれぞれアミノ酸残基、もしくはアミノ酸の代わりの複素環式環であり、該複素環式環は、ピペラジン、デカヒドロイソキノリン、ピロリノン、ピリジン、ピリドン、カルボリノン、キナゾリン、ピリミドンなどである。m は0 または正の整数であり、R₄はヒドロキシル、アルコキシル、アシル、水素、アルキル、またはフェニルであり、R₅、R₆、R₇とR₈ はそれぞれ独立に水素、アルキル、アシル、フェニル、ハロ、ヒドロキシル、オキシ、またはアルコキシであり、そしてＸはN 、S 、O 、またはCH₂である。その他の態様として、システインプロテアーゼインヒビターは以下の式で定義される。式中、B はH またはN 末端保護基であり、Pnはそれぞれアミノ酸残基、もしくはアミノ酸の代わりの複素環式環であり、該複素環式環は、ピペラジン、デカヒドロイソキノリン、ピロリノン、ピリジン、ピリドン、カルボリノン、キナゾリン、ピリミドンなどである。m は0 または正の整数であり、R₄はヒドロキシル、アルコキシル、アシル、水素、アルキル、またはフェニルであり、R₅とR₆はR₇とR₈ につく可能性があり、飽和または不飽和の環もしくは、芳香環を形成し、ＸはN 、S 、O 、またはCH₂である。その他の態様として、システインプロテアーゼインヒビターは以下の式で定義される。式中、B はH またはN 末端保護基であり、Pnはそれぞれアミノ酸残基、もしくはアミノ酸の代わりの複素環式環であり、該複素環式環は、ピペラジン、デカヒドロイソキノリン、ピロリノン、ピリジン、ピリドン、カルボリノン、キナゾリン、ピリミドンなどである。m は0 または正の整数であり、R₄はヒドロキシル、アルコキシル、アシル、水素、アルキル、またはフェニルであり、R₅とR₈はそれぞれ独立して水素、アルキル、アシル、フェニル、ハロ、ヒドロキシル、オキシまたはアルコキシであるか、もしくはR₅はR₈に結合して、飽和または不飽和、もしくは芳香性の同素環かヘテロ環を形成し、そして、ＸはN 、S 、O 、またはCH₂ である。本発明の一つの目的（object）は、より可溶性、および毒性の側面において改良されたシステインプロテアーゼインヒビターを提供することである。本発明のさらなる目的は、特にin vivo の適用において効果的なシステインプロテアーゼインヒビターの一つのクラスを提供することである。本発明のさらなる目的と利点は、次の説明で明らかになるであろう。好ましい態様の説明発明の原理の理解を促進する目的のために、好ましい態様に対する参照がなされ、その態様を説明するのに具体的用語が使われるだろう。しかしながら、本明細書の記載は発明の範囲を限定するものではなく、発明が関連する技術分野の専門家が普通に考えつくような発明の変更や修正、発明の原理の更なる応用は本発明の範囲内であるということは理解されるだろう。上記のように本発明は１、３ジカルボニルエノールエーテル脱離基を含むシステインプロテアーゼインヒビターに関係する。発明の一つの局面では、特にin v ivo での応用に効果があると示されたシステインプロテアーゼインヒビターの一群が開示される。本明細書で説明されているシステインプロテアーゼインヒビターは二つの部分の合計としての機能を持つ。一つめの部分はそれぞれのインヒビターの酵素との特異性を決定する。この特異性はその酵素の本来の基質の性質を模倣、または改善した物質の空間的、疎水的、親水的、イオン性の相互作用によるものである。二つ目の部分は、酵素と二段階のメカニズムで強固に結合する孔である。１段階目では、酵素のチオラート(thiolate)がインヒビターのカルボニルに求核攻撃してヘミチオケタールをつくる。この中間生成物が、チオラートの１、２転移を受けて１、３ジカルボニルのエノラート（またはエノール型）を解離することはエネルギー的に有利である。そして、酵素は非可逆的にインヒビターに結合することになる。本発明のインヒビターにおいては、脱離基は１，３−ジカルボニルのエノール型である。したがって、本発明のシステインプロテアーゼインヒビターは、好ましくは適切なα脱離基を生じる、活性化したカルボニルを含んでいる。このα脱離基はインヒビターを特異的に目的の酵素の活性部位に向かわせるようにプログラムされたペプチド配列に融合している（例えばZ-Phe-PheCHN₂はカテプシンB よりもカテプシンL を優先的に抑制する）。活性部位の内側に入ると、このインヒビターのカルボニルはシステインのチオラートアニオンに攻撃されてヘミアセタール型になる。もし、ひきつずいてα脱離基が外れると、酵素とインヒビターの結合は永続的になり、酵素は非可逆的に失活する。個々の酵素に対するインヒビターの選択性はペプチド部分の「錠前と鍵」のような適合性だけでなく、脱離基をインヒビターのその他の部分に結びつけている結合の反応性にも依存している。脱離基はヘミチオアセタール中間体の分解において、硫黄分子の１、２転移を経由した分子内置換反応の反応性がをもつべきことは重要である。プロテアーゼ抑制のメカニズム以下のFIG1に示す。本発明の好ましいインヒビターの数々は、以下の式により一般的に記述することができる。式中、B はH またはN 末端保護基であり、 R_1-3はそれぞれ、アミノ酸P_1-3のアミノ酸側鎖であり、 n は０または１であり、 m は０または１であり、 X は以下によって定義されるβ- ジカルボニルエノールエーテル脱離基の５員環または６員環部分である。一態様において、本発明の物質は以下の式のカテプシンまたはカルパインインヒビターである。式中、B はH またはN 末端保護基であり、 R₁はP₁アミノ酸残基のアミノ酸側鎖であり、その中でP₁アミノ酸はアスパラギン酸ではない、 Pnはそれぞれアミノ酸残基であるか、またはアミノ酸の代わりの複素環であり、その中で複素環はピペラジン（piperazine）、デカヒドロイソキノリン（decahy d roisoquinoline）、ピロリノン(pyrrolinone)、ピリジン（pyrizine）、カルボリノン(carbolinone)、キナゾリン(quinazoline)、ピリミドン（pyrimidone）、または類似物であり、 m は０または正の整数あり、 R₄はヒドロキシル基、アルコキシル基、アシル基、水素原子、アルキル基またはフェニル基、であり、 R₅とR₆は一緒になってカルボキシル基、またはアルキル基またはアリール基で終わる二重結合、またはもし、R₄が水素原子、アルキル基、フェニル基であるならば、それぞれが独立にアシル基とアリール基またはヘテロアリールでありそれ以外の時は、それぞれ独立にアシル基、アルキル基、水素原子、アリール基、ヘテロアリール基であり、 X はN 、S 、O またはCH₂である。別の態様では本発明の物質は以下の式のICE インヒビターである。式中、B はH またはN 末端保護基であり、 R₁はアスパラギン酸のアミノ酸側鎖であり、 Pnはそれぞれ一アミノ酸残基であるか、またはアミノ酸の代わりの複素環であり、その中で複素環はピペラジン（piperazine）、デカヒドロイソキノリン（deca h idroisoquinoline）、ピロリノン(pyrrolinone)、ピリジン（pyrizine）、カルボリノン(carbolinone)、キナゾリン(quinazoline)、ピリミドン（pyrimidone ）、または類似物であり、 m は０または正の整数あり、 R₄はヒドロキシル基、アルコキシル基、アシル基、水素原子、アルキル基またはフェニル基、であり、 R₅とR₆は一緒になってカルボキシル基、またはアルキル基またはアリール基で終わる二重結合、またはもし、R₄が水素原子、アルキル基、フェニル基であるならば、それぞれが独立してアシル基、アリール基またはヘテロアリールであり、それ以外の場合は、それぞれがアシル基、アルキル基、水素原子、アリール基、ヘテロアリール基などであり、 X はN 、S、O またはCH₂である。別の態様ではシステインプロテアーゼインヒビターは以下の式である。式中、B はH またはN 末端保護基であり、 Pnはそれぞれアミノ酸残基であるか、またはアミノ酸の代わりの複素環であり、その中で複素環はピペラジン（piperazine）、デカヒドロイソキノリン（decahi d roisoquinoline）、ピロリノン(pyrrolinone)、ピリジン（pyrizine）、カルボリノン(carbolinone)、キナゾリン(quinazoline)、ピリミドン（pyrimidone）、または類似物であり、 m は０または正の整数あり、 R₄はヒドロキシル基、アルコキシル基、アシル基、水素原子、アルキル基またはフェニル基、であり、 R₁₀は水素原子、または選択的にアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基、または、糖残基に置換され、 X はN 、S 、O またはCH₂である。この態様ではX が最も好まれる。別の態様ではシステインプロテアーゼインヒビターは以下の式である。式中、B はH またはN 末端保護基であり、 Pnはそれぞれアミノ酸残基であるか、またはアミノ酸の代わりの複素環であり、その中で複素環はピペラジン（piperazine）、デカヒドロイソキノリン（decahi d roisoquinoline）、ピロリノン(pyrrolinone)、ピリジン（pyrizine）、カルボリノン(carbolinone)、キナゾリン(quinazoline)、ピリミドン（pyrimidone）、または類似物であり、 m は０または正の整数あり、 R₅とR₆はそれぞれが水素原子、アルキル基、アシル基であり、 X はN 、S 、O またはCH₂である。 R₅とR₆はそれぞれ水素原子が最も好まれる。一つの代わりの状態ては、複素環脱離基のヒドロキシ基上のＨは、アルキルまたはアルケニルで置換されていてもよい。代わりの態様ではシステインプロテアーゼインヒビターは以下の式である。式中、B はH またはN 末端保護基であり、 Pnはそれぞれアミノ酸残基であるか、またはアミノ酸の代わりの複素環であり、その中で複素環はピペラジン（piperazine）、デカヒドロイソキノリン（decahi d roisoquinoline）、ピロリノン(pyrrolinone)、ピリジン（pyrizine）、カルボリノン(carbolinone)、キナゾリン(quinazoline)、ピリミドン（pyrimidone）、または類似物であり、 m は０または正の整数あり、 R₄とＲ₃は独立してＨまたはアルキルまたはアルケニル基であり、 X はN 、S 、O またはCH₂である。最も好ましくは、上記化合物Ａ２のように、Ｒ₅はＣＨ₃であり、Ｒ₆はＣ₂Ｈ₅ である。他の具体例として、システインプロテアーゼインヒビターは次式で示される。式中、ＢはＨまたはＮ末端保護基である。Pnはアミノ酸残基、またはアミノ酸の複素環置換体であり、その複素環はピペラジン、デカヒドロイソキノリン、ピロリノン、ピリジン、カルボリノン、キナゾリン、ピリミドンまたはそれに類するものである。ｍは０または正の整数である。Ｒ₄はヒドロキシル、アルコキシル、アシル、水素、アルキル、またはフェニルである。Ｒ₅、Ｒ₆、Ｒ₇及びＲ₈は独立して水素、アルキル、アシル、フェニル、ハロゲン、ヒドロキシル、オキシまたはアルコキシであり、そして、ＸはＮ、Ｓ、ＯまたはCH₂である。他の具体例として、システインプロテアーゼインヒビターは次式で示される。式中、ＢはＨまたはＮ末端保護基である。Pnはアミノ酸残基、またはアミノ酸の複素環置換体であり、その複素環はピペラジン、デカヒドロイソキノリン、ピロリノン、ピリジン、カルボリノン、キナゾリン、ピリミドンまたはそれに類するものである。ｍは０または正の整数である。Ｒ₄はヒドロキシル、アルコキシル、アシル、水素、アルキル、またはフェニルである。Ｒ₅及びＲ₆はＲ₇及びＲ₈と一緒になって、飽和、不飽和あるいは芳香性の環を形成しており、そしてＸはＮ、Ｓ、ＯまたはCH₂である。他の具体例として、システインプロテアーゼインヒビターは次式で示される。式中、ＢはＨまたはＮ末端保護基である。Pnはアミノ酸残基、またはアミノ酸の複素環置換体であり、その複素環はピペラジン、デカヒドロイソキノリン、ピロリノン、ピリジン、カルボリノン、キナゾリン、ピリミドンまたはそれに類するものである。ｍは０または正の整数である。Ｒ₄はヒドロキシル、アルコキシル、アシル、水素、アルキル、またはフェニルである。Ｒ₅及びＲ₈は独立した水素、アルキル、アシル、フェニル、ハロゲン(h alo)、ヒドロキシル、オキシまたはアルコキシであり、もしくはＲ₅はＲ₈と結合していて飽和、不飽和あるいは芳香性の同素環や複素環を形成しているものである。ＸはＮ、Ｓ、ＯまたはCH₂である。Ｎ末端アミノ酸窒素のアミノ酸保護基Ｂに関しては、多くの適当なペプチド末端保護基が本技術において知られている。例えば、グロス(E.Gross)とマイエンホウァー(J.Meienhofer)ら(The Peptides,Vol.3)によって同定された末端保護基は、一般的に本発明に用いるのに適している。好ましい保護基はN-モルフォリンカルボニルまたは内在性鎮痛、抗炎症作用を持つプロピオン酸誘導体の誘導体を含んでいる。内在性鎮痛、抗炎症作用を持つ保護基の例は、以下に見出せるだろう。ギルマン(Gilman)、グッドマン(Goodman)、ギルマン(Gilman)、（The Pharm aco logical Basis of Therapeutics,Sixth Ed,MacMillan,Chapter29）本明細書に定義するように、ペプチド末端保護基はアミノ酸もしくはペプチド鎖に直接結合している。特に効果的な保護基の一つは、4-モルフォリニルカルボニル("Mu")保護基であり、以下に示す：別の有用な保護基には、ドエティー(Doherty)らにより報告されたモルフィンスルホニル基や関連基が含まれる。（Doherty et al．”Design and Synthesis of Potent,Selective and Orally Active Fluorine‐Containing Renin Inhibit ors”35 J.Med.Chem.2.）特定の阻害剤に対する適当な保護基は、本技術の専門家により過度に実験することなく選択されるだろう。本技術において常套的であり、また本明細書で用いられているように、一般的にアミノ酸残基はＰ1 、Ｐ2 、等のように呼称される。その中でＰ₁とは脱離基( le aving group)に最も近いアミノ酸残基に当てはまり、Ｐ2 とはＰ1 の隣で保護基により近いアミノ酸残基に当てはまる、等である。従って、ジペプチドの阻害剤においては、Ｐ2 は保護基に最も近いアミノ酸残基である。本開示において、アミノ酸残基鎖はしばしば(Ｐn)mのように表記され、おのおののＰn はアミノ酸残基で、ｍは０または正の整数である。もちろん、おのおののＰn は異なるアミノ酸残基であるだろう。なるべく、ｍは４かそれ以下である。最も好ましくは、ｍは２である。上記に提示したように、どのアミノ酸残基も複素環置換体に置換されうる。好ましくは、その複素環はピペラジン、デカヒドロイソキノリン、ピロリノン、ピリジン、カルボリノン、キナゾリン、ピリミドンやそれに類するものである。本技術の専門家は、適当なアミノ酸残基が選択されれば、それとある意味で類似の適当な複素環を選択するだろう。従って本明細書中で使用されている場合に、「ペプチド部分」という用語は複素環がアミノ酸のいくつかあるいは全てを置換したときの対応する部分にも当てはまる。このインヒビターのペプチド部分は望まれたシステインプロテアーゼを標的とするのに適した全てのペプチドを含む。特に、アミノ酸Ｐ1 の側鎖は標的とされる酵素に従って選択される。カテプシンＢあるいはＬに対しては、これは結合したＰ₁アミノ酸がアラニル(Ala)、アルギニル(Arg)、グルタミン酸(Glu)、ヒスチジル(His)、ホモフェニルアラニル(Hphe)、フェニルアラニル(Phe)、オルニチル (Orn)、セリル(Ser)、そしてスレオニル(Thr)、また、場合によりそれらの置換されない類自体、例えばチアゾールやアミノチアゾールであるような側鎖を含むだろう。好ましくは、アミノ酸Ｐ2 の側鎖は、結合したアミノ酸Ｐ2 がフェニルアラニル(Phe)、ロイシル(Leu)、チロシル(Tyr)、そしてバリル(Val )アミノ酸残基、及び、特にTyr(OMe)を含む置換類似体を含むグループの一員であるように選択される。さらに特に側鎖の選択に関しては、カテプシン類とカルパイン類は共に構造を上記に示した多くのインヒビターに対し交差反応性を持っているが、カテプシンＢはＰ1 の塩基性側鎖に最も強く応答し（それぞれ(several)に反応するが）、一方カテプシンＬはＰ1 の中性側鎖に反応しやすい。カテプシンＢ，カテプシンＬの両者はＰ2 の中性側鎖を必要とする。カテプシンＨとＣは保護されていないペプチドに好んで結びつき、カテプシンＨは単ペプチドを、カテプシンＣはジペプチドを、そしてカルパイン類は中性側鎖を好む。カテプシン類は、一般的な原則としては、カルパイン類に比べ、より反応性がある。興味深いことにＰ1 部位をAsp が占めたとき、これらのどちらの酵素種も阻害されない。対照的に、インターロイキン−１β−変換酵素(ICE)は、Asp がＰ1 部位にない限りこれらのインヒビターによって影響されない。一方でICE 酵素とそのインヒビター、他方のシステイン酵素とそれらのインヒビターの間の基本的な相違については、文献によく立証されている。活性化ケトンを基礎としたインヒビターにアスパラチル側鎖が存在するとき、異常な出来事が起こる。すなわち、側鎖の遊離酸がケトンを攻撃し（その自然基質での対応物は不活性アミドカルボニルである）、また、熱力学的にヘミケタールを好んで生じる。このようなヘミケタールはプロテアーゼ不活性化に働くとも知られている遷移状態の模倣物でありうる。ICE 酵素の阻害は２つの経路のどちらかに従って起こる：ヘミケタール交換またはチオレートの非保護ケトンへの攻撃である。このようにして阻害の機構の詳細においてはいくらかの混乱を引き起こしている。この問題は側鎖のエステル化により消去される。 ICE インヒビターの最善なペプチド配列の一つは次のように知られている： B-Tyr-Val-Ala-Asp-Trap 式中、Ｂは保護基、"trap"は活性ケトンまたはアルデヒド（可逆的インヒビター）である。ドール(Dolle)はこの配列は Val-Ala-Asp短縮できることを示し、また、Asp 単独でさえ阻害活性を持っていることを示した。(Dolleら、P₁ Asparta te- Based Peptide α-((2,6-Dichlorobenzoxy)oxy)methyl ketones as Potent Time- Dependent Inhibitors of Interleukin-1 β-Converting Enzyme，37 J.M ed.Chem．563.) 本発明における脱離基は弱い毒性とインヒビターの良い溶解性を保証する確かな特徴を分け持っている。特に、本発明における脱離基は、（1）プロテアーゼの自然基質の分解されるペプチド部分を模倣あるいは改良する。（2）システインプロテアーゼのチオレートに選択的に反応するためにインヒビターのカルボニルを活性化する。（3）非毒性で、また非システインプロテアーゼやエステラーゼによって分割されない。また、（4）非常に水溶性であり、先行技術の脱離基が許すよりも多くのアミノ酸を用いることができる。指摘したように、本発明におけるインヒビターは自然基質の分解されるペプチド部分を模倣あるいは改良する。自然基質の脱離基は三級置換された光学活性炭素原子に融合した平面的（またはそれに近い）アミド結合の和である。本出願人の先の出願(Ser.NO.08/164,031)では、複素環に融合した酸素は自然基質の脱離基の平面の形状を模倣できることを開示し、また更に、複素環単位は異なった個々の酵素の異なった電気的、また空間的な特異性の必要条件を模倣するために必要とされる多様性を提供することを開示した。また、環の芳香性の程度は機能に必要な条件でないことを証明した。本発明のインヒビターはシステインプロテアーゼのチオレートと選択的に反応するためにインヒビターのカルボニルを活性化する。この概念はラスニック(Ras nick)らのアメリカ合衆国特許4,518,528 によるペプチジルフルオロケトンの成功の証明までは評価されなかった。その化学の最善の模倣は、もっとも電気的陰性な原子がフッ素から、２番目にもっとも電気的陰性な原子（酸素）に置き換えて、更に電子求引性の二重結合性を持つ原子を結合させることにより保護されていない状態にすることに帰する。本発明のインヒビターは脱離基のアニオンをカルボニル炭素の電気的陽性な中心に電気的にカップリングすることにより、この前提を極大化する。われわれはハロゲンを欠くヒドロカルボンを用いることにより本技術分野における他のインヒビターに共通の、ペプチジルフルオロケトン、トリフルオロメチル置換体、及びハロゲン化ヒドロカルボンに関係する毒性を消去した。本発明のインヒビターは非毒性で、非システインプロテアーゼやエステラーゼによって分解されない。双極子モーメントを最小にする試みにおいて、1,3-ジカルボニルは非常に安定なエノールを形成するが、その結果として、本発明において調製したα- ケトエーテルは、優れた安定性と経口効能を示す。一方で、1,3- ジカルボニル類はクレブス回路によりたやすく消去される。それによって、肝臓での酸化的除去を要する窒素芳香性複素環類や他の芳香族よりも低い毒性可能性で振る舞う。本発明のインヒビターは好ましくは非常に水溶性であり、インヒビターのペプチド構造物の脱離基において現行技術よりも多くのアミノ酸を用いることが可能である。従来最新のインヒビターにおける一般論の一つは、脱離基がジクロロフェノールのように大きい分子量であると、その結果全体の水溶性とペプチドインヒビターの経口効能が減少するものである。本発明で、より小さくより極性の大きいオキシ複素環は実際に実施例８で示すように、ペプチドインヒビターの水溶性が増す。その中で、４炭素酸(tetronica cid)から得られる脱離基は、ペプチド部分単独のものに比べほぼ２倍以上にペプチドインヒビターの溶解性を増す（フッ素誘導体によって概算した）。さらに元の４炭素核にヒドロキシルグループを付加すると、水溶性が増していき、アスコルビン酸から得られるような脱離基は最適である。本発明におけるシステインプロテアーゼインヒビターを作る、あるいは用いる、特定の実施例を以下に説明する。実施例は好ましい具体例をさらに完全に記述することを提供するもので、また、それによって本発明の範囲においては何の制限も意図されないことが理解されるだろう。実施例１Ｎ−モルフォリンカルボニル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ホモフェニルアラニン−α−（４−オキシ−５−フェニル−４−シクロペンテン−１、３−ジオン）メチルケトンスターラーバーを装着した20cm試験管にＮ−モルフォリンカルボニル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ホモフェニルアラニンブロモメチルケトン(100mg，0.194m mol )、フッ化カリウム(45mg，0.775 mmol)、および４−ヒドロキシ−５−フェニル−４−シクロペンテン−１、３−ジオンを入れ、気体アルゴンで満たして置く。3ml の無水DMF を反応系に注入し、TLC（シリカゲル、CHCL₃/イソプロパノール：95/5）により出発物質が完全に消失するまで室温で攪拌する。反応物はシリカゲル（酢酸エチル）のショートプラグを通過させ、溶媒を減圧下において除く。生成物質は限外(size exclusion)クロマトグラフィー(LH20,メタノール)により精製し、エーテル中で沈殿させ濾過により黄色の粉末を得る。（融点 155-157℃、IC₅₀カテプシンＢ,94nM）実施例２Ｎ−モルフォリンカルボニル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ホモフェニルアラニル−α−（４−アスコルビチル）メチルケトンＮ−モルフォリンカルボニル−Ｌ−フェニルアラニンブロモメチルケトン(495 mg,1mmol)、アスコルビン酸ナトリウム(380mg、２等量)、及びフッ化カリウム(1 16mg、２等量)を50ml丸底フラスコに入れ気体アルゴン下に置く。次に、5mlの無水DMF を反応系に注入し、室温で一晩攪拌する。翌日セライトで反応物を濾過して溶媒を減圧下において除く。残渣はクロロホルムで溶かし、生成した溶液は等量の塩化メチレンで希釈して未反応のアスコルビン酸ナトリウムを沈殿させる。濾過の後溶媒を減圧下において除き、限外クロマトグラフィーによって残渣を精製する。白色の固体を得る。融点105-110 ℃。IC₅₀カテプシンＢ，141nm。同様の方法により以下の化合物が調製される。Ｎ−モルフォリンカルボニル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ホモフェニルアラニル−α−（４−オキシ−６−メチル−２−ピロン）メチルケトン（融点94-98 ℃ ）Ｎ−モルフォリンカルボニル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ホモフェニルアラニル−α−（４−オキシ５、６−ジヒドロ−６−メチル−２Ｈ−ピラン−２−オン）メチルケトン（融点74-78 ℃）Ｎ−モルフォリンカルボニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−ホモフェニルアラニル−α− （４−オキシ−（６−メチル−２−ピロン）メチルケトン（融点70-75 ℃）Ｎ−モルフォリンカルボニル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ホモフェニルアラニル−α−（４−オキシ−クーマリン）メチルケトン（融点115-119 ℃）Ｎ−モルフォリンカルボニル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−リシル−（４−オキシ−（６−メチル−２−ピロン）メチルケトン（融点151-155 ℃）Ｎ−モルフォリンカルボニル−Ｌ−トリオシル（Ｏ−メチル−）Ｌ−リシル−（４−オキシ−（６−メチル−２−ピロン）メチルケトン（融点140-142 ℃）Ｎ−モルフォリンカルボニル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ホモフェニルアラニル−α−（４−オキシ−３−フェニル−ジヒドロフラン−２−オン）メチルケトン（融点114-116 ℃）Ｎ−モルフォリンカルボニル−Ｌ−トリオシル−（Ｏ−メチル）−Ｌ−リシル− （４−オキシ−３−フェニル−ジヒドロフラン−２−オン）メチルケトン（融点 140-142 ℃）Ｎ−モルフォリンカルボニル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−リシル−α−（４− オキシ−３−フェニル−ジヒドロフラン−２−オン）メチルケトン（融点140-14 5 ℃）Ｎ−モルフォリンカルボニル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ホモフェニルアラニル−α−（４−オキシ−ジヒドロフラン−２−オン）メチルケトン（融点155-15 7 ℃）これらの化合物の構造式及び in vitro 活性（抗カテプシンＢ）は以下に示す。精製カテプシンB に対するin vitroでの活性実施例３カテプシンＢに対するインヒビターのin vitroにおける評価のプロトコール酵素：ヒト肝より精製されたカテプシンＢはEnzyme Systems Products(Dubl in，CA)社製のものである。活性は30℃、52 mM リン酸ナトリウム pH 6.2 、31m M DTT 、2.1 mM EDTA中、0.2 mMの Z-Arg-Arg-7- アミノ-4- トリフルオロメチル- クマリンを基質として１mlあたり50 mU である。比活性はタンパク１mgあたり8330 mU である。（１mU =１分間あたり１nmol）基質のBoc-Leu-Arg-Arg-7-アミノ-4- トリフルオロメチル- クマリン-2HBr は Enz yme Systems Products（Dublin，CA）社製のもので、カテプシンＢに特異的な基質であると考えられている。20 mM の溶液をDMF にて調製し、20℃で保存する。インヒビターの候補物質をDMF に溶解し、20 mM に希釈して20℃で保存する。希釈溶液はアッセイバッファーにて調製する。パーセント阻害及び、酵素が50% 阻害されるインヒビター濃度（IC₅₀）は以下のように求められる。アッセイバッファー（50 mMリン酸カリウム pH 6.2 、２m M EDTA、５mM DTT ）５μlを氷上に30分置く。阻害は200 mM、20 mM 、２mMのインヒビター５ml をそれぞれ480 μl の分注物（aliquots）に加えて開始する。酵素を含む485 μl の分注物（aliquots）を対照として用い、従ってそれにはインヒビターを加えない。酵素／インヒビター混合液を10分間氷上でインキュベートし、カテプシンＢの活性を以下のようにアッセイする。：カテプシンＢアッセイ：アッセイバッファー中、0.5 mlのキュベット中37℃であらかじめインキュベートした酵素／インヒビター混合液490 μl に基質10μl を加える。インヒビターの最終濃度は、200 μM 、20μM 、２μM の原濃度に対してそれぞれ2000 n M 、200 nM、20 nM になる。活性は5 分間の、遊離 AFCの放出によって求められる。蛍光の変化はパーキン- エルマー LS-5B 分光蛍光計（ex = 400 nm，em = 505 nm ）において（ｔ = ６における蛍光単位）‐（ｔ = １における蛍光単位）である。パーセント阻害は、サンプル濃度3 点における、阻害された酵素の蛍光単位の変化を、対照の酵素の蛍光単位の変化と比較して求める。パーセント阻害は、 100‐（サンプルの蛍光単位／対照の蛍光単位× 100 ）のように算出する。 IC₅₀は、パーセント阻害をインヒビター濃度に対して対数目盛上でプロットして確かめる。IC₅₀とは酵素が50％阻害されるようなインヒビター濃度（nM）である。好ましいインヒビターのIC₅₀値は上記の構造式表に示した。実施例４ ¹ IC₅₀とは、われわれのin vitroアッセイの基準で6 分以内に酵素が50％阻害されるようなインヒビター濃度（nM）である（実施例3 参照）。タンパク質分解活性のアッセイ．ゼラチン- 基質 PAGE をRosenthal ，McKerr o w ，Rasnick ，and Leech ，Plasmodium falciparum ：Inhibitors of Lysoso mal Cysteine Proteinases Inhibit a Trophozoite Proteinase and Block Par asite Development ，35 Mol．Biochem．Parasitol．177-184（1989）に説明されているように行う。要するにこの手法は、ゼラチンを含むゲル上で非還元のタンパク質を電気泳動し、2.5% Triton-100 にてゲルを洗ってSDS を除き、ゲルを一晩インキュベート（0.1 M酢酸ナトリウム、10 mM ジチオエリトリトール、pH 6.0、37℃）して復元したプロテイナーゼによってゼラチンを加水分解させ、クマシーブルーで染色するというものである。プロテイナーゼは青く染まったゲル上ではっきりとしたバンドとして同定される。プロテイナーゼインヒビターの効果を評価するために、サンプルを電気泳動のサンプルバッファーと混ぜる前にインヒビターを寄生虫抽出物と一緒にインキュベート（室温で1 時間）し、オーバーナイトゲルインキュベーションバッファーに加える。タンパク質分解活性は他の２つの基質とも比較した。：（a）7-アミノ-4- メチル- クマリン(AMC)検出基を持つ、蛍光を発するペプチド基質（Enzyme Systems Products，Dublin，CA）及び（b）[¹⁴C]- メテモグロビン（Dupont New England Nuclear ，Wilmington ，DE）であり、両者ともRosenthal ，McKerrow ，Aikawa ，Nagasawa ，and Le ech ，A Malarial Cysteine Proteinase is Necessary for Hemoglobin Degrada tion by Plasmodium Falciparum．82 J.Clin．Invest．1560-66（1988）に説明されている通りである。本発明のシステインプロテアーゼインヒビターによる、マラリア阻止の別の試験においては以下の化合物A2に著しい効果があった。実施例５生存期間は、感染によって細胞の単層が破壊されるまでの日数で計る。放射線を照射したBHK 及びJ774細胞（6 穴プレート）にT.cruzi を感染させ、同時に、毎日20μM（総容量3 ml）の培地＋インヒビターを交換して処理した。 T.cruzi の培養及び調製．クローン化された集団及びクローン化されていない集団をBrasil系及びCA-1系から得た。そして、液体窒素中で凍結保存する。純粋培養したepimastigoteを、20μg/mlかつ10%（v/v）の熱非働化ウシ胎児血清を補ったBrain Heart Infusion-Tryptose 培地（Cazzulo，Cazzulo，Martinez，and Caz zulo，Some Kinetic Properties of a Cysteine Proteinase（Cruzipain）f rom Trypanosoma Cruzi．33 Mol．Biochem．Parasitol．33-42(1990)で述べられているBHT 培地）中で一週間ごとに継代して対数増殖期に維持する。種々の宿主細胞株（J774 マウスマクロファージ，BHK など）を、37℃，5% CO₂を含む加湿した大気中で、5% FCSを補ったRPMI-1640 にて培養する。細胞培養の間、寄生虫を連続維持するために、宿主細胞から遊離させたTrypomastigoteを新たな培養細胞に感染させるのに用いる。システインプロテアーゼインヒビターのin vitroにおけるアッセイに用いたプロトコールは、いくつかの実験で、分裂を妨げるために感染前に宿主細胞に放射線を照射する（240ORADs）ことを除いて、本来Harth ，Andrews，Mills，Engel，Smith，and McKerrow，Peptide-Fluoro1nethyl Keto nes Arrest Intracellular Replication and Intercellular Transmission of T rypanosoma Cruzi．58 Mol．Biochem．Parasitol．17-24（1993）で説明されているものである。実施例６ニューモシスチスカリニ（Pneumocystis carinii）のin vitroにおける阻害ヒト胎児性肺繊維芽細胞の単層を用いたニューモシスチスカリニ（Pneumocy stis carinii）の培養系にて以下の化合物を試験した際、以下に説明するように生物体の増殖は阻害された。パーセント阻害は、100‐（処理した細胞培養におけるP.carinii 栄養型の数／対照における栄養型の数）×100 のように算出する。方法．ジメチルスルフォキシドに溶解した薬物を、ヒト胎児性肺繊維芽細胞を培養するのに用いた最小必須培地にて、化合物3 は10μg/mlに、化合物9 は10 μM/mlの濃度に希釈した。ジメチルスルフォキシドの最終最大濃度は0.1%であったが、これは単独で用いる場合にP.carinii の増殖に影響せず、無処理の対照のウエルの生物体の増殖曲線と同様のP.carinii の増殖曲線を与えた濃度である。 24穴プレートでの培養細胞に感染ラット肺から得たP.carinii 栄養型（最終濃度は1ml あたり約7 ×10⁵）を接種した。各培養プレートは無処理ウエル及び処理ウエルを含んだ。プレートを5% O₂，10% CO₂，85% N₂の混合気体中にて35℃で7 日間までインキュベートした。プレートを１日目、３日目、５日目、７日目に、培養細胞を撹拌した後、10μl 量を取ってサンプリングした。サンプルをスライド上の1- cm²の範囲に置き、メタノールにて固定し、ギムザ染色剤で染色した。それから、２人の観察者により盲法で顕微鏡で調査した。各パラメータに対して４ウエルずつあり、つまり各パラメータに対して8 つの値を得た。標準誤差は3 から13% に渡っている。２日目、４日目、６日目に新鮮な薬物を培養細胞に加えた。実施例７ラット肝におけるカテプシンB のin vivo 阻害インヒビターのin vivo における評価のプロトコール．メスのSprague Dawley ラット（各150 〜200 g）をSimonson，Gilroy，CA社から購入する。一週間in-ho useで順化させたあと、動物（通例1 グループあたり4 匹）を選択した投与経路で投薬する。試験化合物をエタノールに溶解し、水にて適切な濃度に希釈する。対照調査の場合、動物は単なるエタノール水媒体を投与する。組織ホモジネートの調製．投与後の適切な時点で、処理を加えた動物をエーテルで麻酔し、断頭して、脱血する。目的の組織を取り出し、すみやかに液体窒素中で凍結して、それから操作を進めるまで-70 ℃で保存する。以後、組織サンプルを扱う操作は全て4 ℃で行う。まだ凍っている間に肝臓及び骨格筋を破砕し、そのあとホモジナイズする。一方、他の標的組織は事前の破砕なしにホモジナイズする。蒸留水もしくは0.1% Brig-35中における組織のホモジナイゼーションは、75〜80% のエネルギーにセットしたTekmar Tissuemizer上で10 Nのプローブで thr ee 15-s burstsを用いて後で行う。サンプルを15000 g で40分間遠心すると脂質層、澄んだ下層、及び固形の沈渣に分離する。澄んだ上清を注意深く吸い取り、酵素活性のための蛍光測定アッセイが行えるまで-70 ℃で保存するために、きれいなポリプロピレンチューブに移す。精製リソソーム酵素の調製．この手順はBohleyら（1969）及びBarrett and Ki rshke（1981）の報告に基づいている。投与後の適切な時点で、処理を加えた動物をバルビタールナトリウムで麻酔し、肝臓をin situ で氷冷生理食塩水にて灌流する。それから肝臓を取り出し、氷冷生理食塩水ですすぎ、水分をふき取って重さを量る。動物はエーテルで屠殺する。以後、組織サンプルを扱う操作は全て４℃で行う。肝臓を、２倍の容積の0.25 Mショ糖溶液中、０℃、30 ml Wheaton Teflon-on-glass ホモジナイザーでモーターを55にセットして5 フルストロークを使ってホモジナイズする。次に600 g で10分間遠心し、上清を、3000 gで10分間遠心するためにきれいなチューブに移す。得られた上清を15分間遠心する。リソソームの沈渣を0.25 Mショ糖溶液で2 回洗浄し、glass-on-glassホモジナイザーを用いて2 .5倍の容積の蒸留水中で可溶化して、それから1000 gで60分間遠心する。酵素活性のための蛍光測定アッセイを行うまで、上清を-70 ℃で保存する。実施例８モルフォリンカルボニル- フェニルアラニル- ホモフェニルアラニル- α-(4-オキシ- ジヒドロフラン-2- オン)メチルケトン対モルフォリン- カルボニル- フェニルアラニル- ホモフェニルアラニル- フルオロメチルケトンの、水に対する溶解度見出しの二つの化合物の、20℃における水に対する溶解度をUV分光計を用いて求め、既知の標準であるベンゾキシカルボニル- フェニルアラニル- アラニルフルオロメチルケトンのそれと比較した。Mu-Phe-HPhe-α-(4-オキシ- ジヒドロフラン-2- オン)メチルケトンの水に対する溶解度を測定したところ0.277 mg/ml であった。Mu-Phe-HPhe-CH₂Fの水に対する溶解度を測定したところ0.140 mg/ml であった。Z-Phe-Ala-CH₂Fの水に対する溶解度は14℃で0.045mg/ml であった。実験．物質を10 mg 量って、蒸留し脱イオンした水5 mlに加えて飽和溶液を調製した。この溶液にフタをし、他に記していないかぎり20℃で撹拌した。24時間後に1 ml抜きとり、0.45μm のフィルターを通してろ過し、蒸留し脱イオンした水で1 ：50に希釈した。続いて48、72、96時間後にもそれぞれ抜きとり、同様に希釈した。化合物12については247 nmで、Mu-Phe-HPhe-CH₂F については219 nm で吸光度を測定し、同じ条件下で操作した一連のそれぞれの標準溶液と比較した。実施例９カテプシンH インヒビターの合成 L-ホモフェニルアラニル−α−(4−オキシ−(6−メチル−2 −ピロン)メチルケトンアルゴン雰囲気下、丸底フラスコにBOC-ホモフェニル- ブロムエチルケトン（ 3 00 mg）,フッ化カリウム（195 mg），炭酸カリウム（233 mg），及び4-ヒドロキシ-6- メチル-2- ピロン（212 mg）を入れた。DMF を約1 mL加え、混合物を50 ℃で４０分間撹拌した。それから、反応溶液を酢酸エチルで希釈し（10×）、塩を除くためにシリカゲルのプラグに通した。溶媒を真空下で除いた。得られた固体を3 mLの塩化メチレンに溶解し4N HCl- ジオキサンを加えることによって、BO C 保護基を除いた。シリカゲルTLC（9:1，CHCl₃：イソプロパノール）で安定なスポットだけが検出されるまで反応を行った。それから、得られた混合液にエーテル50 mL を一滴ずつ加え、沈殿した固体をろ過した。融点 177-179 ℃。IC₅₀ カテプシンH：１ 18 nM。同じ方法でL-ホモフェニルアラニル- α-(4-オキシ- ジヒドロフラン-2- オン )メチルケトン塩酸塩を合成した。融点 128-132 ℃。IC₅₀カテプシンH：251nM 。他の多くのカテプシンH インヒビターを、α-オキシ-ヘテロサイクル-メチル- ケトン上のブロックされていないアミノ酸構造を用いて作ることができる。実施例１０ＩＣＥ阻害物の合成以下の実施例は例示であるが、ブロッキンググループの交換、側鎖構造の省略あるいは僅かな変更、または本発明の他の脱離基との交換を含む他のバリエーションへの限定を意味するものではない。Ｎ−ベンゾキシカルボニル- バリル−アラニル−アスパルチル- α−（４−オキシ−（６−メチル−２−ピロン）メチルケトン Z-Val-AlaOMe ：N-ベンゾキシカルボニル−バリンを新しく蒸留した３００mlのTHF 中にアルゴン存在下で溶解し、得られた溶液をメタノールアイスバス中で冷却した。N-メチルモルホリン１当量および続いてイソブチルクロロフォルメート１当量に対してを加え、２０分間反応させた。これに別のN-メチルモルホリン１当量を加え、更に固形アラニンメチルエステル塩酸塩１当量を加えた。室温で攪拌させながら一晩ゆっくり反応させた。翌日、これを１N 塩酸２００ml中に注ぎ、酢酸エチル（２×１５０ml）で抽出した。一緒にまとめた有機留分を、ブライン５０ml、重炭酸ナトリウム１００mlで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過した。溶媒を減圧下で除去し、白色固形メチルエステル１４g（融点１５７−１６３℃）を得た。メチルエステルの加水分解は、メタノール３５mlに２．２０g を溶解し、続いて１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液８．２mlを加えて行った。反応は室温で４時間攪拌しながら行った。この時、TLC（シリカゲル/ クロロホルム/ イソプロパノール）は大部分が酸（TLC 上の固定地点）に変えられたことを示した。それから、メタノールを、減圧下で除去し、残留物を水（100 mL）に溶かし、追加分の水酸化ナトリウム５mlを加えた。その水を、酢酸エチル（50 ml ）で洗浄し、1 N 塩酸で中和し、２×100 mlのエチル・アセテートで抽出した。有機層は硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過した。溶媒を蒸発させて白い固体を得た。mp.170-175℃。アスパルチル（O-t-ブチル）-O- メチルエステルでの縮合は、次の通り： Z-Val-Ala-OHを300 mLの新たに蒸留されたTHF の中に溶解した。生じた溶液を氷- メタノールバスで冷やした。次にN-メチルモルホリン１当量を加え、そしてイソブチルクロロホルメート１当量を加えて２０分間反応させた。N-メチルモルホリンもう１当量を加え、HCI-Asp(OtBu)OMe1 当量（５g ）を続けて加えた。ゆっくりと室温にもどして、一晩かけて混合した。その翌日、その反応物を1 N 塩酸200 m l へ注ぎ、酢酸エチルで抽出した。有機層を重炭酸ナトリウム（aq 50 mL）、ブライン（50 mL ）で洗浄し、有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過した。溶媒は減圧下で除去した。その残留物は、50 mL の塩化メチレンと200 mL のエーテルで結晶化し、白色結晶（4.0 g ）を得た。ｍｐ.157-163℃。遊離酸への加水分解： Z-Val-Ala-Asp(otBu)OMe（4.6 g ）を30mLのメタノールに溶かし、1 N 水酸化ナトリウム（aq）12 mL を加え、室温で1 時間かき回ぜながら反応させた。その後に、メタノールを減圧下で除去し、５０ ml の水と1 N 水酸化ナトリウム12 m L を加えて、沈殿している固体を溶かした。得られた水溶液を酢酸エチル（50 m L ）で洗浄し、水層を１Ｎ塩酸で酸性にし、これを酢酸エチルで抽出し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し濃縮して、3.74 gのZ-Val-Ala-Asp(O-tBu)OHを得た。ジアゾケトンへの転化： Z-Val-Ala-Asp(O-tBu)OHを200 mLの新たに蒸留されたTHF 中に溶かし、メタノール- 氷バスを用いた。次にN-メチルモルホリン１当量を加え、イソブチルクロロホルメート１当量を加えて、２０分間反応させ、得られた混合物を濾紙を通して、供給者の指示に従って、ダイアザルト（Diazald ）（アルドリッチ）６．３ g からできたジアゾメタン/ エーテル中に注いだ。一晩放置し、以下の方法で後処理した。：反応液を水（2x50 mL ）、重炭酸ナトリウム（50 mL ）、ブライン（50mL）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過した。そして、溶媒を減圧下で除去することにより、黄色の固体3.75g が得られた。この残留部は、1x12インチのシリカゲル（クロロホルム：イソプロパノール/95 ：５）カラムを通して２つの部分にクロマトグラフで分け、２つの生成物画分を得た。Ｒf 値（0.3 ）がより低い生成物は、100 MHz NMR で5.54 ppmの吸収率を示し、目的生成物であった。ブロモケトンへの転化： Z-Val-Ala-Asp(OtBu)CHN₂を25mLエーテルと25のmL THF中に溶かし、メタノール- 氷バスを使用した。エーテル:THF(1:1)の比で１０mlに希釈した0.1mL HBr/ 酢酸（30 %）を滴下して加えた。黄色の溶液が透明になり、色が全て消失したとき、反応液を同量のブライン中に注ぎ、有機層を分離して水層を50mL THF：エーテルで洗浄した。有機留分を50 mL の水酸化ナトリウム重炭酸塩、50mLブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し濾過し濃縮して、白色固体を得た。mp.150 -151℃。 α-(4-oxy-(6- メチル-2- ピロン)メチルケトンへの転化： Z-Val-Ala-Asp(OtBu)CH₂Br（131 mg）、4-ヒドロキシ-6- メチル- ピロン（58 mg 、２当量）、弗化カリウム（53 mg ）、DMF1.5 mL を、室温で２時間攪拌した。そのときTLC（シリカゲル（クロロホルム/ イソプロパノール：97/3））は、開始材料の消失と生成物の存在を示した。その反応物はシリカゲル（クロロホルム/ イソプロパノール/9：1 ）のプラグに通され、溶媒は減圧下で除去された。過剰のピロン開始材料の大部分を、イソプロピルエーテルCH₂Cl₂から沈殿させ、そして母液から：Z-Val-Ala-Asp(OtBu)-α-(4-オキシ-6- メチル- ピロン)メチルケトンを、溶媒の除去とサイズ除外クロマトグラフィーによって分離した： NMR （100 MHz、CDCl 3）δO.9（dd,6）,1.4（幅広いs+d,12）,2.1（s,3）,3.5 （s,2）,5.1（s,2）,7.3（m,5）。側鎖t-ブチルグループの除去： Z-Val-Ala-Asp(OtBu)CH₂O-(6- メチル- ピロン）をアルゴンの存在下で塩化メチレン2 ml中に溶かし、５０％トリフルオロ酢酸メチレンクロライド２mlをこれに加え、透明な溶液を３０分間攪拌した。この時、シリカゲルTLC（クロロホルム/ イソプロパノール：9/1 ）が最初の材料の消失を示した。（開始材料R f 0. 66；生成物R f 0.44）。反応液をクロロホルムで二倍に薄め、溶媒と試薬を減圧下で除去し、白色固体（mp.158-163℃）を得た。（融解前に複数相に変化する）。 N- モルホリンカルボニル-L- バリル-L- アラニル- アスパルチル（OtBu）- α -(アスコルビチル)メチルケトン。 N-モルホリンカルボニル-L- アリンメチルエステル：塩酸- バリンメチルエステル（25 g）を、アルゴン存在下において、600 mLの新たに蒸留されたTHF と、100 mLの乾燥DMF と、1.0 当量のN-メチル・モルホリン中に溶かした。得られた溶液を-15 ℃に冷却し、追加分のN-メチルモルホリン 1.1 当量および更にモルホリンクロライド１．１当量を加えた。その反応物は、ゆっくり室温にもどし、一晩かけて攪拌した。その反応液を1 N 塩酸の300 mLへ注ぎ、酢酸エチル（2x200 mL）で抽出した。有機画分をまとめて、1 N 塩酸（50 mL ）、ブライン（50 mL ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し濾過した。溶媒を減圧下で除去し、白色固体のN-モルホリンカルボニル- バリンメチルエステル３３g を得た。：NMR（100 MHz、CDCl ３δ0.9（dd,6）、2.1（セップテット, 1）、3.0 と3.65（モルホリントリプレット、4 と4 ）、4.98（N-H ）。 Mu Val OH への転化：上記メチル・エステルをメタノール300 mLに溶かし、1 N 水酸化ナトリウム水溶液の157mL を加えた。室温で２時間攪拌すると、固定スポットがTLC により生じた。メタノールを減圧下で除去し、1 N 水酸化ナトリウム水溶液の28mLを加え、水層を酢酸エチル（75 mL ）で洗浄した。水層を1 N 塩酸185 mLで酸性化し、その水の3/4 を減圧下で除去し、得られた混合物を酢酸エチル（2x300 mL）で抽出した。有機層を1 N 塩酸（50 mL ）、ブライン（５０ml）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過して濃縮し、N-モルホリンカルボニル- バリン29.75 g （78 %収率）を得た。アラニンメチルエステルでの縮合： Mu-Val-OH は300 mLの新たに蒸留されたTHF の中に、アルゴンの存在下で溶かし、その溶液を-15 ℃に冷却した。次にN-メチルモルホリン１当量を加え、そしてイソブチルクロロホルメート１当量を加えた。２０分間かけて反応させた後、 N-メチルモルホリン１当量を加え、更にアラニンメチルエステル塩酸塩を加えた。その反応は、室温にて、一晩かけて攪拌しながらゆっくり行った。その翌日、その反応液を1 N 塩酸へ注ぎ、酢酸エチル（2x200 mL）で抽出した。一まとめにした有機層を1 N 塩酸（50 mL ）、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過した。溶媒を減圧下にて除去し、N-モルホリンカルボニル- バリル- アラニルメチルエステル10.74 g（78 %）を得た。NMR（100MHz、CDCl 3δ1.4（d ,Ala CH₃）,3.7（s,OMe ）ppm．遊離酸への加水分解： Mu-Val-Ala-OMe（1 g ）をメタノール15 mL に溶解し、1 N 水酸化ナトリウム（a q ）4.8 mLを加えた。TLC（クロロホルム/ イソプロパノール：9/1 ）が一定のスポットを示すまで、その反応を続けた。メタノールを減圧下で除去し、酢酸エチル1.2mL と水層を1 N 塩酸6 mLで酸性化した。その混合物はほぼ50 mL の酢酸エチルで抽出し、有機層は1 N 塩酸5 mlで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し濾過し濃縮して、白色固体０．８g（８４％）を得た。これは3.7ppmでのNMR吸収の消失により特徴づけられた。 Asp(OtBu)OH との縮合： Asp(OtBu)OH（2.51 g）をアルゴンとビス（トリメチルシリル）アセトアミド（B SA）8.2 mLの存在下で乾燥DMF40ml 中に溶かし、反応は攪拌しながら40分行った。別のフラスコの中で、Mu-Val-Ala-OH（4.0 g ）をアルゴン存在下で200mL の乾燥THF 中に溶かし得られた溶液を-15 ℃に冷却し、N-メチルモルホリン１当量を加え、更にイソブチルクロロホルメート１当量を加えた。得られた混合物を２０分間攪拌し、最初の反応物を第２の反応物中に注ぎ、両者を１時間 -15℃で放置し、ゆっくりと室温にもどし一晩攪拌した。反応物を1 N 塩酸150 mLに注ぎ、2 ×200 mLの酢酸エチルで抽出した。一まとめにした有機層を1 N 塩酸１５ml 、ブライン（５０ml）で洗浄し、硫酸マグネシウム（脱色カーボンとともに）で乾燥し、溶媒を減圧下で除去し、4.89 gのMu-Val-Ala-Asp(OtBu)OHを得た。ジアゾケトンへの転化： Mu-Val-Ala-Asp(OtBu)OH（4.89 g）を250 mLの新たに蒸留されたTHF の中で、アルゴン存在下で溶かし、得られた溶液を-15 ℃に冷却した。次にN-メチルモルホリン１当量を加え、更にイソブチルクロロホルメート１当量を加えた。溶液をこの温度で２０分間反応させ、供給元（Aldrich ）の指示に従って、ダイアザルト（d iazald）１０．８から調製したエーテル中のジアゾメタンの溶液に濾紙を通して流し込んだ。室温にゆっくりもどして一晩攪拌した。翌日、反応液を水、重炭酸塩とブライン（それぞれ50 mL ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過した。溶媒を減圧下にて除去し、TLC （シリカゲル，クロロホルム/ イソプロパノール：97/3）で5 つのスポットを生じた黄色の油分を得た。最も低いR f は、300 g のシリカゲルでクロマトグラフィーによって分離され、δ 5.75 での NMR でCHN₂吸収に基づき生成物であることが示された。ブロモケトンへの転化： Mu-Val-Ala-Asp(OtBu)CHN₂を塩化メチレンの４５mLに溶解し、得られた溶液を -15 ℃に冷却した。次に塩化メチレン30 ml に溶かした30% 塩化メチレン１．７ mlを滴下して加え、反応液をTLC （シリカゲル（クロロホルム/ イソプロパノール））によってモニターした。そして反応液をブライン中に注ぎ、有画分を重炭酸ナトリウム（aq）、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過した。溶媒を減圧下にて除去し、金色の粗固体を得、これを最小の塩化メチレン中に溶解し、エーテル/ ヘキサン中で沈殿させて精製した。生成物Mu-Val-Ala-Asp(O tBu)CH₂ Brは、NMR（100 MHz 、CDCl₃）で、δ5.75でジアゾケトン吸収がなく、 δ4.18で一重線が現れる特徴を有する。ＩＣＥ阻害剤： Mu-Val-Ala-Asp(OtBu)CH₂Br（0.36mmol）、弗化カリウム（1.09 mmol ）およびヒドロキシ複素環式化合物（0.546mmol ）をアルゴン存在下で密閉し、８mLの乾燥DMF を加え、一晩攪拌した。翌日、酢酸エチルで希釈してブラインを洗浄するか、シリカゲルを通過させることにより、試薬を除去した。溶媒を減圧下で除去し、生成物をサイズ除外クロマトグラフィー（LH20）で分離した。この方法では、以下の化合物が製造された： N-モルホリンカルボニル-L- バリル-L- アラニル- アスパルチル(OtBu)- α- （アスコルビチル）メチルケトン（mp．138-144 ℃）； N-モルホリンカルボニル-L- バリル-L- アラニル- アスパルチル(OtBu)- α-(-4 - オキシ-(3-アゾ-m- アニシジン)メチルケトン： NMR（CDCl 3）δ0.95（dd,6 H,Val Ch 3 ）,1.4（s,12H,OtBu+Ala CH₃）,2.1（m ,1H,Val CH ）,2.9（d,2H,CH₂側鎖),3.3（t,4H,MU ）,3.7（t,4H,MU ）,3.85（s ,3H，OCH₃，4.2（t,1H）,4.6（t,1H）,4.7（d,2H）,4.9（m,3H,CH₂O ）,6.9（d, 1H），7.1（m,4H）7.9（d,1H）。上記阻害剤中のtBu の除去は、塩化メチレン中で25 %トリクロロ酢酸で行い、対応する遊離の酸阻害剤を得た。実施例１１カルパイン（CALPAIN）阻害剤の合成以下の実施例は、カルパイン阻害剤の例示であるが、過度の実験なし本発明のペプチドと脱離基の多くのバリエーションが想像できるので、これらの例示によって限定されることを意味しない。アセチル−ロイシル−ロイシル−フェニルアラニル−α-(-4−オキシ−ジヒドロフラン-2- オン)メチルケトン Ac-Leu-Leu-OCH₃ ：アセチル- ロイシン（5.0 g ）をアルゴン存在下で150 mLの蒸留されたTHF 中に溶解し、得られた溶液を-15 ℃に冷やした。次にN-メチルモルホリン１当量を加え、更にイソブチルクロロホルメート１当量を加え、２０分間反応させ、その後、N-メチルモルホリンをもう１当量加え、更に塩酸-LeuOMe（5.25 g）を加えた。ゆっくり室温にもどして一晩攪拌した。反応液を1 N 塩酸150 mLへ注ぎ、エチルアセテート（2x150 mL）で抽出した。一まとめにした有機画分を1 N 塩酸（ 15 mL ）、ブライン（50 mL ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過した。溶媒を減圧下そしてその後高真空下において除去した。TLC（シリカゲル（クロロホルム/ イソプロパノール：95：５））では、生成物Ac-Leu-Leu-OCH₃は、シングルスポットR f 0.36を示した。NMR（100 MHz ）δ0.95（d 、12H ）,1.5 （bs 6H ）,2.0（s,3H）、3.7(s,3H)、4.5（q,2H）,6.6（d,1H）,6.8（d,1H）であった。遊離酸への加水分解： Ac-Leu-Leu-OCH₃（7.8 g ）を150 mLのメタノールに溶かし、1 N 水酸化ナトリウム38 mL を加え、室温でほぼ4 時間攪拌した。メタノールを減圧下で除去し、1 N 水酸化ナトリウム10mLを加え、水層を酢酸エチル１０mlで抽出した。そして水層を1 N 塩酸で中和し、酢酸エチル（3x50 mL ）で抽出した。一まとめにした有機留分をブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、溶媒を減圧下で除去した。δ 0.95（d,12H ）,1.5（br s,6H ）,2.0（s,3H）,4.5（q,2H ）,6.6（d,1 H）,6.8（D,1H）,9.5（bs,1H ）。PheOMe との縮合 Ac-Leu-Leu-OH をアルゴン存在下で200 mLの蒸留されたTHFに溶解し、-15 ℃ に冷却した。N-メチル・モルホリン１当量を加え、更にイソブチルクロロホルメート１当量を加え、２０分間反応させた。更にN-メチルモルホリン１当量を加え、続いて塩酸-HPheOCH₃を加え、ゆっくり室温にもどして一晩攪拌した。反応液を1 N 塩酸200 mLへ注ぎ、酢酸エチル（2x150 mL）で抽出した。有機層を1 N 塩酸（20 mL ）、ブライン（５０ml）で洗浄し、これを硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過した。溶媒を減圧で除去し、高真空にして固形の白色ケークが残った（TL C 、シリカゲル（クロロホルム/ イソプロパノール R f 0.35 ））。NMR（100MH z ）δ 0.95（d,12H ）,1.6（bs,6H ）,2.1（s,3H）,3.1（d,2H）,3.6（s,3H）, 4.7（m,3H）,6.9（d,1H）,7.2（m,5H）,7.5（d,1H）。遊離酸への転化 Ac-Leu-Leu-Phe-OMeをメタノール150 mLに溶かし、1 N 水酸化ナトリウム26 m L を加え、溶液を４時間攪拌し、その後、減圧にしてメタノールを除去し、水酸化ナトリウム７mlを更に加えた。この水層を酢酸エチル（10 mL ）で洗浄し、1 N 塩酸を加えて中和した。混合液を酢酸エチル２x100mlで抽出し、これを1 N 塩酸とブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥して濾過した。溶媒を減圧下で除去して、白色固体のAc-Leu-Leu-Phe-OH 7.56 g（94 %）を得た。生成物の酸の NMR（100 MHz 、CDCl 3）は、δ 3.6でのシグナルの消失と１０．１（１Ｈ）での幅広いシングレットの出現を除き、先駆体エステルのものと極めて類似していた。ジアゾケトンへの転化： Ac-Leu-Leu-Phe-OH（4.68 g）を200 mLの新たに蒸留したTHF に溶かし、メタノール- 氷バスを使用した。次に1 当量のN-メチルモルホリンを加え、更に１当量のイソブチルクロロホルメートを加えた。これを２０分間反応させ、得られた混合液を、供給者（Aldrich ）の指示に従ってダイアザルト（Diazald）１０．８g から調製したジアゾメタン/ エーテル中に濾紙を介して注いだ。溶液を室温で一晩放置してゆっくりと反応させた。これを水（2x50 ml ）、重炭酸ナトリウム（50 mL ）、ブライン（50 mL ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過した。溶媒を減圧下にて除去し、カラム・クロマトグラフィーを介した後で（シリカゲル、クロロホルム/ イソプロパノール：93/7）、黄色の粉状物3.07 g（61 %）を得た。NMR（1 00 MHz、CDCl 3）δ 0.95（d,12H ）,1.6（bs，6H ）,2.1 （s,3H）,3.1（d,2H）,4．7（m,3H）,5.6（s,1H）,6.9（d,1H）,7.2（m,5H）,7. 5（d,1H）。臭化物への転化 Ac-Leu-Leu-Phe-CHN₂（1 g ）を175 mLの塩化メチレンに溶かし、そして塩化メチレン２５mlで希釈した30 %臭化水素/ 酢酸１．２mlを-15 ℃で滴下して加えた。反応が進むにつれて、泡が発生し、は沈殿物が形成した。反応液をTLC（シリカゲル/ クロロホルム- イソプロパノール：9/1 ；Rf生成物0.54 ）でモニターした。終了後、反応液をブライン150 mLへ注ぎ、反応液のフラスコは更に150 mL の塩化メチレンで洗浄し、残留沈殿物を溶解した。一まとめにした有機層を重炭酸ナトリウム（aq 50 mL）、ブライン（50 ml ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し濃縮して、鈍い白色の固体を得た。この固体を塩化メチレンからエーテル中に析出させることにより純化し、白色固体のTLC（シリカゲル（クロロホルム/ イソプロパノール：9:1 ））１スポットRf 0.54 を610 mg（54 %）生じた。NMR （DMSO-d6 ）δ 0.81（d,12H ）,1.3（m,6H）,1.8（s,3H）,3.1（d,2H）,4.1（m ,2H）,4.3（s,2H）,4.6（q,1H）,7.2（m,5H）,8.0（d,2H）,8.4（d,1H）。カルパイン（Calpain）阻害剤： Ac-Leu-Leu-Phe-CH₂Br（200 mg）、テトロニック（tetronic）酸（65 mg ）および弗化カリウム（68 mg ）を、アルゴン存在下で乾燥DMF 5 mLとともに一晩混合させた。反応液を酢酸エチル20mlで希釈し、これを10 mL の重炭酸ナトリウム（aq）、ブライン（10 mL ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥した。これを濾過し、溶媒を減圧下、次いで高度真空中で除去して、アセチル- ロイシル- ロイシル- フェニルアラニル- α-(4-オキシ-ジヒドロフラン-2- オン)メチルケトン 107 mg（49 %）を得た。実施例１２他の複素環阻害剤の合成以下の工程を用いて、他の複素環カテプシン阻害剤を製造する。Ｎ−モルホリンカルボニル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ホモフェニルアラニン −α−（４−オキシ−Ｎ−アセチル−プロリンメチルエステル）メチルケトン（Ａ１）。ＭｕＰｈｅＨＰｈｅＣＨ₂Ｂｒ（２５０ｍｇ）、Ｎ−アセチル− プロリンメチルエステル（２．０ｇ）、フッ化カリウム（２３２ｍｇ）、炭酸カリウム（２７６ｍｇ）をアルゴン下におく。次に１．５ｍＬの乾燥ＤＭＦを加え、反応液を室温で１００分攪拌した。その後反応液を短いシリカゲルコラム（エチルアセテート）に通し、溶媒を真空下で除去した。エーテル中の沈殿物から融点８１−８４の白色固体を得た。Ｎ−モルホリンカルボニル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ホモフェニルアラニル −α−（３−オキシ−５−エチル−４−メチル２（５Ｈ）フラノン）メチルケトン（Ａ２）。ＭｕＰｈｅＨＰｈｅＣＨ₂Ｂｒ（１００ｍｇ）、フッ化カリウム（４５ｍｇ）、５−エチル−３−ヒドロキシ−４−メチル−２（５Ｈ）フラノン（１１０ｍｇ）をアルゴン下で５ｍＬの乾燥ＤＭＦ中におき、反応液を室温で一晩攪拌した。翌日反応液をエチルアセテートで希釈して重炭酸ナトリウム水溶液と食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥し、ろ過して溶媒を真空下で除去した。生成物をサイズ排除クロマトグラフィー（ＬＨ−２０，メタノール）により精製し、融点６５−７１℃の白色固体を得た。Ｎ−モルホリンカルボニル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ホモフェニルアラニン −α−（８−オキシ−キノリン）メチルケトン（Ａ３）。アルゴン下で試験管中においたＭｕＰｈｅＨＰｈｅＣＨ₂Ｂｒ（１００ｍｇ）、フッ化カリウム（４５ｍｇ）と８−ヒドロキシキノリン（１２３ｍｇ）に、５ｍＬの乾燥ＤＭＦを加え、反応液を４時間攪拌した。その後反応液を短いシリカゲルコラムに通して溶媒を真空下で除去した。生成物をまず、サイズ排除クロマトグラフィー（ＬＨ− ２０，メタノール）で、次に塩化メチレン／エーテルからの結晶化により精製し、６５ｍｇの結晶を得た。生成物は、ＮＭＲ（１００ＭＨｚ）δ８．５−８．０（ｍ，ヘテロ芳香族）、７．５−６．５（ｍｍ，ホモおよびヘテロ芳香族）、３．７５−３．５，３．２５−３．０（２ｍ，Ｍｕ，Ｈ），２．７５（ｓ，ヘテロ芳香族Ｍｅ）ｐｐｍであった。Ｎ−モルホリンカルボニル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ホモフェニルアラニン −α−（２−オキシ−４−メチル−キノリン）メチルケトン（Ａ４）。ＭｕＰｈｅＨＰｈｅＣＨ₂Ｂｒ（１００ｍｇ）、フッ化カリウム（４５ｍｇ）と２−ヒドロキシ−４−メチル−キノリン（１２３ｍｇ）をアルゴン下で試験管中におき、５ｍＬの乾燥ＤＭＦを加えた。反応液を室温で一晩攪拌した。その後反応液を短いシリカゲルプラグに通して溶媒を真空下で除去した。残さをまず、サイズ排除クロマトグラフィーで、次にエーテル中に沈殿させて精製し、融点１８０−１８３℃の固体を得た。Ｎ−モルホリンカルボニル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ホモフェニルアラニン −α−（４−オキシ−キノリン）メチルケトン（Ａ５）。ＭｕＰｈｅＨＰｈｅＣＨ₂Ｂｒ（１００ｍｇ）、フッ化カリウム（４５ｍｇ）と４−ヒドロキシキノリンをアルゴン下で試験管中におき、５ｍＬの乾燥ＤＭＦを加えた。反応液を３．５時間攪拌し、その後短いシリカゲルコラム（エチルアセテート）に通した。溶媒を真空下で除去し、残さを、サイズ排除クロマトグラフィーで精製し、次に回収した生成物をエーテル中に沈殿させて、融点１０７−１１１℃の白色粉末を得た。Ｎ−モルホリンカルボニル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ホモフェニルアラニン −α−（４−オキシ−キナゾリン）メチルケトン（Ａ６）。ＭｕＰｈｅＨＰｈｅＣＨ₂Ｂｒ（１００ｍｇ）、５−メチル−５−トリアゾロ［１，５ａ］−ピリミジン−７−オール（１１６ｍｇ）、フッ化カリウム（４５ｍｇ）とを一緒にアルゴン下で乾燥した試験管中におき、５ｍＬの乾燥ＤＭＦを加えた。反応液を室温で３．５時間攪拌し、その後反応液をエチルアセテートで希釈してシリカゲルのプラグに通した。溶媒を真空下で除去し、生成物をサイズ排除クロマトグラフィー（ＬＨ−２０，メタノール）で精製し、融点１２９−１３２℃の白色物を得た。Ｎ−モルホリンカルボニル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ホモフェニルアラニン −α−（２−オキシ−ベンゾイミダゾール）メチルケトン（Ａ７）。ＭｕＰｈｅＨＰｈｅＣＨ₂Ｂｒ（１００ｍｇ）、２−ヒドロキシベンゾイミダゾール（１０４ｍｇ）、フッ化カリウム（４５ｍｇ）とを一緒にアルゴン下で乾燥した試験管中におき、５ｍＬの乾燥ＤＭＦを加えた。反応液を室温で３時間攪拌し、その後反応液をエチルアセテートで希釈しシリカゲルのプラグに通した。溶媒を真空下で除去し、生成物をサイズ排除クロマトグラフィー（ＬＨ−２０，メタノール）で精製し、融点１１５−１２０℃のオフホワイトの固体生成物を得た。Ｎ−モルホリンカルボニル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ホモフェニルアラニン −α−（１−オキシ−イソキノリン）メチルケトン（Ａ８）。ＭｕＰｈｅＨＰｈｅＣＨ₂Ｂｒ（１００ｍｇ）、フッ化カリウム（４５ｍｇ）とイソカルボスチリル（１１２ｍｇ）をアルゴン下におき、次に４ｍＬの乾燥ＤＭＦを加える。反応液を室温で３時間攪拌し、その後反応液をエチルアセテートで希釈し短いシリカゲルコラムに通す。溶媒を真空下で除去し、生成物をサイズ排除クロマトグラフィー（ＬＨ−２０，メタノール）で精製して融点１０４−１０７℃の白色固体を得る。Ｎ−モルホリンカルボニル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ホモフェニルアラニン −α−（７−オキシ−クマリン）メチルケトン（Ａ１０）。ＭｕＰｈｅＨＰｈｅＣＨ₂Ｂｒ（２００ｍｇ）とフッ化カリウム（９０ｍｇ）をアルゴン下で、１．５ｍＬの乾燥ＤＭＦに加え、２５０ｍｇの７−ヒドロキシクマリンを加えた。反応液は明るい金色になり、１時間攪拌するとＴＬＣは臭化物の完全消失を示す。その後反応液を短いシリカゲルのコラム（ＣＨＣｌ₃／イソプロパノール、９：１）に通して溶媒を真空下で除去した。さらにクロマトグラフィー（ＬＧ−２０／メタノール）を用いて溶媒除去後に融点８７−８９℃の白色発泡固体を得た。同様に、融点９９−１０２℃のＮ−モルホリンカルボニル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ホモフェニルアラニル−α−（７−オキシ−４−メチル−クマリン）メチルケトン（Ａ９）を製造した。Ｎ−モルホリンカルボニル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ホモフェニルアラニン −α−（２−オキシ−ベンゾフラン）メチルケトン（Ａ１１）。ＭｕＰｈｅＨＰｈｅＣＨ₂Ｂｒ（１００ｍｇ）、２−クマラノン（５２ｍｇ）とフッ化カリウム（４５ｍｇ）をアルゴン下で試験管中におき、１ｍＬのＤＭＦを加えた。反応液はチェリーレッドになる。２０分後の反応液は、出発臭化物の消失を示す（ＴＬＣ，シリカゲル、ＣＨＣｌ₃／イソプロパノール：９／１）Ｒ_f生成物、０．５９；Ｒ_f臭化物０．４８。反応液を短いシリカゲルのプラグ（エチルアセテート）に通し、溶媒を真空下で除去した。残さを最低量の塩化メチレンに溶解し、エーテル中に沈殿させた。ろ過後の沈殿物から融点９４−１１０℃の白色固体を得た。Ｎ−モルホリンカルボニル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ホモフェニルアラニン −α−（３−オキシ−２−メチル−４−ピロン）メチルケトン（Ａ１２）。ＭｕＰｈｅＨＰｈｅＣＨ₂Ｂｒ（９４ｍｇ）、フッ化カリウム（４５ｍｇ）と３− ヒドロキシ−２−メチル−４−ピロンをアルゴン下で試験管中におき、５ｍＬの乾燥ＤＭＦを加えた。反応液を室温で２時間攪拌すると、反応液は出発物質の消失を示した（シリカゲル、ＣＨＣｌ₃／イソプロパノール、９／１）。その後反応液を短いシリカゲルのプラグに通し、溶媒を真空下で除去した。次に生成物をサイズ排除クロマトグラフィーにより精製し溶媒の揮発後、融点７１−８１℃の金色固体を得た。Ｎ−モルホリンカルボニル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ホモフェニルアラニン −α−（２−オキシ−ベンゾチアゾール）メチルケトン（Ａ１３）。ＭｕＰｈｅＨＰｈｅＣＨ₂Ｂｒ（１００ｍｇ）、２−ヒドロキシベンゾチアゾール（１１７ｍｇ）とフッ化カリウム（４５ｍｇ）をアルゴン下で試験管中におき、３ｍＬの乾燥ＤＭＦを加えた。反応液を室温でＴＬＣ（シリカゲル）が出発物質の消失を示すまで攪拌した。反応液を短いシリカゲルコラムに通し溶媒を真空下で除去した。残さを加熱メタノールに溶解する。白色の沈殿物が生成し、この沈殿物が、ろ過により、融点２１１−２１３℃の物質であることがわかる。Ｎ−モルホリンカルボニル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ホモフェニルアラニン −α−（２−オキシ−チオフェン）メチルケトン（Ａ１４）。ＭｕＰｈｅＨＰｈｅＣＨ₂Ｂｒ（２６５ｍｇ）、炭酸カリウム（１１９ｍｇ）、フッ化カリウム（２８４ｍｇ）をアルゴン下で一緒に加え、次に４ｍＬのＤＭＦ中のチオフェノン１グラムを加えて、反応液を室温で２時間攪拌した。溶媒を真空下で除去し、生成物を１０ｇのシリカゲルコラムで分離した。Ｎ−モルホリンカルボニル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ホモフェニルアラニン −α−（５−オキシ−３−メチル−４−イソオキサゾールカルボキシレート）メチルケトン（Ａ１５）。ＭｕＰｈｅＨＰｈｅＣＨ₂Ｂｒ（５１０ｍｇ）、エチル−５−ヒドロキシ−３−メチル−４−イソオキサゾールカルボキシレートナトリウム塩と５ｍＬのＤＭＦをアルゴン下、室温で４時間攪拌した。その後反応液を短いシリカゲルのプラグ（ＣＨＣｌ₃／イソプロパノール）に通して溶媒を真空下で除去した。生成物をサイズ排除クロマトグラフィー（ＬＨ−２０）により精製し、エーテル中で沈殿、ろ過後、９８−１０５℃で相変化により融解し１２５−１３１℃で再度融解する白色固体を得た。複素環脱離基に窒素を含有する阻害剤からのアルキルハライド塩の合成：Ｎ−モルホリンカルボニル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ホモフェニルアラニン−α− （１−オキシ−イソキノリン）メチルケトン（Ａ１６）のヨウ化メチルイソキノリン塩。化合物Ａ８（８３ｍｇ）を２ｍＬのトルエンに溶解し、１ｍＬのヨードメタンを加える。反応液を密封し２日間攪拌する。白色の沈殿物が生成し、この沈殿物をろ過し、真空下で乾燥することにより融点１５９−１６１℃の白色固体を得る。他の複素環を有する阻害剤の構造（ＩＣ₅₀ カテプシンＢ阻害）実施例１３ペプチド骨格に複素環を有する阻害剤の合成以下に示す反応式は、ペプチド骨格に複素環を有するシステインプロテアーゼ阻害剤の合成のための第一の方法である。この合成方法は、薬学ジャーナル３７，２１５「ＨＩＶ−１プロテアーゼ及びレニンのペプチド疑似阻害剤の設計及び合成」（”ＤｅｓｉｇｎａｎｄＳｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆＰｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃＩｎｈｉｂｉｔｏｒｓｏｆＨＩＶ−１ＰｒｏｔｅａｓｅａｎｄＲｅｎｉｎ，”３７Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２１５）に開示されたアモスビースミス（ＡｍｏｓＢ．Ｓｍｉｔｈ）とラルフハーシュマン（ＲａｌｐｈＨｉｒｓｈｍａｎ）の方法からの適用である。ペプチド骨格の複素環の合成：方法１^* このエステルの酸への加水分解により、本発明の阻害剤の合成において置換してもよいＮ−（モルホリンカルボニル）フェニルアラニンホモフェニルアラニンの同等物がつくられる。以下に示す反応式は、ペプチド骨格に複素環を有するシステインプロテアーゼ阻害剤の合成のための第二の方法を示す。この合成方法は、薬学ジャーナル３７，３３０３「人体白血球エラスターゼの非ペプチド阻害剤」（”ＮｏｎｐｅｐｔｉｄｉｃＩｎｈｉｂｉｔｏｒｓｏｆＨｕｍａｎＬｅｕｋｏｃｙｔｅＥｌａｓｔａｓｅ”３７Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３１０３）に開示されたデインウッドら（Ｄａｍｅｗｏｏｄｅｔａｌ．）の方法からの適用である。ペプチド骨格の複素環の合成：方法２^** Ａ．Ｐ₂の複素環Ｂ．Ｐ₁の複素環試薬：（ａ）ナトリウムエトキシド／エーテル、（ｂ）シアノアセトミド、ピペリジンアセテート、水、（ｃ）４８％ＨＢｒ，酢酸、（ｄ）ジフェニルホスホリルアジド［アルドリッチ（Ａｌｄｒｉｃｈ）］、トリエチルアミン、次にベンジルアルコール、（ｅ）水素化ナトリウム、ＤＭＦ，次にタート−ブチルブロモアセテート、（ｆ）塩化メチレン中のトリフルオロ酢酸、（ｇ）Ｎ−メチルモルホリン、イソブチルクロロフォーメート、次にＬ−ホモフェニル−アルファ −４−オキシ−ジヒドロフラン−２−オン）メチルケトン（実施例９）などの保護されていないアミノ酸アルファオキシ−複素環メチルケトン、（ｈ）Ｎ−メチルモルホリン、イソブチルクロロフォーメート次にダイアザルド（Ｄｉａｚａｌｄ）からのジアゾメタン／エーテル［アルドリッチ（Ａｌｄｒｉｃｈ）］、塩化メチレン中の３０％ＨＢｒ／酢酸、（ｊ）フッ化ナトリウム、ＤＭＦ、テトロン酸等のオキシ複素環、（ｋ）ジオキサン中の塩酸注意：この一つのアミノ酸フラグメントは上記のようにもう一つの保護されたアミノ酸フラグメント（Ｂ−Ｐ₂）との濃縮によりカテプシンＢ，Ｌ型阻害剤を生成する。実施例１４ＩＣＥ阻害剤テスト用プロトコルＮ−ベンゾオキシカルボニル−バリル−アラニル−アスパルチル−α−（４− オキシ−（６−メチル−２−ピロン）メチルケトンとＮ−モルホリンカルボニル−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル−アスパルチル（ＯｔＢｕ）−α−（アスコルビチル）メチルケトンの二つの阻害剤のＩＬ−１βプロテアーゼに対する阻害率を以下のようにして測定した。１０ｍＭジチオトレイトール、１００ｍＭヘペス（Ｈｅｐｅｓ）、１０％スクロース、０．１％ＣＨＡＰＳ、ｐＨ７．５緩衝剤と、５０μＭＺ−ＹＶＡＤ−ＡＦＣ基質との溶液を作成した。酵素を室温で、緩衝剤／基質溶液中で１分間活性化した。阻害剤をジメチルスルホキシド中の保存溶液として製造した。阻害剤と酵素／緩衝剤を３７℃で１５分間インキュベートした。阻害剤の最終濃度は２，０００ｎＭ，２００ｎＭ，２０ｎＭであった。コントロールと比較して、酵素活性を検出用の蛍光遊離基の放出によって３７℃で６０分間観測した。実施例１５カルパイン阻害剤テスト用プロトコル一つの阻害剤、アセチル−ロイシル−ロイシル−フェニルアラニル−α−（４ −オキシ−ジヒドロフラン−２−オン）メチルケトンのカルパイン（カルシウム活性化中性プロテアーゼ）に対する阻害率を以下のようにして測定した。５０ｍＭヘペス（Ｈｅｐｅｓ）、１０ｍＭ塩化カルシウム、５ｍＭシステイン、１ｍＭ β−メルカプトエタノール、ｐＨ７．５緩衝剤の溶液を作成した。酵素を室温で、緩衝溶液中で１分間活性化した。阻害剤をジメチルホルムアミドの保存溶液として製造した。阻害剤と酵素／緩衝剤を３７℃で３０分間インキュベートした。阻害剤の最終濃度は２０μＭ，２μＭ，２００n Ｍであった。コントロールと比較して、酵素活性を、２００μＭＢｏｃ−バルニル−ロイシル−リシン− ＡＦＣ基質を用いて、検出用の蛍光遊離基の放出によって３７℃で数分間観測した。阻害剤は２μＭ未満で酵素阻害活性を示した。図面及び上記の記載において、発明を詳細に説明したが、この発明は一例であり特徴を制限するものではないと考えられる。好ましい態様のみを説明したものであり、この発明の範囲内であるすべての変化、変更は保護されることが求められていると理解される。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＡ６１Ｋ 31/495 ＡＢＥＡ６１Ｋ 31/495 ＡＢＥ 31/505 ＡＤＵ 31/505 ＡＤＵ 31/535 ＡＢＧ 31/535 ＡＢＧ 38/00 ＡＡＡＣ０７Ｄ 217/22 Ｃ０７Ｄ 217/22 207/16 // Ｃ０７Ｄ 207/16 215/22 215/22 215/26 215/26 235/26 Ａ 235/26 239/88 239/88 307/60 Ｚ 307/60 307/62 307/62 309/32 309/32 309/38 309/38 309/40 309/40 311/16 １０１ 311/16 １０１ 311/18 311/18 311/46 311/46 333/64 333/64 333/68 333/68 335/02 335/02 487/04 １４６ 487/04 １４６Ｃ０７Ｋ 5/062 Ｃ０７Ｋ 5/062 5/065 5/065 Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＡＡ (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者ベッカー，マーク・ダブリューアメリカ合衆国カリフォルニア州94596, ウォルナット・クリーク，クリークサイド・ドライブ 1390，アパートメント 76

Claims

【特許請求の範囲】１．次式で表わされるカテプシンまたはカルパイン阻害剤：（式中、ＢはＨまたはＮ−末端保護基であり；Ｒ₁はＰ₁アミノ酸残基のアミノ酸側鎖であり、ここでＰ₁アミノ酸はＡｓｐではなく；各Ｐ_nはアミノ酸残基であるか、またはアミノ酸の複素環置換体であり、ここで、複素環はピペラジン、デカヒドロイソキノリン、ピロリノン、ピリジン、ピリドン、カルボリノン、キナゾリンまたはピリミドン等であり；ｍは０または正の整数であり；Ｒ₄はヒドロキシル基、アルコキシル基、アシル基、水素、アルキル基またはフェニル基であり；Ｒ₅とＲ₆は一緒になって、カルボキシル基またはアルキル基もしくはアリール基で終わる二重結合を表わすか、Ｒ₅とＲ₆はＲ₄が水素、アルキル基またはフェニル基のときは、各々独立にアシル基、アリール基またはヘテロアリール基であり、Ｒ₄がそれ以外のときは、各々独立にアシル基、アルキル基、水素、アリール基またはヘテロアリール基であり；そしてＸはＮ，Ｓ，ＯまたはＣＨ₂である）。２．次式で表わされるＩＣＥ阻害剤：（式中、ＢはＨまたはＮ−末端保護基であり；Ｒ₁はＡｓｐアミノ酸側鎖であり；各Ｐ_nはアミノ酸残基であるか、またはアミノ酸の複素環置換体であり、ここで、複素環はピペラジン、デカヒドロイソキノリン、ピロリノン、ピリジン、ピリドン、カルボリノン、キナゾリンまたはピリミドン等であり；ｍは０または正の整数であり；Ｒ₄はヒドロキシル基、アルコキシル基、アシル基、水素、アルキル基またはフェニル基であり；Ｒ₅とＲ₆は一緒になって、カルボキシル基またはアルキル基もしくはアリール基で終わる二重結合を表わすか、Ｒ₅とＲ₆はＲ₄が水素、アルキル基またはフェニル基のときは、各々独立にアシル基、アリール基またはヘテロアリール基であり、Ｒ₄がそれ以外のときは、各々独立にアシル基、アルキル基、水素、アリール基またはヘテロアリール基であり；そしてＸはＮ，Ｓ，ＯまたはＣＨ₂である）。３．ＸがＣＨ₂であり、Ｒ₅／Ｒ₆がカルボニル基であることを特徴とする、請求項２に記載のＩＣＥ阻害剤。４．次式で表わされるシステインプロテアーゼ阻害剤：（式中、ＢはＨまたはＮ−末端保護基であり；各Ｐ_nはアミノ酸残基であるか、またはアミノ酸の複素環置換体であり、ここで、複素環はピペラジン、デカヒドロイソキノリン、ピロリノン、ピリジン、ピリドン、カルボリノン、キナゾリンまたはピリミドン等であり；ｍは０または正の整数であり；Ｒ₁₀はＨまたは所望により置換されたアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基または糖の残基であり；そしてＸはＮ，Ｓ，ＯまたはＣＨ₂である）。５．次式で表わされるシステインプロテアーゼ阻害剤：（式中、ＢはＨまたはＮ−末端保護基であり；各Ｐ_nはアミノ酸残基であるか、またはアミノ酸の複素環置換体であり、ここで、複素環はピペラジン、デカヒドロイソキノリン、ピロリノン、ピリジン、ピリドン、カルボリノン、キナゾリンまたはピリミドン等であり；ｍは０または正の整数であり；Ｒ₄はヒドロキシル基、アルコキシル基、アシル基、水素、アルキル基またはフェニル基であり；Ｒ₅，Ｒ₆，Ｒ₇、Ｒ₈は各々独立に水素、アルキル基、アシル基、フェニル基、ハロ、ヒドロキシル基、オキシ基またはアルコキシ基であり；そしてＸはＮ，Ｓ，ＯまたはＣＨ₂である）。６．次式で表わされるシステインプロテアーゼ阻害剤：（式中、ＢはＨまたはＮ−末端保護基であり；各Ｐ_nはアミノ酸残基であるか、またはアミノ酸の複素環置換体であり、ここで、複素環はピペラジン、デカヒドロイソキノリン、ピロリノン、ピリジン、ピリドン、カルボリノン、キナゾリンまたはピリミドン等であり；ｍは０または正の整数であり；Ｒ₄はヒドロキシル基、アルコキシル基、アシル基、水素、アルキル基またはフェニル基であり；Ｒ₅とＲ₆はＲ₇とＲ₈に結合して飽和または不飽和のいずれか、もしくは芳香族である環を形成してもよく；そしてＸはＮ，Ｓ，ＯまたはＣＨ₂である）。７．次式で表わされるシステインプロテアーゼ阻害剤：（式中、ＢはＨまたはＮ−末端保護基であり；各Ｐｎはアミノ酸残基であるか、またはアミノ酸の複素環置換体であり、ここで、複素環はピペラジン、デカヒドロイソキノリン、ピロリノン、ピリジン、ピリドン、カルボリノン、キナゾリンまたはピリミドン等であり；ｍは０または正の整数であり；Ｒ₄はヒドロキシル基、アルコキシル基、アシル基、水素、アルキル基またはフェニル基であり；Ｒ₅とＲ₈は各々独立に水素、アルキル基、アシル基、フェニル基、ハロ、ヒドロキシル基、オキシ基またはアルコキシ基であり、Ｒ₅はＲ₈に結合して飽和または不飽和のいずれか、もしくは芳香族である同素環または複素環を形成してもよく；そしてＸはＮ，Ｓ，ＯまたはＣＨ₂である）。８．次式で表わされるシステインプロテアーゼ阻害剤：（式中、ＢはＨまたはＮ−末端保護基であり；各Ｐ_nはアミノ酸残基であるか、またはアミノ酸の複素環置換体であり、ここで、複素環はピペラジン、デカヒドロイソキノリン、ピロリノン、ピリジン、ピリドン、カルボリノン、キナゾリンまたはピリミドン等であり；ｍは０または正の整数であり；Ｒ₅とＲ₆は各々独立に水素、アルキル基またはアシル基であり；そしてＸはＮ，Ｓ，ＯまたはＣＨ₂である）。９．Ｒ₅とＦ₆が各々水素であることを特徴とする、請求項８に記載のシステインプロテアーゼ阻害剤。１０．次式で表わされるシステインプロテアーゼ阻害剤：（式中、ＢはＨまたはＮ−末端保護基であり；各Ｐ_nはアミノ酸残基であるか、またはアミノ酸の複素環置換体であり、ここで、複素環はピペラジン、デカヒドロイソキノリン、ピロリノン、ピリジン、ピリドン、カルボリノン、キナゾリンまたはピリミドン等であり；ｍは０または正の整数であり；Ｒ₂とＲ₃は各々独立にＨ、アルキル基またはアルケニル基であり；そしてＸはＮ，Ｓ，ＯまたはＣＨ₂である）。１１．Ｒ₂がＣＨ₃であり、Ｒ₃がＣ₂Ｈ₅であることを特徴とする、請求項１０に記載のシステインプロテアーゼ阻害剤。１２．脱離基の置換基がＣ_2-8アルキルまたはアルケニル伸びきり鎖であることを特徴とする、請求項９に記載のシステインプロテアーゼ阻害剤。