JPH11139984A - 抗腫瘍剤、抗肥満剤、及び悪疫質の検出方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 抗腫瘍剤、抗肥満剤、及び悪疫質の検出方法
を提供する。 【解決手段】 前記抗腫瘍作用増強剤又は抗肥満剤は、
有効成分として、ストローマ由来因子−１；前記ストロ
ーマ由来因子−１のアミノ酸配列において１若しくは数
個のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されたアミノ
酸配列を有し、かつ抗腫瘍活性を有するストローマ由来
因子−１誘導体；前記ストローマ由来因子−１の断片で
あって、かつ抗腫瘍活性を有する前記断片；又は前記ス
トローマ由来因子−１誘導体の断片であって、かつ抗腫
瘍活性を有する前記断片を有効成分として含有する。検
出方法は、前記ストローマ由来因子−１若しくはその誘
導体又はそれらの断片のタンパク質自体又はｍＲＮＡを
悪疫質マーカーとして利用する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、抗腫瘍剤、抗肥満
剤、及び悪疫質の検出方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】ストローマ由来因子−１（Ｓｔｒｏｍａ
ｌ Ｄｅｒｉｖｅｄ Ｆａｃｔｏｒ−１；以下、ＳＤＦ
−１と称する）は、ケモカインファミリーに属するタン
パク質である。ケモカインファミリーは約３０のメンバ
ーからなり、炎症局所へ白血球を誘導する走化性因子と
考えられている。ケモカインは、構造的に４つのシステ
イン残基の位置が保存された分子量約１０ｋｄのサイト
カインファミリーに命名された名称であり、前記の４つ
のシステインの内、Ｎ末端側の２つのシステインの間に
アミノ酸が１つ入るＣＸＣケモカインと、アミノ酸が入
らない（すなわち、システインが連続する）ＣＣケモカ
インとの２つのサブファミリーからなる。ＳＤＦ−１
は、ＣＸＣケモカインサブファミリーのメンバーであ
る。

【０００３】マウスＳＤＦ−１遺伝子の塩基配列及び推
定されるアミノ酸配列がＳｃｉｅｎｃｅ，２６１，６０
０−６０３（１９９３）に開示されており、その後、こ
のタンパク質は、同様にマウスストローマ細胞から見出
されたプレＢ細胞増殖刺激因子（ｐｒｅ−Ｂ−ｃｅｌｌ
ｇｒｏｗｔｈ−ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｆａｃｔｏ
ｒ；ＰＢＳＦ）［Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．ＵＳＡ，９１，２３０５−２３０９（１９９４）］
と同一のタンパク質であることが明らかになった。マウ
スＳＤＦ−１は、ケモカインファミリーに属するタンパ
ク質の中で、炎症以外の生理機能（器官形成や造血）に
必須であることが最初に示されたタンパク質である［臨
床免疫，２９，６９０−６９６（１９９７）］。

【０００４】一方、ヒトＳＤＦ−１（α及びβの２種
類）遺伝子の塩基配列及び推定されるアミノ酸配列は、
特開平７−１８８２９４号公報に開示されている。この
特開平７−１８８２９４号公報の開示によれば、ヒトＳ
ＤＦ−１は、プロＢ細胞株が生産、分泌するものである
ので、造血幹細胞の生存、増殖、およびＢ細胞系やミエ
ロイド細胞系の増殖、分化に関連した生物活性を有して
いると予想され、従って、ヒトＳＤＦ−１は、造血系細
胞の発育不全、異常増殖、神経系機能の亢進や低下、免
疫機能の亢進や低下に関する疾患の予防または治療に用
いることができるとされている。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】しかしながら、前記公
報には、ヒトＳＤＦ−１α及びヒトＳＤＦ−１βを動物
細胞（ＣＯＳ細胞）で発現させ、その培養上清及び精製
品をＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動で解析した
ところ、その分子量に対応する生成物が検出されたとの
記載があるのみであり、ヒトＳＤＦ−１の活性について
は全く確認されておらず、従って、ヒトＳＤＦ−１が実
際に前記疾病の予防又は治療に有効であるか否かを判断
することのできるデータは一切記載されていない。そも
そも、マウスＳＤＦ−１においても、その活性は、前記
のとおり、炎症局所へ白血球を誘導する走化性促進作用
の他に、器官形成や造血などに必須のタンパク質である
ことが判明しているのみであり、ヒトＳＤＦ−１につい
ては、それらの活性でさえも全く検出されていない。

【０００６】なお、前記公報の記載によれば、ヒトＳＤ
Ｆ−１は、前記のとおり、造血幹細胞の生存、増殖、お
よびＢ細胞系やミエロイド細胞系の増殖、分化に関連し
た生物活性を有しているので、造血系細胞の発育不全、
異常増殖、神経系機能の亢進や低下、免疫機能の亢進や
低下に関する疾患に有効であるとされており、その疾患
の１つに癌が例示されている。しかしながら、前記生物
活性と抗癌活性とは無関係であり、ヒトＳＤＦ−１が、
仮に前記生物活性を有しているとしても、ヒトＳＤＦ−
１が抗癌剤として有効であるものと考える根拠は全くな
い。本発明者は、驚くべきことに、ザルコーマ細胞を移
植したマウスにおいて、ヒトＳＤＦ−１が抗腫瘍作用を
示すことを見出した。また、ザルコーマ細胞を移植し、
ヒトＳＤＦ−１を投与した前記マウスにおいて、血清中
のアルブミン量の低下を伴った悪疫質に由来すると思わ
れる著しい体重減少も観察された。本発明はこうした知
見に基づくものである。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明は、ストローマ由
来因子−１（ＳＤＦ−１）；前記ストローマ由来因子−
１のアミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸が
欠失、置換、若しくは付加されたアミノ酸配列を有し、
かつ抗腫瘍活性を有するストローマ由来因子−１誘導体
（以下、ＳＤＦ−１誘導体と称する）；前記ストローマ
由来因子−１の断片であって、かつ抗腫瘍活性を有する
前記断片（以下、ＳＤＦ−１断片と称する）；又は前記
ストローマ由来因子−１誘導体の断片であって、かつ抗
腫瘍活性を有する前記断片（以下、ＳＤＦ−１誘導体断
片と称する）を有効成分として含有することを特徴とす
る、抗腫瘍剤に関する。

【０００８】また、本発明は、ストローマ由来因子−１
（ＳＤＦ−１）；前記ストローマ由来因子−１のアミノ
酸配列において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置
換、若しくは付加されたアミノ酸配列を有し、かつ体重
減少活性を有するストローマ由来因子−１誘導体（ＳＤ
Ｆ−１誘導体）；前記ストローマ由来因子−１の断片で
あって、かつ体重減少活性を有する前記断片（ＳＤＦ−
１断片）；又は前記ストローマ由来因子−１誘導体の断
片であって、かつ体重減少活性を有する前記断片（ＳＤ
Ｆ−１誘導体断片）を有効成分として含有することを特
徴とする、抗肥満剤に関する。

【０００９】更に、本発明は、被検試料中の、ストロー
マ由来因子−１（ＳＤＦ−１）若しくはそのｍＲＮＡ；
前記ストローマ由来因子−１のアミノ酸配列において１
若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加さ
れたアミノ酸配列を有し、かつ抗腫瘍活性を有するスト
ローマ由来因子−１誘導体（ＳＤＦ−１誘導体）若しく
はそのｍＲＮＡ；前記ストローマ由来因子−１の断片で
あって、かつ抗腫瘍活性を有する前記断片（ＳＤＦ−１
断片）若しくはそのｍＲＮＡ；又は前記ストローマ由来
因子−１誘導体の断片であって、かつ抗腫瘍活性を有す
る前記断片（ＳＤＦ−１誘導体断片）若しくはそのｍＲ
ＮＡを分析（例えば、検出又は測定）することを特徴と
する、悪疫質の検出方法にも関する。

【００１０】本明細書において、「ＳＤＦ−１」とは、
各種動物、特には哺乳動物（例えば、ヒト）のストロー
マ細胞から見出されたストローマ由来因子であって、同
様にストローマ細胞から見出されたプレＢ細胞増殖刺激
因子（ＰＢＳＦ）と同一のタンパク質を意味する。

【００１１】本明細書において、「抗腫瘍活性」とは、
腫瘍細胞若しくは組織の発生、成熟、増殖、若しくは拡
散を予防若しくは抑制する作用、又は腫瘍細胞若しくは
組織を退縮化させる作用を意味し、前記腫瘍には、例え
ば、癌腫又は肉腫などが含まれる。或る化合物が前記抗
腫瘍活性を有するか否かは、例えば、以下に示す方法に
より決定することができる。固形癌を移植した実験動物
（例えば、マウス）を用いる場合には、前記担癌動物に
被検化合物を或る期間投与した後に、被検化合物投与群
と対照群（すなわち、被検化合物非投与群）とからそれ
ぞれ腫瘍を切除し、それらの腫瘍重量を計測して、投与
群から切除した腫瘍重量と対照群から切除した腫瘍重量
との間に有為な重量差が認められるか否かによって、抗
腫瘍活性を有するか否かを決定することができる。ま
た、前記の腫瘍重量の計測に代えて、あるいは、腫瘍重
量の計測と併せて、切除した腫瘍病巣の病理学的所見に
よってもたらされる癌細胞の質的変化を比較することに
より、及び／又は延命率を比較することによっても、抗
腫瘍活性を有するか否かを決定することができる。ある
いは、腹水癌を移植した実験動物を用いる場合には、前
記担癌動物に被検化合物を或る期間投与した後に、被検
化合物投与群と対照群（すなわち、被検化合物非投与
群）とからそれぞれ腹水を採取し、それらの腹水に含ま
れる癌細胞数を計測して、投与群の腹水中の癌細胞数と
対照群の腹水中の癌細胞数との間に有為な差が認められ
るか否かによって、抗腫瘍活性を有するか否かを決定す
ることができる。

【００１２】本明細書において、「体重減少活性」と
は、タンパク質代謝及び／又は脂質代謝を亢進又は抑制
することによって、筋肉量及び／又は体脂肪量を減少さ
せる活性を意味する。前記体重減少活性の測定は、これ
に限定されるものではないが、例えば、体重計測又は剖
検などによって実施することができる。

【００１３】

【発明の実施の形態】以下、本発明を詳細に説明する。
本発明において有効成分として使用することのできる前
記ＳＤＦ−１としては、各種動物、特には哺乳動物（例
えば、ヒト）のＳＤＦ−１、例えば、ヒトＳＤＦ−１α
（アミノ酸配列は特開平７−１８８２９４号公報に記
載）、ヒトＳＤＦ−１β（アミノ酸配列は特開平７−１
８８２９４号公報に記載）、又はマウスＳＤＦ−１［ア
ミノ酸配列はＳｃｉｅｎｃｅ，２６１，６００−６０３
（１９９３）に記載］などを挙げることができる。

【００１４】本発明において有効成分として使用するこ
とのできる「ＳＤＦ−１誘導体」とは、前記ＳＤＦ−１
のアミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸が欠
失、置換、若しくは付加されたアミノ酸配列を有し、か
つ抗腫瘍活性又は体重減少活性の少なくともいずれか一
方の活性を有するタンパク質を意味する。従って、「Ｓ
ＤＦ−１誘導体」には、アレル変異体や人為的な改変体
が含まれる。

【００１５】本発明において有効成分として使用するこ
とのできる「ＳＤＦ−１断片」とは、前記ＳＤＦ−１の
断片であって、かつ抗腫瘍活性又は体重減少活性の少な
くともいずれか一方の活性を有する前記断片を意味す
る。

【００１６】本発明において有効成分として使用するこ
とのできる「ＳＤＦ−１誘導体断片」とは、前記ＳＤＦ
−１誘導体の断片であって、かつ抗腫瘍活性又は体重減
少活性の少なくともいずれか一方の活性を有する前記断
片を意味する。

【００１７】本発明の有効成分として使用することので
きる前記タンパク質は、種々の公知の方法によって得る
ことができる。例えば、公知のＳＤＦ−１遺伝子を用い
て公知の遺伝子工学的手法により調製することもできる
し、あるいは、公知のタンパク質化学的手法により天然
由来の本発明のタンパク質を精製することもできる。

【００１８】本発明者が見出したところによれば、前記
のＳＤＦ−１若しくはその誘導体（又はそれらの断片）
は、抗腫瘍活性を有するので、抗腫瘍剤の有効成分とし
てとして用いることができる。また、本発明者が見出し
たところによれば、前記のＳＤＦ−１若しくはその誘導
体（又はそれらの断片）は、悪疫質に由来すると思われ
る著しい体重減少作用を有するので、その適用量を適宜
調整することによって抗肥満剤の有効成分としてとして
用いることができる。

【００１９】本発明の抗腫瘍剤又は抗肥満剤は、ＳＤＦ
−１若しくはその誘導体、又はそれらの断片（すなわ
ち、ＳＤＦ−１、ＳＤＦ−１誘導体、ＳＤＦ−１断片、
又はＳＤＦ−１誘導体断片）を有効成分として含有し、
所望により、製剤学的若しくは獣医学的に許容すること
のできる通常の担体を含有することができる。本発明の
抗腫瘍剤又は抗肥満剤の投与剤型としては、特に限定が
なく、例えば、散剤、細粒剤、顆粒剤、錠剤、カプセル
剤、懸濁液、エマルジョン剤、シロップ剤、エキス剤、
若しくは丸剤等の経口剤、又は注射剤、外用液剤、軟膏
剤、坐剤、局所投与のクリーム、若しくは点眼薬などの
非経口剤を挙げることができる。

【００２０】これらの経口剤は、例えば、ゼラチン、ア
ルギン酸ナトリウム、澱粉、コーンスターチ、白糖、乳
糖、ぶどう糖、マンニット、カルボキシメチルセルロー
ス、デキストリン、ポリビニルピロリドン、結晶セルロ
ース、大豆レシチン、ショ糖、脂肪酸エステル、タル
ク、ステアリン酸マグネシウム、ポリエチレングリコー
ル、ケイ酸マグネシウム、無水ケイ酸、又は合成ケイ酸
アルミニウムなどの賦形剤、結合剤、崩壊剤、界面活性
剤、滑沢剤、流動性促進剤、希釈剤、保存剤、着色剤、
香料、矯味剤、安定化剤、保湿剤、防腐剤、又は酸化防
止剤等を用いて、常法に従って製造することができる。

【００２１】非経口投与方法としては、注射（皮下、静
脈内等）、又は直腸投与等が例示される。これらのなか
で、注射剤が最も好適に用いられる。例えば、注射剤の
調製においては、有効成分としての、ＳＤＦ−１若しく
はその誘導体、又はそれらの断片の他に、例えば、生理
食塩水若しくはリンゲル液等の水溶性溶剤、植物油若し
くは脂肪酸エステル等の非水溶性溶剤、ブドウ糖若しく
は塩化ナトリウム等の等張化剤、溶解補助剤、安定化
剤、防腐剤、懸濁化剤、又は乳化剤等を任意に用いるこ
とができる。

【００２２】また、本発明の抗腫瘍剤又は抗肥満剤は、
徐放性ポリマーなどを用いた徐放性製剤の手法を用いて
投与してもよい。例えば、本発明の抗腫瘍剤又は抗肥満
剤をエチレンビニル酢酸ポリマーのペレットに取り込ま
せて、このペレットを治療すべき組織中に外科的に移植
することができる。

【００２３】本発明の抗腫瘍剤は、任意の癌の治療又は
予防に有効であるが、特には固形癌、例えば、頭頚部
癌、皮膚癌、悪性黒色腫、又は脳腫瘍などに有効であ
る。

【００２４】本発明の抗腫瘍剤は、有効成分としてのＳ
ＤＦ−１若しくはその誘導体、又はそれらの断片（好ま
しくはＳＤＦ−１）を、これに限定されるものではない
が、例えば、０．０００１〜９９重量％、好ましくは
０．０１〜８０重量％、より好ましくは０．０１〜５０
重量％の量で含有することができる。

【００２５】本発明の抗肥満剤は、有効成分としてのＳ
ＤＦ−１若しくはその誘導体、又はそれらの断片（好ま
しくはＳＤＦ−１）を、これに限定されるものではない
が、例えば、０．０００１〜９９重量％、好ましくは
０．０１〜８０重量％、より好ましくは０．０１〜５０
重量％の量で含有することができる。

【００２６】本発明の抗腫瘍剤又は抗肥満剤は、動物、
好ましくは哺乳動物（特にはヒト）に投与することがで
きる。本発明の抗腫瘍剤又は抗肥満剤を用いる場合の投
与量は、投与対象である動物の種類、年齢、性別、若し
くは体重、疾病の種類、又は投与方法などにより異な
り、特に制限はないが、ＳＤＦ−１若しくはその誘導
体、又はそれらの断片（好ましくはＳＤＦ−１）量とし
て通常成人１人当り１μｇ／ｋｇ〜１００００μｇ／ｋ
ｇ、好ましくは１０μｇ／ｋｇ〜１０００μｇ／ｋｇ、
より好ましくは１００μｇ／ｋｇ〜１０００μｇ／ｋｇ
程度を、１日１〜４回程度にわけて、経口的に又は非経
口的に投与する。更に、用途も医薬品に限定されるもの
ではなく、種々の用途、例えば、機能性食品や健康食品
として飲食物の形で与えることも可能である。

【００２７】本発明者が見出したところによれば、前記
のＳＤＦ−１若しくはその誘導体（又はそれらの断片）
は、著しい体重減少作用を示し、その作用は悪疫質に由
来すると思われるので、前記のＳＤＦ−１若しくはその
誘導体（又はそれらの断片）を悪疫質の診断マーカーと
して利用することもできる。なお、悪疫質（ｃａｃｈｅ
ｘｉａ）とは、慢性疾患の経過中に見られる激しい痩せ
や貧血を伴う消耗した状態をいい、基礎にある疾患によ
って、ガン性悪液質、尿毒症性悪疫質又はマラリア性悪
疫質等がある。すなわち、本発明の体外検出方法を適用
することによって、被検対象者から採取した被検試料に
関して、その被検対象者が悪疫質（例えば、癌悪疫質若
しくは感染症性悪疫質など）の状態であるか否かを分析
することができる。

【００２８】本発明方法において用いることのできる被
検試料としては、ＳＤＦ−１タンパク質が含まれている
可能性があれば特に限定されるものではなく、生物学的
試料、例えば、動物、例えば哺乳類、特にヒト（特には
患者）から採取した細胞等の組織若しくはその抽出物、
又は血液（例えば、血清又は血漿）、尿、若しくは脳脊
髄液等の体液などを例示することができる。また、通常
の臨床検査等における被検試料であれば、特に限定され
ず、使用することが可能である。

【００２９】被検試料中におけるＳＤＦ−１タンパク質
の分析工程では、まず最初に、前記の被検試料を、ＳＤ
Ｆ−１タンパク質と免疫学的に反応性のある免疫反応性
物質と接触させる。ヒトの被検試料を用いる場合には、
ヒトＳＤＦ−１タンパク質と免疫学的に反応性のある免
疫反応性物質と被検試料とを接触させるのが好ましい。
この際に、もし被検試料内にＳＤＦ−１タンパク質が存
在しなければ、前記免疫反応性物質との反応が生じない
が、もし被検試料内にＳＤＦ−１タンパク質が存在する
と、そのＳＤＦ−１タンパク質と前記の免疫反応性物質
とが結合して、ＳＤＦ−１タンパク質と免疫反応性物質
との結合体が、ＳＤＦ−１タンパク質の存在量に応じて
生成する。この結合体は、公知の方法によって簡単に検
出することができるので、結合体の存在や量から前記被
検試料中のＳＤＦ−１タンパク質の存在を検出したり、
その量を測定することができる。被検試料として組織切
片又は細胞を用い、蛍光抗体法又は酵素抗体法により、
組織又は細胞中のＳＤＦ−１タンパク質を測定すること
も可能である。

【００３０】ＳＤＦ−１タンパク質と免疫学的に反応す
ることのできる免疫反応性物質としては、例えば、抗Ｓ
ＤＦ−１タンパク質抗血清、抗ＳＤＦ−１タンパク質ポ
リクローナル抗体、若しくは抗ＳＤＦ−１タンパク質モ
ノクローナル抗体、又はこれらの抗体のフラグメント等
が挙げられる。これらは単独でも、また組み合わせて同
時に用いることもできる。前記抗体フラグメントには、
例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）₂ 、又はＦｖ
等が含まれる。

【００３１】本発明のＳＤＦ−１タンパク質の免疫学的
分析方法では、被検試料と、ＳＤＦ−１タンパク質と免
疫学的に反応することのできる免疫反応性物質とを接触
させ、ＳＤＦ−１タンパク質−免疫反応性物質結合体を
生成させる。そして、免疫化学的測定法により、抗体に
結合したＳＤＦ−１タンパク質を検出し、その量を測定
することによって、被検試料中のＳＤＦ−１タンパク質
レベルを知ることができる。

【００３２】免疫化学的測定法としては、原則的には、
すべての慣用のイムノアッセイ、例えば、ＥＩＡ法、Ｅ
ＬＩＳＡ法、又はＲＩＡ法等を用いることができる。こ
れらの免疫化学的測定法は、一般に次の方法に大別する
ことができる。 （１）競合法：未知量の抗原を含む被検試料と標識剤で
標識した抗原の一定量とを対応する抗体の一定量に対し
て競合反応させ、抗体と結合した標識抗原又は抗体と結
合しなかった標識抗原の活性を測定する。 （２）サンドイッチ法：未知量の抗原を含む被検試料
に、担体上に保持された過剰量の抗体を加えて反応させ
（第１反応）、次に標識剤で標識した過剰量の抗体の一
定量を加えて反応させる（第２反応）。担体上に保持さ
れた標識抗体又は担体上に保持されなかった標識抗体の
活性を測定する。第１反応及び第２反応は同時に行って
もよいし、時間をずらして行ってもよい。標識剤が放射
性同位元素である場合には、ウェルカウンター又は液体
シンチレーションカウンターで測定することができる。
標識剤が酵素である場合には、基質を加えて放置し、比
色法又は蛍光法で酵素活性を測定することができる。標
識剤が蛍光物質や発光物質であっても、それぞれ公知の
方法に従って測定することができる。

【００３３】上記の方法以外に、最近では、電気泳動し
たタンパク質をニトロセルロース等のフィルターに移
し、抗体を用いて目的のタンパク質を検出する、ウェス
タンブロット法が行われるようになってきたが、本発明
におけるＳＤＦ−１タンパク質の検出にももちろん利用
することができる。これらの測定法において用いる抗体
は、公知の抗体標識法によって標識することができ、例
えば、放射性同位元素、酵素、蛍光物質、又は発光性物
質等の適当なマーカーで標識しておくことができる。放
射性同位元素としては、例えば、 ¹²⁵Ｉ、 ¹³¹Ｉ、
³Ｈ、¹⁴Ｃ、又は³⁵Ｓなどを用いることができる。

【００３４】酵素としては、安定で比活性の大きなもの
が好ましく、例えば、グリコシダーゼ（例えば、β−ガ
ラクトシダーゼ、β−グルコシダーゼ、β−グルクロニ
ダーゼ、β−フルクトシダーゼ、α−ガラクトシダー
ゼ、α−グルコシダーゼ、若しくはα−マンノシダー
ゼ）、アミラーゼ（例えば、α−アミラーゼ、β−アミ
ラーゼ、イソアミラーゼ、グルコアミラーゼ、若しくは
タカアミラーゼ）、セルラーゼ、若しくはリゾチーム等
のカルボヒドラーゼ；ウレアーゼ、若しくはアスパラギ
ナーゼ等のアミダーゼ；コリンエステラーゼ（例、アセ
チルコリンエステラーゼ）、ホスファターゼ（例、アル
カリホスファターゼ）、スルファターゼ、若しくはリパ
ーゼ等のエステラーゼ；デオキシリボヌクレアーゼ、若
しくはリボヌクレアーゼ等のヌクレアーゼ；カタラー
ゼ、ペルオキシダーゼ、若しくはチトクロームオキシダ
ーゼ等の鉄・ポルフィリン酵素；チロシナーゼ、若しく
はアスコルビン酸オキシダーゼ等の銅酵素；又はアルコ
ール脱水素酵素、リンゴ酸脱水素酵素、乳酸脱水素酵
素、若しくはイソクエン酸脱水素酵素等の脱水素酵素な
どを用いることができる。蛍光物質としてはフルオレス
カミン、又はフルオレッセンスイソチオシアネートなど
を、発光性物質としてはルミノール、ルミノール誘導
体、ルシフェリン、又はルシゲニンなどをそれぞれ挙げ
ることができる。

【００３５】前記の各種標識からの信号の検出は、それ
自体公知の方法で実施することができる。また、抗体と
標識剤とを結合させる方法としては、任意の常法、例え
ば、クロラミンＴ法［Ｎａｔｕｒｅ，１９４，４９５−
４９６，（１９６２）］、過ヨウ素酸法［Ｊｏｕｒｎａ
ｌ ｏｆ Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｃ
ｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２２，１０８４−１０９
１，（１９７４）］、又はマレイミド法［Ｊｏｕｒｎａ
ｌ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，７９，２３３−
２３６，（１９７６）］などを用いることができる。

【００３６】上記測定方法のうち、例えば、ＥＩＡ法は
次のように行うことができる。まず、担体（例えば、ア
セイプレート）上に固定された第１抗ＳＤＦ−１タンパ
ク質抗体に被検試料を加え、ＳＤＦ−１タンパク質と抗
ＳＤＦ−１タンパク質抗体とを結合させて結合体を生成
させ、この結合体に酵素標識剤（例えば、ペルオキシダ
ーゼ）を結合させた第２抗ＳＤＦ−１タンパク質抗体を
加え、前記結合体に第２抗体を更に結合させ、「第１抗
体−ＳＤＦ−１タンパク質−第２抗体」結合体を生成さ
せる。得られた「第１抗体−ＳＤＦ−１タンパク質−第
２抗体」結合体に、前記標識酵素（ペルオキシダーゼ）
の基質を加え、酵素反応による生成物の吸光度又は蛍光
強度を測定することにより前記の「第１抗体−ＳＤＦ−
１タンパク質−第２抗体」結合体に付着する標識酵素の
酵素活性を測定する。上記の一連の操作を既知量のＳＤ
Ｆ−１タンパク質を含む標準溶液に関して予め実施して
おき、ＳＤＦ−１タンパク質と吸光度又は蛍光強度との
関係を標準曲線として作成しておく。そして、未知量の
ＳＤＦ−１タンパク質を含む被検試料について得られた
吸光度又は蛍光強度を標準曲線にあてはめ、被検試料中
のＳＤＦ−１タンパク質の量を測定することができる。

【００３７】また、以下に示す方法によってＥＩＡ法を
行うこともできる。すなわち、まず、担体（例えば、ア
セイプレート）と被検試料とを接触することにより、被
検試料内のＳＤＦ−１タンパク質を担体上に固定させ、
続いて抗ＳＤＦ−１タンパク質抗体（１次抗体）を加
え、ＳＤＦ−１タンパク質と１次抗体とを結合させて結
合体を生成させ、この結合体に酵素標識剤（例えばペル
オキシダーゼ）を結合させた抗１次抗体抗体（２次抗
体）を加え前記結合体に２次抗体を結合させ、「ＳＤＦ
−１タンパク質−１次抗体−２次抗体」結合体を生成さ
せる。得られた「ＳＤＦ−１タンパク質−１次抗体−２
次抗体」結合体に、前記標識酵素（ペルオキシダーゼ）
の基質を加え、酵素反応による生成物の吸光度、又は蛍
光強度を測定することにより、前記の「ＳＤＦ−１タン
パク質−１次抗体−２次抗体」結合体に付着する標識酵
素の酵素活性を測定する。上記の一連の操作を既知量の
ＳＤＦ−１タンパク質を含む標準溶液に関して予め実施
しておき、ＳＤＦ−１タンパク質と吸光度又は蛍光強度
との関係を標準曲線として作成しておく。そして、未知
量のＳＤＦ−１タンパク質を含む被検試料について得ら
れた吸光度又は蛍光強度を標準曲線にあてはめ、被検試
料中のＳＤＦ−１タンパク質の量を測定することができ
る。

【００３８】また、ＲＩＡ法は、例えば、次のようにし
て行うことができる。まず、担体（例えば、試験管）に
固定された第１抗ＳＤＦ−１タンパク質抗体に被検試料
を加え、ＳＤＦ−１タンパク質と抗ＳＤＦ−１タンパク
質抗体とを結合させて結合体を生成させ、この結合体に
放射性同位元素標識剤（例えば、 ¹²⁵Ｉ）で標識された
第２抗ＳＤＦ−１タンパク質抗体を加え、前記結合体に
第２抗体を更に結合させ、「第１抗体−ＳＤＦ−１タン
パク質−第２抗体」結合体を生成させる。得られた「第
１抗体−ＳＤＦ−１タンパク質−第２抗体」結合体の放
射能活性（例えば、γ−放射能活性）を測定する。上記
の一連の操作を既知量のＳＤＦ−１タンパク質を含有す
る標準溶液に関して予め実施しておき、ＳＤＦ−１タン
パク質と放射能活性との関係を標準曲線として作成して
おく。そして、未知量のＳＤＦ−１タンパク質を含む被
検試料について得られた放射能活性を標準曲線にあては
め、被検試料中のＳＤＦ−１タンパク質の量を測定する
ことができる。

【００３９】また、以下に示す方法によってＲＩＡ法を
行うこともできる。すなわち、まず、担体（例えば、試
験管）と被検試料とを接触させて被検試料内のＳＤＦ−
１タンパク質を前記担体上に固定させ、続いて抗ＳＤＦ
−１タンパク質抗体（１次抗体）を加えてＳＤＦ−１タ
ンパク質と１次抗体とを結合させて結合体を生成させ、
この結合体に放射性同位元素標識剤（例えば、 ¹²⁵Ｉ）
を結合させた抗１次抗体抗体（２次抗体）を加えて前記
結合体に２次抗体を結合させ、「ＳＤＦ−１タンパク質
−１次抗体−２次抗体」結合体を生成させる。そして、
得られた「ＳＤＦ−１タンパク質−１次抗体−２次抗
体」の放射能活性（例えば、γ−放射能活性）を測定す
る。上記の一連の操作を既知量のＳＤＦ−１タンパク質
を含む標準溶液に関して予め実施しておき、ＳＤＦ−１
タンパク質と放射能活性との関係を標準曲線として作成
しておく。そして、未知量のＳＤＦ−１タンパク質を含
む被検試料について得られた放射能活性を標準曲線にあ
てはめ、被検試料中のＳＤＦ−１タンパク質の量を測定
することができる。

【００４０】被検試料中におけるＳＤＦ−１タンパク質
のｍＲＮＡの分析では、被検試料と、ＳＤＦ−１タンパ
ク質ｍＲＮＡの塩基配列に相補的な塩基配列を含むポリ
ヌクレオチドとを反応させ、生成するＳＤＦ−１タンパ
ク質ｍＲＮＡ−ポリヌクレオチド結合体の存在を検出、
又はその量を測定することにより、ＳＤＦ−１タンパク
質のｍＲＮＡを分析することができる。上記ポリヌクレ
オチドは、選択された遺伝子（ＤＮＡ）から転写された
ｍＲＮＡの一部と相補的な又は実質的に相補的な配列を
含み、標的遺伝子から転写されたｍＲＮＡとの間で二重
鎖を形成する。その標的ｍＲＮＡと安定な複合体を形成
するために十分な相補性を有するいずれのポリヌクレオ
チドも適当であると考えられる。本発明に用いることの
できるポリヌクレオチドは、実質的に標的ｍＲＮＡ内の
どの領域の範囲で相補的であってもよい。ポリヌクレオ
チド分子は、ＳＤＦ−１タンパク質遺伝子に特異的なｍ
ＲＮＡ発現の増減を検出するＤＮＡプローブとして用い
ることができる。すなわち、標的であるＳＤＦ−１タン
パク質のｍＲＮＡに特異的に付着し、分子ハイブリッド
を形成することにより、細胞内のＳＤＦ−１タンパク質
の発現の程度を検出することができる。

【００４１】本発明で用いることのできるポリヌクレオ
チドは、標的ＳＤＦ−１タンパク質のｍＲＮＡの特異的
塩基配列と相補的な塩基配列を適宜選択し、例えば、公
知のＤＮＡ合成装置、ＰＣＲ装置、又は遺伝子クローニ
ング等を用いて調製することができる。種々の長さのポ
リヌクレオチドを使用することができるが、好ましくは
１０塩基以上、より好ましくは１７塩基以上を有するも
のが好適である。

【００４２】前記のポリヌクレオチドは、修飾されてい
ないポリヌクレオチド又はポリヌクレオチド類似体であ
ることができる。適当な類似体として、例えば、エチル
−又はメチルホスホネート類似体、ホスホロチオエート
修飾されたポリデオキシヌクレオチド［Ｎｕｃｌｅｉｃ
Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１４，９０８１−９０９３，
（１９８６）；Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１０
６，６０７７−６０７９，（１９８４）］等が挙げられ
る。更に、近年のポリヌクレオチド類似体の製造におけ
る進歩により、例えば、２’−Ｏ−メチルリボヌクレオ
チド［Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１５，
６１３１−６１４８，（１９８７）］又は複合ＲＮＡ−
ＤＮＡ類似体であるキメラポリヌクレオチド［ＦＥＢＳ
Ｌｅｔｔ．，２１５，３２７−３３０，（１９８
７）］等も使用することができる。

【００４３】選択されたポリヌクレオチドは、電荷をも
つもの、又は電荷をもたないものを含め、いかなる種類
のものでもよい。ｉｎ ｖｉｔｒｏ又はｉｎ ｖｉｖｏ
でこのような実験を行うために、ポリヌクレオチドを公
知の標識剤、例えば、放射性同位元素又は蛍光物質等で
常法によって標識することができる。放射性同位元素と
しては、例えば、 ¹²⁵Ｉ、 ¹³¹Ｉ、 ³Ｈ、¹⁴Ｃ、³²Ｐ、
又は³⁵Ｓ等がある。なかでも、放射性同位元素としてラ
ンダムプライマー法［Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１
３２，６−１３，（１９８３）］を用いて³²Ｐで標識す
るのが好適である。また、より容易で危険性の少ない取
扱が可能なものとして誘導体形成した蛍光色素が挙げら
れる。蛍光色素としては、ポリヌクレオチドと結合する
すべての色素を用いることができるが、例えば、フルオ
レセイン、ローダミン、テキサスレッド、４−フルオロ
−７−ニトロベンゾフラザン（ＮＢＤ）、クマリン、フ
ルオレサミン、スクシニルフルオレセイン、又はダンシ
ル等が好適に用いられる。

【００４４】例えば、ＳＤＦ−１タンパク質のｃＤＮＡ
を用いたノーザンブロット解析によるＳＤＦ−１タンパ
ク質ｍＲＮＡ量の測定は、以下のように行うことができ
る。すなわち、任意の体細胞又は組織からｍＲＮＡを抽
出、単離し、単離したｍＲＮＡをアガロースゲルで電気
泳動し、ニトロセルロース又はナイロンメンブランに転
写した後、標識ＳＤＦ−１タンパク質ｃＤＮＡプローブ
と反応させることにより、ＳＤＦ−１タンパク質ｍＲＮ
Ａ量を測定する。使用するＳＤＦ−１タンパク質ｃＤＮ
Ａプローブは、ＳＤＦ−１タンパク質ｍＲＮＡに相補的
なＤＮＡであり、１７塩基以上の長さをもつことが望ま
しい。

【００４５】本発明は悪疫質分析試薬にも関し、その分
析試薬は、主要成分として、ＳＤＦ−１タンパク質と免
疫学的に反応することのできる免疫反応性物質を含む。
ＳＤＦ−１タンパク質と免疫学的に反応することのでき
る免疫反応性物質としては、例えば、抗ＳＤＦ−１タン
パク質抗血清、抗ＳＤＦ−１タンパク質ポリクローナル
抗体、若しくは抗ＳＤＦ−１タンパク質モノクローナル
抗体、又はこれらの抗体のフラグメント等が挙げられ
る。また、本発明の悪疫質分析試薬は、主要成分とし
て、前記免疫反応性物質の代わりに、ＳＤＦ−１タンパ
ク質ｍＲＮＡの塩基配列に相補的な塩基配列を含むポリ
ヌクレオチドを含む構成とすることもできる。

【００４６】本発明の悪疫質分析試薬を用いることによ
り、これまで述べてきた方法に従って、被検試料中にお
けるＳＤＦ−１タンパク質それ自体、又はＳＤＦ−１タ
ンパク質のｍＲＮＡを分析し、その結果から、被検対象
の悪疫質を判定することができる。

【００４７】

【実施例】以下、実施例によって本発明を具体的に説明
するが、これらは本発明の範囲を限定するものではな
い。

【実施例１】本実施例では、以下に示す手順で、ヒトＳ
ＤＦ−１βｃＤＮＡを単離し、そのｃＤＮＡを用いてグ
ルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（以下、ＧＳＴと
称することがある）／ＳＤＦ−１β融合タンパク質を調
製した。

【００４８】（１）ヒトＳＤＦ−１βｃＤＮＡの単離 ＰＣＲ法に用いる２種類のプライマーとして、ヒトＳＤ
Ｆ−１βｃＤＮＡ［Ｅｎｔｒｅｚ，ＮＣＢＩ，登録番号
（ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．）Ｕ１６７５２］の第１
３５番目〜第１５５番目の塩基配列を含み、しかも、
５’末端側に制限酵素ＢａｍＨＩ認識部位を導入するよ
うにデザインしたフォワードプライマー： ５’−ＣＡＣＧＧＡＴＣＣＴ ＴＡＧＣＧＡＣＧＧＧ
ＡＡＧＣＣＣＧＴＣＡＧＣ−３’ と、前記ヒトＳＤＦ−１βｃＤＮＡの第３６８番目〜第
３９０番目の塩基配列に相補的な配列を含み、しかも、
３’末端側に制限酵素ＳａｌＩ認識部位を導入するよう
にデザインしたバックプライマー： ５’−ＧＴＧＧＴＣＧＡＣＧ ＴＡＡＧＧＧＴＴＣＣ
ＴＣＡＧＧＣＧＴＣＴＧＡ−３’ とを化学合成した。

【００４９】１０μＭフォワードプライマー１０μｌ、
１０μＭバックプライマー１０μｌ、ｄＮＴＰ混合物
（各ヌクレオチドの濃度＝２．５ｍＭ）８μｌ、０．５
ユニット／μｌＴａｑポリメラーゼ（Ｅｘ Ｔａｑポリ
メラーゼ；宝酒造，京都，日本）１μｌ、Ｔａｑスター
ト抗体（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂ．Ｉｎｃ．，パロア
ルト，カリフォルニア州，米国）１μｌ、１０×ＰＣＲ
緩衝液［Ｅｘ Ｔａｑバッファー；宝酒造，京都，日
本；（組成）１０ｍＭトリス−ＨＣｌ（ｐＨ８．３），
５０ｍＭ−ＫＣｌ］１０μｌ、及び蒸留水５９μｌと、
鋳型ＤＮＡとしてヒト脾臓ｃＤＮＡライブラリー（Ｃｌ
ｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂ．Ｉｎｃ．，パロアルト，カリフ
ォルニア州，米国）１μｌとを混合し、以下の条件でＰ
ＣＲ法を実施した。すなわち、変性工程を９４℃で１分
間行ない、アニーリング工程を５５℃で４５秒間行な
い、ＤＮＡ合成工程を７２℃で２分間行なうことからな
るサイクルを、４０サイクル実施した。

【００５０】得られた反応液から１０μｌを取り出し、
アガロースゲル（１％）電気泳動を行なったところ、
０．２５ｋｂの単一のＤＮＡバンドを認めた。残りの反
応液を低融点アガロースゲルで再泳動し、０．２５ｋｂ
のＤＮＡバンドを低融点アガロースゲルから回収し、得
られたＤＮＡ断片を常法によりｐＣＲ^TM２．１ベクター
（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐ．，サンディエゴ，
米国）にクローニングした。クローニングした前記ＤＮ
Ａ断片の全塩基配列を決定し、前記ＤＮＡ断片がヒトＳ
ＤＦ−１βｃＤＮＡであることを確認した。

【００５１】ヒトＳＤＦ−１βｃＤＮＡを含む前記プラ
スミドから、制限酵素ＢａｍＨＩ及びＳａｌＩを用いて
ヒトＳＤＦ−１βｃＤＮＡ断片を切り出し、このＤＮＡ
断片を大腸菌発現ベクターｐＧＥＸ−５Ｘ−１［Ｉｎｆ
ｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ．，５８，３９０９−３９１３（１
９９０）］（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ，ウ
プサラ，スウェーデン）のＢａｍＨＩ−ＳａｌＩサイト
にクローニングした。得られたプラスミドをｐＧ／ＳＤ
Ｆ−１βと命名した。前記の大腸菌発現ベクターｐＧＥ
Ｘ−５Ｘ−１は、ｔａｃプロモーターの制御下にあるグ
ルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ；分子量
＝約２９ｋｄ）遺伝子を含み、更に、前記ＧＳＴ遺伝子
の下流側にマルチクローニングサイト（ＢａｍＨＩサイ
ト及びＳａｌＩサイトを含む）を有する。従って、プラ
スミドｐＧ／ＳＤＦ−１βで形質転換した大腸菌では、
ヒトＳＤＦ−１β（分子量＝約８ｋｄ）がＧＳＴ／ＳＤ
Ｆ−１β融合タンパク質（分子量＝約３７ｋｄ）として
発現される。

【００５２】（２）ＧＳＴ／ＳＤＦ−１β融合タンパク
質の調製 以下に示す手順に従って、ＧＳＴ／ＳＤＦ−１β融合タ
ンパク質を調製した。すなわち、前記（１）で得られた
プラスミドｐＧ／ＳＤＦ−１β（１μｇ）を常法により
大腸菌ＪＭ１０９株コンピテント細胞（宝酒造，京都，
日本）に導入した。

【００５３】ＳＤＦ−１β産生大腸菌を確認するため
に、１００μｇ／ｍｌアンピシリン含有２×ＹＴ培地
（トリプトン１６ｇ，酵母抽出物１０ｇ，及び塩化ナト
リウム５ｇを蒸留水１リットルに溶解して調製；ｐＨ
７．２）１ｍｌに大腸菌を殖菌し、３７℃で一晩培養し
た。この培養液１００μｌをアンピシリン含有２×ＹＴ
培地１ｍｌに加え、３７℃で振盪培養した。波長６００
ｎｍにおける光学密度（ＯＤ₆₀₀ ）が０．５を越えたと
ころで、イソプロピル−β−Ｄ−チオ−ガラクトピラノ
シド（ＩＰＴＧ）を最終濃度が１ｍＭになるように加
え、更に、３７℃で２時間振盪した。培養液を１０００
０×ｇで遠心して大腸菌を回収し、常法に従ってＳＤＳ
ポリアクリルアミドゲル電気泳動（以下、ＳＤＳ−ＰＡ
ＧＥと称する）にかけ、ＧＳＴ／ＳＤＦ−１β融合タン
パク質の発現を確認した。

【００５４】ＧＳＴ／ＳＤＦ−１β融合タンパク質が発
現していた大腸菌を大量培養するために、前記大腸菌を
アンピシリン含有２×ＹＴ培地１ｍｌに殖菌し、３７℃
で一晩振盪培養した後に、この培養液１００ｍｌをアン
ピシリン含有２×ＹＴ培地１リットルに加え、３７℃で
振盪培養した。ＯＤ₆₀₀ が０．５を越えたところで、Ｉ
ＰＴＧを最終濃度が１ｍＭになるように加え、更に、３
７℃で２時間振盪した。培養液を３０００×ｇで遠心
（４℃）して大腸菌を集菌した後に、リン酸緩衝溶液
［組成：１４０ｍＭ−ＮａＣｌ，２．７ｍＭ−ＫＣｌ，
１０ｍＭ−Ｎａ₂ ＨＰＯ₄ ，１．８ｍＭ−ＫＨ₂ Ｐ
Ｏ₄ ，ｐＨ７．２；以下、ＰＢＳ（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ
−ｂｕｆｆｅｒｒｅｄ ｓａｌｉｎｅ）と称する］３０
ｍｌ、２５ｍｇ／ｍｌリゾチーム１ｍｌ、１Ｍフェニル
メタンスルホニルフルオライド（ＰＭＳＦ）６０μｌ、
及び１０％トライトンＸ（３ｍｌ）を加え、超音波によ
り氷上で菌体を破砕した。

【００５５】破砕液を遠心（１４０００×ｇ，４℃，１
０分間）し、得られた上清をフィルター（ポアサイズ＝
０．２μｍ）で濾過した。得られた濾液にグルタチオン
セファロース４Ｂ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃ
ｈ，ウプサラ，スウェーデン）１ｍｌを加え、１時間攪
拌することにより吸着させた。懸濁液を遠心（１０００
×ｇ，４℃，５分間）してグルタチオンセファロース４
Ｂを回収した後に、回収したグルタチオンセファロース
４ＢをＰＢＳ１０ｍｌで洗浄し、カラムに充填した。Ｐ
ＢＳ５０ｍｌで洗浄した後に、１０ｍＭグルタチオン溶
液１０ｍｌで溶出させた。溶出された各画分のＧＳＴ活
性を、ＧＳＴ検出キット（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏ
ｔｅｃｈ，ウプサラ，スウェーデン）を用いて測定し、
ＧＳＴ活性の高い画分をプールした。この画分をＳＤＳ
−ＰＡＧＥにかけたところ、分子量約３７ｋｄの単一バ
ンドが検出され、ＧＳＴ／ＳＤＦ−１β融合タンパク質
がこの画分に含まれていることを確認した。この画分を
５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）で透析し、ＧＳＴ
／ＳＤＦ−１β融合タンパク質約７００μｇ（最終濃度
＝５０μｇ／ｍｌ）を得た。

【００５６】

【実施例２】本実施例では、前記実施例１で調製したＧ
ＳＴ／ＳＤＦ−１β融合タンパク質の抗腫瘍効果及び体
重減少効果を、ザルコーマ細胞を移植したマウスを用い
て確認した。ＩＣＲマウス２０匹の腹腔内にザルコーマ
１８０細胞１×１０⁶ 個（１個体当たり）を移植し、各
群１０匹ずつからなる２群に分けた。一方の群（ＧＳＴ
／ＳＤＦ−１β融合タンパク質投与群）においては、前
記実施例１で調製したＧＳＴ／ＳＤＦ−１β融合タンパ
ク質７μｇ（１．９ｎｍｏｌ）をマウス腹腔内に８回隔
日投与した。もう一方の群（コントロール群）において
は、ＧＳＴ５．５μｇ（１．９ｎｍｏｌ）をマウス腹腔
内に８回隔日投与した。

【００５７】８回の投与が終了したところで、ＧＳＴ／
ＳＤＦ−１β融合タンパク質投与群では６匹が生存し、
コントロール群では４匹が生存していた。ＧＳＴ／ＳＤ
Ｆ−１β融合タンパク質投与群では、コントロール群に
比較して、肉眼的に腫瘍（腹囲）の縮小が認められた。
また、ＧＳＴ／ＳＤＦ−１β融合タンパク質投与群で
は、剖検の結果、顕著な体脂肪量の減少と筋肉量の減少
とが見られた。腹水量については、ＧＳＴ／ＳＤＦ−１
β融合タンパク質投与群で４．９２±２．２５ｍｌであ
り、コントロール群で１８．１３±１．３２ｍｌであ
り、ＧＳＴ／ＳＤＦ−１β融合タンパク質投与群では明
らかな腹水産生量の減少が認められた（ｐ＜０．００
５）。ＧＳＴ／ＳＤＦ−１β融合タンパク質投与群及び
コントロール群から、前記の剖検時に採取した各血液試
料について、血清アルブミン分画比（％）を測定したと
ころ、ＧＳＴ／ＳＤＦ−１β融合タンパク質投与群では
４６〜５６であったのに対し、コントロール群では６０
〜６３であった。すなわち、ＧＳＴ／ＳＤＦ−１β融合
タンパク質投与群においては、コントロール群と比べ
て、血清中のアルブミンが低値を示し、悪疫質の発現が
確認された。

【００５８】

【発明の効果】本発明の抗腫瘍剤によれば、ＳＤＦ−１
若しくはその誘導体、又はそれらの断片を有効成分とし
て含有するので、癌患者に対して有効な予防又は治療を
行なうことができる。また、本発明の抗肥満剤は、体重
を減少させるのに有効である。更に、本発明の検出方法
においては、ＳＤＦ−１若しくはその誘導体、又はそれ
らの断片を診断マーカーとして、悪疫質を分析すること
ができる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 石田 裕香子 東京都狛江市西野川４丁目６番１号 京王 柴崎コーポラス508号

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ストローマ由来因子−１；前記ストロー
   マ由来因子−１のアミノ酸配列において１若しくは数個
   のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されたアミノ酸
   配列を有し、かつ抗腫瘍活性を有するストローマ由来因
   子−１誘導体；前記ストローマ由来因子−１の断片であ
   って、かつ抗腫瘍活性を有する前記断片；又は前記スト
   ローマ由来因子−１誘導体の断片であって、かつ抗腫瘍
   活性を有する前記断片を有効成分として含有することを
   特徴とする、抗腫瘍剤。
2. 【請求項２】 ストローマ由来因子−１；前記ストロー
   マ由来因子−１のアミノ酸配列において１若しくは数個
   のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されたアミノ酸
   配列を有し、かつ体重減少活性を有するストローマ由来
   因子−１誘導体；前記ストローマ由来因子−１の断片で
   あって、かつ体重減少活性を有する前記断片；又は前記
   ストローマ由来因子−１誘導体の断片であって、かつ体
   重減少活性を有する前記断片を有効成分として含有する
   ことを特徴とする、抗肥満剤。
3. 【請求項３】 被検試料中の、ストローマ由来因子−１
   若しくはそのｍＲＮＡ；前記ストローマ由来因子−１の
   アミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸が欠
   失、置換、若しくは付加されたアミノ酸配列を有し、か
   つ抗腫瘍活性を有するストローマ由来因子−１誘導体若
   しくはそのｍＲＮＡ；前記ストローマ由来因子−１の断
   片であって、かつ抗腫瘍活性を有する前記断片若しくは
   そのｍＲＮＡ；又は前記ストローマ由来因子−１誘導体
   の断片であって、かつ抗腫瘍活性を有する前記断片若し
   くはそのｍＲＮＡを分析することを特徴とする、悪疫質
   の検出方法。