JPH1146781A - ヒトａｄａｍｔｓ−１タンパク質、それをコードする遺伝子、医薬組成物、及びヒトａｄａｍｔｓ−１タンパク質の免疫学的分析方法 - Google Patents
ヒトａｄａｍｔｓ−１タンパク質、それをコードする遺伝子、医薬組成物、及びヒトａｄａｍｔｓ−１タンパク質の免疫学的分析方法Info
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- JPH1146781A JPH1146781A JP10169158A JP16915898A JPH1146781A JP H1146781 A JPH1146781 A JP H1146781A JP 10169158 A JP10169158 A JP 10169158A JP 16915898 A JP16915898 A JP 16915898A JP H1146781 A JPH1146781 A JP H1146781A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 白血球及び血小板の数を低下させ、同時に、
赤血球の数を増加させることができる新規タンパク質、
それをコードする遺伝子、医薬組成物、及び前記タンパ
ク質の免疫学的分析方法を提供する。 【解決手段】 本発明のヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク
質は、アミノ酸残基７２７個からなり、マトリックスメ
タロプロテアーゼドメイン、ディスインテグリンドメイ
ン、及び３個のトロンボスポンジンドメインを有する。
本発明の医薬組成物は、有効成分として前記タンパク質
を含有する。本発明の免疫学的分析方法では、前記タン
パク質と特異的に反応することのできる免疫反応性物質
を用いる。
赤血球の数を増加させることができる新規タンパク質、
それをコードする遺伝子、医薬組成物、及び前記タンパ
ク質の免疫学的分析方法を提供する。 【解決手段】 本発明のヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク
質は、アミノ酸残基７２７個からなり、マトリックスメ
タロプロテアーゼドメイン、ディスインテグリンドメイ
ン、及び３個のトロンボスポンジンドメインを有する。
本発明の医薬組成物は、有効成分として前記タンパク質
を含有する。本発明の免疫学的分析方法では、前記タン
パク質と特異的に反応することのできる免疫反応性物質
を用いる。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、ヒトＡＤＡＭＴＳ
−１タンパク質、それをコードする遺伝子、医薬組成
物、及びヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質の免疫学的分
析方法に関する。
−１タンパク質、それをコードする遺伝子、医薬組成
物、及びヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質の免疫学的分
析方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】マウスＡＤＡＭＴＳ（Ａ ｄｉｓｉｎｔ
ｅｇｒｉｎ ａｎｄ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａ
ｓｅ ｗｉｔｈ ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ ｍｏ
ｔｉｆｓ）−１遺伝子は、マウスに移植すると癌悪疫質
を引き起こすマウス大腸癌細胞株から、ｃＤＮＡとして
単離された遺伝子であり、この遺伝子にコードされるマ
ウスＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質は、マトリックスメタ
ロプロテアーゼドメイン、ディスインテグリンドメイ
ン、及び３個のトロンボスポンジンドメインを有するユ
ニークなタンパク質である［Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅ
ｍ．，２７２，５５６−５６２（１９９７）］。
ｅｇｒｉｎ ａｎｄ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａ
ｓｅ ｗｉｔｈ ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ ｍｏ
ｔｉｆｓ）−１遺伝子は、マウスに移植すると癌悪疫質
を引き起こすマウス大腸癌細胞株から、ｃＤＮＡとして
単離された遺伝子であり、この遺伝子にコードされるマ
ウスＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質は、マトリックスメタ
ロプロテアーゼドメイン、ディスインテグリンドメイ
ン、及び３個のトロンボスポンジンドメインを有するユ
ニークなタンパク質である［Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅ
ｍ．，２７２，５５６−５６２（１９９７）］。
【０００３】マウスＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質の生理
学的機能は未だに不明であるが、前記タンパク質に含ま
れている個々の機能ドメインについては、すでに種々の
報告がある。例えば、ヘビ毒のディスインテグリンは、
システィンに富み、抗血液凝固作用を有するタンパク質
のファミリーに属する［Ｓｅｍｉｎ．Ｈｅｍａｔｏ
ｌ．，３１，２８９−３００（１９９４）］。
学的機能は未だに不明であるが、前記タンパク質に含ま
れている個々の機能ドメインについては、すでに種々の
報告がある。例えば、ヘビ毒のディスインテグリンは、
システィンに富み、抗血液凝固作用を有するタンパク質
のファミリーに属する［Ｓｅｍｉｎ．Ｈｅｍａｔｏ
ｌ．，３１，２８９−３００（１９９４）］。
【０００４】また、例えば、マトリックスメタロプロテ
アーゼドメインとディスインテグリンドメインとを有す
るタンパク質ファミリーとしては、従来から、ＡＤＡＭ
（Ａｄｉｓｉｎｔｅｇｒｉｎ ａｎｄ ｍｅｔａｌｌｏ
ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ）ファミリーが知られている［Ｎ
ａｔｕｒｅ，３７７，６５２−６５６（１９９５）；Ｎ
ａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔ．，５，１５１−１５７（１９
９３）；Ｎａｔｕｒｅ，３５６，２４８−２５２（１９
９２）］。これまでにＡＤＡＭファミリーとして知られ
るタンパク質としては、例えば、、ファーティリン（ｆ
ｅｒｔｉｌｉｎ）、エピダーマルアピカルプロテイン
（ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ａｐｉｃａｌ ｐｒｏｔｅｉ
ｎ）、シリテスチン（ｃｙｒｉｔｅｓｔｉｎ）、ＭＤＣ
（システイン含有量の高いメタロプロテアーゼ様ディス
インテグリン様タンパク質；ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅ
ａｓｅ−ｌｉｋｅ，ｄｉｓｉｎｔｅｇｒｉｎ−ｌｉｋｅ
ａｎｄ ｃｙｓｔｅｉｎ−ｒｉｃｈ ｐｒｏｔｅｉ
ｎ）、メルトリン（ｍｅｌｔｒｉｎ）、ＭＳ２、及びメ
タージディン（ｍｅｔａｒｇｉｄｉｎ）を挙げることが
できる［Ｎａｔｕｒｅ，３７７，６５２−６５６（１９
９５）；Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔ．５，１５１−１５
７（１９９３）；Ｎａｔｕｒｅ，３５６，２４８−２５
２（１９９２）；Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．，２８６，６７
１−６７５（１９９２）；Ｄｅｖ．Ｇｒｏｗｔｈ．Ｄｉ
ｆｆｅｒ．，３６，４９−５８（１９９４）；Ｉｎｔ．
Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２，５８５−５９１（１９９０）；
Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７１，４５９３−４５９
６（１９９６）］。ファーティリンは、インテグリンを
介する精子と卵子の結合に関与しているとの報告［Ｎａ
ｔｕｒｅ，３５６，２４８−２５２（１９９２）］があ
り、メルトリンは、筋間形成に関与しているとの報告
［Ｎａｔｕｒｅ，３７７，６５２−６５６（１９９
５）］がある。主として中枢神経などで発現しているＭ
ＤＣは、ヒト乳癌の抑制に働く候補タンパク質である
［Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔ．５，１５１−１５７（１
９９３）］。また、ＭＳ２は、マクロファージの１つの
抗原として働いている［Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，
２，５８５−５９１（１９９０）］。しかし、これらＡ
ＤＡＭファミリーに属するタンパク質の生理学的役割は
依然として多くは不明である。
アーゼドメインとディスインテグリンドメインとを有す
るタンパク質ファミリーとしては、従来から、ＡＤＡＭ
（Ａｄｉｓｉｎｔｅｇｒｉｎ ａｎｄ ｍｅｔａｌｌｏ
ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ）ファミリーが知られている［Ｎ
ａｔｕｒｅ，３７７，６５２−６５６（１９９５）；Ｎ
ａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔ．，５，１５１−１５７（１９
９３）；Ｎａｔｕｒｅ，３５６，２４８−２５２（１９
９２）］。これまでにＡＤＡＭファミリーとして知られ
るタンパク質としては、例えば、、ファーティリン（ｆ
ｅｒｔｉｌｉｎ）、エピダーマルアピカルプロテイン
（ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ａｐｉｃａｌ ｐｒｏｔｅｉ
ｎ）、シリテスチン（ｃｙｒｉｔｅｓｔｉｎ）、ＭＤＣ
（システイン含有量の高いメタロプロテアーゼ様ディス
インテグリン様タンパク質；ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅ
ａｓｅ−ｌｉｋｅ，ｄｉｓｉｎｔｅｇｒｉｎ−ｌｉｋｅ
ａｎｄ ｃｙｓｔｅｉｎ−ｒｉｃｈ ｐｒｏｔｅｉ
ｎ）、メルトリン（ｍｅｌｔｒｉｎ）、ＭＳ２、及びメ
タージディン（ｍｅｔａｒｇｉｄｉｎ）を挙げることが
できる［Ｎａｔｕｒｅ，３７７，６５２−６５６（１９
９５）；Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔ．５，１５１−１５
７（１９９３）；Ｎａｔｕｒｅ，３５６，２４８−２５
２（１９９２）；Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．，２８６，６７
１−６７５（１９９２）；Ｄｅｖ．Ｇｒｏｗｔｈ．Ｄｉ
ｆｆｅｒ．，３６，４９−５８（１９９４）；Ｉｎｔ．
Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２，５８５−５９１（１９９０）；
Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７１，４５９３−４５９
６（１９９６）］。ファーティリンは、インテグリンを
介する精子と卵子の結合に関与しているとの報告［Ｎａ
ｔｕｒｅ，３５６，２４８−２５２（１９９２）］があ
り、メルトリンは、筋間形成に関与しているとの報告
［Ｎａｔｕｒｅ，３７７，６５２−６５６（１９９
５）］がある。主として中枢神経などで発現しているＭ
ＤＣは、ヒト乳癌の抑制に働く候補タンパク質である
［Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔ．５，１５１−１５７（１
９９３）］。また、ＭＳ２は、マクロファージの１つの
抗原として働いている［Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，
２，５８５−５９１（１９９０）］。しかし、これらＡ
ＤＡＭファミリーに属するタンパク質の生理学的役割は
依然として多くは不明である。
【０００５】マウスＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質は、マ
トリックスメタロプロテアーゼドメイン及びディスイン
テグリンドメインを有するので、ＡＤＡＭファミリーに
属するが、トロンボスポンジンドメインを有する点で、
従来公知のＡＤＡＭファミリーに属するタンパク質とは
異なる。マトリックスメタロプロテアーゼドメイン及び
ディスインテグリンドメインを有するＡＤＡＭファミリ
ーには、先に述べたように、骨や筋肉代謝、癌増殖抑
制、又は受精に関与する各種タンパク質が含まれ、ま
た、トロンボスポンジンには血管新生阻害作用、及び癌
抑制作用があることから、マウスＡＤＡＭＴＳ−１タン
パク質には特徴的生理機能があると思われる。
トリックスメタロプロテアーゼドメイン及びディスイン
テグリンドメインを有するので、ＡＤＡＭファミリーに
属するが、トロンボスポンジンドメインを有する点で、
従来公知のＡＤＡＭファミリーに属するタンパク質とは
異なる。マトリックスメタロプロテアーゼドメイン及び
ディスインテグリンドメインを有するＡＤＡＭファミリ
ーには、先に述べたように、骨や筋肉代謝、癌増殖抑
制、又は受精に関与する各種タンパク質が含まれ、ま
た、トロンボスポンジンには血管新生阻害作用、及び癌
抑制作用があることから、マウスＡＤＡＭＴＳ−１タン
パク質には特徴的生理機能があると思われる。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】本発明者は、未知のヒ
トＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質を取得することを目指し
て、既知のマウスＡＤＡＭＴＳ−１遺伝子の塩基配列を
基に設計した各種プローブを用いて、ヒト腎臓ｃＤＮＡ
ライブラリーからプラークハイブリダイゼーション法に
よりヒトＡＤＡＭＴＳ−１遺伝子を取得しようと試みた
ところ、目的の遺伝子を取得することはできなかった。
また、既知のマウスＡＤＡＭＴＳ−１遺伝子の塩基配列
を基に設計した各種プライマーを用いて、ヒト腎臓ｃＤ
ＮＡライブラリーを鋳型とするＰＣＲ法を通常の条件で
実施することによって目的遺伝子の取得を試みたが、成
功しなかった。そこで、本発明者は、前記のプライマー
を用いて、通常よりも緩い条件、すなわち、アニーリン
グ温度を通常よりも低い条件で、ヒト腎臓ｃＤＮＡライ
ブラリーを鋳型とするＰＣＲ法を実施することにより、
新規のヒトＡＤＡＭＴＳ−１遺伝子を単離することがで
きた。こうして得られた遺伝子を大腸菌で産生させ、得
られた組換えヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質の生物活
性を検討したところ、驚くべきことに、新規のヒトＡＤ
ＡＭＴＳ−１タンパク質が、白血球及び血小板の数を低
下させ、同時に、赤血球の数を増加させる活性を有する
ことが判明した。このような造血機能に影響を与える活
性は、プライマーを設計するのに参照したマウスＡＤＡ
ＭＴＳ−１遺伝子の由来からは予想することができず、
また、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質に含まれる各ド
メインの機能からも予想することができないものであ
る。本発明は、このような知見に基づくものである。
トＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質を取得することを目指し
て、既知のマウスＡＤＡＭＴＳ−１遺伝子の塩基配列を
基に設計した各種プローブを用いて、ヒト腎臓ｃＤＮＡ
ライブラリーからプラークハイブリダイゼーション法に
よりヒトＡＤＡＭＴＳ−１遺伝子を取得しようと試みた
ところ、目的の遺伝子を取得することはできなかった。
また、既知のマウスＡＤＡＭＴＳ−１遺伝子の塩基配列
を基に設計した各種プライマーを用いて、ヒト腎臓ｃＤ
ＮＡライブラリーを鋳型とするＰＣＲ法を通常の条件で
実施することによって目的遺伝子の取得を試みたが、成
功しなかった。そこで、本発明者は、前記のプライマー
を用いて、通常よりも緩い条件、すなわち、アニーリン
グ温度を通常よりも低い条件で、ヒト腎臓ｃＤＮＡライ
ブラリーを鋳型とするＰＣＲ法を実施することにより、
新規のヒトＡＤＡＭＴＳ−１遺伝子を単離することがで
きた。こうして得られた遺伝子を大腸菌で産生させ、得
られた組換えヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質の生物活
性を検討したところ、驚くべきことに、新規のヒトＡＤ
ＡＭＴＳ−１タンパク質が、白血球及び血小板の数を低
下させ、同時に、赤血球の数を増加させる活性を有する
ことが判明した。このような造血機能に影響を与える活
性は、プライマーを設計するのに参照したマウスＡＤＡ
ＭＴＳ−１遺伝子の由来からは予想することができず、
また、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質に含まれる各ド
メインの機能からも予想することができないものであ
る。本発明は、このような知見に基づくものである。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明は、配列表の配列
番号１の配列で表わされるアミノ酸配列を含むことを特
徴とするタンパク質に関する。また、本発明は、前記タ
ンパク質又はその改変体をコードすることを特徴とする
遺伝子に関する。また、本発明は、前記遺伝子を含むこ
とを特徴とするベクターに関する。また、本発明は、前
記ベクターにより形質転換されたことを特徴とする形質
転換体に関する。
番号１の配列で表わされるアミノ酸配列を含むことを特
徴とするタンパク質に関する。また、本発明は、前記タ
ンパク質又はその改変体をコードすることを特徴とする
遺伝子に関する。また、本発明は、前記遺伝子を含むこ
とを特徴とするベクターに関する。また、本発明は、前
記ベクターにより形質転換されたことを特徴とする形質
転換体に関する。
【０００８】また、本発明は、前記タンパク質又はその
改変体を含有することを特徴とする医薬組成物に関す
る。また、本発明は、前記タンパク質又はその改変体と
特異的に反応することを特徴とする免疫反応性物質（例
えば、ポリクローナル抗体若しくはモノクローナル抗
体、若しくはこれらの抗体フラグメント、又は抗血清な
ど）に関する。また、本発明は、前記免疫反応性物質
と、被検試料とを接触させ、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タン
パク質と前記免疫反応性物質との結合体を検出すること
を特徴とする、前記ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質の
免疫学的分析方法に関する。また、本発明は、配列表の
配列番号１の配列で表わされるアミノ酸配列からなるヒ
トＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質のｍＲＮＡの塩基配列に
相補的な塩基配列を含むポリヌクレオチドと、被検試料
とを接触させ、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質のｍＲ
ＮＡと前記遺伝子との結合体を検出することを特徴とす
る、前記ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質のｍＲＮＡの
分析方法に関する。
改変体を含有することを特徴とする医薬組成物に関す
る。また、本発明は、前記タンパク質又はその改変体と
特異的に反応することを特徴とする免疫反応性物質（例
えば、ポリクローナル抗体若しくはモノクローナル抗
体、若しくはこれらの抗体フラグメント、又は抗血清な
ど）に関する。また、本発明は、前記免疫反応性物質
と、被検試料とを接触させ、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タン
パク質と前記免疫反応性物質との結合体を検出すること
を特徴とする、前記ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質の
免疫学的分析方法に関する。また、本発明は、配列表の
配列番号１の配列で表わされるアミノ酸配列からなるヒ
トＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質のｍＲＮＡの塩基配列に
相補的な塩基配列を含むポリヌクレオチドと、被検試料
とを接触させ、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質のｍＲ
ＮＡと前記遺伝子との結合体を検出することを特徴とす
る、前記ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質のｍＲＮＡの
分析方法に関する。
【０００９】また、本発明は、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タ
ンパク質、又はそのｍＲＮＡを分析することを特徴とす
る、免疫状態の体外検出方法に関する。更に、本発明
は、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質と免疫学的に反応
することのできる免疫反応性物質、又はヒトＡＤＡＭＴ
Ｓ−１タンパク質のｍＲＮＡの塩基配列に相補的な塩基
配列を含むポリヌクレオチドを含有することを特徴とす
る、免疫状態の分析試薬に関する。
ンパク質、又はそのｍＲＮＡを分析することを特徴とす
る、免疫状態の体外検出方法に関する。更に、本発明
は、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質と免疫学的に反応
することのできる免疫反応性物質、又はヒトＡＤＡＭＴ
Ｓ−１タンパク質のｍＲＮＡの塩基配列に相補的な塩基
配列を含むポリヌクレオチドを含有することを特徴とす
る、免疫状態の分析試薬に関する。
【００１０】
【発明の実施の形態】以下、本発明を詳細に説明する。
本発明によるヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質は、アミ
ノ酸残基７２７個からなり、配列表の配列番号１の配列
で表わされるアミノ酸配列からなる新規のタンパク質で
ある。本発明のヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質は、図
１０〜図１２に示すように、Ｎ末端アミノ酸残基である
メチオニンから数えて第１２番目〜第２３０番目のアミ
ノ酸残基からなるマトリックスメタロプロテアーゼ（以
下、ＭＭＰと称することがある）ドメイン、第２３５番
目〜第３０５番目のアミノ酸残基からなるディスインテ
グリン（以下、ＤＩと称することがある）ドメイン、並
びに第３２２番目〜第３７２番目、第６１８番目〜第６
６４番目、及び第６７２番目〜第７２７番目のアミノ酸
残基からなる３個のトロンボスポンジン（以下、ＴＳＰ
と称することがある）ドメインを有する。また、塩基性
アミノ酸であるアルギニン及びリジンがＣ末端領域に多
く存在し、このことから、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパ
ク質は、血液中においてヘパリンやヘパラン硫酸などの
硫酸化多糖分子と相互作用していると思われる。
本発明によるヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質は、アミ
ノ酸残基７２７個からなり、配列表の配列番号１の配列
で表わされるアミノ酸配列からなる新規のタンパク質で
ある。本発明のヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質は、図
１０〜図１２に示すように、Ｎ末端アミノ酸残基である
メチオニンから数えて第１２番目〜第２３０番目のアミ
ノ酸残基からなるマトリックスメタロプロテアーゼ（以
下、ＭＭＰと称することがある）ドメイン、第２３５番
目〜第３０５番目のアミノ酸残基からなるディスインテ
グリン（以下、ＤＩと称することがある）ドメイン、並
びに第３２２番目〜第３７２番目、第６１８番目〜第６
６４番目、及び第６７２番目〜第７２７番目のアミノ酸
残基からなる３個のトロンボスポンジン（以下、ＴＳＰ
と称することがある）ドメインを有する。また、塩基性
アミノ酸であるアルギニン及びリジンがＣ末端領域に多
く存在し、このことから、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパ
ク質は、血液中においてヘパリンやヘパラン硫酸などの
硫酸化多糖分子と相互作用していると思われる。
【００１１】本発明によるタンパク質には、配列表の配
列番号１の配列で表わされるアミノ酸配列を含むタンパ
ク質、又はヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質改変体が含
まれる。本明細書において、「ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タ
ンパク質改変体」とは、そのアミノ酸配列が、ヒトＡＤ
ＡＭＴＳ−１タンパク質のアミノ酸配列、すなわち、配
列表の配列番号１の配列で表わされるアミノ酸配列にお
いて、１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、又は付加さ
れたアミノ酸配列であって、かつヒトＡＤＡＭＴＳ−１
活性を有するタンパク質を意味する。また、本明細書に
おいて、「ヒトＡＤＡＭＴＳ−１活性」とは、造血機能
に影響を与える活性、例えば、白血球及び血小板の数を
低下させ、同時に、赤血球の数を増加させる活性を意味
する。更に、本発明によるタンパク質には、配列表の配
列番号１の配列で表わされるアミノ酸配列を含む前記タ
ンパク質、若しくは前記改変体の一部分であり、かつヒ
トＡＤＡＭＴＳ−１活性を有する断片も含まれる。
列番号１の配列で表わされるアミノ酸配列を含むタンパ
ク質、又はヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質改変体が含
まれる。本明細書において、「ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タ
ンパク質改変体」とは、そのアミノ酸配列が、ヒトＡＤ
ＡＭＴＳ−１タンパク質のアミノ酸配列、すなわち、配
列表の配列番号１の配列で表わされるアミノ酸配列にお
いて、１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、又は付加さ
れたアミノ酸配列であって、かつヒトＡＤＡＭＴＳ−１
活性を有するタンパク質を意味する。また、本明細書に
おいて、「ヒトＡＤＡＭＴＳ−１活性」とは、造血機能
に影響を与える活性、例えば、白血球及び血小板の数を
低下させ、同時に、赤血球の数を増加させる活性を意味
する。更に、本発明によるタンパク質には、配列表の配
列番号１の配列で表わされるアミノ酸配列を含む前記タ
ンパク質、若しくは前記改変体の一部分であり、かつヒ
トＡＤＡＭＴＳ−１活性を有する断片も含まれる。
【００１２】本発明によるタンパク質は、種々の公知の
方法によって得ることができる。例えば、本発明による
遺伝子を用いて公知の遺伝子工学的手法により調製する
こともできるし、あるいは、公知のタンパク質化学的手
法により天然由来の本発明のタンパク質を精製すること
もできる。
方法によって得ることができる。例えば、本発明による
遺伝子を用いて公知の遺伝子工学的手法により調製する
こともできるし、あるいは、公知のタンパク質化学的手
法により天然由来の本発明のタンパク質を精製すること
もできる。
【００１３】本発明の遺伝子には、配列表の配列番号１
の配列で表わされるアミノ酸配列を含むタンパク質（特
には、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１）、又はヒトＡＤＡＭＴＳ
−１タンパク質改変体をコードする遺伝子が含まれる。
なお、前記遺伝子には、ＤＮＡ及びＲＮＡの両方が含ま
れる。ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質をコードする遺
伝子としては、例えば、配列表の配列番号２の配列で表
わされる塩基配列からなる遺伝子を挙げることができ
る。
の配列で表わされるアミノ酸配列を含むタンパク質（特
には、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１）、又はヒトＡＤＡＭＴＳ
−１タンパク質改変体をコードする遺伝子が含まれる。
なお、前記遺伝子には、ＤＮＡ及びＲＮＡの両方が含ま
れる。ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質をコードする遺
伝子としては、例えば、配列表の配列番号２の配列で表
わされる塩基配列からなる遺伝子を挙げることができ
る。
【００１４】本発明の遺伝子、例えば、配列表の配列番
号２の配列で表わされる塩基配列からなる遺伝子は、例
えば、本発明者が前記遺伝子を最初に取得する際に用い
た以下の方法により取得することができる。すなわち、
マウスＡＤＡＭＴＳ−１遺伝子の塩基配列を参照して適
当な各種ＰＣＲ用プライマーを作製し、通常よりも緩い
条件、すなわち、アニーリング温度を通常よりも低い条
件で、ヒト腎臓由来のｃＤＮＡライブラリーを鋳型ＤＮ
ＡとしてＰＣＲ法を実行することにより、ＤＮＡ断片を
得ることができる。このＤＮＡ断片の塩基配列を決定
し、マウスＡＤＡＭＴＳ−１遺伝子の塩基配列と比較す
ることにより、目的遺伝子であることを確認することが
できる。ＰＣＲ法に用いるプライマーの種類に応じて、
ヒトＡＤＡＭＴＳ−１遺伝子の全配列を取得することも
できるし、あるいは、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１遺伝子の部
分塩基配列を取得し、続いて、ＲＡＣＥ法（Ｒａｐｉｄ
ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｃＤＮＡ ｅｎ
ｄｓ）法［Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ
ＳＡ，８５，８９９８−９００２（１９８８）］により
残りの部分塩基配列を取得し、これらの部分塩基配列を
遺伝子工学的手法により連結することにより全配列を取
得することもできる。
号２の配列で表わされる塩基配列からなる遺伝子は、例
えば、本発明者が前記遺伝子を最初に取得する際に用い
た以下の方法により取得することができる。すなわち、
マウスＡＤＡＭＴＳ−１遺伝子の塩基配列を参照して適
当な各種ＰＣＲ用プライマーを作製し、通常よりも緩い
条件、すなわち、アニーリング温度を通常よりも低い条
件で、ヒト腎臓由来のｃＤＮＡライブラリーを鋳型ＤＮ
ＡとしてＰＣＲ法を実行することにより、ＤＮＡ断片を
得ることができる。このＤＮＡ断片の塩基配列を決定
し、マウスＡＤＡＭＴＳ−１遺伝子の塩基配列と比較す
ることにより、目的遺伝子であることを確認することが
できる。ＰＣＲ法に用いるプライマーの種類に応じて、
ヒトＡＤＡＭＴＳ−１遺伝子の全配列を取得することも
できるし、あるいは、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１遺伝子の部
分塩基配列を取得し、続いて、ＲＡＣＥ法（Ｒａｐｉｄ
ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｃＤＮＡ ｅｎ
ｄｓ）法［Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ
ＳＡ，８５，８９９８−９００２（１９８８）］により
残りの部分塩基配列を取得し、これらの部分塩基配列を
遺伝子工学的手法により連結することにより全配列を取
得することもできる。
【００１５】なお、本発明者が実施した前記遺伝子取得
方法においては、前記ＰＣＲプライマーの塩基配列を設
計する際に、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１遺伝子の塩基配列が
未知であったので、マウスＡＤＡＭＴＳ−１遺伝子とヒ
トＡＤＡＭＴＳ−１遺伝子との間で完全な相同性を示す
配列を選択することは実質的に不可能であった。本発明
者は、マウスＡＤＡＭＴＳ−１遺伝子の塩基配列を基に
設計したプライマーを用いて、通常の温度条件でＰＣＲ
法を実施したが、目的のＤＮＡ断片を得ることができな
かった。本発明者は、同じプライマーを用いて、通常よ
りも緩い条件下、すなわち、通常よりも低いアニーリン
グ温度でＰＣＲ法を実施することにより、目的とするＤ
ＮＡ断片を得ることができた。取得したヒトＡＤＡＭＴ
Ｓ−１遺伝子の塩基配列と、前記プライマーの塩基配列
を比較した結果、塩基配列の相同性は、充分なものでは
なかった。
方法においては、前記ＰＣＲプライマーの塩基配列を設
計する際に、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１遺伝子の塩基配列が
未知であったので、マウスＡＤＡＭＴＳ−１遺伝子とヒ
トＡＤＡＭＴＳ−１遺伝子との間で完全な相同性を示す
配列を選択することは実質的に不可能であった。本発明
者は、マウスＡＤＡＭＴＳ−１遺伝子の塩基配列を基に
設計したプライマーを用いて、通常の温度条件でＰＣＲ
法を実施したが、目的のＤＮＡ断片を得ることができな
かった。本発明者は、同じプライマーを用いて、通常よ
りも緩い条件下、すなわち、通常よりも低いアニーリン
グ温度でＰＣＲ法を実施することにより、目的とするＤ
ＮＡ断片を得ることができた。取得したヒトＡＤＡＭＴ
Ｓ−１遺伝子の塩基配列と、前記プライマーの塩基配列
を比較した結果、塩基配列の相同性は、充分なものでは
なかった。
【００１６】本発明によってヒトＡＤＡＭＴＳ−１遺伝
子の塩基配列が解明されたので、ＰＣＲ法におけるプラ
イマーの設計、又はプラークハイブリダイゼーション法
におけるプローブの設計に、このヒトＡＤＡＭＴＳ−１
遺伝子の塩基配列を利用することができる。このような
プライマー又はプローブを用いると、本発明の遺伝子
は、本発明者がその遺伝子を最初に取得する際に用いた
前記方法に限らず、公知の遺伝子取得方法、例えば、通
常条件によるＰＣＲ法、又はプラークハイブリダイゼー
ション法などを用いても調製することができる。なお、
本発明者は、既知のマウスＡＤＡＭＴＳ−１遺伝子の塩
基配列を基に設計したプローブを用いて、プラークハイ
ブリダイゼーション法によりヒト腎臓ｃＤＮＡライブラ
リーから未知のヒトＡＤＡＭＴＳ−１遺伝子を取得しよ
うと試みたが、目的とする遺伝子を取得することができ
なかった。この原因として、用いたプローブの塩基配列
の相同性が充分でなかったことを挙げることができる
が、それ以外の原因として、ノーザンハイブリダイゼー
ション法を用いて、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質の
ｍＲＮＡ解析を行ったところ、その発現量が非常に少な
く、ｃＤＮＡライブラリーを作製しても、そのライブラ
リー中に含まれるヒトＡＤＡＭＴＳ−１遺伝子のコピー
数が、非常に少ないためであったことを確認している。
ヒトＡＤＡＭＴＳ−１遺伝子の塩基配列を基に設計した
プローブを使用することにより、プラークハイブリダイ
ゼーション法によっても、本発明の遺伝子を取得するこ
とが可能である。
子の塩基配列が解明されたので、ＰＣＲ法におけるプラ
イマーの設計、又はプラークハイブリダイゼーション法
におけるプローブの設計に、このヒトＡＤＡＭＴＳ−１
遺伝子の塩基配列を利用することができる。このような
プライマー又はプローブを用いると、本発明の遺伝子
は、本発明者がその遺伝子を最初に取得する際に用いた
前記方法に限らず、公知の遺伝子取得方法、例えば、通
常条件によるＰＣＲ法、又はプラークハイブリダイゼー
ション法などを用いても調製することができる。なお、
本発明者は、既知のマウスＡＤＡＭＴＳ−１遺伝子の塩
基配列を基に設計したプローブを用いて、プラークハイ
ブリダイゼーション法によりヒト腎臓ｃＤＮＡライブラ
リーから未知のヒトＡＤＡＭＴＳ−１遺伝子を取得しよ
うと試みたが、目的とする遺伝子を取得することができ
なかった。この原因として、用いたプローブの塩基配列
の相同性が充分でなかったことを挙げることができる
が、それ以外の原因として、ノーザンハイブリダイゼー
ション法を用いて、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質の
ｍＲＮＡ解析を行ったところ、その発現量が非常に少な
く、ｃＤＮＡライブラリーを作製しても、そのライブラ
リー中に含まれるヒトＡＤＡＭＴＳ−１遺伝子のコピー
数が、非常に少ないためであったことを確認している。
ヒトＡＤＡＭＴＳ−１遺伝子の塩基配列を基に設計した
プローブを使用することにより、プラークハイブリダイ
ゼーション法によっても、本発明の遺伝子を取得するこ
とが可能である。
【００１７】こうして得られた本発明の遺伝子を、例え
ば、真核生物又は原核生物を宿主として用いて、本発明
のタンパク質を発現させることができる。目的とする遺
伝子を含むＤＮＡ断片を、そのまま宿主細胞に入れても
増殖しないので、プラスミドのような細胞内で複製可能
な染色体外遺伝子をベクターとして、発現プラスミドを
作製することができる。使用することのできるベクター
は、宿主細胞内での複製に必要な遺伝情報を含み、自立
的に複製することができ、しかも、宿主細胞からの単離
精製が容易であり、検出可能なマーカーを有することが
望ましい。
ば、真核生物又は原核生物を宿主として用いて、本発明
のタンパク質を発現させることができる。目的とする遺
伝子を含むＤＮＡ断片を、そのまま宿主細胞に入れても
増殖しないので、プラスミドのような細胞内で複製可能
な染色体外遺伝子をベクターとして、発現プラスミドを
作製することができる。使用することのできるベクター
は、宿主細胞内での複製に必要な遺伝情報を含み、自立
的に複製することができ、しかも、宿主細胞からの単離
精製が容易であり、検出可能なマーカーを有することが
望ましい。
【００１８】本発明によるＤＮＡを含む発現ベクター
は、種々の市販のベクターを用いて、宿主細胞に応じて
適宜構築することができ、これらの公知ベクターへのＤ
ＮＡの挿入方法も周知である。原核生物の宿主として
は、大腸菌の菌株、例えば、ＸＬ１−Ｂｌｕｅ、ＨＢ１
０１、ＪＭ１０９、ＤＨ５α、ＡＧ−１、Ｋ１２株２９
４（ＡＴＣＣ３１４４６）、Ｂ、χ１７７６（ＡＴＣＣ
３１５３７）、Ｃ６００、若しくはＷ３１１０（Ｆ−、
λ−、プロトトロフィック；ＡＴＣＣ２７３７５）を挙
げることができる。また、バチラス属の菌株（例えば、
枯草菌）、腸内細菌［例えば、ネズミチフス菌若しくは
霊菌（Ｓｅｒｒａｔｉａ ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ）
等］、又はシュードモナス属の菌株等を挙げることがで
きる。
は、種々の市販のベクターを用いて、宿主細胞に応じて
適宜構築することができ、これらの公知ベクターへのＤ
ＮＡの挿入方法も周知である。原核生物の宿主として
は、大腸菌の菌株、例えば、ＸＬ１−Ｂｌｕｅ、ＨＢ１
０１、ＪＭ１０９、ＤＨ５α、ＡＧ−１、Ｋ１２株２９
４（ＡＴＣＣ３１４４６）、Ｂ、χ１７７６（ＡＴＣＣ
３１５３７）、Ｃ６００、若しくはＷ３１１０（Ｆ−、
λ−、プロトトロフィック；ＡＴＣＣ２７３７５）を挙
げることができる。また、バチラス属の菌株（例えば、
枯草菌）、腸内細菌［例えば、ネズミチフス菌若しくは
霊菌（Ｓｅｒｒａｔｉａ ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ）
等］、又はシュードモナス属の菌株等を挙げることがで
きる。
【００１９】前記の原核生物を宿主として使用する場合
のべクターとしては、本発明による遺伝子を発現するこ
とができるように前記遺伝子の上流にプロモ−タ−及び
ＳＤ塩基配列、更にタンパク質合成開始に必要な塩基配
列・ＡＴＧを付与した発現プラスミドを使用することが
できる。大腸菌株等のべクターとしては、一般に、ｐＵ
Ｃ１９、ｐＢＲ３２２、又はｐＢＲ３２７等が広く用い
られている。プロモーターとしては、例えば、トリプト
ファン・プロモーター、ＰL プロモーター、ｌａｃプロ
モーター、ｔａｃプロモーター、ｔｒｃプロモーター、
ｌｐｐプロモーター、又はβ−ラクタマーゼプロモータ
ー等を使用することができる。マーカー遺伝子の例とし
ては、アンピシリン耐性遺伝子、又はテトラサイクリン
耐性遺伝子を挙げることができる。
のべクターとしては、本発明による遺伝子を発現するこ
とができるように前記遺伝子の上流にプロモ−タ−及び
ＳＤ塩基配列、更にタンパク質合成開始に必要な塩基配
列・ＡＴＧを付与した発現プラスミドを使用することが
できる。大腸菌株等のべクターとしては、一般に、ｐＵ
Ｃ１９、ｐＢＲ３２２、又はｐＢＲ３２７等が広く用い
られている。プロモーターとしては、例えば、トリプト
ファン・プロモーター、ＰL プロモーター、ｌａｃプロ
モーター、ｔａｃプロモーター、ｔｒｃプロモーター、
ｌｐｐプロモーター、又はβ−ラクタマーゼプロモータ
ー等を使用することができる。マーカー遺伝子の例とし
ては、アンピシリン耐性遺伝子、又はテトラサイクリン
耐性遺伝子を挙げることができる。
【００２０】真核微生物の宿主としては、酵母が一般に
広く用いられ、その中でもサッカロミセス属酵母を有利
に利用することができる。酵母等の真核微生物の発現ベ
クターとしては、例えば、ＹＲｐ７等を用いることがで
きる。酵母発現用の発現べクターのプロモーターの例と
しては、アルコールデヒドロゲナーゼ（ＡＤＨ）、ＧＡ
Ｌ１０、３−ホスホグリセレートキナーゼ、エノラー
ゼ、グリセルアルデヒド−３−ホスフェートデヒドロゲ
ナーゼ、又はヘキソキナーゼなどを利用することができ
る。マーカー遺伝子としては、ｔｒｐｌ遺伝子等を利用
することができる。酵母細胞中における転写や翻訳を制
御するための複製起源や終止コドン及びその他のＤＮＡ
配列としては、酵母細胞に適している通常の公知のＤＮ
Ａ配列を用いることができる。
広く用いられ、その中でもサッカロミセス属酵母を有利
に利用することができる。酵母等の真核微生物の発現ベ
クターとしては、例えば、ＹＲｐ７等を用いることがで
きる。酵母発現用の発現べクターのプロモーターの例と
しては、アルコールデヒドロゲナーゼ（ＡＤＨ）、ＧＡ
Ｌ１０、３−ホスホグリセレートキナーゼ、エノラー
ゼ、グリセルアルデヒド−３−ホスフェートデヒドロゲ
ナーゼ、又はヘキソキナーゼなどを利用することができ
る。マーカー遺伝子としては、ｔｒｐｌ遺伝子等を利用
することができる。酵母細胞中における転写や翻訳を制
御するための複製起源や終止コドン及びその他のＤＮＡ
配列としては、酵母細胞に適している通常の公知のＤＮ
Ａ配列を用いることができる。
【００２１】高等動物の培養細胞を宿主とする場合に
は、例えば、赤毛ザル腎臓細胞、蚊幼虫の細胞、アフリ
カミドリザル腎臓細胞（ＣＯＳ−７又はＣＯＳ−１
等）、マウス胎児繊維芽細胞、チャイニーズハムスター
卵巣細胞若しくはそのジヒドロ葉酸レダクターゼ欠損
株、ヒト頚上皮細胞、ヒト胎児腎臓細胞、蛾卵巣細胞、
ヒト骨髄腫細胞、又はマウス繊維芽細胞等を用いること
ができる。
は、例えば、赤毛ザル腎臓細胞、蚊幼虫の細胞、アフリ
カミドリザル腎臓細胞（ＣＯＳ−７又はＣＯＳ−１
等）、マウス胎児繊維芽細胞、チャイニーズハムスター
卵巣細胞若しくはそのジヒドロ葉酸レダクターゼ欠損
株、ヒト頚上皮細胞、ヒト胎児腎臓細胞、蛾卵巣細胞、
ヒト骨髄腫細胞、又はマウス繊維芽細胞等を用いること
ができる。
【００２２】前記ベクターは、一般に、本発明のＤＮＡ
を宿主細胞内で発現させるための機能配列、例えば、複
製開始点、本発明ＤＮＡの上流に位置すべきプロモータ
ー、リボゾーム結合部位、ポリアデニル化部位、及び／
又は転写終止配列を含有している。プロモーターとして
は、例えば、アデノウイルス２主後期プロモーター、Ｓ
Ｖ４０初期プロモーター、ＳＶ４０後期プロモーター、
サイトメガロウイルス、ラウスザルコーマウイルス、又
は真核生物遺伝子からのプロモーター（例えば、エスト
ロゲン誘導ニワトリ卵アルブミン遺伝子、インターフェ
ロン遺伝子、グルココルチコイド誘導チロシンアミノト
ランスフェラーゼ遺伝子、チミジンキナーゼ遺伝子、主
初期及び後期アデノウイルス遺伝子、ホスホグリセレー
トキナーゼ遺伝子、又はα因子遺伝子等）が好ましい。
を宿主細胞内で発現させるための機能配列、例えば、複
製開始点、本発明ＤＮＡの上流に位置すべきプロモータ
ー、リボゾーム結合部位、ポリアデニル化部位、及び／
又は転写終止配列を含有している。プロモーターとして
は、例えば、アデノウイルス２主後期プロモーター、Ｓ
Ｖ４０初期プロモーター、ＳＶ４０後期プロモーター、
サイトメガロウイルス、ラウスザルコーマウイルス、又
は真核生物遺伝子からのプロモーター（例えば、エスト
ロゲン誘導ニワトリ卵アルブミン遺伝子、インターフェ
ロン遺伝子、グルココルチコイド誘導チロシンアミノト
ランスフェラーゼ遺伝子、チミジンキナーゼ遺伝子、主
初期及び後期アデノウイルス遺伝子、ホスホグリセレー
トキナーゼ遺伝子、又はα因子遺伝子等）が好ましい。
【００２３】複製開始点としては、アデノウイルス、Ｓ
Ｖ４０、ウシパピローマウイルス（ＢＰＶ）、水疱性口
内炎ウイルス（ＶＳＶ）、又はそれらの誘導体ベクター
由来のものを用いることができる。また、この際のマー
カー遺伝子としては、例えば、ネオマイシン耐性遺伝
子、メトトレキセート耐性ジヒドロ葉酸還元酵素（ＤＨ
Ｒ）遺伝子、又はブラストサイアジンＳ耐性遺伝子等を
用いることができる。
Ｖ４０、ウシパピローマウイルス（ＢＰＶ）、水疱性口
内炎ウイルス（ＶＳＶ）、又はそれらの誘導体ベクター
由来のものを用いることができる。また、この際のマー
カー遺伝子としては、例えば、ネオマイシン耐性遺伝
子、メトトレキセート耐性ジヒドロ葉酸還元酵素（ＤＨ
Ｒ）遺伝子、又はブラストサイアジンＳ耐性遺伝子等を
用いることができる。
【００２４】昆虫細胞の宿主としては、例えば、ＢｍＮ
４細胞、Ｓｆ９細胞、Ｓｆ２１細胞、又はＴｒｉｃｈｏ
ｐｌｕｓｉａｎｉの卵巣細胞等を用いることができる。
また、カイコの幼虫個体も用いることもできる。昆虫細
胞への遺伝子導入のためには、ウイルスＤＮＡと目的遺
伝子を組み込んだトランスファーベクターとを昆虫細胞
に共感染させて行うことができる。ウイルスＤＮＡとし
ては、例えば、Ｂｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉ ｎｕｃｌｅａ
ｒ ｐｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓ ｖｉｒｕｓ、又はＡｕ
ｔｏｇｒａｐｈｉｃａ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ ｍｕ
ｌｔｉｐｌｅｎｕｃｌｅａｒ ｐｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉ
ｓ ｖｉｒｕｓ等を用いることができる。目的遺伝子を
挿入するトランスファーベクターとしては、例えば、ポ
リヘドリンプロモーターやｐ１０プロモーターベクター
が使用可能であり、これらのプロモーターの下流に目的
遺伝子を組み込むことができる。また、トランスファー
ベクターは大腸菌での複製は可能だが、昆虫細胞等では
複製はできない。従って、大腸菌で大量に複製してから
昆虫細胞等により発現させることが好ましい。この方法
によると動物細胞の場合より発現物質を大量に回収する
ことができる。
４細胞、Ｓｆ９細胞、Ｓｆ２１細胞、又はＴｒｉｃｈｏ
ｐｌｕｓｉａｎｉの卵巣細胞等を用いることができる。
また、カイコの幼虫個体も用いることもできる。昆虫細
胞への遺伝子導入のためには、ウイルスＤＮＡと目的遺
伝子を組み込んだトランスファーベクターとを昆虫細胞
に共感染させて行うことができる。ウイルスＤＮＡとし
ては、例えば、Ｂｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉ ｎｕｃｌｅａ
ｒ ｐｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓ ｖｉｒｕｓ、又はＡｕ
ｔｏｇｒａｐｈｉｃａ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ ｍｕ
ｌｔｉｐｌｅｎｕｃｌｅａｒ ｐｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉ
ｓ ｖｉｒｕｓ等を用いることができる。目的遺伝子を
挿入するトランスファーベクターとしては、例えば、ポ
リヘドリンプロモーターやｐ１０プロモーターベクター
が使用可能であり、これらのプロモーターの下流に目的
遺伝子を組み込むことができる。また、トランスファー
ベクターは大腸菌での複製は可能だが、昆虫細胞等では
複製はできない。従って、大腸菌で大量に複製してから
昆虫細胞等により発現させることが好ましい。この方法
によると動物細胞の場合より発現物質を大量に回収する
ことができる。
【００２５】このようにして、作製した発現プラスミド
を適当な宿主細胞、例えば、大腸菌若しくは酵母等の微
生物細胞、又は動物細胞などへ導入することにより、本
発明の形質転換体を製造することができる。ＤＮＡの導
入方法としては、公知の手法、例えば、塩化カルシウム
処理したコンピテント細胞の利用、プロトプラスト法、
リン酸カルシウム法、又は電気せん孔法などを用いるこ
とができる。
を適当な宿主細胞、例えば、大腸菌若しくは酵母等の微
生物細胞、又は動物細胞などへ導入することにより、本
発明の形質転換体を製造することができる。ＤＮＡの導
入方法としては、公知の手法、例えば、塩化カルシウム
処理したコンピテント細胞の利用、プロトプラスト法、
リン酸カルシウム法、又は電気せん孔法などを用いるこ
とができる。
【００２６】本発明によるタンパク質には、配列表の配
列番号１の配列で表わされるアミノ酸配列を含むタンパ
ク質（特には、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質）、又
はヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質改変体が含まれる。
本発明によるタンパク質は、造血機能に影響を与える活
性を有し、例えば、血管中に投与すると、白血球及び血
小板の数を低下させ、同時に、赤血球の数を増加させる
活性を有する。従って、本発明は、前記の配列表の配列
番号１の配列で表わされるアミノ酸配列を含むタンパク
質（特には、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質）、又は
ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質改変体を有効成分とし
て含有する医薬組成物にも関する。本発明の医薬組成物
は、配列表の配列番号１の配列で表わされるアミノ酸配
列を含むタンパク質（特には、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タ
ンパク質）、又はヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質改変
体を、それ単独で、又は好ましくは製剤学的若しくは獣
医学的に許容することのできる通常の担体と共に、動
物、好ましくは哺乳動物（特にはヒト）に経口投与又は
非経口投与することができる。投与剤型としては、特に
限定がなく、例えば、散剤、細粒剤、顆粒剤、錠剤、カ
プセル剤、懸濁液、エマルジョン剤、シロップ剤、エキ
ス剤、若しくは丸剤等の経口剤、又は注射剤、外用液
剤、軟膏剤、坐剤、局所投与のクリーム、若しくは点眼
薬などの非経口剤を挙げることができる。
列番号１の配列で表わされるアミノ酸配列を含むタンパ
ク質（特には、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質）、又
はヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質改変体が含まれる。
本発明によるタンパク質は、造血機能に影響を与える活
性を有し、例えば、血管中に投与すると、白血球及び血
小板の数を低下させ、同時に、赤血球の数を増加させる
活性を有する。従って、本発明は、前記の配列表の配列
番号１の配列で表わされるアミノ酸配列を含むタンパク
質（特には、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質）、又は
ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質改変体を有効成分とし
て含有する医薬組成物にも関する。本発明の医薬組成物
は、配列表の配列番号１の配列で表わされるアミノ酸配
列を含むタンパク質（特には、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タ
ンパク質）、又はヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質改変
体を、それ単独で、又は好ましくは製剤学的若しくは獣
医学的に許容することのできる通常の担体と共に、動
物、好ましくは哺乳動物（特にはヒト）に経口投与又は
非経口投与することができる。投与剤型としては、特に
限定がなく、例えば、散剤、細粒剤、顆粒剤、錠剤、カ
プセル剤、懸濁液、エマルジョン剤、シロップ剤、エキ
ス剤、若しくは丸剤等の経口剤、又は注射剤、外用液
剤、軟膏剤、坐剤、局所投与のクリーム、若しくは点眼
薬などの非経口剤を挙げることができる。
【００２７】これらの経口剤は、例えば、ゼラチン、ア
ルギン酸ナトリウム、澱粉、コーンスターチ、白糖、乳
糖、ぶどう糖、マンニット、カルボキシメチルセルロー
ス、デキストリン、ポリビニルピロリドン、結晶セルロ
ース、大豆レシチン、ショ糖、脂肪酸エステル（例え
ば、グリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステ
ル、ソルビタン脂肪酸エステル、若しくはプロピレング
リコール脂肪酸エステル）］、タルク、ステアリン酸マ
グネシウム、ポリエチレングリコール、ケイ酸マグネシ
ウム、無水ケイ酸、又は合成ケイ酸アルミニウムなどの
賦形剤、結合剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、流動性
促進剤、希釈剤、保存剤、着色剤、香料、矯味剤、安定
化剤、保湿剤、防腐剤、又は酸化防止剤等を用いて、常
法に従って製造することができる。
ルギン酸ナトリウム、澱粉、コーンスターチ、白糖、乳
糖、ぶどう糖、マンニット、カルボキシメチルセルロー
ス、デキストリン、ポリビニルピロリドン、結晶セルロ
ース、大豆レシチン、ショ糖、脂肪酸エステル（例え
ば、グリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステ
ル、ソルビタン脂肪酸エステル、若しくはプロピレング
リコール脂肪酸エステル）］、タルク、ステアリン酸マ
グネシウム、ポリエチレングリコール、ケイ酸マグネシ
ウム、無水ケイ酸、又は合成ケイ酸アルミニウムなどの
賦形剤、結合剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、流動性
促進剤、希釈剤、保存剤、着色剤、香料、矯味剤、安定
化剤、保湿剤、防腐剤、又は酸化防止剤等を用いて、常
法に従って製造することができる。
【００２８】非経口投与方法としては、注射（皮下、静
脈内等）、又は直腸投与等が例示される。これらのなか
で、注射剤が最も好適に用いられる。例えば、注射剤の
調製においては、有効成分としての配列表の配列番号１
の配列で表わされるアミノ酸配列を含むタンパク質（特
には、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質）、又はヒトＡ
ＤＡＭＴＳ−１タンパク質改変体の他に、例えば、生理
食塩水若しくはリンゲル液等の水溶性溶剤、植物油若し
くは脂肪酸エステル等の非水溶性溶剤、ブドウ糖若しく
は塩化ナトリウム等の等張化剤、溶解補助剤、安定化
剤、防腐剤、懸濁化剤、又は乳化剤などを任意に用いる
ことができる。また、本発明の医薬組成物は、徐放性ポ
リマーなどを用いた徐放性製剤の手法を用いて投与して
もよい。例えば、本発明の医薬組成物をエチレンビニル
酢酸ポリマーのペレットに取り込ませて、このペレット
を治療すべき組織中に外科的に移植することができる。
脈内等）、又は直腸投与等が例示される。これらのなか
で、注射剤が最も好適に用いられる。例えば、注射剤の
調製においては、有効成分としての配列表の配列番号１
の配列で表わされるアミノ酸配列を含むタンパク質（特
には、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質）、又はヒトＡ
ＤＡＭＴＳ−１タンパク質改変体の他に、例えば、生理
食塩水若しくはリンゲル液等の水溶性溶剤、植物油若し
くは脂肪酸エステル等の非水溶性溶剤、ブドウ糖若しく
は塩化ナトリウム等の等張化剤、溶解補助剤、安定化
剤、防腐剤、懸濁化剤、又は乳化剤などを任意に用いる
ことができる。また、本発明の医薬組成物は、徐放性ポ
リマーなどを用いた徐放性製剤の手法を用いて投与して
もよい。例えば、本発明の医薬組成物をエチレンビニル
酢酸ポリマーのペレットに取り込ませて、このペレット
を治療すべき組織中に外科的に移植することができる。
【００２９】本発明の医薬組成物は、これに限定される
ものではないが、配列表の配列番号１の配列で表わされ
るアミノ酸配列を含むタンパク質（特には、ヒトＡＤＡ
ＭＴＳ−１タンパク質）、又はヒトＡＤＡＭＴＳ−１タ
ンパク質改変体を、０．０００１〜９９重量％、好まし
くは０．０１〜８０重量％、より好ましくは０．０１〜
５０重量％の量で含有することができる。本発明の医薬
組成物を用いる場合の投与量は、病気の種類、患者の年
齢、性別、体重、症状の程度、又は投与方法などにより
異なり、特に制限はないが、配列表の配列番号１の配列
で表わされるアミノ酸配列を含むタンパク質（特には、
ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質）、又はヒトＡＤＡＭ
ＴＳ−１タンパク質改変体量として通常成人１人当り
０．０００１μｇ／ｋｇ〜１０，０００μｇ／ｋｇ、好
ましくは０．００１μｇ／ｋｇ〜１，０００μｇ／ｋ
ｇ、より好ましくは０．０１μｇ／ｋｇ〜１００μｇ／
ｋｇ程度を、１日１〜４回程度にわけて、経口的に又は
非経口的に投与する。更に、用途も医薬品に限定される
ものではなく、種々の用途、例えば、機能性食品や健康
食品として飲食物の形で与えることも可能である。
ものではないが、配列表の配列番号１の配列で表わされ
るアミノ酸配列を含むタンパク質（特には、ヒトＡＤＡ
ＭＴＳ−１タンパク質）、又はヒトＡＤＡＭＴＳ−１タ
ンパク質改変体を、０．０００１〜９９重量％、好まし
くは０．０１〜８０重量％、より好ましくは０．０１〜
５０重量％の量で含有することができる。本発明の医薬
組成物を用いる場合の投与量は、病気の種類、患者の年
齢、性別、体重、症状の程度、又は投与方法などにより
異なり、特に制限はないが、配列表の配列番号１の配列
で表わされるアミノ酸配列を含むタンパク質（特には、
ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質）、又はヒトＡＤＡＭ
ＴＳ−１タンパク質改変体量として通常成人１人当り
０．０００１μｇ／ｋｇ〜１０，０００μｇ／ｋｇ、好
ましくは０．００１μｇ／ｋｇ〜１，０００μｇ／ｋ
ｇ、より好ましくは０．０１μｇ／ｋｇ〜１００μｇ／
ｋｇ程度を、１日１〜４回程度にわけて、経口的に又は
非経口的に投与する。更に、用途も医薬品に限定される
ものではなく、種々の用途、例えば、機能性食品や健康
食品として飲食物の形で与えることも可能である。
【００３０】本発明の医薬組成物は、有効成分として配
列表の配列番号１の配列で表わされるアミノ酸配列を含
むタンパク質（特には、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク
質）、又はヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質改変体を含
有するので、例えば、白血球減少剤、血小板減少剤、又
は赤血球増加剤として有用である。一般に、炎症時に
は、白血球が血液中に動員され、炎症部位に移行し、病
態を進展／発症することが知られているので、本発明の
ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質は、各種炎症疾患［例
えば、リウマチ性関節炎、乾癬、喘息、肝炎、川崎病、
痛風、成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、クローン病、
潰瘍性大腸炎、敗血症、又は腎炎など］の治療に有効で
あると考えられる。また、本発明のヒトＡＤＡＭＴＳ−
１タンパク質には、血小板数及び白血球数を減少させる
作用があるので、例えば、真性多血症の治療に有効であ
る。また、発明のヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質には
血小板数を減少させる作用があることから、本発明のヒ
トＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質が抗血栓作用を有するこ
とが予想され、例えば、心筋梗塞、脳梗塞、又は多臓器
不全の治療にも有効であると考えられる。更には、ヒト
ＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質には有意に赤血球数を上昇
させる作用があることから、エリスロポエチンのよう
に、貧血の治療にも有効であると考えられる。
列表の配列番号１の配列で表わされるアミノ酸配列を含
むタンパク質（特には、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク
質）、又はヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質改変体を含
有するので、例えば、白血球減少剤、血小板減少剤、又
は赤血球増加剤として有用である。一般に、炎症時に
は、白血球が血液中に動員され、炎症部位に移行し、病
態を進展／発症することが知られているので、本発明の
ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質は、各種炎症疾患［例
えば、リウマチ性関節炎、乾癬、喘息、肝炎、川崎病、
痛風、成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、クローン病、
潰瘍性大腸炎、敗血症、又は腎炎など］の治療に有効で
あると考えられる。また、本発明のヒトＡＤＡＭＴＳ−
１タンパク質には、血小板数及び白血球数を減少させる
作用があるので、例えば、真性多血症の治療に有効であ
る。また、発明のヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質には
血小板数を減少させる作用があることから、本発明のヒ
トＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質が抗血栓作用を有するこ
とが予想され、例えば、心筋梗塞、脳梗塞、又は多臓器
不全の治療にも有効であると考えられる。更には、ヒト
ＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質には有意に赤血球数を上昇
させる作用があることから、エリスロポエチンのよう
に、貧血の治療にも有効であると考えられる。
【００３１】免疫系刺激物質であるリポ多糖体（ＬＰ
Ｓ；例えば、１０μｇ／マウス）をマウスに投与する
と、マウスＡＤＡＭＴＳ−１遺伝子の発現が、心臓及び
腎臓において超誘導される［Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅ
ｍ．，２７２，５５６−５６２（１９９７）］ことか
ら、マウスＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質は、致死的な急
性炎症時（例えば、エンドトキシンショック）に、心臓
及び腎臓に対して防衛的に（ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ）に
機能している可能性がある。
Ｓ；例えば、１０μｇ／マウス）をマウスに投与する
と、マウスＡＤＡＭＴＳ−１遺伝子の発現が、心臓及び
腎臓において超誘導される［Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅ
ｍ．，２７２，５５６−５６２（１９９７）］ことか
ら、マウスＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質は、致死的な急
性炎症時（例えば、エンドトキシンショック）に、心臓
及び腎臓に対して防衛的に（ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ）に
機能している可能性がある。
【００３２】トロンボスポンジン（ＴＳＰ）は、内皮細
胞増殖を特異的に抑制する血管新生抑制因子として知ら
れており［Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１１１，７６５
−７７２（１９９０）］、ＴＳＰ遺伝子を導入した癌細
胞において、癌細胞の増殖・転移を抑制することが可能
であるとの報告［Ｃａｎｃｅｒ．Ｒｅｓ．，５４，６５
０４−６５１１（１９９４）］がなされていることか
ら、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質も、制癌作用や癌
転移抑制作用を示す可能性がある。また、ＴＳＰやディ
スインテグリンは骨代謝にも関与するとの最近の報告
［Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕ
ｎ．，２１３，１０１７−１０２５（１９９５）］か
ら、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質の骨粗鬆症などの
代謝性骨疾患治療への応用も考えられる。
胞増殖を特異的に抑制する血管新生抑制因子として知ら
れており［Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１１１，７６５
−７７２（１９９０）］、ＴＳＰ遺伝子を導入した癌細
胞において、癌細胞の増殖・転移を抑制することが可能
であるとの報告［Ｃａｎｃｅｒ．Ｒｅｓ．，５４，６５
０４−６５１１（１９９４）］がなされていることか
ら、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質も、制癌作用や癌
転移抑制作用を示す可能性がある。また、ＴＳＰやディ
スインテグリンは骨代謝にも関与するとの最近の報告
［Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕ
ｎ．，２１３，１０１７−１０２５（１９９５）］か
ら、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質の骨粗鬆症などの
代謝性骨疾患治療への応用も考えられる。
【００３３】本発明の免疫反応性物質は、配列表の配列
番号１の配列で表わされるアミノ酸配列を含むタンパク
質（特には、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質）、又は
ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質改変体と特異的に反応
する。本発明の免疫反応性物質には、例えば、抗体（モ
ノクローナル抗体若しくはポリクローナル抗体）、これ
らの抗体のフラグメント［例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、
Ｆ（ａｂ’）2 、又はＦｖ等］、又は抗血清などが含ま
れる。本発明の免疫反応性物質は、ヒトＡＤＡＭＴＳ−
１タンパク質と特異的に反応するので、ヒトＡＤＡＭＴ
Ｓ−１タンパク質の免疫学的分析方法の試薬として有用
である。
番号１の配列で表わされるアミノ酸配列を含むタンパク
質（特には、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質）、又は
ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質改変体と特異的に反応
する。本発明の免疫反応性物質には、例えば、抗体（モ
ノクローナル抗体若しくはポリクローナル抗体）、これ
らの抗体のフラグメント［例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、
Ｆ（ａｂ’）2 、又はＦｖ等］、又は抗血清などが含ま
れる。本発明の免疫反応性物質は、ヒトＡＤＡＭＴＳ−
１タンパク質と特異的に反応するので、ヒトＡＤＡＭＴ
Ｓ−１タンパク質の免疫学的分析方法の試薬として有用
である。
【００３４】本発明のモノクローナル抗体は、従来公知
の方法、例えば、次のようにして調製することができ
る。抗原を含む生理食塩水を等量のフロイント氏完全ア
ジュバンド若しくは不完全アジュバンド、又はその等価
物、例えば、Ｈｕｎｔｅｒ’ｓ ＴｉｔｅｒＭａｘ
TM（フナコシ；Ｃａｔ．Ｎｏ．ＹＴ００１−００，東
京，日本）と乳化混合して、常用する骨髄腫細胞との適
性を考慮して選択された哺乳動物（例えば、マウス、ラ
ット、ウサギ、又はハムスターなど）、特にはマウス
（例えば、ＢＡＬＢ／ｃマウス）の皮下、腹腔内、静脈
内、筋肉内、又は皮内等のいずれかに投与する（初回免
疫）。以後、２〜４週間の間隔で同様の操作を行い、数
回免疫する。最終免疫を抗原液のみで行い、最終免疫か
ら数日後に哺乳動物から脾臓を無菌的に取り出し、脾細
胞を調製する。この脾細胞を用いて、細胞融合を行う。
細胞融合のもう一方の親細胞である骨髄腫細胞は公知の
細胞株、例えば、Ｐ３Ｘ６３−Ａｇ８（Ｘ６３）［Ｎａ
ｔｕｒｅ，２５６，４９５−４９７（１９７５）］、Ｐ
３Ｘ６３−Ａｇ８Ｕ１（Ｐ３Ｕ１）［Ｃｕｒｒｅｎｔ
Ｔｏｐｉｃｓ ｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎ
ｄ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，８１，１−７（１９７
８）］、Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３（ＡＴＣＣ受託番
号：ＣＲＬ−１５８０）などを使用することができる。
の方法、例えば、次のようにして調製することができ
る。抗原を含む生理食塩水を等量のフロイント氏完全ア
ジュバンド若しくは不完全アジュバンド、又はその等価
物、例えば、Ｈｕｎｔｅｒ’ｓ ＴｉｔｅｒＭａｘ
TM（フナコシ；Ｃａｔ．Ｎｏ．ＹＴ００１−００，東
京，日本）と乳化混合して、常用する骨髄腫細胞との適
性を考慮して選択された哺乳動物（例えば、マウス、ラ
ット、ウサギ、又はハムスターなど）、特にはマウス
（例えば、ＢＡＬＢ／ｃマウス）の皮下、腹腔内、静脈
内、筋肉内、又は皮内等のいずれかに投与する（初回免
疫）。以後、２〜４週間の間隔で同様の操作を行い、数
回免疫する。最終免疫を抗原液のみで行い、最終免疫か
ら数日後に哺乳動物から脾臓を無菌的に取り出し、脾細
胞を調製する。この脾細胞を用いて、細胞融合を行う。
細胞融合のもう一方の親細胞である骨髄腫細胞は公知の
細胞株、例えば、Ｐ３Ｘ６３−Ａｇ８（Ｘ６３）［Ｎａ
ｔｕｒｅ，２５６，４９５−４９７（１９７５）］、Ｐ
３Ｘ６３−Ａｇ８Ｕ１（Ｐ３Ｕ１）［Ｃｕｒｒｅｎｔ
Ｔｏｐｉｃｓ ｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎ
ｄ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，８１，１−７（１９７
８）］、Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３（ＡＴＣＣ受託番
号：ＣＲＬ−１５８０）などを使用することができる。
【００３５】細胞融合は、公知の方法に従い、例えば、
ミルシュタインらの方法［Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎ
ｚｙｍｏｌｏｇｙ，７３，３−４７（１９８１）］等に
準じて行うことができる。得られたハイブリドーマを移
植した哺乳動物（例えば、マウス）の腹水から目的とす
るモノクローナル抗体を分離精製する。分離精製には、
公知の方法、例えば、硫酸アンモニウムによる透析イオ
ン交換クロマトグラフィー、プロテインＡ若しくはプロ
テインＧ結合多糖類担体若しくは抗マウスイムノグロブ
リン抗体結合多糖類担体を用いた親和性カラムクロマト
グラフィー、透析、又は凍結乾燥などを用いることがで
きる。
ミルシュタインらの方法［Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎ
ｚｙｍｏｌｏｇｙ，７３，３−４７（１９８１）］等に
準じて行うことができる。得られたハイブリドーマを移
植した哺乳動物（例えば、マウス）の腹水から目的とす
るモノクローナル抗体を分離精製する。分離精製には、
公知の方法、例えば、硫酸アンモニウムによる透析イオ
ン交換クロマトグラフィー、プロテインＡ若しくはプロ
テインＧ結合多糖類担体若しくは抗マウスイムノグロブ
リン抗体結合多糖類担体を用いた親和性カラムクロマト
グラフィー、透析、又は凍結乾燥などを用いることがで
きる。
【００３６】また、本発明のポリクローナル抗体は、従
来公知の方法、例えば、以下に示す方法により調製する
ことができる。すなわち、抗原を含む生理食塩水を等量
のフロイント氏完全アジュバンド若しくは不完全アジュ
バンド、又はその等価物、例えば、Ｈｕｎｔｅｒ’ｓ
ＴｉｔｅｒＭａｘTM（フナコシ；Ｃａｔ．Ｎｏ．ＹＴ０
０１−００，東京，日本）と乳化混合して、哺乳動物、
特にはウサギ、又はヤギ等の皮下、腹腔内、又は筋肉内
などのいずれかに投与する（初回免疫）。以後、２〜４
週間の間隔で同様の操作を行い、数回免疫する。最終免
疫から１〜２週間後に哺乳動物の頸動脈又は心臓から血
液を採取して血清を硫酸アンモニウムによって塩析する
ことにより調製することができる。
来公知の方法、例えば、以下に示す方法により調製する
ことができる。すなわち、抗原を含む生理食塩水を等量
のフロイント氏完全アジュバンド若しくは不完全アジュ
バンド、又はその等価物、例えば、Ｈｕｎｔｅｒ’ｓ
ＴｉｔｅｒＭａｘTM（フナコシ；Ｃａｔ．Ｎｏ．ＹＴ０
０１−００，東京，日本）と乳化混合して、哺乳動物、
特にはウサギ、又はヤギ等の皮下、腹腔内、又は筋肉内
などのいずれかに投与する（初回免疫）。以後、２〜４
週間の間隔で同様の操作を行い、数回免疫する。最終免
疫から１〜２週間後に哺乳動物の頸動脈又は心臓から血
液を採取して血清を硫酸アンモニウムによって塩析する
ことにより調製することができる。
【００３７】本発明の抗体フラグメントは、例えば、本
発明のポリクローナル抗体又はモノクローナル抗体を常
法によりタンパク質分解酵素によって消化し、続いて、
タンパク質の分離・精製の常法に従って得ることができ
る。
発明のポリクローナル抗体又はモノクローナル抗体を常
法によりタンパク質分解酵素によって消化し、続いて、
タンパク質の分離・精製の常法に従って得ることができ
る。
【００３８】免疫機能刺激物質であるＬＰＳなどにより
ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質の産生が亢進されるこ
となどから、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質を、免疫
状態の体外検出方法において免疫状態の診断マーカーと
利用することができる。すなわち、被検対象者から採取
した被検試料に関して、本発明の体外検出方法を適用す
ることによって、その被検対象者の生体防御系が、種々
の疾病、例えば、炎症、癌、悪疫質（例えば、癌悪疫質
若しくは感染症性悪疫質など）、感染症、又は白血病な
どにより変化している場合には、その生体防御系に相当
する免疫状態を検出することができる。一方、前記被検
対象者の生体防御系が正常である場合には、その生体防
御系に相当する免疫状態を検出することができる。
ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質の産生が亢進されるこ
となどから、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質を、免疫
状態の体外検出方法において免疫状態の診断マーカーと
利用することができる。すなわち、被検対象者から採取
した被検試料に関して、本発明の体外検出方法を適用す
ることによって、その被検対象者の生体防御系が、種々
の疾病、例えば、炎症、癌、悪疫質（例えば、癌悪疫質
若しくは感染症性悪疫質など）、感染症、又は白血病な
どにより変化している場合には、その生体防御系に相当
する免疫状態を検出することができる。一方、前記被検
対象者の生体防御系が正常である場合には、その生体防
御系に相当する免疫状態を検出することができる。
【００３９】本発明において用いることのできる被検試
料としては、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質が含まれ
ている可能性があれば特に限定されるものではなく、生
物学的試料、例えば、ヒト（特には患者）から採取した
細胞等の組織若しくはその抽出物、又は血液（例えば、
血清又は血漿）、尿、若しくは脳脊髄液等の体液などを
例示することができる。また、通常の臨床検査等におけ
る被検試料であれば、特に限定されず、使用することが
可能である。
料としては、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質が含まれ
ている可能性があれば特に限定されるものではなく、生
物学的試料、例えば、ヒト（特には患者）から採取した
細胞等の組織若しくはその抽出物、又は血液（例えば、
血清又は血漿）、尿、若しくは脳脊髄液等の体液などを
例示することができる。また、通常の臨床検査等におけ
る被検試料であれば、特に限定されず、使用することが
可能である。
【００４０】被検試料中におけるヒトＡＤＡＭＴＳ−１
タンパク質の分析工程では、まず最初に、前記の被検試
料を、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質と免疫学的に反
応性のある免疫反応性物質と接触させる。この際に、も
し被検試料内にヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質が存在
しなければ、前記免疫反応性物質との反応が生じない
が、もし被検試料内にヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質
が存在すると、そのヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質と
前記の免疫反応性物質とが結合して、ヒトＡＤＡＭＴＳ
−１タンパク質と免疫反応性物質との結合体が、ヒトＡ
ＤＡＭＴＳ−１タンパク質の存在量に応じて生成する。
この結合体は、公知の方法によって簡単に検出すること
ができるので、結合体の存在や量から前記被検試料中の
ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質の存在を検出したり、
その量を測定することができる。被検試料として組織切
片又は細胞を用い、蛍光抗体法又は酵素抗体法により、
組織又は細胞中のヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質を測
定することも可能である。
タンパク質の分析工程では、まず最初に、前記の被検試
料を、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質と免疫学的に反
応性のある免疫反応性物質と接触させる。この際に、も
し被検試料内にヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質が存在
しなければ、前記免疫反応性物質との反応が生じない
が、もし被検試料内にヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質
が存在すると、そのヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質と
前記の免疫反応性物質とが結合して、ヒトＡＤＡＭＴＳ
−１タンパク質と免疫反応性物質との結合体が、ヒトＡ
ＤＡＭＴＳ−１タンパク質の存在量に応じて生成する。
この結合体は、公知の方法によって簡単に検出すること
ができるので、結合体の存在や量から前記被検試料中の
ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質の存在を検出したり、
その量を測定することができる。被検試料として組織切
片又は細胞を用い、蛍光抗体法又は酵素抗体法により、
組織又は細胞中のヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質を測
定することも可能である。
【００４１】ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質と免疫学
的に反応することのできる免疫反応性物質としては、例
えば、抗ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質抗血清、抗ヒ
トＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質ポリクローナル抗体、若
しくは抗ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質モノクローナ
ル抗体、又はこれらの抗体のフラグメント等が挙げられ
る。これらは単独でも、また組み合わせて同時に用いる
こともできる。前記抗体フラグメントには、例えば、Ｆ
ａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）2 、又はＦｖ等が含まれ
る。
的に反応することのできる免疫反応性物質としては、例
えば、抗ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質抗血清、抗ヒ
トＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質ポリクローナル抗体、若
しくは抗ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質モノクローナ
ル抗体、又はこれらの抗体のフラグメント等が挙げられ
る。これらは単独でも、また組み合わせて同時に用いる
こともできる。前記抗体フラグメントには、例えば、Ｆ
ａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）2 、又はＦｖ等が含まれ
る。
【００４２】本発明のヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質
の免疫学的分析方法では、被検試料と、ヒトＡＤＡＭＴ
Ｓ−１タンパク質と免疫学的に反応することのできる免
疫反応性物質とを接触させ、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タン
パク質−免疫反応性物質結合体を生成させる。そして、
免疫化学的測定法により、抗体に結合したヒトＡＤＡＭ
ＴＳ−１タンパク質を検出し、その量を測定することに
よって、被検試料中のヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質
レベルを知ることができる。
の免疫学的分析方法では、被検試料と、ヒトＡＤＡＭＴ
Ｓ−１タンパク質と免疫学的に反応することのできる免
疫反応性物質とを接触させ、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タン
パク質−免疫反応性物質結合体を生成させる。そして、
免疫化学的測定法により、抗体に結合したヒトＡＤＡＭ
ＴＳ−１タンパク質を検出し、その量を測定することに
よって、被検試料中のヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質
レベルを知ることができる。
【００４３】免疫化学的測定法としては、原則的には、
すべての慣用のイムノアッセイ、例えば、ＥＩＡ法、Ｅ
ＬＩＳＡ法、又はＲＩＡ法等を用いることができる。こ
れらの免疫化学的測定法は、一般に次の方法に大別する
ことができる。 （１）競合法：未知量の抗原を含む被検試料と標識剤で
標識した抗原の一定量とを対応する抗体の一定量に対し
て競合反応させ、抗体と結合した標識抗原又は抗体と結
合しなかった標識抗原の活性を測定する。 （２）サンドイッチ法：未知量の抗原を含む被検試料
に、担体上に保持された過剰量の抗体を加えて反応させ
（第１反応）、次に標識剤で標識した過剰量の抗体の一
定量を加えて反応させる（第２反応）。担体上に保持さ
れた標識抗体又は担体上に保持されなかった標識抗体の
活性を測定する。第１反応及び第２反応は同時に行って
もよいし、時間をずらして行ってもよい。標識剤が放射
性同位元素である場合には、ウェルカウンター又は液体
シンチレーションカウンターで測定することができる。
標識剤が酵素である場合には、基質を加えて放置し、比
色法又は蛍光法で酵素活性を測定することができる。標
識剤が蛍光物質や発光物質であっても、それぞれ公知の
方法に従って測定することができる。
すべての慣用のイムノアッセイ、例えば、ＥＩＡ法、Ｅ
ＬＩＳＡ法、又はＲＩＡ法等を用いることができる。こ
れらの免疫化学的測定法は、一般に次の方法に大別する
ことができる。 （１）競合法：未知量の抗原を含む被検試料と標識剤で
標識した抗原の一定量とを対応する抗体の一定量に対し
て競合反応させ、抗体と結合した標識抗原又は抗体と結
合しなかった標識抗原の活性を測定する。 （２）サンドイッチ法：未知量の抗原を含む被検試料
に、担体上に保持された過剰量の抗体を加えて反応させ
（第１反応）、次に標識剤で標識した過剰量の抗体の一
定量を加えて反応させる（第２反応）。担体上に保持さ
れた標識抗体又は担体上に保持されなかった標識抗体の
活性を測定する。第１反応及び第２反応は同時に行って
もよいし、時間をずらして行ってもよい。標識剤が放射
性同位元素である場合には、ウェルカウンター又は液体
シンチレーションカウンターで測定することができる。
標識剤が酵素である場合には、基質を加えて放置し、比
色法又は蛍光法で酵素活性を測定することができる。標
識剤が蛍光物質や発光物質であっても、それぞれ公知の
方法に従って測定することができる。
【００４４】上記の方法以外に、最近では、電気泳動し
たタンパク質をニトロセルロース等のフィルターに移
し、抗体を用いて目的のタンパク質を検出する、ウェス
タンブロット法が行われるようになってきたが、本発明
におけるヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質の検出にもも
ちろん利用することができる。これらの測定法において
用いる抗体は、公知の抗体標識法によって標識すること
ができ、例えば、放射性同位元素、酵素、蛍光物質、又
は発光性物質等の適当なマーカーで標識しておくことが
できる。放射性同位元素としては、例えば、 125Ｉ、
131Ｉ、 3Ｈ、14Ｃ、又は35Ｓなどを用いることができ
る。
たタンパク質をニトロセルロース等のフィルターに移
し、抗体を用いて目的のタンパク質を検出する、ウェス
タンブロット法が行われるようになってきたが、本発明
におけるヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質の検出にもも
ちろん利用することができる。これらの測定法において
用いる抗体は、公知の抗体標識法によって標識すること
ができ、例えば、放射性同位元素、酵素、蛍光物質、又
は発光性物質等の適当なマーカーで標識しておくことが
できる。放射性同位元素としては、例えば、 125Ｉ、
131Ｉ、 3Ｈ、14Ｃ、又は35Ｓなどを用いることができ
る。
【００４５】酵素としては、安定で比活性の大きなもの
が好ましく、例えば、グリコシダーゼ（例えば、β−ガ
ラクトシダーゼ、β−グルコシダーゼ、β−グルクロニ
ダーゼ、β−フルクトシダーゼ、α−ガラクトシダー
ゼ、α−グルコシダーゼ、若しくはα−マンノシダー
ゼ）、アミラーゼ（例えば、α−アミラーゼ、β−アミ
ラーゼ、イソアミラーゼ、グルコアミラーゼ、若しくは
タカアミラーゼ）、セルラーゼ、若しくはリゾチーム等
のカルボヒドラーゼ；ウレアーゼ、若しくはアスパラギ
ナーゼ等のアミダーゼ；コリンエステラーゼ（例、アセ
チルコリンエステラーゼ）、ホスファターゼ（例、アル
カリホスファターゼ）、スルファターゼ、若しくはリパ
ーゼ等のエステラーゼ；デオキシリボヌクレアーゼ、若
しくはリボヌクレアーゼ等のヌクレアーゼ；カタラー
ゼ、ペルオキシダーゼ、若しくはチトクロームオキシダ
ーゼ等の鉄・ポルフィリン酵素；チロシナーゼ、若しく
はアスコルビン酸オキシダーゼ等の銅酵素；又はアルコ
ール脱水素酵素、リンゴ酸脱水素酵素、乳酸脱水素酵
素、若しくはイソクエン酸脱水素酵素等の脱水素酵素な
どを用いることができる。蛍光物質としてはフルオレス
カミン、又はフルオレッセンスイソチオシアネートなど
を、発光性物質としてはルミノール、ルミノール誘導
体、ルシフェリン、又はルシゲニンなどをそれぞれ挙げ
ることができる。
が好ましく、例えば、グリコシダーゼ（例えば、β−ガ
ラクトシダーゼ、β−グルコシダーゼ、β−グルクロニ
ダーゼ、β−フルクトシダーゼ、α−ガラクトシダー
ゼ、α−グルコシダーゼ、若しくはα−マンノシダー
ゼ）、アミラーゼ（例えば、α−アミラーゼ、β−アミ
ラーゼ、イソアミラーゼ、グルコアミラーゼ、若しくは
タカアミラーゼ）、セルラーゼ、若しくはリゾチーム等
のカルボヒドラーゼ；ウレアーゼ、若しくはアスパラギ
ナーゼ等のアミダーゼ；コリンエステラーゼ（例、アセ
チルコリンエステラーゼ）、ホスファターゼ（例、アル
カリホスファターゼ）、スルファターゼ、若しくはリパ
ーゼ等のエステラーゼ；デオキシリボヌクレアーゼ、若
しくはリボヌクレアーゼ等のヌクレアーゼ；カタラー
ゼ、ペルオキシダーゼ、若しくはチトクロームオキシダ
ーゼ等の鉄・ポルフィリン酵素；チロシナーゼ、若しく
はアスコルビン酸オキシダーゼ等の銅酵素；又はアルコ
ール脱水素酵素、リンゴ酸脱水素酵素、乳酸脱水素酵
素、若しくはイソクエン酸脱水素酵素等の脱水素酵素な
どを用いることができる。蛍光物質としてはフルオレス
カミン、又はフルオレッセンスイソチオシアネートなど
を、発光性物質としてはルミノール、ルミノール誘導
体、ルシフェリン、又はルシゲニンなどをそれぞれ挙げ
ることができる。
【００４６】前記の各種標識からの信号の検出は、それ
自体公知の方法で実施することができる。また、抗体と
標識剤とを結合させる方法としては、任意の常法、例え
ば、クロラミンＴ法［Ｎａｔｕｒｅ，１９４，４９５−
４９６，（１９６２）］、過ヨウ素酸法［Ｊｏｕｒｎａ
ｌ ｏｆ Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｃ
ｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２２，１０８４−１０９
１，（１９７４）］、又はマレイミド法［Ｊｏｕｒｎａ
ｌ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，７９，２３３−
２３６，（１９７６）］などを用いることができる。
自体公知の方法で実施することができる。また、抗体と
標識剤とを結合させる方法としては、任意の常法、例え
ば、クロラミンＴ法［Ｎａｔｕｒｅ，１９４，４９５−
４９６，（１９６２）］、過ヨウ素酸法［Ｊｏｕｒｎａ
ｌ ｏｆ Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｃ
ｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２２，１０８４−１０９
１，（１９７４）］、又はマレイミド法［Ｊｏｕｒｎａ
ｌ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，７９，２３３−
２３６，（１９７６）］などを用いることができる。
【００４７】上記測定方法のうち、例えば、ＥＩＡ法は
次のように行うことができる。まず、担体（例えば、ア
ッセイプレート）上に固定された第１抗ヒトＡＤＡＭＴ
Ｓ−１タンパク質抗体に被検試料を加え、ヒトＡＤＡＭ
ＴＳ−１タンパク質と抗ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク
質抗体とを結合させて結合体を生成させ、この結合体に
酵素標識剤（例えばペルオキシダーゼ）を結合させた第
２抗ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質抗体を加え、前記
結合体に第２抗体を更に結合させ、「第１抗体−ヒトＡ
ＤＡＭＴＳ−１タンパク質−第２抗体」結合体を生成さ
せる。得られた「第１抗体−ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タン
パク質−第２抗体」結合体に、前記標識酵素（ペルオキ
シダーゼ）の基質を加え、酵素反応による生成物の吸光
度又は蛍光強度を測定することにより前記の「第１抗体
−ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質−第２抗体」結合体
に付着する標識酵素の酵素活性を測定する。上記の一連
の操作を既知量のヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質を含
む標準溶液に関して予め実施しておき、ヒトＡＤＡＭＴ
Ｓ−１タンパク質と吸光度又は蛍光強度との関係を標準
曲線として作成しておく。そして、未知量のヒトＡＤＡ
ＭＴＳ−１タンパク質を含む被検試料について得られた
吸光度又は蛍光強度を標準曲線にあてはめ、被検試料中
のヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質の量を測定すること
ができる。
次のように行うことができる。まず、担体（例えば、ア
ッセイプレート）上に固定された第１抗ヒトＡＤＡＭＴ
Ｓ−１タンパク質抗体に被検試料を加え、ヒトＡＤＡＭ
ＴＳ−１タンパク質と抗ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク
質抗体とを結合させて結合体を生成させ、この結合体に
酵素標識剤（例えばペルオキシダーゼ）を結合させた第
２抗ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質抗体を加え、前記
結合体に第２抗体を更に結合させ、「第１抗体−ヒトＡ
ＤＡＭＴＳ−１タンパク質−第２抗体」結合体を生成さ
せる。得られた「第１抗体−ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タン
パク質−第２抗体」結合体に、前記標識酵素（ペルオキ
シダーゼ）の基質を加え、酵素反応による生成物の吸光
度又は蛍光強度を測定することにより前記の「第１抗体
−ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質−第２抗体」結合体
に付着する標識酵素の酵素活性を測定する。上記の一連
の操作を既知量のヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質を含
む標準溶液に関して予め実施しておき、ヒトＡＤＡＭＴ
Ｓ−１タンパク質と吸光度又は蛍光強度との関係を標準
曲線として作成しておく。そして、未知量のヒトＡＤＡ
ＭＴＳ−１タンパク質を含む被検試料について得られた
吸光度又は蛍光強度を標準曲線にあてはめ、被検試料中
のヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質の量を測定すること
ができる。
【００４８】また、以下に示す方法によってＥＩＡ法を
行うこともできる。すなわち、まず、担体（例えば、ア
ッセイプレート）と被検試料とを接触することにより、
被検試料内のヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質を担体上
に固定させ、続いて抗ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質
抗体（１次抗体）を加え、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパ
ク質と１次抗体とを結合させて結合体を生成させ、この
結合体に酵素標識剤（例えばペルオキシダーゼ）を結合
させた抗１次抗体抗体（２次抗体）を加え前記結合体に
２次抗体を結合させ、「ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク
質−１次抗体−２次抗体」結合体を生成させる。得られ
た「ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質−１次抗体−２次
抗体」結合体に、前記標識酵素（ペルオキシダーゼ）の
基質を加え、酵素反応による生成物の吸光度、又は蛍光
強度を測定することにより、前記の「ヒトＡＤＡＭＴＳ
−１タンパク質−１次抗体−２次抗体」結合体に付着す
る標識酵素の酵素活性を測定する。上記の一連の操作を
既知量のヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質を含む標準溶
液に関して予め実施しておき、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タ
ンパク質と吸光度又は蛍光強度との関係を標準曲線とし
て作成しておく。そして、未知量のヒトＡＤＡＭＴＳ−
１タンパク質を含む被検試料について得られた吸光度又
は蛍光強度を標準曲線にあてはめ、被検試料中のヒトＡ
ＤＡＭＴＳ−１タンパク質の量を測定することができ
る。
行うこともできる。すなわち、まず、担体（例えば、ア
ッセイプレート）と被検試料とを接触することにより、
被検試料内のヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質を担体上
に固定させ、続いて抗ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質
抗体（１次抗体）を加え、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパ
ク質と１次抗体とを結合させて結合体を生成させ、この
結合体に酵素標識剤（例えばペルオキシダーゼ）を結合
させた抗１次抗体抗体（２次抗体）を加え前記結合体に
２次抗体を結合させ、「ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク
質−１次抗体−２次抗体」結合体を生成させる。得られ
た「ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質−１次抗体−２次
抗体」結合体に、前記標識酵素（ペルオキシダーゼ）の
基質を加え、酵素反応による生成物の吸光度、又は蛍光
強度を測定することにより、前記の「ヒトＡＤＡＭＴＳ
−１タンパク質−１次抗体−２次抗体」結合体に付着す
る標識酵素の酵素活性を測定する。上記の一連の操作を
既知量のヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質を含む標準溶
液に関して予め実施しておき、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タ
ンパク質と吸光度又は蛍光強度との関係を標準曲線とし
て作成しておく。そして、未知量のヒトＡＤＡＭＴＳ−
１タンパク質を含む被検試料について得られた吸光度又
は蛍光強度を標準曲線にあてはめ、被検試料中のヒトＡ
ＤＡＭＴＳ−１タンパク質の量を測定することができ
る。
【００４９】また、ＲＩＡ法は、例えば、次のようにし
て行うことができる。まず、担体（例えば、試験管）に
固定された第１抗ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質抗体
に被検試料を加え、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質と
抗ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質抗体とを結合させて
結合体を生成させ、この結合体に放射性同位元素標識剤
（例えば、 125Ｉ）で標識された第２抗ヒトＡＤＡＭＴ
Ｓ−１タンパク質抗体を加え、前記結合体に第２抗体を
更に結合させ、「第１抗体−ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タン
パク質−第２抗体」結合体を生成させる。得られた「第
１抗体−ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質−第２抗体」
結合体の放射能活性（例えば、γ−放射能活性）を測定
する。上記の一連の操作を既知量のヒトＡＤＡＭＴＳ−
１タンパク質を含有する標準溶液に関して予め実施して
おき、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質と放射能活性と
の関係を標準曲線として作成しておく。そして、未知量
のヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質を含む被検試料につ
いて得られた放射能活性を標準曲線にあてはめ、被検試
料中のヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質の量を測定する
ことができる。
て行うことができる。まず、担体（例えば、試験管）に
固定された第１抗ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質抗体
に被検試料を加え、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質と
抗ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質抗体とを結合させて
結合体を生成させ、この結合体に放射性同位元素標識剤
（例えば、 125Ｉ）で標識された第２抗ヒトＡＤＡＭＴ
Ｓ−１タンパク質抗体を加え、前記結合体に第２抗体を
更に結合させ、「第１抗体−ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タン
パク質−第２抗体」結合体を生成させる。得られた「第
１抗体−ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質−第２抗体」
結合体の放射能活性（例えば、γ−放射能活性）を測定
する。上記の一連の操作を既知量のヒトＡＤＡＭＴＳ−
１タンパク質を含有する標準溶液に関して予め実施して
おき、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質と放射能活性と
の関係を標準曲線として作成しておく。そして、未知量
のヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質を含む被検試料につ
いて得られた放射能活性を標準曲線にあてはめ、被検試
料中のヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質の量を測定する
ことができる。
【００５０】また、以下に示す方法によってＲＩＡ法を
行うこともできる。すなわち、まず、担体（例えば、試
験管）と被検試料とを接触させて被検試料内のヒトＡＤ
ＡＭＴＳ−１タンパク質を前記担体上に固定させ、続い
て抗ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質抗体（１次抗体）
を加えてヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質と１次抗体と
を結合させて結合体を生成させ、この結合体に放射性同
位元素標識剤（例えば、 125Ｉ）を結合させた抗１次抗
体抗体（２次抗体）を加えて前記結合体に２次抗体を結
合させ、「ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質−１次抗体
−２次抗体」結合体を生成させる。そして、得られた
「ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質−１次抗体−２次抗
体」の放射能活性（例えば、γ−放射能活性）を測定す
る。上記の一連の操作を既知量のヒトＡＤＡＭＴＳ−１
タンパク質を含む標準溶液に関して予め実施しておき、
ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質と放射能活性との関係
を標準曲線として作成しておく。そして、未知量のヒト
ＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質を含む被検試料について得
られた放射能活性を標準曲線にあてはめ、被検試料中の
ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質の量を測定することが
できる。
行うこともできる。すなわち、まず、担体（例えば、試
験管）と被検試料とを接触させて被検試料内のヒトＡＤ
ＡＭＴＳ−１タンパク質を前記担体上に固定させ、続い
て抗ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質抗体（１次抗体）
を加えてヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質と１次抗体と
を結合させて結合体を生成させ、この結合体に放射性同
位元素標識剤（例えば、 125Ｉ）を結合させた抗１次抗
体抗体（２次抗体）を加えて前記結合体に２次抗体を結
合させ、「ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質−１次抗体
−２次抗体」結合体を生成させる。そして、得られた
「ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質−１次抗体−２次抗
体」の放射能活性（例えば、γ−放射能活性）を測定す
る。上記の一連の操作を既知量のヒトＡＤＡＭＴＳ−１
タンパク質を含む標準溶液に関して予め実施しておき、
ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質と放射能活性との関係
を標準曲線として作成しておく。そして、未知量のヒト
ＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質を含む被検試料について得
られた放射能活性を標準曲線にあてはめ、被検試料中の
ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質の量を測定することが
できる。
【００５１】被験試料中におけるヒトＡＤＡＭＴＳ−１
タンパク質のｍＲＮＡの分析では、被験試料と、ヒトＡ
ＤＡＭＴＳ−１タンパク質ｍＲＮＡの塩基配列に相補的
な塩基配列を含むポリヌクレオチドとを反応させ、生成
するヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質ｍＲＮＡ−ポリヌ
クレオチド結合体の存在を検出、又はその量を測定する
ことにより、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質のｍＲＮ
Ａを分析することができる。上記ポリヌクレオチドは、
選択された遺伝子（ＤＮＡ）から転写されたｍＲＮＡの
一部と相補的な又は実質的に相補的な配列を含み、標的
遺伝子から転写されたｍＲＮＡとの間で二重鎖を形成す
る。その標的ｍＲＮＡと安定な複合体を形成するために
十分な相補性を有するいずれのポリヌクレオチドも適当
であると考えられる。本発明に用いることのできるポリ
ヌクレオチドは、実質的に標的ｍＲＮＡ内のどの領域の
範囲で相補的であってもよい。ポリヌクレオチド分子
は、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質遺伝子に特異的な
ｍＲＮＡ発現の増減を検出するＤＮＡプローブとして用
いることができる。すなわち、標的であるヒトＡＤＡＭ
ＴＳ−１タンパク質のｍＲＮＡに特異的に付着し、分子
ハイブリッドを形成することにより、細胞内のヒトＡＤ
ＡＭＴＳ−１タンパク質の発現の程度を検出することが
できる。
タンパク質のｍＲＮＡの分析では、被験試料と、ヒトＡ
ＤＡＭＴＳ−１タンパク質ｍＲＮＡの塩基配列に相補的
な塩基配列を含むポリヌクレオチドとを反応させ、生成
するヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質ｍＲＮＡ−ポリヌ
クレオチド結合体の存在を検出、又はその量を測定する
ことにより、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質のｍＲＮ
Ａを分析することができる。上記ポリヌクレオチドは、
選択された遺伝子（ＤＮＡ）から転写されたｍＲＮＡの
一部と相補的な又は実質的に相補的な配列を含み、標的
遺伝子から転写されたｍＲＮＡとの間で二重鎖を形成す
る。その標的ｍＲＮＡと安定な複合体を形成するために
十分な相補性を有するいずれのポリヌクレオチドも適当
であると考えられる。本発明に用いることのできるポリ
ヌクレオチドは、実質的に標的ｍＲＮＡ内のどの領域の
範囲で相補的であってもよい。ポリヌクレオチド分子
は、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質遺伝子に特異的な
ｍＲＮＡ発現の増減を検出するＤＮＡプローブとして用
いることができる。すなわち、標的であるヒトＡＤＡＭ
ＴＳ−１タンパク質のｍＲＮＡに特異的に付着し、分子
ハイブリッドを形成することにより、細胞内のヒトＡＤ
ＡＭＴＳ−１タンパク質の発現の程度を検出することが
できる。
【００５２】本発明で用いることのできるポリヌクレオ
チドは、標的ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質のｍＲＮ
Ａの特異的塩基配列と相補的な塩基配列を適宜選択し、
例えば、公知のＤＮＡ合成装置、ＰＣＲ装置、又は遺伝
子クローニング等を用いて調製することができる。種々
の長さのポリヌクレオチドを使用することができるが、
好ましくは１０塩基以上、より好ましくは１７塩基以上
を有するものが好適である。
チドは、標的ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質のｍＲＮ
Ａの特異的塩基配列と相補的な塩基配列を適宜選択し、
例えば、公知のＤＮＡ合成装置、ＰＣＲ装置、又は遺伝
子クローニング等を用いて調製することができる。種々
の長さのポリヌクレオチドを使用することができるが、
好ましくは１０塩基以上、より好ましくは１７塩基以上
を有するものが好適である。
【００５３】前記のポリヌクレオチドは、修飾されてい
ないポリヌクレオチド又はポリヌクレオチド類似体であ
ることができる。適当な類似体として、例えば、エチル
−又はメチルホスホネート類似体、ホスホロチオエート
修飾されたポリデオキシヌクレオチド［Ｎｕｃｌｅｉｃ
Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１４，９０８１−９０９３，
（１９８６）；Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１０
６，６０７７−６０７９，（１９８４）］等が挙げられ
る。更に、近年のポリヌクレオチド類似体の製造におけ
る進歩により、例えば、２’−Ｏ−メチルリボヌクレオ
チド［Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１５，
６１３１−６１４８，（１９８７）］又は複合ＲＮＡ−
ＤＮＡ類似体であるキメラポリヌクレオチド［ＦＥＢＳ
Ｌｅｔｔ．，２１５，３２７−３３０，（１９８
７）］等も使用することができる。
ないポリヌクレオチド又はポリヌクレオチド類似体であ
ることができる。適当な類似体として、例えば、エチル
−又はメチルホスホネート類似体、ホスホロチオエート
修飾されたポリデオキシヌクレオチド［Ｎｕｃｌｅｉｃ
Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１４，９０８１−９０９３，
（１９８６）；Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１０
６，６０７７−６０７９，（１９８４）］等が挙げられ
る。更に、近年のポリヌクレオチド類似体の製造におけ
る進歩により、例えば、２’−Ｏ−メチルリボヌクレオ
チド［Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１５，
６１３１−６１４８，（１９８７）］又は複合ＲＮＡ−
ＤＮＡ類似体であるキメラポリヌクレオチド［ＦＥＢＳ
Ｌｅｔｔ．，２１５，３２７−３３０，（１９８
７）］等も使用することができる。
【００５４】選択されたポリヌクレオチドは、電荷をも
つもの、又は電荷をもたないものを含め、いかなる種類
のものでもよい。ｉｎ ｖｉｔｒｏ又はｉｎ ｖｉｖｏ
でこのような実験を行うために、ポリヌクレオチドを公
知の標識剤、例えば、放射性同位元素又は蛍光物質等で
常法によって標識することができる。放射性同位元素と
しては、例えば、 125Ｉ、 131Ｉ、 3Ｈ、14Ｃ、32Ｐ、
又は35Ｓ等がある。なかでも、放射性同位元素としてラ
ンダムプライマー法［Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１
３２，６−１３，（１９８３）］を用いて32Ｐで標識す
るのが好適である。また、より容易で危険性の少ない取
扱が可能なものとして誘導体形成した蛍光色素が挙げら
れる。蛍光色素としては、ポリヌクレオチドと結合する
すべての色素を用いることができるが、例えば、フルオ
レセイン、ローダミン、テキサスレッド、４−フルオロ
−７−ニトロベンゾフラザン（ＮＢＤ）、クマリン、フ
ルオレサミン、スクシニルフルオレセイン、又はダンシ
ル等が好適に用いられる。
つもの、又は電荷をもたないものを含め、いかなる種類
のものでもよい。ｉｎ ｖｉｔｒｏ又はｉｎ ｖｉｖｏ
でこのような実験を行うために、ポリヌクレオチドを公
知の標識剤、例えば、放射性同位元素又は蛍光物質等で
常法によって標識することができる。放射性同位元素と
しては、例えば、 125Ｉ、 131Ｉ、 3Ｈ、14Ｃ、32Ｐ、
又は35Ｓ等がある。なかでも、放射性同位元素としてラ
ンダムプライマー法［Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１
３２，６−１３，（１９８３）］を用いて32Ｐで標識す
るのが好適である。また、より容易で危険性の少ない取
扱が可能なものとして誘導体形成した蛍光色素が挙げら
れる。蛍光色素としては、ポリヌクレオチドと結合する
すべての色素を用いることができるが、例えば、フルオ
レセイン、ローダミン、テキサスレッド、４−フルオロ
−７−ニトロベンゾフラザン（ＮＢＤ）、クマリン、フ
ルオレサミン、スクシニルフルオレセイン、又はダンシ
ル等が好適に用いられる。
【００５５】例えば、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質
のｃＤＮＡを用いたノーザンブロット解析によるヒトＡ
ＤＡＭＴＳ−１タンパク質ｍＲＮＡ量の測定は、以下の
ように行うことができる。すなわち、任意の体細胞又は
組織からｍＲＮＡを抽出、単離し、単離したｍＲＮＡを
アガロースゲルで電気泳動し、ニトロセルロース又はナ
イロンメンブランに転写した後、標識ヒトＡＤＡＭＴＳ
−１タンパク質ｃＤＮＡプローブと反応させることによ
り、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質ｍＲＮＡ量を測定
する。使用するヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質ｃＤＮ
Ａプローブは、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質ｍＲＮ
Ａに相補的なＤＮＡであり、１７塩基以上の長さをもつ
ことが望ましい。
のｃＤＮＡを用いたノーザンブロット解析によるヒトＡ
ＤＡＭＴＳ−１タンパク質ｍＲＮＡ量の測定は、以下の
ように行うことができる。すなわち、任意の体細胞又は
組織からｍＲＮＡを抽出、単離し、単離したｍＲＮＡを
アガロースゲルで電気泳動し、ニトロセルロース又はナ
イロンメンブランに転写した後、標識ヒトＡＤＡＭＴＳ
−１タンパク質ｃＤＮＡプローブと反応させることによ
り、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質ｍＲＮＡ量を測定
する。使用するヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質ｃＤＮ
Ａプローブは、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質ｍＲＮ
Ａに相補的なＤＮＡであり、１７塩基以上の長さをもつ
ことが望ましい。
【００５６】本発明の免疫状態の分析試薬は、主要成分
として、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質と免疫学的に
反応することのできる免疫反応性物質を含む。ヒトＡＤ
ＡＭＴＳ−１タンパク質と免疫学的に反応することので
きる免疫反応性物質としては、例えば、抗ヒトＡＤＡＭ
ＴＳ−１タンパク質抗血清、抗ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タ
ンパク質ポリクローナル抗体、若しくは抗ヒトＡＤＡＭ
ＴＳ−１タンパク質モノクローナル抗体、又はこれらの
抗体のフラグメント等が挙げられる。また、本発明の免
疫状態分析試薬は、主要成分として、前記免疫反応性物
質の代わりに、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質ｍＲＮ
Ａの塩基配列に相補的な塩基配列を含むポリヌクレオチ
ドを含む構成とすることもできる。
として、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質と免疫学的に
反応することのできる免疫反応性物質を含む。ヒトＡＤ
ＡＭＴＳ−１タンパク質と免疫学的に反応することので
きる免疫反応性物質としては、例えば、抗ヒトＡＤＡＭ
ＴＳ−１タンパク質抗血清、抗ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タ
ンパク質ポリクローナル抗体、若しくは抗ヒトＡＤＡＭ
ＴＳ−１タンパク質モノクローナル抗体、又はこれらの
抗体のフラグメント等が挙げられる。また、本発明の免
疫状態分析試薬は、主要成分として、前記免疫反応性物
質の代わりに、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質ｍＲＮ
Ａの塩基配列に相補的な塩基配列を含むポリヌクレオチ
ドを含む構成とすることもできる。
【００５７】本発明の免疫状態分析試薬を用いることに
より、これまで述べてきた方法に従って、被検試料中に
おけるヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質それ自体、又は
ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質のｍＲＮＡを分析し、
その結果から、種々の疾病により生体防御系が変化した
被験対象の免疫状態を判定することができる。
より、これまで述べてきた方法に従って、被検試料中に
おけるヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質それ自体、又は
ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質のｍＲＮＡを分析し、
その結果から、種々の疾病により生体防御系が変化した
被験対象の免疫状態を判定することができる。
【００５８】
【実施例】以下、実施例によって本発明を具体的に説明
するが、これらは本発明の範囲を限定するものではな
い。実施例１：ヒトＡＤＡＭＴＳ−１ｃＤＮＡの単離及び塩
基配列の決定 ＰＣＲ法用のプライマーとして、マウスＡＤＡＭＴＳ−
１タンパク質［Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７２，５
５６−５６２（１９９７）］における３個のトロンボス
ポンジン（ＴＳＰ）ドメインの内、Ｎ末端から１番目の
ＴＳＰドメイン中のアミノ酸配列（配列表の配列番号
３）に対応する塩基配列（配列表の配列番号４）からな
るＤＮＡ［以下、フォワードプライマー（１）と称す
る］と、マウスＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質のＣ末端の
アミノ酸をコードする塩基配列及びその周辺（すなわ
ち、上流側及び下流側領域）の塩基配列に相補的な塩基
配列（配列表の配列番号５）からなるＤＮＡ［以下、バ
ックプライマー（１）と称する］を化学合成した。
するが、これらは本発明の範囲を限定するものではな
い。実施例１：ヒトＡＤＡＭＴＳ−１ｃＤＮＡの単離及び塩
基配列の決定 ＰＣＲ法用のプライマーとして、マウスＡＤＡＭＴＳ−
１タンパク質［Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７２，５
５６−５６２（１９９７）］における３個のトロンボス
ポンジン（ＴＳＰ）ドメインの内、Ｎ末端から１番目の
ＴＳＰドメイン中のアミノ酸配列（配列表の配列番号
３）に対応する塩基配列（配列表の配列番号４）からな
るＤＮＡ［以下、フォワードプライマー（１）と称す
る］と、マウスＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質のＣ末端の
アミノ酸をコードする塩基配列及びその周辺（すなわ
ち、上流側及び下流側領域）の塩基配列に相補的な塩基
配列（配列表の配列番号５）からなるＤＮＡ［以下、バ
ックプライマー（１）と称する］を化学合成した。
【００５９】０．５μＭフォワードプライマー（１）、
０．５μＭバックプライマー（１）、０．５ユニットＴ
ａｑポリメラーゼ（Ｅｘ Ｔａｑポリメラーゼ；宝酒
造，京都，日本）、４０μＭ−４ｄＮＴＰ、及びＰＣＲ
緩衝液［組成：１０ｍＭトリス−ＨＣｌ（ｐＨ８．
３），５０ｍＭ−ＫＣｌ］（Ｅｘ Ｔａｑバッファー；
宝酒造，京都，日本）を含む溶液９９μｌに、鋳型ＤＮ
Ａとしてヒト腎臓ｃＤＮＡライブラリー（Ｍａｒａｔｈ
ｏｎ−Ｒｅａｄｙ ｃＤＮＡ；Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａ
ｂ．Ｉｎｃ．，パロアルト，カリフォルニア州，米国）
１μｌを加え、通常のＰＣＲ法に比べて低いアニーリン
グ温度でＰＣＲ法を実施した。すなわち、変性工程を９
４℃で３０秒間実施し、アニーリング工程を５０℃で３
０秒間実施し、ＤＮＡ合成工程を７２℃で２分間実施す
るサイクルを、４０サイクル実施した。
０．５μＭバックプライマー（１）、０．５ユニットＴ
ａｑポリメラーゼ（Ｅｘ Ｔａｑポリメラーゼ；宝酒
造，京都，日本）、４０μＭ−４ｄＮＴＰ、及びＰＣＲ
緩衝液［組成：１０ｍＭトリス−ＨＣｌ（ｐＨ８．
３），５０ｍＭ−ＫＣｌ］（Ｅｘ Ｔａｑバッファー；
宝酒造，京都，日本）を含む溶液９９μｌに、鋳型ＤＮ
Ａとしてヒト腎臓ｃＤＮＡライブラリー（Ｍａｒａｔｈ
ｏｎ−Ｒｅａｄｙ ｃＤＮＡ；Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａ
ｂ．Ｉｎｃ．，パロアルト，カリフォルニア州，米国）
１μｌを加え、通常のＰＣＲ法に比べて低いアニーリン
グ温度でＰＣＲ法を実施した。すなわち、変性工程を９
４℃で３０秒間実施し、アニーリング工程を５０℃で３
０秒間実施し、ＤＮＡ合成工程を７２℃で２分間実施す
るサイクルを、４０サイクル実施した。
【００６０】得られた反応液から５μｌを取り出し、ア
ガロースゲル（１％）電気泳動を行ったところ、図１に
示すように、１．２Ｋｂの単一のＤＮＡバンドを認め
た。残りの反応液を再泳動し、１．２ＫｂのＤＮＡ断片
（以下、Ｆｌａｇ．１ＤＮＡ断片と称する）を低融点ア
ガロースゲルから回収し、ｐＣＲTM２．１ベクター（Ｉ
ｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐ．，サンディエゴ，カリ
フォルニア州，米国）にクローニングした。
ガロースゲル（１％）電気泳動を行ったところ、図１に
示すように、１．２Ｋｂの単一のＤＮＡバンドを認め
た。残りの反応液を再泳動し、１．２ＫｂのＤＮＡ断片
（以下、Ｆｌａｇ．１ＤＮＡ断片と称する）を低融点ア
ガロースゲルから回収し、ｐＣＲTM２．１ベクター（Ｉ
ｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐ．，サンディエゴ，カリ
フォルニア州，米国）にクローニングした。
【００６１】オートマチックＤＮＡシークエンサー（Ｄ
ＳＱ１０００；島津製作所，京都，日本）により、クロ
ーニングしたＦｌａｇ．１ＤＮＡ断片の塩基配列の一部
（３０３ｂｐ）を決定し、マウスＡＤＡＭＴＳ−１に対
してホモロジー検索を実施した結果、７７．４％の相同
性が認められた。Ｆｌａｇ．１ＤＮＡ断片の部分塩基配
列、及びその配列と相同性が認められるマウスＡＤＡＭ
ＴＳ−１遺伝子の部分塩基配列を図２に示す。図２にお
いて、「：」は、Ｆｌａｇ．１ＤＮＡ断片とマウスＡＤ
ＡＭＴＳ−１遺伝子との間で、対応する塩基が一致する
ことを表わす。更に、ランダムプライムドＤＮＡ−ラベ
リングキット（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒｍａｎｍｈｅｉｍ
ＧｍｂＨ，ドイツ）を用いて32Ｐでラベルしたマウス
ＡＤＡＭＴＳ−１ｃＤＮＡが、前記Ｆｌａｇ．１ＤＮＡ
断片にハイブリダイズすることを、ドットハイブリダイ
ゼーション法［Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１６，４７
４３−４７４９（１９７７）］により確認した。結果を
図３に示す。コントロールであるｐＣＲTM２．１ベクタ
ーには、32ＰでラベルしたマウスＡＤＡＭＴＳ−１ｃＤ
ＮＡがハイブリダイズしなかったのに対して、マウスＡ
ＤＡＭＴＳ−１ｃＤＮＡ及びＦｌａｇ．１ＤＮＡ断片に
は、32ＰでラベルしたマウスＡＤＡＭＴＳ−１ｃＤＮＡ
がハイブリダイズした。以上のホモロジー検索及びドッ
トハイブリダイゼーションの結果から、このＦｌａｇ．
１ＤＮＡ断片がヒトＡＤＡＭＴＳ−１の一部であること
が判明した。
ＳＱ１０００；島津製作所，京都，日本）により、クロ
ーニングしたＦｌａｇ．１ＤＮＡ断片の塩基配列の一部
（３０３ｂｐ）を決定し、マウスＡＤＡＭＴＳ−１に対
してホモロジー検索を実施した結果、７７．４％の相同
性が認められた。Ｆｌａｇ．１ＤＮＡ断片の部分塩基配
列、及びその配列と相同性が認められるマウスＡＤＡＭ
ＴＳ−１遺伝子の部分塩基配列を図２に示す。図２にお
いて、「：」は、Ｆｌａｇ．１ＤＮＡ断片とマウスＡＤ
ＡＭＴＳ−１遺伝子との間で、対応する塩基が一致する
ことを表わす。更に、ランダムプライムドＤＮＡ−ラベ
リングキット（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒｍａｎｍｈｅｉｍ
ＧｍｂＨ，ドイツ）を用いて32Ｐでラベルしたマウス
ＡＤＡＭＴＳ−１ｃＤＮＡが、前記Ｆｌａｇ．１ＤＮＡ
断片にハイブリダイズすることを、ドットハイブリダイ
ゼーション法［Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１６，４７
４３−４７４９（１９７７）］により確認した。結果を
図３に示す。コントロールであるｐＣＲTM２．１ベクタ
ーには、32ＰでラベルしたマウスＡＤＡＭＴＳ−１ｃＤ
ＮＡがハイブリダイズしなかったのに対して、マウスＡ
ＤＡＭＴＳ−１ｃＤＮＡ及びＦｌａｇ．１ＤＮＡ断片に
は、32ＰでラベルしたマウスＡＤＡＭＴＳ−１ｃＤＮＡ
がハイブリダイズした。以上のホモロジー検索及びドッ
トハイブリダイゼーションの結果から、このＦｌａｇ．
１ＤＮＡ断片がヒトＡＤＡＭＴＳ−１の一部であること
が判明した。
【００６２】前記Ｆｌａｇ．１ＤＮＡ断片の上流のＤＮ
Ａ断片を得るために、マラソンｃＤＮＡ増幅キット（Ｍ
ａｒａｔｈｏｎ ｃＤＮＡ Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏ
ｎｋｉｔ；Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂ．Ｉｎｃ．，パロ
アルト，カリフォルニア州，米国）を用いて、ＲＡＣＥ
（Ｒａｐｉｄ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆｃＤ
ＮＡ ｅｎｄｓ）法を以下のように実施した。Ｆｌａ
ｇ．１ＤＮＡ断片の塩基配列に関するバックプライマー
として、Ｆｌａｇ．１ＤＮＡ断片の３’末端領域の塩基
配列に相補的な塩基配列（配列表の配列番号６）からな
るＤＮＡ（以下、ＧＳＰ−１プライマーと称する）と、
Ｆｌａｇ．１ＤＮＡ断片の５’側の塩基配列に相補的な
塩基配列（配列表の配列番号７）からなるＤＮＡ（以
下、ＧＳＰ−２プライマーと称する）とを化学合成し
た。また、フォワードプライマーとしては、前記キット
に含まれるＡＰ１プライマー及びＡＰ２プライマーをそ
れぞれ使用した。ＡＰ１プライマーの塩基配列は、配列
表の配列番号８の配列で表わされる塩基配列であり、Ａ
Ｐ２プライマーの塩基配列は、配列表の配列番号９の配
列で表わされる塩基配列である。
Ａ断片を得るために、マラソンｃＤＮＡ増幅キット（Ｍ
ａｒａｔｈｏｎ ｃＤＮＡ Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏ
ｎｋｉｔ；Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂ．Ｉｎｃ．，パロ
アルト，カリフォルニア州，米国）を用いて、ＲＡＣＥ
（Ｒａｐｉｄ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆｃＤ
ＮＡ ｅｎｄｓ）法を以下のように実施した。Ｆｌａ
ｇ．１ＤＮＡ断片の塩基配列に関するバックプライマー
として、Ｆｌａｇ．１ＤＮＡ断片の３’末端領域の塩基
配列に相補的な塩基配列（配列表の配列番号６）からな
るＤＮＡ（以下、ＧＳＰ−１プライマーと称する）と、
Ｆｌａｇ．１ＤＮＡ断片の５’側の塩基配列に相補的な
塩基配列（配列表の配列番号７）からなるＤＮＡ（以
下、ＧＳＰ−２プライマーと称する）とを化学合成し
た。また、フォワードプライマーとしては、前記キット
に含まれるＡＰ１プライマー及びＡＰ２プライマーをそ
れぞれ使用した。ＡＰ１プライマーの塩基配列は、配列
表の配列番号８の配列で表わされる塩基配列であり、Ａ
Ｐ２プライマーの塩基配列は、配列表の配列番号９の配
列で表わされる塩基配列である。
【００６３】ヒト腎臓ｃＤＮＡライブラリー（Ｍａｒａ
ｔｈｏｎ−Ｒｅａｄｙ ｃＤＮＡ；Ｃｌｏｎｔｅｃｈ
Ｌａｂ．Ｉｎｃ．，パロアルト，カリフォルニア州，米
国）５μｌ、ＡＰ１プライマー１μｌ、ＧＳＰ−１プラ
イマー（１０μＭ）１μｌ、Ｔａｑポリメラーゼ（Ｅｘ
Ｔａｑポリメラーゼ）（０．５ユニット）１μｌ、抗
Ｔａｑポリメラーゼ抗体（Ｔａｑ Ｓｔａｒｔ Ａｎｔ
ｉｂｏｄｙ；Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂ．Ｉｎｃ．，パ
ロアルト，カリフォルニア州，米国）１μｌ、１０倍濃
度ＰＣＲバッファー［組成：１００ｍＭトリス−ＨＣｌ
（ｐＨ８．３），５００ｍＭ−ＫＣｌ］（Ｃｌｏｎｔｅ
ｃｈ Ｌａｂ．Ｉｎｃ．，パロアルト，カリフォルニア
州，米国）５μｌ、及び蒸留水３６μｌを混合し、ＰＣ
Ｒ反応を実施した。前記ＰＣＲ反応は、９４℃で３０秒
間の工程と６８℃で４分間とからなるサイクルを３５サ
イクル実施した。得られた反応液を１０ｍＭトリシン−
ＥＤＴＡバッファー（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂ．Ｉｎ
ｃ．，パロアルト，カリフォルニア州，米国）で５０倍
に希釈した。
ｔｈｏｎ−Ｒｅａｄｙ ｃＤＮＡ；Ｃｌｏｎｔｅｃｈ
Ｌａｂ．Ｉｎｃ．，パロアルト，カリフォルニア州，米
国）５μｌ、ＡＰ１プライマー１μｌ、ＧＳＰ−１プラ
イマー（１０μＭ）１μｌ、Ｔａｑポリメラーゼ（Ｅｘ
Ｔａｑポリメラーゼ）（０．５ユニット）１μｌ、抗
Ｔａｑポリメラーゼ抗体（Ｔａｑ Ｓｔａｒｔ Ａｎｔ
ｉｂｏｄｙ；Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂ．Ｉｎｃ．，パ
ロアルト，カリフォルニア州，米国）１μｌ、１０倍濃
度ＰＣＲバッファー［組成：１００ｍＭトリス−ＨＣｌ
（ｐＨ８．３），５００ｍＭ−ＫＣｌ］（Ｃｌｏｎｔｅ
ｃｈ Ｌａｂ．Ｉｎｃ．，パロアルト，カリフォルニア
州，米国）５μｌ、及び蒸留水３６μｌを混合し、ＰＣ
Ｒ反応を実施した。前記ＰＣＲ反応は、９４℃で３０秒
間の工程と６８℃で４分間とからなるサイクルを３５サ
イクル実施した。得られた反応液を１０ｍＭトリシン−
ＥＤＴＡバッファー（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂ．Ｉｎ
ｃ．，パロアルト，カリフォルニア州，米国）で５０倍
に希釈した。
【００６４】続いて、前記希釈液５μｌ、ＡＰ２プライ
マー１μｌ、ＧＳＰ−２プライマー（１０μＭ）１μ
ｌ、Ｔａｑポリメラーゼ（Ｅｘ Ｔａｑポリメラーゼ）
（０．５ユニット）１μｌ、抗Ｔａｑポリメラーゼ抗体
（Ｔａｑ Ｓｔａｒｔ Ａｎｔｉｂｏｄｙ）１μｌ、１
０倍濃度ＰＣＲバッファー（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａ
ｂ．Ｉｎｃ．，パロアルト，カリフォルニア州，米国）
５μｌ、及び蒸留水３６μｌを混合し、ＰＣＲ反応を実
施した。前記ＰＣＲ反応は、９４℃で３０秒間の工程と
６８℃で４分間の工程とからなるサイクルを２０サイク
ル実施した。得られた反応液から５μｌを取り出し、１
％アガロースゲル電気泳動を行ったところ、図４に示す
ように、約１．２Ｋｂの単一のＤＮＡバンドを得た。常
法に従って、このＤＮＡ断片（以下、Ｆｌａｇ．２ＤＮ
Ａ断片と称する）をｐＣＲTM２．１ベクターにクローニ
ングし、Ｆｌａｇ．２ＤＮＡ断片の全塩基配列をダイタ
ーミネーターサイクルシークエンス（Ｄｙｅ Ｔｅｒｍ
ｉｎａｔｏｒ Ｃｙｃｌｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ）法
（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ Ｊａｐａｎ，浦安，日
本）により決定した。
マー１μｌ、ＧＳＰ−２プライマー（１０μＭ）１μ
ｌ、Ｔａｑポリメラーゼ（Ｅｘ Ｔａｑポリメラーゼ）
（０．５ユニット）１μｌ、抗Ｔａｑポリメラーゼ抗体
（Ｔａｑ Ｓｔａｒｔ Ａｎｔｉｂｏｄｙ）１μｌ、１
０倍濃度ＰＣＲバッファー（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａ
ｂ．Ｉｎｃ．，パロアルト，カリフォルニア州，米国）
５μｌ、及び蒸留水３６μｌを混合し、ＰＣＲ反応を実
施した。前記ＰＣＲ反応は、９４℃で３０秒間の工程と
６８℃で４分間の工程とからなるサイクルを２０サイク
ル実施した。得られた反応液から５μｌを取り出し、１
％アガロースゲル電気泳動を行ったところ、図４に示す
ように、約１．２Ｋｂの単一のＤＮＡバンドを得た。常
法に従って、このＤＮＡ断片（以下、Ｆｌａｇ．２ＤＮ
Ａ断片と称する）をｐＣＲTM２．１ベクターにクローニ
ングし、Ｆｌａｇ．２ＤＮＡ断片の全塩基配列をダイタ
ーミネーターサイクルシークエンス（Ｄｙｅ Ｔｅｒｍ
ｉｎａｔｏｒ Ｃｙｃｌｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ）法
（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ Ｊａｐａｎ，浦安，日
本）により決定した。
【００６５】また、Ｆｌａｇ．１ＤＮＡ断片について
も、ダイターミネーターサイクルシークエンス（Ｄｙｅ
Ｔｅｒｍｉｎａｔｏｒ Ｃｙｃｌｅ Ｓｅｑｕｅｎｃ
ｉｎｇ）法（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ Ｊａｐａｎ，
浦安，日本）により全塩基配列を決定し、Ｆｌａｇ．１
ＤＮＡ断片及びＦｌａｇ．２ＤＮＡ断片の塩基配列を統
合することにより、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１ｃＤＮＡの全
塩基配列を決定した。ヒトＡＤＡＭＴＳ−１ｃＤＮＡの
全塩基配列（停止コドンを含め、２１８４ｂｐ）は、配
列表の配列番号２の配列で表わされる塩基配列であり、
前記塩基配列から推定されるヒトＡＤＡＭＴＳ−１タン
パク質のアミノ酸配列（アミノ酸残基７２７個）は、配
列表の配列番号１の配列で表わされるアミノ酸配列であ
る。なお、図２に示すＦｌａｇ．１ＤＮＡ断片の一部塩
基配列と、配列表の配列番号２の配列で表わされるヒト
ＡＤＡＭＴＳ−１ｃＤＮＡの全塩基配列との間に、一
部、塩基配列が一致しない箇所があるが、図２に示す前
記一部塩基配列は、配列決定の途中で得られた塩基配列
であり、配列表の配列番号２の配列で表わされる塩基配
列が、最終的に決定したヒトＡＤＡＭＴＳ−１ｃＤＮＡ
の正しい塩基配列である。
も、ダイターミネーターサイクルシークエンス（Ｄｙｅ
Ｔｅｒｍｉｎａｔｏｒ Ｃｙｃｌｅ Ｓｅｑｕｅｎｃ
ｉｎｇ）法（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ Ｊａｐａｎ，
浦安，日本）により全塩基配列を決定し、Ｆｌａｇ．１
ＤＮＡ断片及びＦｌａｇ．２ＤＮＡ断片の塩基配列を統
合することにより、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１ｃＤＮＡの全
塩基配列を決定した。ヒトＡＤＡＭＴＳ−１ｃＤＮＡの
全塩基配列（停止コドンを含め、２１８４ｂｐ）は、配
列表の配列番号２の配列で表わされる塩基配列であり、
前記塩基配列から推定されるヒトＡＤＡＭＴＳ−１タン
パク質のアミノ酸配列（アミノ酸残基７２７個）は、配
列表の配列番号１の配列で表わされるアミノ酸配列であ
る。なお、図２に示すＦｌａｇ．１ＤＮＡ断片の一部塩
基配列と、配列表の配列番号２の配列で表わされるヒト
ＡＤＡＭＴＳ−１ｃＤＮＡの全塩基配列との間に、一
部、塩基配列が一致しない箇所があるが、図２に示す前
記一部塩基配列は、配列決定の途中で得られた塩基配列
であり、配列表の配列番号２の配列で表わされる塩基配
列が、最終的に決定したヒトＡＤＡＭＴＳ−１ｃＤＮＡ
の正しい塩基配列である。
【００６６】ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質は、シス
テインに富み、Ｃ末端側領域に塩基性アミノ酸であるリ
ジン及びアルギニンが多く分布しており、Ｎ−グリコシ
レーション部位（第３０７番目〜第３０９番目のアミノ
酸、及び第５２４番目〜第５２６番目のアミノ酸）が２
個存在する。
テインに富み、Ｃ末端側領域に塩基性アミノ酸であるリ
ジン及びアルギニンが多く分布しており、Ｎ−グリコシ
レーション部位（第３０７番目〜第３０９番目のアミノ
酸、及び第５２４番目〜第５２６番目のアミノ酸）が２
個存在する。
【００６７】ヒトＡＤＡＭＴＳ−１遺伝子とマウスＡＤ
ＡＭＴＳ−１遺伝子との塩基配列におけるホモロジーを
図５〜図９に、それぞれの塩基配列から予想されるアミ
ノ酸配列におけるホモロジーを図１０〜図１２に示す。
図５〜図９において、「＊」は、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１
遺伝子とマウスＡＤＡＭＴＳ−１遺伝子との間で、対応
する塩基が一致することを表わす。図１０〜図１２にお
いて、「＊」は、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質とマ
ウスＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質との間で、対応するア
ミノ酸残基が一致することを表わす。また、図１０〜図
１２において、「ＭＭＰドメイン」は、マトリックスメ
タロプロテアーゼドメインを意味し、第１１番目及び第
１２番目のアミノ酸の間に引いた直線は、その位置から
マトリックスメタロプロテアーゼドメインが始まること
を表わし、「ＤＩドメイン」は、ディスインテグリンド
メインを意味し、第２３４番目及び第２３５番目のアミ
ノ酸の間に引いた直線は、その位置からディスインテグ
リンドメインが始まることを表わす。更に、図１０〜図
１２において、「ＴＳＰドメイン」は、トロンボスポン
ジンドメインを意味し、トロンボスポンジンドメインを
構成するアミノ酸配列（３箇所）を四角形で囲んで示
す。ヒトＡＤＡＭＴＳ−１とマウスＡＤＡＭＴＳ−１と
は、塩基配列において８５．５％の相同性を示し、アミ
ノ酸配列において９０．１％の相同性を示し、マウスと
ヒトとの間でその配列がよく保存されているタンパク質
であることが判明した。
ＡＭＴＳ−１遺伝子との塩基配列におけるホモロジーを
図５〜図９に、それぞれの塩基配列から予想されるアミ
ノ酸配列におけるホモロジーを図１０〜図１２に示す。
図５〜図９において、「＊」は、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１
遺伝子とマウスＡＤＡＭＴＳ−１遺伝子との間で、対応
する塩基が一致することを表わす。図１０〜図１２にお
いて、「＊」は、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質とマ
ウスＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質との間で、対応するア
ミノ酸残基が一致することを表わす。また、図１０〜図
１２において、「ＭＭＰドメイン」は、マトリックスメ
タロプロテアーゼドメインを意味し、第１１番目及び第
１２番目のアミノ酸の間に引いた直線は、その位置から
マトリックスメタロプロテアーゼドメインが始まること
を表わし、「ＤＩドメイン」は、ディスインテグリンド
メインを意味し、第２３４番目及び第２３５番目のアミ
ノ酸の間に引いた直線は、その位置からディスインテグ
リンドメインが始まることを表わす。更に、図１０〜図
１２において、「ＴＳＰドメイン」は、トロンボスポン
ジンドメインを意味し、トロンボスポンジンドメインを
構成するアミノ酸配列（３箇所）を四角形で囲んで示
す。ヒトＡＤＡＭＴＳ−１とマウスＡＤＡＭＴＳ−１と
は、塩基配列において８５．５％の相同性を示し、アミ
ノ酸配列において９０．１％の相同性を示し、マウスと
ヒトとの間でその配列がよく保存されているタンパク質
であることが判明した。
【００６８】実施例２：大腸菌によるヒトＡＤＡＭＴＳ
−１融合タンパク質の調製 （１）大腸菌発現ベクターの構築 ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質の内、ＭＭＰドメイン
から下流の部分をすべて含むヒトＡＤＡＭＴＳ−１部分
タンパク質をコードするＤＮＡにおいて、５’側に制限
酵素ＳｍａＩ切断部位を導入し、３’側に制限酵素Ｎｏ
ｔＩ切断部位を導入するために、配列表の配列番号１０
の配列で表わされる塩基配列からなるフォワードプライ
マー（２）及び配列表の配列番号１１の配列で表わされ
る塩基配列からなるバックプライマー（２）を化学合成
した。
−１融合タンパク質の調製 （１）大腸菌発現ベクターの構築 ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質の内、ＭＭＰドメイン
から下流の部分をすべて含むヒトＡＤＡＭＴＳ−１部分
タンパク質をコードするＤＮＡにおいて、５’側に制限
酵素ＳｍａＩ切断部位を導入し、３’側に制限酵素Ｎｏ
ｔＩ切断部位を導入するために、配列表の配列番号１０
の配列で表わされる塩基配列からなるフォワードプライ
マー（２）及び配列表の配列番号１１の配列で表わされ
る塩基配列からなるバックプライマー（２）を化学合成
した。
【００６９】フォワードプライマー（２）５μｌ、バッ
クプライマー（２）５μｌ、ヒト腎臓ｃＤＮＡライブラ
リー（Ｍａｒａｔｈｏｎ−Ｒｅａｄｙ ｃＤＮＡ；Ｃｌ
ｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂ．Ｉｎｃ．，パロアルト，カリフ
ォルニア州，米国）１μｌ、Ｔａｑポリメラーゼ（Ｅｘ
Ｔａｑポリメラーゼ）（０．５ユニット）１μｌ、抗
Ｔａｑポリメラーゼ抗体（Ｔａｑ Ｓｔａｒｔ Ａｎｔ
ｉｂｏｄｙ；Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂ．Ｉｎｃ．，パ
ロアルト，カリフォルニア州，米国）１μｌ、１０倍濃
度ＰＣＲバッファー（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂ．Ｉｎ
ｃ．，パロアルト，カリフォルニア州，米国）１０μ
ｌ、２．５ｍＭ−４ｄＮＴＰ（宝酒造，京都，日本）８
μｌ、及び蒸留水６９μｌを混合し、ＰＣＲ反応を実施
した。前記ＰＣＲ反応は、９４℃で１分間の工程、５５
℃で４５秒間の工程、及び７２℃で２分間の工程からな
るサイクルを４０サイクル実施した。
クプライマー（２）５μｌ、ヒト腎臓ｃＤＮＡライブラ
リー（Ｍａｒａｔｈｏｎ−Ｒｅａｄｙ ｃＤＮＡ；Ｃｌ
ｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂ．Ｉｎｃ．，パロアルト，カリフ
ォルニア州，米国）１μｌ、Ｔａｑポリメラーゼ（Ｅｘ
Ｔａｑポリメラーゼ）（０．５ユニット）１μｌ、抗
Ｔａｑポリメラーゼ抗体（Ｔａｑ Ｓｔａｒｔ Ａｎｔ
ｉｂｏｄｙ；Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂ．Ｉｎｃ．，パ
ロアルト，カリフォルニア州，米国）１μｌ、１０倍濃
度ＰＣＲバッファー（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂ．Ｉｎ
ｃ．，パロアルト，カリフォルニア州，米国）１０μ
ｌ、２．５ｍＭ−４ｄＮＴＰ（宝酒造，京都，日本）８
μｌ、及び蒸留水６９μｌを混合し、ＰＣＲ反応を実施
した。前記ＰＣＲ反応は、９４℃で１分間の工程、５５
℃で４５秒間の工程、及び７２℃で２分間の工程からな
るサイクルを４０サイクル実施した。
【００７０】得られた反応液から５μｌを取り出し、１
％アガロースゲル電気泳動を行ったところ、図１３に示
すように、約２．２Ｋｂの単一のＤＮＡバンドを得た。
常法に従って、約２．２ＫｂのＤＮＡ断片をｐＣＲ
TM２．１ベクターにクローニングし、得られたプラスミ
ドを大量調製［Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅ
ｓ．，９，２９８９−２９９８（１９８１）］した。大
量調製したプラスミドを制限酵素ＳｍａＩ（宝酒造，京
都，日本）及びＮｏｔＩ（宝酒造，京都，日本）で処理
することにより得られる約２．２ＫｂのＤＮＡ断片を、
大腸菌発現ベクターｐＧＥＸ−５Ｘ−１［Ｉｎｆｅｃｔ
Ｉｍｍｕｎ．，５８，３９０９−３９１３（１９９
０）］（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ，ウプサ
ラ，スウェーデン）のＳｍａＩ−ＮｏｔＩサイトにクロ
ーニングした。得られた発現プラスミドをｐＧ／ＡＤＡ
ＭＴＳ−１と命名した。プラスミドｐＧ／ＡＤＡＭＴＳ
−１の構造を図１４に模式的に示す。ＡＤＡＭＴＳ−１
タンパク質は、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ
（以下、ＧＳＴと称することがある）（分子量＝約２６
Ｋｄ）との融合タンパク質（分子量＝約９６Ｋｄ）とし
て発現されると思われる。図１４において、「Ｏｒｉ」
は、複製開始点を意味し、「ＡｍｐR 」は、アンピシリ
ン耐性遺伝子を意味し、「ｌａｑ Ｉq 」は、ｌａｑリ
プレッサーを意味する。
％アガロースゲル電気泳動を行ったところ、図１３に示
すように、約２．２Ｋｂの単一のＤＮＡバンドを得た。
常法に従って、約２．２ＫｂのＤＮＡ断片をｐＣＲ
TM２．１ベクターにクローニングし、得られたプラスミ
ドを大量調製［Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅ
ｓ．，９，２９８９−２９９８（１９８１）］した。大
量調製したプラスミドを制限酵素ＳｍａＩ（宝酒造，京
都，日本）及びＮｏｔＩ（宝酒造，京都，日本）で処理
することにより得られる約２．２ＫｂのＤＮＡ断片を、
大腸菌発現ベクターｐＧＥＸ−５Ｘ−１［Ｉｎｆｅｃｔ
Ｉｍｍｕｎ．，５８，３９０９−３９１３（１９９
０）］（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ，ウプサ
ラ，スウェーデン）のＳｍａＩ−ＮｏｔＩサイトにクロ
ーニングした。得られた発現プラスミドをｐＧ／ＡＤＡ
ＭＴＳ−１と命名した。プラスミドｐＧ／ＡＤＡＭＴＳ
−１の構造を図１４に模式的に示す。ＡＤＡＭＴＳ−１
タンパク質は、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ
（以下、ＧＳＴと称することがある）（分子量＝約２６
Ｋｄ）との融合タンパク質（分子量＝約９６Ｋｄ）とし
て発現されると思われる。図１４において、「Ｏｒｉ」
は、複製開始点を意味し、「ＡｍｐR 」は、アンピシリ
ン耐性遺伝子を意味し、「ｌａｑ Ｉq 」は、ｌａｑリ
プレッサーを意味する。
【００７１】（２）大腸菌によるＧＳＴ−ヒトＡＤＡＭ
ＴＳ−１融合タンパク質の発現 タンパク質分解酵素活性の低い大腸菌株ＢＬ−２１（Ｐ
ｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ，ウプサラ，スウェ
ーデン）に、プラスミドｐＧ／ＡＤＡＭＴＳ−１を常法
［Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，６
９，２１１０−２１１４（１９７２）］によりトランス
フォームし、そのプラスミドを保持する大腸菌クローン
をアンピシリン耐性株として単離した。５つのアンピシ
リン耐性クローン（以下、クローン＃１〜クローン＃５
と称する）を無作為に選び、アンピシリン（１００μｇ
／ｍｌ）を含む２×ＹＴ培地（トリプトン１６ｇ，酵母
抽出物１０ｇ，塩化ナトリウム５ｇを蒸留水１リットル
に溶解して調製；ｐＨ７．２）２ｍｌに殖菌し、３７℃
で一晩培養した。次に、１つのクローンに対して、アン
ピシリン（１００μｇ／ｍｌ）を含むＬＢ培養液１８０
０μｌの入った試験管２本を１組とし、それぞれの試験
管に一晩培養した前記培養液２００μｌを入れた。３７
℃で２時間培養した後に、２本１組の試験管の内、一方
の試験管に発現誘導剤であるイソプロピル−β−Ｄ−チ
オ−ガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）（宝酒造，京都，
日本）２０μｌ（最終濃度１．０ｍＭ）を加え、更に、
３７℃で２時間培養を続けた。なお、２本１組の試験管
の内、残る一方は、発現誘導剤を入れないコントロール
とした。
ＴＳ−１融合タンパク質の発現 タンパク質分解酵素活性の低い大腸菌株ＢＬ−２１（Ｐ
ｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ，ウプサラ，スウェ
ーデン）に、プラスミドｐＧ／ＡＤＡＭＴＳ−１を常法
［Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，６
９，２１１０−２１１４（１９７２）］によりトランス
フォームし、そのプラスミドを保持する大腸菌クローン
をアンピシリン耐性株として単離した。５つのアンピシ
リン耐性クローン（以下、クローン＃１〜クローン＃５
と称する）を無作為に選び、アンピシリン（１００μｇ
／ｍｌ）を含む２×ＹＴ培地（トリプトン１６ｇ，酵母
抽出物１０ｇ，塩化ナトリウム５ｇを蒸留水１リットル
に溶解して調製；ｐＨ７．２）２ｍｌに殖菌し、３７℃
で一晩培養した。次に、１つのクローンに対して、アン
ピシリン（１００μｇ／ｍｌ）を含むＬＢ培養液１８０
０μｌの入った試験管２本を１組とし、それぞれの試験
管に一晩培養した前記培養液２００μｌを入れた。３７
℃で２時間培養した後に、２本１組の試験管の内、一方
の試験管に発現誘導剤であるイソプロピル−β−Ｄ−チ
オ−ガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）（宝酒造，京都，
日本）２０μｌ（最終濃度１．０ｍＭ）を加え、更に、
３７℃で２時間培養を続けた。なお、２本１組の試験管
の内、残る一方は、発現誘導剤を入れないコントロール
とした。
【００７２】培養液１ｍｌをマイクロ遠心機で遠心（１
４０００ｒｐｍ，１分間）することにより菌体を集め、
リン酸緩衝溶液（組成：１４０ｍＭ−ＮａＣｌ，２．７
ｍＭ−ＫＣｌ，１０ｍＭ−Ｎａ2 ＨＰＯ4 ，１．８ｍＭ
−ＫＨ2 ＰＯ4 ，ｐＨ７．２；以下、ＰＢＳと称する）
１００μｌで懸濁した後、２×サンプルバッファー
（０．２５Ｍ−トリス−ＨＣｌ，２％ＳＤＳ，３％グリ
セロール，１０％β−メルカプトエタノール，０．０１
％ブロモフェノールブルー；ｐＨ６．８）１００μｌに
溶解した。得られた溶液１０μｌをＳＤＳ−ポリアクリ
ルアミドゲル電気泳動（以下、ＳＤＳ−ＰＡＧＥと称す
る）にかけ、クマシー染色法によって目的とするタンパ
ク質の発現誘導を確認した。
４０００ｒｐｍ，１分間）することにより菌体を集め、
リン酸緩衝溶液（組成：１４０ｍＭ−ＮａＣｌ，２．７
ｍＭ−ＫＣｌ，１０ｍＭ−Ｎａ2 ＨＰＯ4 ，１．８ｍＭ
−ＫＨ2 ＰＯ4 ，ｐＨ７．２；以下、ＰＢＳと称する）
１００μｌで懸濁した後、２×サンプルバッファー
（０．２５Ｍ−トリス−ＨＣｌ，２％ＳＤＳ，３％グリ
セロール，１０％β−メルカプトエタノール，０．０１
％ブロモフェノールブルー；ｐＨ６．８）１００μｌに
溶解した。得られた溶液１０μｌをＳＤＳ−ポリアクリ
ルアミドゲル電気泳動（以下、ＳＤＳ−ＰＡＧＥと称す
る）にかけ、クマシー染色法によって目的とするタンパ
ク質の発現誘導を確認した。
【００７３】結果を図１５に示す。図１５において、
「＋」で示すレーンは、発現誘導剤であるＩＰＴＧを加
えて培養した大腸菌を泳動したレーンであり、「−」で
示すレーンは、発現誘導剤であるＩＰＴＧを加えずに培
養した大腸菌を泳動したレーンである。いずれのクロー
ンにおいても、「＋」で示すレーンには、「ＧＳＴ−Ａ
ＤＡＭＴＳ−１」で示す位置に、分子量約１００Ｋｄの
タンパク質が表われ、この分子量は、ＧＳＴ−ヒトＡＤ
ＡＭＴＳ−１融合タンパク質の予想される分子量（約９
６Ｋｄ）と一致した。なお、このタンパク質は、いずれ
のクローンにおいても、「−」で示すレーンには表われ
ていなかった。５種類のクローン（クローン＃１〜クロ
ーン＃５）の内、最も高い発現量を示したクローン＃２
を以下の実施例に使用した。
「＋」で示すレーンは、発現誘導剤であるＩＰＴＧを加
えて培養した大腸菌を泳動したレーンであり、「−」で
示すレーンは、発現誘導剤であるＩＰＴＧを加えずに培
養した大腸菌を泳動したレーンである。いずれのクロー
ンにおいても、「＋」で示すレーンには、「ＧＳＴ−Ａ
ＤＡＭＴＳ−１」で示す位置に、分子量約１００Ｋｄの
タンパク質が表われ、この分子量は、ＧＳＴ−ヒトＡＤ
ＡＭＴＳ−１融合タンパク質の予想される分子量（約９
６Ｋｄ）と一致した。なお、このタンパク質は、いずれ
のクローンにおいても、「−」で示すレーンには表われ
ていなかった。５種類のクローン（クローン＃１〜クロ
ーン＃５）の内、最も高い発現量を示したクローン＃２
を以下の実施例に使用した。
【００７４】（３）ＧＳＴ−ヒトＡＤＡＭＴＳ−１融合
タンパク質の抽出・精製 クローン＃２の一晩培養した培養液１ｍｌを２×ＹＴ培
養液（１００μｇ／ｍｌアンピシリン含有）１００ｍｌ
に加え、３７℃で培養した。６００ｎｍにおける吸光度
が約０．５になったところで、前記培養液に１００ｍＭ
−ＩＰＴＧ１ｍｌを加え、更に、２時間培養を続けた。
前記培養液を遠心（３０００ｒｐｍ，３０分間）するこ
とにより、大腸菌を集菌し、得られた菌体をＰＢＳ８ｍ
ｌに懸濁した。懸濁液に、０．５Ｍ−ＥＤＴＡ溶液１ｍ
ｌと２５ｍｇ／ｍｌリゾチーム溶液１ｍｌとを加えて、
氷中に３０分間静置した。更に、１１０μｌのトライト
ンＸ−１００を加えた後に、超音波破砕機（ＴＡＩＴＥ
Ｃ，越谷，日本）により氷上で菌体を破砕した。破砕液
を遠心（８０００ｒｐｍ，４℃，１０分間）し、得られ
た沈殿を１．０％トライトンＸ−１００含有ＰＢＳ３０
ｍｌに懸濁し、再び遠心（８０００ｒｐｍ，４℃，１０
分間）した。
タンパク質の抽出・精製 クローン＃２の一晩培養した培養液１ｍｌを２×ＹＴ培
養液（１００μｇ／ｍｌアンピシリン含有）１００ｍｌ
に加え、３７℃で培養した。６００ｎｍにおける吸光度
が約０．５になったところで、前記培養液に１００ｍＭ
−ＩＰＴＧ１ｍｌを加え、更に、２時間培養を続けた。
前記培養液を遠心（３０００ｒｐｍ，３０分間）するこ
とにより、大腸菌を集菌し、得られた菌体をＰＢＳ８ｍ
ｌに懸濁した。懸濁液に、０．５Ｍ−ＥＤＴＡ溶液１ｍ
ｌと２５ｍｇ／ｍｌリゾチーム溶液１ｍｌとを加えて、
氷中に３０分間静置した。更に、１１０μｌのトライト
ンＸ−１００を加えた後に、超音波破砕機（ＴＡＩＴＥ
Ｃ，越谷，日本）により氷上で菌体を破砕した。破砕液
を遠心（８０００ｒｐｍ，４℃，１０分間）し、得られ
た沈殿を１．０％トライトンＸ−１００含有ＰＢＳ３０
ｍｌに懸濁し、再び遠心（８０００ｒｐｍ，４℃，１０
分間）した。
【００７５】得られた沈殿を１０ｍＭ−ＥＤＴＡ溶液２
ｍｌに懸濁し、８Ｍ尿素及び１％メルカプトエタノール
を含有する５０ｍＭトリス−ＨＣｌバッファー（ｐＨ
８．５）５０ｍｌを加えた。充分に混合した後に、遠心
（１５０００ｒｐｍ，４℃，５分間）し、得られた上清
を１０ｍＭトリス−ＨＣｌバッファー（ｐＨ８．５）５
リットルに対して４℃で透析した。透析を行った溶液を
遠心（１５０００ｒｐｍ，４℃，５分間）し、得られた
上清を陰イオンクロマトグラフィー（Ｅｃｏｎｏ−Ｐａ
ｃ Ｈｉｇｈ Ｑ；Ｂｉｏ−Ｒａｄ Ｌａｂ．，ハーキ
ュルス，カリフォルニア州，米国）に吸着させた後に、
０．２〜０．４Ｍ塩化ナトリウム水溶液で溶出される画
分を、ＰＢＳ３リットルに対して透析し、続いて、グル
タチオンセファロース４Ｂ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉ
ｏｔｅｃｈ，ウプサラ，スウェーデン）１ｍｌに吸着さ
せた［Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，９，２
９８９−２９９８（１９８１）］。
ｍｌに懸濁し、８Ｍ尿素及び１％メルカプトエタノール
を含有する５０ｍＭトリス−ＨＣｌバッファー（ｐＨ
８．５）５０ｍｌを加えた。充分に混合した後に、遠心
（１５０００ｒｐｍ，４℃，５分間）し、得られた上清
を１０ｍＭトリス−ＨＣｌバッファー（ｐＨ８．５）５
リットルに対して４℃で透析した。透析を行った溶液を
遠心（１５０００ｒｐｍ，４℃，５分間）し、得られた
上清を陰イオンクロマトグラフィー（Ｅｃｏｎｏ−Ｐａ
ｃ Ｈｉｇｈ Ｑ；Ｂｉｏ−Ｒａｄ Ｌａｂ．，ハーキ
ュルス，カリフォルニア州，米国）に吸着させた後に、
０．２〜０．４Ｍ塩化ナトリウム水溶液で溶出される画
分を、ＰＢＳ３リットルに対して透析し、続いて、グル
タチオンセファロース４Ｂ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉ
ｏｔｅｃｈ，ウプサラ，スウェーデン）１ｍｌに吸着さ
せた［Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，９，２
９８９−２９９８（１９８１）］。
【００７６】ＰＢＳ５０ｍｌで前記グルタチオンセファ
ロース４Ｂを洗浄した後に、１０ｍＭグルタチオン溶液
８ｍｌで溶出させ［Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅ
ｓ．，９，２９８９−２９９８（１９８１）］、ＧＳＴ
検出キット（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ，ウ
プサラ，スウェーデン）にてＧＳＴ活性の高い画分をプ
ールした。得られた画分の一部をＳＤＳ−ＰＡＧＥにか
け、クマシー染色を行ったところ、図１６に示すよう
に、ＧＳＴ−ヒトＡＤＡＭＴＳ−１融合タンパク質であ
ることを、その分子量から確認した。大腸菌培養液１０
０ｍｌより目的タンパク質約１μｇを抽出・精製した。
ロース４Ｂを洗浄した後に、１０ｍＭグルタチオン溶液
８ｍｌで溶出させ［Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅ
ｓ．，９，２９８９−２９９８（１９８１）］、ＧＳＴ
検出キット（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ，ウ
プサラ，スウェーデン）にてＧＳＴ活性の高い画分をプ
ールした。得られた画分の一部をＳＤＳ−ＰＡＧＥにか
け、クマシー染色を行ったところ、図１６に示すよう
に、ＧＳＴ−ヒトＡＤＡＭＴＳ−１融合タンパク質であ
ることを、その分子量から確認した。大腸菌培養液１０
０ｍｌより目的タンパク質約１μｇを抽出・精製した。
【００７７】得られた融合タンパク質には、ＧＳＴとヒ
トＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質との間にＦａｃｔｏｒ
Ｘａ等で切断することができる部位が存在するので、前
記プロテアーゼで消化することによりヒトＡＤＡＭＴＳ
−１タンパク質を得ることができる。このヒトＡＤＡＭ
ＴＳ−１タンパク質は、例えば、抗体を作製するための
抗原として使用することができる。
トＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質との間にＦａｃｔｏｒ
Ｘａ等で切断することができる部位が存在するので、前
記プロテアーゼで消化することによりヒトＡＤＡＭＴＳ
−１タンパク質を得ることができる。このヒトＡＤＡＭ
ＴＳ−１タンパク質は、例えば、抗体を作製するための
抗原として使用することができる。
【００７８】実施例３：ＧＳＴ−ヒトＡＤＡＭＴＳ−１
融合タンパク質の造血機能に影響を与える活性の検討 ＧＳＴ−ヒトＡＤＡＭＴＳ−１融合タンパク質の造血機
能に影響を与える活性を検討するために、実施例２
（３）に記載の方法に基づいて、大腸菌培養液３リット
ルからＧＳＴ−ヒトＡＤＡＭＴＳ−１融合タンパク質の
大量調製を実施し、目的タンパク質約３０μｇを得た。
ＧＳＴ−ヒトＡＤＡＭＴＳ−１融合タンパク質の造血機
能に影響を与える活性として、マウス尾静脈単回投与に
よる血球系細胞数に与える作用を検討した。この評価系
は、少量の目的タンパク質で実施することが可能であ
り、しかも、迅速に生物活性を明らかにすることができ
る。コントロールとしてベクターｐＧＥＸ−５Ｘ−１を
導入した大腸菌から、実施例２（３）に記載の方法に基
づいて抽出・精製したＧＳＴタンパク質を用いた。
融合タンパク質の造血機能に影響を与える活性の検討 ＧＳＴ−ヒトＡＤＡＭＴＳ−１融合タンパク質の造血機
能に影響を与える活性を検討するために、実施例２
（３）に記載の方法に基づいて、大腸菌培養液３リット
ルからＧＳＴ−ヒトＡＤＡＭＴＳ−１融合タンパク質の
大量調製を実施し、目的タンパク質約３０μｇを得た。
ＧＳＴ−ヒトＡＤＡＭＴＳ−１融合タンパク質の造血機
能に影響を与える活性として、マウス尾静脈単回投与に
よる血球系細胞数に与える作用を検討した。この評価系
は、少量の目的タンパク質で実施することが可能であ
り、しかも、迅速に生物活性を明らかにすることができ
る。コントロールとしてベクターｐＧＥＸ−５Ｘ−１を
導入した大腸菌から、実施例２（３）に記載の方法に基
づいて抽出・精製したＧＳＴタンパク質を用いた。
【００７９】８匹のＣ57ＢＬ／６Ｎマウス（チャールス
リバー，横浜，日本）（雄，７週令）に、ＧＳＴ−ヒト
ＡＤＡＭＴＳ−１融合タンパク質１μｇを尾静脈より投
与し、投与してから３時間及び２４時間後に白血球、赤
血球、及び血小板の数を算出した。コントロールとし
て、８匹のＣ57ＢＬ／６Ｎマウス（チャールスリバー，
横浜，日本）（雄，７週令）に、ＧＳＴタンパク質１μ
ｇを尾静脈より投与し、同様に、投与してから３時間及
び２４時間後に白血球、赤血球、及び血小板の数を算出
した。結果を図１７に示す。図１７から明らかなよう
に、ＧＳＴ−ヒトＡＤＡＭＴＳ−１融合タンパク質を投
与したマウスでは、白血球及び血小板の数が、コントロ
ールに比べて有意に低下し、赤血球の数が、コントロー
ルに比べて有意に増加した。
リバー，横浜，日本）（雄，７週令）に、ＧＳＴ−ヒト
ＡＤＡＭＴＳ−１融合タンパク質１μｇを尾静脈より投
与し、投与してから３時間及び２４時間後に白血球、赤
血球、及び血小板の数を算出した。コントロールとし
て、８匹のＣ57ＢＬ／６Ｎマウス（チャールスリバー，
横浜，日本）（雄，７週令）に、ＧＳＴタンパク質１μ
ｇを尾静脈より投与し、同様に、投与してから３時間及
び２４時間後に白血球、赤血球、及び血小板の数を算出
した。結果を図１７に示す。図１７から明らかなよう
に、ＧＳＴ−ヒトＡＤＡＭＴＳ−１融合タンパク質を投
与したマウスでは、白血球及び血小板の数が、コントロ
ールに比べて有意に低下し、赤血球の数が、コントロー
ルに比べて有意に増加した。
【００８０】
【発明の効果】本発明によるタンパク質によれば、造血
機能を調節することができ、例えば、白血球及び血小板
の数を低下させ、同時に、赤血球の数を増加させること
ができる。
機能を調節することができ、例えば、白血球及び血小板
の数を低下させ、同時に、赤血球の数を増加させること
ができる。
【００８１】
【００８２】配列番号 ： １ 配列の長さ： ７２７ 配列の型 ： アミノ酸 配列 Met Asp Ile Cys Arg Ile Arg Leu Arg Lys Lys Arg Phe Val Ser Ser 5 10 15 Pro Arg Tyr Val Glu Thr Met Leu Val Ala Asp Gln Ser Met Ala Glu 20 25 30 Phe His Gly Ser Gly Leu Lys His Tyr Leu Leu Thr Leu Phe Ser Val 35 40 45 Ala Ala Arg Leu Tyr Lys His Pro Ser Ile Arg Asn Ser Val Ser Leu 50 55 60 Val Val Val Lys Ile Leu Val Ile His Asp Glu Gln Lys Gly Pro Glu 65 70 75 80 Val Thr Ser Asn Ala Ala Leu Thr Leu Arg Asn Phe Cys Asn Trp Gln 85 90 95 Lys Gln His Asn Pro Pro Ser Asp Arg Asp Ala Glu His Tyr Asp Thr 100 105 110 Ala Ile Leu Phe Thr Arg Gln Asp Leu Cys Gly Ser Gln Thr Cys Asp 115 120 125 Thr Leu Gly Met Ala Asp Val Gly Thr Val Cys Asp Pro Ser Arg Ser 130 135 140 Cys Ser Val Ile Glu Asp Asp Gly Leu Gln Ala Ala Phe Thr Thr Ala 145 150 155 160 His Glu Leu Gly His Val Phe Asn Met Pro His Asp Asp Ala Lys Gln 165 170 175 Cys Ala Ser Leu Asn Gly Val Asn Gln Asp Ser His Met Met Ala Ser 180 185 190 Met Leu Ser Asn Leu Asp His Ser Gln Pro Trp Ser Pro Cys Ser Ala 195 200 205 Tyr Met Ile Thr Ser Phe Leu Asp Asn Gly His Gly Glu Cys Leu Met 210 215 220 Asp Lys Pro Gln Asn Pro Ile Gln Leu Pro Gly Asp Leu Pro Gly Thr 225 230 235 240 Leu Tyr Asp Ala Asn Arg Gln Cys Gln Phe Thr Phe Gly Glu Asp Ser 245 250 255 Lys His Cys Pro Asp Ala Ala Ser Thr Cys Ser Thr Leu Trp Cys Thr 260 265 270 Gly Thr Ser Gly Gly Val Leu Val Cys Gln Thr Lys His Phe Pro Trp 275 280 275 Ala Asp Gly Thr Ser Cys Gly Glu Gly Lys Trp Cys Ile Asn Gly Lys 290 295 300 Cys Val Asn Lys Thr Asp Arg Lys His Phe Asp Thr Pro Phe His Gly 305 310 315 320 Ser Trp Gly Pro Trp Gly Pro Trp Gly Asp Cys Ser Arg Thr Cys Gly 325 330 335 Gly Gly Val Gln Tyr Thr Met Arg Glu Cys Asp Asn Pro Val Pro Lys 340 345 350 Asn Gly Gly Lys Tyr Cys Glu Gly Lys Arg Val Arg Tyr Arg Ser Cys 355 360 365 Asn Leu Glu Asp Cys Pro Asp Asn Asn Gly Lys Thr Phe Arg Glu Glu 370 375 380 Gln Cys Glu Ala His Asn Glu Phe Ser Lys Ala Ser Phe Gly Ser Gly 385 390 395 400 Pro Ala Val Glu Trp Ile Pro Lys Tyr Ala Gly Val Ser Pro Lys Asp 405 410 415 Arg Cys Lys Leu Ile Cys Gln Ala Lys Gly Ile Gly Tyr Phe Phe Val 420 425 430 Leu Gln Pro Lys Val Val Asp Gly Thr Pro Cys Ser Pro Asp Ser Thr 435 440 445 Ser Val Cys Val Gln Gly Gln Cys Val Lys Ala Gly Cys Asp Arg Ile 450 455 460 Ile Asp Ser Lys Lys Lys Phe Asp Lys Cys Gly Val Cys Gly Gly Asn 465 470 475 480 Gly Ser Thr Cys Lys Lys Ile Ser Gly Ser Val Thr Ser Ala Lys Pro 485 490 495 Gly Tyr His Asp Ile Val Thr Ile Pro Thr Gly Ala Thr Asn Ile Glu 500 505 510 Val Lys Gln Arg Asn Gln Arg Gly Ser Arg Asn Asn Gly Ser Phe Leu 515 520 525 Ala Ile Lys Ala Ala Asp Gly Thr Tyr Ile Leu Asn Gly Asp Tyr Thr 530 535 540 Leu Ser Thr Leu Glu Gln Asp Ile Met Tyr Lys Gly Val Val Leu Arg 545 550 555 560 Tyr Ser Gly Ser Ser Ala Ala Leu Glu Arg Ile Arg Ser Phe Ser Pro 565 570 575 Leu Lys Glu Pro Leu Thr Ile Gln Val Leu Thr Val Gly Asn Ala Leu 580 585 590 Arg Pro Lys Ile Lys Tyr Thr Tyr Phe Val Lys Lys Lys Lys Glu Ser 595 600 605 Phe Asn Ala Ile Pro Thr Phe Ser Ala Trp Val Ile Glu Glu Trp Gly 610 615 620 Glu Cys Ser Lys Ser Cys Glu Leu Gly Trp Gln Arg Arg Leu Val Glu 625 630 635 640 Cys Arg Asp Ile Asn Gly Gln Pro Ala Ser Glu Cys Ala Lys Glu Val 645 650 655 Lys Pro Ala Ser Thr Arg Pro Cys Ala Asp His Pro Cys Pro Gln Trp 660 665 670 Gln Leu Gly Glu Trp Ser Ser Cys Ser Lys Thr Cys Gly Lys Gly Tyr 675 680 685 Lys Lys Arg Ser Leu Lys Cys Leu Ser His Asp Gly Gly Val Leu Ser 690 695 700 His Glu Ser Cys Asp Pro Leu Lys Lys Pro Lys His Phe Ile Asp Phe 705 710 715 720 Cys Thr Leu Thr Gln Cys Ser 725
【００８３】配列番号 ： ２ 配列の長さ： ２１８４ 配列の型 ： 核酸 配列 ATG GAT ATC TGC AGA ATT CGG CTT AGG AAG AAG CGA TTT GTG TCC AGC 48 Met Asp Ile Cys Arg Ile Arg Leu Arg Lys Lys Arg Phe Val Ser Ser 5 10 15 CCC CGT TAT GTG GAA ACC ATG CTT GTG GCA GAC CAG TCG ATG GCA GAA 96 Pro Arg Tyr Val Glu Thr Met Leu Val Ala Asp Gln Ser Met Ala Glu 20 25 30 TTC CAC GGC AGT GGT CTA AAG CAT TAC CTT CTC ACG TTG TTT TCG GTG 144 Phe His Gly Ser Gly Leu Lys His Tyr Leu Leu Thr Leu Phe Ser Val 35 40 45 GCA GCC AGA TTG TAC AAA CAC CCC AGC ATT CGT AAT TCA GTT AGC CTG 192 Ala Ala Arg Leu Tyr Lys His Pro Ser Ile Arg Asn Ser Val Ser Leu 50 55 60 GTG GTG GTG AAG ATC TTG GTC ATC CAC GAT GAA CAG AAG GGG CCG GAA 240 Val Val Val Lys Ile Leu Val Ile His Asp Glu Gln Lys Gly Pro Glu 65 70 75 80 GTG ACC TCC AAT GCT GCC CTC ACT CTG CGG AAC TTT TGC AAC TGG CAG 288 Val Thr Ser Asn Ala Ala Leu Thr Leu Arg Asn Phe Cys Asn Trp Gln 85 90 95 AAG CAG CAC AAC CCA CCC AGT GAC CGG GAT GCA GAG CAC TAT GAC ACA 336 Lys Gln His Asn Pro Pro Ser Asp Arg Asp Ala Glu His Tyr Asp Thr 100 105 110 GCA ATT CTT TTC ACC AGA CAG GAC TTG TGT GGG TCC CAG ACA TGT GAT 384 Ala Ile Leu Phe Thr Arg Gln Asp Leu Cys Gly Ser Gln Thr Cys Asp 115 120 125 ACT CTT GGG ATG GCT GAT GTT GGA ACT GTG TGT GAT CCG AGC AGA AGC 432 Thr Leu Gly Met Ala Asp Val Gly Thr Val Cys Asp Pro Ser Arg Ser 130 135 140 TGC TCC GTC ATA GAA GAT GAT GGT TTA CAA GCT GCC TTC ACC ACA GCC 480 Cys Ser Val Ile Glu Asp Asp Gly Leu Gln Ala Ala Phe Thr Thr Ala 145 150 155 160 CAT GAA TTA GGC CAC GTG TTT AAC ATG CCA CAT GAT GAT GCA AAG CAG 528 His Glu Leu Gly His Val Phe Asn Met Pro His Asp Asp Ala Lys Gln 165 170 175 TGT GCC AGC CTT AAT GGT GTG AAC CAG GAT TCC CAC ATG ATG GCG TCA 576 Cys Ala Ser Leu Asn Gly Val Asn Gln Asp Ser His Met Met Ala Ser 180 185 190 ATG CTT TCC AAC CTG GAC CAC AGC CAG CCT TGG TCT CCT TGC AGT GCC 624 Met Leu Ser Asn Leu Asp His Ser Gln Pro Trp Ser Pro Cys Ser Ala 195 200 205 TAC ATG ATT ACA TCA TTT CTG GAT AAT GGT CAT GGG GAA TGT TTG ATG 672 Tyr Met Ile Thr Ser Phe Leu Asp Asn Gly His Gly Glu Cys Leu Met 210 215 220 GAC AAG CCT CAG AAT CCC ATA CAG CTC CCA GGC GAT CTC CCT GGC ACC 720 Asp Lys Pro Gln Asn Pro Ile Gln Leu Pro Gly Asp Leu Pro Gly Thr 225 230 235 240 TTG TAC GAT GCC AAC CGG CAG TGC CAG TTT ACA TTT GGG GAG GAC TCC 768 Leu Tyr Asp Ala Asn Arg Gln Cys Gln Phe Thr Phe Gly Glu Asp Ser 245 250 255 AAA CAC TGC CCC GAT GCA GCC AGC ACA TGT AGC ACC TTG TGG TGT ACC 816 Lys His Cys Pro Asp Ala Ala Ser Thr Cys Ser Thr Leu Trp Cys Thr 260 265 270 GGC ACC TCT GGT GGG GTG CTG GTG TGT CAA ACC AAA CAC TTC CCG TGG 864 Gly Thr Ser Gly Gly Val Leu Val Cys Gln Thr Lys His Phe Pro Trp 275 280 275 GCG GAT GGC ACC AGC TGT GGA GAA GGG AAA TGG TGT ATC AAC GGC AAG 912 Ala Asp Gly Thr Ser Cys Gly Glu Gly Lys Trp Cys Ile Asn Gly Lys 290 295 300 TGT GTG AAC AAA ACC GAC AGG AAG CAT TTT GAT ACG CCT TTT CAT GGA 960 Cys Val Asn Lys Thr Asp Arg Lys His Phe Asp Thr Pro Phe His Gly 305 310 315 320 AGC TGG GGA CCA TGG GGA CCG TGG GGA GAC TGT TCG AGA ACG TGC GGT 1008 Ser Trp Gly Pro Trp Gly Pro Trp Gly Asp Cys Ser Arg Thr Cys Gly 325 330 335 GGA GGA GTC CAG TAC ACG ATG AGG GAA TGT GAC AAC CCA GTC CCA AAG 1056 Gly Gly Val Gln Tyr Thr Met Arg Glu Cys Asp Asn Pro Val Pro Lys 340 345 350 AAT GGA GGG AAG TAC TGT GAA GGC AAA CGA GTG CGC TAC AGA TCC TGT 1104 Asn Gly Gly Lys Tyr Cys Glu Gly Lys Arg Val Arg Tyr Arg Ser Cys 355 360 365 AAC CTT GAG GAC TGT CCA GAC AAT AAT GGA AAA ACC TTT AGA GAG GAA 1152 Asn Leu Glu Asp Cys Pro Asp Asn Asn Gly Lys Thr Phe Arg Glu Glu 370 375 380 CAA TGT GAA GCA CAC AAC GAG TTT TCA AAA GCT TCC TTT GGG AGT GGG 1200 Gln Cys Glu Ala His Asn Glu Phe Ser Lys Ala Ser Phe Gly Ser Gly 385 390 395 400 CCT GCG GTG GAA TGG ATT CCC AAG TAC GCT GGC GTC TCA CCA AAG GAC 1248 Pro Ala Val Glu Trp Ile Pro Lys Tyr Ala Gly Val Ser Pro Lys Asp 405 410 415 AGG TGC AAG CTC ATC TGC CAA GCC AAA GGC ATT GGC TAC TTC TTC GTT 1296 Arg Cys Lys Leu Ile Cys Gln Ala Lys Gly Ile Gly Tyr Phe Phe Val 420 425 430 TTG CAG CCC AAG GTT GTT GAT GGT ACT CCA TGT AGC CCA GAT TCC ACC 1344 Leu Gln Pro Lys Val Val Asp Gly Thr Pro Cys Ser Pro Asp Ser Thr 435 440 445 TCT GTC TGT GTG CAA GGA CAG TGT GTA AAA GCT GGT TGT GAT CGC ATC 1392 Ser Val Cys Val Gln Gly Gln Cys Val Lys Ala Gly Cys Asp Arg Ile 450 455 460 ATA GAC TCC AAA AAG AAG TTT GAT AAA TGT GGT GTT TGC GGG GGA AAT 1440 Ile Asp Ser Lys Lys Lys Phe Asp Lys Cys Gly Val Cys Gly Gly Asn 465 470 475 480 GGA TCT ACT TGT AAA AAA ATA TCA GGA TCA GTT ACT AGT GCA AAA CCT 1488 Gly Ser Thr Cys Lys Lys Ile Ser Gly Ser Val Thr Ser Ala Lys Pro 485 490 495 GGA TAT CAT GAT ATC GTC ACA ATT CCA ACT GGA GCC ACC AAC ATC GAA 1536 Gly Tyr His Asp Ile Val Thr Ile Pro Thr Gly Ala Thr Asn Ile Glu 500 505 510 GTG AAA CAG CGG AAC CAG AGG GGA TCC AGG AAC AAT GGC AGC TTT CTT 1584 Val Lys Gln Arg Asn Gln Arg Gly Ser Arg Asn Asn Gly Ser Phe Leu 515 520 525 GCC ATC AAA GCT GCT GAT GGC ACA TAT ATT CTT AAT GGT GAC TAC ACT 1632 Ala Ile Lys Ala Ala Asp Gly Thr Tyr Ile Leu Asn Gly Asp Tyr Thr 530 535 540 TTG TCC ACC TTA GAG CAA GAC ATT ATG TAC AAA GGT GTT GTC TTG AGG 1680 Leu Ser Thr Leu Glu Gln Asp Ile Met Tyr Lys Gly Val Val Leu Arg 545 550 555 560 TAC AGC GGC TCC TCT GCG GCA TTG GAA AGA ATT CGC AGC TTT AGC CCT 1728 Tyr Ser Gly Ser Ser Ala Ala Leu Glu Arg Ile Arg Ser Phe Ser Pro 565 570 575 CTC AAA GAG CCC TTG ACC ATC CAG GTT CTT ACT GTG GGC AAT GCC CTT 1776 Leu Lys Glu Pro Leu Thr Ile Gln Val Leu Thr Val Gly Asn Ala Leu 580 585 590 CGA CCT AAA ATT AAA TAC ACC TAC TTC GTA AAG AAG AAG AAG GAA TCT 1824 Arg Pro Lys Ile Lys Tyr Thr Tyr Phe Val Lys Lys Lys Lys Glu Ser 595 600 605 TTC AAT GCT ATC CCC ACT TTT TCA GCA TGG GTC ATT GAA GAG TGG GGC 1872 Phe Asn Ala Ile Pro Thr Phe Ser Ala Trp Val Ile Glu Glu Trp Gly 610 615 620 GAA TGT TCT AAG TCA TGT GAA TTG GGT TGG CAG AGA AGA CTG GTA GAA 1920 Glu Cys Ser Lys Ser Cys Glu Leu Gly Trp Gln Arg Arg Leu Val Glu 625 630 635 640 TGC CGA GAC ATT AAT GGA CAG CCT GCT TCC GAG TGT GCA AAG GAA GTG 1968 Cys Arg Asp Ile Asn Gly Gln Pro Ala Ser Glu Cys Ala Lys Glu Val 645 650 655 AAG CCA GCC AGC ACC AGA CCT TGT GCA GAC CAT CCC TGC CCC CAG TGG 2016 Lys Pro Ala Ser Thr Arg Pro Cys Ala Asp His Pro Cys Pro Gln Trp 660 665 670 CAG CTG GGG GAG TGG TCA TCA TGT TCT AAG ACC TGT GGG AAG GGT TAC 2064 Gln Leu Gly Glu Trp Ser Ser Cys Ser Lys Thr Cys Gly Lys Gly Tyr 675 680 685 AAA AAA AGA AGC TTG AAG TGT CTG TCC CAT GAT GGA GGG GTG TTA TCT 2112 Lys Lys Arg Ser Leu Lys Cys Leu Ser His Asp Gly Gly Val Leu Ser 690 695 700 CAT GAG AGC TGT GAT CCT TTA AAG AAA CCT AAA CAT TTC ATA GAC TTT 2160 His Glu Ser Cys Asp Pro Leu Lys Lys Pro Lys His Phe Ile Asp Phe 705 710 715 720 TGC ACA CTG ACA CAG TGC AGT TAA 2184 Cys Thr Leu Thr Gln Cys Ser 725
【００８４】配列番号 ： ３ 配列の長さ： １０ 配列の型 ： アミノ酸 配列 Arg Thr Cys Gly Gly Gly Val Gln Tyr Thr 5 10
【００８５】配列番号 ： ４ 配列の長さ： ３０ 配列の型 ： 核酸 配列 AGAACCTGTG GTGGTGGAGT TCAATACACA 30
【００８６】配列番号 ： ５ 配列の長さ： ３２ 配列の型 ： 核酸 配列 CCTCTTAACT GCACTGTGTC AGTGTGCAAA AG 32
【００８７】配列番号 ： ６ 配列の長さ： ２３ 配列の型 ： 核酸 配列 CCTCTTAACT GCACTGTGTC AGT 23
【００８８】配列番号 ： ７ 配列の長さ： ２４ 配列の型 ： 核酸 配列 CAGGCCCACT CCCAAAGGAA GCTT 24
【００８９】配列番号 ： ８ 配列の長さ： ２７ 配列の型 ： 核酸 配列 CCATCCTAAT ACGACTCACT ATAGGGC 27
【００９０】配列番号 ： ９ 配列の長さ： ２３ 配列の型 ： 核酸 配列 ACTCACTATA GGGCTCGAGC GGC 23
【００９１】配列番号 ： １０ 配列の長さ： ４３ 配列の型 ： 核酸 配列 CACCCCGGGA GGAAGAAGCG ATTTGTGTCC AGCCCCCGTT ATG 43
【００９２】配列番号 ： １１ 配列の長さ： ４２ 配列の型 ： 核酸 配列 GTGGCGGCCG CCCTCTTAAC TGCACTGTGT CAGTGTGCAA AA 42
【図１】ＰＣＲ法により得られたＦｌａｇ．１ＤＮＡ断
片の電気泳動の結果を示す図面に代わる写真である。
片の電気泳動の結果を示す図面に代わる写真である。
【図２】マウスＡＤＡＭＴＳ−１遺伝子とＦｌａｇ．１
ＤＮＡ断片との相同性を示す説明図である。
ＤＮＡ断片との相同性を示す説明図である。
【図３】Ｆｌａｇ．１ＤＮＡ断片のドットハイブリダイ
ゼーションの結果を示す説明図である。
ゼーションの結果を示す説明図である。
【図４】ＲＡＣＥ法により得られたＦｌａｇ．２ＤＮＡ
断片の電気泳動の結果を示す図面に代わる写真である。
断片の電気泳動の結果を示す図面に代わる写真である。
【図５】本発明のヒトＡＤＡＭＴＳ−１遺伝子とマウス
ＡＤＡＭＴＳ−１遺伝子とのホモロジー（第１番目〜第
４８０番目の塩基配列）を示す説明図である。
ＡＤＡＭＴＳ−１遺伝子とのホモロジー（第１番目〜第
４８０番目の塩基配列）を示す説明図である。
【図６】本発明のヒトＡＤＡＭＴＳ−１遺伝子とマウス
ＡＤＡＭＴＳ−１遺伝子とのホモロジー（第４８１番目
〜第９６０番目の塩基配列）を示す説明図である。
ＡＤＡＭＴＳ−１遺伝子とのホモロジー（第４８１番目
〜第９６０番目の塩基配列）を示す説明図である。
【図７】本発明のヒトＡＤＡＭＴＳ−１遺伝子とマウス
ＡＤＡＭＴＳ−１遺伝子とのホモロジー（第９６１番目
〜第１４４０番目の塩基配列）を示す説明図である。
ＡＤＡＭＴＳ−１遺伝子とのホモロジー（第９６１番目
〜第１４４０番目の塩基配列）を示す説明図である。
【図８】本発明のヒトＡＤＡＭＴＳ−１遺伝子とマウス
ＡＤＡＭＴＳ−１遺伝子とのホモロジー（第１４４１番
目〜第１９２０番目の塩基配列）を示す説明図である。
ＡＤＡＭＴＳ−１遺伝子とのホモロジー（第１４４１番
目〜第１９２０番目の塩基配列）を示す説明図である。
【図９】本発明のヒトＡＤＡＭＴＳ−１遺伝子とマウス
ＡＤＡＭＴＳ−１遺伝子とのホモロジー（第１９２１番
目〜第２１８４番目の塩基配列）を示す説明図である。
ＡＤＡＭＴＳ−１遺伝子とのホモロジー（第１９２１番
目〜第２１８４番目の塩基配列）を示す説明図である。
【図１０】本発明のヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質と
マウスＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質とのホモロジー（第
１番目〜第２４０番目のアミノ酸配列）を示す説明図で
ある。
マウスＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質とのホモロジー（第
１番目〜第２４０番目のアミノ酸配列）を示す説明図で
ある。
【図１１】本発明のヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質と
マウスＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質とのホモロジー（第
２４１番目〜第５１０番目のアミノ酸配列）を示す説明
図である。
マウスＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質とのホモロジー（第
２４１番目〜第５１０番目のアミノ酸配列）を示す説明
図である。
【図１２】本発明のヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質と
マウスＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質とのホモロジー（第
５１１番目〜第７２７番目のアミノ酸配列）を示す説明
図である。
マウスＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質とのホモロジー（第
５１１番目〜第７２７番目のアミノ酸配列）を示す説明
図である。
【図１３】ＰＣＲ法により得られた本発明によるヒトＡ
ＤＡＭＴＳ−１遺伝子の完全長のｃＤＮＡの電気泳動の
結果を示す図面に代わる写真である。
ＤＡＭＴＳ−１遺伝子の完全長のｃＤＮＡの電気泳動の
結果を示す図面に代わる写真である。
【図１４】本発明のプラスミドｐＧ／ＡＤＡＭＴＳ−１
の構造を模式的に示す説明図である。
の構造を模式的に示す説明図である。
【図１５】プラスミドｐＧ／ＡＤＡＭＴＳ−１により形
質転換された形質転換体の電気泳動の結果を示す図面に
代わる写真である。
質転換された形質転換体の電気泳動の結果を示す図面に
代わる写真である。
【図１６】ＧＳＴ−ヒトＡＤＡＭＴＳ−１融合タンパク
質の電気泳動の結果を示す図面に代わる写真である。
質の電気泳動の結果を示す図面に代わる写真である。
【図１７】ＧＳＴ−ヒトＡＤＡＭＴＳ−１融合タンパク
質のマウス静脈単回投与による血球細胞数に与える作用
を示すグラフである。
質のマウス静脈単回投与による血球細胞数に与える作用
を示すグラフである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ Ｃ０７Ｋ 16/32 Ｃ１２Ｐ 21/00 ＺＮＡＣ Ｃ１２Ｎ 1/21 21/08 Ｃ１２Ｐ 21/00 ＺＮＡ Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ 21/08 Ｇ０１Ｎ 33/50 ＺＮＡＰ Ｃ１２Ｑ 1/68 33/53 Ｄ Ｇ０１Ｎ 33/50 ＺＮＡ Ｇ０１Ｎ 33/574 Ａ 33/53 Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＢＹ // Ｇ０１Ｎ 33/574 ＡＧＺ (Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡ Ｃ１２Ｒ 1:91） (Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｒ 1:19） (72)発明者 石田 裕香子 東京都狛江市西野川４丁目６番１号 京王 柴崎コーポラス508号 (72)発明者 松島 綱治 千葉県松戸市松戸159−１ 松戸第３住宅 ２−905 (72)発明者 久野 耕嗣 石川県金沢市笠舞１丁目１の17 白翠荘
Claims (17)
- 【請求項１】 配列表の配列番号１の配列で表わされる
アミノ酸配列を含むことを特徴とするタンパク質。 - 【請求項２】 配列表の配列番号１の配列で表わされる
アミノ酸配列において、１ないし数個のアミノ酸が欠
失、置換、又は付加されたアミノ酸配列を含み、かつヒ
トＡＤＡＭＴＳ−１活性を有することを特徴とするタン
パク質。 - 【請求項３】 請求項１又は２に記載のタンパク質をコ
ードすることを特徴とする遺伝子。 - 【請求項４】 配列表の配列番号２の配列で表わされる
塩基配列を含む、請求項３に記載の遺伝子。 - 【請求項５】 請求項３又は４に記載の遺伝子を含むこ
とを特徴とするベクター。 - 【請求項６】 請求項５に記載のベクターにより形質転
換されたことを特徴とする形質転換体。 - 【請求項７】 請求項１又は２に記載のタンパク質を含
むことを特徴とする医薬組成物。 - 【請求項８】 白血球減少剤である、請求項７に記載の
医薬組成物。 - 【請求項９】 血小板減少剤である、請求項７に記載の
医薬組成物。 - 【請求項１０】 赤血球増加剤である、請求項７に記載
の医薬組成物。 - 【請求項１１】 請求項１又は２に記載のタンパク質と
特異的に反応することを特徴とする免疫反応性物質。 - 【請求項１２】 配列表の配列番号１の配列で表わされ
るアミノ酸配列からなるヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク
質と免疫学的に反応することのできる免疫反応性物質
と、被検試料とを接触させ、ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タン
パク質と前記免疫反応性物質との結合体を検出すること
を特徴とする、前記ヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク質の
免疫学的分析方法。 - 【請求項１３】 被検試料における、配列表の配列番号
１の配列で表わされるアミノ酸配列からなるヒトＡＤＡ
ＭＴＳ−１タンパク質を分析することを特徴とする、免
疫状態の体外検出方法。 - 【請求項１４】 配列表の配列番号１の配列で表わされ
るアミノ酸配列からなるヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク
質のｍＲＮＡの塩基配列に相補的な塩基配列を含むポリ
ヌクレオチドと、被検試料とを接触させ、ヒトＡＤＡＭ
ＴＳ−１タンパク質のｍＲＮＡと前記遺伝子との結合体
を検出することを特徴とする、前記ヒトＡＤＡＭＴＳ−
１タンパク質のｍＲＮＡの分析方法。 - 【請求項１５】 被検試料における、配列表の配列番号
１の配列で表わされるアミノ酸配列からなるヒトＡＤＡ
ＭＴＳ−１タンパク質のｍＲＮＡを分析することを特徴
とする、免疫状態の体外検出方法。 - 【請求項１６】 配列表の配列番号１の配列で表わされ
るアミノ酸配列からなるヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク
質と免疫学的に反応することのできる免疫反応性物質を
含有することを特徴とする、免疫状態の分析試薬。 - 【請求項１７】 配列表の配列番号１の配列で表わされ
るアミノ酸配列からなるヒトＡＤＡＭＴＳ−１タンパク
質のｍＲＮＡの塩基配列に相補的な塩基配列を含むポリ
ヌクレオチドを含有することを特徴とする、免疫状態の
分析試薬。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP16915898A JP3741867B2 (ja) | 1997-06-03 | 1998-06-03 | ヒトａｄａｍｔｓ−１タンパク質、それをコードする遺伝子、医薬組成物、及びヒトａｄａｍｔｓ−１タンパク質の免疫学的分析方法 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9-160422 | 1997-06-03 | ||
| JP16042297 | 1997-06-03 | ||
| JP16915898A JP3741867B2 (ja) | 1997-06-03 | 1998-06-03 | ヒトａｄａｍｔｓ−１タンパク質、それをコードする遺伝子、医薬組成物、及びヒトａｄａｍｔｓ−１タンパク質の免疫学的分析方法 |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2003431333A Division JP2004222722A (ja) | 1997-06-03 | 2003-12-25 | ヒトａｄａｍｔｓ−１タンパク質、それをコードする遺伝子、医薬組成物、及びヒトａｄａｍｔｓ−１タンパク質の免疫学的分析方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH1146781A true JPH1146781A (ja) | 1999-02-23 |
| JP3741867B2 JP3741867B2 (ja) | 2006-02-01 |
Family
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Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP16915898A Expired - Fee Related JP3741867B2 (ja) | 1997-06-03 | 1998-06-03 | ヒトａｄａｍｔｓ−１タンパク質、それをコードする遺伝子、医薬組成物、及びヒトａｄａｍｔｓ−１タンパク質の免疫学的分析方法 |
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|---|---|
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Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2003509478A (ja) * | 1999-09-21 | 2003-03-11 | エモリー・ユニバーシティ | 血小板関連障害を処置する方法および組成物 |
| JP2014011997A (ja) * | 2013-07-16 | 2014-01-23 | Univ Of Tokyo | 骨粗鬆症感受性遺伝子、及び骨粗鬆症罹患リスクの測定方法 |
| JP5651890B2 (ja) * | 2008-11-11 | 2015-01-14 | 国立大学法人 岡山大学 | 再灌流療法の治療効果を判定するキット |
-
1998
- 1998-06-03 JP JP16915898A patent/JP3741867B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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